La presente tesis doctoral se relaciona con las actitudes de estudiantes sin discapacidad hacia la inclusión de estudiantes con discapacidad en la educación superior. Desde esta perspectiva, los objetivos del estudio fueron: 1) conocer las actitudes de estudiantes sin discapacidad hacia la inclusión de estudiantes con discapacidad en la educación superior, 2) identificar la relación de sus actitudes con variables sociodemográficas y experiencia con la discapacidad y 3) indagar acerca de variables predictoras de la disposición de los estudiantes sin discapacidad a apoyar el proceso de inclusión de compañeros con discapacidad en una universidad chilena. El enfoque de la investigación fue cuantitativo, de tipo exploratorio, descriptivo y correlacional. Para ello, se construyó un Cuestionario de Actitudes de Estudiantes hacia la Inclusión en la Educación Superior, CACDEHI.ES. Este cuestionario presenta una adecuada validez y fiabilidad en las puntuaciones e incluye cuatro subescalas: 1) disposición a apoyar el proceso de inclusión de compañeros con discapacidad, 2) percepción de la necesidad de adecuaciones para estudiantes con discapacidad, 3) emociones asociadas a la interacción con estudiantes con discapacidad, y 4) creencias respecto a la inclusión desde el ámbito académico. Los participantes fueron 1899 estudiantes universitarios sin discapacidad de una universidad chilena. Los datos fueron analizados utilizando diferentes pruebas estadísticas, incluyendo: prueba t de Student, correlación de Pearson, análisis de la varianza y comparaciones múltiples, regresión múltiple, midiéndose para todos los casos el tamaño del efecto, con la d de Cohen. Los resultados muestran que los estudiantes sin discapacidad presentan actitudes favorables hacia la inclusión de estudiantes con discapacidad. Se encontraron diferencias en las actitudes de los estudiantes sin discapacidad hacia aquellos que presentan discapacidad, en función de las variables -sexo, tipo de carreras cursadas y experiencia previa con la discapacidad a nivel personal-. Además, las variables que mejor explican la disposición de los estudiantes sin discapacidad a apoyar la inclusión, se relacionan con las emociones asociadas a la interacción con compañeros con discapacidad y con la percepción de la necesidad de adecuaciones para estudiantes con discapacidad, así como también con la variable sexo -en el caso de las estudiantes mujeres-, y con su experiencia con la discapacidad a nivel personal. Finalmente, desde la perspectiva del modelo ecológico de Bronfenbrenner, se presentan diversas conclusiones que permiten comprender cómo el proceso de inclusión de estudiantes con discapacidad en la educación superior se articula en el sistema educativo, social y cultural, permitiendo a su vez, realizar una aproximación hacia futuras intervenciones e investigaciones. / The present doctoral dissertation is related to non-disabled students´ attitudes towards inclusion of students with disabilities in higher education. From this perspective, the objectives of the study were to following: 1) To know the attitudes of non-disabled students towards inclusion of students with disabilities in higher education, 2) To identify the relationship of their attitudes and sociodemographic variables and experience with disability and 3) To investigate variables predicting willingness of students without disabilities to support the process of inclusion of classmates with disabilities in a Chilean university. The research´s approach was quantitative, exploratory, descriptive and correlational. To accomplish these objectives, a questionnaire Attitudes of Students toward the Inclusion in Higher Education, CACDEHI.ES was constructed. This questionnaire has adequate validity and reliability scores and includes four subscales: 1) Willingness to support the inclusion process of classmates with disabilities, 2) Perception of the need of adjustments for students with disabilities, 3) Emotions associated with the interaction with students with disabilities, and 4) Beliefs about the inclusion in the academic field. 1899 college students from one Chilean university participated in the study. The data was analyzed using different statistical tests, including: t test, Pearson correlation, analysis of variance and multiple comparisons, multiple regression, measured for all cases the effect size. The results show that non-disabled students have favorable attitudes towards the inclusion of students with disabilities. Differences in attitudes of students without disabilities to those with disabilities, in terms of the variables such as gender, type of university courses and previous experience with disability on a personal level were found. Also, the variables that best explain the willingness of students without disabilities to support inclusion, are related to the emotions associated with the interaction with peers with disabilities and the perception of the need of adjustments for students with disabilities, as well as with the variable gender in the case of women students, and also their experience with disability on a personal level. Finally, from the perspective of the ecological model of Bronfenbrenner, several conclusions allowing the understanding of inclusion of disabled students in higher education and its articulation with in the educational, social and cultural system are presented. This allows, in turn, to develop an approach to future interventions and research.

Resums pendent

Resums pendents

Las enfermedades cardiovasculares constituyen las complicaciones más prevalentes en los pacientes con diabetes mellitus tipo 2 (DM2) y son las que se asocian con mayor morbi-mortalidad. Los mecanismos responsables del desarrollo acelerado de arteriosclerosis en los pacientes con DM2 no se conocen con precisión, pero tanto la dislipemia aterogénica y la inflamación de bajo grado características de esta población, están implicados. La información sobre la relación del grado de control glucémico con las características cualitativas de las lipoproteínas de baja densidad (LDL) y alta densidad (HDL) es insuficiente y se desconoce el efecto que puede tener la optimización del control glucémico sobre las características cualitativas de las partículas de LDL y HDL y la distribución de la fosfolipasa A2 asociada a las lipoproteínas (Lp-PLA2) entre ambas. Igualmente, los estudios que tratan de determinar la correlación entre los parámetros inflamatorios y el control glucémico no son del todo concluyentes, y la información existente acerca del efecto que tiene la mejoría del control glucémico sobre los parámetros inflamatorios es también escasa. Así, nuestra hipótesis es que la intensificación del control glucémico aporta beneficios relacionados con la modificación de los parámetros inflamatorios y los cambios cualitativos en las lipoproteínas y de la distribución de Lp-PLA2, que podrían contribuir a disminuir el riesgo cardiovascular en los pacientes con DM2. Para ello se ha elaborado un estudio transversal de 122 pacientes con DM2 y mal control glucémico (hemoglobina glicosilada (HbA1c) > 8,5%) y 54 individuos control, y un estudio longitudinal con un subgrupo de 42 pacientes con DM2, a los que se les ha optimizado con distintas estrategias terapéuticas y seguido durante 3 meses. Se ha realizado una caracterización clínica de los sujetos (edad, sexo, peso, índice de masa corporal, tiempo de evolución de la DM2, medicación previa, complicaciones crónicas), determinación del perfil lipídico (colesterol total, fracciones lipoproteicas de colesterol, tamaño de LDL, características cualitativas de LDL y HDL, triglicéridos, Apolipoproteína A-I, Apolipoproteína B, ácidos grasos libres) y de marcadores de inflamación sistémica (proteína C reactiva, interleucina-6, interleucina-8, proteína quimiotáctica de monocitos 1, factor transformante del crecimiento β1 (TGF-β1), adiponectina, leptina). Se han comparado estos aspectos entre los diferentes grupos estudiados y, además, se ha valorado el efecto que tiene la mejora del control glucémico (HbA1c) sobre sobre el perfil lipídico, los parámetros inflamatorios y las características cualitativas de las lipoproteínas. Los principales hallazgos de los trabajos desarrollados en esta tesis doctoral son: 1- Las pautas de insulina bolo-basal son factibles y permiten mejorar el control glucémico sin comprometer la seguridad y calidad de vida, en los pacientes con DM2 de larga evolución y mal control; 2- Los pacientes con DM2 tienen alteraciones en las características cualitativas y cuantitativas de las LDL y HDL y que muchas de ellas están relacionadas con el fenotipo B de las partículas LDL; 3- La mejoría del control glucémico promueve modificaciones menos aterogénicas en las partículas LDL y HDL; 4- Los marcadores inflamatorios se encuentran elevados en los sujetos DM2, sobretodo en aquellos con fenotipo B; 5- La optimización del control glucémico podría reducir los niveles de TGF-β1, en parte implicado en la patogenia de la nefropatía diabética. Por tanto, los sujetos con DM2, especialmente aquellos con fenotipo B de las LDL, tienen niveles elevados de marcadores inflamatorios y alteraciones cualitativas de las partículas LDL y HDL relacionadas con mayor aterogenicidad. La intensificación del control glucémico aportaría beneficios que podrían contribuir a disminuir el riesgo cardiovascular en los pacientes con DM2. / Cardiovascular diseases are the most prevalent complications in patients with type 2 diabetes mellitus (T2DM) and are associated with increased morbidity and mortality. The mechanisms responsible for the accelerated development of atherosclerosis in patients with T2DM are not known with precision, but both atherogenic dyslipidemia and low-grade inflammation characteristics of this population, are involved. There is limited information on the relationship between the degree of glycemic control and quality characteristics of low-density lipoproteins (LDL) and high-density lipoproteins (HDL) and also the effect that the optimization of glycemic control could have on the quality characteristics of LDL and HDL particles and distribution of lipoprotein-associated phospholipase A2 (Lp-PLA2) is unknown. Similarly, studies that attempt to determine the correlation between inflammatory parameters and glycemic control are not entirely conclusive, and information on the effect of improved glycemic control on inflammatory parameters is also scarce. Thus, our hypothesis is that the intensification of glycemic control provides benefits due to inflammatory parameters modification and qualitative changes in lipoproteins and distribution of Lp-PLA2, which could help to reduce cardiovascular risk in patients with T2DM. We have developed a cross-sectional study of 122 patients with T2DM and poor glycemic control (glycosylated hemoglobin (HbA1c) > 8,5%) and 54 control subjects, and a longitudinal study with a subgroup of 42 patients, which were optimized with different therapeutic strategies and followed for 3 months. There has been a clinical characterization of the subjects (age, sex, weight, body mass index, duration of T2DM, previous medication, chronic complications), determination of the lipid profile (total cholesterol, lipoprotein cholesterol fractions, LDL size, qualitative characteristics of LDL and HDL, triglycerides, apolipoprotein AI, apolipoprotein B, free fatty acids) and inflammatory biomarkers (C-reactive protein, interleukin-6, interleukin-8, monocyte chemotactic protein 1, transforming growth factor β1 (TGF -β1), adiponectin, leptin). We compared these aspects between the different groups studied and we assessed the improvement of glycemic control (HbA1c) on the lipid profile, inflammatory parameters and qualitative characteristics of lipoproteins. The main findings of this thesis are: 1- Switching to basal-bolus insulin therapy is feasible, effective and safe in patients with long-standing T2DM and poor glycemic control, and does not impair their quality of life; 2- Patients with T2DM have alterations in the qualitative and quantitative characteristics of LDL and HDL and many of them are related to phenotype B of LDL particles; 3- Improvement of glycemic control promotes less atherogenic changes in LDL and HDL particles; 4- Inflammatory biomarkers are elevated in T2DM subjects, especially in those with phenotype B; 5- Optimization of glycemic control may reduce levels of TGF-β1 in part involved in the pathogenesis of diabetic nephropathy. Thus, subjects with T2DM, especially those with LDL phenotype B, have elevated levels of inflammatory biomarkers and qualitative changes in LDL and HDL particles associated with increased atherogenicity. The intensification of glycemic control brings benefits that could help to reduce cardiovascular risk in patients with T2DM.

L’objectiu d’aquest estudi és descriure les conseqüències que pot tenir, en la salut mental i enla qualitat de vida, el fet de patir cremades que requereixin de l’hospitalització dels pacients. A més a més, intenta identificar també alguns dels mecanismes que intervenen en l’aparició d’aquest malestar. Per tal de fer-ho, es realitza una revisió de la literatura i es recullen les dades sociodemogràfiques dels participants, les característiques de la lesió i del seu tractament, antecedents mèdics i consum de tòxics al llarg dels sis mesos posteriors al moment de la lesió, mitjançant una entrevista semi-estructurada creada ad-hoc específicament per a aquest projecte. També s’administren diversos instruments d’avaluació per tal de mesurar la personalitat, els símptomes d’ansietat, de depressió, d’estrès traumàtic, l’estat de salut general i la qualitat de vida dels pacients. En aquesta tesi doctoral es confirma la presència de psicopatologia secundària a la cremada i s’assenyala a variables subjectives, com la personalitat o aquelles relacionades amb la creació de memòries traumàtiques, com a factors de risc. Aquests resultats podrien augmentar la comprensió dels efectes psicosocials que tenen les lesions per cremada greu en les seves víctimes i el seu entorn més proper, així com identificar certs factors de vulnerabilitat que podrien ajudar a prevenir les evolucions més tòrpides pel que fa a salut mental i emocional. / The aim of this study is to describe the possible consequences, in terms of mental health and quality of life of patients suffering burns requiring hospitalization. In addition, we attempt to identify some of the mechanisms involved in the appearance of distress among these patients. To do so, a review of the literature was performed and also, demographic data of the participants, nature of the injury and its treatment, medical history and use of toxic substances during the six months after the time of injury, were collected using a semi-structured interview created ad-hoc specifically for this project. In addition, several assessment measurements of personality, anxiety, depression, and posttraumatic stress symptoms, general health status and quality of life were administered. This doctoral thesis confirms the presence of psychopathology secondary to burns and points to subjective variables, such as personality or those related to the creation of traumatic memories, as risk factors. These results may increase understanding of the psychosocial effects due to serious burn injuries on their victims and their relatives, and identify certain variables of vulnerability that could help to prevent more torpid evolution with respect to mental and emotional symptoms.

La incontinencia fecal constituye un problema sanitario significativo que repercute en la calidad de vida y en la salud mental de los pacientes afectos. Su prevalencia en medicina primaria es poco conocida. Objetivos: Determinar la prevalencia de la incontinencia fecal en centros de atención primaria en un sector de Barcelona. Estudiar las características de los pacientes con incontinencia fecal y su relación con la alteración en la calidad de vida y con los trastornos de salud mental. Método: Se realizó un estudio observacional transversal y multicéntrico. Se entrevistaron a los pacientes adultos que consultaron a 9 centros de atención primaria. La incontinencia fecal se definió como la pérdida involuntaria de gases, heces líquidas o sólidas al menos una vez en las 4 semanas anteriores. Se evaluaron la calidad de vida general y la específica de enfermedad utilizando los cuestionarios de calidad de vida 36-Item Short-Form Health Survey (SF-36) y el Fecal Incontinence Quality of Life Scale (FIQLS), respectivamente. Los trastornos de salud mental se evaluaron mediante el 28-Item General Health Questionnarie (GHQ-28). Se estudió la gravedad de la incontinencia fecal con la escala de gravedad del St. Mark’s Hospital y la consistencia y forma de las heces con la escala de Bristol. Para estudiar la asociación de la incontinencia fecal con los trastornos de salud mental se realizó un análisis multivariado. Resultados: Se estudiaron un total de 518 pacientes (edad media de 60,3 años). La tasa de respuesta fue del 67,2%. La prevalencia de la incontinencia fecal fue del 10,8%. La edad, el IMC y la presencia de dos o más comorbilidades de los pacientes incontinentes fue significativamente mayor a la de los continentes. Sólo uno de los motivos de consulta fue la incontinencia fecal. Se halló un porcentaje significativamente mayor de consistencia y forma de las heces patológica en los pacientes con incontinencia fecal, 45,5% vs. 24,4% (p=0,001). La gravedad global de la incontinencia fue de 8,3 ± 5. No hubo asociación entre la gravedad de la incontinencia y el género (p=0,521) ni la edad (p=0,062). Los pacientes incontinentes presentaron puntuaciones inferiores en los cuestionarios de calidad de vida general y específico, siendo estas diferencias estadísticamente significativas. Se detectó una alteración del estado de salud mental en el 51,8% de los pacientes con incontinencia fecal y en el 30,5% de los que no (p = 0,001). La incontinencia fecal fue un factor significativo independiente para la alteración del estado de salud mental (OR 2,088, IC 95% 1,138-3,829, p = 0,017). Conclusiones: La prevalencia de la incontinencia fecal en la medicina primaria es elevada, con un impacto significativo en la calidad de vida y en el estado de salud mental. La edad avanzada, un elevado índice de masa corporal, la presencia de más de dos comorbilidades y la alteración en la consistencia y la forma de las heces son factores asociados a una mayor prevalencia de incontinencia fecal. / Fecal incontinence is a significant health problem that affects the quality of life and mental health of patients affected. There is a little information regarding its prevalence in primary care. Objectives: To determine the prevalence of fecal incontinence in primary care in an area of Barcelona. To study the characteristics of patients with fecal incontinence and its relationship to impaired quality of life and mental health disorders. Methods: A cross-sectional multicenter observational study was undertaken. We interviewed adult patients who consulted 9 primary care centers. Fecal incontinence was defined as involuntary loss of gas, liquid or solid stool at least once in the previous 4 weeks. Health-related and disease-specific quality of life were assessed using the 36-Item Short-Form Health Survey (SF-36) and the Fecal Incontinence Quality of Life (FIQOL) scale, respectively. Mental health status was assessed using the 28-item General Health Questionnaire (GHQ-28). We studied severity of fecal incontinence using St. Mark's score and consistency and stool form by Bristol Stool Scale Form. An adjusted multivariate analysis was performed to study the association of fecal incontinence with the presence of altered mental status. Results: A total of 518 patients were studied (mean age 60.3 years). The overall response rate was 67.2%. The prevalence of fecal incontinence was 10.8% in all series. Age, BMI and the presence of two or more comorbidities were significantly higher in patients with fecal incontinence. In all series one patient has been attended primary health care for fecal incontinence symptoms. We found a significantly higher percentage of altered stool consistency in patients with fecal incontinence, 45.5% vs. 24.4% (p = 0.001). The mean St. Mark’s score was 8.3 ± 5. There was no association between severity of incontinence and gender (p = 0.521) or age (p = 0.062). Incontinent patients had significant lower scores on quality of life questionnaires. Altered mental status was found in 51.8% of patients with fecal incontinence and in 30.5% of those without incontinence symptoms (p=0.001). Fecal incontinence was a significant independent predictive factor for altered mental health status (odds ratio, 2.088; 95% confidence interval, 1.138-3.829, p=0.017). Conclusions: The prevalence of fecal incontinence in primary care is high, with significant impact on quality of life and mental health status. Advanced age, high body mass index, the presence of more than two comorbidities and alteration in the consistency and stool form are factors associated with a higher prevalence of fecal incontinence.

Introducción: El Test Barcelona abreviado (TB-A) constituye un instrumento de exploración neuropsicológica general que ha mostrado ser sensible y válido en la detección de deterioro cognitivo. Desde la publicación en 1997 de la versión abreviada del Test Barcelona, no se han vuelto a desarrollar datos normativos para todos los subtest que componen esta prueba. Por lo tanto, se hace necesaria una nueva normalización del test. La Teoría de Respuesta a los Ítems (TRI) es en la actualidad una de las teorías predominantes en la investigación psicométrica. Esta teoría presenta múltiples ventajas, pero la más importante en neuropsicología, es la invarianza de la medida. Por otro lado, en el ámbito de las demencias y del deterioro cognitivo leve (DCL), la exploración neuropsicológica debe ir encaminada a la identificación de perfiles cognitivos. El TB-A permite la creación de un perfil clínico, muy útil como representación gráfica de las funciones cognitivas preservadas y alteradas. Por último, las redes neuronales artificiales (RNA) se han desarrollado como herramientas de soporte en la toma de decisiones clínicas en el contexto de clasificación de patrones y predicción de funciones. Objetivos: 1) Aportar los nuevos datos normativos del Test Barcelona abreviado, así como crear un perfil único para todos los sujetos. 2) Identificar el perfil cognitivo del deterioro cognitivo leve y la enfermedad de Alzheimer (EA). 3) Estudiar las propiedades psicométricas del TB-A mediante la Teoría de Respuesta a los Ítems utilizando los siguientes grupos diagnósticos: envejecimiento normal, deterioro cognitivo leve y enfermedad de Alzheimer. 4) Utilizar redes neuronales artificiales como método de clasificación mediante el Test Barcelona abreviado, entre sujetos con envejecimiento normal, DCL y EA.Método: El presente estudio se engloba en el contexto del Proyecto Neuronorma. La muestra estaba formada por 346 controles, 79 sujetos con deterioro cognitivo leve y 97 sujetos con enfermedad de Alzheimer. Se estudió la fiabilidad del TB-A mediante el coeficiente de consistencia interna. Con el objetivo de aportar nuevos datos normativos del TB-A se utilizó la técnica de solapamiento de intervalos y punto medio. Se estudió el efecto de las variables sociodemográficas de edad, escolaridad y sexo. Se transformaron las puntuaciones brutas a escalares ajustadas para la edad y escolaridad. Se realizan los perfiles cognitivos del DCL y EA. Desde la TRI, se aplicó el modelo logístico de dos parámetros para datos binarios. Para la calibración de los parámetros se utilizó el programa BILOG MG versión 3. Se crearon tres redes neuronales artificiales, a partir de la combinación de los tres grupos diagnósticos. Se utilizó una arquitectura de Perceptrón Multicapa entrenado con el algoritmo de retropropagación del error. Desde esta perspectiva se utilizó el programa Easy-NN-Plus V.10. Resultados y conclusiones: El TB-A mostró una excelente consistencia interna (α de Cronbach .921). Se presentaron los nuevos datos normativos del TB-A en puntuaciones escalares mediante tablas ajustadas por edad y escolaridad. Los resultados revelaron un perfil cognitivo diferente para el grupo DCL y EA, tanto en el número de funciones cognitivas alteradas como en su magnitud. Desde la TRI, el TB-A presentó una buena sensibilidad clínica y excelente validez discriminante en diferentes grupos de sujetos: envejecimiento normal, deterioro cognitivo leve y enfermedad de Alzheimer. En este sentido, permite separar entre diferentes niveles de habilidad o rasgo latente. El empleo de RNA mostró una exactitud de clasificación de 66.67% en el caso más complejo (tres grupos diagnósticos), 98.33% (controles vs. deterioro cognitivo leve) y 100% (controles vs. enfermedad de Alzheimer). Asimismo, esta aproximación aporta cuáles son las medidas del TB-A más importantes y sensibles en cada situación. / Background: The brief version of the Barcelona Test (a-BT) is an instrument for general neuropsychological assessment. Since 1997, no normative data has been developed for this test. Therefore, a new normalization is needed. Nowadays, Item Response Theory (IRT) is a predominant theory in psychometric research. These models provide several advantages over Classical Test Theory, such as the invariance of ability and item parameters as the most important. On the other hand, neuropsychological assessment in dementia and Mild Cognitive Impairment (MCI) is directed towards identifying cognitive profiles. The a-BT enables creating cognitive profiles, very useful for identifying maintained and impaired cognitive domains. Finally, Artificial Neural Networks (AANs) are interesting computational tools which can provide valuable support to clinical decision making, classification and the prediction of cognitive functioning. Objectives: 1) To provide new normative data of the a-BT, and develop a unique cognitive profile. 2) To identify cognitive profile of MCI and Alzheimer's disease. 3) To apply IRT to assess the psychometric properties of the a-BT in following diagnosis groups: healthy controls, MCI and Alzheimer's disease. 4) To use artificial neural networks to classify among normal aging, MCI and Alzheimer's disease.Method: The sample, within NEURONOMA project, consisted of 346 healthy controls, 79 MCI patients and 97 Alzheimer's disease (AD) patients. Reliability was studied through internal consistency. "Overlapping cell procedure" and midpoint was applied to develop the normative data. Age, education and sex influence were studied. Raw scores were transformed to age-education adjusted scaled scores. MCI and AD cognitive profiles were developed. A two parameter IRT logistic model for binary data was used to calibrate the parameters using BILOG MG version 3. Three artificial neural networks were developed from the combination of the three diagnostic groups. Sofware Easy NN-Plus V. 10 was used to simulate a Multilayer Perceptron trained with backpropagation learning rule.Results and conclusions: The a-BT showed an excellent internal consistency (Cronbach's alpha .921). Normative data were presented on age-education scaled scores. Different cognitive profiles emerged for MCI and AD, according to the number of impaired cognitive domains and magnitude of cognitive alterations. By using IRT, the a-BT showed an appropriate clinical sensitivity and excellent discriminant validity in the following diagnostic groups: normal ageing, MCI and AD. Furthermore, the test allowed to classify individuals according to different skill levels or latent trait. ANNs successfully classified 66.67% of the overall sample in the three diagnostics groups. When using two diagnostic groups, ANNs showed higher accuracy: 98.33% (healthy controls and. MCI) and 100% (healthy controls vs. AD). Finally, this model was useful for identifying relevant and sensitive variables for neuropsychological diagnosis of MCI and AD.

Aquesta tesi mostra, primerament, els resultats de l'enquesta efectuada als titulars d'explotacions araneses d'ovins, així com la caracterització morfològica de la raça Aranesa mitjançant l'estudi de 31 mesures morfològiques quantitatives, 17 índexs d'interès etnològic i funcional, i les variables qualitatives més importants en etnologia, així com un estudi de la llana. En total s'han enquestat 54 ramaderies, amidat 197 animals adults per a la biometria i mostrejat 53 animals per a l'estudi de la llana. El cens oví aranès l'any 2003 era de 2.569 ovelles i 92 marrans, estimant-se en unes 1.489 ovelles i uns 61 marrans els ovins purs aranesos. Aquestes xifres fan entrar l'Aranesa dins la categoria 4, estatus de perill d'extinció, d'acord amb els criteris de l'EAAP (European Association for Animal Production). Els ramats són de dimensions enormement variables i s'exploten en sistema extensiu en pastures naturals, amb aprofitament estival en peixius d'alta o mitjana muntanya. L'Aranès és un tipus oví d'aptitud càrnia poc marcada, que produeix corders de tipus pasqual pesat, criats "a braguer". El maneig productiu és força dissimilar entre explotacions. Poc menys de la meitat de les explotacions sincronitzen els zels mitjançant la separació dels mascles; en aquestes explotacions, la paridora es concentra sobretot els mesos de març a maig, i d'agost a gener, amb uns màxims a l'octubre i al novembre. Unes tres quartes parts dels ramaders practiquen alguna mena de desparasitació periòdica. La disposició d'electricitat és irregular entre explotacions, però és el recurs aigua el de més valor en les explotacions. Les explotacions són de tipus individual, poquíssimes a títol principal, i la mitjana d'edat dels ramaders és de 50,2 anys. Morfològicament, la raça ovina Aranesa presenta un dimorfisme sexual força marcat; es dóna poca variabilitat morfològica intrasexe i no es detecten subpoblacions biomètricament diferenciables, al menys entre terçons. És una raça subhipermètrica i longilínia; en relació al cap, podem definir els animals com a subconvexos, mesaticèfals, braquicraniots i mesoprosopis, de banya en espiral oberta, i de capa polícroma, les més habituals de la qual són la blanca, la negra, la beret i la capiroia. La llana està formada per metxes quadrades tancades amb un clar predomini de les fibres curtes-fines, de diàmetre mitjà, i que es classificaria com a tipus comercial V, "entrefí corrent" (XI si es tracta del fenotip negre) de la classificació espanyola. En aquesta tesi, a partir dels caracters morfològics i de la llana, es fa un estudi comparatiu entre races ovines pirinenques, que situa l'Aranesa en el que anomenem "entrefí occità pirinenc". Finalment, pel que fa a l'estudi genètic, es pot destacar que el grau de subestructuració entre els diferents peixius estivals és molt reduït i generalment poc significatiu. A nivell de marcadors microsatèl·lit, la raça ovina Aranesa mostra una elevada variabilitat genètica i una diferenciació genètica poc pronunciada amb races geogràficament veïnes, com la Tarasconesa i la Xisqueta. Les races Aranesa i Tarasconesa corresponen a agrupacions poc diferenciades entre elles, tant en el pla genètic com morfològic. / This thesis gives the results of the research done with the farmers of sheep farms in the Vall d'Aran. It indicates the morphological characteristics of the Araneses breed through the study of 31 measurements and 17 indexes of ethnological and functional value, the most important qualitative variables in ethnology as well as a study of the wool. 54 breeding flocks have been investigated, 197 adult animals have been measured biometrically and a sample study of the wool of 53 animals has been carried out. The ovine census in 2003 was of 2,569 ewes and 92 rams, of which 1,489 ewes and 61 rams were considered to be of pure Aranese breed. These figures put the Araneses breed in category 4, a status indicating danger of extinction according to the criteria of the EAAP (European Association for Animal Production). The flocks are of very different sizes. They are reared on extensive natural pastures, taking advantage of high and medium alps in summer. The Aranese is not a breed marked out for meat production. The lambs reach optimum weight around Easter after rearing by suckling. The way of rearing varies greatly from farm to farm. Slightly less than half the farms synchronize the coming on heat of the ewes by separating them from the rams. In theses farms lambing period goes from March to May and from August to January, peaking in October and November. About three quarters of the breeders periodically practise some form of deparasitation. The electricity supply is irregular on the farms but water resources are always readily avalaible. The main activity of the farmers is not sheep farming. The average age of the farmers is 50.2 yr. In morphological terms the Aranese breed exhibits a very pronounced morphological variability between the sexes and no biometrically different subpopulations can be detected at least among in the studied areas. The breed is subhypermetrical and longilineal. Their heads can be defined as subconvex, mesaticephalic, brachicranial and mesoprosopeial, with horns in an open spiral and with a polychrome coat. The white, the black, the "beret" and the "capiroia" are the most common. The wool is made up of closed square tufs wich a clear predominance of short-fine fibres of medium diametre, which are classified as of the commercial type V (XI if it is the black phenotype) according to the Spanish classification. In this Thesis, starting from the morphological characteristics and from the wool, there is a comparative study of the pyrenean sheep breeds. The Aranese breed belongs to the "entrefí occità pirinenc". Finally, as regards the study of theier genes the degreee of substructuration in the differents alps is very limited and of little significance. Using microsatellite markers, the Aranese breed shows high genetic variability and little genetic differentiation in geographically neighbouring breeds such as the Tarasconese and the Xisqueta. The Aranese and the Tarasconese appear in similar groupings both genetically and morphologically. / Aguesta tèsi mòstre, en prumèr lòc, es resultats dera enquèsta hèta as titulars d'espleites araneses d'ovins, atau com era caracterizacion morfologica dera raça Aranesa miejançant er estudi de 31 mesures morfologiques quantitatives, 17 indèxs d'interès etnologic e foncionau, e es variables qualitatives mès importantes en etnologia, atau coma un estudi dera lan. En totau s'an enquestat 54 ramaderies, mesurat 197 animaus adults entara biometria e mostrejat 53 animaus entar estudi dera lan. Eth cens ovin aranés er an 2003 ei de 2.569 oelhes e 92 mardans, estimant-se en ues 1.489 oelhes e uns 61 mardans es ovins purs aranesi. Aguestes chifres hèn a entrar ara Aranesa laguens dera categoria 4, estatus de perilh d'escandiment, cossent damb es critèris der EAAP (European Association for Animal Production). Es ramats son de dimensions enormament variables e s'espleiten en sistèma extensiu en peisheus naturaus, damb aprofitament estivau en peisheus de mieja o nauta o montanha. Er Aranés ei un tipe d'ovin d'aptitud càrnia pòc mercada, produsint anhèths de tipe pasqual pesat, criats "a braguèr". Eth maneg productiu ei fòrça desparièr entre espleites. Pòc mens dera mitat des espleites sincronizen es zèls miejançant era separacion des mascles; en aguestes espleites, era paridora se concentre sustot es mesi de març a mai, e d'agost a gèr, damb uns maxims en octobre e noveme. Ues tres quataus parts des ramadèrs practiquen bèra sòrta de desparasitacion periodica. Era disposicion d'electricitat ei irregulara entre es espleites, mès ei eth recors aigua eth de mès valor enes espleites. Es espleites son de tipe individuau, ben pògues a títol principau, e era mejana d'edat des ramadèrs ei de 50,2 ans. Morfologicament, era raça ovina Aranesa presente un dimorfisme sexuau fòrça marcat; se da pòga variabilitat morfologica intrasèxe e non se detècten sospoblacions biometricament diferenciables, aumens entre terçons. Ei ua raça subipermetrica e longilinha; en relacion ath cap, podem definir as animaus coma subconvèxi, mesaticèfals, braquicraniòts e mesoprosòpis, de còrna en espirau dubèrta, e de capa policròma, en tot èster era mès abituau era blanca e era nera, era beret e era capiroia. Era lan ei formada per mèches quarrades tancades damb un clar predomini des fibres cuertes-fines, de diamètre mejan, e que se classificarie coma tipe comerciau V, "entrefin corrent" (XI se se tracte deth fenotip nere) dera classificacion espanhòla. En aguesta tèsi, a compdar des caractèrs morfologics e dera lan, se hè un estudi comparatiu entre races ovines pirenenques, en tot èster era Aranesa en que nomentam "entrefin occitan pirenenc". Fin finau, per çò que hè ar estudi genetic, subergés qu'eth grad de sosestructuracion entre es diferenti peisheus estivaus ei plan redusit e generaument pòc significatiu. A nivèu de marcadors microsatellit, era raça ovina Aranesa mòstre ua elevada variabilitat genetica e ua diferenciacion genetica pòc prononciada damb races geograficament vesies, com era Tarasconesa e era Xisqueta. Es races Aranesa e Tarasconesa corresponen a agropacions pòc diferenciades entre eres, autant en plan genetic com morfologic.

La calidad o competencia del oocito se define por su capacidad para ser madurado, fecundado y dar lugar a una gestación normal y a un parto con un nacimiento sano. .La producción in vitro de embriones (PIVE)s posibilita la obtención de un gran número de embriones de una hembra seleccionada. Utilizar oocitos de hembras prepúberes para la PIVE permite acortar el intervalo generacional y de esta forma intensificar la selección genética en los programas de mejora animal. Sin embargo los oocitos de hembras prepúberes son obtenidos de folículos pequeños y son oocitos de menos calidad para formar embriones in vitro. En estudios anteriores en nuestro laboratorio observamos que la calidad del oocito está mas relacionada con el tamaño del folículo del cual provienen que de la edad de la hembra. Así observamos el mismo porcentaje de embriones producidos in vitro en oocitos de cabras prepúberes (30 a 45 días de edad) obtenidos de folículos mayores de 3mm que de oocitos de cabras adultas. LA conclusión a la que se llega es que la calidad y competencia del oocito está estrechamente relacionada con el desarrollo folicular y la composición del liquido folicular del cual proviene. En vacuno se han realizado varios estudios en los que se relaciona la fertilidad de las vacas con su dieta rica en grasas no saturadas. También los grasos poli insaturados son los ácidos grasos que se encuentran en mayor concentración en el líquido folicular. Entre estos ácidos grasos los que más atención y estudios han conseguido son el Acido Linoleico (AL) y el acido Linolenico (ALA) de las familias omega 6 y omega 3, respectivamente. Ambos ácidos han demostrado su efecto sobre la calidad de los oocitos in vivo e in vitro. Las hembras prepúberes tiene una composición corporal pobre en grasa y presumiblemente también su liquido folicular tenga baja concentración en ácidos AL y ALA. Así uno de los objetivos de este trabajo de tesis ha sido estudiar el efecto de la adicción de diferentes concentraciones de AL y ALA en los medios de maduración in vitro de oocitos de corderas sobre su desarrollo embrionario in vitro. El Acido Hialurónico (AH) es un polisacárido con largas cadenas de azucares que se encuentra en la matriz extracelular e intracelular de los tejidos animales. El AH se encuentra como un glicosaminoglicano (GAG) en el tracto reproductivo de las hembras: úteros, oviducto y liquido folicular. Además se ha demostrado que el AH juega un papel importante retrasando la muerte por fragmentación de los oocitos porcinos. En vacuno, la adición del AH ha mejorado la producción in vitro de blastocistos y añadido en los medios de crioconservación también ha mejorado la supervivencia de los embriones crioconservados. El siguiente objetivo de este trabajo es añadir AH en los medios de cultivo embrionario con el objetivo de incrementar el desarrollo hasta blastocisto de los cigotos de corderas producidos in vitro y su resistencia a la crioconservación. Con estos objetivos se han realizado 3 estudios: 1) Efecto del Acido Linolenico (ALA) sobre la maduración del oocito y su desarrollo embrionario en oocitos de oveja prepúber.2) Efecto del Acido Linoleico (AL) sobre la maduración del oocito y su desarrollo embrionario en oocitos de ovejas prepúberes y 3) Efecto del Acido Hialuronico de alto peso molecular sobre el desarrollo a blastocisto y su resistencia a la crioconservación. En el Experimento 1, se añadió al medio de Maduración in vitro (MIV) de oocitos de corderas concentraciones 50, 100 y 200 µM de Acido Linolenico (ALA) y se estudió su efecto sobre la maduración nuclear, la expansión del cumulus, la secreción de prostaglandinas E2 y F2α, estradiol, progesterona y el porcentaje de oocitos que alcanzaban el estadio de blastocistos. Estos resultados se compararon con un grupo control que no llevaba ALA. Los resultados de este experimento demostraron que a concentraciones 200 µM la maduración del oocito y la expansión del cumulus disminuían comparado con los otros grupos (P≤0.05). La adición de ALA incrementaba la secreción de ambas prostaglandinas analizadas después de las 24 h de maduración de los oocitos (P≤0.05). No se observaron diferencias en el porcentaje de blastocistos obtenidos entre el grupo control (12.2%) y los grupos de 50, 100 y 200 µM ALA (6.9, 11.5 y 14.0%, respectivamente). Sin embargo si que hubo diferencias en el total de células por blastocisto (46.50±5.85, 67.94±6.71, 45.20±6.37, y 59.80±5.51, respectivamente, P≤0.05) y en el total de células apoptoticas por blastocisto (6.45±0.89, 2.48±0.81, 4.02±1.15, y 3.67±1.15, respectivamente, P≤0.05). Después de la MIV la concentración de E2 fue mas baja y la de P4 mas alta en los grupos con ALA que en el grupo control (P≤0.05). En conclusión, estos resultados indican que la adición de ALA al medio de MIV han afectado la calidad de los blastocistos producidos y alterado la liberación de hormonas reproductivas En el experimento 2, se añadió al medio de MIV concentraciones de 50, 100 and 200 µM de Acido Linoleico (LA) y se estudiaron los mismos parámetros que en el experimento 1. Los resultados de este experimento no demostraron ningún cambio en el número de oocitos que alcanzaban la metafase II. La producción de PGE2 y PGF2α incrementó en todos los grupos de AL comparados con el control (P≤0.05). La relación PGE2/PGF2α tampoco fue alterada. Después de la FIV el grupo con 50 µM de AL presentaba un porcentaje de cigotos correctamente fertilizados (2PN) superior al control (57.89 vs. 45.45, respectivamente, P≤0.05). No se observaron diferencias en el porcentaje de blastocistos obtenidos. Sin embargo la calidad de los blastocistos fue superior en el grupo de 50 µM con un número total de células por blastocisto superior al control (63.88±4.54 vs. 53.35±3.64, P≤0.05, respectivamente). No hubo diferencias en el número de células apoptoticas. La producción de E2 fue menor en los grupos AL y no hubo diferencias en la producción de P4. En conclusión, la adición de LA no ha afectado la maduración nuclear ni la producción de blastocistos, sin embargo dosis bajas de LA han incrementado el porcentaje de cigotos normales con 2 pronucleos y la calidad de los blastocistos evaluada por el número total de células. En el experimento 3, concentraciones de 0.25, 0.5 y 1 mg/ml de Acido Hialuronico (AH) fue añadido al medio de cultivo de los embriones producidos en in vitro con oocitos de corderas. El medio de cultivo se preparó sin suero. Los embriones de 2-4 células se cultivaron durante 7 días. Los resultados que se obtuvieron fueron que el porcentaje de blastocistos obtenidos con las distintas concentraciones de AH (33±5.7%, 32±6.0%, 35±5.5%, respectivamente) y el porcentaje de supervivencia embrionaria después de la vitrificación (63±17.1%, 83±15.2%, 58±14.2%; respectivamente) fue estadísticamente superior (P≥0.05) al grupo control (25±5.2%, 38±17.1%, respectivamente). Además, la adicción de AH aumentó el número total de células por blastocisto (83.6±4.6, 100.7±3.8, 97.2±3.7, 105.0±3.9; respectivamente, P<0.05) y el número de células de trofoectodermo ((58.4±3.8, 74.2±3.2, 75.6±3.3, 80.1±3.4; respectivamente, P<0.05). Los embriones que sobrevivieron a la vitrificación también presentaron mayor número de células totales (63.2±3.7, 130.8±3.6, 113.9±5.2, 149.8±5.4; P<0.05), del trofoectodermo (42.9±3.0, 96.7±3.1, 85.2±4.5, 111.9±4.7; P<0.05) y del botón embrionario (20.3±2.2, 32.9±1.8, 27.7±2.6, 36.5±2.7; P<0.05) los blastocistos cultivados con AH que los del grupo control. En conclusión, con oocitos de corderas de 3 meses de edad, aproximadamente, la utilización de AL, ALA en el medio de MIV y de AH en el medio de cultivo no ha incrementado el porcentaje de blastocistos obtenidos. Sin embargo, los ácidos grasos LA y ALA han mejorado la calidad de los embriones aumentando su número de células y el AH ha mejorado la calidad de los blastocistos y mejorado su resistencia a la vitrificación. / The prepubertal sheep ovaries have a large number of small follicles containing oocytes with a capability of developing to upper stages of nuclear maturation, cleaving subsequent post insemination and finally being a blastocyst, that can be transferred to surrogate ewes for progressing of animal breeding programs. Whereas, it has shown that oocytes from prepubertal animals have low competence to develop to higher stages. Accordingly, in this study we have tried to do experiments to improve this deficiency by using Alpha linolenic acid (ALA) and Linoleic Acid (LA). Also, we have tried to improve survival of sheep embryos cultured in vitro using Hyaluronan (HA). Polyunsaturated fatty acids (PUFAs) have shown to have beneficial effects on oocyte maturation and embryo development in vivo and in vitro conditions. Also, PUFAs constitute the major portion of the fatty acid content of the follicular fluid in small and large follicles. ALA and LA from PUFAs used in the present study in 2 separate experiments (experiment 1 for ALA and experiment 2 for LA). To our knowledge there are no previous reports using ALA and LA in prepubertal sheep oocytes in vitro. We used in three concentrations (50, 100 and 200µM) of ALA and LA in maturation media. Subsequently, we evaluated parameters such as cumulus cell expansion, nuclear maturation, secretion of prostaglandins (PGE2 and PGF2α) and steroids (E2 and P4), two pro-nuclei, polyspermy, asynchrony, cleavage, blastocyst rate and embryo quality via counting total cell number and apoptotic cells. In experiment 1, oocytes nuclear maturation and the number of fully expanded cumulus cells were reduced in 200 µM ALA treatment compared to other groups (P≤0.05). Supplementation with ALA increased both PGE2 and PGF2α concentration in the spent media (P≤0.05). No differences were observed in blastocyst development among control (12.2%) and 50, 100 and 200 µM ALA groups (6.9, 11.5 and 14.0%, respectively). However, total cells (46.50±5.85, 67.94±6.71, 45.20±6.37, and 59.80±5.51, respectively, P≤0.05) and apoptotic cell number (6.45±0.89, 2.48±0.81, 4.02±1.15, and 3.67±1.15, respectively, P≤0.05) were significantly improved. After IVM, E2 concentration was lower and P4 concentration was higher in ALA groups compared to control (P≤0.05). In conclusion, these results showed that ALA affects prepubertal sheep embryo quality associated with alteration of releasing reproductive hormones. In experiment 2, no changes were observed in the number of oocytes achieving MII nuclear maturation (91.8, 91.6, 87.9, 93.1 and 93.1, respectively). Production of PGE2 and PGF2α increased in all LA concentrations compared to control (P≤0.05). The ratio of PGE2/PGF2α was not altered. LA at 50µM significantly improved the rate of 2 pro-nuclear (2PN) compared to control (57.89 vs. 45.45, respectively, P≤0.05). There were no differences in cleaved embryos and blastocyst rates. However, embryo quality was improved by 50µM of LA with increase in total cell numbers compared to control (63.88±4.54 vs. 53.35±3.64, P≤0.05, respectively). There was no difference in apoptotic cell numbers. Also, production of E2 decreased significantly while there were not differences in P4 production and the rate of E2/P4 ratio. In conclusion, LA supplementation to prepubertal sheep oocytes in IVM media negatively altered the fully expanded cumulus cells significantly without inhibition of MII nuclear stage percentage of oocytes. The results from the present study provide evidence in increased number of zygotes with normal 2PN and also showed beneficial effects of low level LA on embryo quality of blastocysts at 8 day of post insemination in serum free media. HA is a polysaccharide with long polymer chains of sugars and has found in the extracellular matrix and intercellular matrix of animal tissues. HA is found enormously as a plentiful Glycosaminoglycan (GAG) in the female reproductive tract like uterus, oviduct and follicular fluids. Furthermore, it has been illustrated that HA plays a role in introducing a delay of death in the oocyte with preventing of oocyte from fragmentation in porcine. Also HA improves in vitro produced bovine embryos to develop to the blastocyst stage. It has also been indicated that embryo cryo-survival improvement is due to the HA added to cryopreservation medium HA numerically increased blastocyst percentage at 7-day (33±5.7, 32±6.0, 35±5.5; P≥0.05) and survival rates 48 h after culture in serum free media (63±17.1, 83±15.2, 58±14.2; P≥0.05) as compared to the respective controls (25±5.2, 38±17.1). It increased the total cell (TC) number (83.6±4.6, 100.7±3.8, 97.2±3.7, 105.0±3.9; P<0.05) and trophectoderm cells (TE) (58.4±3.8, 74.2±3.2, 75.6±3.3, 80.1±3.4; P<0.05) at 7-day embryos. Survived embryos had higher TC (63.2±3.7, 130.8±3.6, 113.9±5.2, 149.8±5.4; P<0.05), TE (42.9±3.0, 96.7±3.1, 85.2±4.5, 111.9±4.7; P<0.05) and ICM (20.3±2.2, 32.9±1.8, 27.7±2.6, 36.5±2.7; P<0.05). The results indicate that HA improves the embryo development and viability even quality which might have implication for improving embryo transfer.

Objetivo: Determinar la viabilidad y la seguridad microbiológica del tejido corneal y escleral canino [c] , felino [f] y equino [e] crioconservado a -20ºC, comparando tejidos crioconservados durante menos de 1 año (G≤1a) con aquellos crioconservados durante largos periodos de tiempo (G≥6a). Materiales y métodos: Treinta y seis globos oculares de perro, 20 de gato, y 34 de caballo se obtuvieron de la Fundació Hospital ClínicVeterinari entre 2003 y 2013. Todos los animales estaban libres de neoplasias o enfermedades infecciosas y no presentaban alteraciones oculares. Tras un protocolo de descontaminación, los ojos se enuclearon en condiciones estériles antes de las 10 horas post-mortem. Los globos se almacenaron a -20ºC en condiciones atmosféricas con un antibiótico de amplio espectro y se mantuvieron a esa temperatura durante diferentes periodos de tiempo hasta su análisis. Se realizaron estudios microbiológicos, histológicos y ultraestructurales, tanto del tejido corneal como del escleral. La microbiología consistió en sembrar las muestras de córnea y esclera en agar sangre, McConkey y Sabouraud, y en caldo de cultivo cerebro-corazón. Histológicamente se evaluaron los artefactos de crioconservación y mediante microscopia electrónica de transmisión se analizó la integridad del colágeno, y se establecieron el número y las características de los queratocitos, clasificándolos en normales, apoptóticos y necróticos. En una selección de muestras caninas se comprobó la muerte celular por apoptosis mediante TUNEL. Resultados. Microbiología: Los cultivos directos de los G≤1afueron positivos en un 27,5% [c], 15,0% [f] y 0% [e] y los de los G≥6a en un 0% [c], 0% [f] y 0% [e]. Los cultivos enriquecidos de los G≤1afueron positivos en un 47,5% [c], 30,0% [f] y 27,5% [e] y los de los G≥6a en un 16,7% [c], 0% [f] y 25,0% [e]. Histopatología:En las tres especies, los artefactos de crioconservación fueron más frecuentes en muestras G≥6a que en G≤1a. MET: El tipo de queratocito predominante fue el apoptótico en todas las muestras de las 3 especies. La estructura del colágeno se conservó a lo largo del tiempo, clasificándose como organizada o semiorganizada en todos los casos, excepto en una muestra de córnea canina. Conclusión. El tejido corneal y escleral canino, felino y equino puede crioconservarse a -20ºC y utilizarse al menos durante 8, 10 y 9 años respectivamente sin impedimentos microbiológicos o estructurales. El paso del tiempo parece reducir la contaminación bacteriana en estos tejidos. La apoptosis es la vía de muerte celular más importante para los queratocitoscriocongelados a -20ºC. / Objective: To determine the viability and microbiological safety of canine [c], feline [f] and equine [e] corneal and scleral tissue cryopreserved at -20°C, comparing tissues cryopreserved for less than 1 year (G≤1a) with those cryopreserved for long periods (G≥6a). Materials and Methods: Thirty-six eyeballs from dogs, 20 from cats, and 34 from horses were obtained from the Fundació Hospital Clinic Veterinari between 2003 and 2013. All animals were free of neoplasia or infectious diseases and had no ocular abnormalities. After a decontamination protocol, the eyes were enucleated under sterile conditions within 10 hours post-mortem and stored at -20°C under atmospheric conditions with a broad spectrum antibiotic until analysis. Microbiological, histological and ultrastructural studies of both, the scleral and corneal tissue were performed. Microbiology consisted on cultures of corneal and scleral samples on blood, McConkey and Sabouraud agar and brain heart broth. Cryopreservationartefacts were evaluatedby histology. Transmission electron microscopy (TEM) was used to establish collagen integrity, as well asthe number and characteristics of keratocytes, classifying those in normal, apoptotic and necrotic. Cell death by apoptosis was assessed by TUNEL in selected canine samples Results.Microbiology: Direct cultures were positive in 27.5% [c] 15.0% [f] and 0% [e] of G≤1aand in none of the G≥6a.Enriched cultures were positive in 47.5% [c] 30.0% [f] and 27.5% [e] of G≤1aand in 16.7% [c] 0% [f] and 25.0% [e] ofG≥6a.Histopathology: In all three species, cryopreservation artefacts were more frequent in G≤1a samples than in G≥6a. TEM: The predominant keratocyte was apoptotic in all samples of the 3 species. Collagen structure is retained over time, classified as organized or semi-organized in all cases, except in one sample of canine cornea. Conclusion. The canine, feline and equine corneal and scleral tissues cryopreserved at -20°C can be used for at least 8, 10 and 9 years respectively without microbiological or structural impediments. Bacterial contamination in these tissues seems to be reduced over time. Apoptosis is the most important cell death pathway for cryopreserved (-20º)keratocytes.