La esterificación química de ácidos grasos (AG) libres y glicerol, co-productos de la refinación y de la industria del biodiesel respectivamente, genera nuevas grasas con diferentes características físico-químicas y nutricionales. La introducción de estos co-productos en dietas comerciales para perros contribuye a reducir la cantidad de residuos y a conseguir un sistema de producción de alimentos para animales de compañía más sostenible. Por todo ello, el objetivo de esta Tesis es evaluar el uso de diferentes aceites ácidos esterificados (AAE) para dietas caninas. En primer lugar, la presente tesis doctoral explora el efecto de la inclusión en dietas para perros adultos de AAE de palma con diferente contenido en mono- (MG) y diglicéridos (DG), en comparación con un aceite convencional de palma, sobre las preferencias alimentarias, la digestibilidad y los niveles de lípidos plasmáticos, tanto postprandiales como en ayuno. La hipótesis de este capítulo se centra en que la esterificación de aceites ácidos de palma incrementará la digestibilidad de ciertos AG, como la de los AG saturados (AGS), debido a un incremento de los AGS localizados en la posición sn-2 de la molécula de glicerol y a un incremento en el contenido de MG y DG, que poseen propiedades emulsificantes de la grasa. Nuestros resultados indicaron que los perros tienen una preferencia por las dietas con AAE de palma en su composición en comparación con las que incorporaban aceite convencional de palma. Además, la inclusión de AAE de palma no produjo ninguna diferencia ni en la digestibilidad de la grasa ni en la lipemia, tanto postprandial como en ayuno, en comparación con el aceite de palma convencional. No observamos ninguno de los beneficios hipotetizados con la inclusión de aceites de palma esterificados, que se podrían haber visto neutralizados por los efectos negativos de los AAE sobre su digestión y absorción relacionados con su punto de fusión. Por otro lado, la presenta memoria investiga el uso de AAE, obtenidos a partir de aceite de coco, con alto contenido en ácidos grasos de cadena media (AGCM) en comparación con AG de cadena más larga, obtenidos a partir de aceite de colza y soja. Para ello, se determinó el efecto sobre las preferencias alimentarias, la digestibilidad de la dieta y el control de peso en perros adultos con sobrepeso. Diferentes estudios han confirmado el potencial de los AGCM para reducir la grasa corporal (GC) en humanos y roedores. Sin embargo, no se han publicado estudios que estudien este efecto en perros. Nuestros resultados indicaron que la incorporación de AG de aceite de coco no tiene ningún efecto negativo ni en la palatabilidad ni en la digestibilidad de la materia orgánica y la energía en comparación con AG insaturados de cadena más larga. Además, nuestros resultados también muestran una mayor digestibilidad total de la grasa en los animales alimentados con AGCM, debido a una mejor digestibilidad de los AGCM respecto a AGS de cadena más larga. Por otro lado, la incorporación de AGCM del aceite de coco disminuye el porcentaje de peso perdido y aumenta la GC después de un tratamiento de pérdida de peso en comparación con AG insaturados de cadena más larga, aportados por aceites de colza y soja. Sin embargo, las dietas experimentales no sólo difieren en longitud de cadena sino que también lo hacen en grado de saturación, por lo cual es necesario más investigaciones enfocadas a diferenciar estos efectos. / Chemical esterification of free fatty acids (FA) and glycerol, by-products of the refinery and the bio-diesel industries respectively, generates new technological fats with different physico-chemical and nutritional characteristics. Moreover, re-introducing these by-products in commercial canine diets minimizes the amount of residues and contributes to sustainable food manufacturing systems. Thus, this thesis aims to evaluate the use of different esterified acid oils (EAO) for canine diets. On the one hand, this thesis aims to explore the effect of palm EAO with different mono- (MAG) and diacylglycerides (DAG) content on food preferences, digestibility, and post-prandial and fasting plasma lipids compared to palm native oil in adult dogs. It is hypothesized that esterification of palm acid oil improves the digestibility of certain FA, such as saturated FA (SFA), due to a predicted increase of SFA at the sn-2 position within the glycerol molecule and also due to their increased MAG and DAG content, which have fat emulsifying properties. Our results indicate that dogs preferred diets with palm EAO in their composition compared to those with palm native oil. Additionally, the inclusion of palm EAO in a canine basal diet did not result in any differences on lipid digestibility, and fasting and post-prandial lipaemia compared to palm native oil. We did not observe any of the hypothesized expected benefits of the inclusion of palm EAO, which might have been counteracted by negative effects of EAO associated to their melting point on digestion and absorption. On the other hand, this dissertation also aims to investigate the use of EAO with different medium chain fatty acid (MCFA) content from coconut oil on food preferences, digestibility, and weight management compared to longer chain FA from canola and soybean oils in overweight adult dogs. Several studies have confirmed the potential of MCFA to reduce fat mass (FM) in humans and rodents. However, to our knowledge, there are no published studies in dogs assessing this effect. Our results indicate that the incorporation of FA from coconut oil does not have a negative effect neither on palatability nor on organic matter and energy digestibility compared to unsaturated long chain FA. Moreover, our results also show an improvement in overall fat digestibility in dogs fed diets with MCFA, explained by the better digestibility of saturated MCFA versus longer chain SFA. On the other hand, incorporation of MCFA from coconut oil decreases the percentage of body weight lost and increases body FM after weight loss in comparison to longer unsaturated FA from canola and soybean oils. However, since the experimental diets differed not only in chain length but also in chain saturation, further research is needed to clearly differentiate these effects.

L'objectiu general d'aquesta tesi per compendi de publicacions va ser aportar evidència empírica per a la comprensió de l'ús d'Internet i dels videojocs a partir de l'anàlisi de la personalitat i el rendiment cognitiu. Per donar resposta a l'objectiu es va adaptar l'Internet Addiction Test IAT (Young, 1998) a la població colombiana. Després es van identificar les característiques sociodemogràfiques, els hàbits d'ús d'Internet i la personalitat per relacionar-les amb l'ús problemàtic. Finalment es va examinar la influència de la passió, la impulsivitat i el rendiment cognitiu en videojugador . Es va realitzar l'adaptació a Colòmbia l'IAT en aplicació llapis i paper a una primera mostra de 595 universitaris de 16 a 34 anys d'edat. Després es va aplicar en línia l'IAT a una segona mostra de 1.117 participants de la comunitat de 14 a 67 anys d'edat. Es va administrar el qüestionari de dades sociodemogràfiques i hàbits d'ús d'Internet. A una tercera mostra de 300 videojugadors colombians i 330 espanyols , de 16 a 31 anys d'edat se'ls va aplicar la Passion Scale (Vallerand et al., 2003 ), l'inventari d'impulsivitat (Dickman, 1990 ) i el qüestionari d'Avaluació d'Aptituds Diferencials EFAI (Santamaría et al., 2005). D'acord amb les dades obtingudes, 'estudi conclou : a) el IAT és un instrument vàlid i fiable apte per a l'avaluació clínica i el screening de l'ús problemàtic d'Internet; b) els universitaris colombians i espanyols dediquen el mateix nombre d'hores diàries a l'ús d'Internet però utilitzen diferents plataformes i lloc de joc preferent; c) l'ús problemàtic d'Internet es va relacionar amb activitats d'informació i oci com la xarxa social Facebook, el correu electrònic i les pàgines de contingut per a adults; d) l'ús problemàtic d'Internet és més comú en homes amb neuroticisme; baixa afabilitat i baixa responsabilitat; e) ser dona i tenir alta responsabilitat és un factor protector; f) els videojocs són una activitat altament apassionant que ocupa temps; g) la impulsivitat funcional és més evident en els jugadors de Massively Multiplayer Online Role Playing (MMORPG), g) els jugadors de MMORPG són majors i perceben el seu estil de joc com intensiu; h) els videojugadores d'acció i esport tenen més impulsivitat disfuncional i són més joves; i) els videojugadors presenten més aptitud espacial, raonament abstracte, aptitud verbal i intel•ligència general que els no jugadors i j ) els jugadors de MMORPG tenen més habilitats en aptitud espacial raonament numèric i verbal que els jugadors d'acció, esport i minijocs. / El objetivo general de esta tesis por compendio de publicaciones fue aportar evidencia empírica para la comprensión de uso de Internet y de los videojuegos a partir del análisis de la personalidad y del rendimiento cognitivo. Para dar respuesta a este objetivo se adaptó el Internet Addiction Test IAT (Young, 1998) a la población colombiana. Luego se identificaron las características sociodemográficas, los hábitos de uso de Internet y la personalidad para relacionarlas con el uso problemático. Finalmente se examinó la influencia de la pasión, la impulsividad y el rendimiento cognitivo en videojugadores. Se realizó la adaptación en Colombia del IAT en aplicación lápiz y papel a una primer muestra de 595 universitarios de 16 a 34 años de edad. Luego se aplicó en línea el IAT a una segunda muestra de 1.117 participantes de la comunidad de 14 a 67 años de edad. Se administró el cuestionario de datos sociodemográficos y hábitos de uso de Internet. A una tercera muestra de 300 colombianos y 330 españoles videojugadores de 16 a 31 años de edad se les aplicó la Passion Scale (Vallerand et al., 2003), el inventario de impulsividad (Dickman, 1990) y el cuestionario de Evaluación de Aptitudes Diferenciales EFAI (Santamaría, 2005). De acuerdo a los resultados, el estudio concluye: a) el IAT es un instrumento válido y fiable, apto para la evaluación clínica y el screening del uso problemático de Internet; b) los universitarios colombianos y españoles dedican el mismo número de horas diarias al uso de Internet, sin embargo, utilizan diferentes plataformas y lugar de juego preferente; c) el uso problemático de Internet se relacionó con actividades de información y ocio como la red social Facebook, el correo electrónico y las páginas de contenido para adultos; d) el uso problemático de Internet es más común en hombres con neuroticismo, baja afabilidad y baja responsabilidad; e) ser mujer y tener alta responsabilidad es un factor protector; f) Los videojuegos son una actividad altamente apasionante que ocupa tiempo; g) la impulsividad funcional es más evidente en los jugadores de Massively Multiplayer Online Role Playing (MMORPG); h) los jugadores de MMORPG tienen más edad y perciben su estilo de juego como intensivo; i) los videojugadores de acción y deporte tienen más impulsividad disfuncional y son más jóvenes; j) los videojugadores presentan más aptitud espacial, razonamiento abstracto, aptitud verbal e inteligencia general que los no jugadores; y k) los jugadores de MMORPG tienen más habilidades en aptitud espacial razonamiento numérico y verbal que los jugadores de acción, deporte y minijuegos. / The overall objective of this thesis by publications was to provide empirical evidence for understanding of Internet use and video games based on the analysis of personality and cognitive performance. To respond to the aim initially adapted to the Colombian population the Internet Addiction Test IAT (Young, 1998). Then the sociodemographic characteristics of Internet use habits and personality to relate to the problematic use were identified. Finally the influence of passion, impulsivity and cognitive performance was examined in gamers. Adaptation was performed in Colombia IAT pencil and paper application to a first sample of 595 university students from 16-34 years of age. Then applied to online IAT a second sample of 1117 participants from the general community of 14 to 67 years old. Sociodemographic questionnaire data and Internet usage habits was administered. To a third sample of 630 gamers including 300 Colombians and 330 Spaniards aged 16 to 31 years old were administered the Passion Scale (Vallerand et al., 2003), inventory of impulsivity (Dickman, 1990) and the evaluation questionnaire Differential Aptitude EFAI (Santamaría et al., 2005). According to the results, the study concludes: a) the IAT is a valid and reliable instrument suitable for clinical evaluation and screening of problematic Internet use b) the Colombian and Spanish college students spend the same number of hours to use Internet however, use different platforms and instead preferred game; c) the problematic Internet use was related to information and leisure activities such as social network Facebook, email and pages of adult content; d) use problematic Internet is more common in men with neuroticism, low agreeableness and low responsiveness. Being female and having high responsibility is a protective factor; e) video games are a highly passionate activity that takes time; f) functional impulsivity is most evident in the players of Massively Multiplayer Online Role Playing MMORPG; g) MMORPG players are older and see their style of play as intensive; h) action gamers and sport are more dysfunctional impulsivity and are younger; i) all gamers have more spatial ability, abstract reasoning, verbal ability and general intelligence than non-players and j) MMORPG players have more skills in spatial ability and verbal reasoning numerical players of action, sport and minigames.

Introducción: El schwannoma vestibular (SV) es un tumor benigno con origen en el VIII par craneal. La prueba diagnóstica de referencia del SV es la resonancia magnética (RM), si bien existen una serie de pruebas de funcionalidad cócleo-vestibular que, junto con el grado de sospecha dado por determinadas manifestaciones clínicas, pueden poner sobre la pista del SV. Entre éstas pruebas se encuentran los potenciales evocados vestibulares miogénicos de registro cervical (cVEMPs) que ha ganado popularidad en los últimos años como prueba de funcionalidad del sáculo y del nervio vestibular inferior. Los objetivos del presente estudio son determinar cuál es la bondad diagnóstica de los cVEMPs , establecer qué variables demográficas, clínicas (síntomas, signos, inicio) y de resultados en pruebas otoneurológicas (audiometría, pruebas vestibulares calóricas, potenciales auditivos de tronco –PEATC-, cVEMPs) pueden predecir tamaño, grado de penetración y localización tumorales (fundamentales para establecer la modalidad terapéutica adecuada y para la valoración de la funcionalidad auditivo-vestibular residual que, sin duda, marcan la calidad de vida de estos pacientes). Material y métodos: Para establecer la bondad diagnóstica de los cVEMPs se analizó retrospectivamente una cohorte de 585 pacientes visitados consecutivamente en una consulta de otoneurología, en un período de 4 años, con síntomas-signos auditivo-vestibulares (93 con SV, 492 sin SV). A todos ellos se les realizó cVEMPs y RM. Se calculó sensibilidad, especificidad, valores predictivos y razones de verosimilitud; así mismo se usó una cohorte retrospectiva de 157 pacientes con diagnóstico confirmado de SV en el mismo hospital en un período de 10 años, recogiendo datos demográficos, síntomas (hipoacusia, acúfenos, desequilibrio, vértigo, signos no otológicos) y resultados en audiometría, pruebas calóricas, PEATC y cVEMPs, para realizar análisis multivariado referente a la predicción de tamaño, localización –intra o extracanalicular- y grado de penetración en el conducto auditivo interno (CAI) del SV. Resultados: La prueba índice usada en la serie (cVEMPs) para el diagnóstico de SV, cuando fue comparada con la prueba de referencia (RM CAI), presentó una sensibilidad de 81.72% y una especificidad del 37.60%. Mucho más bajas fueron la sensibilidad (58%) y especificidad (52%) de las pruebas vestibulares calóricas. El valor predictivo negativo de los cVEMPs fue del 92%. La afectación de las frecuencias bajas en la audiometría, una alteración del intervalo III-V en el lado sano en los PEATC y presentar signos no otológicos y desequilibrio fueron las variables predictivas que se relacionaron significativamente con el tamaño del SV, en un modelo de regresión lineal múltiple. Los pacientes con afectación en la audiometría de frecuencias graves y penetración del SV más allá de la mitad del CAI tuvieron más probabilidad de presentar SV extracanaliculares. La pérdida en la audiometría de > 40 dB se mostró como la única variable explicativa del mayor grado de penetración de los SV en el CAI. Conclusiones: Los cVEMPs no son una buena herramienta diagnóstica de detección, debido a su baja especificidad, pero sí de exclusión dado su alto valor predictivo negativo. Presentar desequilibrio, signos no otológicos, afectación de las frecuencias bajas en la audiometría y un incremento en el intervalo III-V del lado sano en los PEATC son las variables que predicen mejor el tamaño en mm de los SV. Los cVEMPs no son una buena herramienta para discernir entre un tumor intra o extracanalicular, ni tampoco el grado de penetración tumoral en el CAI. / Introduction: Vestibular schwannoma (VS) is a benign tumor arising from the eighth cranial nerve. The current gold standard for diagnosing SV is magnetic resonance imaging (MRI), although many tests which evaluate cochleovestibular functionality, together with the degree of suspicion given by certain clinical manifestations, can put on the track of the diagnostic of VS. These tests include cervical vestibular evoked myogenic potentials (cVEMPs), that has gained popularity in recent years as a diagnostic tool to evaluate the saccule and the inferior vestibular nerve functionality. The aims of this study are to determine what is the diagnostic accuracy of the cVEMPs, to establish which demographic, clinical (symptoms, signs, onset) and otoneurological tests (audiometry, caloric tests, auditory brainstem potentials -ABR-, cVEMPs) variables can predict size, degree of tumor penetration and location (they are fundamental for establishing the proper therapeutic modality and for the assessment of the residual auditory-vestibular functionality, which undoubtedly predict the quality of life of these patients). Material and methods: A cohort of 585 patients visited consecutively over a period of 4 years, in an otoneurology clinic, suffering from audiovestibular signs and symptoms (93 with VS, 492 without VS) was retrospectively analyzed to establish the diagnostic accuracy of cVEMPs. cVEMPs and MRI was performed in all of them. Sensitivity, specificity, predictive values, and likelihood ratios were calculated; a retrospective cohort of 157 patients with confirmed diagnosis of VS, at the same hospital in a period of 10 years, was also analyzed, collecting demographic data, symptoms (hearing loss, tinnitus, vertigo, imbalance non-otological signs) and results in audiometry, caloric testing, ABR and cVEMPs in order to perform a multivariate analysis to predict the size, location - intra vs. extracanalicular- and degree of penetration into the internal auditory canal (IAC) of the VS. Results: The index test for the diagnosis of SV used in this series (cVEMPs) -when compared to the reference standard test (MRI) - presented a sensitivity of 81.72% and a specificity of 37.60%. The caloric test showed both low sensitivity (58%) and specificity (52%). The negative predictive value of cVEMPs was 92%. The involvement of low frequencies on audiometry, an alteration of the III-V interval in the ipsilateral side in the ABR, non-otological signs and imbalance were predictive variables that were significantly related to the size of the SV in a multiple linear regression model. Patients with involvement of low-frequencies in the audiometric test and penetration of the VS beyond half of the IAC were more likely to have an extracanalicular VS. A loss > 40 dB in the audiometry was established as the single explanatory variable of a higher penetration degree of VS in the IAC. Conclusions: cVEMPs are not a good diagnostic detection tool, due to its low specificity. Conversely, given its high negative predictive value, they are a good diagnostic tool of exclusion. Having imbalance, non-otological signs, involvement of low frequencies in the audiometry and an increased III-V interval in the healthy side in ABR are the variables which best predict the size of VS in millimeters. cVEMPs are not a good tool to discern between intracanalicular and extracanalicular tumors, nor the degree of tumor penetration in the IAC.

La enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) se caracteriza por limitación al flujo aéreo crónica asociada a una respuesta inflamatoria crónica persistente en las vías respiratorias y los pulmones como respuesta a la inhalación de partículas o gases nocivos, principalmente el humo de tabaco. La EPOC es una enfermedad crónica líder en el mundo. Tiene un gran impacto en términos de prevalencia, costes, morbilidad y mortalidad. Así, se ha convertido en un tema principal para los programas de los Servicios Nacionales de Salud. Sin embargo, la EPOC sigue estando muy infradiagnosticada. La detección de casos de EPOC se limita actualmente a la atención primaria, pero esto es notablemente insuficiente. Después de la mejora del acceso a la espirometría de la atención primaria, el infradiagnóstico sólo se ha reducido un 5% en España. Por lo tanto, otras opciones deben ser consideradas. La farmacia comunitaria es un proveedor de servicios de salud actualmente involucrado en varios programas de prevención. Tienen experiencia en manejo ambulatorio de enfermedades respiratorias, pero hasta ahora, no hay evidencia de estudio de casos de EPOC en la farmacia comunitaria. Nuestro objetivo fue desarrollar un programa de estudio de casos de EPOC en farmacia comunitaria para investigar su viabilidad y eficiencia. Se reclutaron 100 farmacias comunitarias en la provincia de Barcelona. Se les proporcionó un espirómetro y fueron entrenados en la supervisión de la espirometría forzada siguiendo las directrices internacionales actuales. Durante las próximas 12 semanas, invitaron a sujetos en la edad objetivo (más de 40 años de edad) a participar en el estudio. En que estaban en alto riesgo (medido por el cuestionario de cinco preguntas de la GOLD) y no se habían estudiado previamente por la EPOC, se hizo espirometría. Aquellos con un FEV1 / FVC inferior a 0,7 fueron remitidos a su equipo de atención primaria. Se animó a los sujetos a volver en los próximos 3 meses con un cuestionario debidamente cumplimentado por el médico de atención primaria. Un total de 3121 clientes fueron invitados a participar en el estudio. De ellos, 2.295 aceptaron y después de firmar el formulario de consentimiento informado, completaron el cuestionario del estudio. A los 1456 clientes de alto riesgo se les ofreció una espirometría. Finalmente, se hizo en 1423 sujetos. De los cuales 282 presentaron limitación del flujo aéreo. Ellos fueron referidos a la atención primaria, pero sólo 39 regresaron con el cuestionario cumplimentado por su médico de atención primaria. Las espirometrías, evaluadas por un experto, fueron de buena calidad en un 69,4% de los casos. El estudio de casos de EPOC en la comunidad de farmacia es factible y eficiente en la atención primaria. Los farmacéuticos comunitarios son capaces de supervisar espirometrías de calidad. Estos nuevos datos abren una nueva opción para el estudio de casos de EPOC. / Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is characterized by persistent airflow limitation associated with an enhanced chronic inflammatory response in the airways and the lungs to noxious particles or gases, mainly tobacco smoking. COPD is a chronic leading disease. It has a great impact in terms of prevalence, costs, morbidity and mortality. Thus, it has become a main issue for National Health Service programs. However, COPD remains highly underdiagnosed. COPD case finding is currently limited to primary care but this is notably insufficient. After improving primary care access to spirometry, underdiagnosis has been only reduced a 5% in Spain. Therefore, other options should be considered. Community-pharmacy is a health service provider currently involved in several preventive programs. They have experience in ambulatory management of respiratory conditions, but until now, there is no evidence of COPD case finding in community-pharmacy. Our objective was developing a COPD case finding in community pharmacy to investigate its feasibility and efficiency. We recruited 100 community-pharmacies in Barcelona province. Community-pharmacies were provided with a spirometer and they were trained in supervising forced spirometry following current international guidelines. During next 12 weeks, they approach subjects in the target age (over 40 years old) to participate in the study. In they were in high risk (measured by GOLD 5-item questionnaire) and had not been investigated previously for COPD, a spirometry was done. Those with a FEV1/FVC less than 0,7 were referred to their primary care team. Subjects were encouraged to return in the next 3 months with a referral questionnaire filled in by the primary care physician. A total of 3121 customers were invited to participate in the study. Of those, 2295 accepted and after signing the informed consent form, they filled in a questionnaire. In 1456 high risk customers spirometry was offered. Finally, it was done in 1423 subjects. Of whom 282 presented airflow limitation. They were referred to primary care but only 39 returned with the questionnaire filled in by his primary care physician. Quality spirometry, measured by an expert, was obtained in 69,4% of tests. COPD case finding in community-pharmacy is feasible and efficient as in primary care. Community-pharmacists are able to supervise high quality spirometries. This new data open a novel option for COPD case finding.

The Amaryllidaceae alkaloids represent a large and still expanding group of isoquinoline alkaloids, usually classified into nine skeleton types whose representative compounds are: norbelladine, lycorine, homolycorine, crinine, haemanthamine, narciclasine, tazettine, montanine and galanthamine. To date, the alkaloids have been isolated from plants of this family, showing a broad range of biological effects, including acetylcholinesterase (AChE)-inhibitory, antitumor, antibacterial, antifungal, antiviral and antimalarial activities. The genus Lycoris, a group of Amaryllidaceae plants distributed in temperate regions of Eastern Asia, is already known for containing representative alkaloids typical of this botanical family with a wide range of biological activities (for example, lycorine and galanthamine). In the work, the alkaloid profiles of nine species, L. albiflora, L. aurea, L. chinensis, L. haywardii, L. incarnata, L. longituba, L. radiata, L. sprengeri, and L. squamigera, and one variety (L. radiata var. pumila) have been evaluated by GC-MS. This study has identified a total of 31 alkaloids. Structures belonging to the lycorine-, homolycorine-, haemanthamine-, narciclasine-, tazettine-, montanine- and galanthamine-series were identified and quantified, with galanthamine- and lycorine-type alkaloids predominating and usually showing a high relative abundance in comparison with other alkaloids of the extracts. All detected and identified alkaloids had been characterized previously. The analysis of bioactive Amaryllidaceae alkaloid profiles in 9 species and one variety of Lycoris by GC-MS revealed some similarities and differences. This kind of analysis could be useful in guiding the search for compounds with pharmacological activity. Among the species analyzed in the work, L. longituba revealed itself to be a potential commercial source of bioactive alkaloids (such as galanthamine and lycorine) due to its high content in comparison with the other species. In general terms, our results are consistent with the alkaloid profiles reported in the literature for previously studied species. Finally, the GC-MS technology applied has demonstrated to be sufficiently sensitive for the detection of Amaryllidaceae alkaloids, allowing the application of quantitative methodologies to obtain valuable information in relatively short times. The Hippeastrum is a well-known ornamental Amaryllidaceae genus from South America and South Africa, particularly Brazil. Three novel Amaryllidaceae alkaloids form the species Hippeastrum papilio were isolated, including hippapiline, papiline and 3-O-(3’-hydroxybutanoyl)haemanthamine. Their structures were determined by physical and spectroscopic methods. In addition, the known alkaloids haemanthamine, galanthamine, narwedine, 11β-hydroxygalanthamine, apogalanthamine and 9-O-demethyllycosinine B were identified. The unusual cis-B/C ring fusion for the new homolycorine representative hippapiline was ratified by NMR and CD spectroscopy. Besides, GC-MS analysis revealed that galanthamine was the main constituent in the n-hexane extract (86.3 %), also featuring as one of the major components in the EtOAc extract (39.0 %). A crinine-type alkaloid, 3-O-methyl-epimacowine was identificated in the indigenous Brazilian species Hippeastrum calyptratum. Furthermore, the ongoing search for alkaloids in the Amaryllidaceae species using GC-MS resulted in the identification of 18 alkaloids. In addition, the absolute stereochemistry of the 5,10b-ethano bridge in the crinine variants was determined by circular dichroism and X-ray crystallographic analysis, affording the first direct evidence for the presence of crinine-type alkaloids in the genus Hippeastrum. Parasitic protozoa in vitro assays were performed on the new alkaloids from H. papilio. The alkaloid papiline showed favorable activity against Trypanosoma brucei rhodesiense (STIB 900 strain, trypomastigotes stadium) with an IC50 of 0.523 mg/ml, and low activity against Leishmania donovani. Additionally, 3-O-(3’-hydroxybutanoyl)haemanthamine showed mild activity against T. cruzi, low activity against L. donovani and Plasmodium falciparum and also showed low cytotoxicity against myoblasts (L-6 cells). Overall, the research has once again demonstrated the enormous potential of the Amaryllidaceae (subfamily Amaryllidoideae) plants as sources of bioactive products and novel alkaloids, and confirmed the importance of continuing research on species not yet explored. / La familia Amaryllidaceae presenta un grupo específico de alcaloides isoquinolínicos, que suelen mostrar un amplio espectro de actividades biológicas. Se han seleccionado para su estudio 9 especies del género Lycoris (L. albiflora, L. aurea, L. chinensis, L. haywardii, L. incarnata, L. longituba, L. radiata, L. sprengeri, and L. squamigera) y una variedad L. radiata var. pumila. El género Lycoris presenta numerosos endemismos en China. Las especies Hippeastrum papilio y H. calyptratum originarias de Brasil también han sido objeto de estudio. Por lo que respecta a las especies estudiadas del género Lycoris, la identificación de sus alcaloides se ha llevado a cabo por GC-MS. Este estudio ha permitido identificar un total de 31 alcaloides. En el perfil de los extractos de las especies estudiadas predominan los alcaloides que presentan un acoplamiento fenol-oxidativo orto-para’ (tipo licorina) y para-orto’ (tipo galantamina). El número de alcaloides detectado en cada una de las especies estudiadas oscila entre 10 (L. incarnata y L. radiata var. pumila) y 20 (L. longituba) compuestos. Todos los alcaloides detectados e identificados habían sido caracterizados con anterioridad. En el estudio de Hippeastrum papilio se constató la presencia del alcaloide galantamina en cantidades notables –de interés por su utilización como tratamiento paliativo de la Enfermedad de Alzheimer-, además de los nuevos compuestos hippapilina, papilina y 3-O-(3’-hidroxibutanoil)hemantamina junto a los ya conocidos 11β-hidroxigalantamina, apogalantamina, hemantamina, narwedina y 9-O-demethyllycosinine B. El alcaloide hippapilina es el primer ejemplo de fusión cis B/C con los protones 10b y 1 en orientación beta. Por su parte, el alcaloide papilina muestra una remarcable actividad frente a Trypanosoma brucei rhodesiense (cepa STIB 900, estadio tripomastigote) con un IC50 de 0.523 μg/ml. Finalmente, el estudio de la especie Hippeastrum calyptratum nos ha permitido la identificación de 17 compuestos, de los cuales el alcaloide del tipo crinina 3-O-metilepimacowina, se aisla por primera vez de una fuente natural.

Tesi realitzada al Centre de Recerca en Agrigenómica (CRAG) / SUMO, Small Ubiquitin-related MOdifier, es un modificador post-traduccional de la familia de la Ubiquitina, ya que presentan estructuras y mecanismo de conjugación conservados. La unión de SUMO al sustrato puede modificar la actividad, localización y estabilidad de la proteína diana. En plantas, la conjugación de SUMO es un proceso esencial durante los primeros estadíos del desarrollo embrionario y que regula las respuestas de las plantas a hormonas y su adaptación frente a diferentes estreses abióticos y bióticos. La conjugación de SUMO al sustrato es el resultado de la acción secuencial de tres reacciones enzimáticas: la activación de SUMO, catalizada por el heterodímero SAE2/SAE1, la conjugación a la enzima conjugadora SCE1 y su transferencia al sustrato en una reacción facilitada por E3 ligasas. En Arabidopsis, existen cuatro isoformas de SUMO, SUMO1, 2, 3 y 4, y dos isoformas de la subunidad pequeña de la enzima activadora, SAE1a y b. Con el objetivo de analizar las bases moleculares de la función de SUMO in vivo, se ha procedido a la caracterización molecular de la maquinaria de SUMOylación. El análisis bioquímico de los parálogos de SUMO de Arabidopsis ha puesto de manifiesto la existencia de un mecanismo de regulación que permite la conjugación preferencial de las isoformas esenciales AtSUMO1/2. Este mecanismo consiste en una mayor afinidad de la enzima activadora E1 por SUMO1/2, de manera que la primera enzima de la vía seleccionaría la isoforma de SUMO que entra en la cascada de conjugación. Además, en Arabidopsis, existen dos isoformas de la enzima activadora E1 que difieren en la composición de la subunidad pequeña, SAE1a y SAE1b. Plantas mutantes de Arabidopsis que carecen de la subunidad SAE1a presentan deficiencias en las respuestas frente a estrés térmico e hídrico, sugiriendo que la subunidad pequeña podría tener un papel regulador en el mantenimiento de la homeostasis de SUMO in vivo. En resumen, los resultados indican que la enzima E1 activadora regularía la conjugación de SUMO mediante la selección de las isoformas de SUMO que entran en la cascada de conjugación y la cinética de conjugación mediante la expresión diferencial de las isoformas SAE1a y SAE1b. Resultados adicionales indican la existencia de modificaciones post-traduccionales que podrían regular la actividad de la enzima activadora in vivo. Por un lado, se ha identificado un procesamiento del extremo C-terminal de la enzima activadora que participa en la regulación de la localización subcelular de esta enzima. Por otro lado, se ha identificado la SUMOilación de diferentes componentes de la maquinaria de SUMO in vitro, entre los que se encuentran SAE2, SAE1, SUMO y SCE1. Estas modificaciones podrían estar regulando la actividad, estabilidad y localización de estas enzimas in vivo. Los resultados obtenidos han sentado las bases para el desarrollo de una herramienta molecular que permite la inhibición moderada de la SUMOylación in vivo. Esta herramienta consiste en la generación de una forma de SAE2 que actúa como dominante negativo, bloqueando la transferencia de SUMO desde la enzima activadora a la conjugadora. La expresión de este dominante negativo mimetiza los defectos de desarrollo característicos de plantas mutantes que presentan una SUMOilación disminuida, validando esta estrategia para el estudio de la función de SUMO en plantas in vivo. Mediante el uso de estas plantas, se ha establecido que un sistema de SUMOilación funcional es necesario para la activación de las respuestas de defensa de las plantas frente a patógenos. Además, como abordaje adicional para estudiar la función biológica de SUMO, se han realizado aproximaciones proteómicas en semilla y se han identificado proteínas potenciales sustrato de SUMO que podrían regular transiciones de desarrollo en semilla. / SUMO, Small Ubiquitin-related Modifier, is a post-translational modifier belonging to the ubiquitin family, as they present preserved structures and mechanism of conjugation. In plants, SUMO conjugation is essential in the early stages of embryonic development and regulates plant responses to hormones and abiotic and biotic stresses. SUMO conjugation is the result of the three sequential enzymatic reactions: SUMO activation catalyzed heterodimer SAE2 / SAE1, conjugation to SCE1 conjugating enzyme and its transfer to the substrate in a reaction facilitated by E3 ligases. In Arabidopsis, there are four SUMO isoforms, SUMO1, 2, 3 and 4, and two isoforms of the small subunit of the activating-enzyme, SAE1a and b. In order to analyze the molecular basis of the role of SUMO in vivo, we performed the molecular characterization of SUMOylation machinery. Biochemical analysis of the Arabidopsis SUMO paralogs revealed the existence of a regulatory mechanism that allows the preferential conjugation of the essential isoforms AtSUMO1 / 2, which is mediated by the E1 activating enzyme. Also, there are two isoforms of the activating enzyme E1 which differ in the composition of the small subunit, SAE1a and SAE1b. We have shown that the SAE1a subunit is necessary for maintaining SUMOylation homeostasis in vivo. In summary, the results indicate that the E1 regulates SUMO conjugation by selecting SUMO isoforms entering the conjugation pathway and the conjugation rate by the differential expression of SAE1a/b isoforms. Additional results indicate that post-translational modifications may regulate the activity of the E1-activating enzyme. We have identified a processing of the E1 C-terminus involved in the regulation of its subcellular localization. Furthermore, we have identified the SUMOylation of different components of SUMO machinery, including SAE2, SAE1 SUMO and SCE1. We have advanced our knowledge of the SUMO biology by using a molecular tool that allows moderate inhibition of in vivo SUMOylation. We have engineered an E1 dominant negative which mimics plant responses typical of SUMOylation mutants. By using these plants, we have uncovered a new role of SUMOylation in defense responses against pathogens. Furthermore, proteomic approaches have been identified potential SUMO protein substrates that could regulate seed developmental transitions.

La cepa bacteriana AL 1.1 se aisló de una muestra de suelo de la isla Decepción del continente Antártico. Inicialmente se observó que dicha cepa tenía la capacidad de reducir la tensión superficial del medio, por lo que fue seleccionada para realizar la presente tesis doctoral. Después de confirmar la identificación del aislado como un Bacillus licheniformis se caracterizó el biotensioactivo (BT) producido como liquenisina (LchAL1.1). El estudio de las propiedades físico-químicas de la LchAL1.1 mostró que es capaz de reducir la tensión superficial del agua de 72 a 30 mN/m y posee una concentración micelar crítica de 15 mg/L, indicando una elevada eficacia y eficiencia. La LchAL1.1 tiene la capacidad de formar cristales líquidos del tipo de cruces de malta, lo cual sugiere una importante capacidad de agregación y abre un campo importante en la encapsulación de compuestos de interés. La primera parte del trabajo se centró en el estudio de la producción del BT. Al analizarse diversas fuentes de carbono se observó que la cepa AL 1.1 solo producía liquenisina con hidratos de carbono. Dicha información fue de utilidad para la selección de las melazas como fuente de carbono ya que es un sustrato rico en dichos componentes y además es una fuente residual de bajo coste. Utilizando dicho sustrato se diseñó el medio de producción óptimo mediante la aplicación de la metodología de superficie de respuesta (107,82 g/L de melazas, 6,47 g/L de NaNO3 y 9,7 g/L de K2HPO4/KH2PO4), obteniendo rendimientos cercanos a los 3,2 g/L de liquenisina, lo que representa un incremento de 15 veces con respecto al medio inicial. Se han estudiado las propiedades biológicas de la LchAL1.1 para conocer su posible aplicación en diferentes ámbitos. A pesar de su débil acción antimicrobiana, la LchAL1.1 se presenta como una alternativa interesante para evitar la adherencia y eliminación de biofilms microbianos, encontrando una mayor eficacia para evitar la adherencia microbiana y una alta eficiencia para la eliminación del biofilm pre-formado. Adicionalmente se estudió la interacción de la LchAL1.1 con membranas biológicas y vesículas fosfolipídicas con el objetivo de conocer el mecanismo molecular de su acción. La LchAL1.1 produce hemólisis a concentraciones por debajo de su concentración micelar crítica. Las medidas cinéticas muestran que con la adición de la LchAL1.1, la salida de K+ precede a la de la hemoglobina, y que la adición de protectores osmóticos de tamaño apropiado al medio externo hace posible disminuir y hasta evitar la hemólisis. Estos resultados sugieren que la hemólisis de los eritrocitos humanos ocurre por un proceso coloide-osmótico. Por otro lado, la adición de la LchAL1.1 a vesículas unilamelares (LUV) de POPC produce la salida selectiva de solutos atrapados en su interior al medio externo, encontrando que la composición de la membrana modula el proceso de salida en gran medida. Esto nos indica que la incorporación de la LchAL1.1 en membranas tanto experimentales como modelos, provoca la formación de dominios laterales, los cuales forman defectos o “poros” a través de los cuales tiene lugar la salida de solutos con un tamaño determinado. Con respecto a su acción sobre células eucariotas, la liquenisina induce apoptosis en un 96,5% de las células epiteliales de cáncer de colón (Caco-2). Dicho efecto puede estar relacionado con la interacción de las micelas con la bicapa lipídica, ya que el efecto ocurre a concentraciones de la LchAL1.1 que están por encima de su concentración micelar crítica (50 – 100 µg/mL). Un nuevo enfoque para potenciar las propiedades biológicas de los compuestos bioactivos, es la posibilidad de utilizarlos en combinación. En este sentido, se evaluó la interacción de la LchAL1.1 con tensioactivos sintéticos geminales derivados de aminoácidos como el C3(LA)2 y C6(LL)2, encontrando que con el C3(LA)2 se produce una respuesta sinérgica en sus propiedades antimicrobianas, mejorando la acción de ambos compuestos especialmente contra bacterias Gram negativas / Biosurfactants are of great interest due to the demand for natural products with low toxicity. Strain AL 1.1, isolated on Deception Island (Antarctica) and identified as Bacillus licheniformis, produce lipopeptide when grow under a variety of carbohydrates. The lipopeptide was characterised as lichenysin (LchAL1.1). The LchAL1.1 reduced surface tension to 30 mN/m and had a critical micelle concentration of 15 mg/L. This highly effective and efficient characterized the product as a powerful surfactant. Besides, the formation of liquid crystalline by LchAL1.1 in form of Maltese crosses was revealed. This suggested important properties to self-aggregate and opens an important field in the compounds encapsulation. Nevertheless, their production is not competitive when cost is a limiting factor. For this reason, an economical medium, containing molasses, was optimized to enhance lichenysin production by response surface methodology (RSM). A production of 3.2 g l-1 of lichenysin was achieved with an optimum medium containing 107.82 g l-1 of molasses, 6.47 g l-1 of NaNO3 and 9.7 g l-1 of K2HPO4/KH2PO4, in which, molasses and phosphate salts had a significant effect on biosurfactant production. This medium resulted in a fifteen times increase in production compared with the non-optimized medium. The LchAL1.1 showed a weak antimicrobial activity, however, it had notable anti-adhesion activity, and was able to prevent and eliminate the biofilm formation by pathogenic strains associated with foodborne illness. Lychenysin was effectively applied in a surface pre-treatment to avoid microbial biofilm. It was also very efficient in removing biofilms in surface post-treatment. In addition, the molecular mechanism underlying permeabilization of model and biological membranes by the lipopeptide lichenysin was evaluated. The LchAL1.1 caused hemolysis of human erythrocytes, which varied with LchAL1.1 concentration in a sigmoidal manner. The LchAL1.1-induced K+ release from red blood cells preceded the leakage of hemoglobin, and in addition, hemolysis could be impeded by the presence of compounds in the external medium having a size larger than PEG 4000, indicating a colloid-osmotic mechanism for hemolysis. Lichenysin also caused permeabilization of model phospholipid membranes, as monitored by the release of carboxyfluorescein, from large unilamellar vesicles (LUV). Lipid membrane composition plays a role in the target membrane selectivity of lichenysin. The experimental results support a pore-type behaviour that can be explained by the formation of enhanced permeability domains in the erythrocyte membrane, as observed in model membranes. Furthermore, the LchAL1.1 induced apoptosis in non-differentiated intestinal Caco-2 cells (96.5%). The action can be due to the micelles interaction with lipid bilayer, because the effect occurred to LchAL1.1 concentration above critical micelle concentration (50-100 µg ml-1). Finally, the interaction between lichenysin, arginine (C3(LA)2) and lysine (C6(LL)2) surfactants was evaluated. Thus, when the LchAL1.1 act as co-surfactant improved the antimicrobial activity of arginine (C3(LA)2) surfactant, showing a synergistic effect, mainly in front to Gram negatives bacteria.

Al igual que en muchos países industrializados de América y Europa, en Chile ha habido una transición demográfica y epidemiológica caracterizada por un considerable aumento de enfermedades crónicas no transmisibles relacionadas con la dieta (Enfermedades coronarias, diabetes, obesidad, hipertensión, apoplejía y cáncer) (Aedo M., et al., 2010; Caro S., 2015; Marin & Wallace, 2002). El objetivo de este estudio es comprender la efectividad de la estrategia comunicativa en el tiempo, con la cual se implantó e implementó en la comunidad de Villarrica, Chile la intervención educativa sanitaria relativa a evaluar el Estilo de Vida Promotor de Salud (EVPS) total, así como, para cada una de las sub-escalas o factores de vida saludable de acuerdo al modelo de Pender, tales como autorrealización, responsabilidad de salud, ejercicio, nutrición, apoyo interpersonal y manejo de estrés. Este es un estudio longitudinal y comparativo, entre los indicadores que muestran los resultados del programa EVPS obtenidos en el estudio realizado en el año 2002 y los indicadores obtenidos en el año 2010, complementando lo que refleja la investigación cuantitativa y las entrevistas en profundidad (EEP) con su análisis argumentativo mostrando la investigación cualitativa, en Mujeres de la comuna, con el propósito de determinar las conductas promotoras de salud adquiridas o no, por las mujeres participantes, lo cual refleja la eficiencia de la estrategia comunicativa usada en la intervención. La presente investigación se considera desde el período de re-test y EEP efectuadas en el mes de mayo del año 2010, es decir, ocho años después de finalizada la intervención, Programa Estilo de Vida Promotor de Salud (PEVPS). El objetivo fue determinar el impacto del programa, a largo plazo, tanto en las conductas de EVPS global, como en las seis dimensiones, es decir, Autorrealización, Responsabilidad en Salud, Ejercicio, Nutrición, Apoyo Interpersonal, Manejo del estrés. Para tal efecto, se aplicó el instrumento para medir el EVPS de Pender, al igual que en los períodos de pre-test y post-test, luego se aplicaron las EEP con su respectiva matriz de análisis argumentativo para formar los mapas conceptuales que nos brindaron la información necesaria para contrastar los resultados cuantitativos y cualitativos. La estrategia comunicativa empleada en la intervención, fue importante para lograr el cambio de comportamiento en el año 2002, permitiendo a las personas adoptar conductas promotoras de vida saludable en algunas dimensiones, como en el EVPS total. Esto muestra la importancia de un refuerzo de estas conductas en forma permanente post intervención, los comportamientos saludables se mantuvieron en el tiempo por el refuerzo de redes de apoyo social, contando principalmente con la familia, ya que las mujeres de la comuna mantienen estas conductas, probablemente debido a su autorealización como a la red social que mantienen considerando una mayor frecuencia de relaciones a nivel familiar y social. / Like many industrialized countries in Europe and the Americas, Chile has undergone a demographic and epidemiological transition characterized by a considerable increase in chronic and non-transmissible diseases linked to diet (heart disease, diabetes, obesity, hypertension, stroke and cancer) (Aedo M., et al., 2010; Caro S., 2015; Marin & Wallace, 2002). The objective of this study is to understand the effectiveness over time of a communication strategy applied during the implementation of a health education intervention based on the evaluation of Health Promoting Lifestyle (HPL), in general and for each of the sub-scales or healthy living factors according to the Pender model, namely self-actualization, responsibility for health, exercise, nutrition, interpersonal support and stress management, in the community of Villarica, Chile. This is a longitudinal comparative study based on indicators from the results of the study carried out in 2002 and indicators obtained in 2010. This quantitative analysis is complemented by a qualitative component consisting of in-depth interviews carried out with women from the community and submitted to argument analysis, in order to detect health-promoting behaviors acquired by the participants and determine the effectiveness of the communication strategy applied during the intervention. The present study is based on the re-test and in-depth interviews which took place in May 2010, eight years after the end of the Health Promoting Lifestyle Program (HPLP). The objective is to determine the long-term impact of the program on general HPL behaviors as well as each of the six dimensions, that is, Self-Actualization, Responsibility for Health, Exercise, Nutrition, Interpersonal Support and Stress Management. To this effect, Pender’s model for measurement of HPL was applied, as in the pre-test and post-test, and in-depth interviews were then carried out and an argument analysis matrix performed in order to form the conceptual maps that provided the information necessary to compare and contrast quantitative and qualitative results. The communication strategy employed during the intervention was important in order to achieve behavioral changes in 2002, allowing for the adoption of health-promoting behavior in some of the measured dimensions as well as for overall HPL. The results demonstrate the importance of ongoing reinforcement of positive behaviors in the post-intervention period. Healthy behaviors were maintained over time through social support networks, especially the family, as women from the area studied maintained these behaviors probably due to the degree of self-actualization and the social network that they possess, with a higher frequency of social and family relationships.

INTRODUCCIÓN: Los pacientes cirróticos tienen una elevada susceptibilidad a las infecciones, siendo la peritonitis bacteriana espontánea especialmente grave. Pese a que el tratamiento antibiótico es eficaz, la mortalidad todavía es elevada. Los modelos experimentales descritos hasta el momento son modelos de cirrosis que pueden llegar a desarrollar ascitis y peritonitis bacteriana espontánea, aunque con dificultades metodológicas. Para validar nuevos tratamientos es imprescindible disponer de un modelo experimental que se asemeje al máximo a la patología humana a estudiar. OBJETIVOS: Desarrollar modelos experimentales de peritonitis bacteriana inducida en ratas con cirrosis que permita evaluar nuevas estrategias terapéuticas MATERIAL Y MÉTODOS: Para el desarrollo del modelo experimental de peritonitis bacteriana inducida se utilizó ratas Sprague-Dawley con cirrosis inducida mediante la administración orogástrica de CCl4 con o sin ascitis. Recibieron una inyección intraperitoneal de diferentes concentraciones de E. coli diluido en 1 ml de agua estéril y diferentes volúmenes de agua estéril. Un subgrupo de animales sin ascitis recibió ceftriaxona 4 horas después de la inoculación de E. coli. En el segundo protocolo se utilizaron ratas a las que se les indujo PBI mediante una inyección intraperitoneal de 109 ufc de E. coli diluido en 20 ml de agua estéril. Fueron aleatorizados a recibir por vía subcutánea: placebo, ceftriaxona, anti-TNFα y ceftriaxona, o anti-TNFα solo. RESULTADOS: Las ratas con ascitis mostraron una menor mortalidad que las ratas sin ascitis a las que se les inyectó 108 o 109 ufc de E. coli (p<0.05). La mortalidad fue mayor con 109 ufc respecto 108 ufc de E. coli tanto en ratas con ascitis (pNS) como en las ratas sin ascitis (p<0.01). Se observó una tendencia a una menor mortalidad en las ratas inoculadas con 108 ufc de E. coli y mayor volumen de líquido inoculado. Se observó una marcada respuesta de las células polimorfonucleares peritoneales 4 horas después de la inyección de E. coli tanto en ratas con o sin ascitis. La terapia con antibióticos redujo significativamente la mortalidad en las ratas infectadas con 108 ufc de E. coli (p<0.01). En el segundo protocolo la mortalidad en las ratas tratadas con ceftriaxona y anti-TNFα fue menor que en los animales que recibieron placebo (53% vs 100%, p<0.01). Los niveles TNFα en suero se redujeron significativamente en las ratas que sobrevivieron tratadas con ceftriaxona y anti-TNFα pero no en aquellas tratadas con antibiótico solo. CONCLUSIONES: Hemos desarrollado un nuevo modelo experimental de peritonitis bacteriana inducida en ratas cirróticas con o sin ascitis, que es fácilmente reproducible, mediante la inoculación intraperitoneal de E. coli y que podría ser de gran utilidad para evaluar nuevas estrategias terapéuticas, como la administración de anti-TNFα asociada a antibióticos. / INTRODUCTION: Spontaneous bacterial peritonitis (SBP) is a common and severe infection in patients with cirrhosis. Although antibiotic treatment is effective, mortality is still high. The experimental model of cirrhosis induced by carbon tetrachloryde administration has been used to study the pathogenesis of ascites formation, renal dysfunction and bacterial translocation and to evaluate the effect of administration of different drugs on portal pressure and water and sodium renal excretion. However, this model has not been used to evaluate spontaneous bacterial peritonitis and the effect of different therapies. It is very important to design an experimental model of bacterial peritonitis in cirrhotic rats that remembers the outcome of the disease in cirrhotic patients. AIM: To develop an available experimental model of induced bacterial peritonitis in cirrhosis and to evaluate the efficacy of new therapeutic interventions in this model of induced bacterial peritonitis (IBP). MATERIAL AND METHODS: We used Sprague-Dawley rats with carbon-tetrachloride-induced cirrhosis with or without ascites. Rats were randomized to receive an intraperitoneal administration of different concentrations of Escherichia coli (E. coli) diluted in 1 ml of sterile water in ascitic rats and in different volumes in nonascitic rats. A subgroup of nonascitic animals received ceftriaxone 4 h after E. coli inoculation. In the second protocol cirrhotic rats without ascites were infected with an intraperitoneal injection of 109 cfu of E. coli diluted in 20 ml of sterile water to induce bacterial peritonitis and then were randomized to receive placebo, ceftriaxone, anti-TNFα and ceftriaxone, or anti-TNFα alone administered subcutaneously. RESULTS: Ascitic rats showed a lower mortality rate than nonascitic rats infected with 108 or 109 cfu of E. coli (p<0.05). Mortality was higher with 109 cfu than with 108 cfu of E. coli in ascitic (pNS) and nonascitic (p<0.01) rats. A trend was noted to ward higher mortality in nonascitic rats inoculated with 108 cfu with increasing water volumes. A marked peritoneal polymorphonuclear cell response was observed 4 h after E. coli injection in both ascitic and nonascitic rats. Antibiotic therapy significantly reduced the mortality rate of rats infected with 108 cfu (p<0.01). In the second protocol mortality in rats treated with ceftriaxone and anti-TNFα was significantly lower than in animals receiving placebo (53% vs. 100%, p<0.01). Serum TNFα decreased significantly in surviving rats treated with ceftriaxone plus anti-TNFα but not in treated with antibiotics alone. CONCLUSIONS: We have developed a new experimental model of induced bacterial peritonitis in cirrhotic rats with or without ascites, which is easily reproducible by intraperitoneal inoculation of E. coli and may represent a useful tool for the study of pathogenic events postinfection and for the design of new therapeutic strategies to treat patients with SBP such as the administration of anti-TNFα associated with antibiotics.

El virus de la gripe porcina (SwIV) es una zoonosis. El hecho de que los cerdos pueden actuar como "cocteleras virales" del virus de la gripe potencialmente infecciosos para el ser humano pone de manifiesto su relevancia y la necesidad de comprender la interacción de los diferentes virus de la gripe y otros patógenos respiratorios con el sistema inmune porcino. Además, el estado clínico de los cerdos infectados con gripe puede agravarse debido a una infección bacteriana secundaria. Algunas de estas bacterias como el Haemophilus parasuis son comensales del tracto respiratorio y producen la enfermedad de Glässer, una enfermedad de las granjas de cerdos con alto impacto económico. Por otro lado, las células dendríticas (DCs) son importantes en la inducción de una respuesta inmune efectiva contra los patógenos. Su localización en las vías respiratorias como células centinelas, les convierte en dianas de los patógenos. Sin embargo, su interacción con los virus de la gripe o su papel en las co-infecciones no ha sido totalmente caracterizado. Con el objetivo de entender al nivel celular la interacción de los virus de la gripe y el H. parasuis como patógenos comunes del trato respiratorio de los cerdos, tres estudios fueron desarrollados y presentados en esta tesis. En el primer estudio, las células dendríticas derivadas de la médula ósea de cerdos (poBMDCs) fueron expuestas a una cepa circulante de la gripe porcina H3N2. En el segundo estudio, las poBMDCs fueron infectados con diferentes virus de la gripe que el sistema inmune porcino puede encontrar en la naturaleza como son: el A/Swine/Spain/SF32071/2007(H3N2), el virus de la gripe pandémica de 2009 A/Catalonia/63/2009(H1N1), el virus de la gripe aviar de baja patogenicidad Anas/plathyrhynchos/Spain/1877/2009(H7N2) y el virus de la gripe aviar de alta patogenicidad A/Chicken/Italy/5093/1999(H7N1); y finalmente en el tercer estudio, las poBMDCs fueron infectadas o co-infectadas con el H3N2-SwIV y H. parasuis no virulenta (SW114) o virulenta (Nagasaki). De estos estudios, tres conclusiones generales se pueden extraer: (i) las poBMDCs se infectan con el virus de la gripe porcina H3N2 y transmiten la infección a las células permisivas sólo cuando se favorece la interacción célula-célula, (ii) el perfil de secreción de citoquinas, la expresión de los mRNA de citoquinas y factores de transcripción después de la infección con los virus H3N2 SwIV, hH1N1 y aH7N2 o aH7N1 pueden indicar una activación de la respuesta inmune específica contra estos virus, (iii) la previa infección de las poBMDCs con el H3N2-SwIV seguida por la infección con H. parasuis resultó en un perfil de citoquinas sesgada mayoritariamente hacia una respuesta inflamatoria. En conjunto, estos datos nos ayudan a comprender la interacción entre los patógenos respiratorios como los virus de la gripe porcina y/o H. paraseis, con las células dendríticas así como conocer posibles mecanismos involucrados en el desarrollo de la respuesta inmune protectora. / Swine influenza virus (SwIV) is considered a zoonosis and the fact that swine may act as “mixing vessels” of influenza viruses potentially infectious for humans illustrates its relevance and the need to understand the interaction of different influenza viruses and other respiratory pathogens with the porcine immune system. Moreover, the clinical status of influenza infected animals may deteriorate due to secondary bacterial infection. Some of these bacteria such as Haemophilus parasuis are commensal of the respiratory tract of pigs and the causal agent of Glässer’s disease, an important disease in swine herds that results in high economical loses. In other hand, dendritic cells (DCs) mediate the induction of immunity against pathogens and the location of DCs beneath the epithelium of respiratory organs makes them suitable targets for pathogens. However, their interaction with different influenza viruses or the role of DCs in co-infections has not been fully characterized. With the aim to understand at cellular level the interaction of influenza virus and H. parasuis as common pathogens of pig’s respiratory tract, three studies were undertaken and are presented in this thesis. In the first study, porcine bone marrow derived DCs (poBMDCs) were exposed to a circulating strain of H3N2-SwIV. In the second study, poBMDCs were infected with different influenza viruses that would enter in contact with the porcine immune system, such as: SwIV A/Swine/Spain/SF32071/2007(H3N2), the 2009 pandemic influenza virus A/Catalonia/63/2009(H1N1), the low pathogenic avian influenza virus A/Anas plathyrhynchos/Spain/1877/2009(H7N2) and the high pathogenic avian influenza virus A/Chicken/Italy/5093/1999(H7N1); and finally in the third study, poBMDCs were infected or co-infected with the H3N2-SwIV and H. parasuis non-virulent (SW114) or virulent (Nagasaki). From these studies, three general conclusions can be drawn: (i) poBMDCs are infected by H3N2-SwIV and they transmit the infection to permissive cells only when cell-to-cell contact was favoured; (ii) the cytokine profile and the mRNA expression of transcription factors after H3N2-SwIV, hH1N1 and aH7N2 or aH7N1 may indicate a specific immune response activation against these viruses; (iii) previous infection of poBMDCs with H3N2-SwIV followed by H. parasuis infection resulted in a profile of cytokines biased mainly towards inflammatory response. Overall, these data pave the way for understanding the relation between respiratory pathogens such as influenza viruses and/or H. parasuis and porcine dendritic cells for triggering possible mechanisms driving to protective immune response.