Introducción: La recaída de pacientes drogodependendientes es frecuente tras períodos de abstinencia. Es importante identificar factores relacionados con la recaída que puedan ser tratados, ya que la corrección de los mismos se podría relacionar con una mayor probabilidad de abstinencia a largo plazo. La prevalencia del insomnio, su importancia y su tratamiento han sido poco estudiados en la población adicta, a pesar de que les preocupa a los pacientes y afecta a su calidad de vida. Objetivos: Los objetivos del presente trabajo son: a) analizar los factores relacionados con la recaída a los 3 y 6 meses; b) estimar la prevalencia del insomnio y los factores relacionados con el mismo y c) analizar si la corrección del insomnio con un tratamiento farmacológico adecuado se relaciona con una menor probabilidad de recaída. Material y Métodos: Se incluyeron pacientes dependientes de sustancias que ingresaron en la unidad de desintoxicación hospitalaria del Hospital de Vall Hebron desde junio 2008 hasta mayo 2013. Se realizó seguimiento ambulatorio durante seis meses tras el alta. Se recogieron variables sociodemográficas, clínicas referidas al consumo, clínicas relacionadas con la comorbilidad médica y psiquiátricas y variables terapeúticas. Para el diagnóstico se utilizaron cuestionarios y entrevistas semiestructuradas (SCID-I y II y CAADID). Para estudiar el insomnio se utilizó la escala COS y la agenda de sueño nocturno. Para el primer y segundo objetivo se realizó un estudio de cohortes y prospectivo. Para el tercer objetivo se realizó un estudio cuasiexperimental en el que los pacientes con insomnio recibieron fármacos con función hipnótica (antidepresivos, antipsicóticos, antiepilépticos). Resultados: Se incluyeron 481 pacientes. El 48,4% recayeron a los 3 meses y el 66,7% a los 6 meses tras el ingreso de desintoxicación. El 84,3% presentó insomnio en el consumo activo de la sustancia y el 66,5% en las fases iniciales de la abstinencia. Los pacientes con insomnio tuvieron mayor probabilidad de recaída precoz, a los 3 meses tras el ingreso hospitalario, tanto durante el consumo activo (71,7% vs 61,3%, p=0,01) como en las fases iniciales de la abstinencia (71,7% vs 61,7%, p=0,02). Los pacientes con corrección del insomnio tras tratamiento farmacológico tuvieron una probabilidad de recaída significativamente menor que aquellos con insomnio no corregido (62% vs 75%, p=0,04), igualando el porcentaje de recaída de los pacientes sin insomnio. Conclusiones: La recaída en el consumo de sustancias es frecuente. El insomnio en pacientes adictos se relaciona con la probabilidad de recaída a corto plazo y la corrección del insomnio con un tratamiento eficaz, se relaciona con una mejor evolución de la adicción. / Introduction: Addict patients relapsed frequently after periods of abstinence. It is important to identify factors for relapse to be treated, since the correction of the same could be related to an increased likelihood of long-term abstinence. The prevalence of insomnia, its important and its treatment have not been studied extensively in the addicted population, although they care to patients and affect their quality of life. Objectives: The objectives of this work are: a) to evaluate factors associated with relapse at 3 and 6 months; b) estimate the prevalence of insomnia and related factors; c) consider whether the correction of insomnia with appropriate drug therapy is associated to a lower probability of relapse. Material and Methods: Substance dependent patients admitted to the inpatient detoxification unit Vall Hebron Hospital from June 2008 to May 2013 were included. Outpatient follow was carried out for six months after discharge. Sociodemographic, clinical factors referred to consumption, clinical related to medical clinics and psychiatric comorbidity and therapeutic variables were collected. To diagnostic questionnaires and semi-structured interviews (SCID-I and II and CAADID) were used. To study the insomnia, COS scale was used and the schedule of nighttime sleep. For the first and second targets a prospective cohort study was performed. For the third objective, a quasi-experimental study in which patients received drugs with hypnotic insomnia function (antidepressants, antipsychotics, antiepileptics) was performed. Results: 481 patients were included. 48.4% relapsed at 3 months and 66.7% at 6 months after admission for detoxification. 84.3% had insomnia in the active substance use and 66.5% in the initial phases of abstinence. Patients with insomnia were more likely to relapse early, at 3 months after hospital admission, both during active use (71.7% vs 61.3%, p = 0.01) and during the initial phases of abstinence (71.7% vs 61.7%, p = 0.02). Patients with insomnia correction after pharmacological treatment had a significantly lower probability of relapse than those with uncorrected insomnia (62% vs 75%, p = 0.04), equaling the relapse rate of patients without insomnia. Conclusions: The relapse into substance use is common. Insomnia addicted patients is related to the probability of relapse in the short term and the correction of insomnia with effective treatment, is associated with better outcomes of addiction.

Los ovarios de cabras prepúberes proporcionan una población de ovocitos de pequeño diámetro con una menor competencia para el desarrollo hasta blastocisto después de la maduración, fecundación y posterior cultivo in vitro (MIV, FIV y CIV). Las condiciones del cultivo in vitro aportan los requerimientos necesarios a los ovocitos e influyen sobre su posterior desarrollo embrionario. En esta tesis hemos llevado a cabo dos estudios para evaluar los efectos de la adición de diferentes suplementos a los medios de MIV y CIV sobre el desarrollo embrionario y la calidad de los blastocistos obtenidos a partir de ovocitos de cabras prepúberes. En ovocitos de hembras prepúberes, la adición de sustancias, incluyendo las hormonas gonadotrópicas, factores de crecimiento, fuentes de proteínas y antioxidantes, como son el complejo insulina-transferrina-selenio (ITS) y el L-ácido ascórbico (AA), han demostrado producir una mejora en la maduración citoplasmática de los ovocitos y su subsiguiente desarrollo embrionario in vitro. El objetivo del primer estudio fue evaluar los efectos de la adición de AA, ITS y un bajo nivel hormonal en el medio de MIV sobre el desarrollo embrionario y la calidad de los blastocistos obtenidos. En concreto, hemos utilizado 4 medios maduración: Medio Tradicional (MT), Medio de Crecimiento (MC): MT + ITS + AA + bajo nivel hormonal, Medio Tradicional modificado (MTm): MT + bajo nivel hormonal y Medio de Crecimiento modificado (MCm): MT + ITS + AA + nivel hormonal normal. Los complejos–ovocito-cúmulus (COCs) se clasificaron en dos grupos según el diámetro ovocitario: pequeños (<125μm) y grandes (≥125μm). Los ovocitos ≥125μm fueron madurados en MT mientras que los ovocitos <125μm fueron madurados en combinaciones de MT, MC, MTm y MCm. Después de la MIV, los ovocitos fueron fecundados in vitro y posteriormente los embriones fueron CIV durante 8 días. En este estudio se observó que el desarrollo embrionario de los ovocitos <125 μm no mejoró en las diferentes combinaciones de medios de MIV estudiadas (MT, MC, MTm y MCm). El mayor desarrollo hasta blastocisto se obtuvo en el grupo de embriones procedentes de ovocitos ≥125μm. Sin embargo, cuando los ovocitos de menor diámetro se maduraron en MC, se observó una mejoría significativa en la calidad de los blastocistos obtenidos, optimizando la supervivencia de los embriones tras la descongelación comparado con el MT (53.3% vs 30.8%, respectivamente; P<0.05). En el segundo estudio se analizó el efecto de la suplementación de los medios de MIV y CIV con activina-A sobre el desarrollo embrionario. La activina-A es un miembro de la superfamilia del factor de crecimiento transformante β (TGF-β) y cumple un papel importante en la proliferación y diferenciación celular. Con el fin de determinar el efecto de la activina-A sobre los ovocitos de cabras prepúberes, se realizaron 2 experimentos, analizando la maduración nuclear de los ovocitos, su posterior desarrollo embrionario y calidad de los blastocistos obtenidos. En el primer experimento se estudió la suplementación del medio de MIV con varias concentraciones de activina-A (0, 10 y 100 ng/mL) y en el segundo experimento se evaluó la adición de 10 ng/mL de activina-A a los medios de MIV y CIV. Los resultados de este estudio demostraron que la suplementación del medio de MIV con diferentes concentraciones de activina-A proporciona similares porcentajes de maduración nuclear y de blastocistos comparado con la MIV sin activina-A. Además, la adición de 10 ng/mL de activina-A durante el CIV aumentó significativamente las tasas de desarrollo hasta blastocisto en comparación con el grupo control (19.5 ± 2.21% vs. 13.1 ± 2.37%, respectivamente; P<0.05). Sin embargo, no se observó una mejora en la calidad de los blastocistos cuando se añadió activina-A en el medio de MIV (evaluada por la tinción de Hoechst 33342) y/o en el de CIV (evaluado por la tinción diferencial). En conclusión, la maduracíon in vitro de los ovocitos de cabras prépuberes de diámetro <125 μm en medio de crecimiento sería una alternativa útil para mejorar la calidad de los blastocistos producidos in vitro, mientras que la presencia de activina-A durante el cultivo in vitro incrementa el porcentaje de embriones desarrollados hasta el estadío de blastocisto. / The prepubertal goat ovary shows a large number of small oocytes with a compromised competence to develop up to blastocyst stage following IVM, IVF and IVC. Culture conditions used to support in vitro embryo production appears to be an important factor to suit the requirements of these oocytes and to increase the blastocyst yield. In the present thesis work, we have carried out two studies to evaluate the effects of addition of different supplements to in vitro maturation and culture media on embryo development and the quality of resultant blastocyst in prepubertal goat oocytes. In oocytes from prepubertal females, different types and concentrations of substances including gonadotrophic hormones, growth factors, protein sources and antioxidants, such as insulin-transferrin-selenium (ITS) and L-ascorbic acid (AA), have been shown to improve oocyte cytoplasmic maturation and embryo development. The aim of the first study was to assess the effects of adding low level of hormones and/or ITS plus AA to IVM medium through the developmental competence and embryo quality of small oocytes from prepubertal goats. Specifically, we tested four maturation media: conventional IVM medium (CM), CM+ITS+AA and low level of hormones (named as Growth Medium; GM), CM with low level of hormones (modified CM; mCM) and CM+ITS+AA and normal level of hormones (modified GM; mGM). Cumulus-Oocyte Complexes (COCs) were classified into two categories according to oocyte diameter: small (<125 μm) and large (≥125 μm) oocytes. Large oocytes were matured in CM and small oocytes were matured in different combination of CM, GM, mCM or mGM. After IVM, oocytes were fertilized and after 24h presumptive zygotes were cultured for 8 days. Results of this study showed that using different combinations of CM, GM, mCM, and mGM for IVM of prepubertal goat small oocytes did not have a beneficial effect on the percentage of blastocysts. The high blastocyst rate was only related to oocyte diameter. However, the culture of small oocytes in GM improved the quality of blastocysts and enhanced their survival post-warming compared to CM (53.3% vs 30.8%, respectively; P<0.05). The second study examined the effect of activin-A during IVM and embryo culture on the blastocyst rate of prepubertal goat oocytes. Activin is a member of the transforming growth factor β superfamily that plays a functional role in the process of cellular proliferation and differentiation. In experiment 1, with a view to search for optimal concentration of recombinant human activin-A during IVM, three concentrations (0, 10 and 100 ng/mL) were tested on oocytes meiotic maturation and subsequent in vitro embryo development. The experiment 2 was performed to evaluate the effect of adding 10 ng/mL activin-A at the IVM and/or IVC media on embryo development and blastocyst quality. Results of this study demonstrated that the addition of activin-A to IVM yielded similar percentages of maturation and blastocyst. Moreover, the addition of 10 ng/mL of activin-A throughout the whole embryo culture significantly increased rates of development to the blastocyst stage as compared with the control group (19.5 ± 2.21% v. 13.1 ± 2.37%, respectively; P<0.05). Blastocyst quality was not improved in the presence of activin-A neither during IVM evaluated after Hoechst 33342 staining, nor during IVM and/ or IVC evaluated by differential staining. In conclusion, IVM of prepubertal goat small oocytes in GM would be useful to improve the intrinsic quality of blastocysts produced in vitro and the presence of activin-A during IVC enhances embryo development of prepubertal goat oocytes.

En el tracto gastrointestinal, los estímulos de origen luminal se han implicado en la patofisiología del síndrome del intestino irritable (IBS). Aunque los mecanismos por los cuales contribuyen al inicio/mantenimiento de la sintomatología permanecen poco definidos, se ha propuesto la implicación de un circuito neuroinmune dependiente de mastocitos (MCs) y factores neurotróficos (NTFs). Este trabajo profundiza en la capacidad de los estímulos luminales, incluyendo factores relacionados con la microbiota comensal, las infecciones intestinales y los antígenos alimentarios, para producir alteraciones de tipo IBS en el colon de la rata, con especial énfasis en la implicación de los NTFs. Con este propósito, se han utilizado dos modelos de disfunción intestinal dependientes de mastocitos de mucosa (MMCs): la exposición oral a ovoalbúmina (OVA) y la infección por Trichinella spiralis. Tanto la exposición oral a OVA durante 6 semanas como la infección por T. spiralis activaron los MMCs del colon, si bien el reclutamiento celular sólo tuvo lugar durante la infección. La exposición a OVA durante 6 semanas alteró la contractilidad colónica, tanto in vivo como in vitro, un efecto que no se observó en tratamientos cortos (1 semana).Sin embargo, la exposición durante una semana a OVA combinada con un estado de disbiosis, inducido por el tratamiento con lipopolisacáridos bacterianos, produjo alteraciones motoras similares, sugiriendo una interacción facilitadora entre la microbiota y los antígenos alimentarios. El tratamiento con K252a, un antagonista de los receptores tropomiosina-receptor-quinasa, disminuyó la motilidad espontánea del colon y previno parte de las alteraciones motoras asociadas a OVA. Estos resultados apuntan a que, en la rata, el eje neurotrofinas-receptores Trk participa en el mantenimiento de la contractilidad basal del colon y en la disfunción contráctil asociada a OVA. En presencia de un estímulo luminal de origen infeccioso (T. spiralis), se observaron cambios morfológicos y en el contenido de NTFs en las neuronas de los ganglios de la raíz dorsal (DRGs) de los segmentos espinales toracolumbares, indicando una remodelación difusa de las vías aferentes entéricas. Los animales infectados presentaban, además, alteraciones en la respuesta a la estimulación aferente (disminución de TRPV1 en neuronas de los DRGs), sugiriendo cambios persistentes en la sensibilidad. Estas alteraciones coincidieron con cambios temporales (fases tempranas vs. tardías) y regionales (yeyuno vs. colon) en la expresión de NTFs. En el yeyuno, se observó un incremento temprano en la expresión de factor de crecimiento nervioso (NGF), de NTF derivado de la línea celular glial y de artemina. Por el contrario, en el colon se observó un descenso general en la expresión de NTFs entre los días 6-14 post-infección. Estas diferencias regionales podrían estar relacionadas con el grado de inflamación local ya que el colon, comparado con el yeyuno, mostró una respuesta inflamatoria atenuada. En el colon, se detectó la presencia de NGF en el epitelio y en el sistema nervioso entérico pero no en los MMCs. Sin embargo, la expresión de receptores TrkA sí se localizó en MMCs. Además, el tratamiento con K252a tendió a aumentar los niveles de la proteasa mastocitaria de rata de tipo II, sugiriendo que los receptores TrkA mastocitarios son funcionales. Por tanto, los MMCs podrían representar una diana para el NGF. Este trabajo demuestra que el eje estímulos luminales-MMCs-NTFs está implicado en las alteraciones funcionales colónicas observadas en modelos de IBS en la rata relacionados con antígenos alimentarios y procesos infecciosos. Las vías dependientes de NTFs podrían desempeñar un papel clave en el inicio/mantenimiento de la sintomatología del IBS, al menos en aquellos pacientes cuya enfermedad está relacionada con factores dietéticos o infecciosos. Los NTFs representan una diana terapéutica para el tratamiento de los desórdenes gastrointestinales caracterizados por alteraciones sensoriales y motoras. / In the gastrointestinal tract, luminal-derived stimuli have been implicated in the pathophysiology of irritable bowel syndrome (IBS). Although the pathways through which luminal factors contribute to the onset/maintenance of IBS-like symptoms remain unclear, a role for a neuroimmune circuitry implicating mast cells (MCs) and neurotrophic factors (NTFs) has been suggested. This work aims to characterize the ability of luminal-derived stimuli, including gut commensal microbiota (GCM), intestinal infections and food antigens, to trigger IBS-like alterations in the colon of the rat, with special emphasis on the potential role of NTFs. For this, we used two accepted models of mucosal MC (MMC)-dependent intestinal dysfunction in rats: chronic exposure to oral ovalbumin (OVA) and infection with Trichinella spiralis. Both, exposure to oral OVA for a 6-week period and infection with T. spiralis activated MMCs of the colon, although cell recruitment was only observed during T. spiralis infection. A 6-week, but not 1-week, exposure to oral OVA resulted in a colonic contractile dysfunction, observed both in vivo and in vitro. Nevertheless, short (1-week) OVA exposure led to similar colonic motor alterations when combined with a dysbiotic-like state (treatment with bacterial lipopolysaccharides), thereby indicating a facilitatory interaction between microbiota and food-derived antigens. Treatment with K252a, an antagonist of tropomyosin-receptor-kinase (Trk) receptors, decreased spontaneous colonic motility and prevented part of the motor alterations associated to OVA exposure, thus suggesting that the neurotrophins-Trk receptors axis participates in the maintenance of basal contractility in the rat colon and in the contractile dysfunction associated to exposure to oral OVA. In the presence of an infectious-related luminal-derived stimulus (T. spiralis infection), changes in thoracolumbar dorsal root ganglia (DRG) neurons’ morphology and NTFs content was observed, pointing to an extended afferent remodeling through the gastrointestinal tract. Moreover, in infected animals, altered responses of DRGs (down-regulation of TRPV1 receptors) after colonic afferent stimulation with capsaicin indicated a persistent change in afferent sensitivity. Alterations in afferent functionality during T. spiralis infection coincided with time- (early vs. late phases) and site-specific (jejunum vs. colon) changes in NTFs expression. Within the jejunum, an early increase in nerve growth factor (NGF), glial cell line-derived NTF and artemin levels was observed. In the colon, however, a general down-regulation of NTFs was observed between days 6-14 post-infection. These regional differences might be related to the local degree of inflammation; since, compared to the jejunum, the colon showed an attenuated inflammatory response. Within the colon, NGF was located in the epithelium and the enteric nervous system, but not in MMCs. Nevertheless, MMCs expressed TrkA and treatment with K252a tended to increase the levels of rat mast cell protease II, thus indicating that colonic MMCs are a target for NGF. In summary, this work shows that the axis luminal-derived stimuli-MMCs-NTFs is implicated in the colonic functional alterations observed in food antigen- and infection-related models of IBS in rats. These results highlight a potentially important role for NTF-related pathways in the onset/maintenance of the symptomatology in, at least, a subset of IBS patients in which the disease is related to luminal dietary- or infectious-related factors. NTFs represent a therapeutic target for the treatment of gastrointestinal disorders characterized by altered colonic sensitivity and dysmotility.

La Anorexia Nerviosa (AN) es el trastorno de la conducta alimentaria que más se ha estudiado a nivel neuropsicológico, aunque la mayoría de estudios sobre las alteraciones cognitivas en la AN se han llevado a cabo en población adulta. Su investigación es mucho más escasa en población adolescente, edad en la que habitualmente tiene lugar el inicio del trastorno y que conlleva importantes repercusiones en el desarrollo personal, académico/laboral y social del individuo. En el presente trabajo se estudió el funcionamiento cognitivo de adolescentes (de 11 a 18 años) diagnosticados de AN con una corta duración del trastorno y en un momento agudo de la enfermedad, así como su evolución tras 6 meses de tratamiento y recuperación ponderal en comparación con un grupo control del mismo sexo, edad y nivel de estudios. Los resultados obtenidos fueron que el perfil neuropsicológico de los pacientes con AN en infrapeso presentaba un mayor enlentecimiento en el procesamiento de la información visual compleja. Aunque cuando analizamos los perfiles cognitivos observamos que no es igual en todos ellos, presentándose únicamente en un 30% de la muestra un perfil cognitivo deficitario. Las dificultades que presentan se encuentran en la memoria visual, velocidad psicomotora y curva de aprendizaje verbal. Este subgrupo se caracteriza además por presentar un Índice de Masa Corporal (IMC) más bajo y elevada presencia de ansiedad rasgo. En el estudio longitudinal una vez recuperado el peso se encontró que los pacientes mejoraro su perfil neuropsicológico general. Sin embargo, cuando comparamos aquellas pacientes que han recuperado el ciclo menstrual, con aquellas que todavía sufren amenorrea y el grupo control, observamos que las pacientes que aún no han reestablecido el ciclo menstrual presentan dificultades cognitivas en la memoria visual, en las habilidades visuoconstructivas, débil coherencia central y menor resistencia a la interferencia. Las pacientes con AN que han recuperado el ciclo menstrual no diferían en su funcionamiento cognitivo con respecto a los controles. En conclusión, los resultados nos sugieren que no hay importantes dificultades en el funcionamiento general cognitivo de todos los adolescentes con AN. Las alteraciones más significativas en el rendimiento neurocognitivo se encuentran cuando se relacionan con alguna variable clínica o biológica. Variables clínicas, como el IMC muy bajo o la amenorrea, asociadas a un peor funcionamiento cognitivo, podrían estar relacionadas con un peor curso y pronóstico de la enfermedad. Conocer el funcionamiento cognitivo de los adolescentes con AN nos permitirá conocer mejor el funcionamiento global de la enfermedad y desarrollar mejores intervenciones terapéuticas. / Anorexia Nervosa (AN) is the eating disorder that has been most studied at neuropsychological performance, although most studies on the cognitive impairment in AN have been conducted in the adult population. It has been less studied in adolescent subjects, age in which usually takes place the beginning of a disorder and that entails significant impact on the personal, academic and social development of the individual. In this work it was studied the cognitive performance of adolescents (aged 11 to 18) diagnosed with AN with a short duration of the disorder and acute moment of disease, as well as its evolution after 6 months of treatment and weight recovery when compared to a control group of same sex, age and educational level. The obtained results were that the neuropsychological profile of underweight patients with AN were slower in the processing of complex visual information. Although when we look at cognitive profiles we observe is not equal in all of them, appearing an impaired cognitive performance only at 30% of the sample. The inefficiencies that they present are visual memory, verbal learning curve and psychomotor speed. This subgroup is also characterized by a lower Body Mass Index (BMI) and presence of a high anxiety trait. In the longitudinal study when AN recovered weight, it was found that patients normalized general neuropsychological performance profile. However, when we compared those patients who have recovered the menstrual cycle, with those who still suffer from amenorrhea and with the control group, we observed that patients who have not yet re-established the menstrual cycle have cognitive inefficiencies in visual memory visual-constructive abilities, weak central coherence and lower resistance to interference. AN patients that have recovered the menstrual cycle do not differ in their cognitive performance with respect to the controls. In conclusion, the results suggest that there are not important difficulties in general cognitive performance of all adolescents with AN. The most significant inefficiencies in the neurocognitive performance are when they are related to some clinical or biological variable. Clinical variables, such as very low BMI or amenorrhea, associated with poorer cognitive functioning, could be related to a worse course and prognosis of the disease. To know the cognitive functioning of adolescents with AN will allow us to better understand the overall functioning of the disease and to develop better therapeutic interventions.

Existe un crecimiento progresivo de la utilización de terapias naturales (TN) en occidente y especialmente en los pacientes oncológicos. El cáncer es una de los problemas de salud fundalmentales de nuestra sociedad. Cuando existe una sospecha o diagnóstico de cáncer, los estudios de diagnóstico por la imagen tienen un papel fundalmental en la actividad clínica de este grupo de pacientes. Estos estudios pueden conllevar un grado importante de ansiedad. La tesis tiene dos objetivos fundamentales. El primero es evaluar el grado de ansiedad que presentan los pacientes oncológicos que se realizan un estudio PET-TAC en un servicio de Medicina Nuclear. La evaluación se realizó mediante el cuestionario validado State Trait Anxiety Inventory (STAI). En el segundo valoramos los cambios en el metabolismo cerebral de la glucosa, mediante un PET cerebral, tras realizar una técnica de relajación, Relajación progresiva de Jacobson (PR). PR es un método cuyo objetivo es el reducir la ansiedad mediante la supresión progresiva de la tensión muscular. El efecto en el metabolismo cerebral obtenido tras realizar la PR se ha comparado con los cambios provocados tras la administración de un diazepam sublingual. / Natural therapies (NT) are growing in occidental society and especially in cancer patients. Cancer is one of the main health problems in western countries. When there is a diagnosis or suspicion of cancer, performing diagnostic imaging studies has an important role in the clinical activity and may have an elevated psychological impact. This doctoral thesis has two purpose. The first one is to evaluate the level of anxiety in oncology patients during the performance of a nuclear medicine study (PET-CT) in a Nuclear Medicine Service, by means of the State Trait Anxiety Inventory (STAI). The second is address to evaluate changes in brain glucose metabolism induced by Progressive Relaxation (PR) in patients under a stressing state generated by a diagnostic medical intervention. PR is a non-pharmacological method to reduce anxiety. The aim of the method is to reduce mental stress and associated mental processes by means of progressive suppression of muscle tension. The effect of PR was compared to a dose of sublingual diazepam, with the prediction that both interventions would be associated with a reduction in brain metabolism.

ANTECEDENTS. L’any 1995, els Serveis d’Oncologia Mèdica i Genètica de l’Hospital de Sant Pau (HSP) inicien l’estudi genètic i clínic del càncer de mama i ovari hereditaris (CMOH) i s’estableix el Registre de famílies CMOH. METODOLOGIA. Estudi observacional descriptiu longitudinal del Registre CMOH, el qual conté informació genètica, socio-demogràfica i epidemiològica de famílies i els seus membres, i dades clinicopatològiques dels casos de càncer de mama (CM) i d’ovari (CO) diagnosticats en les famílies, incloses del 1995 al 2005. RESULTATS. S’han estudiat 357 famílies amb criteris de CMOH (869 membres registrats), 620 i 11 neoplàsies de mama femenina i masculina, respectivament, i 64 d’ovari. Majoritàriament les famílies provenien de Barcelona. Es va identificar una mutació BRCA1/2 en 83 famílies (23%). Els criteris clínics associats a una major identificació de mutació BRCA són el nombre de casos (>=3), la co-presència de CM i CO en les famílies, i l’edat jove al diagnòstic del CM. Principalment les dones amb CM del Registre van néixer a Catalunya i un 60% havien completat estudis secundaris o superiors. Majoritàriament seguien una dieta del tipus mediterrani, fins un terç fumaven i un altre terç consumia vi quotidianament. La informació sobre l’etapa adolescent mostra que tenien una alçada i pes normals, que seguien una dieta variada, tenien un baix consum d’alcohol i que practicaven esport unes 3 hores/setmana. En general, els CM del Registre es caracteritzen per presentar una edat jove al diagnòstic, histologia ductal infiltrant i pobra diferenciació. Els tumors BRCA1 presenten les edats més joves al diagnòstic, un baix percentatge de patró càlcic mamogràfic, un major percentatge d’histologia medul·lar i de receptors hormonals negatius. D’altra banda, els casos BRCA2 presenten trets anatomopatològics similars als casos amb resultat genètic no informatiu. En quan a les dones amb CO del Registre, han estat diagnosticades majoritàriament a una edat jove i fora de cap programa de control rutinari. Els CO mostren majoritàriament histologia serosa-papilar i són d’alt grau, especialment els associats al gen BRCA1. La supervivència global de les dones amb CM del Registre és de 31.9 anys de mediana. Les taxes supervivència global a 5, 10, 15 i 20 anys del diagnòstic són del 90%, 80%, 71% i 62%, respectivament. Factors associats a una millor supervivència són l’absència d’afectació ganglionar i d’invasió vàsculo-limfàtica, el baix grau histològic i l’edat jove al diagnòstic. La supervivència global mediana de la nostra sèrie de CO és de 11 anys. Les taxes de supervivència global del CO a 5 i 10 anys són del 65,8% i 52%, respectivament. En especial, les dones BRCA2 i aquelles diagnosticades a edat jove (<50 anys) n les que tenen majors taxes de supervivència global. CONCLUSIONS La taxa d’identificació de mutacions BRCA del Registre i els criteris clínics associats a una major identificació són similars als resultats reportats per altres programes similars d’arreu del món. Les dones amb CM del Registre comparteixen característiques epidemiològiques amb les dones catalanes, amb excepció que presenten un nivell d’estudis superior i un major percentatge d’avortaments. Les variables clíniques i anatomopatològiques dels CM i CO del Registre presenten els mateixos trets específics descrits en altres sèries de casos familiars i hereditaris. Les dones amb CM del Registre tenen una taxa de supervivència global més elevada que la reportada en CM esporàdic. No s’han observat diferències segons l’estatus genètic. En quan al CO, la supervivència global mostra una taxa superior al CO esporàdic, i en especial, les dones BRCA2 són les que mostren valors més favorables. Aquesta tesi representa una contribució valuosa en el coneixement de les famílies amb CMOH del nostre entorn i significa un punt de partida per a futures línies d’investigació d’interès per a l’assessorament genètic i maneig clínic de les famílies amb càncer de mama i ovari hereditaris amb o sense mutació BRCA. / BACKGROUND. In 1995, the Genetic and Oncology Departments of the Hospital de Sant Pau (HSP) began genetic counselling for hereditary breast and ovarian cancer (HBOC) and established the Registry of HBOC families. METHODS. Observational descriptive longitudinal study of the HBOC Registry which contains genetical, socio-demographic and epidemiological information about the families and their members, and clinicopathological data of breast (BC) and ovarian (OC) cancers diagnosed in the families. This thesis develops a comprehensive study of HBOC families included in the Registry from 1995 to 2005, the first ten years of genetic counselling in HSP. RESULTS. 357 families with HBOC criteria with a total of 869 members were included in the Registry. Complete information on 620 female BC and 11 male BC has been analyzed, as well as 64 OC. Most of these families came from the metropolitan area of Barcelona. We identified a BRCA1 or BRCA2 mutation in 83 families (23%). Clinical criteria associated with greater identification of BRCA mutation were the number of cases (>=3), the copresence of BC and OC in the family, and early onset BC. The women with BC in the Registry were mainly born in Catalonia and a 60% had a higher secondary or further educational level. Most of them had a mediterranien diet, a third were, or had been, habitual smokers, and around another third consumed wine. The information about the adolescence of these women showed they were of average height and weight, they had a balanced diet, their average alcohol consumption was low and that they did physical exercise for about three hours/week. In general, the BCs from the Registry were early onset, they presented an invasive ductal histology and poor differentiation. BRCA1 women were diagnosed at the youngest age, and BRCA1 tumors presented a low percentage of calcium mammographic pattern, a greater percentage of medullar histology and they mostly showed negative hormone receptors. On the other hand, BRCA2 cases had similar pathological traits to non BRCA cases. Women with OC were mostly diagnosed at an early age and outside routine screening programs. The majority of OCs had papillary serous histology and were poorly differentiated, especially those associated with BRCA1 mutations. The overall survival (OS) of women with BC was a median of 31,9 years. The OS rates at 5, 10, 15 and 20 years were 90%, 80%, 71% and 62%, respectively. Associated factors relating to a longer OS were negative axilary nodes and vascular and lymphatic invasion, lower histological degree and diagnosis at a young age. The median OS time for the women with OC was 11 years. The OS rates at 5 and 10 years for OC were 65,8% and 52%, respectively. Especially, BRCA2 women and those cases diagnosed at a young age (<50y.) had the highest OS rates. CONCLUSIONS. Our identification rate for BRCA1/2 mutations from the Registry is consistent with the majority of studies around the world, as well as our clinical criteria associated with the major identification rate. Epidemiological characteristics of women with BC from the Registry are similar to those reported for the Catalan population, except that our women have a higher educational level and that they have had a higher percentage of abortions. Clinical and pathological variables for our registered BC and OC have the same characteristics generally associated with these types of hereditary tumors. In the Registry, the OS rates for BC and OC are superior to those reportered in the non hereditary cases. With regards to BC, genetical status is not associated with OS diferences in our cases. Nevertheless, BRCA2 women have the longest OS for OC in the Registry. This thesis represents a valuable contribution to the knowledge of HBOC families in our area, it serves as a source of epidemiological, genetical, clinical and pathological data available for future research, relevant to genetic counseling and clinical management of families with HBOC criteria, with or without BRCA mutation.

Un primer objetivo de la tesis ha sido estudiar el papel de los eicosanoides en el desarrollo del síndrome de distrés respiratorio agudo (SDRA) mediante el estudio de sus concentraciones. Otro objetivo ha sido analizar si el aporte de una emulsión lipídica administrada por vía parenteral enriquecida con ácidos grasos poliinsaturados de la serie 3 (AGPI n-3) en forma de aceite de pescado y bajo aporte de ácido linoleico (AGPI n-6) puede regular la síntesis de eicosanoides en pacientes con SDRA y su efecto sobre el intercambio de gases y los parámetros hemodinámicos. La tesis se articula como compendio de publicaciones estructurada en tres artículos originales. En el primer estudio, analizamos en los estadios precoces del SDRA eicosanoides de todas las vías enzimáticas (TXB2 y el 6-Keto-PGF1α de la vía de la COX, el LTB4 de la LO), tanto a nivel sistémico como en sangre venosa mixta. En el segundo estudio, analizamos los eicosanoides durante la administración de dos emulsiones lipídicas, una rica en AGPI n-6 y la emulsión a estudio (enriquecida con AGPI n-3 y con menor cantidad de AGPI n-6), en pacientes con SDRA. En el tercer estudio nos centramos en la investigación sobre el intercambio de gases y los cambios hemodinámicos de las emulsiones anteriores en pacientes con SDRA. Los principales resultados mostraron que los niveles plasmáticos de los eicosanoides estudiados en los pacientes con SDRA en fase precoz fueron superiores a los valores de referencia. Los niveles sistémicos de TXB2, LTB4 y el gradiente sistémico-pulmonar de LTB4 se relacionaron con el grado de hipoxemia. El gradiente sistémico-pulmonar de LTB4 se correlacionó con el nivel de gravedad pulmonar. Los niveles basales más elevados a nivel arterial de LTB4 y TXB2, los niveles más elevados de LTB4 en sangre venosa mezclada y un mayor gradiente sistémico-pulmonar de LTB4 se asocian con un peor pronóstico. En los pacientes que recibieron emulsiones lipídicas ricas en AGPI n-6, todos los eicosanoides medidos, tanto a nivel sistémico como en sangre venosa mixta, se incrementaron durante la perfusión de la emulsión, con un comportamiento errático tras su finalización (a las 12 horas de finalizar la emulsión lipídica). En los pacientes tratados con la emulsión enriquecida con AP y menor aporte de AGPI n-6, todos los eicosanoides medidos, tanto a nivel sistémico como en sangre venosa mixta, disminuyeron durante la perfusión de la emulsión a estudio. Únicamente alcanzó significación estadística la variación de LTB4. Tras finalizar el aporte los valores siguieron disminuyendo. Por último, no observamos ningún cambio significativo ni en el intercambio de gases ni en la hemodinamia tras la administración de las diferentes emulsiones. Los resultados de los estudios presentados permiten afirmar que los diferentes mediadores lipídicos juegan un papel crucial en la fisiopatología del SDRA siendo de especial relevancia el LTB4. También se puede afirmar que una emulsión lipídica administrada por vía parenteral enriquecida con AGPI n-3 en forma de aceite de pescado y bajo aporte de ácido linoleico (AGPI n-6) es capaz de modular la síntesis de mediadores lipídicos claves en el SDRA y no provocar alteraciones en la hemodinamia ni en el intercambio de gases a corto plazo. / Our thesis objective was to study eicosanoids role on acute respiratory distress syndrome (ARDS) development by studying their plasmatic concentrations. Other objective was to evaluate if parenteral administration of an enriched 3 series polyunsaturated fatty acids (PUFA n-3) in the form of fish-oil and lowered linoleic acid (PUFA n-6) lipid emulsion can regulate eicosanoid synthesis in ARDS patients as well as its hemodynamics and gas exchange effects. Thesis is articulated as a publication compendium structured in three original articles. On our first study, in early ARDS stages we evaluate both systemic and mixed venous plasmatic eicosanoid levels in all enzymatic pathways (TXB2 and 6-Keto-PGF1α in COX pathway, and LTB4 in LO pathway). On our second study, we analyse eicosanoids in ARDS patients during administration of two different lipid emulsions, one PUFA n-6 enriched and the study´s emulsion (PUFA n-3 enriched and with less PUFA n-6). On our third study we focused on gas exchange and hemodynamic changes with the previous lipid emulsions in ARDS patients. Main results showed that eicosanoid plasmatic levels measured in early stage ARDS patients were superior to reference levels. Systemic TXB2, LTB4 and pulmonary-systemic LTB4 gradient correlated with hypoxemia severity. Pulmonary-systemic LTB4 gradient correlated with pulmonary severity score. LTB4 and TXB2 increased baseline plasmatic arterial levels, LTB4 increased venous mixed plasmatic levels and a higher pulmonary-systemic LTB4 gradient were associated with a worst outcome. In patients whom received PUFA n-6 enriched lipid emulsions, all eicosanoids measured levels, both systemic and venous mixed, were increased during emulsion perfusion with an erratic behaviour after the end (12 hours after finishing lipid emulsion). In patients treated with PUFA n-3 enriched emulsion and less PUFA n-6, all eicosanoids measured levels, both systemic and venous mixed, were decreased during study´s emulsion perfusion. Only LTB4 variation was statistically significant. After finishing emulsion´s administration, levels continued decreasing. Finally, we didn´t observe any significant variation neither in gas exchange nor in hemodynamics after both different emulsion´s administration. These results from our exposed studies lets us stablish that different lipid mediators play an important role in ARDS physiopathology with special emphasis on LTB4. We can also stablish that a parenteral administration of an PUFAn-3 enriched lipid emulsion in the form of fish oil and lowered linoleic acid (PUFA n-6) lipid emulsion can modulate crutial ARDS lipid mediator´s synthesis without hemodynamic or gas exchange short term modifications.

El objetivo principal de la presente tesis doctoral fue investigar el papel de la adversidad interpersonal en la infancia y los estilos de apego adulto con respecto a la esquizotipia y otros fenotipos del espectro esquizofrénico en población no clínica. El cuerpo de la tesis se compone de siete capítulos que abordan cuestiones relacionadas con la evaluación y validez de los estilos de apego y las dimensiones de esquizotipia, las asociaciones entre estos constructos y el potencial efecto mediador del apego inseguro en la relación entre la adversidad interpersonal y el fenotipo psicótico subclínico. El capítulo 1 presenta la adaptación española y las propiedades psicométricas de la Psychosis Attachment Measure. Se encontró que la adaptación española es conceptual y semánticamente equivalente a la versión original, que es apropiada para usarse en personas que presentan síntomas psicóticos y que sus propiedades psicométricas son adecuadas. El capítulo 2 examina la expresión de los estilos de apego en la vida diaria utilizando el método de “muestreo de experiencias”. Se encontró que las experiencias momentáneas de afecto, cognición y funcionamiento social variaron de forma teóricamente coherente en función del estilo de apego—proporcionando evidencia de la validez ecológica de los estilos de apego. El capítulo 3 investiga la validez de la esquizotipia positiva y negativa. La esquizotipia positiva predijo el estado mental de alto riesgo/umbral de psicosis y ambas dimensiones predijeron la presencia de trastornos de la personalidad del espectro esquizofrénico. Además, la esquizotipia positiva se asoció con síntomas positivos y paranoides y con esquemas cognitivos negativos, mientras que la esquizotipia negativa se asoció con síntomas esquizoides y con niveles bajos de esquemas cognitivos positivos. El capítulo 4 investiga la relación entre el apego y la esquizotipia en un estudio transcultural comparando muestras de España y Estados Unidos. Se encontró que en las dos muestras el apego preocupado estaba asociado con la esquizotipia positiva, el evitativo con la esquizotipia negativa y el temeroso con ambas dimensiones de esquizotipia. El capítulo 5 presenta una revisión de la investigación sobre los factores ambientales asociados con la vulnerabilidad a la psicosis y de los mecanismos que podrían explicar dichas asociaciones. Los dos últimos capítulos describen estudios que investigaron la hipótesis de que el apego inseguro tiene un efecto mediador en la relación entre la adversidad y el fenotipo psicótico. El estudio presentado en el capítulo 6 (el cual utilizó cuestionarios autoaplicados) encontró que el trauma físico/emocional estaba asociado con la esquizotipia, la suspicacia y las experiencias psicóticas y que el apego temeroso actuaba como mecanismo mediador. El estudio descrito en el capítulo 7 (el cual utilizó entrevistas semi-estructuradas) encontró que dos formas de adversidad en el ámbito de la falta de cuidado parental estaban asociadas con la fenomenología psicótica subclínica (síntomas positivos y negativos y rasgos de personalidad paranoides y esquizotípicos) y que los estilos de apego ansioso y enojado-rechazante actuaban como mecanismos mediadores. Como conclusión, los estudios de esta tesis contribuyen a esclarecer cómo las experiencias interpersonales adversas y los estilos de apego están relacionados con la expresión de la esquizotipia y otras manifestaciones subclínicas de la psicosis. Los resultados indican que centrarse en las experiencias interpersonales y en cómo son internalizadas es importante para mejorar nuestra comprensión de la vulnerabilidad a la psicopatología del espectro esquizofrénico. Por otra parte, los resultados apoyan la noción de que el estudio de las expresiones subclínicas puede facilitar la identificación de factores de riesgo relevantes para la psicosis clínica. En su conjunto, los resultados contribuyen a ampliar y afinar los actuales modelos psicosociales de vulnerabilidad a la psicosis y podrían informar el diseño de estrategias preventivas y de tratamiento. / Attachment theory has been suggested as a useful framework for understanding the development and persistence of schizophrenia-spectrum features. The main aim of this thesis was to examine the role of childhood interpersonal adversity and attachment styles in relation to schizotypy and other schizophrenia-spectrum phenotypes in nonclinical young adults. The body of the thesis includes seven chapters investigating issues related to the assessment and validity of attachment styles and schizotypy dimensions, the associations between these constructs, and the role of insecure attachment styles as potential mechanisms underlying the adversity-psychosis link. Chapter 1 presents the adaptation process and psychometric properties of the Spanish version of the Psychosis Attachment Measure. The findings indicated that the Spanish version of the scale is semantically and conceptually equivalent to the original English version, that it is appropriate for use with individuals experiencing psychotic symptoms, and that its psychometric properties are comparable to those reported for the English version. Chapter 2 describes a study investigating the real-life expression of attachment styles using the Experience Sampling Method. It was found that daily life experiences of affect, cognition, and social functioning varied in theoretically meaningful ways across different attachment styles, thus providing evidence of ecological validity of the attachment styles. Furthermore, the differential expression of attachment styles in social contexts was found to be dependent upon the subjective appraisal, and not the mere presence, of social contacts. Chapter 3 presents a study examining the validity of the positive and negative schizotypy dimensions. It was found that positive schizotypy predicted the ultra high-risk or psychosis threshold status and that both dimensions predicted the presence of schizophrenia-spectrum personality disorders. Moreover, positive schizotypy was associated with psychotic-like experiences, positive and paranoid symptoms, and negative self- and other-schemas, whereas negative schizotypy was associated with schizoid symptoms and diminished positive self- and other-schemas. Chapter 4 examines the associations between attachment styles and schizotypy dimensions in a cross-cultural study using samples from Spain and the United States. The results showed a cross-culturally consistent pattern of associations in which preoccupied attachment was related to positive schizotypy, dismissing attachment to negative schizotypy, and fearful attachment to both schizotypy dimensions. Chapter 5 presents an overview of the environmental factors that have been associated with psychosis-proneness and reviews research on the plausible mechanisms that may explain these associations. The last two chapters present studies investigating the hypothesis that insecure attachment provides a pathway from childhood adversity to psychotic phenomena. Chapter 6 describes a self-report study that found that physical/emotional childhood trauma was associated with schizotypy, suspiciousness, and psychotic-like experiences and that these associations were mediated by the fearful attachment style. Chapter 7 presents an interview study that found that two forms of poor childhood care, namely parental antipathy and role reversal, were associated with subclinical symptoms of psychosis as well as with paranoid and schizotypal personality disorder traits. Furthermore, the angry-dismissive and enmeshed attachment styles were mediators of associations between poor childhood care and schizophrenia-spectrum phenomenology. In conclusion, the studies presented in this thesis provide new insights into the way childhood interpersonal adversities and attachment styles are related to the expression of positive and negative schizotypy and other schizophrenia-spectrum phenotypes in nonclinical individuals. The findings indicate that focusing on relational experiences and the ways they are internalized is important for refining our understanding of the vulnerability for schizophrenia-spectrum psychopathology. Moreover, they support the notion that investigating subclinical expressions may facilitate the identification of risk factors and mechanistic pathways relevant to clinical psychosis. Overall, this work contributes to expand and refine current psychosocial models of psychosis vulnerability and may ultimately inform the development of prophylactic and treatment strategies.

El objetivo principal de la presente tesis doctoral fue optimizar la crioconservación de semen caprino de la raza Blanca de Rasquera. Para ello, se diseñaron 4 estudios. En el primer estudio se evaluó la sustitución de la yema de huevo fresco por yema de huevo en polvo (YHP), para reducir el riesgo de contaminación microbiológica del diluyente, así como el efecto de la yema de huevo fresco clarificado obtenida por centrifugación ultrarrápida. Simultáneamente, se evaluó la presencia de plasma seminal en la congelabilidad espermática de donantes de uno y dos años de edad. En el segundo, se estudió la sustitución de los crioprotectores penetrante (glicerol vs trehalosa) y no penetrante (YHP vs lecitina de soja (LS)), así como la inclusión del antioxidante BHT y el tampón zwitteriónico Test, en lugar del Tris, en los diluyentes. En el tercer trabajo, se analizó la lecitina de soja como alternativa viable en la conservación de espermatozoides caprinos en presencia de plasma seminal, así como la concentración óptima del antioxidante BHT en los diluyentes a base de YHP o LS. Por último, en el cuarto estudio se valoró la calidad espermática a lo largo de todo el año, la adición de antioxidantes (BHT o melatonina) en los diluyentes y la aplicación de implantes de melatonina en los sementales en primavera, además de valorar el efecto de la edad y del individuo en la congelabilidad de los espermatozoides caprinos. Tras un complejo análisis de la calidad de los espermatozoides durante su conservación, podemos concluir que la yema de huevo en polvo puede sustituir a la yema de huevo fresco en la congelación de semen caprino, ya que, independientemente de la edad del donante, no se observó superioridad alguna en ningún tipo de yema de huevo analizadas, aunque permaneciendo la necesidad de eliminar el plasma seminal cuando está presente al 15%. Tampoco la yema de huevo clarificada supuso ninguna mejora, pero sí desventajas a la hora de elaborar los diluyentes. Respecto al uso de la lecitina de soja como crioprotector, ésta podría ser una alternativa viable a incorporar en los medios de refrigeración sin la necesidad de eliminar el plasma seminal. No obstante, tras la crioconservación de espermatozoides lavados y no lavados, en diluyentes a base de LS, la viabilidad espermática fue inferior, observándose una población espermática con membranas intactas pero sin función mitocondrial mayor respecto a los espermatozoides conservados con YHP. En cuanto a la sustitución del crioprotector penetrante y del sistema tampón, el glicerol y el tampón Tris continúan siendo las mejores alternativas en la conservación espermática caprina. La inclusión de BHT como antioxidante en los diluyentes apenas mostró efecto alguno, así como tampoco se observaron diferencias significativas al utilizar diferentes concentraciones de BHT (0.6, 2.0 y 5.0 mM) tras la conservación, tanto en los medios a base de YHP como de LS, aunque en éstos últimos, de nuevo, se observó un notable incremento de espermatozoides con membrana plasmática y acrosomal intactas pero sin función mitocondrial. Finalmente, tras recopilar los resultados obtenidos a lo largo de dos años de experimental, observamos que la viabilidad de los espermatozoides frescos fue superior a los 18 y 30 meses de edad en fotoperiodo positivo (final de la primavera) respecto a los 14 y 25 meses de edad en fotoperiodo negativo (final del otoño). El uso de implantes de melatonina en primavera afectó negativamente la viabilidad y resistencia al shock hipoosmótico del semen fresco y refrigerado, así como la motilidad total en los refrigerados. Por último, existen diferencias entre individuos tanto en el semen fresco como refrigerado y descongelado, identificando tres tipos de individuos: buenos, moderados y malos congeladores. / The main objective of present doctoral thesis was to optimize the semen cryopreservation of goat from Blanca de Rasquera breed. For this, four studies were designed. In the first study we assessed the replacement of fresh egg yolk by powdered egg yolk (PEY), to reduce the risk of microbiological contamination of extender, and the effect of the clarified fresh egg yolk obtained by centrifugation. Simultaneously, we also assessed the effect of the presence of seminal plasma on sperm freezability from males of one and two years old. In the second study, the aim was to substitute the penetrating cryoprotectants (glycerol vs trehalosa) and non-penetrating (PEY vs soybean lecithin (SL)), and the inclusion of the antioxidant BHT and Test zwitterionic-buffer, instead of Tris, in the extenders. The aims of third study were to determine whether SL-based media is a viable alternative in the preservation of goat sperm in the presence of seminal plasma and to determine the optimal concentration of the antioxidant BHT in PEY or SL-based media. Finally, the fourth study was conducted to assess sperm quality throughout the year, the addition of antioxidants (BHT or melatonin) in the extenders, and the application of melatonin implants in males in spring. In addition, we assessed the effect of donor age and the individual in the freezability of goat sperm. After a complex analysis of sperm quality during preservation, we can conclude that the PEY can be used in place of fresh egg yolk in the extenders for cryopreservation goat semen, since, regardless of donor age, there was not superiority in any of the egg yolk types, remaining the need to remove seminal plasma when the medium containing 15% egg yolk. The use of clarified egg yolk did not confer any benefit to the fresh egg yolk, complicated the process of drawing up preservation media. Regarding the use of SL as a cryoprotectant, this could be a viable alternative to incorporate in preservation at 5°C media, without the need to remove seminal plasma. However, after cryopreservation of washed and unwashed sperm, in LS-based media, sperm viability was low and the population of sperm with intact plasma and acrosomal membranes, but without mitochondrial function was high compared with sperm preserved PEY. Related to the replacement of penetrating cryoprotectant and the buffer, Tris-buffer system and glycerol were still the best alternative in preserving goat sperm. The inclusion of BHT as an antioxidant in extenders showed hardly any effect, nor when using different concentrations of BHT (0.6, 2.0 and 5.0 mM) after preservation, in PEY or SL-based media, although in the latter, again were observed a significant increase of spermatozoa with intact plasma and acrosomal membranes, but without mitochondrial function. Finally, after compiling the results throughout two years of experimental period, we observed that the viability and resistance to hypoosmotic shock of fresh spermatozoa was higher at 18 and 30 months old males during positive photoperiod (late spring) compared to the 14 and 25 months old males during negative photoperiod (late autumn). The use of melatonin implants in spring negatively affected the viability and hypoosmotic shock resistance of fresh and cooled semen, and the total motility in cooled semen. Finally, individual effect exists on buck sperm cryopreservation, identifying 3 types of males: good, average and bad freezers.

En el primer estudi d’aquesta tesi, es vàren estudiar diferents brots que presentàven patología respiratòria per tal de detectar-ne la presència de virus de la influença porcina. En catorze casos es vàren detectar virus de la grip circulants. Aquests van ser aïllats, seqüenciats a nivell de genoma complet i comparats amb altres virus de la influença coneguts. Els virus aïllats pertanyien als subtipus H1N1 (n=6, incloent un virus pandèmic H1N1 humà), H3N2 (n=4), i H1N2 (n=4). En 11/14 casos es van detectar possibles reorganitzacións genètiques mitjançant l’anàlisi filogenètica. En una segona part es va analitzar l’evolució genètica d’aïllats H1N1 obtinguts en un estudi longitudinal d’un lot de porcs durant 6 mesos. La seqüenciació de 22 aïllats obtinguts en aquesta explotació van indicar la co-circulació de dues variants del mateix virus, així com l’emergència de noves soques recombinants en diferents moments. Aquests resultats indiquen que les reorganitzacions genètiques són comuns i corroboren la importància de conèixer la epidemiologia dels virus de la influenza porcina, particularment en explotacions endèmiques. En el segon estudi d’aquesta tesi, els aïllats seqüenciats prèviament es varen analitzar mitjançant la inhibició de l’hemaglutinació. Aquesta anàlisi es va fer amb l’ús de sèrums mono-específics obtinguts de porcs immunitzats i amb 100 sèrums obtinguts d’explotacions porcines comercials seropositives a grip i no vacunades. Els resultats obtinguts van permetre detectar una gran diversitat antigènica dels virus H1N1. En canvi, els virus H1N2 i H3N2 circulants semblen ser més homòlegs per subtipus al analitzar la seva reactivitat creuada. Quan es van comparar les seqüències d’amino àcids del gen de la hemaglutinina es va observar que els virus H1N1 també presentaven una major quantitat de canvis de residus que els altres dos subtipus. Les causes d’aquestes característiques antigèniques diferents de cada subtipus no es coneixen i probablement són reflex una epidemiologia diferent. / En el primer estudio de esta tesis, se estudiaron diferentes brotes de enfermedad respiratoria en cerdos para detectar la presencia del virus de la influenza porcina. En catorce casos se obtuvo el aislamiento de virus influenza A. Los aislados víricos se secuenciaron en todos sus genes y las secuencias se compararon con otros virus de la influenza porcina. Los virus aislados pertenecían a los subtipos H1N1 (n=6, incluyendo un virus pandémico H1N1 humano), H3N2 (n=4), y H1N2 (n=4). En 11/14 casos se detectaron posibles reorganizaciones genéticas en los genes examinados. En una segunda parte se analizó la evolución genética de aislados H1N1 obtenidos en un estudio longitudinal de un lote de cerdos durante 6 meses. La secuenciación de 22 aislados obtenidos en esa explotación indicaron la co-circulación de dos variantes del mismo virus, así como la emergencia de virus recombinantes en diferentes momentos. Estos resultados indican que las reorganizaciones genéticas son comunes y corroboran la importancia las situaciones endémicas. En el segundo estudio de esta tesis, los aislados secuenciados previamente se analizaron mediante la inhibición de la hemaglutinación (IHA). Este análisis se hizo con el uso de sueros mono-específicos obtenidos de cerdos inmunizados con los aislados obtenidos anteriormente y con 100 sueros obtenidos de explotaciones porcinas comerciales no vacunadas. Los resultados obtenidos permitieron detectar una gran diversidad antigènica entre los virus H1N1. En cambio, los virus H1N2 y H3N2 circulantes parecen ser más homólogos al analizar su reactividad cruzada. Cuando se compararon las secuencias de aminoácidos del gen de la hemaglutinina se observó que los virus H1N1 también presentaban una mayor cantidad de cambios en los residuos aminoacídicos que los otros dos subtipos. Las causas de estas diferentes características antigénicas de cada subtipo no se conocen y probablemente son reflejo de particularidades epidemiológicas. / In the first study of the present thesis, outbreaks of respiratory disease were investigated for the presence of swine influenza virus (SIV). In 14 cases the circulating influenzaviruses were isolated, fully sequenced and compared with other known SIV. H1N1 (including human pandemic H1N1) was the most common subtype involved in the outbreaks (n=6), followed by H3N2 (n=4) and H1N2 subtypes (n=4). In 11/14 cases the phylogenetic analyses indicated the occurrence of possible reassortment events. In the second part of the study, the genetic evolution of a H1N1 isolate was assessed over a six-month period in a longitudinal study in closed group of pigs. Sequencing of 22 isolates retrieved during that follow-up indicated the co-circulation of two different variants of the same virus. Also, the emergence of SIV reassortants at certain timepoints was evidenced. These results indicate that reassortment events in SIV are common, and point towards the need for a better understanding of the epidemiology of SIV, particularly in endemic farms. In the second study of the present thesis, SIV isolates sequenced in the first study where analyzed by means of the haemagglutination inhibition assay (HI) using monospecific sera obtained from pigs immunized with the different isolates. Also, 100 serum samples obtained from seropositive and unvaccinated commercial farms were analyzed. Based on those analysis, a high antigenic diversity was found when comparing the H1N1 viruses. In contrast, HN2 and H3N2 viruses circulating in Spanish swine seemed to have less antigenic diversity regarding their cross-reactivity in the HI. Comparing the amino acid sequences of the haemagglutinin of the analyzed isolates, H1N1 viruses had more changes than the other subtypes. The causes behind this different behavior depending on the subtype are unknown and probably reflect a different epidemiology.