Submitted by Nathália Neves (nathalia.neves@ufpe.br) on 2015-03-05T18:45:56Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO COM FICHA_MONA LISA VENÂNCIO DE SOUZA DOS SANTOS_PPGBF.pdf: 1364478 bytes, checksum: d338acd4f4e9297de4cac5d9eef2671b (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-05T18:45:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO COM FICHA_MONA LISA VENÂNCIO DE SOUZA DOS SANTOS_PPGBF.pdf: 1364478 bytes, checksum: d338acd4f4e9297de4cac5d9eef2671b (MD5) Previous issue date: 2012-03-07 / CAPES / Fungos endofíticos residem assintomaticamente na planta colonizando os tecidos internos durante algum momento do ciclo de vida. Plantas medicinais, como Schinus terebinthifolius, despertam interesse quanto às comunidades endofíticas pela relação entre suas propriedades e as de seus endófitos, contudo ainda é pouco estudada. Os objetivos deste trabalho foram isolar fungos endofíticos de S. terebinthifolius e caracterizá-los quanto à capacidade de inibir fungos filamentosos e leveduras patogênicos ao homem através de testes em meios sólido e líquido. Foram realizadas duas coletas, julho/2010 e fevereiro/2011 nos Campi da Universidade Federal de Pernambuco e da Universidade Federal Rural de Pernambuco, utilizando duas temperaturas de isolamento, 28°C e 18°C em ágar batata dextrose. Dos 960 fragmentos analisados, 364 (37,92%) foram colonizados, sendo isolados 397 fungos. Maiores freqüências de colonização foram de Guignardia bidwellii (25,94%), Colletotrichum gloeosporioides (9,17%), Phyllosticta sp. (1,88%) e Phomopsis spp. (1,46%). Não houve diferença significativa, isoladamente ou combinadas, relacionando o número de fragmentos colonizados e de isolados em relação às variáveis área, período de coleta e temperatura de isolamento. Dentre os fungos, G. bidwelli e C. gloeosporioides apresentaram médias significativamente maiores do que os demais isolados. Houve diferença significativa, entre o número de isolados de cada espécie, e entre estes e as variáveis período e área. Fungos endofíticos como G. bidwellii, C. gloeosporioides e a morfoespécie 1 de S. terebinthifolius apresentaram atividade antifúngica contra dermatófitos e leveduras de interesse médico.

Mangrove ecosystems are critical to Florida, providing economic resources to humans, and untold ecological resources to estuarine organisms. In Florida's estuaries, mangrove ecosystems have suffered significant losses due to natural and human disturbances; these disturbances potentially leave mangrove communities vulnerable to invasion by the opportunistic exotic, Schinus terebinthifolius (Brazilian pepper). Prior experiments have suggested that Schinus terebinthifolius is unable to survive under marine conditions and poses no long term threat to mangrove systems. However, this contradicts field observations where Schinus terebinthifolius was found growing in the intertidal zone of Mosquito Lagoon alongside three native species of mangroves, Rhizophora mangle, Avicennia germinans and Laguncularia racemosa. The purpose of my study was to evaluate competition between the invasive S. terebinthifolius and these three native species of mangroves in the coastal estuarine system along the east coast of Central Florida in Canaveral National Seashore. The effects of competition were evaluated by testing the ability of S. terebinthifolius to: 1) chemically inhibit growth of mangrove propagules, 2) invade new coastal habitats by dispersing seeds in the water, 3) alter species richness and abundance of the flora when present in a mangrove system, and 4) recruit and survive in mangrove habitat. By better understanding the invasibility and impact of Schinus terebinthifolius on mangroves, coastal resource managers will be able to develop the most effective management strategies to prevent this exotic from altering the structure and productivity of the mangrove ecosystem.

O uso de produtos anti-inflamatórios e antioxidantes sintéticos representa uma grande preocupação nos dias atuais para a população. Importante destacar alguns aspectos relevantes quanto às dificuldades encontradas no tratamento, como o aumento da resistência aos fármacos e os efeitos colaterais da terapia convencional, que apresenta como consequência o desencadeamento de doenças graves, prejudicando e comprometendo a saúde humana. Os óleos voláteis têm sido alvo na busca de novas substâncias, por apresentarem como potencial fonte de novos agentes antioxidantes e anti-inflamatórios. Dentre as espécies vegetais caracterizadas pela produção deste metabólito secundário, estão aquelas pertencentes ao gênero Schinus, da família Anacardiaceae, de ampla ocorrência do Rio Grande do Sul. Nesse contexto, o presente trabalho objetivou analisar e identificar a composição química e avaliar as atividades biológicas a partir da extração do óleo volátil das espécies de Schinus weinmannifolius e Schinus polygamus, nativas do Rio Grande do Sul. Assim, o óleo volátil foi obtido por hidrodestilação de diversas coletas de folhas e frutos de S. weinmannifolius e folhas de S. polygamus. A análise química, realizada por cromatografia à gás acoplada à espectrometria de massas (CG-EM), demonstrou grande variedade de compostos presentes nas amostras, com predominância dos sesquiterpenos β-cariofileno, germacreno D, biciclogermacreno, germacreno A, δ-cadineno, espatulenol, óxido de cariofileno e α-cadinol para folhas e frutos de S. weinmannifolius e predominância do composto alifático n-nonano para S. polygamus. Os óleos obtidos foram submetidos aos ensaios de reação com 2,2-difenil-1-picrilidrazila (DPPH) e substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) para avaliação da atividade antioxidante, sendo esta ação apenas observada para as amostras de folhas de S. weinmannifolius coletadas no outono e inverno de 2016 pelo ensaio de TBARS. No método de DPPH as amostras de folhas de S. weinmannifolius coletadas no outono de 2015 e 2016 apresentaram baixa atividade antioxidante, na concentração de 100 μg/mL. A ação anti-inflamatória foi inicialmente avaliada pela técnica in vitro da câmara de Boyden, nas concentrações de 0,001 a 10 μg/mL. Todas as amostras apresentaram inibição significativa da migração leucocitária em relação ao controle, avaliada no ensaio de antiquimiotaxia. A avaliação da atividade anti-inflamatória in vivo, realizada pelo método de edema de pata, foi conduzida apenas para a amostra que melhor resultado obteve no ensaio in vitro, folhas de S. weinmannifolius, verificando-se inibição significativa do edema na segunda hora de tratamento, na dose de 100 mg/kg. Os resultados encontrados suportam o uso tradicional dos óleos de Schinus como agentes anti-inflamatórios. / The use of synthetic anti-inflammatory and antioxidant products represents a major worry these days for the population. It is important to highlight some aspects relevant concerning the difficulties of the treatment, such as the increase in drug resistance and the side effects of conventional medication, leading to the development of serious diseases, impairing and compromising human health. Volatile oils have been the target of this search for new substances, as they are potential sources of new antioxidant and anti-inflammatory agents. Among the plant species characterized by the production of this chemical group, are those belonging to the Schinus genus, from the Anacardiaceae family, of large occurrence in Rio Grande do Sul. In this context, the present work aimed to analyze and identify the chemical composition and to evaluate the biological activities from the extraction of volatile oil from species of Schinus weinmannifolius and Schinus polygamus, native from Rio Grande do Sul. Thus, the volatile oil was obtained by hydrodistillation of several leaves and fruit collections of S. weinmannifolius and S. polygamus leaves. The chemical analysis, performed by gas chromatography coupled with mass detector (GC-MS), demonstrated great variety of compounds present in the samples, with predominance β-caryophyllene, germacrene D, bicyclogermacrene, germacrene A, δ-cadinene, espatulenol, caryophyllene oxide and α-cadinol for leaves and fruits of S. weinmannifolius and predominance of the compound aliphatic n-nonane for S. polygamus. The obtained oils were submitted to the reaction with 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) and thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) assays to evaluate the antioxidant activity, being this action only observed for leaves samples of S. weinmannifolius collected in autumn and winter of 2016 by the TBARS assay. In the DPPH method, leaves samples of S. weinmannifolius collected in the autumn of 2015 and 2016 presented low antioxidant activity at the concentration of 100 μg/mL. The anti-inflammatory potential was initially performed by the in vitro technique of the Boyden chamber, at concentrations 0,001 to 10 μg/mL. All samples showed significant inhibition of leukocyte migration in relation to the control, evaluated in the antichemotactic assay. The evaluation of in vivo anti-inflammatory activity by the paw edema method was conducted only for the sample that obtained the best result in the in vitro test, S. weinmannifolius oil, with significant inhibition of edema in the second hour of treatment, at dose 100 mg/kg. The results found support the traditional use of Schinus oils as anti-inflammatory agent.

O uso de produtos anti-inflamatórios e antioxidantes sintéticos representa uma grande preocupação nos dias atuais para a população. Importante destacar alguns aspectos relevantes quanto às dificuldades encontradas no tratamento, como o aumento da resistência aos fármacos e os efeitos colaterais da terapia convencional, que apresenta como consequência o desencadeamento de doenças graves, prejudicando e comprometendo a saúde humana. Os óleos voláteis têm sido alvo na busca de novas substâncias, por apresentarem como potencial fonte de novos agentes antioxidantes e anti-inflamatórios. Dentre as espécies vegetais caracterizadas pela produção deste metabólito secundário, estão aquelas pertencentes ao gênero Schinus, da família Anacardiaceae, de ampla ocorrência do Rio Grande do Sul. Nesse contexto, o presente trabalho objetivou analisar e identificar a composição química e avaliar as atividades biológicas a partir da extração do óleo volátil das espécies de Schinus weinmannifolius e Schinus polygamus, nativas do Rio Grande do Sul. Assim, o óleo volátil foi obtido por hidrodestilação de diversas coletas de folhas e frutos de S. weinmannifolius e folhas de S. polygamus. A análise química, realizada por cromatografia à gás acoplada à espectrometria de massas (CG-EM), demonstrou grande variedade de compostos presentes nas amostras, com predominância dos sesquiterpenos β-cariofileno, germacreno D, biciclogermacreno, germacreno A, δ-cadineno, espatulenol, óxido de cariofileno e α-cadinol para folhas e frutos de S. weinmannifolius e predominância do composto alifático n-nonano para S. polygamus. Os óleos obtidos foram submetidos aos ensaios de reação com 2,2-difenil-1-picrilidrazila (DPPH) e substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) para avaliação da atividade antioxidante, sendo esta ação apenas observada para as amostras de folhas de S. weinmannifolius coletadas no outono e inverno de 2016 pelo ensaio de TBARS. No método de DPPH as amostras de folhas de S. weinmannifolius coletadas no outono de 2015 e 2016 apresentaram baixa atividade antioxidante, na concentração de 100 μg/mL. A ação anti-inflamatória foi inicialmente avaliada pela técnica in vitro da câmara de Boyden, nas concentrações de 0,001 a 10 μg/mL. Todas as amostras apresentaram inibição significativa da migração leucocitária em relação ao controle, avaliada no ensaio de antiquimiotaxia. A avaliação da atividade anti-inflamatória in vivo, realizada pelo método de edema de pata, foi conduzida apenas para a amostra que melhor resultado obteve no ensaio in vitro, folhas de S. weinmannifolius, verificando-se inibição significativa do edema na segunda hora de tratamento, na dose de 100 mg/kg. Os resultados encontrados suportam o uso tradicional dos óleos de Schinus como agentes anti-inflamatórios. / The use of synthetic anti-inflammatory and antioxidant products represents a major worry these days for the population. It is important to highlight some aspects relevant concerning the difficulties of the treatment, such as the increase in drug resistance and the side effects of conventional medication, leading to the development of serious diseases, impairing and compromising human health. Volatile oils have been the target of this search for new substances, as they are potential sources of new antioxidant and anti-inflammatory agents. Among the plant species characterized by the production of this chemical group, are those belonging to the Schinus genus, from the Anacardiaceae family, of large occurrence in Rio Grande do Sul. In this context, the present work aimed to analyze and identify the chemical composition and to evaluate the biological activities from the extraction of volatile oil from species of Schinus weinmannifolius and Schinus polygamus, native from Rio Grande do Sul. Thus, the volatile oil was obtained by hydrodistillation of several leaves and fruit collections of S. weinmannifolius and S. polygamus leaves. The chemical analysis, performed by gas chromatography coupled with mass detector (GC-MS), demonstrated great variety of compounds present in the samples, with predominance β-caryophyllene, germacrene D, bicyclogermacrene, germacrene A, δ-cadinene, espatulenol, caryophyllene oxide and α-cadinol for leaves and fruits of S. weinmannifolius and predominance of the compound aliphatic n-nonane for S. polygamus. The obtained oils were submitted to the reaction with 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) and thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) assays to evaluate the antioxidant activity, being this action only observed for leaves samples of S. weinmannifolius collected in autumn and winter of 2016 by the TBARS assay. In the DPPH method, leaves samples of S. weinmannifolius collected in the autumn of 2015 and 2016 presented low antioxidant activity at the concentration of 100 μg/mL. The anti-inflammatory potential was initially performed by the in vitro technique of the Boyden chamber, at concentrations 0,001 to 10 μg/mL. All samples showed significant inhibition of leukocyte migration in relation to the control, evaluated in the antichemotactic assay. The evaluation of in vivo anti-inflammatory activity by the paw edema method was conducted only for the sample that obtained the best result in the in vitro test, S. weinmannifolius oil, with significant inhibition of edema in the second hour of treatment, at dose 100 mg/kg. The results found support the traditional use of Schinus oils as anti-inflammatory agent.

The phytochemical and biological study of the species S. lentiscifolius, S. terebinthifolius, S. molle and S. polygamus known as ―aroeiras‖ (Anacardeaceae) distributed in Rio Grande do Sul, was carried out to establish the chemical composition of volatile oils obtained by hydrodistillation of aerial parts of leaves, flowers and fruits collected in different seasons. In addition, leaves and fruits were analyzed and compared to determine seasonal variations in the oils constitution. The oils chemical composition was determined by Gas Chromatography coupled with a Mass Spectrometry (GC-MS). The yields of the studied species oils essential aerial parts ranged from 0.14-2-13%, depending on the stage of development and part collected. One hundred and thirty-five compounds were identified from the oils essential, representing approximately 90% of the oils from leaves, flowers and fruits collected between spring and summer in 2005 to 2011. The volatile oils of the analyzed species showed a constant qualitative standard in the compounds: α-pinene, β-pinene, δ-2- carene, limonene for majority monoterpenes; germacrene-D, bicyclogermacrene, δ-cadinene, spatulenol, caryophyllene oxide and -cadinol for majority sesquiterpenes in the leaves oil; α- pinene, mircene epi-cubenol, cubenol and spatulenol for majority sesquiterpenes in the flowers oil; α-pinene, β-pinene mircene, epi-cubenol, cubenol, spatulenol, caryophyllene oxide and -cadinol for majority sesquiterpenes in the oil fruits. The quantitative variations among the different constituents in oils of different species were quite relevant. Additionally, considering the therapeutic potential and the compounds described, the phytochemical study and antioxidant and antimicrobial activity were evaluated in the oils, crude extracts, aqueousextracts, isolated and derivative compounds. The aqueous extracts obtained by 9 hydrodestillation, in part were dried by lyophilization and in part were subjected to a liquidliquid partition using hexane solvent, ethyl acetate and n-butanol. Besides these, the crude extract was prepared from the leaves of S. lentiscifolius. The chromatographic fraction of crude extract and ethyl acetate led to the isolation and identification of nonadecanol (1) and moronic acid (2). From moronic acid (2) by employing NaBH4 reduction reaction were obtained the derivatives morolic acid (3) and 3-epi-morolic acid (4). The analysis of S. lentiscifolius ethyl acetate aqueous extract led to the isolation of the compound FLA-1 (5) and galic acid (6), from this was obtained the derivative methyl gallate (7). The S. molle nbutanol aqueous extract led to the isolation of the flavonoid quercetin (8) and rutin (9). The substances were identified by physical data and spectroscopic techniques (1H NMR, 13C, COSY, HMQC, HMBC), mass spectrometry and X-rays. The aqueous extracts analysis by High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) led to the characterization of galic acid (6), quercetin (8) and rutin (9) comparing to the existing laboratory standards. All extracts present galic acid (6), except to S. molle. The oils antimicrobial activity of the species S. lentiscifolius, S. terebinthifolius, S. molle and S. polygamus were evaluated by microdilution method using a collection of pathogenic microorganisms composed of bacteria and fungi. The results showed that the obtained oils from different plants were active using the most of the microorganisms tested. Best results were found in the fruits oils of S. terebinthifolius. The extracts and fractions of S. lentiscifolius, S. terebinthifolius and S. molle have also been tested as antibacterial and antifungal activity. Best results were found for the extract of S. lentiscifolius with a Minimum Inhibitory Concentration (MIC) from 31.2 to 12.5 mg/mL. In addition, isolated compounds extracts were evaluated as antioxidant activity using 2,2-diphenyl-picrylhydrazyl (DPPH). All extracts and compounds tested showed inhibition results for free radical DPPH. / O estudo fitoquímico e biológico das espécies S. lentiscifolius, S. terebinthifolius, S. molle e S. polygamus conhecidas como ―aroeiras‖ (Anacardiaceae), distribuídas no Rio Grande do Sul, foi realizado visando o estabelecimento da composição química de óleos voláteis obtidos por hidrodestilação das partes aéreas (folhas, flores e frutos) coletadas em diferentes estações do ano. Além disso, folhas e frutos foram analisados e comparados para determinar as variações sazonais na constituição dos óleos. A composição química dos óleos foi determinada através de Cromatografia Gasosa acoplada à Espectrometria de Massas (CGEM). Os rendimentos dos óleos essenciais das partes aéreas das espécies estudadas variaram de 0,14-2,13%, dependendo do estágio de desenvolvimento e da parte coletada. Aproximadamente cento e trinta e cinco compostos foram identificados a partir dos óleos essenciais, representando aproximadamente 90% dos óleos das folhas, flores e frutos, coletados entre a primavera e o verão no período 2005 a 2011. Os óleos volatéis das espécies analisadas apresentaram um padrão qualitativo constante dos compostos: α-pineno, β-pineno, δ-2-careno, limoneno como monoterpênicos majoritários; germacreno-D, biciclogermacreno, δ-cadineno, espatulenol, óxido de cariofileno -cadinol com os esquiterpenos majoritários no óleo das folhas; α-pineno, mirceno epi-cubenol, cubenol, espatulenol como sesquiterpenos majoritários no óleo das flores; α-pineno, β-pineno mirceno como monoterpenos e epicubenol, cubenol, espatulenol, óxido de cariofileno e -cadinol como sesquiterpenos majoritários no óleo dos frutos. As variações quantitativas entre os diferentes constituintes 7 nos óleos das diferentes espécies foram marcantes. Adicionalmente, considerando-se o potencial terapêutico e os compostos descritos para o gênero, foi realizado o estudo fitoquímico e avaliadas as atividades antimicrobianas e antioxidantes dos óleos, dos extratos brutos, dos aquosos, dos compostos isolados e dos derivados. Os extratos aquosos obtidos do processo de hidrodestilação, parte foi seco por liofilização parte foi submetido à partição líquido-líquido com os solventes hexano, acetato de etila e n-butanol. Além desses, foi preparado o extrato bruto das folhas de S. lentiscifolius. O fracionamento cromatográfico do extrato bruto de acetato de etila de S. lentiscifolius levou ao isolamento do álcool graxo (119), ácido morônico (120). Também foram obtidos dois derivados do ácido morônico (120), por reação de redução empregando NaBH4, os quais foram caracterizados como ácido morólico (121) eácido 3-epi- morólico (122). A análise do extrato aquoso de acetato de etila de S. lentiscifolius levou ao isolamento do composto FLA-1 (115) e do ácido gálico (116), do qual foi obtido o derivado galato de metila (118). Do extrato aquoso n-butanólico de S. molle foi isolado o flavonóide quercetina (90) e rutina (117). As substâncias foram identificadas por dados físicos e técnicas espectroscópicas (RMN de 1H, 13C, COSY, HMQC e HMBC) espectrometria de massas e raios-X. A análise dos extratos aquosos por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) levou à caracterização do ácido gálico (116), quercetina (90) e rutina (117) por comparação com padrões existentes no laboratório. Todos os extratos apresentaramo ácido gálico (116), exceto nos extratos de S. molle. A atividade antimicrobiana dos óleos das espécies S. lentiscifolius, S.terebinthifolius, S.molle e S. polygamus foram avaliadas pelo método de microdiluição frente uma coleção de microorganismos patogênicos, compostos por bactérias e fungos. Os resultados demonstraram que os óleos obtidos das diferentes plantas foram ativos frente à maioria dos microorganismos testados. Os melhores resultados foram encontrados para os óleos dos frutos de S. terebinthifolius. Os extratos brutos e frações de S. lentiscifolius, S. terebinthifolius e S. molle foram testados também quanto à sua atividade antibacteriana e antifúngica. Os melhores resultados foram encontrados para o extrato de S. lentiscifolius com uma Concentração Inibitória Mínima (CIM) 31,2- 12,5μg/mL. Além disso, os extratos e os compostos isolados foram avaliados quanto à atividade antioxidante, utilizando-se 2,2-difenil-picrilhidrazil (DPPH). Todos os extratos e compostos testados apresentaram resultados de inibição ao radical livre DPPH.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:13:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FranciscoNTVB.pdf: 4697852 bytes, checksum: ce51988c79b68ec25268a90a156fbd93 (MD5) Previous issue date: 2008-04-28 / The decoction of Brazilian pepper tree barks (Schinus terebinthifolius, Raddi), is used in medicine as wound healing and antiinflamatory. Once extracts from this plant are used for acceleration of scar s process, it is important to study their mutagenic and genotoxic potential. In previous works in our laboratory, it was observed mutagenicity caused by the decoction when in high concentrations. Among the chemical compounds of this plant that could be able to induce mutation, the flavonoids were the only group that was referred to have either an oxidant or antioxidant potential. The flavonoids were isolated, purified and quantified by adsorptive column chromatography under silica gel, bacterial and in vitro genotoxic tests were realized to determine if the flavonoids were the responsible agents for this mutagenicity found. The tests realized with plasmidial DNA were indicative that the flavonoids are probably genotoxic, due to the presence of correlation between increase of the flavonoid concentration and in plasmidial DNA double strand breakage visualized in agarose gel, as well as they were capable to generated abasic sites shown by the in vitro treatment with exonuclease III. The same tests with plasmidial DNA in the presence of copper [10 ?M] and of a Tris-HCl pH 7.5 [10 ?M] buffer were realized with the isolated flavonoids to determine if there would be or not participation of reactive oxygen species (ROS). The transformation of plasmidial DNA in different bacterial strains proficient and deficient in DNA repair enzymes in the presence or not of a Tris-HCl buffer, suggests that the enzymes that repair oxidative lesions are necessary to repair the lesions generated by the flavonoids and that ROS are generated and are necessary to promote the lesions. Bacterial tests with Escherichia coli strains of the CC collection (deficient or not for DNA repair enzymes), showed that the flavonoids are able to increase the frequency of mutations, mainly in strains mutated in repair enzymes (MutM, MutY-glicosylases and double mutant), suggesting that these agents are responsible for the enhancement in the mutation rate. In order to determine the mutation spectrum caused by the flavonoids of the Brazilian pepper tree stem bark, plasmidial DNA previously treated with the flavonoids were transformed in bacterial strains deficient and proficient in the DNA repair enzymes, followed by a blue-white selection with X-gal, DNA amplification by PCR and sequencing the positive mutant clones. Analysis of the mutants obtained from strains CC104, CC104mutM, CC104mutY, CC104mutMmutY, BW9101, BW9109 indicated a predominance of some mutations like G:C to C:G that can be correlated with the origin of 8-oxoG, due to oxidative lesions caused by the flavonoids. So it can concluded that the flavonoid isolated or in fractions enriched on them are genotoxic and mutagenic, and their mutations are predominantly oxidative, mediated by ROS, and the lesions are recognized by the BER system. In this way it is proposed that the flavonoids can act in two different ways to generate the DNA lesion: 1. in a Fenton-like reaction, when the flavonoid are in the presence of metal ions and that together with the water generate ROS that promotes the DNA lesions; 2. in another way the lesions can be generated by the formation of ROS due to the internal chemical structure of the flavonoid molecule due to the quantity and location of hydroxyl groups, and so producing the DNA lesions, those lesions can be directly (suggested by the in vitro experiments) or indirectly done (supported by the experiments using the CC bacterial strains) / O decocto feito de cascas da Aroeira (Schinus terebinthifolius, Raddi) ? usado na medicina popular como cicatrizante e anti-inflamat?rio, mas, apesar de seu efeito medicinal, tamb?m foi demonstrado um efeito mutag?nico. O objetivo deste trabalho foi determinar se os flavon?ides da aroeira s?o os respons?veis pela mutagenicidade bem como propor um mecanismo de a??o. Para tanto, diferentes fra??es enriquecidas em flavon?ides foram preparadas e os flavon?ides foram isolados, purificados e quantificados via cromatografia de adsor??o em gel de s?lica. Testes de genotoxicidade, in vitro e em sistemas bacterianos foram realizados a fim de determinar o mecanismo de a??o. Testes realizados com DNA plasmidial In vitro foram indicativos de que as fra??es enriquecidas de flavon?ides s?o capazes de gerar dupla quebra na fita do DNA, bem como s?o capazes de gerar s?tios ab?sicos, evidenciados na presen?a da exonuclease III. O mesmo teste com DNA plasmidial, mas na presen?a de cobre [10 ?M] e de tamp?o Tris-HCl pH 7.5 [10 ?M], foi realizado, para determinar se haveria ou n?o participa??o de esp?cies reativas de oxig?nio na indu??o de danos. A transforma??o do DNA plasmidial em diferentes cepas bacterianas, proficientes e deficientes em diferentes vias de reparo de DNA, na aus?ncia e presen?a de tamp?o Tris-HCl pH 7.5 [10 ?M], sugerem que enzimas de reparo de les?es oxidativas s?o necess?rias para reparar as les?es geradas pelos flavon?ides e que esp?cies reativas de oxig?nio s?o geradas e necess?rias para promover as les?es. Teste de mutagenicidade direta com diferentes cepas de Escherichia coli derivadas da linhagem CC104 sugeriram que os flavon?ides aumentam a freq??ncia de muta??o em cepas deficientes nas enzimas MutM e MutY glicosilases, principalmente na duplo mutante, sugerindo que as les?es predominantemente oxidativas, s?o substratos destas enzimas no DNA. A fim de determinar o espectro de muta??o causado pelos flavon?ides da aroeira, DNA plasmidial foi transformado previamente tratado com as fra??es enriquecidas em flavon?ides em cepas deficientes em enzimas de reparo de DNA, seguido de sele??o por colora??o com x-gal (sele??o azul-branco), amplifica??o de DNA por PCR e sequenciamento dos clones mutantes. An?lise dos mutantes obtidos nas cepas CC104, CC104mutM, CC104mutY e CC104mutMmutY indicaram a predomin?ncia de muta??es do tipo G:C para C:G, que pode estar correlacionada a origem de 8-oxoG, devido a les?es oxidativas causadas pelos flavon?ides. Assim, pode-se concluir que os flavon?ides isolados ou em fra??es enriquecidas nos mesmos s?o respons?veis pelo potencial mutag?nico dos extratos da aroeira, que as les?es geradas s?o oxidativas, predominando a forma??o de 8-oxoG, devido ? forma??o de EROs, e que s?o reconhecidas por enzimas do sistema de reparo por excis?o de base. Desta forma, prop?e-se que os flavon?ides possam gerar esp?cies reativas de oxig?nio de duas maneiras diferentes: i) em uma rea??o Fenton-like, quando os flavon?ides est?o na presen?a de metais e ?gua ou ii) devido ? estrutura interna da mol?cula de flavon?ide pela disposi??o e quantidade de grupamento hidroxilas na pr?pria mol?cula. As les?es podem ser geradas diretamente (sugerido pelos experimentos de tratamento in vitro) ou indiretamente (pelos experimentos obtidos com as linhagens CC)

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:16:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AnaLRS.pdf: 726183 bytes, checksum: 81046db5b8c498443b16524a30d07eff (MD5) Previous issue date: 2007-09-29 / Schinus terebinthifolius Raddi is used in the treatment of skin and mucosal injuries, infections of respiratory, digestive and genitourinary systems. Currently one of the biggest problems faced for the industry of phytopharmaceuticals with regard to the quality of raw materials is the microbial contamination. The aim this study was to evaluate the antimicrobial action of the hidroalcoholic extract of aroeira, beyond testing the effectiveness of the preservative system in hidrogel to the base of this extract. The extracts were prepared by maceration in the ratio of 1:10 of solvent plant/with alcohol 40%. The methods for microbial count were pour plate and test for specific microorganisms, analyzing in third copy each one of the samples. The antimicrobial activity of aroeira extracts was performed using an agar diffusion method, using strains of S. aureus, P. aeruginosa, E. coli, B. subtilis, C. albicans, C. tropicalis, C. krusei, C. guilliermondii, T. rubrum, M. gypseum, A. flavus and A. niger. The formula with aroeira was evaluated by the challenge test. This method consisted of artificial contamination the sample with separate in?culos of A. niger, C. albicans, E. coli e S. aureus aeruginosa and determinations of survivors for the method of counting for pour plate , during times 0, 24h, 48h, 7 days, 14 days, 21 days and 28 days. How much to the results, one verified that the extract of aroeira in the 13,5 concentration mg/mL presented antimicrobial activity for cepas of E. coli, B. subtilis, P. aeruginosa e S. aureus, producing inhibition zone, on average with 13 mm of diameter. However it did not present no fungi activity. The formula with aroeira containig both methylparaben and propylparaben showed a good efficacy in challenge test front to strains of A. niger, C. albicans, E. coli, S. aureus. The A criteria of European Pharmacopoeia, adopted in this work, was verified that this product revealed the good preservative efficacy for the challenge test, time interval of the 28 days. However, it is interesting to extend this study, in order to carry through the sped up stability and the test of shelf, to establish the validity of this formularization / Schinus terebinthifolius Raddi, conhecida popularmente como aroeira da praia, ? utilizada na medicina tradicional para o tratamento de les?es e ?lceras de pele e mucosas, infec??es do sistema respirat?rio, digest?rio e geniturin?rio. Atualmente, um dos maiores problemas enfrentados pela ind?stria de fitoter?picos com rela??o ? qualidade das mat?rias-primas de origem vegetal ? a contamina??o microbiana. Este trabalho objetivou avaliar a a??o antimicrobiana do extrato hidroalc?olico de aroeira, al?m de testar a efic?cia do sistema conservante em formula??o de hidrogel ? base desse extrato. Os extratos foram obtidos por macera??o na propor??o de 1:10 de planta/solvente com ?lcool a 40%. Os m?todos microbiol?gicos utilizados foram o de contagem de microrganismos em placa por pour plate e o da pesquisa de pat?genos, analisando em triplicata cada uma das amostras. A atividade antimicrobiana dos extratos de aroeira foi avaliada atrav?s do m?todo de difus?o em ?gar, empregando as cepas de Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Candida albicans, Candida tropicalis, Candida krusei, Candida guilliermondii, Trichophyton rubrum, Microsporum gypseum, Aspergilus flavus e Aspergilus niger. A f?rmula com aroeira foi avaliada pelo teste do desafio. Este m?todo consistiu em contaminar artificialmente a amostra com in?culos separados de A. niger, C. albicans, E. coli, P. aeruginosa e S. aureus e determinar os sobreviventes pelo m?todo de contagem por pour plate , durante os tempos 0, 24h, 48h, 7 dias, 14 dias, 21 dias e 28 dias. Quanto aos resultados, verificou-se que o extrato de aroeira na concentra??o de 13,5 mg/mL apresentou atividade antimicrobiana para as cepas de E. coli, B. subtilis, P. aeruginosa, S. aureus, produzindo halos de inibi??o, em m?dia com 13 mm de di?metro. No entanto n?o apresentou nenhuma atividade antif?ngica. Quanto ao teste do desafio, verificou-se que a formula??o com gel de aroeira associada aos conservantes metil e propilparabeno apresentou-se eficaz frente ?s cepas de A. niger, C. albicans, E. coli, P. aeruginosa e S. aureus. Conforme o crit?rio A da Farmacop?ia Europ?ia, adotado neste trabalho, verificou-se que esse produto mostrou-se eficaz para o teste do desafio durante o per?odo dos 28 dias. No entanto, ? interessante ampliar esse estudo, a fim de realizar a estabilidade acelerada e o teste de prateleira, para estabelecer a validade dessa formula??o

O uso de produtos anti-inflamatórios e antioxidantes sintéticos representa uma grande preocupação nos dias atuais para a população. Importante destacar alguns aspectos relevantes quanto às dificuldades encontradas no tratamento, como o aumento da resistência aos fármacos e os efeitos colaterais da terapia convencional, que apresenta como consequência o desencadeamento de doenças graves, prejudicando e comprometendo a saúde humana. Os óleos voláteis têm sido alvo na busca de novas substâncias, por apresentarem como potencial fonte de novos agentes antioxidantes e anti-inflamatórios. Dentre as espécies vegetais caracterizadas pela produção deste metabólito secundário, estão aquelas pertencentes ao gênero Schinus, da família Anacardiaceae, de ampla ocorrência do Rio Grande do Sul. Nesse contexto, o presente trabalho objetivou analisar e identificar a composição química e avaliar as atividades biológicas a partir da extração do óleo volátil das espécies de Schinus weinmannifolius e Schinus polygamus, nativas do Rio Grande do Sul. Assim, o óleo volátil foi obtido por hidrodestilação de diversas coletas de folhas e frutos de S. weinmannifolius e folhas de S. polygamus. A análise química, realizada por cromatografia à gás acoplada à espectrometria de massas (CG-EM), demonstrou grande variedade de compostos presentes nas amostras, com predominância dos sesquiterpenos β-cariofileno, germacreno D, biciclogermacreno, germacreno A, δ-cadineno, espatulenol, óxido de cariofileno e α-cadinol para folhas e frutos de S. weinmannifolius e predominância do composto alifático n-nonano para S. polygamus. Os óleos obtidos foram submetidos aos ensaios de reação com 2,2-difenil-1-picrilidrazila (DPPH) e substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) para avaliação da atividade antioxidante, sendo esta ação apenas observada para as amostras de folhas de S. weinmannifolius coletadas no outono e inverno de 2016 pelo ensaio de TBARS. No método de DPPH as amostras de folhas de S. weinmannifolius coletadas no outono de 2015 e 2016 apresentaram baixa atividade antioxidante, na concentração de 100 μg/mL. A ação anti-inflamatória foi inicialmente avaliada pela técnica in vitro da câmara de Boyden, nas concentrações de 0,001 a 10 μg/mL. Todas as amostras apresentaram inibição significativa da migração leucocitária em relação ao controle, avaliada no ensaio de antiquimiotaxia. A avaliação da atividade anti-inflamatória in vivo, realizada pelo método de edema de pata, foi conduzida apenas para a amostra que melhor resultado obteve no ensaio in vitro, folhas de S. weinmannifolius, verificando-se inibição significativa do edema na segunda hora de tratamento, na dose de 100 mg/kg. Os resultados encontrados suportam o uso tradicional dos óleos de Schinus como agentes anti-inflamatórios. / The use of synthetic anti-inflammatory and antioxidant products represents a major worry these days for the population. It is important to highlight some aspects relevant concerning the difficulties of the treatment, such as the increase in drug resistance and the side effects of conventional medication, leading to the development of serious diseases, impairing and compromising human health. Volatile oils have been the target of this search for new substances, as they are potential sources of new antioxidant and anti-inflammatory agents. Among the plant species characterized by the production of this chemical group, are those belonging to the Schinus genus, from the Anacardiaceae family, of large occurrence in Rio Grande do Sul. In this context, the present work aimed to analyze and identify the chemical composition and to evaluate the biological activities from the extraction of volatile oil from species of Schinus weinmannifolius and Schinus polygamus, native from Rio Grande do Sul. Thus, the volatile oil was obtained by hydrodistillation of several leaves and fruit collections of S. weinmannifolius and S. polygamus leaves. The chemical analysis, performed by gas chromatography coupled with mass detector (GC-MS), demonstrated great variety of compounds present in the samples, with predominance β-caryophyllene, germacrene D, bicyclogermacrene, germacrene A, δ-cadinene, espatulenol, caryophyllene oxide and α-cadinol for leaves and fruits of S. weinmannifolius and predominance of the compound aliphatic n-nonane for S. polygamus. The obtained oils were submitted to the reaction with 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) and thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) assays to evaluate the antioxidant activity, being this action only observed for leaves samples of S. weinmannifolius collected in autumn and winter of 2016 by the TBARS assay. In the DPPH method, leaves samples of S. weinmannifolius collected in the autumn of 2015 and 2016 presented low antioxidant activity at the concentration of 100 μg/mL. The anti-inflammatory potential was initially performed by the in vitro technique of the Boyden chamber, at concentrations 0,001 to 10 μg/mL. All samples showed significant inhibition of leukocyte migration in relation to the control, evaluated in the antichemotactic assay. The evaluation of in vivo anti-inflammatory activity by the paw edema method was conducted only for the sample that obtained the best result in the in vitro test, S. weinmannifolius oil, with significant inhibition of edema in the second hour of treatment, at dose 100 mg/kg. The results found support the traditional use of Schinus oils as anti-inflammatory agent.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Many advances in science and industry were inspired by research in natural products, and play an important role in the evolution of organic synthesis, as many methods have been inserted by the efforts in the total synthesis of natural compounds. The few studies with Schinus species lentiscifolius and be widely found in Rio Grande do Sul contributed to their choice as object of study. Using for this purpose the essential oil extracted by hydrodistillation of the stem bark and the hexane extract. The analysis revealed the presence of these basic structures such as α-pinene and myrcene, however, when there is heating the plant material that contain the transformation occurs in more complex structures such as bicyclogermacrene, this turned into during spathulenol isolation process. The study of extract revealed the presence of a mixture of four isomers of similar polarity, requiring esterification to aid in separation. And check of a coupling in the cosy experiment that was not expected, suggesting a change in stereochemistry of morônico acid. Obtained also a metabolite comprises a five-membered lactone with a linear chain substituent comprising sixteen carbons. The originated derivatives morônico acid were an attempt to enhance their antimicrobial activity by inserting a triple bond and later a triazole. The antimicrobial activity revealed that only the morônico acid has a significant activity against the bacteria tested and that the attempt to enhance this activity with derivatives was ineffective. / Muitos avanços na ciência e na indústria foram inspirados pela pesquisa em produtos naturais, além de desempenhar um papel importante na evolução da síntese orgânica, pois muitos métodos foram inseridos pelos esforços na síntese total de compostos naturais. Os escassos estudos com a espécie Schinus lentiscifolius e por ser amplamente encontrada no Rio Grande do Sul contribuíram para sua escolha como objeto de estudo. Utilizando para tanto o óleo essencial extraído por hidrodestilação da casca do caule e o extrato hexânico. A análise destes revelou a presença de estruturas básicas como mirceno e α-pineno, no entanto, quando há o aquecimento do material vegetal que os contêm, ocorre a transformação destas em estruturas mais complexas como o biciclogermacreno, este, se transformou em espatulenol durante o processo de isolamento. O estudo do extrato hexânico revelou a presença de uma mistura de quatro isômeros com polaridade similar, sendo necessária a esterificação para auxiliar na separação. E a verificação de um acoplamento no experimento cosy que não era esperado, sugerindo uma alteração na esterioquímica do ácido morônico. Obteve-se também, um metabólito constituído por uma lactona de cinco membros com um substituinte de cadeia linear composto por dezesseis carbonos. Os derivados originados do ácido morônico foram uma tentativa de potencializar sua atividade antimicrobiana através da inserção de uma tripla ligação e posteriormente de um triazol. As atividades antimicrobianas revelaram que apenas o ácido morônico apresenta uma atividade significante frente às bactérias testadas e que a tentativa de potencializar essa atividade com os derivados foi ineficaz.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-07-13T14:23:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação de Mestrado Augusto - Versão Final - 05.07.16.pdf: 2539433 bytes, checksum: 5317f34435773775b8fcf0c7526d78d5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-13T14:23:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação de Mestrado Augusto - Versão Final - 05.07.16.pdf: 2539433 bytes, checksum: 5317f34435773775b8fcf0c7526d78d5 (MD5) Previous issue date: 2016-05-27 / O pantoprazol é, atualmente, um dos medicamentos mais utilizados para tratamento das doenças gástricas por seu mecanismo de ação conhecido e eficácia comprovada na inibição da secreção de ácido no lúmen estomacal, contudo o tratamento prolongado e os efeitos causados pelas gastropatias exigem tratamentos específicos e mais abrangentes. O material Vegetal Schinus terebinthifolius Raddi, conhecida como Aroeira, já é utilizada popularmente em feridas cutâneas pelos seus efeitos cicatrizantes e anti-inflamatórios, possui vários estudos comprovando sua eficácia na diminuição das lesões promovidas pelas doenças gástricas. Sabendo-se da existência das formulações Associação em Dose Fixa (ADF), que integram em uma mesma fórmula farmacêutica um insumo farmacêutico sintético e um insumo farmacêutico fitoterápico, o objetivo deste trabalho foi elaborar um forma farmacêutica sólida ADF utilizando doses terapêuticas do pantoprazol e do extrato da Aroeira. Para isto, foi realizada a obtenção do granulado seco de aroeira pela metodologia de secagem por convecção. Assim, os ativos foram misturados a excipientes e transformados em comprimidos, por compressão direta. Os comprimidos obtidos foram submetidos a controle físico-químico e foram realizados testes de doseamento, dissolução e estabilidade acelerada que avaliaram as condições da formulação. Como esperado a dissolução demonstrou liberação do pantoprazol em meio básico e degradação em meio ácido, levando a necessidade de utilização do fármaco em formato de grânulos gastroresistentes. Já os testes de estabilidade realizados nos tempos 0, 3 e 6 meses atestou no curto período a manutenção das características básicas de liberação e teor dos comprimidos que foram mantidos durante o estudo em câmara climática de zona IV. Foi possível, desta forma, estabelecer os parâmetros básicos para o desenvolvimento desta formulação ADF contribuindo para a descoberta de alternativas terapêuticas aos tratamentos convencionais. / Pantoprazole is today one of the most used drugs for the treatment of gastric diseases because its known mechanism of action and proven effectiveness in inhibiting acid secretion in the stomach lumen, but prolonged treatment and the effects caused by gastropathy require specific treatments and more extensive. Schinus terebinthifolius Raddi plant, known as Aroeira, is already commonly used in skin healing by its anti-inflammatory effects, having several studies showing efficacy in reducing gastric lesions promoted by the disease. Knowing the existence of the formulations Association-Dose-Fixed (ADF), which are part of the same pharmaceutical form, a synthetic active ingredient and an active herbal principle, the objective of this study was to develop a solid dosage form ADF using therapeutic doses of pantoprazole and the Aroeira extract. For to obtain the dry granulated were used the method for drying by convection, where the active excipients were mixed and tableted by direct compression. The tablets obtained were subjected to physic-chemical control and tests to determinate their concentrations, their accelerated stability and their dissolution quality who served to evaluate the conditions of the formulation. The obtained values maintained their therapeutic range described in the literature. As expected the dissolution demonstrated release of pantoprazole in basic medium and degradation in acid medium that leads to the need to use the drug in gastroresistant granules format. Since the stability testing at 0, 3 and 6 months attested short period maintaining the basic characteristics of release and content of the tablets that were maintained during the study in climate zone IV camera. It was thus possible to establish the basic parameters for the development of this formulation ADF contributing to the discovery of therapeutic alternatives to conventional treatments.