Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Schistosomalmyeloradiculopathy (SMR) is a severe formofpresentationof schistosomiasis, in whichthe spinal cord isaffectedby species ofSchistosoma. Thisstudy aimed todevelopan animal modelof SRMcaused byS.mansoni, and characterize the sensory and motorchanges causedby the depositionofeggsof S. mansoniin the spinal cordand correlate thesensory aspects, engines and histologicalanimalsinfunction of time.Heldmechanicalsensitivitytests, behavioral and subsequenteuthanasiain two series(infected and control)animalsdividedinto six groups offivemale Wistar ratseachin5, 10, 20 and 30dayspost-infection. The experimental groupswere anaesthetizedwith halothane andinjected witha suspension ofS. mansonieggs in thesubarachnoid space.Control animalsunderwent the sameprocedure, but with phosphate buffersolution administration(PBS). The spinal cordwas removed,subjected tohistologicalanalysis ofT10and L5. It was observedreduction in surfacemechanical sensitivity, thermal sensitivityand muscle strengthcaused by theeggsof S. mansoniin the spinal cord; Changesobservedin nervous tissueof 25% of the animals following infectionof S. mansoni. The modelproved to besuitable forevaluation offunctional changesin ratsand may beuseful forpathogenesisstudiesofMRE. / Mielorradiculopatiaesquistossomótica (MRE) é uma forma grave de apresentação da esquistossomose, em que a medula espinhal é acometida por espécies de Schistosoma. Este estudo teve como objetivo o desenvolvimento de modelo animal de MRE causada pelo S. mansoni, além de caracterizar as alterações sensoriais e motoras ocasionadas pelo depósito de ovos do S. mansoni na medula espinhal e correlacionar os aspectos sensoriais, motores e histológicos nos animais em função do tempo. Realizou-se testes de sensibilidade mecânica, comportamentais e posterior eutanásia em duas séries (infectada e controle) de animais divididas em seis grupos com 5 ratos Wistar machos cada nos 5º, 10º, 20º e 30º dias da pós-infecção. Os grupos experimentais foram anestesiados com halotano e injetou-se uma suspensão de ovos de S. mansoni no espaço subaracnóideo. Os animais controle foram submetidos ao mesmo procedimento, porém com administração de solução tampão-fosfato (PBS). A medula espinhal foi removida, submetida a análise histológica entre T10 e L5. Constatou-se redução na sensibilidade mecânica superficial, da sensibilidade térmica e da força muscular ocasionadas pelos ovos do S. mansoni na medula espinhal; Observou-se alterações no tecido nervoso de 25% dos animais após a infecção de S. mansoni. O modelo desenvolvido mostrou-se satisfatório para avaliação das alterações funcionais em ratos Wistar, podendo ser útil para estudos da etiopatogenia da MRE.

Orientador: Eliana Maria Zanotti-Magalhães / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T06:14:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Allegretti_SilmaraMarques_D.pdf: 7173440 bytes, checksum: a0d4e606aad825810e374339d5ed7dce (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: Este trabalho teve por objetivo verificar a ação da inoculação de hemolinfa total, hemolinfa livre de células e suspensão dc amebócitos no desenvolvimento do /..__. mansoni da linhagem BH em B. g/abrata melânica. Os parâmetros avaliados foram: taxa de infecção, taxa de mortalidade, período pré-patente, reação tecidual em tomo das larvas de S. mansoni, atividade fagocitária dos amebócitos e nÚmero de amebócitos na hemolintà. Para a determinação da taxa de infecção, taxa de mortalidade, período pré-patente, atividade fagocitária e número de amebócitos circulantes os moluscos foram infectados com 10 miracídios do tremalódeo. A reação tecidual foi observada em moluscos expostos a 100 miracídios. Os resultados indicaram que, a inoculação de hemolintà total provocou a facilitação da infecção observando-se diminuição do período pré-patente, aumento da taxa de mortalidade, pequena atividade fagocitária dos amebócitos e discreta reação amebocitária em tomo do esporocisto de ,)_. mansoni. A inoculação de hemolintà livre de células provocou um retardamento do desenvolvimento do parasita com o aumento do período pré-patente, e reação tecidual mais intensa em tomo do esporocisto de S. mansoni. A inoculação de suspensão de amebócitos produziu uma reação mais efetiva contra o parasita com aumento do período pré-patente, diminuição da mortalidade dos moluscos, aumento da atividade fagocitária, aumento das células estreladas na hemolinfa circulante e aumento das reações amebocitárias no tecido em tomo dos csporocistos. A inoculação de suspensão de células produziu maior resistência ao desenvolvimento do S. mansoni. / Abstract: The main purpose of this work was to verify the effects from the inoculation of diftercnt kinds of hemolymph on the development of SdÚS/OSOlIIll IIIlf/l lli in pigmcnted Biomphalaria glahrata. The S. mansoni belongs to the BH strain. The types of hemolymph were: complete hemolymph, cells-fTee hemolymph and amoebocyte suspenslOn. In order to achieve our purpose the following variables vere considered: intection rate, death rate, pre-patent period, tissue reactions arollnd S mansoJli larval, phagocytosis activity and number of amoebocytes in the circlIlation hemolymph R. [;/ahrala snail were infected with 10 miracidia trom the trematodes. The tissue reaction was observed on the snails that were exposed to 100 miracidia. The results have indicated that the inoculation of the complete hemolymph facilitated the infection with decrease on the pre-patent period as well as the increase on the death rate little phagocytosis activity on the amoebocytes and slight reaction around sporocyst of the S. mansoni. The inoculation of cells-tl'ee hemolymph postponed the parasite development with the increase of the pre-patent period and more intense tissue reaction arollnd sporocyst of S. mansoni. The inoculation of the amoebocytes slIspcnsion caused a more ctrcctive reaction against the parasite with the increase the pre-patent period, the decrease snails mortality, the increase phagocytosis activity the increase 01' granulocytes in the circulating hemolymph and the increase of amoebocytes reactions around sporocysts of S mansoni. The inoculation of the amoebocytes suspension produccd greater resistance to the S. mansoni development. / Doutorado / Parasitologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Eliana Maria Zanotti-Magalhaes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-09T03:44:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guerino_LauraRocha_M.pdf: 645841 bytes, checksum: c75feb38c5a946cf3347791584c0e3e8 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Moluscos terrestres de várias espécies têm sido relatados como hospedeiros naturais do Angiostrongylus costaricensis. Experimentalmente, Biomphalaria glabrata pode ser utilizada como hospedeira intermediária deste nematódeo, responsável pela angiostrongilíase abdominal. Os moluscos se infectam pela ingestão ou penetração ativa das larvas L1 de A. costaricensis. O objetivo deste trabalho foi verificar a capacidade de atração exercida por B. glabrata infectada com A. costaricensis sobre miracídios de Schistosoma mansoni da linhagem BH e verificar a suscetibilidade de B. glabrata submetida à infecção concomitante com A. costaricensis e S. mansoni. Para o estudo da atração miraxonal utilizamos B. glabrata infectada com 120 larvas L1 de A. costaricensis e após 20 dias de infecção os moluscos foram utilizados nos experimentos. Nesses experimentos foi utilizado um artefato de vidro composto por duas câmaras unidas por um canal e preenchido com água declorada. Os moluscos ou sua água de condicionamento (SCW) foram colocados aleatoriamente em uma das câmaras e dez miracídios foram colocados no centro do canal e seu comportamento foi observado por 15 minutos. De acordo com os resultados obtidos, pudemos observar que B. glabrata infectada ou não com A. costaricensis ou sua SCW atraíram miracídios de S. mansoni. Verificamos ainda, haver maior atração miraxonal frente à SCW de B. glabrata infectada com A. costaricensis (89%) do que o próprio molusco infectado com A. costaricensis (71%). No estudo da suscetibilidade exemplares de B. glabrata foram expostos a 10 miracídios de S. mansoni BH e a 120 larvas L1 de A. costaricensis. Após 30 dias de infecção os moluscos foram examinados para a verificação de eliminação de cercárias. Após 60 dias de infecção os moluscos sobreviventes tiveram seu corpo digerido por pepsina e ácido clorídrico para a recuperação de larvas L3 de A. costaricensis. A infecção prévia de B. glabrata com A. costaricensis (com intervalo de 48 horas), facilitou a infecção pelo S. mansoni. Foi constatada maior taxa de infecção por S. mansoni (96,7%), maior número de cercárias liberadas (4955 cercárias/molusco) e baixa mortalidade dos moluscos (20%). A exposição prévia de B. glabrata ao A. costaricensis e posteriormente ao S mansoni, também facilitou o desenvolvimento do A. costaricensis, uma vez que na nona semana de infecção foi recuperada maior quantidade de larvas L3 (12 larvas/molusco), se comparado com moluscos expostos somente ao A. costaricensis (8 larvas/molusco). Entretanto a pré-infecção de B. glabrata com S. mansoni (com intervalo de 24 horas) e posteriormente com A. costaricensis mostrou-se muito prejudicial à B. glabrata provocando grande mortalidade dos moluscos (83%). A maior mortalidade dos moluscos provocou menor taxa de infecção pelo S. mansoni (63,3%), menor recuperação de larvas L3 de A. costaricensis (10 larvas/molusco) e menor número de cercárias liberadas (2722 cercárias/molusco) / Abstract: Several species of land mollusks are natural hosts of the Angiostrongylus costaricensis. Experimentally, Biomphalaria glabrata can be used as an intermediate host for this nematode, responsible for the abdominal angiostrongyliasis. The mollusks are infected through the ingestion or activate penetration by the first-stage larvae (L1) of A. costaricensis. The objective of this work was to verify the ability of B. glabrata, infected with A. costaricensis, to attract miracidia of the BH strain of Schistosoma mansoni and to verify the susceptibility of B. glabrata infected concomitantly with A. costaricensis and S. mansoni. For the study of the miraxonal attraction we used B. glabrata infected with 120 first-stage larvae of A. costaricensis and the mollusks were used in the experiments after twenty days of infection. In these experiments we used a glass apparatus consisting of two circular chambers connected by a channel and filled with chlorine free water. Aleatorily, the snails or their conditioning water (SCW) were placed in one chamber and ten miracidia were placed in the center of the channel and their behavior was observed for 15 minutes. According to the results obtained, we could observe that B. glabrata infected or not infected with A. costaricensis and their SCW attracted S. mansoni miracidia. We also verified, a larger miraxonal attraction to the SCW of B. glabrata infected with A. costaricensis (89%) than to the actual mollusk infected with A. costaricensis (71%). In the study of the susceptibility samples of B. glabrata were exposed to 10 miracidia of the BH strain of S. mansoni and to 120 first-stage larvae of A. costaricensis. After thirty days of infection the mollusks were examined for the cercariae elimination. After sixty days of infection the surviving mollusks had their bodies digested by pepsin and hydrochloric acid for the recovery of third-stage larvae of A. costaricensis. The prior infection of B. glabrata with A. costaricensis (with an interval of 48 hours), facilitated the infection with S. mansoni. A larger infection rate to S. mansoni was verified (96.7%), a larger number of liberated cercariae (4955 cercariae/mollusk) and a lower mortality of the mollusks (20%). The prior infection of B. glabrata with A. costaricensis and posteriorly to S. mansoni, also facilitated the development of the A. costaricensis, because in the ninth week of infection a larger amount of third-stage larva was recovered (12 larvae/mollusk), if compared with mollusks exposed only to the A. costaricensis (8 larvae/mollusk). However the prior infection of B. glabrata with S. mansoni (with an interval of 24 hours) and posteriorly with A. costaricensis it was shown to be very harmful to B. Glabrata causing a great mortality of the mollusks (83%). The larger mortality of the mollusks caused a smaller infection rate for the S. mansoni (63.3%), a smaller recovery of thirdstage larvae of A. costaricensis (10 larvae/mollusk) and a smaller number of liberated cercariae (2722 cercariae/mollusk) / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-01-11T12:51:11Z No. of bitstreams: 1 luanacarlasaco.pdf: 2126264 bytes, checksum: 52375e7c0fb34e4e12a8cbcf2262b635 (MD5) / Approved for entry into archive by Diamantino Mayra (mayra.diamantino@ufjf.edu.br) on 2017-01-31T11:19:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 luanacarlasaco.pdf: 2126264 bytes, checksum: 52375e7c0fb34e4e12a8cbcf2262b635 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-31T11:19:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 luanacarlasaco.pdf: 2126264 bytes, checksum: 52375e7c0fb34e4e12a8cbcf2262b635 (MD5) Previous issue date: 2015-07-30 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A esquistossomíase é considerada uma das doenças tropicais negligenciada mais significativa no mundo. Sendo que a presença de apenas um medicamento para o tratamento da infecção leva a busca por novos compostos esquistossomicidas, utilizando os produtos naturais como uma das principais fontes destas novas moléculas. Neste sentido, a lignana Arctiina extraída da espécie Arctium lappa, cujas funções anti-inflamatórias e antiproliferativas já foram descritas na literatura, se tornou alvo do nosso estudo. O nosso propósito foi pesquisar a sua ação esquistossomicida através de testes in vitro e em modelo murino. A substância foi utilizada nas concentrações de 30, 60, 120 e 240 µg/mL nos ensaios in vitro. Após o período de incubação, em nenhuma das concentrações, a molécula foi capaz de promover modificação na viabilidade do parasito em cultura quando comparado ao grupo controle. Após a administração por via intraperitoneal, para verificar a presença da substância no plasma murino, foi realizada uma análise cromatográfica. A análise da amostra de arctiina pura, diluída em metanol, e diluída em plasma murino não tratado mostrou um pico no cromatograma medido a 254 nm, com retenção de 5 minutos. A amostra de plasma animal coletada após uma hora de tratamento com arctiina, sob as mesmas condições experimentais, revelou um pico semelhante ao da amostra pura, confirmando que a arctiina está disponível no plasma após administração. Os testes in vivo, foram realizados em camundongos fêmeas da linhagem Swiis que receberam por via intraperitoneal duas dosagens de arctiina (50 mg/kg), sendo a primeira administrada 20 dias após a infecção e a segunda após duas semanas. Nos parâmetros analisados: peso hepático, leucometria global, redução da carga parasitária e alteração no oograma, não foi verificado nenhuma alteração significativa em relação aos parâmetros encontrados no grupo controle infectado, tratado com praziquantel (200 mg/kg) e Dimetilsulfóxido (0,5%). O resultado mais promissor foi uma redução das médias das áreas dos granulomas, a administração da arctiina provocou uma redução em torno de 20% em comparação com o controle infectado. Mais estudos devem ser realizados a fim de verificar o possível mecanismo de atuação sobre os componentes inflamatórios presentes na formação do granuloma. / Schistosomiasis is one of the most significant neglected tropical diseases in the world. Only one drug is currently available for the treatment and control of schistosomiasis, therefore there is an urgent need for the development of new schistosomicide compounds, being natural products an important source of these molecules. Hence, in this work we studied the lignan arctiin extracted from Arctium lappa species, whose anti-inflammatory and antiproliferative functions have been previously described. Our aim was to investigate in vitro and in vivo its schistosomicidal activity. We tested the compound in vitro at the follow concentrations 30, 60, 120 and 240 ug/ml. There was no difference in all tested concentrations in the viability of the parasite in the culture after the incubation when compared to the control group. In addition we verified the plasmatic concentration of arctiin after intraperitoneal administration in mice by chromatographic analysis. The analysis of pure arctiin diluted in either methanol or mouse plasma showed a peak in the chromatogram at retention time of 5 minutes, absorbance was measured at 254 nm. Animal plasma sample collected one hour after treatment with arctiin was analyzed under same experimental conditions and revealed a similar peak, confirming the availability of arctiin in the plasma following administration. The in vivo tests were performed in Swiss female mice, those were intraperitoneally injected with two dosages of arctiin (50 mg/kg) - the first administered 20 days after infection and the second two weeks later. The follow parameters were analyzed: liver weight, white blood cell count, parasitic load and oogram. We did not find any significant change in those parameters comparing infected control groups treated either with praziquantel (200 mg / kg) or dimethyl sulfoxide (0.5 %) to the group treated with arctiin. The most promising result was the reduction around 20% of the average area of the granuloma in the arctiin group compared with the infected control. More studies are needed to verify possible mechanisms of action of this molecule in inflammatory components that play a role in granuloma formation.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-08-25T20:20:51Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Morgana Elias Arantes - 2016.pdf: 2372439 bytes, checksum: e242dc3a0095f55eea6f6e8fc5fe0748 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-26T11:39:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Morgana Elias Arantes - 2016.pdf: 2372439 bytes, checksum: e242dc3a0095f55eea6f6e8fc5fe0748 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-26T11:39:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Morgana Elias Arantes - 2016.pdf: 2372439 bytes, checksum: e242dc3a0095f55eea6f6e8fc5fe0748 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-03-14 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Schistosomiasis is a neglected tropical disease caused by parasites of the genus Schistosoma. In Brazil only Schistosoma mansoni transmits this disease. The World Health Organization estimated in 2012 approximately 249 million people at risk of acquiring this disease around the world. The main strategy to control this disease is the treatment of individuals living in endemic areas with Praziquantel. The drug praziquantel is used on a large scale in the treatment of schistosomiasis and currently there are reported cases of resistance, indicating the need to discover new drugs. In silico drug repositioning is a strategy that reduces the time and cost in the search of anti-schistosomal agents. This work used bioinformatics tools and methodology based on previous studies, as a means to identify potential new S. mansoni targets and drug homologs, consequently identifying potential new schistosomal drugs. A list was compiled with S. mansoni potential targets that are part of essential processes in the database TDR and the targets that are part of the tegument were obtained in the scientific literature. The file with S. mansoni targets contained 1376 targets, and of these only 61 targets associated with 399 drugs had homology with drug targets. After removal of duplicate drugs, drugs found in previous studies and after the analysis of the conservation of the active site only 28 S. mansoni targets associated with 102 drugs had 60% or more of the active site conserved. Some of the drugs had activity and are interesting to validate this study such as: artemether, lumefantrine, meloxicam. Among the drugs found 18 drugs were selected to be tested using the following criteria: low toxicity in vivo, expired patent and a value of log P interesting for oral administration. / A esquistossomose é uma doença tropical negligenciada causada por parasitos do gênero Schistosoma. No Brasil apenas o Schistosoma mansoni transmite esta doença. A Organização Mundial de Saúde estimou em 2012 cerca de 249 milhões de pessoas em risco de adquirirem esta doença por meio de diferentes espécies e países. A principal estratégia no controle desta doença é o tratamento dos indivíduos que vivem em áreas endêmicas com o fármaco praziquantel. O praziquantel é o fármaco utilizado em ampla escala no tratamento desta doença e atualmente há casos de resistência relatados, sendo necessário a descoberta de novos fármacos. O reposicionamento in silico é uma estratégia que reduz o tempo e o custo na busca de fármacos esquistossomicidas. Neste trabalho, por meio da ferramenta de bioinformática e com base em estudos anteriores, identificou-se potenciais novos alvos homólogos a alvos de fármacos em uso em humanos, identificando com isso, potenciais novos fármacos esquistossomicidas. Compilou-se uma lista com os potenciais alvos do S. mansoni que fazem parte das vias essências da base de dados do TDR e encontrou-se os alvos que fazem parte do tegumento na literatura científica. O arquivo com os alvos do S. mansoni continha 1376 alvos, sendo que destes apenas 61 alvos do S. mansoni possuía homologia com alvos de fármacos associados a 399 fármacos. Após a remoção dos fármacos duplicados, fármacos encontrados em estudos anteriores e após a análise da conservação do sítio ativo restou 28 alvos do S. mansoni associados a 102 fármacos que tinha 60% ou mais do sítio ativo. Encontrou-se alguns fármacos com atividade comprovada e validam o estudo como: artemeter, lumefantrina, meloxicam. Dentre os fármacos encontrados cerca 18 fármacos foram selecionados para serem testados e a sua atividade então comprovada, utilizando os seguintes critérios: baixa toxicidade in vivo, patente expirada e um valor de log P interessante para um fármaco de administração oral.

A esquistossomose é uma das mais relevantes doenças induzidas por helmintos, acometendo cerca de 207 milhões de pessoas em todo o mundo. O Praziquantel e o Oxamniquine são os fármacos empregados no tratamento, mas além de não impedirem re-infecções, não atuam nos estágios imaturos do verme. Portanto, o desenvolvimento de uma estratégia de vacinação eficaz representa um componente essencial para o controle e erradicação desta doença. Neste sentido, tivemos como objetivo estudar a resposta imunológica induzida pela imunização com a vacina DNA-Sm14 em associação com a DNA-Hsp65 utilizando protocolos de imunização prime-boost, sendo eles heterólogo ou homólogo. A utilização das vacinas em prime-boost heterólogo não alterou a produção de IgG2a, mas diminuiu a produção de IFN- e IL-10 dos animais quando comparados aos que receberam apenas DNA-Sm14. Após infecção, a estratégia prime-boost heterólogo não foi eficaz em reduzir a carga parasitária dos animais, enquanto a vacinação com DNA-Sm14 reduziu parcialmente o número de vermes. Na vacinação prime-boost homóloga utilizando as duas vacinas, observamos que a modificação da estratégia também não alterou a produção de IgG2a, mas reduziu a produção de IFN- pelas células recuperadas do espaço bronco-alveolar, quando comparada com os animais que receberam DNA-Sm14. Após infecção, a imunização com DNA-Sm14/DNA-Hsp65 não alterou a carga parasitária dos animais, mas sistemicamente reduziu o número de eosinófilos. Quando avaliado o perfil de células de memória dos animais vacinados, verificamos aumento do número de células T CD8+ e menor número de células T CD4+ no baço dos animais imunizados com as duas vacinas simultaneamente. Em suma, a utilização das vacinas DNA-Sm14 e DNA-Hsp65 nas estratégias prime-boost heterólogo ou homólogo não foi capaz de gerar proteção contra infecção experimental por S. mansoni, e sugerimos que em parte, a diminuição de IFN-, IL-10, aumento da razão IgG1/IgG2a e a estimulação de células T CD8+ ao invés de CD4+, podem ter contribuído para baixa eficácia dos protocolos vacinais testados. / Schistosomiasis is one of the most important diseases due to helminthes, affecting approximately 207 million people worldwide. The treatment is based on Praziquantel and Oxamniquine drugs, however these drugs do not avoid reinfections and are inefficient against worm immature stages. Therefore, the development of an efficient vaccination strategy is an essential component in the control of this disease. The aim of this work was to study the immune response induced by immunization with DNA-Sm14 vaccine in combination with DNA-Hsp65 using prime-boost protocols, which were heterologous or homologous. The heterologous prime-boost vaccination did not modify IgG2a production, but decreased IFN- and IL-10 production compared to animals that received only DNA-Sm14. After infection, this prime-boost strategy was not effective in reducing the worm burden of animals, while vaccination with DNA-Sm14 induced partial reduction. Using both vaccines in the homologous prime-boost model, we found that the modification of the strategy did not alter IgG2a production, although reduced IFN- production by cells recovered from the broncho-alveolar space compared to DNA-Sm14 immunized mice. After infection, immunization with DNA-Sm14/DNA-Hsp65 didnt modify the animals parasitic burden, however systemically, reduced eosinophils number. When the profile of memory cells in vaccinated animals was evaluated, we verified increased numbers of CD8+ T cells and lower numbers of CD4+ T cells in the spleen of animals immunized with both vaccines simultaneously. In conclusion, the vaccines DNA-Sm14 and DNA-Hsp65 in both strategies, prime-boost heterologous or homologous, were not able to generate protection against experimental infection with S. mansoni, and we propose that, partly, the decrease of IFN-, IL-10 levels, increase of IgG1/IgG2a ratio and the stimulation of CD8+ T cells rather than CD4+, may have contributed to the low efficacy of the vaccination protocols tested.

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-05-12T15:33:22Z No. of bitstreams: 1 thaisvieirasoares.pdf: 151024 bytes, checksum: dfb7ee8f9e6e385cff4e13ff23904a99 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-12T15:42:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 thaisvieirasoares.pdf: 151024 bytes, checksum: dfb7ee8f9e6e385cff4e13ff23904a99 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-12T15:42:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 thaisvieirasoares.pdf: 151024 bytes, checksum: dfb7ee8f9e6e385cff4e13ff23904a99 (MD5) Previous issue date: 2012-07-18 / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Um polipeptídio originado do domínio B conservado da apirase de batata (r78-117), homólogo ao domínio B da isoforma ATPDase 2 de Schistosoma mansoni (r156-195), foi obtido como um polipeptídio com cauda de hexahistidina (r-potDomínio B). Anticorpos policlonais anti-r-potDomínio B, quando imobilizados em Proteína A-Sepharose, imunoprecipitaram 67-91% das atividades ATPásica e ADPásica de preparação de vermes adultos. Por “Western blots”, o soro imune reconheceu bandas de 63 e 55 kDa na preparação do parasito e no complexo imunoprecipitado, confirmando a identidade da isoforma ATPDase 2. Adicionalmente, anticorpos policlonais anti-r-potDomínio B inibiram 38-58% das atividades ATPásica e ADPásica, sugerindo que o domínio B da ATPDase 2 de S.mansoni é um novo alvo para o desenho de inibidores. Amostras de soros de pacientes com esquistossomose foram testados em ELISA usando r-potDomínio B como antígeno. A soropositividade da subclasse IgG1 (27%, 8/30), IgG2 (27%, 8/30), IgG3 (50%, 15/30) ou IgG4 (17%, 5/30) sugeriu que o domínio B da ATPDase 2 está potencialmente envolvido na resposta imune do hospedeiro. A apirase de batata ou r-potDomínio B, emulsificado em adjuvantes Completo e Incompleto de Freund, foi inoculado em camundongos Suíços, aumentando a produção de anticorpos IgG, os quais foram também reativos com antígenos solúveis de ovos (SEA). Imunidade protetora induzida por cada biomolécula foi avaliada 60 dias após o desafio com cercárias. Nenhuma redução de vermes ou do número de ovos foi observada. Camundongos imunizados com apirase de batata desenvolveram altos níveis de anticorpos IgG1 reativos com as biomoléculas e SEA, enquanto anticorpos IgG2a foram produzidos em menor proporção, sugerindo uma tendência de resposta imune do tipo Th2. O r-potDomínio B foi capaz de induzir maior produção de anticorpos IgG2a reativos com as biomoléculas e SEA, uma resposta imune possivelmente associada ao tipo Th1. Análises histológicas de cortes de fígado corados por hematoxilina-eosina, obtidos de camundongos imunizados com apirase de batata, mas não com r-potDomínio B, mostraram uma redução significativa na área do granuloma, como evidenciado pela redução do número de células e substituição por fibras de colágeno. Estudos futuros destas biomoléculas poderão contribuir para um melhor entendimento da interação parasito e hospedeiro, e poderão ser exploradas como novas ferramentas de estudo da esquistossomose. / A polypeptide belonging to the conserved domain B (r78-117) from the potato apyrase, homologue to the domain B (r156-195) from the S. mansoni ATPDase 2 isoform, was obtained as a 6xHis tag polypeptide (r-potDomain B). Polyclonal anti-r-potDomain B antibodies, when immobilized on Protein A-Sepharose, immunoprecipitated 67-91% of the ATPase and ADPase activities from the adult worm preparation. By Western blots, the immune serum recognized band of 63 and 55 kDa in both parasite preparation and immunoprecipitated complex, confirming the ATPDase 2 identity. Additionally, polyclonal anti-r-potDomain B antibodies inhibited 38-58% of the ATPase and ADPase activities, suggesting that the domain B from the S.mansoni ATPDase 2 is a new target for inhibitor design. Serum samples from patients with schistosomiasis were tested in ELISA using r-potDomain B as coating antigen. The seropositivity of the subclass IgG1 (27%, 8/30), IgG2 (27%, 8/30), IgG3 (50%, 15/30) or IgG4 (17%, 5/30) suggested that the domain B from the ATPDase 2 is potentially involved in the host immune response. The potato apyrase or r-potDomain B, emulsified in Freund Complete and Incomplete adjuvants, was inoculated in Swiss mice, increasing the IgG antibodies production, which were also reactive with soluble egg antigens (SEA). Protective immunity induced by each biomolecule was evaluated 60 days after challenge infection. No worm burden or egg number reduction was observed. Mice immunized with potato apyrase developed high IgG1 antibody levels, reactive with either biomolecules or SEA, while IgG2a antibody levels were produced in lower proportion, suggesting a tendency of a Th2 type immune response. The r-potDomain B was able to induce higher IgG2a antibody production, an immune response possibly associated to the Th1 type. Histological analyses of haematoxylin-eosin-sections obtained from mice immunized with potato apyrase, but not with r-potDomain B, showed a significant reduction in liver granuloma area as evidenced by the cells number reduction and substitution by collagen fibbers. Further studies of these biomolecules could contribute to a better understanding of host-parasite interactions, and may to be explored as new tools in schistosomiasis research.

Orientador: Rodrigo Ramos Catharino / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T23:10:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_MonicaSiqueira_D.pdf: 2752694 bytes, checksum: 8012f1d5668a55e8fba463c5f394c113 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Com a grande incidência de resistência ao único fármaco utilizado no tratamento de esquistossomose, Praziquantel (PZQ), e relatos de diferentes níveis de virulência do parasita, o controle da doença tem se tornado cada vez mais difícil. Além disso, o método de diagnóstico convencional demanda tempo e grande preparo amostral. Num cenário clínico, quanto mais rápido o diagnóstico, maiores as chances de sucesso no tratamento da doença. Tendo em vista esse escopo, apresentamos uma nova plataforma "ômica" - a Parasitômica, que propõe o uso de metodologias simplificadas e de grande eficácia em termos de preparo de amostra e facilidade na aquisição de dados voltados a área de parasitologia, englobando diagnóstico, tratamento e elucidação de vias e mecanismos de ação. Amostras de diferentes cepas de Schistosoma mansoni, bem como diferentes estágios e tratamento com PZQ, foram analisadas através da técnica de espectrometria de massas por imagem (MALDI-MSI) e por alta resolução (ESI-HR-FTMS), pela integração de dados tanto analíticos quanto estatísticos. É possível a caracterização e diferenciação química de cada sexo e cepa do S. mansoni, bem como a visualização das alterações na composição molecular de vermes submetidos ao tratamento com PZQ. Tais resultados poderão ser úteis como potenciais alvos de novos fármacos. Nossos resultados também demonstram uma possível forma de futuro diagnóstico da esquistossomose pela análise da urina utilizando a parasitômica / Abstract: With the large incidence of resistance to the only drug used to schistosomiasis treatment, Praziquantel (PZQ), and reports of different levels of parasite virulence, disease control has become increasingly difficult. Furthermore, the conventional diagnosis method is time consuming and requires extensive sample preparation. In a clinical setting, the sooner the diagnosis is, the greater are the chances of successful disease treatment. Within this scope, we present a new "omic" platform ¿ Parasitomics, which proposes the use of simple and effective methods in terms of sample preparation and readiness of data acquisition focused on parasitology, including diagnosis, treatment and elucidation of pathways and mechanisms of action. Samples with different strains of Schistosoma mansoni, as well as different stages of life cycle and treatment with PZQ, were analyzed by mass spectrometry imaging (MALDI-MSI) and by high-resolution technology (ESI-HR-FTMS), through the integration of analytical and statistical data. Results have enabled the characterization and chemical differentiation of each sex and strain of S. mansoni, as well as the visualization of molecular composition changes in worms¿ body submitted to PZQ treatment. These results could be helpful on unraveling potential targets for new drugs. Our results also demonstrated a possible form of future schistosomiasis diagnosis by urine analysis using the parasitomics platform / Doutorado / Fisiopatologia Médica / Doutora em Ciências

Orientador: Eliana Maria Zanotti Magalhães / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-25T23:25:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Simoes_LucianaFranceschi_D.pdf: 13158668 bytes, checksum: 8fb7b4a656ae812560a18a5466806eea (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A busca de novos tratamentos para a esquistossomose é relevante devido a constatação de linhagens do Schistosoma mansoni com perda de sensibilidade aos fármacos atuais. A interferência por RNA (RNAi) é uma técnica que pode ser usada no silenciamento de um gene especifico, através de um RNA dupla fita (dsRNA). Essa ferramenta se mostra eficaz em aplicações terapêuticas em vírus, príons e patógenos intracelulares. Estudos mostram que a técnica do RNAi é bastante eficiente no verme Caenorhabditis elegans. Até o momento poucos trabalhos analisaram a técnica de RNAi no combate a esquistossomose. Este trabalho teve como objetivo aplicar a técnica da interferência por RNA em S. mansoni e avaliar sua eficiência em testes in vitro e in vivo, tendo como alvo o gene fucosiltransferase, enzima envolvida no processo de fucosilação de lipídios e proteínas essenciais ao parasita e o gene glicosilfosfatidilinositol, que atua como ancora de superfície, na qual se ligam antígenos protéicos e glicoprotéicos. A supressão gênica foi estudada em testes in vitro e in vivo, com observações da atuação na biologia, morfologia e mortalidade dos vermes. Como resultados nos testes in vitro, obtiveram-se alterações tegumentares nos adultos, extravasamento do conteúdo interno de fêmeas e alterações na oviposição, apresentando os grupos tratados maior quantidade de ovos mortos e malformados quando comparados com os grupos controles. Nos experimentos in vivo verificou-se diminuição no numero de vermes recuperados, mortalidade de vermes em alguns grupos tratados, e alteração na oviposição, quando examinados pelas técnicas de Kato e oograma. Análise histológica do fígado mostrou diferenças no número, na área e na conformação dos granulomas dos grupos tratados quando comparados com os grupos controles. A mortalidade de ovos eliminados nas fezes de camundongos após dois dias de tratamento também se mostrou significativamente maior nos grupos tratados com moléculas para silenciamento. Esses resultados sugerem o potencial uso da técnica de RNAi no estudo da esquistossomose / Abstract: The search for new schistosomiasis treatments is relevant due to the observation of resistant Schistosoma mansoni strains for current drugs. The interference by RNA (RNAi) is a technique which can be used for silencing a specific gene using a double strain RNA (dsRNA). This methodology presents efficacy in therapeutic use in virus, prions, and intracellular pathogens. Studies demonstrate that RNAi technique is very efficient in Caenorhabditis elegans worm. Up to the moment, a few studies have analyzed the RNAi technique against schistosomiasis. Thus, the aims of this study were apply the interference by RNA in S. mansoni and evaluate its efficiency in in vitro and in vivo tests, having the fucosyltransferase gene, an enzyme involved in parasite essential lipids and proteins fucosilation process, and the glicosylfosfatidilinositol gene, which acts as anchor-surface where proteic and glicoproteic antigens are bonded, as targets. The genic suppression was studied in in vitro and in vivo tests, with observation of its action in the biology, morphology, and mortality of the worms. The results for in vitro testswere integumentary alteration in adults, internal content extravasation in females, and oviposition alteration, with higher amount of dead eggs and not well formed eggs in the treated groups in comparison with the control groups. The in vivo tests presented a decrease in the number of recovered worms, worm mortality in some groups, and oviposition alteration when analyzed under the Kato and oogram techniques. Histological analysis of the liver presented differences in the number, area, and conformation of the granulomas of the treated groups in comparison with the control groups. The mortality of the eggs eliminated on the mice feces after two days of treatment were also significantly higher in the groups treated with the silencing molecules. These results suggest the potential use of the RNAi technique in the schistosomiasis treatment / Doutorado / Relações Antrópicas, Meio Ambiente e Parasitologia / Doutora em Biologia Animal

Orientador: Vera Lucia Garcia Rehder / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T17:07:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_PauloEuzebioRubbodos_M.pdf: 8287880 bytes, checksum: 81821aafe849e03ea5711f1686603c72 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The abstract is available with the full electronic document / Mestrado / Fármacos, Medicamentos e Insumos para Saúde / Mestre em Biociências e Tecnologia de Produtos Bioativos