Apesar de uma diversidade de estudos científicos, em que dezenas de milhares de pacientes foram analisados e tratados, a sepse continua sendo um grande desafio para a medicina contemporânea. Investigações bem conduzidas levaram a uma reavaliação do modelo clássico da sepse, tradicionalmente vista como um processo descontrolado de hiperinflamação sistêmica, uma vez que se observou a existência de uma atividade antiinflamatória ao longo do seu curso evolutivo. Nesse contexto, o comportamento do sistema imune inato se assemelha ao de indivíduos idosos submetidos ao fenômeno da imunossenescência, interseção ainda mais relevante ao considerarmos o crescente incremento na faixa etária média dos pacientes internados em UTI. O presente estudo visou a estabelecer a epidemiologia da sepse em um hospital público de um país de renda media, como é o caso do Brasil. Ademais, através de citometria de fluxo, buscamos definir a cinética da expressão monocitária de moléculas HLA-DR e CD64 ao longo do processo de envelhecimento humano. Comparamos essas observações com o comprometimento do sistema imune inato visto na sepse visando discriminar as alterações da senescência do sistema imune associada ao envelhecimento daquelas associadas ao fenômeno da imunoparalisia da sepse. Na investigação epidemiológica, nós encontramos uma taxa de ocorrência de 5,9 casos de sepse por 100 pacientes e uma densidade de incidência de 6,4 casos por 1000 pacientes-dia. Documentamos ainda sua associação com uma elevada incidência de sepse e documentamos sua associação com uma elevada taxa de comordidades crônicas. A sepse foi diagnosticada tardiamente (72% dos casos após 12 horas de evolução) e em estágio avançado como atestado pelos elevados escores de gravidade de doença e de disfunção orgânica. O presente estudo identificou vários obstáculos à efetiva implementação das recomendações da Surviving Sepsis Campaign. No segundo estudo, observamos correlações negativas significativas entre idade e intensidade de expressão dos biomarcadores avaliados. Durante a sepse, a expressão de mHLA-DR foi ainda mais reduzida, enquanto a expressão de CD64 foi majorada. Para melhor discriminar imunossenescência de imunoparalisia, valores de cutoff de 9.700 m/c para mCD64 e de 7.000 m/c para mHLA-DR forneceram as melhores combinações de sensibilidade e especificidade. / Despite a multiplicity of trials enrolling several thousands of treated patients, sepsis still represents a major challenge to contemporary medicine. Since several well-conducted investigations have consistently indicated the existence of an anti-inflammatory activity during sepsis evolution, there has been a reappraisal of the classic sepsis model in which the condition was traditionally seen as an uncontrolled systemic hyper-inflammatory process. During sepsis, the innate immune system behavior has some similarities to the immunosenescence process experienced by elderly people; something that is even more relevant when considering the progressive increase of the mean age of the patients admitted to ICUs along the last decades. This study investigated the epidemiology of sepsis in a public university hospital from a middle-income country, as is the case of Brazil. Also, applying a flow cytometry methodology, we tried to establish the kinetics of the molecular expression of HLA-DR and CD64 on monocytes during human aging. To put it in context, we compared such findings with those obtained from septic patients aiming at the discrimination between changes related to the normal aging process from those of the immunoparalysis phenomenon seen in sepsis. In the epidemiological arm of this study, we found an occurrence rate of 5.9 cases of sepsis per 100 patients, and an incidence density of 6.4 cases per 1000 patient-days. We documented the association of sepsis with an elevated rate of chronic comorbid conditions. Sepsis was detected late (72% evolving for more than 12 hours) and in advanced stages as indicated by severity and organ failure scores. The study detected several obstacles to the effective implementation of the Surviving Sepsis Campaign recommendations. In the second study, we observed significant negative correlations between age and the levels of HLA-DR and of CD64 expression on monocytes. During sepsis, HLA-DR expression decreased further while CD64 expression was upregulated. To better discriminate immunosenescence from immunoparalysis, cutoff values of 9,700 m/c for mCD64 and of 7,000 m/c for HLA-DR provided the best combination of sensitivity and specificity.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-06-13T20:29:52Z No. of bitstreams: 1 AndreLuizSilvaDavim_TESE.pdf: 2927049 bytes, checksum: c70bf3fe6cd0580d21ea07690845a8e8 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-06-19T14:43:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AndreLuizSilvaDavim_TESE.pdf: 2927049 bytes, checksum: c70bf3fe6cd0580d21ea07690845a8e8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-19T14:43:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AndreLuizSilvaDavim_TESE.pdf: 2927049 bytes, checksum: c70bf3fe6cd0580d21ea07690845a8e8 (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / Atualmente os custos no tratamento de pacientes com doen?as inflamat?rias que progridem de forma sist?mica, com destaque para a sepse, s?o muito elevados e representa a maior causa de morte em unidades de terapia intensiva, n?o cardiol?gica, em todo o mundo. No Brasil, a incid?ncia de pacientes com sepse ? cada vez mais frequente. Apesar dos avan?os farmacol?gicos, tecnol?gicos e cir?rgicos, a mortalidade por sepse e/ou doen?as associadas continua alta em todo o mundo, e por isso se busca alternativas terap?uticas de f?cil acesso e baixo custo para conter o avan?o dessa doen?a. Os produtos naturais v?m desempenhando importante papel na ind?stria farmac?utica, pois algumas dessas subst?ncias agem de forma ben?fica sobre o sistema imunol?gico humano. Nos ?ltimos tempos, h? uma crescente investiga??o das poss?veis propriedades biol?gicas e terap?uticas atribu?das ao ?leo de r?-touro, pois esse ?leo vem sendo utilizado de forma indiscriminada pela popula??o no tratamento de diversas doen?as como bronquite, asma, l?quem escleroso, furunculose, cisto seb?ceo e para cicatriza??o de pele e mucosas. Por?m as poss?veis consequ?ncias no consumo excessivo desse ?leo s?o, o aumento da produ??o de eicosanoides derivados do ?cido araquid?nico proinflamat?rio e a defici?ncia na regula??o hep?tica, predispondo ? esteatose podendo progredir para inflama??o hep?tica e fibrose. Muitas hip?teses se baseiam na atua??o dos compostos presentes no ?leo de r?-touro na modula??o da resposta inflamat?ria, impedindo assim a instala??o de inj?rias teciduais. Dessa forma, a microemuls?o apresenta-se como uma poss?vel alternativa para um novo sistema de libera??o de f?rmacos, com o intuito de diminuir a incid?ncia de hepatoxicidade e protegendo o organismo contra instala??o de les?es teciduais em fun??o do quadro s?ptico. Assim, o presente estudo teve como objetivo avaliar o potencial anti-inflamat?rio do ?leo de r?-touro puro e em um sistema microemulsionado em modelo experimental. Neste estudo, foi preparado e caracterizado um sistema microemulsionado (WIV) e, aplicado em ensaios biol?gicos a fim de avaliar o potencial antiinflamat?rio do ?leo puro e em microemuls?o. Foram utilizados o modelo de sepse, induzida pela t?cnica da CLP (cecal ligant puncture), e a les?o muscular induzida pela formalina. Os ensaios foram realizados em modelos murinos, onde os animais foram separados aleatoriamente em grupos e tratados com o ?leo de r?-touro puro e em microemuls?o, atrav?s da t?cnica de gavage para posterior avalia??o do potencial hepatot?xico e anti-inflamat?rio. Para a an?lise do potencial antiinflamat?rio em modelo de sepse, foram realizadas lavagens bronco alveolares com posterior contagem de c?lulas inflamat?rias e an?lises histopatol?gicas do tecido pulmonar. Para a an?lise no modelo de les?o muscular, foi avaliado extens?o horizontal da pata dos animais, bem como feita a an?lise histopatol?gica do tecido muscular. Para a an?lise do potencial hepatot?xico das subst?ncias, foram avaliados a taxa de sobrevida dos animais p?s-sepse e as an?lises histopatol?gicas dos tecidos hep?ticos dos animais. Quando avaliado a toxicidade do ?leo de r?-touro puro e em sistema microemulsionado, foi observado que no grupo em que foi administrado a microemuls?o (ME), o f?gado teve a arquitetura preservada, mas com sinais cl?nicos de esteatose hep?tica, diferentemente do grupo ?leo de r?-touro puro (OR), que apresentou m?ltiplos focos de necrose hepatoc?tica acompanhado de infiltrado de polimorfonucleares. Esses achados evidenciam um quadro de esteatohepatite, ou seja, um est?gio mais avan?ado e um precursor do carcinoma hep?tico. Quando avaliada a sobrevida dos animais, foi observado que no grupo ME a taxa foi significativamente maior quando comparado ao grupo OR. Quando avaliado o potencial antiinflamat?rio da ME e OR em modelo de sepse, foi observado em ambos os grupos potencial de modula??o da resposta inflamat?ria, visto a capacidade de reduzir de forma significativa (P?0.01) a migra??o de leuc?citos para os pulm?es ap?s a indu??o da sepse. Quando analisado a histologia dos tecidos pulmonares dos animais dos dois grupos, foi verificado intenso desgaste nos animais do grupo OR quando comparados com o grupo ME, onde evidenciou-se pouco comprometimento tecidual. No ensaio de les?o muscular, foi observado que o grupo ME e OR apresentaram bom potencial antiedematog?nico at? a segunda hora da indu??o da les?o, quando comparados ao grupo controle (P?0.01), mas n?o sendo observado diferen?as significativas entre os dois grupos at? a vig?sima quarta hora p?s-les?o. Nas an?lises histol?gicas foram observadas maior desgaste no tecido muscular do grupo OR, com intensa presen?a de infiltrado celular (edema) e comprometimento de fibras musculares, n?o sendo observado a mesma intensidade de inj?ria no grupo ME. Assim, conclui-se que o ?leo de r?-touro puro e em sistema microemulsionado apresentam bom potencial anti-inflamat?rio nos modelos avaliados, embora o ?leo puro tenha apresentado alto potencial hepatot?xico, caracterizando que este em um sistema microemulsionado, se mostra com um poss?vel novo sistema de libera??o de f?rmacos (NSLF). / Current costs of treating patients with systemically progressing inflammatory diseases, especially sepsis, are the leading cause of death in non-cardiological intensive care units worldwide. In Brazil, the incidence of sepsis in patients is becoming more frequent. Despite pharmacological, technological and surgical advances, mortality due to sepsis and/or associated diseases remains high worldwide, hence the search for easily accessible and inexpensive therapeutic alternatives to contain the progression of this disease. Natural products have played an important role in the pharmaceutical industry because some of these substances act in a beneficial way on the human immune system. In recent times, there is a growing investigation of the possible biological and therapeutic properties attributed to bullfrog oil, since this oil has been used indiscriminately by the population in the treatment of various diseases, such as bronchitis, asthma, lichen sclerosus, furunculosis, sebaceous cyst, and for healing of skin and mucous membranes. However, the possible consequences of excessive consumption of this oil are increased production of eicosanoids derived from proinflammatory arachidonic acid and deficiency in hepatic regulation, predisposing to steatosis, which may progress to hepatic inflammation and fibrosis. Many hypotheses are based on the performance of the compounds present in bullfrog oil in the modulation of the inflammatory response, thus preventing the onset of tissue injuries. The microemulsion is presented as a possible alternative to a new drug delivery system, in order to reduce the incidence of hepatotoxicity and protect the organism against the installation of tissue lesions as a function of the septic condition. The present study is aimed to evaluate the anti-inflammatory potential of pure bullfrog oil and a microemulsion system in an experimental model. In this study, a microemulsified system (WIV) was determined and characterized, and applied in biological tests to evaluate the anti-inflammatory potential of pure oil and microemulsion. We used the sepsis model, induced by cecal ligant puncture (CLP) technique, and the formalin-induced muscle injury. The tests were performed in murine models, where the animals were randomly separated into groups and treated with pure bullfrog oil and microemulsion, using the gavage technique for further evaluation of the hepatotoxic and anti-inflammatory potential. For the analysis of the anti-inflammatory potential in a sepsis model, bronchoalveolar lavage was performed with subsequent inflammatory cell counts and histopathological analyzes of lung tissue. For the analysis in the muscle injury model, the horizontal extension of the limbs of the animals was evaluated, as well as the histopathological analysis of the muscle tissue. For the analysis of the hepatotoxic potential of the substances, the post-sepsis survival rate and the histopathological analyzes of the hepatic tissues of the animals were evaluated. When evaluating the toxicity of pure bullfrog oil and in a microemulsion system, it was observed that in the group that received the microemulsion (ME), the liver had the architecture preserved, but with clinical signs of hepatic steatosis, unlike the pure bullfrog oil group, which presented multiple outbreaks of hepatocytic necrosis accompanied by polymorphonuclear infiltrates. These findings indicate a picture of steatohepatitis, that is, a more advanced stage and a precursor of hepatic carcinoma. When evaluating the survival of the animals, it was observed that the ME group survival rate was significantly higher when compared to the oil group. When evaluating the anti-inflammatory potential of the ME and the oil group in a sepsis model, the potential for modulation of the inflammatory response was observed in both groups, since the leukocyte migration to the lungs was significantly reduced (P<0.01) after the induction of sepsis. When analyzing the histology of the lung tissues of the animals of both groups, intense wear was observed in the animals of the oil group, when compared with the ME group, where there was little tissue compromise. In the muscle injury test, it was observed that the ME and oil group had good anti-nematode potential until the second hour of injury induction, when compared to the control group (P<0.01), but no significant differences were observed between the two groups until twenty-fourth hour post-injury. In the histological analyzes, greater wear was observed in the oil group muscle tissue, with an intense presence of cellular infiltrate (edema) and muscle fibers involvement, and the same intensity of injury was not observed in the ME group. Thus, it is concluded that pure bullfrog oil and microemulsion system present good anti-inflammatory potential in the evaluated models, although the pure oil showed high hepatotoxic potential, characterizing that in a microemulsified system, it is shown with a possible new drug delivery system (NSLF).

A tese encontra-se em formato de artigos conforme norma do Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica da Universidade Federal de Uberlândia. Esta tese é composta por 4 capítulos, sendo o primeiro capítulo a revisão bibliografica a qual foi escrita em português de acordo com as normas da ABNT e os demais capítulos refere-se a artigos científicos os quais estão em inglês e obdecem as normas das revistas científicas as quais serão submetidos. / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A sepse é uma síndrome clínica grave responsável por grande parte dos óbitos nas Unidades de Terapia Intensiva. Há uma diversidade de causas primárias que podem evoluir para um quadro clínico de sepse o que dificulta o diagnóstico precoce e a descoberta de drogas eficientes para tratamento. Os altos custos dos tratamentos e as taxas de letalidade mundial demonstram a necessidade de uma melhor compreensão desta síndrome. Este estudo buscou avaliar a expressão gênica dos Receptores de Peptídeos Formilados (FPR) em leucócitos totais, análise de marcadores sistêmicos e o perfil proteínas globais dos monócitos para averiguar as alterações presentes no organismo do indivíduo com a síndrome da sepse. Foi realizado a caracterização das alterações sistêmicas responsáveis pelo óbito de pacientes com sepse através da quantificação simultânea de 27 biomarcadores; verificou-se o silenciamento da expressão gênica do FPR1 e o FPR2 em pacientes com sepse e choque, relatando as possíveis disfunções imunológicas provocadas pela ausência desses FPRs; e a análise proteômica dos monócitos de pacientes com choque séptico permitiu averiguar a contribuição dessa célula no colapso desta síndrome, sua influência na lesão vascular, endotoxemia, inflamação e trombose. Esta investigação identificou pela primeira vez alvos biológicos relevantes os quais podem desempenhar papeis importantes no diagnóstico, prognóstico e terapêutica. / Sepsis is a serious clinical syndrome responsible for most of the deaths in the Intensive Care Units. There are a number of primary causes that may develop for a clinical picture of sepsis, making it difficult to diagnose early and find effective treatment medications. The high costs of treatments and global lethality rates demonstrate the need for a better understanding of this syndrome. This study aimed to evaluate the gene expression of Formulated Peptide Receptors (FPR) in total leukocytes, analysis of systemic markers and the profile of monocyte global proteins to ascertain the changes present in the body of the individual with sepsis syndrome. The characterization of the systemic changes responsible for the death of patients with sepsis was carried out through the simultaneous quantification of 27 biomarkers. The silencing of the gene expression of FPR1 and FPR2 in patients with sepsis and septic shock, reporting as possible immunological dysfunctions caused by the absence of these FPRs. The proteomic analysis of the monocytes of patients with septic shock allowed us to investigate the contribution of this cell in the collapse of this syndrome, its influence on vascular injury, endotoxemia, inflammation and thrombosis. This research identified for the first time, what is more important for the diagnosis, prognosis and therapeutics. / Tese (Doutorado)

Introduction: Thrombotic events are among the most serious complications of sepsis and also the most frequent causes of morbidity and mortality in patients with sepsis. Currently, the administration of low molecular weight heparins (LMWH) is recommended in patients with severe sepsis for prophylaxis of these complications. However, this prophylaxis often fails. Objectives of the study: One of the objectives of our study was to examine changes in haemostasis in relation to the inflammatory response during 15 days of severe sepsis. The next objective was to determine whether a prophylactic inhibition of F Xa in the range from 0.2 to 0.4 IU/mL is achieved in these patients, if they receive the recommended prophylaxis with LMWH. We also recorded the dynamics of changes in the F Xa inhibition during the entire study period. Moreover, we tried to identify the factors that may affect the antithrombotic efficacy of the subcutaneously administered enoxaparin. Patient population and methods: A total of 35 ICU patients meeting the criteria of severe sepsis were enrolled in the study. Only 16 of these patients could be followed throughout the entire 15-day period. Patients were treated according to the current guidelines, including LMWH prophylaxis; enoxaparin (40 mg sc per day) was used in this study....

Introdução: Uma em cada 25 crianças com câncer vai morrer devido a complicações da terapia: trata-se de uma em cada seis mortes. Das complicações do tratamento, uma importante causa de morte continua sendo a infecção. Esta frequentemente apresenta-se como febre com neutropenia, mais conhecido como “neutropenia febril”. O reconhecimento precoce de processos infecciosos em pacientes neutropênicos é dificultado pelo fato destes poderem ter apresentações clínicas variadas e não específicas, aguardando-se o início da febre para se começar um tratamento com antibióticos. O CD64 é um marcador de superfície de neutrófilos, detectável por exame de citometria de fluxo e que é pouco expressado em neutrófilos não sensibilizados. Quando o neutrófilo é exposto a TNF- alfa e outros mediadores inflamatórios, este marcador passa a ser ativado e é mensurado através da expressão do Índice de CD64. Justificativa: O diagnóstico precoce de sepse com hemocultura positiva em crianças neutropênicas febris é de suma importância. Os testes laboratoriais disponíveis nos ajudam pouco no momento da chegada deste paciente ao hospital. O diagnóstico mais precoce de uma infecção bacteriana nestes pacientes possibilita um melhor manejo da antibióticoterapia e, consequentemente, uma melhora na sobrevida. Objetivos: O objetivo deste trabalho foi de avaliar a existência de relação entre o valor do índice de CD64 no primeiro dia de neutropenia febril com a positividade da hemocultura. A correlação com outros parâmetros, como número de leucócitos, PCR e VSG também foi avaliada. Metodologia: Este foi um estudo do tipo casos e controles, prospectivo, diagnóstico, com 64 episódios de neutropenia, sendo o grupo de casos definido como aquele com hemoculturas positivas e o controle com hemoculturas negativas. O grupo de casos contou com 14 episódios e o grupo de controle com 50. Por se tratar de uma variável não-paramétrica, utilizamos o teste de Mann-Whitney para relacionar o índice de CD64 com os resultados da hemocultura em cada grupo e com as demais variáveis. Para avaliar a capacidade de prever o resultado de uma hemocultura com o índice de CD64 e também avaliarmos suas medidas de eficácia, utilizamos curva ROC (Receiver Operating Characteristic) Resultados: O grupo de casos contou com 14 pacientes. A mediana do índice de CD64 no grupo de casos foi de 2,1 (±3,9) e para o grupo controles foi de 1,76(±5,02). Os testes de Mann-Whitney não foram capazes de evidenciar relação entre o valor do índice de CD64 e a positividade das hemoculturas. O índice de CD64 também não se mostrou correlacionado com a positividade do PCR. A curva ROC não evidenciou que o Índice de CD64 foi capaz de prever a positividade de uma hemocultura. Com relação às medidas de eficácia, tivemos: Sensibilidade de 64,3%, especificidade de 42% com valor preditivo positivo de 23,7% e valor preditivo negativo de 80%. O valor linear do PCR não apresentou diferença estatísticamente significativa entre os grupos das hemoculturas. Para o PCR as medidas de eficácia do exame foram: Sensibilidade de 71,4%, especificidade de 32% com valor preditivo positivo de 22,7% e valor preditivo negativo de 80%. Conclusão: Em desacordo com a literatura, o índice de CD64 se mostrou inadequado para prever a positividade de hemocultura nesta população específica de pacientes com neutropenia febril. O valor linear da PCR também não foi capaz de prever a positividade dos culturais nos neutropênicos febris. Deste modo, ambos os exames não são adequados para prever positividade de culturais em crianças neutropências febris. / Introduction : One in every 25 children with cancer will die from therapy complications: it means one in six deaths. Between these patients, a major cause of death remains infection. This condition often presents as fever with neutropenia, better known as “febrile neutropenia." Early recognition of infectious processes in neutropenic patients is hampered by the fact that these may have dissimilar and non-specific clinical presentations, pending the onset of fever to start treatment with antibiotics. The CD64 is a neutrophil surface marker, detectable by flow cytometry tests, and are not expressed in non-sensitized neutrophils. When the neutrophil is exposed to TNF-alpha and other inflammatory mediators, it is activated and is measured via the CD64 index. Rationale: The early diagnosis of sepsis with positive blood culture in febrile neutropenic children is of utmost importance. Laboratory tests available help us little in the moment this patient arrives at the hospital. The early diagnosis of a bacterial infection in these patients allows a better management of antibiotic therapy and, consequently, an improvement in survival. Objectives: The main objective of this paper is to evaluate the existence of a relationship between the index value of CD64 on the first day of febrile neutropenia with positive blood culture. The correlation with other parameters such as leukocyte count, CRP and ESR was also evaluated. Methodology: This is a cases-control, prospective, diagnosis study that included 64 episodes of neutropenia. The cases group(n=14) was defined by those with positive blood cultures and the control(n=50) one with negative blood cultures. Because it is a non - parametric variable, we used the Mann-Whitney correlation test to relate the index of CD64 with the result of blood culture in each group and with the other variables. A ROC (Receiver Operating Characteristic) curve was used to assess the competence of the CD64 index to predict the outcome of blood culture. The median rate of CD64 in the case group was 2,1 (±3,9) and controls for the group was 1,76(±5,02). The Mann-Whitney tests were not able to show the relationship between the value of CD64 index and the results of blood cultures. The CD64 index was also not correlated with the positivity of CRP. The ROC curve did not show that the CD64 index was able to predict the positivity of blood culture. Regarding efficacy measurmements, sensibility was 64,3%, specificity 42%, positive predictive value 23,7% and negative predictive value 80%. The linear value of CRP showed no statistically significant difference between the groups of blood cultures. For CRP, the efficacy measurements were sensibility 71,4%, specificity 32%, positive predictive value 22,7% and negative predictive value 80%. Conclusion: CD64 index was not suitable to predict the positivity of blood cultures in this specific population of patients with febrile neutropenia. Also the linear values of CRP showed no statistically significant difference between the blood culture groups. Therefore, both exams should not be used in order to predict positivity of cultural in neutropenic febrile childen.

Muito se tem investido em pesquisa na compreensão dos processos e fenômenos envolvidos nas respostas imunes às infecções e, principalmente, no desenvolvimento de recursos e tecnologias a fim favorecer os avanços no tratamento da sepse. Este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar os efeitos anti-inflamatórios das células-tronco mesenquimais (MSCs) quando administradas por duas diferentes vias: intraperitoneal (IP) e intravenosa (IV), determinando qual a melhor via de traramento, em modelo experimental murino de sepse. Foram utilizados 31 camundongos da linhagem C57Bl/6 para padronização do modelo de Ligadura e Perfuração do Ceco (CLP). Após os experimentos de estabelecimento do modelo, outros 60 animais foram distribuídos em nove grupos: grupo CONTROLE, grupo sepse sem tratamento (SEPSE), grupo SHAM, grupo sepse com administração de PBS via IV (SEPSE PBS IV), grupo sham com administração de PBS via IV (SHAM PBS IV), grupo sham com administração de MSCs via IV (SHAM MSC IV), grupo sham com administração de MSCs via IP (SHAM MSC IP), grupo sepse com administração de MSCs via IP (SEPSE MSC IP) e grupo sepse com administração de MSCs via IV (SEPSE MSC IV). Transcorridas 6 horas da indução da sepse pelo modelo CLP, padronizado com oclusão total do ceco seguida de uma única punctura com agulha 18G, os animais receberam o tratamento de acordo com o grupo que compunham. Após 24 horas do procedimento cirúrgico, procedeu-se a eutanásia dos animais para coleta dos órgãos, sangue e fluidos peritoneais. As amostras foram analisadas quanto aos parâmetros histológicos, hematológicos e inflamatórios, respectivamente. Com base nos resultados obtidos, foi possível concluir que: 1) O modelo CLP padronizado com oclusão total do ceco e uma punctura com agulha 18G induziu sepse aguda nos animais; 2) A administração das MSCs via IP foi atenuadamente mais eficaz na redução da concentração de leucócitos hematológicos e no quadro de trombocitopenia instalado nos animais com sepse induzida; 3) A injeção IP das MSCs diminuiu, com maior eficiência, a infiltração de células inflamatórias na região abdominal dos animais doentes. 4) As citocinas IL-6, TNF-α e IL- 10 obtiveram queda de suas concentrações séricas com a terapia nos animais dos grupos submetidos à indução da sepse. 5) O tratamento com MSCs melhorou o grau de peritonite, necrose e ulcerações observadas na histologia do ceco dos animais, com melhores resultados encontrados no grupo SEPSE MSC IP. / Much has been invested on research regarding comprehension of the processes and phenomena that are involved in immune responses to infections and mainly on resources and technologies development in order to support advances in the treatment of sepsis. This study has been performed in order to evaluate the anti-inflammatory effects of mesenchymal stem cells (MSCs) when administered by two different routes: intraperitoneal (IP) and intravenous (IV), to determine which is the best treatment route, in an experimental murine model of sepsis. Thirty-one C57Bl/6 strain mice have been used to standardize the Cecal Ligation and Perforation (CLP) model. After the establishment of CLP, 60 animals were allocated into nine groups: CONTROL group, sepsis group without treatment (SEPSE), SHAM group, sepsis group with intravenously administration of PBS (SEPSE PBS IV), sham group with intravenously administration of PBS (SHAM PBS IV), sham group with intravenously administration of MSCs (SHAM MSC IV), sham group with intraperitoneal administration of MSCs (SHAM MSC IP), sepsis group with intraperitoneal administration of MSCs (SEPSE MSC IP), and sepsis group with intravenously administration of MSCs (SEPSE MSC IV). 6 hours after the induction of sepsis by CLP model, standardized with total occlusion followed by a single cecal puncture with a 18G needle, the animals received the treatment according to the group they belonged to. 24 hours after the surgical procedure the animals were sacrificed in order to get the organs, blood and peritoneal fluid. The samples were analyzed for histological, haematological and inflammatory parameters, respectively. Basing on the results it was concluded that:1) The CLP model standardized with total occlusion followed by a single cecal puncture with a 18G needle induced acute sepsis in the animals; 2) The intraperitoneal administration of MSCs was slightly better in reducing the hematological concentration of leukocytes and the installed picture of thrombocytopenia in sepsis groups; 3) the intraperitoneal injection of MSCs decreased, with greater efficiency, the inflammatory cells infiltration in the abdominal cavity of sepsis groups. 4) The IL-6, TNF-α and IL-10 cytokines had their serum concentrations decline with therapy, in the groups subjected to induction of sepsis. 5) Treatment with MSCs improved the severity of peritonitis, necrosis and ulceration observed in cecum histology, with better results in the SEPSIS MSC IP group.

Um estudo prévio demonstrou em pacientes com choque séptico a presença de exossomos plasmáticos. Nossa hipótese é que exossomos circulantes poderiam contribuir para a disfunção contrátil da sepse. Foi colhido sangue de 55 pacientes com choque séptico. A incubação de corações isolados com exossomos de pacientes sépticos reduziu significantemente as derivadas da pressão ventricular e aumentou as concentrações de nitrato no miocárdio. A exposição de músculos papilares a exossomos reduziu a tensão desenvolvida. Concluímos que exossomos de pacientes sépticos induzem disfunção inotrópica em corações isolados e músculos papilares, possivelmente contribuindo para a disfunção miocárdica da sepse. / A previous report identified in plasma of septic shock patients the presence of exosomes. We hypothesized that circulating exosomes in sepsis could contribute to inotropic dysfunction. We collected blood samples from 55 patients with septic shock. Incubation of isolated heart preparations with exosomes induced a significant decrease in the derivatives of ventricular pressure and increased myocardial nitrate content. Exposure of isolated rat papillary muscles to exosomes reduced developed tension. We conclude that exosomes from septic patients induce myocardial dysfunction in isolated heart and papillary muscle preparations. Thus, they may contribute to myocardial dysfunction of sepsis.

A sepse é uma patologia que desperta interesse crescente em virtude dos altos índices de morbidade e mortalidade e pelo impacto socioeconômico decorrente dos diversos cuidados dispensados ao paciente acometido pela doença. Pressupõe-se que a implementação de cuidados específicos embasados em diretrizes poderiam ser inseridos, avaliados e difundidos no campo da saúde a fim de se obter diagnóstico precoce com maior efetividade terapêutica, minimizando danos a saúde e aumentando a sobrevida dos pacientes sépticos. Dentre esses cuidados, destaca-se nesse estudo o controle da glicemia durante o quadro séptico e a relação da variabilidade glicêmica com desfecho clínico da doença. O objetivo desse estudo foi traçar o perfil sociodemográfico e clínico e verificar a variabilidade glicêmica dos pacientes com diagnóstico de sepse grave e choque séptico em uma unidade de terapia intensiva (UTI). O método do estudo teve delineamento de abordagem descritiva, exploratório, retrospectivo. Os dados foram obtidos por meio de revisão de prontuários dos pacientes internados em uma UTI para adultos, de um hospital público de cuidados terciários e diagnosticados com sepse grave ou choque séptico no ano de 2012. A variabilidade glicêmica foi avaliada por dois métodos: desvio padrão (DP) e a amplitude média das excursões glicêmicas (MAGE). Foram incluídos no estudo 116 pacientes. A caracterização sociodemográfica e clínica mostrou que a maioria dos pacientes era do sexo masculino (57,8%), com média de idade de 59 anos, 81,9% era da raça branca e 50,9% viviam em união consensual. A comorbidade prevalente foi a hipertensão arterial sistêmica (51,7%) e o tratamento cirúrgico foi a causa mais frequente de internação (55,2%). A maioria apresentou infecção de origem comunitária (66,3%), sendo os fungos leveduriformes os microrganismos mais frequentes (13,7%). A duração média da internação foi de 36,4 (DP = 27,9, mediana=31) dias. A condição dos pacientes ex-tabagistas foi associada ao óbito (p=0,004). Entre os pacientes sobreviventes a análise da glicose corporal média mostrou média de 134,6 mg/d e entre os pacientes não sobreviventes a média foi de 154,8 mg/dl. Dos pacientes não sobreviventes 39,8% apresentaram um episódio de hipoglicemia < 60 mg/dl. A ocorrência de episódios de hipoglicemia e hipoglicemia grave foi mais frequente nos pacientes não sobreviventes. Quando comparados com os pacientes não diabéticos os diabéticos apresentaram maior VG. Este estudo demonstrou características semelhantes a outros que investigaram a população crítica com diagnóstico de sepse grave e choque séptico, mostrou que apesar dos avanços no cuidado a esses pacientes, o número de óbitos continua inaceitavelmente alto. Há necessidade do controle glicêmico no paciente com sepse grave e choque séptico, a fim de evitar grande variabilidade nos valores da glicemia / Sepsis is a condition that arouses increasing interest because of the high morbidity and mortality and the socioeconomic impact of the various treatment provided to patients affected by the disease. It is assumed that the implementation of care grounded in specific guidelines could be inserted, evaluated and disseminated in the health field in order to obtain early diagnosis with greater therapeutic effectiveness while minimizing damage to health and increasing survival of septic patients. Among such care, stands out in this study glycemic control during sepsis and the relationship of glycemic variability with clinical outcome of the disease. The aim of this study was to trace the sociodemographic and clinical profile and verify glycemic variability in patients with severe sepsis and septic shock in the intensive care unit (ICU). The method of the study design was descriptive, exploratory and retrospective approach. The data were obtained through review of medical records of patients admitted to an adult ICU of a public tertiary hospital care and diagnosed with severe sepsis or septic shock in 2012 Glycemic variability was assessed by two methods. Standard deviation (SD) and the mean amplitude of glycemic excursions (MAGE). 116 patients were included in the study. The sociodemographic and clinical characterization showed that most patients were male (57.8%), mean age 59 years, 81.9% were white and 50.9% lived in a consensual union. A prevalent comorbidity was hypertension (51.7%) and surgical treatment was the most frequent cause of hospitalization (55.2%). Most patients with infection of Community origin (66.3%), and the yeast fungi the most frequent microorganisms (13.7%). The mean duration of hospitalization was 36.4 (SD = 27.9, median 31) days. The condition of former smokers was associated with death (p = 0.004). Among the surviving patients the analysis of average body glucose showed a mean 134.6 mg / from non-surviving patients, the mean was 154.8 mg / dl. Of not surviving patients 39.8% had an episode of hypoglycemia <60 mg / dl. The occurrence of hypoglycemia and severe hypoglycemia was more frequent in non-survivors. Compared with nondiabetic patients, diabetics had higher VG. This study showed similar characteristics to others who investigated the critical population with severe sepsis and septic shock, showed that despite the advances in the care of these patients, the number of deaths remains unacceptably high. There is need of glycemic control in patients with severe sepsis and septic shock, in order to avoid large variability in blood glucose values

Introdução: Indivíduos sobreviventes à sepse apresentam maior mortalidade à longo prazo e maior risco de apresentar infecções oportunistas. Existem evidências clínicas e experimentais de desregulação imune no estado pós-sepse. Essas alterações apresentam semelhança com aquelas encontradas no microambiente tumoral, estando relacionadas à imunossupressão. O presente trabalho avaliou o papel de macrófagos associados ao tumor (TAM) em modelo de progressão tumoral em camundongos sobreviventes à sepse. Materiais e Métodos: Camundongos C57/BL6 foram submetidos a ligadura e punção cecal (CLP) e tratados com ertapenem (20 mg/kg, i.p., 6 horas após CLP e 12/12 h por 3 dias). Os animais sobreviventes de sepse eram inoculados com células de melanoma B16-F10 (30 mil, s.c., 15 dias após a CLP). Animais naïve foram usados como controle. Foram avaliadas a progressão tumoral, sobrevida e formação de metástases espontâneas à distância. No D+14, animais foram sacrificados para mensuração do acúmulo de TAM por citometria de fluxo (CD45+F4/80+CD206+) e de citocinas no soro e no tumor por ELISA (IFN-?, IL-10, TNF-?, TGF-?, CCL2, CXCL12). Macrófagos derivados de medula óssea de animais pós-CLP ou naïve foram coinoculados com células B16 para avaliação de progressão tumoral e sobrevida. TAM de animais naïve ou pós-CLP foram isolados através de gradiente de Percoll seguido de adesão seletiva e o RNA foi isolado para análise diferencial de expressão gênica por microarray. Para avaliação da participação da via CXCL12/CXCR4 foi realizada sua inibição com o AMD3100, antagonista de CXCR4 (5 mg/kg, i.p., D+10 e D+14). Foi avaliada a progressão tumoral, sobrevida, acúmulo de TAM e proliferação extramedular de TAM no D+14. Resultados: Animais sobreviventes de sepse apresentaram aumento de progressão tumoral (após 15, 30 e 60 dias da CLP), aumento da carga de metástases (após 15 dias da CLP) e redução de sobrevida. Foi detectado o aumento de TAM nos animais pós-CLP, associado a maior marcação de Ki67, em comparação com animais naïve no D+14. Verificamos aumento das concentrações séricas de TGF-?, CXCL12, CCL2 e TNF-?. Camundongos naïve que coinoculados com macrófagos derivados de medula óssea de animais pós-CLP apresentaram aumento de progressão tumoral e redução de sobrevida em comparação com o grupo controle. TAM de animais pós-CLP apresentaram menor expressão de genes relacionados ao MHC-II e genes relacionados à ativação leucocitária. A inibição de CXCL12/CXCR4 preveniu a progressão tumoral induzida por sepse, com menor acúmulo de TAM e menor presença de TAM Ki67+. Conclusões: O estado pós-sepse promove a progressão tumoral de melanoma B16 em camundongos, o qual foi associado a aumento de 12 TAM. A via CXCL12/CXCR4 participa do processo de acúmulo de TAM nesse modelo experimental. / Background: Survivors from sepsis present higher long-term mortality and increased risk of opportunistic infections. There is clinical and experimental evidence for an immunosuppressive immune dysregulation in post-sepsis. These alterations are similar to those found in tumor microenvironment. The present work assessed the role of tumorassociated macrophage (TAM) in a model of tumor progression in sepsis-surviving mice. Materials and Methods: C57/BL6 mice were submitted to cecal ligation and puncture (CLP) and treated with ertapenem (20 mg/kg, ip. - 6 h after CLP and then each 12 h for 3 days). Sepsis surviving mice were inoculated with B16-F10 melanoma cells (30,000, sc., 15 days after CLP). Naïve mice were used as controls. Tumor progression, survival and distant spontaneous metastasis were evaluated. Mice were killed at D+14 for TAM measurement through flow cytometry (CD45+F4/80+CD206+) and for cytokines (IFN-?, IL-10, TNF-?, TGF-?, CCL2, CXCL12) quantification by ELISA. Bone marrow-derived macrophage (BMDM) were isolated and co-inoculated together with B16 melanoma cells for tumor progression and survival evaluation. TAM from naïve or post-sepsis mice were isolated through Percoll gradient (70/30) followed by selective adhesion. The RNA was isolated for gene expression analysis using microarray assay. To evaluate the role of CXCL12/CXCR4, we used the specific antagonist AMD3100 (5 mg/kg, ip., at D+10 and D+14) and assessed tumor progression, survival and TAM accumulation at D+14. Results: Sepsis-surviving mice showed increased tumor progression (15, 30 or 60 days after CLP), higher metastatic burden (15 days after CLP), and less overall survival. TAM were increased in post-sepsis mice at D+14. We found increased serum levels of TGF-?, CXCL12, CCL2 e TNF-?. Naïve mice inoculated with BMDM from post-sepsis and B16 cells showed higher tumoral progression and less survival, when compared to the control group. TAM from post-sepsis showed decreased expression of MHC-II related genes and genes related to leukocyte activation. The inhibition of CXCL12/CXCR4 prevented the post-sepsis-induced tumor progression, with less TAM accumulation and reduced expression of Ki67 in TAM. Conclusions: The post-sepsis state promotes the progression of B16 melanoma in mice, which was associated with an increase in TAM accumulation. CXCL12/CXCR4 mediates TAM accumulation in this experimental model.

Objetivo: estudar os efeitos hemodinâmicos da solução salina hipertônica/dextran, comparada com solução salina normal, em pacientes com sepse grave. Modelo: ensaio clínico randomizado, prospectivo, duplo-cego, controlado. Local: Unidade de Terapia Intensiva de um hospital universitário. Pacientes: 29 pacientes com sepse grave, admitidos na UTI com pressão de oclusão da artéria pulmonar (POAP) menor que 12 mmHg. Intervenções: os pacientes foram randomizados para receber 250 ml da solução salina normal [NaCl 0,9%] (Grupo SS, n=16) ou solução salina hipertônica [NaCl 7,5%]/dextran 70 8% ( Grupo SSH, n=13). Medidas e resultados: para cada grupo foram coletadas medidas hemodinâmicas, gasometrias (arterial e venosa), lactato e sódio séricos nos tempos 0, 30 minutos, 60 minutos, 120 minutos e 180 minutos. Durante o período do estudo não foi permitida qualquer alteração na infusão tanto de fluidos quanto das drogas vasopressoras. A POAP foi maior no grupo SSH, com a diferença sendo maior em 30 minutos (10,7±3,2 mmHg vs. 6,8±3,2 mmHg) e 60 minutos (10,3±3 mmHg vs. 7,4±2,9 mmHg); p<0,05. O índice cardíaco aumentou apenas no grupo SSH, sendo que as diferenças foram maiores em 30 minutos (6,5±4,7 l min-1 m-2 vs. 3,8±3,4 l min-1 m-2), em 60 minutos (4,9±4,5 l min-1 m-2 vs. 3,7±3,3 l min-1 m-2) e em 120 minutos (5,0±4,3 l min-1 m-2 vs. 4,1±3,4 l min-1 m-2); p<0,05. O índice sistólico seguiu o mesmo padrão e foi maior em 30 minutos (53,6[39,2-62,8] ml m-2 vs. 35,6[31,2-49,2] ml m-2) e em 60 minutos (46,8[39,7-56,6] ml m-2 vs. 33,9[32,2-47,7] ml m-2); p<0,05. A resistência vascular sistêmica diminuiu no grupo SSH e foi menor nos tempos 30 minutos (824±277 dyne s-1 cm-5 m-2 vs. 1139±245 dyne s-1 cm-5 m-2), em 60 minutos (921±256 dyne s-1 cm-5 m-2 vs. 1246±308 dyne s-1 cm-5 m-2) e em 120 minutos (925±226 dyne s-1 cm-5 m-2 vs. 1269±494 dyne s-1 cm-5 m-2); p<0,05. O sódio sérico aumentou no grupo SSH e foi maior do que o grupo SS em 30 minutos (145±3 mEq l-1 vs. 137±7 mEq l-1), em 60 minutos (143±4 mEq l-1 vs. 136±77 mEq l-1), em 120 minutos (142±5 mEq l-1vs. 136±7 mEq l-1) e em 180 minutos (142±5 mEq l-1 vs. 136±87 mEq l-1); p<0,05. Conclusão: Solução salina hipertônica/dextran pode melhorar a performance cardiovascular na ressuscitação de pacientes com sepse grave. Os efeitos hemodinâmicos parecem estar relacionados tanto ao efeito no volume quanto a melhora da função cardíaca. A SSH/dextran podem ajudar a restaurar rapidamente a estabilidade hemodinâmica em pacientes sépticos, hipovolêmicos, sem apresentar efeitos indesejáveis significativos. / Objective: to study the hemodynamic effects of a hypertonic saline/dextran solution compared with a normal saline solution in severe septic patients. Design: prospective double blind and control-randomised study. Setting: Adult intensive care unit in a university hospital Patients: Twenty nine severe septic patients admitted to the intensive care unit with a pulmonary artery occlusion pressure (PAOP) lower than 12 mmHg. Interventions: Patients were randomised to receive 250 ml of blinded solutions of either normal saline (SS group, n=16) or hypertonic saline (NaCl 7,5%)/dextran 70 8% (HSS group, n=13) solutions. Measurements and Results: Hemodynamic, blood gases, blood lactate and sodium data were collected for each group at the following time points: baseline, 30 min, 60 min, 120 min and 180 min. During the study period, it was not allowed further fluid or vasoactive infusion rate modifications. PAOP was higher in the HSS group with the differences being greater at 30 (10.7±3.2 mmHg vs. 6.8±3.2 mmHg) and 60 min (10.3±3 mmHg vs. 7.4±2.9 mmHg); p<0.05. The cardiac index increased only in the HSS group with differences being greater at 30 (6.5±4.7 l min-1 m-2 vs. 3.8±3.4 l min-1 m-2), 60 (4.9±4.5 l min-1 m-2 vs. 3.7±3.3 l min-1 m-2) and 120 min (5.0±4.3 l min-1 m-2 vs. 4.1±3.4 l min-1 m-2); p<0.05. The stroke volume index followed a comparable course and it was higher at 30 (53.6[39.2-62.8] ml m-2 vs. 35.6[31.2-49.2] ml m-2) and 60 min (46.8[39.7-56.6] ml m-2 vs. 33.9[32.2-47.7] ml m-2); p<0.05. Systemic vascular resistance decreased in the HSS group and became lower at 30 (824±277 dyne s-1 cm-5 m-2 vs. 1139±245 dyne s-1 cm-5 m-2), 60 (921±256 dyne s-1 cm-5 m-2 vs. 1246±308 dyne s-1 cm-5 m-2) and 120 min (925±226 dyne s-1 cm-5 m-2 vs. 1269±494 dyne s-1 cm-5 m-2); p<0.05. The serum sodium levels increased in the HSS group and were higher than in the SS group at 30 (145±3 mEq l-1 vs. 137±7 mEq l-1), 60 (143±4 mEq l-1 vs. 136±77 mEq l-1), 120 (142±5 mEq l-1vs. 136±7 mEq l-1) and 180 min (142±5 mEq l-1 vs. 136±87 mEq l-1 ); p<0.05. Conclusion: Hypertonic saline/dextran solution can improve cardiovascular performance in the resuscitation of severe septic patients. The hemodynamic effect appears related both to a volume effect and an improvement in cardiac function. Hypertonic saline/colloid solutions may help to rapidly restore hemodynamic stability in hypovolemic septic patients without significant side effects.