Orientador: Luis Antonio Mathias / Banca: Samir Issa Samara / Banca: Maria da Gloria Buzinaro / Banca: Fernando Padilha Poester / Banca: Luis Ernesto Samartino / Resumo: O objetivo deste trabalho foi analisar os aspectos epidemiológicos da brucelose suína, estudando a disseminação da enfermidade num surto detectado em julho de 2006, em um rebanho em Jaboticabal, no Estado de São Paulo, Brasil. De 271 matrizes examinadas, 254 (93,7%) foram positivas na reação de fixação de complemento (RFC), e de 62 animais da terminação testados, 17 (27,4%) foram positivos na mesma prova. Todos os 33 bovinos, 5 equinos, 126 ovinos e 25 gansos foram negativos no teste do antígeno acidificado tamponado (AAT), porém 3 (23,07%) dos 13 cães da propriedade foram positivos na RFC. Foram colhidas amostras de sangue dos 14 trabalhadores da granja; 3 (21,42%) deles apresentaram títulos de anticorpos contra brucelas lisas na prova de soroaglutinação em tubos, e apenas 1 (7,14%) apresentou sinais clínicos da doença. O biovar 1 de Brucella suis foi cultivado a partir de 14 fetos abortados e de 6 matrizes necropsiadas, e a identificação foi confirmada por provas de rotina. Não foram encontrados anticorpos específicos contra amostras lisas de Brucella em 1.100 amostras sanguíneas de suínos e em 24 de funcionários de um frigorífico do Estado de São Paulo. Foi avaliado o desempenho de 6 técnicas sorológicas, AAT, 2-mercaptoetanol realizado simultaneamente à soroaglutinação lenta (SAL+ME), RFC, antígeno acidificado tamponado após tratamento com rivanol (AAT-RIV), e teste de polarização fluorescente (TPF) no diagnóstico da brucelose suína a partir do soro sanguíneo colhidos de 333 suínos da fazenda do foco e de mais 1.100 animais abatidos no frigorífico. As informações relatadas neste trabalho indicaram que, apesar da redução da incidência da brucelose suína no Brasil, ainda ocorre infecção por B.suis, sendo um risco para a saúde animal e a saúde pública / Abstract: The purpose of this study was to analyze epidemiological aspects of swine brucellosis, studying an outbreak in a herd in Jaboticabal, State of São Paulo, Brazil, detected in July 2006. Of 271 sows, 254 (93.7%) tested positive by the complement fixation test (CFT), and among 62 randomly bled fattening animals, 17 (27.4%) tested positive. All the 33 cattle, 5 horses, 126 sheep and 25 geese tested negative by the rose Bengal test (RBPT), however, 3 of the 13 dogs in the farm tested positive by the CFT. Blood samples were taken from 14 farm workers; 3 (21.42%) of them had antibody titers to smooth Brucella by the slow agglutination test, and 1 (7.14%) presented clinical signs. B.suis biovar 1 was cultured from 14 aborted fetuses and 6 sows. Brucella identification was accomplished by routine methods. Blood samples were taken from 1,100 pigs and 24 abaittor workers in a slaughterhouse in the state of São Paulo; all the animal and human sera tested negative to smooth Brucella antibodies. The performance of 6 serological tests were evaluated, RBPT, standart tube agglutination test plus mercaptoethanol test (STAT+2-ME), CFT, rose Bengal plate test after serum treatment with rivanol (RBPT-RIV), and fluorescence polarization assay (FPA), for the diagnosis of swine brucellosis in serum samples of 333 pigs from the outbreak and 1,100 pigs from the slaughterhouse. The results showed that, in spite of the reduction of swine brucellosis prevalence in Brazil, B.suis infection still occurs, posing a risk to animal and human health / Doutor

O sorodiagnóstico da toxocaríase humana é geralmente baseado na detecção de anticorpos IgG anti-Toxocara spp. em amostras de soro pelo teste ELISA utilizando os antígenos de excreção-secreção de larvas de T. canis (TES). No entanto, observa-se uma ocorrência de reatividade cruzada com outras helmintíases nas áreas endémicas de poliparasitismo. Vários estudos têm mostrado que as glicanas presentes nos antígenos dos helmintos podem ser as responsáveis pela reatividade cruzada. Neste estudo, avaliamos o efeito da deglicosilação dos antígenos TES na sensibilidade e especificidade dos testes de ELISA e Western-blotting para detecção de anticorpos IgG, IgM e IgE. Para a deglicosilação dos antígenos TES, estes foram tratados com diferentes concentrações de hidróxido de sódio (NaOH) ou metaperiodato de sódio (NaIO4) e foram testados 58 amostras de soro de pacientes com toxocaríase visceral, 75 amostras de soros de pacientes com outras helmintíases, e 95 amostras de soro de indivíduos saudáveis. Nossos resultados mostraram que os antígenos TES foram totalmente deglicosilados com NaOH 100mM por 4 horas a 37°C (dTES), enquanto que o tratamento com NaIO4 não gerou bons resultados. A sensibilidade e especificidade dos antígenos TES e dTES na detecção de anticorpos IgG pelo teste de ELISA foi de 100%, com menor reatividade cruzada (5,3%) para os antígenos dTES, se comparada com os antígenos TES (13,3%). Todos os pacientes com toxocaríase mostraram anticorpos IgG contra as cinco frações dos antígenos TES (32, 45, 55, 70 e 120 kDa) e contra a única fração de 26kDa dos antígenos dTES, com sensibilidades e especificidades de 100% para ambos os antígenos. A reatividade cruzada, observada com as frações de 70 kDa, 55 kDa e 32 kDa dos antígenos TES, foi eliminada totalmente quando utilizaram-se os antígenos dTES. A detecção de anticorpos IgM pelo teste de ELISA mostrou reatividade inespecífica nos três grupos estudados, com sensibilidades de 39,7% e 34,5% e especificidades de 95,8% e 96,8%, para os antígenos TES e dTES, respectivamente, porém com ocorrência de reatividade cruzada de 24% e 28% para ambos os antígenos. Os três grupos estudados apresentaram reatividade contra quase todas as frações dos antígenos TES e dTES. A detecção de anticorpos IgE apresentou sensibilidades de 63,79% e 62,07% e uma especificidade de 100%, e uma reatividade cruzada de 26,6% e 53,3% para ambos os antígenos. A maioria dos pacientes com toxocaríase (74,1%) mostraram anticorpos contra as frações de 32, 55 e 70 kDa, em quanto que não houve reatividade nos pacientes com outras helmintíases ou nos indivíduos saudáveis. Estes resultados mostraram que a deglicosilação dos antígenos TES permite reduzir a ocorrência de reatividade cruzada nos pacientes com outras helmintíases, elevando o valor diagnóstico da detecção de anticorpos IgG. No entanto, este procedimento não permite melhorar a sensibilidade e especificidade na detecção de anticorpos IgM e não permite elevar a sensibilidade na detecção de anticorpos IgE pelo teste de ELISA. Por outro lado, os resultados discordantes na especificidade do Western-blotting para a detecção de anticorpos IgG, IgM e IgE sugerem a presença de epítopos conformacionais presentes no estado nativo dos antígenos TES que estariam implicados na reação cruzada observada no teste de ELISA / Serodiagnosis of human toxocariasis is usually based on the detection of anti-Toxocara spp. IgG antibodies in serum samples by ELISA test using T.canis larvae excretory-secretory (TES) antigens. However, a cross-reactivity occurrence is observed in endemic areas of polyparasitism. Many studies have shown that the glycan structures, present in helminth antigens, can be the responsible for the cross-reactivity. In this study, we evaluated the deglycosylation of the TES antigens on the sensitivity and specificity of both the ELISA and Western-blotting for the detection of IgG, IgM, and IgE antibodies. For the deglycosylation of the TES antigens, they were treated with different concentrations of sodium hydroxide (NaOH) or sodium metaperiodate (NaIO4), and 58 serum samples of 58 patients with visceral toxocariasis, 75 serum samples of patients with other helminth infections, and 95 serum samples of healthy individuals. Our results show that the TES antigens were totally deglycosylated with 100 mM NaOH for 4 hours at 37°C (dTES), whereas not good results were obtained with sodium metaperiodate. The sensitivity and specificity of both TES and dTES antigens were 100% in detecting IgG antibodies by ELISA; the cross-reactivity observed with TES antigens (13.3%) was reduced (5.3%) when dTES antigens were used. All toxocariasis patients showed IgG antibodies against the five fractions of TES antigens (32, 45, 55, 70, and 120 kDa), but also with the 26-kDa single fraction of dTES antigens, with sensitivities and specificities of 100% for both antigens. The occurrence of cross-reactivity, observed mainly with the 32-, 55-, and 70 kDa fractions of the TES antigens, was totally eliminated when the dTES antigens were used. The detection of IgM antibodies by ELISA test showed unspecific reactivity in all studied groups, with sensitivities of 39.7% and 34.5%, and specificities of 95.8% and 96.8% for both antigens; the occurrence of cross-reactivity for both antigens were 24% and 28%, respectively. All studied groups have IgM antibodies against almost all fractions of TES antigens and the single fraction of dTES. The detection of IgE antibodies by ELISA test showed sensitivities of 63.8% and 62%, specificities of 100%, and occurrence of reactivity of 26.6% and 53.3% for TES and dTES antigens, respectively. The majority of the toxocariasis patients (74.1%) showed IgE antibodies against the 32-, 55-, and 70 kDa fractions of the TES antigens, whereas there was not reactivity in sera from patients with other helminth infections or healthy individuals. These results showed that the deglycosylation of the TES antigens reduces the occurrence of cross-reactivity in patients with other helminth infections, increasing the diagnostic value for the detection of IgG antibodies. However, this procedure does not improve the sensitivity nor reduces the occurrence of cross-reactivity in the detection of IgM antibodies. Likewise, this procedure does not improve the sensitivity in the detection of IgE antibodies by the ELISA test. On the other hand, the high specificity obtained in the detection of IgG, IgM, and IgE by Western-blotting suggest that conformational epitopes of the TES antigens may also be the responsible for the cross-reactivity in the ELISA test

O Vírus de Influenza aviária pertence à família Orthomyxoviridae. Nos últimos anos vários subtipos da gripe aviária de baixa patogenicidade têm causado surtos e epidemia em humanos e aves domésticas. As aves selvagens e migratórias participam da manutenção e transmissão interespécie dos 16 subtipos de hemaglutinina e 9 subtipos de Neuraminidase na natureza. Nosso estudo teve como objetivo subtipar as amostras positivas através de teste sorológico de inibição da hemaglutinação (HI) e técnica de Biologia Molecular. Foram positivas as amostras das espécies: Elaenia mesoleuca (2), Sporophila lineola (1) Sporophila caerulescen (1), Vireo olivaceus (3), Columbina talpacoti (3), Paroaria dominicana (2), foram coletadas das reservas experimentais de campo localizadas no estado de São Paulo-Brasil,durante os anos de 1997 e 1998. Tais amostras foram identificadas por teste preconizado HI(de acordo com WHO) usando 20 soros imunes anti-influenza do tipo A e um do tipo B e análise de RT-PCR com sequenciamento do gene Hemaglutinina e Neuraminidase. O teste HI demonstrou que 12 amostras apresentou estreita afinidade com com soros imune A/HongKong/1/68 (H3N2), A/Equine/Miami/63 (H3N8) and A/Duck/Ukraine/63 (H3N8). As análises de sequenciamento do gene hemaglutinina e Neuraminidase desses isolados revelaram uma alta homologia com os do subtipos H3N2. As análise filogenética e variabilidade genética em comparação com as seqüências de Genbank representando diversos países, mostraram que nossas amostras apresentou estreita homologia com os vírus do subtipos que circularam em Victoria (1990), Siena (1991) e Beijim (1989). A análise de amino ácido indicou que há mutações não sinônimas no gene da Hemaglutinina exclusiva de nossas amostras e as mutações da Neuraminidase são sinônimos, quando comparadas com amostras de AIV de outros paises. Nossas Amostras quando análisadas a NA, não apresentaram mutações nos aminoácidos y285t e r297n que conferem resistencia aos inibidores da Neuminidase. / Avian Influenza virus belongs to Orthomyxoviridae family. The last years several low pathogenic avian influenza subtypes have caused outbreaks and epidemic in human and poultry. The wild and migrating birds may be participating of maintenance and interspecies transmission of the sixteen subtypes of the Hemagglutinina and nine Neuraminidase in nature. Our study was aimed to subtype the positive samples for influenza A isolated from migrating and wild birds by molecular technique and Haemagglutination inhibition test (HI). The samples from species Elaenia mesoleuca (2), Sporophila lineola (1) Sporophila caerulescens (1), Vireo olivaceus (3), Columbina talpacoti (3), Paroaria dominicana (2), were collected in reserves and experimental field stations located in the São Paulo State - Brazil, during the years 1997 and 1998. The samples were identified by HI test (according WHO) using the 20 antibody patterns anti-influenza A type and one for the influenza type B and RT-PCR and Sequence analysis of Hemaglutinina and Neuraminidase gene. The HI test demonstrated that 12 samples presented an antigenic close relationship with A/HongKong/1/68 (H3N2), A/ Equine/Miami /63 (H3N8) and A/Duck/ Ukraine/ 63 (H3N8) antiserum.The sequencing analyses of Hemaglutinin and Neuraminidase gene of these 12 isolates revealed a high homology with H3N2. Phylogenetic analysis and genetic variability compared with genbank sequence representing several countries, showed that our current samples submitted close homology to that circulated in Victoria (1990), Siena (1991) and Beijim (1989). Amino acid analysis compared our samples with representative genbank samples all of mutation are synonymous.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001Bitstream added on 2014-06-13T19:57:02Z : No. of bitstreams: 1 sene_mg_me_botfm.pdf: 956728 bytes, checksum: fe9e35a9180c7ad377bc30cbf9974ccd (MD5) / A paracoccidioidomicose (Pbmicose) é micose sistêmica causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis, que acomete principalmente trabalhadores rurais do sexo masculino. A doença tem como principais manifestações clínicas a forma aguda/subaguda e a forma crônica. Métodos sorológicos têm considerável valor na Pbmicose e diferentes testes têm sido utilizados no diagnóstico e monitoramento da resposta do paciente ao tratamento. O objetivo deste estudo foi avaliar a IFI, a ID e o ELISA antes e após introdução do tratamento de pacientes com a forma aguda/subaguda e a forma crônica da Pbmicose. Para cada teste, os seguintes parâmetros foram avaliados: sensibilidade (SE), especificidade (EP), valor preditivo positivo (VPP), valor preditivo negativo (VPN) e eficiência (EF). No período pré-tratamento a IFI teve SE=92,3%, VPP= 87,5%, VPN= 92% e EF=88,6%. A ID teve SE=94,93%, VPP=97,4%, VPN=95% e EF=96,2%. Para o ELISA, SE=100%, VPP=95%, VPN=100% e EF=97,4%. No grupo de doadores de sangue, a EP da IFI, da ID e do ELISA foram, respectivamente, de 93,3%, 100% e 100%. Em soros de pacientes com outras micoses sistêmicas (histoplasmose, criptococose, actinomicose, aspergilose e adiaspiromicose), as EP para os testes foram de 60%, 90% e 80%, respectivamente. Durante o tratamento, maior correlação foi obtida entre a ID e o ELISA (r= 0,61591, p<0,05), obtendo-se baixas correlações com a IFI. O tempo necessário para negativar o ELISA (Md= 20,0 meses) foi maior do que a ID (Md= 13,5 meses). O ELISA se negativou em geral nove meses após a ID, o que sugere que este teste passe a ser um referencial para suspensão do tratamento de manutenção. Devido à sua elevada sensibilidade, especificidade, VPP, VPN e eficiência, o ELISA deve ser incluído na rotina sorológica de pacientes com Pbmicose. / Pararaccidioidomycosis (Pbmycosis) is a systemic mycosis caused by the dimorphic fungus Paracoccidioiodes brasiliensis, which often affects rural workers, usually male adults. The overt disease is manifested by two clinical forms, acute/subacute and chronic forms. Serological methods are of considerable value in Pbmycosis, and various tests has been utilized in the diagnostic and monitoring the patient's response to treatment. The aim of this study was to evaluated the reliability of the double immunodiffusion test (ID), indirect immunofluorescence (IIF) and immunoenzymatic assay (ELISA) in the pre-treatment and during the period of treatment of patients with acute/subacute and chronic forms of Pbmycosis. For each test the following parameters were evaluated: Sensitivity (SE), Specificity (SP), Positive and Negative Predictive Values (PPV and NPV) and Efficiency (EF). In the pre-treatment period these values for IFI were SE=92.3%, PPV=87.5%, NPV=92% and EF=88.6%. For ID: SE=94.9%, PPV=97.4%, NPV=95% EF=96.2%. For ELISA: SE=100%, PPV=95%, NPV=100% and EF=97.4%. In the group of blood donors, for IFI, ID and ELISA the ES were, respectively, 93.3%, 100% and 100%. In patients with other deep mycosis (histoplasmosis, cryptococcosis, actinomycosis, aspergillosis and adiaspiromycosis) the ES for these tests were respectively 60%, 90% and 80%. During the period of treatment, the highest correlation was observed between ID and ELISA (r= 0,61591, p<0,05), and the lowest correlations with IFI. The time elapsed to negative the ELISA was larger (Md=20 months) than for ID (Md= 13,5 meses). In overall, the ELISA negativated nine months after ID. This result suggests that the ELISA may be a referential test to monitoring the time for interruption of the treatment in Pbmycosis. Moreover, owing to its high values of SE, SP, PPV, NPV and EF, ELISA should be included in the serological routine for patients with Pbmycosis.

Orientador: Márcio Garcia Ribeiro / Banca: Paulo Francisco Domingues / Banca: André Mendes Jorge / Banca: Lília Paulin / Banca: Daniel Moura de Aguiar / Resumo: O perfil sorológico de 21 fêmeas bubalinas vacinadas entre três a oito meses de idade, com amostra-padrão da vacina B19 (Brucella abortus), foi avaliado pelas provas do antígeno acidificado tamponado corado com rosa bengala (AAT), 2-mercaptoetanol (2-ME) e fixação de complemento (FC). As colheitas foram realizadas no dia zero (vacinação), 15, 30, 45,60 e, subsequentemente, a cada 30 dias até o 720o dia pós-vacinal. Nenhum animal foi reagente no dia zero. No 15o dia pós-vacinal, acima de 95% dos animais reagiram em todas as provas. Os títulos máximos na soroaglutinação lenta em tubos e 2- mercaptoetanol foram obtidos entre 15o e 45o dia após a vacinação. Entre 120 e 150 dias foi observado o declínio das reações nos animais em todas as provas. Na FC, AAT e 2-ME todos os animais resultaram não reagentes, respectivamente, aos 270, 300 e 360 dias da vacinação. Nenhum dos animais apresentou oscilação de títulos ou reações nas três provas após 360 dias de acompanhamento. / Abstract: The serological profiles of 21 female buffaloes, vaccinatedd at three to eight months of age using the B19 standard strain of Brucella abortus were evaluated by rose bengal plate, 2-mercaptoethanol and complement fixation tests. The serum samples were collected in day zero (vaccination), 15, 30, 45, 60th and, subsequently to each 30 months, until 720th day after vaccination. No animal showed reaction in day zero. In 15th day, more tham 95% of animals showed reaction in all tests. The maximum levels of antibodies detected by the tube agglutination and 2-mercaptoethanol tests were found between the 15 and 45th days after vaccination. Between 120 and 150 days after vaccination was observed decreased of reactions in all the tests. All the animals showed absence of reactions in complement fixation, rose bengal plate and 2- mercaptoethanol tests at 270, 300 and 360 days respectively after vaccination. None of animals presented oscillation of titers on reactions in any test after 360 day of study. / Doutor

As leishmanioses são zoonoses de caráter incurável que apresentam diversas manifestações clínicas no homem e tem o cão como seu principal reservatório no ambiente urbano. A Leishmaniose visceral (LV) é a forma mais grave da parasitose e sua ocorrência tem aumentado no Brasil, apesar das ações dos órgãos de saúde pública. Até o do ano de 2002, o Estado do Rio Grande do Sul era área indene para as leishmanioses humana e canina. Em 2003 foi registrado o primeiro caso humano da forma tegumentar e em 2006 e 2008 identificaram-se, respectivamente 3,5% e 30,5% de cães sororreagentes para Leishmania sp. em Porto Alegre/RS. Em 2009, foram confirmados os primeiros casos autóctones humanos de LV e caninos de Leishmaniose visceral canina (LVC) no município de São Borja/RS e registrada, pela primeira vez, a ocorrência do inseto vetor no estado. Em 2010, foi notificado o primeiro caso confirmado de LVC e identificados cães sororreagentes em Porto Alegre/RS. Tendo em vista a importância desta zoonose e as dificuldades de um diagnóstico confiável em cães, o presente estudo objetivou identificar aspectos epidemiológicos da LVC em cães em uma região com registros de casos no município de Porto Alegre/RS. Coletaram-se 300 amostras de sangue de cães desta região as quais foram testas pelos métodos TR-DPP® e ELISA para diagnóstico de Leishmania chagasi. Um questionário epidemiológico foi aplicado durante entrevista com os tutores, contendo aspectos relativos à criação dos animais e fatores ambientais. Na área de estudo, observou-se presença frequente de lixo não acondicionado e saneamento básico precário nas moradias, além de extensas áreas de mata verde e pequenos sítios alternados com áreas urbanizadas. Verificou-se que 83% (250/300) dos cães não tinham raça definida, 58% (175/300) eram fêmeas, 78% (238/300) dormiam ao ar livre e 61% (183/300) conviviam com outras espécies animais. Clinicamente, observou-se que 90% (270/300) dos animais apresentavam infestação por ectoparasitos, 70% (210/300) apresentavam alterações dermatológicas, 24% (72/300) emagrecimento e anorexia e 22% (65/300) alterações oculares. Os resultados dos testes sorológicos foram 100% concordantes uma vez que as mesmas três amostras (1%) apresentaram reação positiva e as demais 297 (99%) foram negativas em ambos os métodos diagnósticos. Concluiu-se que, apesar da baixa prevalência de cães soropositivos para L. chagasi, existem condições de transmissão de LVC, com risco de LV para a população humana no município de Porto Alegre. / Leishmanioses are zoonoses of incurable character that present different clinical manifestations in the man and have the dog as its main reservoir in the urban environment. Visceral leishmaniasis (VL) is the most severe form of the parasitosis and its incidence has been increasing in Brazil, despite the actions of public health authorities. To the year of 2002, the state of Rio Grande do Sul was unscathed to the human and canine Leishmanioses. In 2003, it was first recorded a human case of cutaneous leishmaniasis and in 2006 and 2008 were identified, respectively, 3.5% and 30.5% of seropositive dogs to Leishmania sp. in Porto Alegre/RS. In 2009, the first autochthonous human cases of VL and canine visceral leishmaniasis (CVL) were confirmed in the municipality of São Borja/RS and it was registered, for the first time, the occurrence of the vector insect in the state. In 2010 was reported the first confirmed CVL case and seropositive dogs were identified in Porto Alegre/RS. Given the importance of this zoonosis and the difficulties of a reliable diagnosis in dogs, this study goal was to identify epidemiological aspects of CVL and evaluate the performance of ELISA and TR-DPP® in the diagnosis of this disease in dogs on a region with records of cases in the city of Porto Alegre/RS. Blood samples were collected from 300 dogs of this region. An epidemiological questionnaire, containing aspects of care and management of the animals, was conducted during an interview with the owners. Within the study area, it was observed the frequent presence of unpacked garbage and poor sanitation in the homes, and large areas of green forest and small farms alternated with urbanized areas. It was found that 83% (250/300) dogs were of mixed breeds, 58% (175/300) were females, 78% (238/300) slept outdoors and 61% (183/300) coexisted with other animal species. Clinically, it was observed that 90% (270/300) of the animals had infestation by ectoparasites, 70% (210/300) had dermatological alterations, 24% (72/300) had weight loss and anorexia and 22% (65/300) had ocular disorders. The results of serological tests were 100% consistent since, in both diagnostic methods, the same three samples showed a positive reaction and the remaining 297 were negative. Despite the low prevalence of dogs seropositive for L. chagasi, it was concluded that there are conditions for the transmission of CVL, resulting in a risk of VL for the human population in the municipality of Porto Alegre.

A toxoplasmose, protozoose disseminada de baixa morbidade, apresenta número significativo de doença ocular, congênita ou do sistema nervoso central. O diagnóstico é sorológico por diferentes testes, mas limiares baixos e variação individual levam a frequentes problemas. Novos imunoensaios fluorescentes de fase sólida (FLISA) usam a quantificação direta de anticorpos. Aqui, desenvolvemos um FLISA multiplex (FLISAm) para a detecção simultânea de anticorpos IgG e IgM contra Toxoplasma gondii. Após padronização, a eficiência do FLISAm com conjugados comerciais foi feita inicialmente de forma isolada para cada imunoglobulina em 140 amostras de soro de universitários previamente analisadas pelo ELISA IgG/IgM. FLISA IgG mostrou boa concordância (Kappa=0,7088), com sensibilidade de 83,3% e especificidade de 94,2%, enquanto FLISA IgM apresentou boa concordância (K=0,6026), menor sensibilidade de 55,5% e igual especificidade de 98,4%. Foram produzidos novos conjugados fluorescentes de maior especificidade e seu desempenho no FLISAm foi validado em 24 amostras e sua eficiência foi avaliada em 120 amostras conhecidas de soro de gestantes. FLISAm mostrou excelente concordância, tanto para a detecção de anticorpos IgG (K=0.8837, sensibilidade=100,0%, especificidade=87,5%), quanto para a detecção de anticorpos IgM (K=0,9187, sensibilidade=100%, especificidade=99,1%) com excelente reprodutibilidade. O teste desenvolvido é rápido, econômico, de fácil execução, alto rendimento e que pode ser utilizado como método de triagem de soroconversão em mulheres grávidas, útil em aplicações de grande número de amostras como o cuidado pré-natal. / Toxoplasmosis, a disseminated low morbidity protozoan disease, presented significant numbers of affected people, mainly ocular disease, fetal infections or encephalitis in immune deficient patients. Serology is the main diagnosis with commercial antibody assays, but individual variation or low thresholds cause many inconsistencies. New solid phase immunofluorescence assays (FLISA) allows direct antibody quantification in microplates. Here, we developed a multiplex FLISA (FLISAm) for simultaneous detection of IgG and IgM anti-Toxoplasma gondii antibodies. After standardization, the efficiency of this method was initially analyzed in isolated FLISA for each immunoglobulin with commercial conjugates in 140 serum samples of the students previously screened by IgG/IgM ELISA. IgG FLISA showed good concordance (Kappa=0.7088), 83,3% sensitivity and 94,2% specificity, while IgM FLISA also showed good concordance (Kappa=0,6026), lower 55,5% sensitivity and similar 98,4% specificity. New higher efficiency conjugated were prepared and tested in 120 serum samples of the pregnant woman in a same well conjunct IgG/IgM FLISAm. We also validate the FLISAm in 24 serum samples. Compared to isolated ELISA IgG/IgM, FLISAm demonstrated excellent concordance for IgG (Kappa=0.8837; sensitivity=100%; specificity=87,5%,) and IgM (Kappa=0,9187; sensitivity=100%; specificity=99,1%), with excellent reproducibility. The standardized FLISAm is quick, inexpensive, easily performed and high throughput and the assay can be used for screening serum conversion in pregnant women, useful in large numbers applications as antenatal care.

As leishmanioses são zoonoses de caráter incurável que apresentam diversas manifestações clínicas no homem e tem o cão como seu principal reservatório no ambiente urbano. A Leishmaniose visceral (LV) é a forma mais grave da parasitose e sua ocorrência tem aumentado no Brasil, apesar das ações dos órgãos de saúde pública. Até o do ano de 2002, o Estado do Rio Grande do Sul era área indene para as leishmanioses humana e canina. Em 2003 foi registrado o primeiro caso humano da forma tegumentar e em 2006 e 2008 identificaram-se, respectivamente 3,5% e 30,5% de cães sororreagentes para Leishmania sp. em Porto Alegre/RS. Em 2009, foram confirmados os primeiros casos autóctones humanos de LV e caninos de Leishmaniose visceral canina (LVC) no município de São Borja/RS e registrada, pela primeira vez, a ocorrência do inseto vetor no estado. Em 2010, foi notificado o primeiro caso confirmado de LVC e identificados cães sororreagentes em Porto Alegre/RS. Tendo em vista a importância desta zoonose e as dificuldades de um diagnóstico confiável em cães, o presente estudo objetivou identificar aspectos epidemiológicos da LVC em cães em uma região com registros de casos no município de Porto Alegre/RS. Coletaram-se 300 amostras de sangue de cães desta região as quais foram testas pelos métodos TR-DPP® e ELISA para diagnóstico de Leishmania chagasi. Um questionário epidemiológico foi aplicado durante entrevista com os tutores, contendo aspectos relativos à criação dos animais e fatores ambientais. Na área de estudo, observou-se presença frequente de lixo não acondicionado e saneamento básico precário nas moradias, além de extensas áreas de mata verde e pequenos sítios alternados com áreas urbanizadas. Verificou-se que 83% (250/300) dos cães não tinham raça definida, 58% (175/300) eram fêmeas, 78% (238/300) dormiam ao ar livre e 61% (183/300) conviviam com outras espécies animais. Clinicamente, observou-se que 90% (270/300) dos animais apresentavam infestação por ectoparasitos, 70% (210/300) apresentavam alterações dermatológicas, 24% (72/300) emagrecimento e anorexia e 22% (65/300) alterações oculares. Os resultados dos testes sorológicos foram 100% concordantes uma vez que as mesmas três amostras (1%) apresentaram reação positiva e as demais 297 (99%) foram negativas em ambos os métodos diagnósticos. Concluiu-se que, apesar da baixa prevalência de cães soropositivos para L. chagasi, existem condições de transmissão de LVC, com risco de LV para a população humana no município de Porto Alegre. / Leishmanioses are zoonoses of incurable character that present different clinical manifestations in the man and have the dog as its main reservoir in the urban environment. Visceral leishmaniasis (VL) is the most severe form of the parasitosis and its incidence has been increasing in Brazil, despite the actions of public health authorities. To the year of 2002, the state of Rio Grande do Sul was unscathed to the human and canine Leishmanioses. In 2003, it was first recorded a human case of cutaneous leishmaniasis and in 2006 and 2008 were identified, respectively, 3.5% and 30.5% of seropositive dogs to Leishmania sp. in Porto Alegre/RS. In 2009, the first autochthonous human cases of VL and canine visceral leishmaniasis (CVL) were confirmed in the municipality of São Borja/RS and it was registered, for the first time, the occurrence of the vector insect in the state. In 2010 was reported the first confirmed CVL case and seropositive dogs were identified in Porto Alegre/RS. Given the importance of this zoonosis and the difficulties of a reliable diagnosis in dogs, this study goal was to identify epidemiological aspects of CVL and evaluate the performance of ELISA and TR-DPP® in the diagnosis of this disease in dogs on a region with records of cases in the city of Porto Alegre/RS. Blood samples were collected from 300 dogs of this region. An epidemiological questionnaire, containing aspects of care and management of the animals, was conducted during an interview with the owners. Within the study area, it was observed the frequent presence of unpacked garbage and poor sanitation in the homes, and large areas of green forest and small farms alternated with urbanized areas. It was found that 83% (250/300) dogs were of mixed breeds, 58% (175/300) were females, 78% (238/300) slept outdoors and 61% (183/300) coexisted with other animal species. Clinically, it was observed that 90% (270/300) of the animals had infestation by ectoparasites, 70% (210/300) had dermatological alterations, 24% (72/300) had weight loss and anorexia and 22% (65/300) had ocular disorders. The results of serological tests were 100% consistent since, in both diagnostic methods, the same three samples showed a positive reaction and the remaining 297 were negative. Despite the low prevalence of dogs seropositive for L. chagasi, it was concluded that there are conditions for the transmission of CVL, resulting in a risk of VL for the human population in the municipality of Porto Alegre.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-19T17:24:07Z No. of bitstreams: 1 Marcilia Maria Alves de Souza.pdf: 1643173 bytes, checksum: de92227ec0b9b02a73e95528ab1282d2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-19T17:24:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcilia Maria Alves de Souza.pdf: 1643173 bytes, checksum: de92227ec0b9b02a73e95528ab1282d2 (MD5) Previous issue date: 2012-02-01 / Glanders is a disease that affects equids, produced by Burkholderia mallei, a coccobacillus, gram-negative, immobile, and not sporulated anaerobic (Yabuuchi et al., 1992), which can be transmitted to humans, and his agent used as a biological weapon (Ulrich, et al, 2006). Reemerging disease in Brazil since 1999, has been the subject of discussion regarding the serological diagnosis. Complement Fixation Test (CFT) is recommended in the examination program for control and eradication of glanders by the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (BRAZIL, 2004) and the World Organization for Animal Health (OIE) for international trade (OIE 2008) The Objective of this study was to evaluate the results of the Complement Fixation Test using two antigens commercially available and two methods of incubation in sera of horses from a property in Pernambuco. / O mormo é uma doença que acomete equídeos, produzida pela Burkholderia mallei, um cocobacilo, Gram-negativo, imóvel, anaeróbio e não esporulado (YABUUCHI et al., 1992), que pode ser transmitida para o homem, e seu agente utilizado como arma biológica (ULRICH, et al, 2006). Doença reemergente no Brasil desde 1999 tem sido motivo de discussão, no que concerne ao diagnóstico sorológico. Fixação do Complemento (FC) é o exame preconizado no programa de controle e erradicação do mormo, pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (BRASIL, 2004) e pela Organização Mundial de Saúde Animal (OIE) para trânsito internacional (OIE 2008). Objetiva-se com este trabalho, avaliar os resultados do Teste de Fixação do Complemento frente a dois antígenos comercialmente disponíveis utilizando dois métodos de incubação, em soros de equinos de uma propriedade em Pernambuco.

A doença de Chagas ainda é causa importante da morte de milhares de pessoas nos países em desenvolvimento, sendo de grande importância a identificação e confirmação de indivíduos chagásicos, principalmente mulheres e crianças. Neste trabalho avaliamos o valor clínico dos resultados do teste sorológico TESAcruzi como confirmatório de infecção chagásica em amostras de sangue colhidas em papel de filtro . Foram estudadas 8.788 amostras de sangue coletadas em papel filtro (tipo Whatman nº4) de crianças de 0 a 5 anos de idade incompletos de zonas rurais de 13 estados do Brasil, enviadas ao Laboratório de Soroepidemiologia e Imunobiologia do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo pelo Laboratório de Chagas do Hospital das Clínicas-UFG, para confirmação e controle de qualidade da infecção chagásica. Foram utilizados os testes sorológicos ELISA - BIOELISACRUZI, IFI - IMUNOCRUZI e WB - TESAcruzi (BioMérieux-Brasil). Das 8.788 amostras de sangue analisadas, 166 (1,9%) foram reagentes por ELISA (cut off 0,3) e 313 (3,6%) por IFI a partir de 1/40. Todas as amostras reagentes ou duvidosas foram ensaiadas por TESAcruzi para confirmação dos resultados. Foram reagentes 77 eluatos (0,9%). Considerando que o TESAcruzi apresenta 100% de sensibilidade e 99,6% de especificidade, os valores preditivos positivos e negativos obtidos, conferem aos resultados um alto valor clínico para a confirmação de resultados positivos, negativos e inconclusivos na sorologia da doença de Chagas. A introdução do TESAcruzi na sorologia da doença de Chagas é uma ferramenta importante quando se deseja confirmar casos com sorologia duvidosa ou inconclusiva. / Identifying and confirming Chagas disease patients is a goal to be achieved at this moment, just when many countries from Latin America had announced its control an/or eradication. In this project we studied the TESAcruzi as confirmatory test for Chagas Disease diagnosis using serum samples collected from children (0-5 years old) living in different states of Brazil and selected by statistics criteria. The study is part of the seroepidemiological survey that is occurring in Brazil looking for ongenital or acquired Chagas disease. Blood samples collected by fingerprint in nº4 Whatman filter paper (10% of total and all reagents and inconclusive samples) were sent to our laboratory by central laboratory located in Goiania - Goias to confirm previous results. For this we used traditional commercial reagents, IgG indirect immunofluorescence - IgG-IFI, enzyme immunoassay - IgG - ELISA and introduced TESAcruzi, western blotting reagent, recently registered by BioMerieux S.A. From 8.788 samples 166 (1.9%) were reagents in IgG-ELISA (C.O = 0.300) and 313 (3.64%) by IgG IFI (C.O 1/40). From these, 77 (0.9%) were reagents in TESAcruzi. Considering the predictive values of TESAcruzi (NPV = 100% and PPV = 99.5%) the results obtained had high clinical value to define the Chagasic patients. TESAcruzi reagent seems to be an important tool for Chagas disease diagnosis when it is necessary to confirm reagents or inconclusive results.