Resumo não disponível

Ectonucleotidases constituem uma cascata enzimática altamente organizada para regulação da sinalização mediada por nucleotídeos, controlando a quantidade e a taxa de degradação destes, além da formação do respectivo nucleosídeo. Nucleotídeos/ nucleosídeos extracelulares são conhecidos por regularem diversas respostas fisiológicas, incluindo o tônus vascular, função cardíaca e homeostasia. Neste estudo nós analisamos a presença dos membros das famílias das E-NTPDases, E-NPPs e ecto-5'-nucleotidase em tecido de ventrículo esquerdo (VE) de ratos. A análise por PCR mostrou a expressão da NTPDase1, 2, 3,5,6, ecto-5'-NT/CD73, NPP2 e NPP3, excluindo a presença da NPP1 e NTPDase8. Através da análise por PCR em tempo real, encontramos o maior nível de expressão de mRNA para a NTPDase2 no ventrículo esquerdo. Também caracterizamos as propriedades bioquímicas e atividades enzimáticas em sinaptossomas de terminal nervoso (sinaptossoma cardíaco) em VE. No estudo das propriedades das E-NTPDases e ecto-5'-NT, observamos dependência de cátions divalentes, pH ótimo de 8.0 para as hidrólises de ATP e ADP e 9.5 para a hidrólise de AMP. Os valores de Km aparente são 40 µM, 90 µM, 39 µM e os valores de Vmax aparente são 537, 219 and 111 nmol Pi liberado/min/mg de proteína para as hidrólises de ATP, ADP e AMP, respectivamente. Oligomicina e azida, ambos inibidores de ATPases mitocondriais, inibiram somente a hidrólise de ATP. A hidrólise de AMP não foi afetada por levamisole e tetramisole, enquanto molibdato de amônio praticamente aboliu a atividade da ecto-5'-nucleotidase. Utilizando o p-nitrofenil-5'-timidina monofosfato (p-Nph-5'-TMP) como substrato marcador para E-NPPs na preparação de sinaptossoma cardíaco, observamos um pH alcalino, dependência de cátions divalentes e valores de Km de 91.42 ± 13.97 µM e Vmax calculado de 63.79 ± 3.59 nmol p-nitrofenol liberado/min/mg de proteína. Não houve alteração na hidrólise do substrato com adição de levamisole no pH de 8.9 (pH ótimo caracterizado), porém o suramin reduziu fortemente a hidrólise de p-Nph-5'-TMP. Para estudarmos se estas enzimas poderiam participar na patofisiologia das doenças diabéticas cardiovasculares, usamos um modelo de diabetes experimental por estreptozotocina (STZ) 65mg/kg. A injeção de STZ causou aumento da glicemia, perda de peso corporal, diminuição dos batimentos cardíacos e pressão sangüínea. Seis dias de tratamento com insulina foram capazes de reverter as alterações encontradas no diabetes. Houve uma inibição das hidrólises de ATP e ADP, mas não de AMP e p-Nph-5'-TMP em sinaptossoma cardíaco. O tratamento com insulina reverteu as hidrólises para os níveis do controle (citrato). A análise do metabolismo extracelular de ATP em sinaptossoma cardíaco por HPLC mostrou que o ATP é hidrolisado mais lentamente no grupo diabético. Dados preliminares de análise molecular sugerem a participação das NTPDases 1 e 2 nas hidrólises de nucleotídeos em sinaptossoma cardíaco. Com o intuito de analisar um material biológico de fácil obtenção, avaliamos as atividades das ectonucleotidases e o perfil extracelular de hidrólise de ATP em soro de ratos diabéticos e também a influência da glicemia nestas atividades. Trinta dias após a injeção de STZ, observamos um aumento nas hidrólises de ATP, ADP, AMP e p-Nph-5'-TMP, quando comparados ao grupo citrato e este aumento foi revertido com 6 dias de tratamento com insulina. Glicose (20 mM), in vitro, não afetou a atividade enzimática em soro de ratos controle, após 24 h de pré-incubação. A análise por HPLC mostrou uma rápida hidrólise de ATP em soro de animais diabéticos, diminuindo os níveis de ATP e ADP mais rapidamente do que os grupos controle e insulina. Mostramos uma alteração na hidrólise de nucleotídeos em sinaptossoma cardíaco e em soro de ratos diabéticos. A alteração encontrada em coração parece fazer parte da etiologia da doença cardiovascular diabética. No entando, a alteração encontrada no soro dos ratos diabéticos, diminuição de ADP (pró-agregante plaquetário) e aumento de adenosina (antiagregante plaquetário) parece participar de um sistema de proteção a possíveis danos vasculares decorrentes do diabetes. / Ectonucleotidases constitute a highly organized enzymatic cascade in the regulation of nucleotidemediated signaling, controlling the rate, amount and timing of nucleotide degradation and ultimately, the nucleoside formation. Extracellular nucleotides/nucleosides are known to regulate several physiological responses, including vascular tone, cardiac function and haemostasis. In this study, we have analyzed the presence of the E-NTPDase family members, ecto-5'-nucleotidase/CD73 and E-NPPs in rat heart left ventricle. RT-PCR analysis from left ventricle tissue demonstrated different levels of expression of NTPDase1, 2, 3, 5, 6, 5'-NT/CD73, NPP2 and NPP3, but excluded the presence of NPP1 and NTPDase8. By quantitative real-time PCR we identified the NTPDase2 as the enzyme with the highest mRNA expression in rat left ventricle. Moreover, we characterized the biochemical properties and enzyme activities from synaptosomes of the nerve terminal endings (cardiac synaptosomes) of heart left ventricle. In the E-NTPDases study, we observed divalent cation-dependent enzymes that presented optimum pH of 8.0 for ATP and ADP hydrolysis, and 9.5 for AMP hydrolysis. The apparent Km values are 40 µM, 90 µM and 39 µM and apparent Vmax values are 537, 219 and 111 nmol Pi released/min/mg of protein for ATP, ADP and AMP hydrolysis, respectively. Oligomycin and sodium azide, both mitochondrial ATPase inhibitors, inhibited only the ATP hydrolysis. AMP hydrolysis was not affected by levamisole and tetramisole, whereas ammonium molybdate practically abolished the ecto-5'-nucleotidase activity. Using p-nitrophenyl-5'- thymidine monophosphate (p-Nph-5'-TMP) as substrate for E-NPPs in rat cardiac synaptosomes, we observed an alkaline pH dependence, divalent cation dependence and the Km value corresponded to 91.42 ± 13.97 μM and Vmax value calculated was 63,79 ± 3,59 nmol p-nitrophenol released/min/mg of protein. Levamisole was ineffective as inhibitor of p-Nph-5'-TMP hydrolysis in pH 8.9 (optimum pH for the enzyme characterized). Suramin strongly reduced the hydrolysis of p- Nph-5'-TMP. In order to study if these enzymes could participate in the pathophysiology of diabetic cardiovascular diseases, we induced experimental diabetes with an injection of streptozotocin 65mg/kg to study diabetic complications. The STZ injection caused a rise in glucose levels, loss of body weight, lower heart rate (HR) and systolic blood pressure (SBP) when compared to citrate group (control). The 6 days insulin treatment was able to reverse these parameters. There was an inhibition in ATP and ADP, but not in AMP and p-Nph-5'-TMP hydrolysis in cardiac synaptosomes and the insulin treatment returned the hydrolysis to the citrate group levels. The analysis of extracellular ATP metabolism in cardiac synaptosomes by HPLC shows that ATP was hydrolyzed slower in diabetes group. Preliminar data from molecular analysis suggest the participação of NTPDases 1 and 2 on nucleotide hydrolysis in cardiac synaptosomes. In order to analyse a readily available biological material, we evaluated the ectonucleotidases activities and the profile of extracellular ATP metabolism in blood serum of streptozotocin-diabetic rats and the influence of glycemic status. The 30 days of STZ injection was associated with a raise in ATP, ADP, AMP, and 5'-TMP hydrolysis in blood serum, when compared to the citrate group. In vitro, 20 mM glucose added did not affect ectonucleotidases activities in normal blood serum of rats with 24 h of preincubation. HPLC analysis showed a rapid hydrolysis of extracellular ATP by diabetic animals, decreasing the ATP and ADP levels faster than in serum of control and insulin groups, leading to the formation of high levels of adenosine when compared with citrate and insulin groups. We showed alterations in the nucleotides hydrolysis in the cardiac synaptosomes and in serum from diabetic rats. The cardiac alteration seems to be related to the ethiology of cardiac problems. However, the serum hydrolysis alterations seems to be related to a vascular protection, with the diminution of ADP (pro-agregant) and an increase in adenosine (antiagregant), found in diabetic serum rats.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Produção. / Made available in DSpace on 2012-10-22T13:06:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 234340.pdf: 2906055 bytes, checksum: 47cfd9370ed4b8c251cf6948646b72a3 (MD5) / O presente estudo objetivou investigar o efeito da participação longa versus curta em um programa de reabilitação cardiovascular (RCV) na evolução da doença arterial coronariana (DAC) e no estilo de vida (EV). Com esta finalidade, entre todos os pacientes que passaram pelo programa de RCV da UFSC (ProCor) desde a sua implantação, foram selecionados aqueles com DAC, compondo uma amostra dividida em dois grupos, o G1 que praticou mais de 72 sessões e o G2 menos de 72. A coleta dos dados foi realizada através das fichas de controle do ProCor, de uma entrevista e de um questionário. Foram estudados 67 pacientes. A entrevista foi realizada com base num roteiro e o questionário foi o FANTASTIC (CSEP, 1998). Esta pesquisa foi caracterizada como um estudo de caso. Os dados obtidos receberam tratamento não-paramétrico quando apropriado e as análises descritivas e inferências consideraram nível de significância de p=0,05. A média de idade foi de 63,06 anos e a distribuição por gênero foi de 47 homens e 20 mulheres. A média de pressão arterial foi 138,22/84,45 mmHg. Com relação à flexibilidade, o resultado caracterizou os sujeitos como predominantemente "fracos" e "abaixo da média". Quanto ao Índice de Massa Corporal, os sujeitos foram classificados como pré-obesos e a gordura corporal confirmou que estavam fora da faixa recomendável. Quanto ao VO2 máximo, o valor médio para os homens foi 31,47 e para as mulheres 20,35 ml O2.(kg.min)-1. A evolução clínica não apresentou diferença entre os dois grupos (G1 e G2). Mas, quanto à evolução terapêutica, existiu diferença significativa entre aqueles que participaram de mais sessões que evoluíram melhor do que os que participaram menos. Os escores obtidos no questionário do EV não foram diferentes entre os grupos. Entretanto, conforme os dados da entrevista sobre alterações no EV em função da passagem pela RCV, observou-se que os indivíduos que participaram de maior número de sessões obtiveram possibilidade maior de apresentar mudanças favoráveis ao tratamento da DAC. Com relação à depressão, também houve diferença significativa favorável ao G1 (> de 72 sessões). Com base neste estudo, são apresentadas diretrizes para implantação e acompanhamento em programas de RCV e estratégias para intervenção e alteração dos aspectos modificáveis do EV. This case study aimed to investigate the effect of long-term compared to short-term participation in a cardiac rehabilitation program (CRP) on the cardiovascular disease (CVD) evolution and on lifestyle (LS). Therefore, CVV patients who participated from the beginning of CRP (ProCor) at UFSC were selected and classified into two groups: G1 composed by those who attended at least 72 ProCor sessions and G2 by those who had less than 72 attended sessions. Altogether, there were 67 patients in the study, 47 males and 20 females. Data was obtained through search in ProCor patient files as well as through a guided interview and the FANTASTIC questionnaire (CSEP, 1998). Data analyses consisted of descriptive and inferential procedures and of non-parametric statistics, using significance level at 0.05. Mean age of the entire group was 63.06 years old. The Body Mass Index classified subjects as pre-obese, which was corroborated by fat mass estimation. Maximum oxygen consumption (VO2 max) mean values were, respectively, 31.47 and 20.35 ml O2.(kg.min)-1 for males and females. Mean blood pressure was 138.22 mmHg for systolic and 84.45 mmHg for diastolic. For flexibility, most of the sample was classified either as below average or low. Clinical evolution did not differ between G1 and G2. However, G1 showed better therapeutic evolution than G2. Scores on the lifestyle questionnaire were similar between G1 and G2, though interview data on lifestyle showed that G1 subjects were more likely to show favorable changes in treating CVD. Depression was significantly lower among G1 patients. The results allowed for presenting guidelines for CRP implementation and patient follow-up as well as strategies for intervention and changes in modifiable aspects of lifestyle.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-03-17T13:16:39Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1490106 bytes, checksum: 22b9db576e45cdbd820b5dde0450e840 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-17T13:16:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1490106 bytes, checksum: 22b9db576e45cdbd820b5dde0450e840 (MD5) Previous issue date: 2016-10-28 / A hipertensão arterial é o principal fator de risco para doença cardiovascular e um precursor da insuficiência cardíaca produzindo grande preocupação para as autoridades de saúde pública. Atualmente, a hipertensão atinge proporções epidêmicas entre os idosos e os efeitos desta doença são maiores em homens do que em mulheres. Há evidências que tanto a hipertensão quanto a senescência são fatores que promovem hipertrofia cardíaca, alterações na homeostase intracelular do Ca2+ e contratilidade dos cardiomiócitos levando à disfunção sistólica e diastólica em ratos hipertensos. Todavia, não há informações claras sobre as diferenças entre os sexos na sinalização intracelular de Ca2+ e contratilidade dos cardiomiócitos de ratos hipertensos jovens e idosos. Este estudo teve como objetivo investigar as mudanças referentes à idade e as diferenças existente entre os sexos sobre os parâmetros contráteis e sinalização intracelular de Ca2+ em cardiomiócitos isolados dos ventrículos de ratos espontaneamente hipertensos (SHR). Ratos SHR e ratos Wistar normotensos com 8 e 17 meses de idade foram separados aleatoriamente em 8 grupos: grupos normotensos controle com 8 e 17 meses macho (N8M e N17M, n=5); grupos normotensos controle com 8 e 17 meses fêmea (N8F e N17F, n=5); grupos hipertensos com 8 e 17 meses macho (H8M e H17M, n=5); grupos hipertensos com 8 e 17 meses fêmea (H8F e H17F, n=5). Após a eutanásia, os cardiomiócitos ventriculares foram isolados por dispersão enzimática. Para a determinação do transiente de [Ca2+]i e das sparks espontâneas de Ca2+, os cardiomiócitos isolados foram incubados com o indicador fluorescente de Ca2+ Fluo-4 acetoximetil-ester (Fluo-4 AM) e colocados dentro de uma câmara experimental montada em um microscópio confocal. A contratilidade celular foi determinada através da técnica de alteração do comprimento dos cardiomiócitos, usando-se um sistema de detecção de bordas, com o auxílio de um microscópio invertido. Para as análises do transiente de [Ca2+]i e contratilidade celular, utilizou-se a estimulação elétrica de campo (30V; 1Hz; em temperatura ambiente ~ 25oC). Os registros das sparks espontâneas de Ca2+ foram realizados com as células quiescentes e a partir daí obteve-se 10 imagens por célula. Os resultados do presente estudo mostraram que a hipertensão arterial reduziu a amplitude do transiente de [Ca2+]i e a contratilidade celular nos cardiomiócitos ventriculares dos ratos hipertensos de 8 meses de idade em ambos os sexos. Em contraste, a amplitude do transiente de [Ca2+]i e a contratilidade celular foram maiores nos cardiomiócitos ventriculares dos ratos hipertensos de 17 meses de idade em ambos os sexos. Estes aumentos foram maiores nas fêmeas hipertensas. A hipertensão arterial aumentou a frequência das sparks espontâneas de Ca2+ nos ratos hipertensos em todas as idades estudadas. Contudo, a frequência das sparks espontâneas de Ca2+ foi menor nos cardiomiócitos dos ratos idosos comparado aos mais jovens. A amplitude das sparks espontâneas de Ca2+ foi menor nos cardiomiócitos ventriculares dos ratos hipertensos de 8 meses e nas fêmeas hipertensas de 17 meses. Todavia, os efeitos da hipertensão sobre as sparks espontâneas de Ca2+ estavam menos proeminentes nas fêmeas hipertensas em comparação aos machos, independentemente da idade. Além disso, a hipertensão prolongou o tempo para o pico do transiente de [Ca2+]i e o tempo para o pico de contração nos cardiomiócitos ventriculares dos ratos hipertensos de 8 meses. Este efeito foi menos proeminente nas fêmeas hipertensas. A hipertensão prolongou o tempo para o pico do transiente de [Ca2+]i no ventrículo esquerdo das fêmeas hipertensas de 17 meses e no ventrículo direito dos ratos hipertensos de 17 meses. Não houve diferença entre os sexos para este parâmetro nos ratos hipertensos idosos. A hipertensão reduziu o tempo para 50% do decaimento de [Ca2+]i nos cardiomiócitos ventriculares dos ratos hipertensos de 8 meses. Não houve diferença entre os sexos para este parâmetro nestes animais. Entretanto, o tempo para o relaxamento celular foi menor nas fêmeas hipertensas de 8 meses em comparação aos machos da mesma idade. Não houve diferenças entre os sexos para este parâmetro nos ratos hipertensos idosos. Em conclusão, os cardiomiócitos ventriculares dos ratos hipertensos apresentaram alterações deletérias na sinalização intracelular de [Ca2+]i e contratilidade celular em todas as idades estudadas. Algumas destas alterações estavam menos proeminentes nos cardiomiócitos das fêmeas hipertensas em comparação aos machos. / Hypertension is a major risk factor for cardiovascular disease and a precursor of heart failure producing major concern for public health authorities. Currently, hypertension reaches epidemic proportions among the elderly and the effects of this disease is greater in men than in women. There is evidence that both hypertension and senescence are factors that promote cardiac hypertrophy, changes in intracellular Ca2+ homeostasis, and contractility of cardiomyocytes leading to systolic and diastolic dysfunction in hypertensive rats. However, there is no clear information about the differences between the sexes in intracellular Ca2+ signaling and contractility of cardiomyocytes hypertensive rats young and old. The objective of the present study was to investigate changes in age and differences between the sexes in contractile parameters and intracellular Ca2+ signaling in cardiomyocytes isolated from the ventricles of spontaneously hypertensive rats (SHR). SHR and normotensive Wistar rats with 8 and 17 months of age were randomly divided into 8 groups: normotensive control groups with 8 and 17 months male (N8M and N17M, n = 5); normotensive control groups with 8 and 17 months female (N8F and N17F, n = 5); hypertensive groups with 8 and 17 months male (H8M and H17M, n = 5); Hypertensive groups with 8 and 17 months female (H8F and H17F, n = 5). After euthanasia, ventricular cardiomyocytes were isolated by enzymatic dispersion. To determine the [Ca2+]i transient and spontaneously Ca2+ sparks, isolated cardiomyocytes were incubated with the Ca2+fluorescent indicator Fluo-4 acetoxymethyl ester (Fluo-4 AM) and placed inside an experimental chamber mounted on a confocal microscope. Cellular contractility was determined by the technique of altering the length of the cardiomyocytes using an edge detection system with the aid of an inverted microscope. For analyzes of the [Ca2+]i transient and cell contractility, we used field electrical stimulation (30V, 1Hz, at room temperature ~ 25°C). The records of spontaneously Ca2+ sparks were carried out with quiescent cells, thereafter was obtained 10 images per cell. The results of this study showed that and cell contractility in ventricular cardiomyocytes of hypertensive rats of 8 months of age in both sexes. In contrast, [Ca2+]i transient and cell contractility were greater in ventricular cardiomyocytes of hypertensive rats of 17 months of age in both sexes. These increases were higher in hypertensive females. Hypertension increased the spontaneously Ca2+ sparks frequency in hypertensive rats at all ages studied. However, the spontaneously Ca2+ sparks frequency was smaller in cardiomyocytes of aged rats compared to young rats. The spontaneously Ca2+ sparks amplitude was smaller in ventricular cardiomyocytes of hypertensive rats of 8 months and in hypertensive females of 17 months. However, the effects of hypertension on the spontaneously Ca2+ sparks were less prominent in hypertensive females compared to males, regardless of age. Furthermore, hypertension increased the time to the peak of the [Ca2+]i transient and the time to peak contraction of the ventricular cardiomyocytes in hypertensive rats of 8 months. This effect was less prominent in the female hypertensive rat. Hypertension increased the time to the peak of the [Ca2+]I transient in the left ventricle of hypertensive female rat of 17 months and right ventricle of hypertensive rats of 17 months. There was no difference between sexes for this parameter in the elderly hypertensive rats. Hypertension reduced the time to 50% decay of [Ca2+]i in ventricular cardiomyocytes of hypertensive rat of 8 months. There was no difference between the sexes for this parameter in these animals. However, the relaxation time for the cell was smaller in hypertensive females of 8 months compared to males of the same age. There were no differences between sexes for this parameter in the elderly hypertensive rats. In conclusion, ventricular cardiomyocytes of the hypertensive rats showed deleterious changes in the intracellular signaling of [Ca2+]i and cell contractility at all ages studied. Some of these changes were less prominent in cardiomyocytes of hypertensive females compared to males.

A vitamina A apresenta importantes papéis no sistema cardiovascular, desde a fase embrionária até a vida adulta. Além disso, propriedades antioxidantes são atribuídas a essa vitamina; Contudo, propriedades pró-oxidantes lhe são atribuídas. Portanto, nosso objetivo foi comparar parâmetros energéticos/redox (no sistema cardiovascular) entre animais submetidos a uma suplementação com vitamina A e animais não submetidos a essa suplementação. Ratos adultos Wistar machos foram tratados com 4 diferentes doses (1000-9000 UI.Kg-1.dia-1) de palmitato de retinol ou com salina (controle) ao longo de 3 diferentes períodos (3, 7 e 28 dias). Após o tratamento, a artéria aorta e o coração foram retirados para as análises. Foram avaliados parâmetros de estresse oxidativo em ambas as estruturas, e parâmetros de estresse nitrosativo e energéticos no coração dos animais tratados por 28 dias. A análise estatística foi realizada por Anova de uma via, seguida do pos hoc de Dunnet, com significância de ρ ≤ 0,05. Na artéria aorta, foi observada uma diminuição na lipoperoxidação após 7 e 28 dias, bem como aumento de sulfidril em 3 dias e alterações enzimáticas em todos períodos. No coração, foi detectado um aumento de lipoperoxidação e de carbonilação após 7 e 28 dias e uma dimuição na reatividade não enzimática nos 3 períodos. Alterações enzimáticas foram vistas nos 3 períodos. No período mais longo, foi observado aumento de nitração na fração mitocondrial e diminuição da atividade dos complexos da cadeia transferidora de elétrons. Concluímos que ocorre uma adaptação oposta entre coração e artéria, onde há um aumento de estresse oxidativo no coração e uma diminuição na aorta, no entanto, uma futura análise fisiológica ainda é necessária para se sugerir um ou outro como positivo ou negativo. Além disso, o estresse cardíaco crônico está associado com um possível bloqueio energético e um estado de estresse nitrosativo mitocondrial. / Vitamin A plays important roles on cardiovascular system, since development until adult life. Besides physiological roles, antioxidants properties are also attributed to its. However, pro-oxidants properties have been associated to vitamin A. Therefore, our aim was to compare redox parameters among animals supplemented with vitamin A and one not. Adult male Wistar rats were treated with different doses (1000-9000 IU.Kg-1.day-1) of retinyl palmitate or saline (control) for 3 different periods (3, 7 and 28 days). Thereafter, the aorta artery and the heart were removed to follow analysis. Oxidative stress parameters were assessed in both organs, while nitrosative stress and energetic parameters were evaluated only at heart from animals treated for 28 days. Statistics were conducted with Anova one way, followed by Dunnet’s pos hoc, and significance of ρ ≤ 0.05. On arterial level it was observed a decrease in lipoperoxidation after 7 and 28 days, as well as an increase in sulfhydryl after 3 days and changed enzymatic activity for all periods. In the heart, it was detected an increased lipoperoxidation and carbonyl levels after 7 and 28 days, and a decreased non-enzimatic reactivity for all periods. Additionally, enzymatic changes were also seen. For the chronic treatment we could observe an increase in mitochondrial nitration and a decrease in respiratory chain complexes activities. Thus, we concluded that happens an opposite adaptation between heart and aorta, since there is an increased oxidative stress status in the heart, while in the aorta there is a decreased status. However, a physiological evaluation is needed to suggest what is positive or negative. Furthermore, the cardiac oxidative stress is associated to an energetic impairment and a mitochondrial nitrosative stress.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Objetivos: avaliar a influência da perda de peso na espessura do complexo intimalmedial carotídeo (CIM-C) e a variação da espessura do CIM-C de acordo com a modificação dos fatores de risco cardiovascular decorrente da cirurgia bariátrica. Métodos: dezoito mulheres (idade média de 44,1 ± 9,8 anos e o IMC médio de 44,3±6,4 kg/m2 ), submetidas à cirurgia bariátrica, participaram do estudo. As avaliações foram feitas no período basal e após 3,6 e 12 meses de pós-operatório. Os FRCVs analisados foram: nível de colesterol total,nível de lipoproteína de alta densidade do colesterol(HDL-C), relação triglicérides/ HDL-C (TG/HDL-C) conhecido como índice aterogênico do plasma, glicemia de jejum, bem como comorbidades outras como hipertensão arterial e tabagismo. O CIM-C foi medido pelo método não invasivo através da ultra-sonografia modo B. Resultados: na avaliação basal, baixo nível de HDL-C foi encontrado em 55,6%, altos níveis de colesterol total em 50% e altos níveis de triglicérides em 33,4%. Houve correlação significativa entre o CIM-C com a idade e com a trigliceridemia (r =0,67, p=0,002 e r=0,56, p=0,02 respectivamente) Seis meses após a cirurgia, observamos redução significante do CIM-C (p<0,05) que mostrou correlação significativa com a trigliceridemia e com a pressão arterial (p<0,05). Conclusão: os resultados deste estudo sugerem que a perda de peso obtida com a cirurgia bariátrica é acompanhada pela regressão do CIM-C, um marcador precoce da aterosclerose e essa regressão pode ser evidenciada após 6 meses da cirurgia, com benefício adicional em 12 meses. / Purpose: to correlate CIM-C thickness with the CVRFs before the surgery (baseline data) and after the surgery, and to observe whether the weight loss is followed by a regression of CIM-C thickness. Methods: eighteen women (mean age: 44.1 ± 9.8 years and mean BMI: 4.3±6.4kg/m2 ) submitted to bariatric surgery participated in this study. The assessments were performed in the baseline period and 3, 6 and 12 months after the surgery. The analyzed CVRFs were: total cholesterol level; high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C) level; relation between triglycerides and HDL-C (TG/HDL-C) - also known as atherogenic index of plasma; fasting glycemia; as well as other comorbidities, such as blood pressure arterial and smoking habit. CIM-C was measured through a non-invasive method: B-mode ultrasound system. Results: in the baseline assessment, low level of HDL-C was found in 55,6%, elevated total cholesterol in 50% and hypertriglyceridemia in 33.4%, and a positive correlation was found between CIM-C and age and triglyceridemia (r =0.67, p=0.002 and r=0.56, p=0.02, respectively). Six months after the surgery, we found a significant reduction of CIM-C (p<0.05), which presented a positive correlation with triglyceridemia and systolic pressure (p<0.05). Conclusion: the results from this study suggest the weight loss achieved through bariatric surgery is followed by the regression of CIM-C, an indicator of early atherosclerosis. This regression may be evidenced 6 months, with additional benefits 12 months after the surgery. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação Multicêntrico em Ciências Fisiológicas, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2014-08-06T18:09:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 325331.pdf: 3140065 bytes, checksum: 7d0bcc46e48292ab4c04e32222948c8e (MD5) Previous issue date: 2014 / A hipóxia intermitente (HI), condição comumente observada em situações patológicas, promove aumentos na atividade simpática e na pressão arterial (PA), bem como elevação persistente na ventilação, por mecanismos ainda não completamente elucidados. No presente estudo, mostramos com detalhes as alterações cardiorrespiratórias induzidas pela HI aguda (HIA; 10 episódios 6-7% O2 por 45 s, intercalados por 5 min de normóxia/hiperóxia) em ratos adultos (290-300 g) não anestesiados ou anestesiados com uretana (1,2 g/Kg, i.p.). Nos animais não anestesiados, a HIA promoveu uma elevação persistente da PA (n=9, P<0,05) associado ao aumento das modulações simpática (n=9, P<0,05) e respiratória (n=9, P<0,05) sobre a PA, obtidas pela análise de variabilidade da PA. Nestes animais também houve redução da frequência respiratória (n=5, P<0,05). Em ratos anestesiados, a HIA resultou em aumento das atividades motoras inspiratória (diafragma-DIA; n=12, P<0,05) e expiratória (abdominais-ABD; n=8, P<0,05). Tanto o aumento na PA e no ABD induzidos pela HIA foram abolidos após a inibição bilateral do núcleo retrotrapezoide (RTN) com muscimol (1mM, 50 nL), indicando importante participação deste núcleo nas alterações cardiorrespiratórias induzida pela HIA. Considerando estudos mostrando envolvimento serotoninérgico no contexto da HIA, verificamos que microinjeções intermitentes (MI) de 5-HT (1mM, 50 nL, com 5 minutos de intervalo) no RTN de animais anestesiados (n=7, P<0,05), induziu aumento significativo e sustentado da atividade ABD (padrão expiratório ativo), por pelo menos 60 min após a última microinjeção, de forma semelhante àquele observado após a HIA. Tal elevação da atividade ABD não foi observada após a realização de MI veículo ou únicas de 5-HT no RTN. O aumento promovido pela MI de 5HT no RTN foi associado a facilitação das respostas ventilatórias à hipercapnia (n=7, P<0,05), sugerindo uma possível sensibilização dos quimiorreceptores centrais localizados no RTN. Ademais, a resposta de ativação expiratória induzida pela MI de 5-HT no RTN foi potencializada após a realização da vagotomia bilateral (n=6, P<0,05), indicando um possível função inibitória das aferências vagais sobre o processamento da resposta ABD ao nível do RTN. Em conjunto, nosso resultados mostram que a HIA, tanto em condições anestesiadas como, principalmente, em condições não anestesiadas, promove facilitação a longo prazo das atividades simpática e motoras inspiratória e expiratória. A ativação intermitente de mecanismos serotoninérgicos no RTN promove alterações do padrão respiratório, com o aparecimento da expiração ativa em condições basais, semelhante aos animais expostos à HIA, associado a potencialização das repostas ventilatórias à hipercapnia. Tais observações sugerem que os mecanismos serotoninérgicos do RTN podem desempenhar função modulatória importante na sensibilização dos quimiorreceptores centrais do RTN, fato que pode contribuir para o aparecimento das alterações cardiorrespiratórias após a exposição à HIA.<br> / Abstract : Intermittent hypoxia (HI), a condition commonly observed in pathological conditions, promotes increases in sympathetic activity and arterial blood pressure (BP) as well as a persistent increase in ventilation, by mechanisms not yet fully elucidated. In the present study, we explored in details the cardiorespiratory changes elicited by acute HI (HIA; 10 episodes 6-7 % O2 for 45 s, interspersed by 5 min of normoxia/hyperoxia) in adult rats (290-300 g) unanesthetized or anesthetized with urethane (1.2 g/kg, ip). In unanesthetized animals, the HIA promoted a sustained raise in BP (n=9 , P <0.05) associated with increased sympathetic (n=9 , P <0.05) and respiratory (n=9 , P < 0 05) modulations on BP, obtained by analyses of BP variability. In these animals, we also observed a reduction in respiratory frequency (n=5 , P <0.05). In anesthetized rats, HIA resulted in increased inspiratory (diaphragm-DIA, n=12 , P<0.05) and expiratory (abdominal-ABD, n=8, P<0.05) motor activities. Both HIA-induced increases of BP and ABD activity were abolished after bilateral inhibition retrotrapezoid nucleus (RTN) with muscimol microinjections (1 mM, 50 nL), suggesting an important role of this nucleus in cardiorespiratory changes induced by HIA. Based on studies showing an important serotonergic role in the scenario of HIA, in another experimental protocol we found that intermittent microinjections (IM) of 5-HT (1 mM, 50 nL) in the RTN of anesthetized animals (n=7, P< 0.05), administered with 5 minutes apart, induced a significant and sustained increase of ABD activity (active expiratory pattern) for at least 60 min after the last microinjection, similar to that observed after HIA. This increase of ABD activity was not observed after single MI of 5-HT or vehicle in the RTN. Importantly, the ABD increase elicited by 5-HT MI in RTN was associated with a facilitation of ventilatory responses to hypercapnia (n=7, P<0.05), suggesting a possible sensitization of central chemoreceptors located in the RTN. In addition, the expiratory motor activation induced by 5-HT MI in the RTN was enhanced after the bilateral vagotomy (n=6, P<0.05), suggesting possible inhibitory role of vagal afferents on the processing of the ABD response to the RTN level. Together, our results show that HIA exposure, in both anesthetized and unanesthetized conditions, elicits long-term facilitations of sympathetic and inspiratory and expiratory motor activities. Furthermore, intermittent activation of serotonergic mechanisms in RTN promotes changes in breathing pattern, with the emergence of active expiration at basal conditions, similarly to animals exposed to HIA, associated with a potentiation of ventilatory responses to hypercapnia. These observations suggest that serotonergic mechanisms RTN may play an important modulatory role in increasing the sensitivity of the RTN central chemoreceptors, which may contribute to the onset of cardiorespiratory alterations induced by HIA.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-12-09T19:50:52Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoVivoEfeito.pdf: 1898867 bytes, checksum: f85eee9ac16ab6cce5a6d1e2f8473061 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-12-09T20:20:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoVivoEfeito.pdf: 1898867 bytes, checksum: f85eee9ac16ab6cce5a6d1e2f8473061 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-09T20:20:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoVivoEfeito.pdf: 1898867 bytes, checksum: f85eee9ac16ab6cce5a6d1e2f8473061 (MD5) Previous issue date: 2013 / O aumento dos níveis plasmáticos de aldosterona após infarto do miocárdio (IM) está relacionado com a piora do prognóstico da doença e contribui para patogênese da insuficiência cardíaca. O tratamento do IM com antagonistas de receptores mineralocorticoides (MR) da aldosterona, espironolactona e eplerenona, têm reduzido a remodelação do ventrículo esquerdo e a morte súbida. Entretanto, existem evidências clínicas e experimentais de que a cardioproteção promovida por esses antagonista pode ser em parte independente do bloqueio da ação da aldosterona. O objetivo do presente estudo foi avaliar comparativamente os efeitos cardioprotetores da espironolactona e eplerenona em um modelo agudo de isquemia cardíaca em ratos. Ratos machos wistar, submetidos a adrenalectomia lateral ou não foram tratados, via oral, com Espironolactona 20mg/kg ou Eplerenona 10mg/kg, na presença e na ausência de um antagonista de receptor GR (Mifepristona 20mg/kg) e submetidos a isquemia cardíaca. O sinal de ECG em ratos anestesiados foi obtido antes e após a ligadura coronária esquerda, durante 1 hora. A área sob a curva do segmento ST do ECG, um parâmetro que indica isquemia do miocárdio, foi significativamente menor para a espironolactona (53.9.3 ± 13,07) e eplerenona (31,3 ± 10,08) de animais tratados em comparação com os animais de controle (179,4 ± 32,3). Mifepristona (76,6 ± 14,54) não foi capaz de alterar os efeitos de espironolactona. Estes resultados sugerem que doses baixas de espironolactona e eplerenona são cardioprotetoras mesmo quando os níveis de aldosterona não estão aumentados e que este efeito não é dependente da ativação dos receptores GR. ______________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: The increasing plasma levels of aldosterona after myocardial infarction (MI) is related to its prognostic aggravation and contributes to the cardiac failure pathogenesis. The MI treatment with the mineralocorticoid receptors (MR) antagonists, spironolactone and eplerenone, can reduce the left ventricular remodeling and sudden death occurrence. However, clinical and experimental evidences demonstrated that this cardioprotection could be in part independent of the aldosterone inhibition. The mechanisms activated by these two drugs in the heart remain unknown. Spironolactone also presents glucocorticoid receptors (GR) affinity, which also shows cardioprotective properties. The objective of the present work was to evaluate the cardioprotective effects of spironolactone and eplerenone in a model of acute cardiac ischemia in rats. Male Wistar rats were first subjected to adrenalectomy and received by oral route 20mg/kg of spironolactone or 10mg/kg eplerenone in the presence and in the absence of mifepristone (20mg/kg), a GR receptor antagonist. The ECG signal was obtained in anaesthetized rats before and after the left coronary ligature, during 1 hour. The area under the curve of the ST segment of ECG, a parameter that indicates myocardial ischemia, was significantly smaller for the spironolactone (53.9.3±13.07) and eplerenone (31.3±10.08) treated animals compared to the control animals (179.4 ± 32.3). Mifepristone (76.6±14.54) was not able to alter the effects of spironolactone. These results suggest that low doses of spironolactone and eplerenone are cardioprotective even when plasma levels of aldosterone are not augmented and that this effect is not dependent of GR receptors activation.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Maurílio Figueiredo (maurilioafigueiredo@yahoo.com.br) on 2015-01-16T18:54:34Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_ParticipaçãoHipotálomoDorsomedial.pdf: 1614471 bytes, checksum: 506e9b6d1b2a6693d9762d13a39ffffa (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-01-19T16:43:07Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_ParticipaçãoHipotálomoDorsomedial.pdf: 1614471 bytes, checksum: 506e9b6d1b2a6693d9762d13a39ffffa (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-19T16:43:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_ParticipaçãoHipotálomoDorsomedial.pdf: 1614471 bytes, checksum: 506e9b6d1b2a6693d9762d13a39ffffa (MD5) Previous issue date: 2014 / A síndrome do envenenamento escorpiônico é considerada um importante problema de saúde pública, em países tropicais, devido a sua elevada incidência e potencial gravidade dos sintomas, principalmente em crianças. Alguns estudos apontam a grande sensibilidade do sistema nervoso central (SNC) à ação dos componentes tóxicos do veneno e comprovam que as manifestações cardiorespiratórias, consideradas as principais causa mortis do envenenamento, são decorrentes da ativação do sistema nervoso autônomo, sobretudo, da subdivisão simpática. Entretanto, a origem desta modulação permanece desconhecida. Considerando a importante participação do SNC na gênese das repostas hemodinâmicas e cardíacas evocadas pela ação central da Tityustoxina (TsTX, uma α-toxina extraída do veneno do escorpião Tityus serrulatus) e a semelhança destas respostas àquelas mediadas pelo hipotálamo dorsomedial (HDM) em reações de defesa, o objetivo central deste trabalho foi avaliar a participação do HDM nas respostas cardiovasculares decorrentes da injeção i.c.v. de TsTX em ratos. Para tal, em ratos acordados, avaliamos a influência de injeções i.c.v. de diferentes doses de TsTX (1,74μg; 0,174μg; 0,116μg e 0,087μg) sobre os parâmetros cardiovasculares e sobre a porcentagem de letalidade e o tempo de sobrevida. Também realizamos a correlação temporal entre estes parâmetros. Em ratos anestesiados, avaliamos a influência da injeção i.c.v. de TsTX (0,116μg) sobre os parâmetros cardiovasculares e sobre a atividade simpática renal, e o envolvimento dos receptores GABAérgicos e glutamatérgicos ionotrópicos do HDM sobre as alterações cardiovasculares produzidas pela injeção i.c.v. desta dose de TsTX. Dessa forma, nossos principais achados foram: i) a comprovação de uma elevada sensibilidade do SNC à toxicidade exercida pela TsTX; (ii) a relação dose-dependente entre o recrutamento de estruturas encefálicas e o comprometimento cardiovascular (elevação da PAM e FC); (iii) a constatação de uma alta correlação positiva entre a prematuridade das alterações no ritmo cardíaco e a latência para o agravo destas respostas; (iv) uma elevada correlação positiva entre a latência para o agravo das respostas pressora e taquicárdica e o tempo de sobrevida; (v) o aumento da responsividade do nervo simpático renal e (vi) a fundamental participação dos receptores glutamatérgicos ionotrópicos nas respostas hipertensiva e taquicárdica mediadas pela ação central da TsTX. Nossos dados corroboram a hipótese de que o SNC tem uma participação importante na sintomatologia envolvida no envenenamento escorpiônico e sugerem que os circuitos neurais recrutados pela TsTX, cuja ativação resulta em uma variedade de alterações fisiológicas e comportamentais, dependem da ativação dos diferentes subtipos de receptores glutamatérgicos ionotrópicos presentes no HDM. __________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: The scorpion envenoming syndrome is an important public health problem, in tropical countries, due to its high incidence and potential severity of symptoms, mainly in children. Some studies address the high sensitivity of the central nervous system (CNS) to the action of the venom toxic components and show that the cardiorespiratory manifestations, which are considered the main causa mortis of scorpion envenoming, are consequences of the autonomic nervous system activation, especially of the sympathetic pathway. However, the origin of this modulation remains unclear. Considering the important CNS participation on the genesis of the cardiovascular responses evoked by the central action of Tityustoxin (TsTX, a α-type toxin extracted from the Tityus serrulatus scorpion venom), and the similarity of these responses, to those mediated by dorsomedial hypotalamus (DMH) in the cardiovascular responses during defense reaction, the central aim of this work was to evaluate the role of DMH on the cardiovascular responses to TsTX i.c.v. injection in rats. To this end, in awake rats, we evaluated the influence of i.c.v. injections of different TsTX doses (1.74μg; 0.174μg; 0.116μg and 0.087μg) on cardiovascular parameters, on lethality percentage and survival time, and a time correlation between these parameters. In anesthetized rats, we evaluated the influence of TsTX i.c.v. injection (0.116μg) on cardiovascular parameters and renal sympathetic nerve activity, and the involvement of GABA and ionotropic glutamate receptors of HDM on cardiovascular alterations induced by i.c.v. injection of this TsTX dose. Thus, our main findings were: i) the evidence of CNS high sensitivity to TsTX toxicity; (ii) the dose-dependent relationship between brain structures recruitment and the cardiovascular compromise (MAP and HR enhance); (iii) a high positive correlation between prematurity of the changes in heart rate and the latency to the grievance of these responses; (iv) a high positive correlation between latency to the grievance of the pressor and tachycardic responses and survival time; (v) the responsiveness increased of renal sympathetic nerve activity and (vi) the essential participation at glutamate receptors in the hypertensive and tachycardic responses mediated by central action of TsTX. Our data support the hypothesis that CNS plays an important role in the symptomathology of scorpion envenomation and suggest that the central circuit recruited by TsTX, whose activation results in an array of physiological and behavioral changes, depend on the activation of the different subtypes of DMH ionotropic glutamate receptors.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Desportos, Programa de Pós-Graduação em Educação Física, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-02-09T03:13:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337196.pdf: 1933000 bytes, checksum: 5891a8bdc226b154e7d6f2717906e7a1 (MD5) Previous issue date: 2015 / O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos do treinamento com exergames e exercícios físicos aeróbios no desempenho cognitivo e na variabilidade da frequência cardíaca. Trinta e seis indivíduos com idade igual e superior a 55 anos, sem comprometimento cognitivo ou cardiovascular, foram randomizados e divididos em dois grupos de intervenção: a) programa de treinamento com exergames, utilizando jogos que simulam atividades esportivas (Kinect Sports Ultimate Collection), por meio do Xbox 360 Kinecttm; b) programa de treinamento com exercícios aeróbios, realizado em ciclo ergômetros e esteiras, com intensidade moderada (40-60% da frequência cardíaca de reserva). O desempenho cognitivo (função executiva, função psicomotora, atenção visual, memória de curto prazo, memória de trabalho e memória tardia) foi verificado por meio de uma bateria de avaliação cognitiva computadorizada: "bateria Cogstate" e pela avaliação cognitiva global (Mini Exame do Estado Mental). Os indicadores (RR, SDNN, RMSSD, LF, HF e LF/HF) da variabilidade da frequência cardíaca (VFC) foram coletados em repouso e durante execução dos testes cognitivos. Após 12 semanas de treinamento, os participantes do grupo exergames apresentaram diferença na função executiva e na memória tardia, e os participantes do grupo aeróbio, diferenças na função executiva, memória de curto prazo, memória tardia e na cognição global. O grupo exergames apresentou variação nos indicadores LF, HF e LF/HF durante a execução nos testes de função psicomotora e memória de curto prazo, e no LF/HF e memória de trabalho, em relação ao repouso na avaliação inicial. E no indicador LF/HF durante a realização do teste de atenção visual na avaliação final.No grupo aeróbio houve diferença em relação ao repouso nos indicadores LF e HF durante o desempenho do teste de atenção e no indicador LF/HF no teste de memória de trabalho, na avaliação inicial. Na avaliação final entre os indicadores LF e HF no desempenho do teste de memória tardia e do LF/HF na função executiva. O grupo aeróbio mostrou aumento no indicador LF/HF durante o teste de memória de trabalho após o treinamento. Tais resultados podem contribuir para ampliação de informações sobre a influência da prática de exergames e exercício aeróbio no desempenho cognitivo e na VFC.<br> / Abstract : The purpose of the present study was to investigate the effects of the training program with exergames and aerobic exercises on cognitive performance and heart rate variability. Twenty-seven individuals aged 55 years or older, without cognitive or cardiovascular impairment, completed 12 weeks of training. For the training program with exergames, were used games that simulate sports activities through the Xbox 360 Kinecttm (Kinect Sports Ultimate Collection). In the aerobic training program, cycle ergometers and treadmills, with moderate intensity (40-60% of heart rate reserve) exercise were used. The cognitive performance (executive function, psychomotor function, visual attention, short-term memory, working memory and delayed recall) was verified through a battery of computerized cognitive assessment: "Cogstate battery" and the global cognitive assessment (Mini-Mental State Examination). Indicators (RR, SDNN, RMSSD, LF, HF and LF/HF) of heart rate variability (HRV) were collected at rest and during execution of cognitive tests. After 12 weeks of training, the participants of exergames group showed differences in executive function and delayed recall, and the participants in the aerobic group showed differences on the executive function, short-term memory, delayed recall and global cognition. The exergames group showed differences in indicators LF, HF and LF/HF while running in psychomotor function tests and short-term memory, and LF/HF andworking memory, in relation to rest at baseline. And in LF/HF index during the performance of visual attention test in the final assessment. In the aerobic group there was difference in relation to rest in LF and HF indicators for the performance of attention test and LF/HF index on the working memory test at baseline. And in the final assessment between the LF and HF indicators on the performance of the delayed recall test and LF/HF in executive function. The aerobic group showed an increase in LF/HF index during working memory test after training. These results can contribute to the expansion of information on the influence of practice exergames and aerobic exercise on cognitive performance and HRV.