O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos morfofuncionais da leptina por 7 e 28 dias sobre os rins e a participação do Sistema Renina-Angiotensina (SRA) neste processo. Os animais tratados por 7 dias apresentaram redução no ganho de peso (p<0.05), aumento da pressão arterial (PA, p<0.05), sem alterar o fluxo plasmático renal (FPR) e o ritmo de filtração glomerular (RFG). Também apresentaram aumento na fração de filtração (FF) (p<0.05), diurese e natriurese. No tratamento por 28 dias houve aumento da PA (p<0.05), queda no FPR (p<0.05), nenhuma alteração no RFG e aumento na FF (p<0.05). Ambos os grupos apresentaram hipertrofia glomerular, aumento da expressão de desmina e proteinúria. Os estudos in vitro demonstraram que a leptina (100 e 250 ng/ml, por 72 horas) induziu apoptose de células mesangiais. Em conclusão, o tratamento com leptina por 7 e 28 dias levou a alterações morfofuncionais renais e estas são, em grande parte, normalizadas com o Losartan, evidenciando uma interação entre a leptina e o SRA sistêmico, neste modelo experimental. / The aim of this study was to evaluate the morphofunctional effects of leptin treatment for 7 and 28 days on kidneys and the participation of the Renin-Angiotensin System (RAS) in this process. The animals treated for 7 days showed a reduction in weight gain (p<0.05), enhancement of blood pressure (BP; p<0.05), without changes in renal plasmatic flow (RPF) and glomerular filtrtaion rate (GFR). They also showed an increase in filtration fraction (FF) (p<0.05), diuresis and natriuresis. In the treatment for 28 days, there was an increase in BP (p<0.05), decrease in RPF (p<0.05), no changes in GFR and enhacement in FF (p<0.05). Both groups showed glomerular hypertrophy, increased desmin staining and proteinuria. The in vitro studies showed that leptin (100 and 250 ng/ml for 72 hours) induced mesangial cells apoptosis. In conclusion, the treatment with leptin for 7 and 28 days induced renal morphofunctional changes and they are mostly normalized by Losartan, demonstrating an interaction between leptin and systemic RAS, in this experimental model.

Dados recentes apontam para a participação do sistema renina-angiotensina (SRA) em processos metabólicos, devido a sua presença local em tecidos metabolicamente ativos, como o tecido adiposo, e sugerem que tais tecidos também poderiam ser alvos dos bloqueadores do SRA. Por isso, investigamos possíveis efeitos diretos de bloqueadores do SRA no metabolismo celular de adipócitos isolados. Para isso, adipócitos isolados foram tratados com doses não tóxicas de Alisquireno ou Captopril ou Losartan. Após 24 horas, as capacidades lipolíticas, lipogênicas e oxidativas foram. Como resultados, o fármaco Alisquireno, aumentou a relação entre oxidação de glicose e incorporação desse substrato em lipídeos, enquanto o Captopril diminuiu a incorporação de glicose em lipídeos, particularmente na fração glicerol do TAG mediante estímulo com insulina, bem como diminuiu a expressão gênica de receptor de (pró) renina. Como conclusão, os fármacos Captopril e Alisquireno podem modular o metabolismo lipogênico e oxidativo de adipócitos isolados, mas de maneiras diferentes. / Recent data indicate a participation of the renina-angiotensin system (RAS) in metabolic process, due its local presence in tissues, like the adipose tissue, and suggests that these tissues could be targets of RAS blockers. Therefore, we have studied the possible effects of pharmacological RAS blockers in isolated fat cells. Therefore, fat cells were isolated of epididymal fat pad and treated with non toxic doses of Aliskiren or Captopril or Losartan. After 24 hours, the lipolytic, lipogenic and oxidative capacity were tested in their respective spontaneous and stimulated states. Also, gene expression of PPARg and RAS components were verified. The results showed Aliskiren increases the relation between oxidation and lipogenesis from glucose, whereas Captopril decreased glucose lipid incorporation, especially in glicerol fraction of triglyceride when insulin stimulus exist, and the Renin receptor gene expression. As a conclusion, Captopril and Aliskiren can directly modulate lipogenic and oxidative metabolism of isolated fat cells, but in a different way.

Este estudo investigou a ação do equilin em artérias mesentéricas de resistência de ratas espontaneamente hipertensas, bem como o mecanismo envolvido, comparando com o 17<font face=\"Symbol\">b-estradiol. O equilin promoveu vasodilatação equivalente à do 17<font face=\"Symbol\">b-estradiol, não demonstrando diferença nas respostas observadas em ratas intactas e ovariectomizadas. A resposta ao equilin não foi alterada pelo antagonista de receptores de estrógeno. De modo similar, a remoção do endotélio ou a inibição da adenilato ciclase, da PKA, da óxido nítrico sintase, da guanilato ciclase e da PKG não afetou o relaxamento ao equilin. Além disso, a incubação com diferentes bloqueadores de canais de K+ não alterou o relaxamento ao equilin. O equilin diminuiu a contração ao CaCl2 e ao BAYK 8644 (ativador de canais de Ca2+ do tipo-L), porém, não modificou a contração à cafeína (que promove liberação de Ca2+ do retículo sarcoplasmático), demonstrando que o efeito relaxante do equilin em artérias mesentéricas de ratas espontaneamente hipertensas se deve predominantemente ao bloqueio de canais de Ca2+ do tipo L. / The present study investigated the action of equilin in mesenteric resistance arteries from female hypertensive rats. Mechanisms contributing to equilin-induced effects were determined, comparing with 17<font face=\"Symbol\">b-estradiol. Equilin evoked vasodilatation equivalent to that of 17<font face=\"Symbol\">b-estradiol, with no difference between intact and ovariectomized rats. Equilin-induced response was not altered by the estrogen receptor antagonist. Similarly, endothelium removal or inhibition of adenylyl cyclase, PKA, NOS, guanylate cyclase or PKG did not affect the relaxation to equilin. Furthermore, the relaxation to this hormone was not altered after incubation with K+ channel blockers. Equilin reduced contraction induced by both CaCl2 and Bay K 8644 (an L-type Ca2+ channel activator), however, it was unable to alter caffeine-induced contraction (via Ca2+ release from the intracellular stores), demonstrating that equilin vasorelaxant effect in mesenteric arteries from female spontaneously hypertensive rats occurs predominantly due to blockade of L-type Ca2+ channels.

Alguns estudos têm procurado avaliar os efeitos de variações no consumo de sal no período perinatal sobre o sistema cardiovascular da prole na idade adulta. No entanto, várias questões ainda estão em aberto e merecem estudos adicionais. Neste trabalho, o OBJETIVO foi estudar os efeitos da sobrecarga ou restrição crônica de sal na dieta de ratas Wistar, durante a gestação e amamentação, sobre o ganho de peso, a pressão arterial, a sensibilidade da pressão arterial ao sal (SENS), a atividade do sistema renina-angiotensina, o conteúdo renal de angiotensina II (AII) e a densidade glomerular da prole na idade adulta. Foram utilizadas fêmeas Wistar recém desmamadas divididas em 3 grupos: dieta hipo (HO - 0,15% NaCl - n=8), normo (NR - 1,27% NaCl - n=9) ou hipersódica (HR – 7,94% NaCl - n=8). A quantidade de dieta oferecida as ratas foi ajustada de forma a manter o peso semelhante entre os grupos. A fecundação ocorreu na 12a semana de idade. Após o parto, apenas 8 recém-nascidos (4 machos e 4 fêmeas) permaneceram com suas mães. Após o desmame, todos os animais da prole receberam apenas a dieta NR. O peso materno foi medido diariamente até a fecundação e semanalmente até uma semana após o parto. O peso da prole foi medido no dia do parto e semanalmente após o desmame. A PA caudal materna foi medida desde uma semana antes da fecundação até uma semana após o parto (PAc-M) e na prole entre a 8a e a 12a semana de idade (PAc-P). Ao completar 12 semanas de idade, a prole foi submetida a um teste de sensibilidade da pressão arterial ao sal (1 semana em dieta HO seguido por 1 semana em dieta HR ou vice-versa). A atividade de renina plasmática (ARP) foi medida ao final de cada semana do teste. O conteúdo renal de AII foi avaliado por imunohistoquímica e a densidade glomerular através de um método histológico apropriado para a contagem dos glomérulos. Durante a gestação, a PAc-M foi maior no grupo HR (p<0,05) comparado aos grupos HO e NR. Na prole: 1) o ganho de peso foi menor (p<0,05) no grupo HR; 2) a PAc-P foi maior (p<0,05) no grupo HR, 3) a SENS foi menor (p<0,05) nas fêmeas do grupo HR, 4) uma semana de sobrecarga salina reduziu a ARP (p<0,05 vs. ARP após uma semana de restrição salina) nos grupos HO e NR, mas não no HR, 5) o conteúdo de AII renal foi maior no grupo HR (p<0,05) e 6) não foram observadas diferenças na densidade glomerular entre os grupos. Sobrecarga crônica de sal na dieta durante a gestação e amamentação, aumenta a pressão arterial materna e leva a um distúrbio na modulação do sistema renina-angiotensina sistêmico e renal da prole, o que pode explicar os maiores níveis pressóricos e a menor sensibilidade ao sal da prole do grupo HR na idade adulta e também acarreta um menor ganho de peso destes animais. / To study the influence of high salt intake during pregnancy and lactation on body weight, blood pressure, and the function of the renin-angiotensin system in adult rats. METHODS AND RESULTS: Female Wistar rats received a low (0.15 NaCl), normal (1.30), or high (8% diet) salt diet. Mating occurred on the 12th week of age. From weaning, the offspring received normal salt diet. Weekly tail-cuff blood pressure and body weight measurements were performed during pregnancy and in the offspring (body weight since weaning and tail-cuff blood pressure between the 8th and the 12th week of age). Salt sensitivity of the blood pressure was evaluated and plasma renin activity determinations were performed in the 12-week-old offspring. Immunohistochemistry for renal angiotensin II was performed in the adult offspring. Renal mass and the number of glomeruli were determined. Tail-cuff blood pressure was higher in salt overloaded dams than in normal and low salt ones. In the adult offspring from the high salt dams, lower body weight, higher tail-cuff blood pressure, lower salt sensitivity in females, and increased kidney angiotensin II were observed. Plasma renin activity did not change with changes in salt intake in the adult offspring submitted to high salt environment during the perinatal period. In the offspring, renal mass and the number of glomeruli were not influenced by the dams' salt intake. CONCLUSIONS: Salt overload during pregnancy and/or lactation has long-term effects on offspring's body weight and blood pressure. In addition, high salt diet during the perinatal period induced renin-angiotensin system functional disturbances in the offspring.

Durante a gestação normal, o Sistema Renina-Angiotensina (SRA) exerce um papel de importância vital no balanço de sais, pressão sanguínea e homeostase da água e, consequentemente, no bem estar da mãe e do feto. Neste sentido, merece destaque não apenas o SRA clássico (descrito inicialmente como um sistema puramente endócrino), mas também, o SRA local, no caso, útero-placentário, onde nos tecidos materno e fetal os vários componentes do sistema se comportam diferentemente, sob regulação e estímulos locais. As perturbações do SRA útero¬placentário podem ocasionar hemorragias e redução no fluxo sanguíneo entre mãe e feto, podendo levar, como conseqüência, à pré-eclampsia e crescimento intrauterino retardado. Já é bem estabelecido que disfunções da tireóide, como ocorre no hipertiroidismo, promovem amplas alterações no sistema cardiovascular, agindo sobre contratilidade cardíaca, débito cardíaco, pressão sanguínea e resistência vascular sistêmica. Sabe-se ainda que o hipertiroidismo é responsável por importantes alterações sobre o padrão de comportamento dos vários componentes do SRA no indivíduo adulto, e estas, por sua vez, também estão envolvidas com o aparecimento de alterações cardiovasculares. Assim, o SRA está sob influência direta dos níveis plasmáticos dos hormônios tiroideanos e parece apresentar um importante papel na modulação do trofismo cardíaco induzido pelos mesmos. Embora a associação entre estes dois sistemas endócrinos tenha sido já observada em indivíduos adultos, o conhecimento a respeito dessas interações durante um período crítico de desenvolvimento do sistema cardiovascular, onde o coração representa importante alvo de ação desses dois sistemas hormonais, ainda é escasso. Diante do exposto, este estudo teve como objetivo avaliar na prole o efeito do hipertiroidismo nos componentes do SRA ao longo do período gestacional, destacando que a prevalência desta doença em mulheres que se encontram durante o período gestacional é bastante elevada e suas consequências, no que diz respeito ao sistema cardiovascular da prole, amplamente desconhecidas. / During normal gestation, the Renin-Angiotensin System (RAS) exerts an important role in salt balance, blood pressure and water homeostasis and, consequently, in the welfare of mother and fetus. In this sense, it is important to highlight both the classic RAS (initially described as a purely endocrine system), and the local RAS, in this case, the uteroplacental RAS, where the different components of this system in maternal and fetal tissues behave differently, under local regulation and stimuli. The disruption of uteroplacental RAS can cause bleeding and reduced blood flow between mother and fetus and may lead to pre-eclampsia and intrauterine growth restriction. Its well known that thyroid dysfunction, as occurs in hyperthyroidism, promotes deep changes in cardiovascular system, by acting on cardiac contractility, cardiac output, blood pressure and systemic vascular resistance. Moreover, hyperthyroidism is responsible for important alterations in the expression of distinct components of RAS, which are, in turn, involved with the onset of cardiovascular changes. Thus, the RAS is under direct influence of plasma levels of thyroid hormones and seems to play an important role in the modulation of cardiac tropism induced by these hormones. Although the association between these two endocrine systems have already been observed in adult individuals, the knowledge about this interaction during the critical period of cardiovascular development where the heart is an important target of the action of these two hormonal systems is still poor. Considering the information given above, this study aimed to evaluate the effect of hyperthyroidism in the RAS components on the offspring during the gestational period, considering that this disease is highly prevalent in pregnant women and its consequences upon the cardiovascular system of the offspring are largely unknown.

A obesidade é caracterizada por inflamação no tecido adiposo. A angiotensina II via receptor AT1 induz estresse oxidativo e inflamação vascular. O tecido adiposo perivascular (PVAT) circunda os vasos sanguíneos, possui ação parácrina na parede vascular e é classificado como marrom e branco, sendo que este último é mais propenso à inflamação. No presente estudo, avaliamos os compenentes do sistema renina-angiotensina no PVAT marrom (da aorta torácica - AT) e branco (do leito mesentérico LM) de camundongos controles (CT) e obesos (OB). O RNAm para angiotensinogênio tanto no PVAT marrom quanto no PVAT branco foi reduzido em camundongos OB. A atividade enzimática da ECA 1 foi reduzida no PVAT-marrom do grupo OB em comparação ao grupo CT e foi semelhante no PVAT branco dos dois grupos. No PVAT marrom, o conteúdo proteico do receptor AT1 (AT1R) foi semelhante nos grupos CT e OB e o receptor AT2 (AT2R) não foi detectado no PVAT dos dois grupos. No PVAT branco, o conteúdo proteico dos receptores AT1 e AT2 foi aumentado no grupo OB. A expressão de RNAm do receptor CCR2 de MCP-1 (proteína quimiotáxica de monócitos) no PVAT marrom foi semelhante nos dois grupos, mas foi aumentada no PVAT branco do grupo OB. O conteúdo proteico da MCP1 foi aumentado no PVAT branco do grupo OB em relação ao grupo CT. O tratamento de camundongos OB com antagonista de receptor AT1 de angiotensina II (losartana; 10 mg/kg) por 30 dias, não reverteu os parâmetros que caracterizam a obesidade e não diminuiu a expressão de MCP-1 no PVAT branco. Em relação aos componentes do sistema renina-angiotensina, o PVAT marrom e o PVAT branco respondem de maneira diferente à obesidade induzida por dieta hiperlipídica. / Obesity is characterized by inflammation in adipose tissue. Angiotensin II/AT1 receptor pathway induces oxidative stress and vascular inflammation. Perivascular adipose tissue surrounds blood vessels and has paracrine actions in the vascular wall. It is classified as brown and white being the last one more willing to inflammation. In the present study, we evaluated the components of renin angiotensin-system in brown (thoracic aortic - TA) and white (mesenteric bed MB) PVAT in lean (CT) as well as in obese mice (OB). RNAm content of angiotensinogen in brown and white PVAT was reduced in obese mice. ACE1 activity was lower in brown PVAT of OB group in comparison to CT group and it was similar to white PVAT in both groups. In brown PVAT, protein content of AT1 receptor (AT1R) was similar to CT and OB groups and AT2 receptor (AT2R) was not detected in both groups. In white PVAT, protein contents of AT1R and AT2R were increased in obese group. RNAm expression of CCR2 receptor from MCP1 (monocytes chemoctatic protein 1) in brown PVAT was similar to both groups; however, it was increased in white PVAT in OB group. Protein content of MCP1 was increased in white PVAT in OB group. Treatment in obese mice with angiotensin II receptor blocker (ARB) (losartan; 10 mg/kg) for 30 days did not reverse the parameters which characterize obesity and did not diminish MCP-1 expression in white PVAT. In relation to the components of renin angiotensinsystem, brown and white PVAT responded differently to high-fat diet obesity.

O receptor de angiotensina II tipo I (AT1) tem uma participação importante no desenvolvimento de hipertrofia cardíaca (HC). Anteriormente, demonstramos que o receptor AT1 participa da hipertrofia cardíaca induzida pelo treinamento de força em ratos (Baraúna, et. al., 2008). Com isso, nosso objetivo foi estudar a participação do receptor AT1 na sinalização intracelular relacionada com a HC em ratos submetidos a uma sessão de exercício de força (SEF). Para isso, realizamos um experimento com seis grupos de animais: controle (CO), exercitado e sacrificado 5 minutos após o exercício (Exe 5), exercitado e sacrificado 30 minutos após o exercício (Exe 30), controle Losartan (CO Los), tratado com losartan, exercitado e sacrificado 5 minutos após o exercício (Exe 5 Los), tratado com losartan, exercitado e sacrificado 30 minutos após o exercício (Exe 30 Los). O protocolo de exercício consistiu de 4 séries de 12 repetições com intervalo de 1min e 30s entre as séries, estímulo de 10-15v, 0,3s de duração e 4s de intervalo entre cada repetição com uma sobrecarga de 80% de 1RM. Os resultados mostram que no grupo Exe 5 e Exe 30 ocorreu um aumento na fosforilação da proteína AKT, enquanto a fosforilação da mTor e da ERK 1/2 foram aumentadas somente no grupo Exe 30, sendo estes efeitos bloqueados pelo uso do losartan nos grupos Exe 5 Los e Exe 30 Los. Para a proteína JNK, P38 e p70S6K não foram observadas nenhuma diferença entre os grupos. Esses resultados, juntamente com dados anteriores do nosso laboratório, demonstram que o receptor AT1 tem participação na ativação da AKT, mTOR e ERK 1/2 após uma SEF / The angiotensin II type I (AT1) receptor has an important participation in the development of cardiac hypertrophy (CH). Previously, we showed that AT1 receptor participates in the cardiac hypertrophy induced by resistance training in rats (Barauna, et. al., 2008). We studied AT1 receptor signaling pathways related to the CH in rats submitted to a session of strength exercise (SRE). We used male Wistar rats randomly divided into six groups: control (CO), exercised and sacrificed 5 minutes after training (Ex 5); exercised and sacrificed 30 minutes after exercise (Ex 30); control treated with Losartan (Co Los); treated with Losartan, exercised and sacrificed 5 minutes after exercise (Ex 5 Los); treated with Losartan, exercised and sacrificed 30 minutes after exercise (Ex 30 Los). The exercise session consisted of 4 sets of 12 repetitions with an interval of 1min and 30s among sets, stimulation of 10-15v, 0.3 in length and 4s in between repetitions with an work (80% of 1RM). The results show that in Exe 5 and Exe 30 groups acurred an increase in protein phosphorylation of AKT, whereas the phosphorylation of mTOR and ERK 1/2 were increased only in Exe 30 group. These effects were blocked by the use of losartan in Exe 5 Los and Exe 30 Los groups. Protein JNK, p70S6K and p38 expression was not differente among groups.These results, together with our previous data show that the AT1 receptor has a role in the activation AKT/mTOR and ERK 1/2 signaling pathway after a SRE

Para avaliar a participação do Sistema Renina Angiotensina (SRA) sobre a Hipertrofia Cardíaca de ratos submetidos ao treinamento resistido foram usados 64 Ratos Wistar divididos em: Controle (CO), Treinado (TR), Controle ou Treinado tratados com Losartan (LOS; 20mg/Kg/d) e Controle ou Treinado tratados com NaCl (SAL; 1% água). Os grupos treinados realizaram quatro séries de 12 repetições, 5x/sem/8sem, com 65-75% de 1 Repetição Máxima (1RM). Hipertrofia cardíaca (HC), obtida pelo peso úmido do VE corrigida pelo Peso Corporal (PC) e pelo Ecocardiograma, foi observada no grupo TR com nenhum prejuízo da função ventricular. Tanto a atividade da ECA, sistêmica e local no coração, quanto a atividade da renina não foram alteradas pelo treinamento. Pelo Western blotting, não foi observada alteração na expressão protéica do peptídeo angiotensina II e do receptor de angiotensina II AT2 com o treinamento, mas observou-se aumento de 31,4% na expressão dos receptores de angiotensina II AT1 no grupo TR. A administração do antagonista do receptor AT1 (Losartan) preveniu a HC em resposta ao treinamento. O mesmo não foi observado com a administração do NaCl para inibir a atividade da Renina. Esses resultados sugerem que o receptor AT1 participa da HC induzida pelo treinamento resistido sem a necessidade de aumento na concentração da angiotensina II cardíaca. Um possível mecanismo seria a ativação direta dos receptores AT1 pelo estiramento mecânico dos cardiomiócitos. / Besides the well-known effects of Ang II in stimulating pathological pressure-overload cardiac hypertrophy, little information is available regarding the role of Renin-Angiotensin-System (RAS) in the exercise training-induced cardiac hypertrophy. 64 male Wistar rats were divided into 6 groups: Sedentary, Trained, Sedentary or Trained + Losartan (20mg/Kg/d, n=7) and Sedentary or Trained + Salt (NaCl 1%). The exercise protocol was: 4 x 12 bouts, 5x/week during eight weeks, with 65-75% of 1 Repetition Maximum (1RM). Using LV weight/body weight ratio and echocardiography (ECHO) we have observed cardiac hypertrophy in the Trained group without any impairment in ventricular function. Concerning RAS, neither ACE, analyzed by fluorometric assay (systemic and local in the heart), nor Renin, by RIA, activities were altered after resistance training. In addition, using Western blotting analysis, no change was observed in cardiac Ang II and AT2 receptor levels while the AT1 receptor expression was upregulated in Trained groups by 31,4%. Administration of the AT1 receptor antagonist (losartan) prevented left ventricle hypertrophy in response to the resistance training. The administration of salt, to inhibit the renin activity, did not prevent the cardiac hypertrophy. These results suggest that the AT1 receptor participates in resistance-training-induced cardiac hypertrophy without an increase in Ang II concentration in the heart. A possible mechanism is the direct activation of the AT1 receptor by mechanical stretching of cardiomyocytes.

O Sistema renina-angiotensina (SRA) tem sido relatado como um importante modulador de processos inflamatórios e imunológicos, incluindo a doença periodontal (DP). Estudos sugerem neste sistema um eixo alternativo (ECA-2 /ANG(1-7) /MAS) que atuaria como um contra-regulador de efeitos mediados pelo clássico eixo (ECA /ANGII /AT1). Sabe-se que bactérias periodontopatogênicas, como a Porphyromonas gingivalis (Pg), possuem componentes bioativos de membrana (ex. lipopolissacarídeos-LPS) capazes de induzir uma forte resposta imune no hospedeiro devido à liberação de citocinas nas células, entre elas Interleucina (IL)- 1&#x3B2;. Neste contexto, fibroblastos são as células mais abundantes nos tecidos periodontais e possuem em sua superfície celular receptores necessários para o reconhecimento da invasão bacteriana, ativando cascatas intracelulares, que levam à produção de citocinas. O objetivo deste estudo foi verificar se os eixos ECA/ ANGII/ AT1 e ECA-2/ ANG(1-7)/ MAS contribuem para a produção e/ ou regulação de citocinas inflamatórias (CI) por fibroblastos de gengiva humana (HGF) e ligamento periodontal humano (HPLF) estimulados por IL-1&#x3B2;. Após o pré-tratamento com Losartan e Ang (1-7) ou silenciamento mediado por RNA de interferência (RNAi) de AT1, HGF e HPLF foram estimulados por IL-1&#x3B2; por 3 horas (RNAm) ou 24 horas (proteína). Expressão de RNAm para AT1, MAS, ECA, ECA-2, IL-1&#x3B2;, TNF-&#x3B1;, IL-6, IL-8, IL-10, TGF-&#x3B2;, CXCL12, RANK-L e OPG foram avaliados por RT-qPCR e das proteínas IL-6, IL-8, ECA e ECA-2 por ELISA. Foi realizado também Western Blot para detecção de AT1 e ECA nos extratos celulares e dosagem de nitrito no sobrenadante das culturas. Ambos os subtipos de fibroblastos mostraram aumento da expressão de RNAm para AT1, IL-1&#x3B2;, IL-6, IL-8, TNF-&#x3B1; e OPG, quando estimulados por IL-1&#x3B2;. No entanto, apenas em HPLF foi observado aumento para MAS, ECA e TGF-&#x3B2;. Losartan e Ang (1-7) não modularam o transcrito, a secreção de CI e nem a produção de nitrito no sobrenadante das culturas, tanto em HGF como em HPLF. O silenciamento do receptor AT1 reduziu a secreção de IL-6 e IL-8 induzida por IL-1&#x3B2; em cultura de HGF e HPLF e aumentou a expressão gênica de OPG somente em HGF. Estes resultados sugerem que o silenciamento de AT1, mas não o bloqueio farmacológico deste receptor pelo antagonista Losartan, em HGF e HPLF, pode controlar a produção de IL-6 e IL-8, que por sua vez contribuem para a patogênese periodontal. / The renin-angiotensin system (RAS) has been reported as an important modulator of inflammatory and immune responses, including periodontal disease (PD). Studies suggest an alternative axis as part of this system (ACE-2 / ANG (1-7) / MAS) that would act as counter-regulatory to the classical axis (ECA / ANGII / AT1). It is known that periodontal bacteria such as Porphyromonas gingivalis (Pg) have bioactive components in their membrane (such as lipopolysaccharide-LPS) capable of inducing a strong immune response in the host due to the release of cytokines in cells, including interleukin (IL) - 1&#x3B2;. In this regard, fibroblasts are the most abundant cells in periodontal tissues and receptors needed for the recognition of bacterial invasion by activating intracellular cascades that lead to cytokine production. The aim of this study was to determine whether the axes ACE / ANGII / AT1 and ACE-2 / ANG (1-7) / MAS contribute to the production and / or regulation of inflammatory cytokines (IC) by fibroblasts of human gingiva (HGF) and human periodontal ligament (HPLF) stimulated IL-1&#x3B2;. After pre-treatment with Losartan, Ang (1-7) or silencing mediated by RNA interference (RNAi) of AT1, HGF and HPLF were stimulated by IL-1&#x3B2; for 3 hours (RNAm) or 24 hours (protein). Expression mRNA for AT1, MAS, ACE, ACE-2, IL-1&#x3B2;, TNF-&#x3B1;, IL-6, IL-8, IL-10, TGF-&#x3B2;, CXCL12, RANK-L and OPG was assessed by RT- qPCR and proteins IL-6, IL-8, ACE and ACE-2 by ELISA. Western Blot for the detection of AT1 and ECA and dosage of nitrite was also performed. Experiments stimulated by IL-1&#x3B2; showed a positive control for gene expression AT1, IL-1&#x3B2;, IL-6, IL-8, TNF-&#x3B1; and OPG in HGF and HPLF and MAS, ACE and TGF-&#x3B2; only HPLF. Losartan and Ang (1-7) did not modulate the transcription and secretion of IC and no nitrite production in the culture supernatant of HGF and HPLF. The silencing AT1 reduced IL-6 secretion and IL-8 induced by IL- &#x3B2; in cultured HGF and HPLF and increased OPG gene expression only HGF. These results suggest that silencing AT1, but not pharmacological blockade of this receptor by Losartan in HPLF and HGF, can control the production of IL-6 and IL-8, which in turn contribute to the pathogenesis of periodontal disease.

A doença periodontal (DP) compreende um grupo de lesões que afetam os tecidos periodontais de proteção (gengivite) e suporte (periodontite), envolvendo a participação de células residentes, células estruturais e mediadores inflamatórios. Pesquisas recentes do laboratório mostraram a existência de um Sistema Renina-Angiotensina (SRA) local no tecido gengival de ratos e sugeriram que o SRA pode participar do início e da progressão da DP. Portanto, os objetivos deste trabalho foram investigar no tecido gengival humano com saúde clínica (SG, n=12), com gengivite (G, n = 10) e com periodontite (P, n=12): 1) a existência e eventuais diferenças na expressão e localização dos componentes do SRA local; 2) in vitro, a funcionalidade deste possível SRA local quanto à formação de peptídeos do SRA. Após a coleta dos tecidos gengivais, foram utilizadas as seguintes técnicas: contagem celular de infiltrado inflamatório, reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR), imunoistoquímica, ensaio fluorimétrico para medida da atividade da enzima conversora de Ang I (ECA) e cromatografia líquida de alto desempenho de fase reversa (HPLC). Os dados foram analisados por meio de ANOVA a 1 e 2 critérios e adotado nível de significância de 5%. Houve expressão gênica de RNAm sem diferenças estatísticas entre as três condições testadas para angiotensinogênio, renina, ECA, ECA2, receptor de Ang I tipo 1(AT1) e receptor do tipo MAS. Houve imunomarcação para os receptores de angiotensina AT1 e AT2 sem diferenças estatísticas entre as três condições testadas. Os testes fluorimétricos mostraram maior atividade da ECA nas amostras afetadas por gengivite em comparação às amostras com saúde gengival (p<0,05). Nos ensaios de HPLC, quando os homogenatos de tecido gengival foram incubados com Ang I, houve formação de Ang 1-7, Ang 1-9 e Ang II. Para as formações de Ang 1-7 e Ang II não houve diferenças estatísticas entre as três condições clínicas, enquanto que para Ang 1-9 houve maior formação nas amostras afetadas por periodontite em comparação às amostras com saúde gengival (p<0,05). Pôde-se concluir que existe um SRA local no tecido gengival humano com diferenças entre SG,G e P, com maior atividade nos tecidos gengivais acometidos pela gengivite e periodontite. / Periodontal disease (PD) comprises a group of lesions that affect protection (gingivitis) and support periodontal tissues (periodontitis) involving the participation of resident and structural cells as well as inflammatory mediators. Recent research in our laboratory showed the existence of a local gingival renin-angiotensin system (RAS) in rats and suggested that it might participate in the initiation and progression of PD. Therefore, the aims of this study were to investigate in human gingival tissue under three conditions, clinically healthy (HG, n = 12), gingivitis (G) and periodontitis (P): 1) the existence and differences in the expression and localization of the local RAS components; 2) the in vitro functionality of this local RAS regarding the formation of RAS peptides. After surgical procedure the human gingival tissue was analyzed using the following techniques: inflammatory cells counting, quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR), immunohistochemistry, fluorimetric tests to measure Angiotensin converting enzyme (ACE) activity and reverse phase high performance liquid chromatography (HPLC). Data were submitted to 1 and 2 way ANOVA with significance level established at 5%. There was genic expression (mRNA) for angiotensinogen, renin, ACE, ACE2, AT1 and Mas receptors, without statistically significant difference between all the three conditions analyzed. There was positive immunostaining for AT1 and AT2 receptors in all three conditions without statistically significant difference. Fluorimetric assays showed increased ACE activity in the samples affected by gingivitis as compared to healthy controls (p<0.05). In HPLC assays there was release of Ang-1-7, Ang-1-9 and Ang II after incubation of gingival tissue homogenates with Ang I. The formation of Ang-1-7 and Ang II was not statistically significant different between the three conditions whereas in periodotitis group there was an increase in Ang-1-9 formation when compared to healthy tissues (p<0.05). Therefore, one can conclude that there is a local RAS in the human gingival tissues that is different between the studied conditions HG, G and P, with higher activity in gingivitis and periodontitis.