Orientador: Paulo Cezar Ceresini / Resumo: O controle biológico é um dos métodos do manejo integrado de doenças de plantas, sendo uma das únicas alternativas viáveis para minimizar o impacto da queima-das-folhas e morte súbita das pastagens do gênero Urochloa (anteriormente Brachiaria). A queima-das-folhas e morte de pastagens é causada pelo fungo basidiomiceto Rhizoctonia solani grupo de anastomose AG-1 IA. Em nosso estudo determinamos se isolados de espécies de Pseudomonas fluorescentes obtidos de solos supressivos do bioma Amazônico possuem potencial como agentes de biocontrole de R. solani AG-1 IA. Especificamente objetivamos: i. Efetuar o screening de isolados de Pseudomonas quanto ao potencial de biocontrole in vitro; ii. Realizar a identificação molecular dos isolados de Pseudomonas fluorescentes selecionados como potenciais agentes de biocontrole e iii. Determinar se as bactérias selecionadas in vitro mantém, in vivo, o potencial de biocontrole da queima-das-folhas e morte da braquiária. Três isolados foram selecionados como potenciais agentes biocontroladores nos testes de antagonismo in vitro (Amana, Poti e Yara), pois diminuíram significativamente tanto o crescimento micelial quanto a germinação de escleródios do patógeno. Com base em análises filogenéticas, os isolados Amana e Yara foram agrupados ao clado de Pseudomonas putida enquanto o isolado Poti foi agrupado em clado distinto de todos os demais, e possivelmente se constitui numa nova espécie. Nos testes in vivo, a inoculação via sementes não resultou... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Biological control is one of the methods of the integrated management of plant diseases, which is one of the only viable alternative to minimizes foliar blight impact and sudden death of pastures from genus Urochloa (previously known as Brachiaria). Foliar blight and death of pastures are caused by the fungus Rhizoctonia solani AG-1 IA. In our study, it was determined whether isolates from florescent Pseudomonas obtained from suppressive soils on the Amazon biome had potential as biocontrol agents of Rhizoctonia solani AG-1 IA. Specifically, we aim to: i. Carry out a screening of isolates from Pseudomonas to evaluate their potential as in vitro biocontroler; ii. Perform molecular identification of selected fluorescent Pseudomonas isolates as potential biocontrol agents; and iii. Determine whether in vitro selected bacterial strains maintain the biocontrol ability in vivo of foliar blight and sudden death of braquiária. Three isolates were selected as potential biocontoller agents in vitro antagonism tests (Amana, Poti e Yara), which reduced significantly mycelial growth and sclerotia germination of pathogen. Based on phylogenetic analyzes, Amana and Yara isolates were grouped to the clade belonging to Pseudomonas putida and Poti isolated was grouped in a distinct clade, and should to constitute a new species. For in vivo tests, seed inoculation did not resulted in R. solani AG-1 IA control. On the other hand, in foliar application of biocontrol agent, Amana isolated was the m... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-05-18Bitstream added on 2014-06-13T19:16:32Z : No. of bitstreams: 1 franco_hbj_me_jabo.pdf: 828158 bytes, checksum: 3da61c47398d1434dae4fea307ba8e5b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivou-se estudar diferentes metodologias de inoculação de Fusarium tucumaniae em folhas destacadas e em plântulas de soja, visando à caracterização da reação de resistência de cultivares de soja à F. tucumaniae. O trabalho foi desenvolvido em diferentes etapas relacionadas a seguir: obtenção e manutenção do inóculo; avaliação do desenvolvimento do patógeno em diferentes meios de cultura e diferentes luminosidades; avaliação de diferentes métodos de inoculação em folhas destacadas acondicionadas em papel de filtro e em solo, incubadas em duas temperaturas; avaliação de métodos de inoculação em plântulas cultivadas em casa de vegetação (primavera/verão e outono/inverno), reação de cultivares de soja a F. tucumaniae avaliadas em folhas destacadas, reação de cultivares de soja a F. tucumaniae avaliadas em plântulas (outono/inverno). As análises dos resultados permitiram concluir maior esporulação do fungo em meio de grãos de sorgo. As metodologias de inoculação de plântulas foram bem sucedidas na época de outono/inverno 2005, observando-se infecção das plântulas, principalmente de variedades suscetíveis, e os sintomas típicos da doença ocorreram em todos os métodos utilizados. FT-Cristalina apresentou maior nível de infecção da planta, para o método de grãos de sorgo (GS). O método de inoculação, em folhas destacadas, com grãos de aveia, promoveu maior infecção nas folhas e, o ambiente mais propício ao desenvolvimento dos sintomas da doença foi o solo a 23ºC. A cultivar FT-Estrela apresentou 90,2% de plântulas mortas, e CAC-1 46,9% (método GS). No método da folha destacada não foi possível caracterizar a reação das cultivares estudadas. / Detached leaves and seedlings of some cultivars were inoculated with F. tucumaniae using different methodologies in order to evaluated their resistance reaction. The conduction of the research work consisted of the following phases: obtainment and maintenance the isolate, evaluation of the pathogen growth and sporulation in different cultura media and luminosity; evaluation of different inoculation methods in detached leaves conditioned either in filter paper and soil being, incubated under two temperatures; evaluation of inoculation methods in soybean seedlings developed in greenhouse (Spring/Summer and Autumn/Winter); reaction of soybean cultivars to F. tucumaniae evaluated in detached leaves; reaction of soybean cultivars to F. tucumaniae evaluated in seedling (Autumn/Winter). The obtained results showed that the fungus sporulation was more intense when grown in a sorghum grain medium. Inoculation methodologies in seedlings showed best results when carried out during the 2005 Autumn/Winter period, because seedlings infection was observed, mainly in the susceptible cultivars, and all the employed methods allowed observation of the disease typical symptoms. FT-Cristalina was the cultivar in which the highest level of plant infection was observed, when the sorghum grain method (GS) was employed. The oat grain inoculation method in detached leaves, led to the highest leaf infection index, and the environmental condition which allowed the highest degree of leaf infection was in the soil under 23oC. FT-Estrela cultivar had 90.2% of their seedlings dead whereas for the CAC-1 cultivar that value was of 46.9% (method GS). Cultivars reaction could not be evaluated by means of the detached leaf method.

Orientador: Maria Aparecida Pessoa da Cruz Centurion / Banca: Vanoli Fronza / Banca: Antonio Orlando Di Mauro / Resumo: Objetivou-se estudar diferentes metodologias de inoculação de Fusarium tucumaniae em folhas destacadas e em plântulas de soja, visando à caracterização da reação de resistência de cultivares de soja à F. tucumaniae. O trabalho foi desenvolvido em diferentes etapas relacionadas a seguir: obtenção e manutenção do inóculo; avaliação do desenvolvimento do patógeno em diferentes meios de cultura e diferentes luminosidades; avaliação de diferentes métodos de inoculação em folhas destacadas acondicionadas em papel de filtro e em solo, incubadas em duas temperaturas; avaliação de métodos de inoculação em plântulas cultivadas em casa de vegetação (primavera/verão e outono/inverno), reação de cultivares de soja a F. tucumaniae avaliadas em folhas destacadas, reação de cultivares de soja a F. tucumaniae avaliadas em plântulas (outono/inverno). As análises dos resultados permitiram concluir maior esporulação do fungo em meio de grãos de sorgo. As metodologias de inoculação de plântulas foram bem sucedidas na época de outono/inverno 2005, observando-se infecção das plântulas, principalmente de variedades suscetíveis, e os sintomas típicos da doença ocorreram em todos os métodos utilizados. FT-Cristalina apresentou maior nível de infecção da planta, para o método de grãos de sorgo (GS). O método de inoculação, em folhas destacadas, com grãos de aveia, promoveu maior infecção nas folhas e, o ambiente mais propício ao desenvolvimento dos sintomas da doença foi o solo a 23ºC. A cultivar FT-Estrela apresentou 90,2% de plântulas mortas, e CAC-1 46,9% (método GS). No método da folha destacada não foi possível caracterizar a reação das cultivares estudadas. / Abstract: Detached leaves and seedlings of some cultivars were inoculated with F. tucumaniae using different methodologies in order to evaluated their resistance reaction. The conduction of the research work consisted of the following phases: obtainment and maintenance the isolate, evaluation of the pathogen growth and sporulation in different cultura media and luminosity; evaluation of different inoculation methods in detached leaves conditioned either in filter paper and soil being, incubated under two temperatures; evaluation of inoculation methods in soybean seedlings developed in greenhouse (Spring/Summer and Autumn/Winter); reaction of soybean cultivars to F. tucumaniae evaluated in detached leaves; reaction of soybean cultivars to F. tucumaniae evaluated in seedling (Autumn/Winter). The obtained results showed that the fungus sporulation was more intense when grown in a sorghum grain medium. Inoculation methodologies in seedlings showed best results when carried out during the 2005 Autumn/Winter period, because seedlings infection was observed, mainly in the susceptible cultivars, and all the employed methods allowed observation of the disease typical symptoms. FT-Cristalina was the cultivar in which the highest level of plant infection was observed, when the sorghum grain method (GS) was employed. The oat grain inoculation method in detached leaves, led to the highest leaf infection index, and the environmental condition which allowed the highest degree of leaf infection was in the soil under 23oC. FT-Estrela cultivar had 90.2% of their seedlings dead whereas for the CAC-1 cultivar that value was of 46.9% (method GS). Cultivars reaction could not be evaluated by means of the detached leaf method. / Mestre

Resumo: O fungo Thanatephorus cucumeris é responsável por várias doenças foliares em culturas de importância agrícola ou em espécies nativas na região Amazônica do país. Entre as doenças relatadas, a mancha areolada de Thanatephorus é considerada uma das mais importantes para a região. Neste estudo, baseando-se na ausência de informações sobre quais os grupamentos de anastomose (AG) de Rhizoctonia solani estão associados a plantas hospedeiras na Amazônia, foi testada a hipótese de que os isolados de T. cucumeris oriundos de seringueira e citros e outras espécies cultivadas ou nativas pertencem a grupamentos de anastomose distintos. Assim, os isolados de T. cucumeris foram caracterizados citomorfologicamente, por meio da caracterização cultural, grupamento de anastomose e molecular. Esta última baseou-se na observação da variação associada a seqüências da região ITS-5,8S do rDNA. Também não há informação sobre a patogenicidade cruzada, à seringueira, de isolados provenientes de outras espécies de plantas da Amazônia. Então, por meio do teste de patogenicidade cruzada foi testada uma segunda hipótese, a de que isolados de T. cucumeris de hospedeiros distintos são patogênicos também à seringueira. O estudo teve como objetivo elucidar aspectos importantes sobre a etiologia do patógeno, que podem ser relevantes para o manejo da doença. De forma importante, concluiu-se que a seringueira hospeda não apenas um, mas sim vários grupos de anastomose de R. solani como agente causal da mancha areolada. / Abstract: The fungus Thanatephorus cucumeris is responsible for causing several foliar diseases on important agricultural crops or on native species in the Amazonian area of the country. Among the diseases, Thanatephorus aerial blight is considered one of the most important in that region. In this study, based on the lack of information on which anastomosis groups (AG) of R. solani are associated with distinct hosts in the Amazon, we tested the hypothesis that T. cucumeris isolates from rubber tree, citrus and other cultivated or native species from the area belong to distinct AGs. So, T. cucumeris isolates were characterized based on cytomorphology, cultural characteristics, by anastomosis grouping, and molecularly. This last one was based on the observation of the variation associated with sequences of the ITS-5.8S region of the rDNA. There is no information about the cross pathogenicity (to rubber tree) of isolates from other Amazonian plant species. Based on cross-pathogenicity tests, a second hypothesis was tested stating that T. cucumeris isolates from distinct hosts are also pathogenic to rubber tree. This study had as objective to elucidate important aspects of the aetiology of the pathogen that can be relevant for managing the disease. We have found that the rubber tree hosts not only one, but several anastomosis groups of R. solani as causal agent of the aerial blight. / Orientador: Paulo Cezar Ceresini / Coorientador: Alcebíades Ribeiro Campos / Banca: Edson Luiz Furtado / Banca: Cesar Junior Bueno / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-07-17Bitstream added on 2014-06-13T19:39:07Z : No. of bitstreams: 1 campos_aps_me_ilha.pdf: 533716 bytes, checksum: a6a41f1f3c5a72bb618808187efbaa15 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O fungo Thanatephorus cucumeris é responsável por várias doenças foliares em culturas de importância agrícola ou em espécies nativas na região Amazônica do país. Entre as doenças relatadas, a mancha areolada de Thanatephorus é considerada uma das mais importantes para a região. Neste estudo, baseando-se na ausência de informações sobre quais os grupamentos de anastomose (AG) de Rhizoctonia solani estão associados a plantas hospedeiras na Amazônia, foi testada a hipótese de que os isolados de T. cucumeris oriundos de seringueira e citros e outras espécies cultivadas ou nativas pertencem a grupamentos de anastomose distintos. Assim, os isolados de T. cucumeris foram caracterizados citomorfologicamente, por meio da caracterização cultural, grupamento de anastomose e molecular. Esta última baseou-se na observação da variação associada a seqüências da região ITS-5,8S do rDNA. Também não há informação sobre a patogenicidade cruzada, à seringueira, de isolados provenientes de outras espécies de plantas da Amazônia. Então, por meio do teste de patogenicidade cruzada foi testada uma segunda hipótese, a de que isolados de T. cucumeris de hospedeiros distintos são patogênicos também à seringueira. O estudo teve como objetivo elucidar aspectos importantes sobre a etiologia do patógeno, que podem ser relevantes para o manejo da doença. De forma importante, concluiu-se que a seringueira hospeda não apenas um, mas sim vários grupos de anastomose de R. solani como agente causal da mancha areolada. / The fungus Thanatephorus cucumeris is responsible for causing several foliar diseases on important agricultural crops or on native species in the Amazonian area of the country. Among the diseases, Thanatephorus aerial blight is considered one of the most important in that region. In this study, based on the lack of information on which anastomosis groups (AG) of R. solani are associated with distinct hosts in the Amazon, we tested the hypothesis that T. cucumeris isolates from rubber tree, citrus and other cultivated or native species from the area belong to distinct AGs. So, T. cucumeris isolates were characterized based on cytomorphology, cultural characteristics, by anastomosis grouping, and molecularly. This last one was based on the observation of the variation associated with sequences of the ITS-5.8S region of the rDNA. There is no information about the cross pathogenicity (to rubber tree) of isolates from other Amazonian plant species. Based on cross-pathogenicity tests, a second hypothesis was tested stating that T. cucumeris isolates from distinct hosts are also pathogenic to rubber tree. This study had as objective to elucidate important aspects of the aetiology of the pathogen that can be relevant for managing the disease. We have found that the rubber tree hosts not only one, but several anastomosis groups of R. solani as causal agent of the aerial blight.

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Nas últimas décadas, a podridão vermelha das raízes da soja (PVR), causada pelo Fusarium solani f.sp. glycines (FSG), tornou-se uma doença séria nas regiões brasileiras onde já foi constatada, sendo a utilização de cultivares resistentes um componente fundamental de um sistema integrado de controle. Este trabalho teve por objetivo pesquisar estratégias de seleção de genótipos resistentes a PVR. Várias metodologias foram implementadas: avanço de progênies até a geração F7:2 e seleção em campo infestado, de progênies selecionadas em F2. Avaliou-se o cruzamento IAC 4 x Conquista em casa de vegetação (geração F3:2) e em campo infestado (gerações F3:2, F4:2 e F5:2), através de estudo de estabilidade e adaptabilidade das progênies. As metodologias de infecção em vasos de barro e bandejas de isopor em casa de vegetação foram comparadas para melhorar a eficiência de seleção; também foi feita análise de repetibilidade dos sintomas foliares da PVR, para otimização do número de avaliações necessárias para classificar o genótipo de soja quanto à reação ao FSG. Cultivares brasileiras de soja foram avaliadas em campo infestado. Em campo, as plantas foram avaliadas no estádio R5-6, com notas variando de 1 (ausência de sintomas) a 5 (100% da raiz principal com sintomas). Em casa de vegetação, as plantas foram avaliadas aos 35 dias pós-semeadura para sintomas radiculares e da parte aérea. Houve eficiência da seleção para resistência a PVR tanto em F2 (sintomas foliares em casa de vegetação) quanto em F7:2 (sintomas radiculares em campo naturalmente infestado). A seleção praticada nas gerações intermediárias também foi eficiente para aumentar a produtividade de grãos das progênies. Para o cruzamento IAC 4 x Conquista nas gerações F3:2, F4:2 e F5:2 em campo naturalmente infestado e na F3:2 em casa de vegetação, a metodologia de Annicchiarico possibilitou a seleção de genótipos com maior estabilidade e adaptabilidade para os diferentes ambientes; com o estudo genético destas gerações, demonstrou que há efeitos gênicos aditivos e dominantes no controle genético da PVR. Além disso, constatou-se que os genes responsáveis pela resistência estão dispersos nos genitores, provavelmente agrupados em blocos gênicos. A presença de dominância indica que a seleção deve ser postergada para gerações com maior homozigose (linhagem pura); esta idéia foi reforçada pela baixa herdabilidade ao nível de plantas. O uso de bandejas de isopor foi significativamente mais eficiente do que vasos de barro para inoculação de FSG em casa de vegetação. Pela análise de repetibilidade, detectou-se que quatro avaliações foram suficientes para discriminar se o genótipo era realmente suscetível ao FSG. A correlação da geração F3:2 (IAC 4 x Conquista) entre campo infestado e casa de vegetação foi praticamente nula; no entanto, 54% das progênies selecionadas em campo também foram selecionadas em casa de vegetação. A seleção de genótipos superiores para resistência ao FSG não é tarefa fácil, mas pode ser aprimorada pelo uso conjugado de metodologias suplementares que aumentem a eficiência de seleção. / During the last decades, soybean sudden death syndrome (SDS), caused by Fusarium solani f.sp. glycines (FSG), has become a serious disease in the regions where it was encountered. The use of resistant soybean cultivars has been an important component of an integrated management system. The aim of this work was to research selection strategies of SDS-resistant genotypes. A number of methodologies were used: self pollination up to generation F7:2 and progeny selection in infested field of selected F2. The crossing IAC 4 x Conquista was studied in greenhouse (generation F3:2) and in a naturally infested field (generations F3:2, F4:2 and F5:2), where the progeny stability and adaptability study was carried out. The methodologies of infection in clay pots and polystyrene trays in greenhouse were compared to improve selection efficiency. An analysis of the repeatability of foliar SDS symptoms was also performed in order to optimize the number of evaluations needed to classify a soybean genotypes reaction to FSG. Brazilian soybean cultivars were evaluated in a naturally infested field, where plants were evaluated at stage R5-6 with scores varying from 1 (absence of symptoms) to 5 (main root 100% symptoms). In the greenhouse, the plants were evaluated 35 days after sowing for root symptoms, while the leaf symptoms was only evaluated after the appearance of symptoms. The selection done in F2 (leaf symptoms in greenhouse) as well as F7:2 (root symptoms in infested field) for FSG were efficient. The selections performed in intermediary generations were efficient in increasing the grain yield of the progeny. Studies of the F3:2, F4:2 and F5:2 generations of the IAC 4 x Conquista cross in an infested field and F3:2 in greenhouse, enabled through Annicchiaricos methodology, the selection of genotypes with greater stability and adaptability to different environments. The genetic study of these generations demonstrated there are additive and dominant genetic effects on the genetic control of SDS. Moreover, it was noted that the genes responsible for resistance are dispersed on the genitors, probably grouped into genic blocks. The presence of dominance indicates that the selection should be passed onto generations with greater homozygosity. There is also a clear indication that breeders should work with progeny lines in order to assist selection due to the low inheritability at the individual plant level. For the experiments with different FSG inoculation methodologies (clay pots and polystyrene trays) in greenhouse the use of trays was significantly more efficient; by studying the repeatability analysis, it was found that four evaluations is enough to discriminate if the genotype is really susceptible to FSG. The correlation of the F3:2 generation (IAC 4 x Conquista) between infested field and greenhouse was practically null; however, 54% of the progeny selected in the field were selected in greenhouse. As observed, the selection of superior genotypes for FSG resistance is not an easy task, but may be improved by means of new methodologies and the conjugated use of methodologies which improve selection efficiency.

Orientador: Ian Castro-Gamboa / Resumo: A utilização de produtos naturais pela humanidade, como agentes terapêuticos, é descrita desde primórdios da antiguidade e representam um importante aliado no tratamento de doenças. Com isso a busca por novas ferramentas analíticas mais robustas, com abordagem metabolômica se faz necessária, de forma a otimizar e acelerar a busca por novas moléculas e substâncias com atividade biológica promissora. Nesse contexto, esse trabalho tem como alvo de estudo, os fungos Fusarium solani e Purpureocillium lilacinum isolados da rizosfera de Senna spectabilis. Essas espécies de microrganismos apresentam muitos estudos químicos relatados na literatura, o que influenciou o interesse em realizar os estudos de OSMAC (One Strain Many Compounds). Para, assim, verificar a variação metabólica que acontece com esses fungos em diferentes tipos de cultivo (variando meio de cultura e agitação) incluindo o co-cultivo. Para os extratos obtidos também foram realizados os ensaios biológicos citotóxico e antibacteriano. Foram utilizadas ferramentas analíticas do estado da arte como GC-MS (Cromatografia Gasosa acoplada a Espectrometria de Massas) e LC-MS (Cromatografia Líquida acoplada a Espectrometria de Massas) fazendo uso das ferramentas de bioinformática Molecular Networking (ou Rede Molecular) com a plataforma GNPS (Global Natural Product Social Molecular Networking) e o UNIFI (Sistema de informação científica – Waters Corporation). A espectrometria de massas (MS) foi uma grande aliada que ajudou a d... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The use of natural products by mankind, as therapeutic agents, has been described since ancient times and represents an important ally in the treatment of diseases. Thus, the search for new more robust analytical tools, with a metabolomic approach is necessary, in order to optimize and accelerate the search for new molecules and substances with promising biological activity. In this context, this study is aimed at studying Fusarium solani and Purpureocillium lilacinum fungi isolated from the rhizosphere of Senna spectabilis. These species of microorganisms have many chemical studies reported in the literature, which influenced the interest in carrying out the studies of OSMAC (One Strain Many Compounds). Thus, to verify the metabolic variation that happens with these fungi in different types of cultivation (varying culture medium and agitation) including co-culture. For the extracts obtained, cytotoxic and antibacterial biological tests were also performed. State-of-the-art analytical tools such as GCMS (Gas Chromatography coupled to Mass Spectrometry) and LC-MS (Liquid Chromatography coupled to Mass Spectrometry) were used alongside the bioinformatics tools Molecular Networking with the platform GNPS (Global Natural Product Social Molecular Networking) and UNIFI (Scientific Information System - Waters Corporation). Mass spectrometry (MS) was a great ally that helped to demonstrate the variation of the metabolites profile of these microorganisms in different cultures, in whic... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

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Tableau d’honneur de la Faculté des études supérieures et postdoctorales, 2010-2011 / Le but de cette étude était d'en apprendre davantage sur les relations antagonistes entre Helminthosporium solani et les souches E30 et 94-19 de Pseudomonas putida. Les travaux présentés dans ce mémoire montrent que la souche 94-19 produit des composés antifongiques quel que soit le milieu de culture utilisé alors que la souche E30 produit des composés antifongiques seulement en présence de cellules fongiques vivantes, en particulier en présence de cellules vivantes de H. solani. La présence des gènes de voies de biosynthèse de la pyrrolnitrine, de la pyolutéorine et du 2,4-diacétylphloroglucinol chez la souche 94-19 suggère l'implication de ces molécules dans l'activité antagoniste de cette bactérie envers H. solani. Aucun de ces gènes n'a été retrouvé chez la souche E30. Les travaux réalisés suggèrent plutôt qu'un composé thermostable de faible poids moléculaire serait impliqué dans l'activité antagoniste de la souche E30 envers H. solani.