Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-14Bitstream added on 2014-06-13T19:36:23Z : No. of bitstreams: 1 sousa_kcm_me_jabo.pdf: 1190164 bytes, checksum: 4d98963d90176b0331075c9dd139f5bd (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Dentre as doenças emergentes causadas por artrópodes em cães destacam-se as infecções por agentes das espécies Leishmania chagasi, transmitida por flebotomíneos, Ehrlichia canis e Babesia canis transmitidas por carrapatos da espécie Rhipicephalus sanguineus. O presente estudo teve como objetivo realizar o diagnóstico sorológico e molecular de parasitos das espécies Leishmania chagasi, Ehrlichia canis e Babesia canis em amostras de soro e de baço, respectivamente. Foram utilizados 60 cães naturalmente infectados, eutanasiados no Centro de Controle de Zoonoses do Município de Campo Grande, Mato Grosso do Sul. Pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), 60 (100%), 39 (65%) e 49 (81%) dos 60 animais amostrados foram sororeagentes frente aos antígenos de L.chagasi, E.canis e B.canis respectivamente. Também foi realizado o ensaio Imunoenzimático Indireto (ELISA-teste) para detecção de anticorpos da classe IgG anti-L. chagasi, onde sessenta cães (100%) mostraram-se soropositividade. Cinquenta e quatro cães (90%) mostraram-se positivos na reação em cadeia pela polimerase (PCR) para o gênero Leishmania sp e destes cinquenta e três animais, 53 (88%) foram positivos para o complexo L.Donovani. Vinte e sete animais (45%) foram positivos para Ehrlichia e destes animais todos foram positivos para E.canis pelo nested PCR e 2 (3,33%) cães foram PCR positivos para Babesia sp. Os amplicons foram confirmados por seqüenciamento e os DNAs mostraram 99% de similaridade genética para L.chagasi, E.canis e B.canis. Este estudo mostrou que os cães residentes em Campo Grande/MS, podem albergar mais de um hemoparasita, As co-infecções por agentes patogênicos intracelulares de células do sistema monocítico fagocitário, como é o caso da Ehrlichia e Leishmania, associadas ou não a Babesia... / Among emerging diseases caused by arthropods in dogs stand out infections by agents of the species Leishmania chagasi, transmitted by sandflies, Ehrlichia canis and Babesia canis transmitted by ticks of the species Rhipicephalus sanguineus. The present study aims to perform serological and molecular diagnosis of parasites of the species Leishmania chagasi, Ehrlichia canis and Babesia canis in samples of sera and spleen, respectively. A total of 60 naturally infected dogs were euthanized at the Zoonosis Control Center of the city of Campo Grande, Mato Grosso do Sul Through Immunofluorescence Assay (IFA), sixty (100%), 39 (65%) and 49 (81%) of the 60 animals sampled were reactive serum against the antigens L.chagasi, E.canis and B. canis, respectively. We also performed indirect immunosorbent assay (ELISA test) for detection of IgG antibodies anti-L. chagasi, where sixty dogs (100%) were seropositive. Fifty-four dogs (90%) were positive by PCR for the genus Leishmania, and of these fifty and three animals, 53 (88%) were positive for the complex L.Donovani. Twenty-seven dogs (45%) were positive for Ehrlichia sp and these animals were all positive for E.canis by nested PCR and two dogs (3%) were PCR positive for Babesia sp. The amplicons were confirmed by DNA sequencing and showed 99% genetic similarity to L.chagasi, E.canis and B. canis. This study showed that dogs living in Campo Grande / MS, can accommodate more than one haemoparasite. The co-infections by intracellular pathogens monocytic phagocyte system cells, as is the case with Ehrlichia and Leishmania, associated or not with Babesia (which multiplies in red blood cells), causing serious damage to the health of animals. The decline in physical condition and immune co-infections resulting from increases parasitemia, which in the case of agents transmitted by... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-06-07T17:12:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-26. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-07T17:16:41Z : No. of bitstreams: 1 000860294.pdf: 1568094 bytes, checksum: 044319797056c4a704a1822a33bee13d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Made available in DSpace on 2016-06-07T17:12:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-30. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-07T17:16:58Z : No. of bitstreams: 1 000863716.pdf: 3896142 bytes, checksum: 956d75511f2ff2d224cbafdf08facf84 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Animais silvestres são importantes fontes de infecção de leishmanioses e doença de Chagas, para espécies domésticas e o homem. A PCR com emprego de iniciadores da região ITS1 associando-se clonagem e seqüenciamento de DNA alvo permite caracterizar espécies parasitas. Pelo uso de imunorreagentes específicos também possibilitam a investigação da infecção natural entre diferentes espécies de animais silvestres para ambas enfermidades. Foram avaliados isolados flagelares em meio LIT (hemocultura) de 103 animais procedentes do Centro de Conservação da Fauna Silvestre de Ilha Solteira/SP e 118 amostras de soros. Em ensaios imunoenzimáticos utilizaram-se as proteínas recombinantes CRA e FRA de Trypanosoma cruzi e rK39 de Leishmania infantum. Conjugados espécie-específicos foram produzidos para diferentes espécies e empregados no teste de ELISA indireto e a proteína A conjugada foi avaliada para testes sorológicos com emprego da rK39. Soros de cães reagentes para leishmaniose visceral e de humanos para doença de Chagas foram testados para verificar a reatividade contra estas proteínas. Observou-se na hemocultura, flagelados para as seguintes espécies de vida livre: cotia, gambá e tatu-galinha; espécie em cativeiro: bugio-preto. Produtos foram amplificados pela PCR (585 pb) a partir de hemocultura em animais de vida livre e de um animal em cativeiro (650 pb) em amostra de sangue total. Os amplificados foram inseridos em vetor de clonagem e sequenciados resultando-se em 97% de similaridade com T. cruzi para gambá e cotia (acesso nº: AF362825.1) e tatu-galinha (acesso nº: GQ258720.1) com 98%. No isolado de bugio-preto houve 90% de similaridade com T. minasense (acesso nº: AB362411.1). Estes resultados apresentam o primeiro relato destas espécies parasitárias de importância epidemiológica na área de estudo e demonstraram vantagem ao associar-se a hemocultura às técnicas moleculares para caracterização de... / Wild animals are important sources of infection of leishmaniasis and Chagas disease to domestic animals and humans. The employment of PCR with ITS1 primers plus cloning and sequencing target DNA allows to characterize parasitic species. By using specific immunoreagents also enable investigation of natural infection between different species of wild animals for both diseases. Flagellate isolates in LIT medium (blood culture) were assessed of 103 animals coming from the Wildlife Conservation Center of Ilha Solteira -SP and 118 serum samples. In immunoassays, recombinant proteins CRA and FRA fromTrypanosoma cruzi and rK39 from Leishmania infantum were used. Species -specific conjugates were produced for different animal species and used in indirect ELISA and the protein A conjugate was evaluated for serological tests with use of rK39. Sera from dogs reagents for visceral leishmaniasis and for humans reagents for Chagas disease were tested for reactivity against these proteins. Flagellate protozoa were observed in LIT culture medium, at the following free-living species: common agouti (D. agouti), white-eared opossum (D. albiventris) and nine-banded armadillo (D. novemcinctus); and from a captive black howler monkey (A. caraya). Products were amplified by PCR (585bp) from blood culture in wild animals and from an animal in captivity (650bp) in whole blood sample. The amplified products were inserted into cloning vector and sequenced resulting in 97% similarity with T. cruzi to white-eared opossum an common agouti (acess number: AF 362825.1) and 98% to nine-banded armadillo (acess number: GQ 258720.1). The isolated from black howler monkey was 90% similar to T. minasense (acess number: AB 362411.1). The results present the first report of these parasitic species of epidemiological importance in the studied area and demonstrated advantage in the association of blood culture to molecular techniques to characterize flagellates. For ...

Orientador: Raul José Silva Gírio / Coorientador: Fernanda Senter Magajevski / Banca: Anna Monteiro Correia Lima Ribeiro / Banca: Adriana Malvásio / Banca: Karin Werther / Banca: Luis Antonio Mathias / Resumo: No Brasil, alguns estados, como Mato Grosso e Goiás, que possuem regiões alagadiças e pouco exploradas, têm a bovinocultura de corte extensiva como um dos pilares da economia. Isso faz com que bovinos e animais selvagens compartilhem o mesmo ambiente, facilitando uma possível transmissão cruzada de doenças infectocontagiosas entre eles e até mesmo para humanos. Com o objetivo de identificar anticorpos e detectar o DNA de Leptospira spp. e Brucella spp. nos diferentes materiais oriundos de tartarugas-da-amazônia (Podocnemis expansa) e do meio onde vivem, foram examinados 600 Testudines. As técnicas de diagnóstico sorológico empregadas foram a soroaglutinação microscópica (SAM), utilizada para a identificação de anticorpos anti-Leptospira, e a prova do antígeno acidificado tamponado (AAT), o teste da polarização fluorescente (TPF) e a reação de fixação de complemento (RFC), utilizados para a identificação de anticorpos anti- Brucella. Já a detecção de DNA dos agentes foi realizada pela reação em cadeia da polimerase (PCR). Empregando-se a SAM observou-se que 483 (80,5%) amostras foram reagentes ao teste. Quatro amostras foram reagentes na AAT, porém no TPF e na RFC, não houve reagentes. Detectou-se DNA de Leptospira spp. e Brucella spp. nos materiais oriundos dos animais e no ambiente onde vivem. Tal achado demonstra que há possibilidade da P. expansa ser hospedeiro natural da Leptospira spp. assim como da Brucella spp., permitindo a disseminação do agente para animais domésticos, outras espécies selvagens e humanos / Abstract: In Brazil, States such as Mato Grosso and Goiás, having flooded and little explored regions, maintain beef cattle as a pillar of their economies. This results in both cattle and wild animals sharing the same environment, and thus facilitating the potential cross transmission of infectious diseases among them and even to humans. With the goal of identifying antibodies and detecting the DNA of Leptospira spp. and Brucella spp. in various tissues and fluids from giant Amazon turtles (P. expansa) and the environment where they live, 600 Testudines were examined. The serological diagnostic techniques employed included the microscopic agglutination test (MAT) for the identification of anti-Leptospira antibodies, and the rose bengal plate test (RBPT), the fluorescence polarization assay (FPA) and the complement fixation test (CFT) for the identification of anti-Brucella antibodies. The detection of DNA was carried out by polymerase chain reaction (PCR). The MAT results showed that 483 (80.5%) of the samples tested were reagents to Leptospira spp. Four samples were reagents in RBPT, but in FPA and CFT, there weren't reagents. The DNA of these bacteria was detected in the biologic material from tested animals and in the environment where they live. This demonstrates the possibility of P. expansa being a natural host of Leptospira spp. as well as a natural host of Brucella spp. thus allowing dissemination of the agents to domestic animals, other wildlife and humans / Doutor

Orientador: João Pessoa Araújo Junior / Banca: Luciane Alarcão Dias Melício / Banca: Marcelo de Souza Zanutto / Resumo: O Coronavírus felino (FCoV) é um membro da ordem Nidovirales, família Coronaviridae, gênero Alphacoronavírus, que é responsável por causar a peritonite infecciosa felina (PIF). Dentre os testes sorológicos utilizados no auxílio ao diagnóstico da doença, o método mais sensível e recomendado é o ELISA. O FCoV apresenta características que dificultam seu cultivo celular, sendo necessário o uso de antígenos recombinantes no ELISA. A proteína de nucleocapsídeo (N) do FCoV apresenta vantagens no seu uso como antígeno recombinante em testes sorológicos, por ser conservada, altamente imunogênica, e ser uma das mais produzidas durante a infecção viral. O objetivo deste trabalho foi padronizar e aplicar o ELISA indireto com uso de proteína N recombinante para detectar anticorpos anti-FCoV em soros de gatos naturalmente infectados. Um fragmento de rim de um felino que veio a óbito com PIF foi utilizado para extração de RNA viral, amplificação pela RT-PCR e sequenciamento da proteína N. A sequência da proteína N foi sintetizada com códons otimizados para expressão em Escherichia coli e inserida no plasmídeo pGS21a. Após sua produção, a proteína foi purificada. Foi realizado o Western blott com soro de gato naturalmente infectado para a confirmação da reatividade da proteína. Na padronização do ELISA indireto foi determinada o tipo de bloqueio, concentração de antígeno e diluição dos soros. Trezentos e oitenta e duas amostras de soros felinos foram testadas. Os resultados obtidos mostraram que a proteína produzida apresentou ótima reatividade no ELISA indireto. Foram encontradas diferenças de A450 entre os soros testados, onde se demonstrou uma alta capacidade de discriminação com A450 de 0,1 a 1,8, mostrando que o teste é quantitativo. O ELISA indireto padronizado para detecção de anticorpos anti-FCoV utilizando a proteína N recombinante é um método eficiente e pode ser aplicado em amostras de campo / Abstract: The Feline Coronavírus (FCoV) is a member of the Nidovirales order, Coronaviridae family, Alphacoronavírus genus, which is responsible for causing Feline Infectious Peritonitis (FIP). Among the serological tests used in the disease diagnosis, ELISA is the most sensitive and recommended assay. FCoV has characteristics that difficult their cell culture growing, requiring the use of recombinant antigens in the ELISA. The FCoV nucleocapsid protein (N) is conserved, highly immunogenic and is the most protein produced during viral infection, being a great recombinant antigen in serological tests. The aim of this study was to standardize and apply the indirect ELISA using recombinant N protein to detect anti-FCoV antibodies in sera from naturally infected cats. A kidney fragment of died feline FIP positive was used for extraction of viral RNA, amplification by RT-PCR and sequencing of the protein N. The N protein sequence was synthesized with optimized codons for expression in Escherichia coli and inserted into pGS21a plasmid. The protein was produced, purified and the Western blotting was performed with sera from naturally infected cat to confirm the reactivity of the protein. To indirect ELISA standardization, the antigen concentration, serum dilution and the blocking reagent were determined. Three hundred eighty-two cat's sera were tested. The obtained results showed that the protein presented good reactivity in indirect ELISA. The A450 differences from 0.1 to 1.8 showed the quantitative feature of the assay. The standardized indirect ELISA for detection of anti-FCoV using recombinant N protein is efficient and can be applied in field samples / Mestre

Orientador: Raul Borges Guimarães / Banca: José Eduardo Tolezano / Banca: Edilson Ferreira Flores / Resumo: A Geografia da saúde busca analisar padrões de morbimortalidade de acordo com a distribuição da doença no espaço. Através da análise espacial dos sistemas de saúde, equipamentos e serviços e sua utilização, considera a influência biogeográfica e antrópica, demonstrando a importância do meio geográfico no aparecimento e distribuição de doenças, visando fornecer bases seguras para os programas de saúde pública. Quando aliada ao uso de tecnologias do geoprocessamento, por exemplo, os Sistemas de Informação Geográfica (SIGs), tem oferecido importantes subsídios para a área da saúde, identificando fatores e condicionantes na ocorrência de uma doença. Tendo por base a abordagem geográfica da saúde, o objetivo deste trabalho foi analisar a evolução espacial e temporal dos casos de Leishmaniose Visceral Canina (LVC), bem como seus condicionantes, identificando padrões de comportamento no município de Presidente Prudente - SP. Para isso, elaboramos um banco de dados com os casos de LVC e do Inquérito Sorológico Canino (ISC) - dados do Centro de Controle de Zoonoses da Secretaria Municipal de Saúde de Presidente Prudente - e com as variáveis ambientais - com imagens de satélite e levantamentos de campo na área urbana. Aplicamos técnicas estatísticas, epidemiológicas e de estatística espacial e foi gerada uma coleção de mapas, interpretada e analisada conforme a espacialização de eventos pontuais e de área, de acordo com a necessidade de transposição de escalas. A Leishmaniose Visceral (LV) é uma doença grave que atinge milhares de pessoas no mundo... / Abstract: The Geography of Health seeks to analyze patterns of morbidity and mortality according to disease distribution in the space. The spatial analysis of health facilities and services, and the systems they use, considers the biogeographic and anthropogenic influences, demonstrating the importance of the geographical environment in the appearance and distribution of diseases, aiming to provide a secure basis for public health programs. When combined with technology, for example, Geographic Information Systems (GIS), this has offered important insights into the area of health, identifying and conditioning factors in disease occurrence. Based on the geographical approach to health, the aim of this study was to analyze the spatial and temporal evolution of the cases of Canine Visceral Leishmaniasis (LVC) as well as their constraints, identifying patterns of behavior in the city of Presidente Prudente, São Paulo state, Brazil. For this, we developed a database with cases of LVC and Canine Serological Survey (ISC) - data from the Presidente Prudente's Centro de Controle de Zoonoses in Municipal Secretariat of Health - and with environmental variables - via satellite images and field surveys in an urban area. Using statistical techniques, epidemiological and spatial statistics were generated and a collection of maps (interpreted and analyzed as the spatial distribution of point events and area), according to the necessity of transposing scales... / Mestre

Orientador: João Pessoa Araújo Junior / Banca: Alexandre Secorun Borges / Banca: Alice Fernandes Alfieri / Banca: Hélio Jose Montassier / Banca: Marcos Bryan Heinemann / Resumo: A quantificação de anticorpos é muito importante para monitoramento sorológico em granjas e associação com proteção contra o circovírus suíno tipo 2 (PCV2). Dessa forma este trabalho teve como objetivo padronizar e aplicar ELISA indireto com anticorpo de captura e utilizá-lo na quantificação de anticorpos contra o PCV2 em soros de suínos. Na padronização, os soros teste e os imunoreagentes básicos, incluindo, anticorpo de coelho anti-PCV2 purificado utilizado como captura e suspensão viral tiveram suas concentrações de uso ótimas determinadas. Aplicou-se o índice ELISA (IE) nos resultados dos soros de suínos para correção de variações entre testes. O teste mostrou-se específico do ponto de vista analítico e com alta reprodutibilidade podendo adequadamente ser utilizado na quantificação de anticorpos em soros de suínos contra o PCV2. Na aplicação, um total de 138 amostras de soros foi testado sendo cinco de porcas na gestação e 133 de leitões nascidos dessas porcas, acompanhados nas fases de maternidade ao crescimento em uma granja comercial com SMDS. Na avaliação da resposta de anticorpos contra o vírus, houve uma diminuição dos anticorpos da maternidade para a creche, coincidindo com o declínio dos anticorpos de origem materna e com a ocorrência da soroconversão simultaneamente com a detecção de PCV no sangue total pela PCR quantitativa. Em dois leitões com alta carga relativa de DNA viral e sinais clínicos sugestivos de SMDS, a quantidade de anticorpos detectada foi extremamente baixa / Abstract: Antibody quantification is important for serological monitoring in swine herds and association with protection against porcine circovirus type 2 (PCV2). The aim of this work was to standardize and apply indirect trapping ELISA and use it in the quantification of antibodies against PCV2 in sera from pigs. The immunoreagents, including rabbit antibody anti-purified PCV2 used as trapping antibody and viral suspension had their optimum use dilution previously determined. The absorbance index (ELISA Index, EI), was used to determine the antibody concentration in pig serum directed against PCV2. The test showed high analytical specificity and reproducibility. A total of 138 serum samples was tested including five sows in gestation and 133 piglets accompanied by phases from lactation to growth in a commercial swine herd where PCV2 was previously detected. In anti PCV2 antibody response it was observed a decreasing in the phases of lactation to nursery due to decline of maternal antibodies. The seroconversion was concurrent with PCV DNA detection by quantitative PCR in total blood. In two piglets with high relative DNA viral load and compatible clinical signs of PMWS, the anti PCV2 antibody concentration was very low / Doutor

Orientador: Simone Baldini Lucheis / Coorientador: João Pessoa Araújo Junior / Banca: Lúcia Helena O'Dwyer de Oliveira / Banca: Virgínia Bodelão Richini Pereira / Banca: José Eduardo Tolezano / Banca: Tricia Maria Ferreira de Sousa Oliveira / Resumo: Animais silvestres são importantes fontes de infecção de leishmanioses e doença de Chagas, para espécies domésticas e o homem. A PCR com emprego de iniciadores da região ITS1 associando-se clonagem e seqüenciamento de DNA alvo permite caracterizar espécies parasitas. Pelo uso de imunorreagentes específicos também possibilitam a investigação da infecção natural entre diferentes espécies de animais silvestres para ambas enfermidades. Foram avaliados isolados flagelares em meio LIT (hemocultura) de 103 animais procedentes do Centro de Conservação da Fauna Silvestre de Ilha Solteira/SP e 118 amostras de soros. Em ensaios imunoenzimáticos utilizaram-se as proteínas recombinantes CRA e FRA de Trypanosoma cruzi e rK39 de Leishmania infantum. Conjugados espécie-específicos foram produzidos para diferentes espécies e empregados no teste de ELISA indireto e a proteína A conjugada foi avaliada para testes sorológicos com emprego da rK39. Soros de cães reagentes para leishmaniose visceral e de humanos para doença de Chagas foram testados para verificar a reatividade contra estas proteínas. Observou-se na hemocultura, flagelados para as seguintes espécies de vida livre: cotia, gambá e tatu-galinha; espécie em cativeiro: bugio-preto. Produtos foram amplificados pela PCR (585 pb) a partir de hemocultura em animais de vida livre e de um animal em cativeiro (650 pb) em amostra de sangue total. Os amplificados foram inseridos em vetor de clonagem e sequenciados resultando-se em 97% de similaridade com T. cruzi para gambá e cotia (acesso nº: AF362825.1) e tatu-galinha (acesso nº: GQ258720.1) com 98%. No isolado de bugio-preto houve 90% de similaridade com T. minasense (acesso nº: AB362411.1). Estes resultados apresentam o primeiro relato destas espécies parasitárias de importância epidemiológica na área de estudo e demonstraram vantagem ao associar-se a hemocultura às técnicas moleculares para caracterização de... / Abstract: Wild animals are important sources of infection of leishmaniasis and Chagas disease to domestic animals and humans. The employment of PCR with ITS1 primers plus cloning and sequencing target DNA allows to characterize parasitic species. By using specific immunoreagents also enable investigation of natural infection between different species of wild animals for both diseases. Flagellate isolates in LIT medium (blood culture) were assessed of 103 animals coming from the Wildlife Conservation Center of Ilha Solteira -SP and 118 serum samples. In immunoassays, recombinant proteins CRA and FRA fromTrypanosoma cruzi and rK39 from Leishmania infantum were used. Species -specific conjugates were produced for different animal species and used in indirect ELISA and the protein A conjugate was evaluated for serological tests with use of rK39. Sera from dogs reagents for visceral leishmaniasis and for humans reagents for Chagas disease were tested for reactivity against these proteins. Flagellate protozoa were observed in LIT culture medium, at the following free-living species: common agouti (D. agouti), white-eared opossum (D. albiventris) and nine-banded armadillo (D. novemcinctus); and from a captive black howler monkey (A. caraya). Products were amplified by PCR (585bp) from blood culture in wild animals and from an animal in captivity (650bp) in whole blood sample. The amplified products were inserted into cloning vector and sequenced resulting in 97% similarity with T. cruzi to white-eared opossum an common agouti (acess number: AF 362825.1) and 98% to nine-banded armadillo (acess number: GQ 258720.1). The isolated from black howler monkey was 90% similar to T. minasense (acess number: AB 362411.1). The results present the first report of these parasitic species of epidemiological importance in the studied area and demonstrated advantage in the association of blood culture to molecular techniques to characterize flagellates. For ... / Doutor

Orientador: Luis Antonio Mathias / Coorientador: Raphaella Barbosa Meirelles Bartoli / Banca: Samir Issa Samara / Banca: Anna Monteiro Correia Lima Ribeiro / Resumo: O trabalho teve como objetivo analisar a resposta sorológica induzida pela vacinação com a dose padrão de 60-120x109 organismos da amostra B19 de Brucella abortus em bezerras da raça Tabapuã, com idade entre 3 e 8 meses, pelos testes sorológicos preconizados pelo Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose (PNCEBT) para diagnóstico da brucelose bovina. Foram examinadas amostras de soro sanguíneo de 72 animais em quatro provas sorológicas: antígeno acidificado tamponado (AAT), teste de soroaglutinação lenta juntamente com o teste de 2-mercaptoetanoll (2-ME), reação de fixação de complemento (RFC) e teste de polarização fluorescente (TPF), o qual foi interpretado de duas formas: ponto de corte variável e ponto de corte fixo. As amostras de soro sanguíneo foram colhidas imediatamente antes da vacinação, e após 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330 e 360 dias. Foi calculada a especificidade dos testes, e os resultados foram comparados pelo indicador kappa e pelo teste ² de McNemar. O TPF apresentou especificidade mais elevada do que os outros testes nas amostras colhidas dos 30 aos 90 dias após a vacinação, mas com o passar do tempo a diferença entre a especificidade do TPF e a dos outros testes diminuiu. Aos 270 dias de vacinação, observou-se especificidade de 93,74% no AAT, no 2-ME e na RFC. No TPF com ponto de corte variável a especificidade foi 87,5%, e com ponto de corte fixo foi 100,0%. Foi possível concluir que o TPF apresentou maior capacidade de discriminação dos títulos de anticorpos vacinais logo após a vacinação, quando comparado com os outros testes preconizados pelo PNCEBT, apresentando-se, portanto, como uma ferramenta útil para o diagnóstico da brucelose bovina, além de ser de execução fácil e rápida / Abstract: The study aimed to analyze the antibody response induced by vaccination with the standard dose of 60-120x109 organisms of Brucella abortus strain 19 in Tabapuã heifers, aged between 3 and 8 months, by serological tests recommended by the National Program for Brucellosis and Tuberculosis Control and Eradication (PNCEBT) for the diagnosis of bovine brucellosis. Serum samples of 72 animals were examined by four serological tests: rose Bengal test (RBT), standard agglutination test with the 2-mercaptoetanol (2-ME) test, complement fixation test (CFT) and fluorescence polarization assay (FPA), which was interpreted in two ways: variable cutoff and fixed cutoff. Heifers were bled immediately prior to vaccination, and after 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330 and 360 days. Specificity of the tests were calculated, and the results were compared using the kappa statistic and the McNemar's ² test. The FPA had a higher specificity than the other tests on the samples collected from 30 to 90 days after vaccination, but over time this difference decreased. At 270 days of vaccination, the specificity of RBT, 2-ME and RFC was 93.74%. The specificity of the FPA with variable cutoff was 87.5%, and with fixed cutoff was 100.0%. It was concluded that FPA had a higher discrimination ability for vaccination antibody titers shortly after vaccination, when compared with other tests recommended by the PNCEBT, and is a useful tool for the diagnosis of bovine brucellosis, besides being easy and quick to perform / Mestre

Orientador: Gilson Pereira de Oliveira / Coorientador: Gisele Braziliano de Andrade / Coorientador: Alvimar Jose da Costa / Banca: Carlos Noriyuki Kaneto / Banca: Heitor Miraglia Herrera / Resumo: Dentre as doenças emergentes causadas por artrópodes em cães destacam-se as infecções por agentes das espécies Leishmania chagasi, transmitida por flebotomíneos, Ehrlichia canis e Babesia canis transmitidas por carrapatos da espécie Rhipicephalus sanguineus. O presente estudo teve como objetivo realizar o diagnóstico sorológico e molecular de parasitos das espécies Leishmania chagasi, Ehrlichia canis e Babesia canis em amostras de soro e de baço, respectivamente. Foram utilizados 60 cães naturalmente infectados, eutanasiados no Centro de Controle de Zoonoses do Município de Campo Grande, Mato Grosso do Sul. Pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), 60 (100%), 39 (65%) e 49 (81%) dos 60 animais amostrados foram sororeagentes frente aos antígenos de L.chagasi, E.canis e B.canis respectivamente. Também foi realizado o ensaio Imunoenzimático Indireto (ELISA-teste) para detecção de anticorpos da classe IgG anti-L. chagasi, onde sessenta cães (100%) mostraram-se soropositividade. Cinquenta e quatro cães (90%) mostraram-se positivos na reação em cadeia pela polimerase (PCR) para o gênero Leishmania sp e destes cinquenta e três animais, 53 (88%) foram positivos para o complexo L.Donovani. Vinte e sete animais (45%) foram positivos para Ehrlichia e destes animais todos foram positivos para E.canis pelo nested PCR e 2 (3,33%) cães foram PCR positivos para Babesia sp. Os amplicons foram confirmados por seqüenciamento e os DNAs mostraram 99% de similaridade genética para L.chagasi, E.canis e B.canis. Este estudo mostrou que os cães residentes em Campo Grande/MS, podem albergar mais de um hemoparasita, As co-infecções por agentes patogênicos intracelulares de células do sistema monocítico fagocitário, como é o caso da Ehrlichia e Leishmania, associadas ou não a Babesia... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Among emerging diseases caused by arthropods in dogs stand out infections by agents of the species Leishmania chagasi, transmitted by sandflies, Ehrlichia canis and Babesia canis transmitted by ticks of the species Rhipicephalus sanguineus. The present study aims to perform serological and molecular diagnosis of parasites of the species Leishmania chagasi, Ehrlichia canis and Babesia canis in samples of sera and spleen, respectively. A total of 60 naturally infected dogs were euthanized at the Zoonosis Control Center of the city of Campo Grande, Mato Grosso do Sul Through Immunofluorescence Assay (IFA), sixty (100%), 39 (65%) and 49 (81%) of the 60 animals sampled were reactive serum against the antigens L.chagasi, E.canis and B. canis, respectively. We also performed indirect immunosorbent assay (ELISA test) for detection of IgG antibodies anti-L. chagasi, where sixty dogs (100%) were seropositive. Fifty-four dogs (90%) were positive by PCR for the genus Leishmania, and of these fifty and three animals, 53 (88%) were positive for the complex L.Donovani. Twenty-seven dogs (45%) were positive for Ehrlichia sp and these animals were all positive for E.canis by nested PCR and two dogs (3%) were PCR positive for Babesia sp. The amplicons were confirmed by DNA sequencing and showed 99% genetic similarity to L.chagasi, E.canis and B. canis. This study showed that dogs living in Campo Grande / MS, can accommodate more than one haemoparasite. The co-infections by intracellular pathogens monocytic phagocyte system cells, as is the case with Ehrlichia and Leishmania, associated or not with Babesia (which multiplies in red blood cells), causing serious damage to the health of animals. The decline in physical condition and immune co-infections resulting from increases parasitemia, which in the case of agents transmitted by... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre