Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-09T11:59:40Z No. of bitstreams: 1 Wagnner Jose Nascimento Porto.pdf: 485977 bytes, checksum: 38cc1a2dbc36f847dab429353687fd56 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-09T11:59:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Wagnner Jose Nascimento Porto.pdf: 485977 bytes, checksum: 38cc1a2dbc36f847dab429353687fd56 (MD5) Previous issue date: 2007-02-09 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The prevalence of serum antibodies to Babesia bovis, Babesia bigemina and Anaplasma marginale infections were investigated in cattle farming herds from three regions called Sertão, Agreste and Leste of Alagoas State, Brazil. Sera samples from 1,155 cattle raised in 26 farms were evaluated by enzyme immunoassay (indirect ELISA). At the same time a questionnaire survey was conducted in the data were also analyzed. According to the results, 70.22% (811/1155) of the animals were positive for B. Bovis and 77.40% (894/1155) for B. bigemina and 27.45% (317/1155) of the animals were positive for antibodies against A. marginale The seroprevalence showed that the State of Alagoas is considered enzootically unstable for B. bovis and A. marginale enzootically stable for B. bigemina. The prevalence of Babesia sp infection was higher (p<0.05) in beef cattle than for dairy cattle and mixed herds. Regarding the infection by A. marginale, antibodies levels were more elevated in dairy cattle than others kind of rearing, but this difference was not significant. It is concluded that preventive measures should be adopted especially unstable areas. / A prevalência de anticorpos séricos para infecções por Babesia bovis, Babesia bigemina e Anaplasma marginale foram investigados em bovinos das Mesorregiões do Agreste, Leste e Sertão do Estado de Alagoas, Brasil. Amostras de soro de 1155 bovinos provenientes de 26 propriedades foram analisadas pelo ensaio imunoenzimático (ELISA). Os resultados mostraram que 70,22% (811/1155) dos animais foram sororreagentes para B. bovis, 77,40% (894/1155) para B. bigemina e 27,45% (317/1155) foram positivos à infecção por A. marginale, o que evidencia que o Estado de Alagoas pode ser classificado como área de instabilidade enzoótica para B. bovis e A. marginale, e estabilidade enzoótica para B. bigemina. A prevalência da infecção por Babesia sp foi mais alta (p<0,05) em rebanhos de corte do que nos rebanhos leiteiros ou de aptidão mista. Com relação à infecção por Anaplasma marginale houve diferença não significativa. Conclui-se que medidas preventivas devem ser adotadas especialmente nas áreas de instabilidade enzoótica.

The human Chagas disease, also called American trypanosomiasis, is considered by the World Health Organization of the 17 most neglected tropical diseases in the world. The eradication of disease vector transmission path in Brazil is not implemented and was confirmed in this study. The objective was to investigate the infection of Chagas disease vector transmission in humans in rural Tobias Barreto. This is a cross-sectional field study with a quantitative approach, which were investigated 255 individuals 0-85 years living in the villages and Alagoinhas Well Clara, selected at random. Participants received information on the risks of the disease, answered a questionnaire on socio-economic and demographic data relevant to the risk of vector transmission in the study area, and gave blood sample after signing the informed consent form. Factors related to transmission of the disease among those surveyed were analyzed using Epi Info version 7.1.4 software. New cases were found, one sororeagente and three inconclusive. The results demonstrate that the vectorial transmission is not interrupted and the disease is not being diagnosed. The wild species of domicialização the region studied assuming the role of Triatoma infestans, may be responsible for maintaining the transmission of the disease, demonstrating the need for changes in policies for prevention and control of disease. / A doença de Chagas humana, também conhecida como tripanossomíase americana, é considerada pela Organização Mundial de Saúde uma das 17 doenças tropicais mais negligenciadas no mundo. A erradicação da doença por via de transmissão vetorial no Brasil não está concretizada e foi comprovada nesse estudo. O objetivo do trabalho foi investigar a infecção da doença de Chagas por transmissão vetorial em humanos em área rural de Tobias Barreto. Trata-se de um estudo transversal de campo, com abordagem quantitativa, onde foram investigados 255 indivíduos de 0 a 85 anos, residentes nos povoados Alagoinhas e Poço da Clara, selecionados de forma aleatória. Os participantes receberam informações sob os riscos da doença e responderam questionário sobre dados socioeconômico e demográficos relevantes ao risco de transmissão vetorial na área estudada, e cederam amostra sanguínea após assinarem o TCLE. Fatores relacionados à transmissão da doença entre os pesquisados foram analisados através do software Epi Info versão 7.1.4. Novos casos da doença foram encontrados, um sororeagente e três não conclusivos. Os resultados demonstram que a transmissão vetorial não está interrompida e a doença não está sendo diagnosticada. A domicialização de espécie silvestre da região estudada assumindo o papel do Triatoma infestans, pode ser responsável pela manutenção da transmissão da doença, demonstrando a necessidade de mudanças nas políticas de prevenção e controle da doença.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-03-27T12:03:26Z No. of bitstreams: 1 Paula Radaelli.pdf: 1280329 bytes, checksum: 00e048f01119106e351e005b652d1b99 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-27T12:03:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paula Radaelli.pdf: 1280329 bytes, checksum: 00e048f01119106e351e005b652d1b99 (MD5) Previous issue date: 2009-03-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The vegetative propagation of the grapevine (Vitis spp.) facilitates the dissemination of pathogens, such as viruses, favoring the appearance of complex diseases, by accumulation of different virus species in the same plant. Among the diseases that affect the grapevine, those caused by viruses are the most difficult to control because the dissemination and the accumulation of viruses are favored by the transport and use of infected propagative material. Due to advanced studies with molecular biology, evidences suggest that some grapevine viruses, as Rupestris stem pitting-associated virus (RSPaV), Grapevine leafroll-associated virus 2 (GLRaV-2) and Grapevine fanleaf virus (GFLV) frequently present polymorphic sequences, as well as mixing infections with other viruses, making difficult to define the biological properties of the different virus variants. Therefore, one objective of this work was to evaluate the variability of these three important viruses of grapevine using the molecular characterization of the coat protein (CP) gene. Fragments comprising the complete CP genes of RSPaV, GLRaV-2 and of GFLV isolates were amplifiedby RT-PCR, using primers for specific regions of each viral species, allowing the separation of the isolate groups by phylogenetic analyses of the sequences. The isolates of each viral species here studied were additionally detected by non-radioactive probes with digoxigenin, allowing unambiguous identification of infected samples, independently of the isolate used as template for probe synthesis. The methods of diagnosis of the grapevine virus diseases can be divided in three categories. The two traditional ones include the biological tests and the serologic diagnosis. Recently, the molecular methods of diagnosis have been developed, comprising the tests RT-PCR, IC-RT-PCR and real time RT-PCR. This last one is the most advanced technique of diagnose and quantification of nucleic acids, accomplishing amplifications in precisely way and with higher reproducibility, allowing the detention of more than one virus in a single reaction. Considering the difficulties to detect virus in grapevine, and the high cost of the diagnosis methods it was considered the production ofantisera against isolates of GLRaV-2 and Grapevine virus B (GVB), developed from CPs expressed in Escherichia coli and to test the possibility of using themfor detecting these two viruses in infected grapevines. The CP genes were amplified by RT-PCR, cloned, sequenced and later subcloned, where the recombinant plasmids were employed in the transformation of E. coli and in the expression of CPs. The proteins were purified, their identities confirmed by SDS-PAGE and Western blot and used for immunizing rabbit. The antisera produced against these proteins were capable to recognize corresponding recombinant proteins in Western blot and to detect GLRaV-2 and GVB in infected grapevines by indirect ELISA, as well as discriminating healthy and infected grapevines. Many viruses that infect grapevine occur in concentrations under the limit of detention of the diagnostic tests commonly used. Considering this fact, another objective of the present work was to detect important viruses of the genera Closterovirus (GLRaV-2) and Ampelovirus (Grapevine leafroll-associated virus 1 - GLRaV-1 and Grapevine leafroll-associated virus 3- GLRaV-3), family Closteroviridae, as well as the viruses of the genera Foveavirus (RSPaV) and Vitivirus (Grapevine virus A (GVA) and the GVB),family Flexiviridae, by real time RT-PCR (TaqMan®). For ampelovirus, with degenerate primers and specific probes GLRaV-1 and GLRaV-3 were detected in isolates and/or cultivars tested. For closterovirus with degenerate primers and specific probes GLRaV-2 was detected in all cultivars tested and in Nicotiana benthamiana. The members of the family Flexiviridae GVA, GVB and RSPaV were detected by multiplex RT-PCR (TaqMan®), demonstrating that RT-PCR TaqMan® is a fast method for molecular diagnosis, quantitative, reliable, sensitive and applicable for detecting more than one virus in the same reaction. / A videira (Vitis spp.), por ser propagada vegetativamente, facilita a disseminação de patógenos, como os vírus, favorecendo o aparecimento de doenças complexas, pelo acúmulo de diferentes espécies virais numa mesma planta. Entre as doenças que afetam a videira, as viroses são as mais difíceis de controlar, pois a disseminação e o acúmulo de vírus são favorecidos pelo transporte e emprego de material propagativo infectado. Devido a avançados estudos por meio da biologia molecular, evidências sugerem que alguns vírus em videira, como Rupestris stem pitting-associated virus (RSPaV), Grapevine leafroll-associated virus 2 (GLRaV-2) e Grapevine fanleaf virus (GFLV) frequentemente apresentam muitas seqüências variáveis, bem como infecções mistas com outros vírus, dificultando a definição das propriedades biológicas das diferentes variantes deste vírus. Um dos objetivos do presente trabalho foiavaliar a variabilidade genética destes três importantes vírus da videira através da caracterização molecular do gene da proteína capsidial (CP). Foram amplificados fragmentos que compreendem os genes completos da CP de isolados de RSPaV, GLRaV-2 e de GFLV por RT-PCR, utilizando-se primers específicos para cada espécie viral, permitindo a separação em grupos dos isolados estudados por análise filogenética das seqüências obtidas. Os diferentes isolados das três espécies virais estudadas também foram detectados utilizando-se hibridização com sondas não radioativas, marcadas com digoxigenina, possibilitando identificar de forma inequívoca as amostras infectadas, independentemente dos isolados virais empregados para síntese das sondas. Os métodos de diagnóstico das viroses da videira podem ser divididos em três categorias. As duas tradicionais incluem os testes biológicos e o diagnóstico sorológico. Mais recentemente, desenvolveram-se os métodos de diagnóstico molecular, com os testes RT-PCR, IC-RT-PCR e RT-PCR em tempo real. Este último é o mais avançado para diagnose e quantificação deácidos nucléicos, pois realiza amplificações de maneira precisa e com maior reprodutibilidade, além de permitir a detecção de mais de um vírus em uma só reação. Devido às dificuldades em detectar vírus em videira, além do custo elevado dos métodos de diagnose, propôs-se a produção de antissorosespecíficos contra isolados de GLRaV-2 e Grapevine virus B (GVB), desenvolvidos a partir da proteína capsidial expressa em Escherichia coli, e testar seu possível uso para a detecção destes dois vírus, em videiras infectadas. Os genes das CPs foram amplificados via RT-PCR, clonados, seqüenciados e posteriormente subclonados, onde os plasmídeos recombinantes foram empregados na transformação de E. coli e na expressão das proteínas capsidiais. Estas foram purificadas, suas identidades confirmadas em SDS-PAGE e “Western blot”, utilizadas para imunizar coelho. Os antissoros produzidos contra estas proteínas foram capazes de reconhecer as proteínas recombinantes correspondentes em “Western blot” e detectar GLRaV-2 e GVB em tecidos infectados de videiras pelo ELISA indireto, bem como discriminar videiras sadias e infectadas. Muitos vírus que infectam a videira ocorrem em concentrações abaixo do limite de detecção dos testes diagnósticos comumente utilizados. Com isso, um outro objetivo deste trabalho foi detectar importantes vírus dos gêneros Closterovirus (GLRaV-2) eAmpelovirus (Grapevine leafroll-associated virus 1- GLRaV-1 e Grapevine leafroll-associated virus 3 - GLRaV-3), família Closteroviridae, bem como os vírus dos gêneros Foveavirus (RSPaV) e Vitivirus (Grapevine virus A (GVA) e GVB), família Flexiviridae, através de RT-PCR em tempo real (TaqMan®). Para ampelovírus, com primers degenerados e sondas específicas, foram detectados GLRaV-1 e GLRaV-3 nos isolados e /ou cultivares testados. Para closterovírus, com primers degenerados e sonda específica, detectou-se GLRaV-2 em todas as cultivares testadas e em Nicotiana benthamiana. Os membros da família Flexiviridae GVA, GVB e RSPaV foram detectados através de multiplex RT-PCR (TaqMan®), demonstrando-se assim, que a RT-PCR TaqMan® é um método de diagnóstico molecular rápido, quantitativo, confiável, sensível e capaz de detectar mais de um vírus na mesma reação.

Orientador: Domingos da Silva Leite / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T10:33:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moura_Claudiade_D.pdf: 2791356 bytes, checksum: 7830cb1ece9ec9ac3c34c2794b264c93 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Escherichia coli é um membro comensal da microbiota de animais, porém podem causar doenças desde diarréias até sepses. A caracterização dos seus antígenos de superfície O (somático) e H (flagelar) auxilia na determinação de linhagens patogênicas dentro da espécie. Contudo, algumas bactérias não expressam flagelo in vitro, demonstrado que a amplificação do gene fliC, a análise dos fragmentos de polimorfismo (PCR-RFLP) e sequenciamento podem ser utilizadas para identificação dos antígenos H, em substituição à sorologia convencional. Até meados de 1980, pensava-se que, diferentemente da Salmonella, E. coli possui um único gene para expressão de flagelina (fliC), mas algumas amostras podem conter genes para expressão de flagelina flkA, fllA, flmA, flnA e fljA (repressor de fliC). Em nosso trabalho, analisamos 31 amostras de E. coli isolados de animais e alimentos que apresentavam o fenótipo HNT em ensaios de sorologia. Utilizamos PCR-RFLP e sequenciamento para descrever novos genes para flagelina, da qual foram obtidos antissoros. Identificamos por PCR e sequenciamento os genes responsáveis pela variação de fase fljA, flkA e flmA, realizamos experimentos de motilidade para determinar a variação de fase flagelar e detectar a expressão dos genes através de RT-PCR. Dezessete amostras tiveram seus antígenos H caracterizados, sendo nove caracterizadas por PCR-RFLP: H2 (duas amostras) H16 (duas amostras), H34 (três amostras), H33 (uma amostra) e H38 (uma amostra). Na análise de sequenciamento identificamos duas amostras portadoras do gene fliCh25, duas amostras fliCh7 e uma amostra apresentando fliCh32. Três novos genes para flagelina foram descritos: fliCh2', fliC4c, fliC40c. Identificamos o gene fljA em duas amostras HNT (3C e 4C) e na amostra padrão H35. O gene das amostras HNT apresentaram homologia ao fljA de Salmonella enterica, cuja variação de fase é bem estabelecida. As amostras padrão H11, H35, H40 e H47, bem como as amostras HNT 3C e 4C foram positivas para o gene flmA. As amostras padrão H3 e H53 são portadoras do gene flkA, contudo apenas a amostra H53 apresentou fljA. A amostra H54 é portadora de fljA e flmA. Nenhuma amostra H padrão mostrou variação de fase, diferentemente da literatura, sugerindo a perda da capacidade de variar a fase flagelar. A amostra 4C mostrou variação de fase positiva quando induzida em meios de cultura contendo antissoros anti-H48, anti-H54 e anti-H4C. Do mesmo modo, a detecção dos RNAm em diferentes condições de cultura confirmou a variação de fase. Como resultado um esquema de identificação para detecção de grupos de antígenos H e identificação de fliC foi testado. A técnica de fliC-RFLP provou ser eficiente e rápida, auxiliando a sorologia clássica para detecção de antígenos H de E. coli. Um modelo geral de variação de fase da amostra 4C é expresso por fliCoff + flmAon ? fliCon + flmAoff. Além disso, nós verificamos que a amostra 4C apresenta um gene novo para expressão de flagelina. Este trabalho é pioneiro em relação à variação de fase flagelar, demonstrando uma nova associação entre os antígenos H48 e H54 / Abstract: Escherichia coli are a species of microflora, and characterization of the cell surface lipopolysaccharide O antigen and the flagellar H antigen allow the grouping of pathogenic clones within this species. Moreover, some bacteria in vitro do not obtain to express its flagella, demonstrated that PCR-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) and sequencing analysis has been used for the identification of these antigens, in substitution of traditional serology. Moreover, until middle of years 80, are believed, differently of the Salmonella, E. coli possesss an only gene for flagelin expression (fliC), but some s/strains can contain genes for flagellin expression flkA, fllA, flmA, flnA and fljA (repressor of fliC). In this work, we analyzed 31 strains of E. coli isolated from animals and foods that presented HNT phenotype in serology assays. We use PCR-RFLP and sequencing to describe new genes for flagellin, of which antiserum were obtained. We identify for PCR and sequencing the genes for phase variation fljA, flkA and flmA, we carry through motility experiments to determine the flagellar phase variation and to detect the expression of the genes (RNAm) through RT-PCR. Seventeen strains had had its H antigen characterized and nine of then were characterized for PCR-RFLP: H2 (two strains) H16 (two strains), H34 (three strains), H33 (one strain) and H38 (one strain). Through sequencing analysis we identify to two carrying strains of the gene fliCh25, two strains fliCh7 and one strain presenting fliCh32. Three new genes for flagellin had been described: fliCh2', fliC4c, fliC40c. Using PCR and sequencing, we identify fljA gene in two strains HNT (3C and 4C) and in the H35 control strain. The HNT genes showed homology to fljA of Salmonella enterica, whose variation of phase well is established. The control strains H11, H35, H40 and H47, as well as HNT 3C and 4C strains were positive for flmA gene. The control strains H3 and H53 are carrying of flkA gene, however only the H53 strain presented fljA. The H54 control strain is carrying of fljA and flmA. No H control strain showed phase variation, differently of literature, suggesting the loss of the capacity to flagellar phase variation. The 4C strain showed positive phase variation when cultured with antiserum anti-H48, anti-H54 and anti-H4C. In a similar way, the detention of RNAm in different conditions of culture confirmed the phase variation. As a result, an identification scheme was tested to deduce H antigen groups and new genes of fliC. The fliCRFLP technique proved to be faster than classic serotyping for the deduction of the E. coli H antigen, characterizing the antigens with few days and indicating new putative genes. Thus, a general model for flagellar phase variation in 4C strain can be expressed as fliCoff + flmAon ? fliCon + flmAoff. In addition, we found that strains 3C and 4C express unidentified flagellin antigens. This is the first report of flagellar phase variation in wild E. coli strains. We have also provided evidence that strain 4C, identified here for the first time, expresses three flagellar antigens, H48, H54 and a previously unidentified flagellin / Doutorado / Microbiologia / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Orientador: Domingos da Silva Leite / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-14T15:47:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tiba_MoniqueRibeiro_D.pdf: 3934673 bytes, checksum: 211302f7129afd8376ba9096064a21c4 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Escherichia coli tem sido isolada, com certa freqüência, apresentando antígenos flagelares (H) que não são reconhecidos por nenhum dos anti-soros disponibilizado pelo mais importante centro de referência de E. coli, The International Escherichia and Klebsiella Centre (WHO) do Statens Serum Institut, Copenhague, Dinamarca. Atualmente são reconhecidos 53 antígenos "H" e, nos últimos 29 anos, nenhuma modificação ocorreu na lista dos antígenos flagelares associados à Escherichia coli. Isto posto, os objetivos deste trabalho foram identificar os antígenos flagelares das cepas de E. coli que expressam H não tipável (HNT) e que apresentam fatores de virulência associados à diferentes enteropatias. Esta identificação foi realizada inicialmente, pela reação em cadeia da polimerase (PCR) do gene fliC, responsável pela proteína flagelina, das 53 amostras padrões para os antígenos H e das 20 amostras HNT (H não-tipável). Em seguida, os amplicons foram digeridos por enzimas de restrição e daquelas amostras que apresentaram perfis de restrições distintos daqueles observados para as amostras padrões de antígeno H, foram produzidos soros em coelhos. Foram realizados testes de titulação frente aos 53 antígenos padrões, frente ao antígeno homólogo e frente aos antígenos das amostras HNT. As seqüência gênicas das amostras HNT, obtidas na reação de sequenciamento, foram comparadas aos diferentes genes de fliC armazenados no banco de dados do "National Center for Biotecnology Information" (NCBI) através do sistema BLAST, e o programa ClustalW foi utilizado para alinhamento das seqüências. Os resultados demonstraram que estas amostras apresentaram similaridade com antígenos padrões, entretanto, elas não possuem a mesma seqüência nucleotídica e também não reagiram fenotipicamente com o anti-soro esperado. Os dados obtidos permitem concluir que no conjunto de amostras estudado, treze amostras apresentaram antígeno flagelar diferente daqueles já descritos na literatura, quando utilizado as técnicas de PCR e/ou sorologia. / Abstract: Escherichia coli has been isolated frequently, showing flagellar antigens that are not recognized by any of the antisera, provided by the most important reference center of E. coli, The International Escherichia and Klebsiella Centre (WHO) of the Statens Serum Institute, Copenhagen, Denmark. Are currently recognized 53 H antigens and in the last 29 years, no change occurred in the list of flagellar antigens associated with Escherichia coli. The objectives of this study were to identify the flagellar antigens of E. coli that do not express non-typeable H antigens and presenting the virulence factors associated with different diseases. This identification was performed initially by gene amplification of the fliC, (flagellin protein) by the polymerase chain reaction (PCR) in all 53 standards E. coli strains for the H antigens and 20 non-typeable H-antigens E. coli strains, being then, the amplicons were digested by restriction enzymes. Anti-sera were produced in rabbits, those strains that showed different restriction profiles of these patterns observed for the nontypeable H antigens E. coli strains. Agglutination testes were carried out against the 53 antigens standards, against the homologous antigen and H antigens of the non-typeable strains. DNA sequences were compared to different fliC genes stored in the database of the National Center for Biotecnology Information (NCBI) through the BLAST, and ClustalW program was used to align the sequences. The results showed that although these strains have homology with a standard H-antigen, they do not have the same nucleotide sequence and did not phenotypically reacted with the antiserum expected. The data obtained showed that thirteen strains had a different H antigen those already described in the literature when used the techniques of PCR-RFLP and/or serology. / Doutorado / Microbiologia / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

A urbanização e a ocupação de espaços de uma forma desordenada podem contribuir para mudanças importantes no ambiente, favorecendo a poluição e o uso de recursos naturais e contribuindo para a proliferação de algumas doenças parasitárias, em especial doenças transmitidas por água e vetores. A esquistossomose é uma dessas doenças, causada por um parasito trematódeo, Schistosoma mansoni, que requer um caramujo de água doce para servir como hospedeiro intermediário. Esta é uma doença de larga distribuição e representa um importante problema de saúde pública no Brasil. Este estudo foi realizado em Pindamonhangaba, cidade situada no Vale do Paraíba, onde os primeiros casos de esquistossomose foram notificados em 1955; com grandes campos de arroz e diferentes tipos de atividades agrícolas, fazendo uso de riachos e canais de irrigação, a região apresentava alguns aspectos ambientais que favoreciam a proliferação de caramujos, que costumavam lançar no ambiente aquático grande número de cercárias, tendo em vista as precárias condições sanitárias da população e a contaminação ambiental. O objetivo do presente estudo foi verificar a ocorrência e a distribuição dos casos de esquistossomose nas diferentes localidades da cidade, relacionando os dados colhidos nos últimos 15 anos (1992 a 2006) com as transformações ambientais observadas. Um total de 275 casos foram notificados no período estudado, e as localidades com maior número de casos foram Colméia e Mombaça, respectivamente com 144 e 29 casos. Os índices de prevalência, em 100.000 habitantes, variaram de 57,24 a 3,58, respectivamente em 1992 e 2005. Uma baixa prevalência também foi observada no inquérito soro-epidemiológico realizado com crianças de 2 a 4 série do ensino fundamental, nas escolas situadas em localidades que historicamente representavam áreas de risco para a doença; do total de 544 amostras de sangue submetidas ao teste sorológico para detecção de anticorpos anti-Schistosoma, apenas uma foi reagente. A redução do número de casos de esquistossomose pode estar relacionada às mudanças nos hábitos da população e aos processos de urbanização, com a substituição de atividades agrícolas para as relacionadas com o comércio e a indústria; foi observada a mecanização dos arrozais e substituição do cultivo por áreas de pastagens. Melhorias nas condições de saneamento básico, associada ao aumento do índice escolar também contribuíram para o controle da esquistossomose. / The urbanization and the occupation of spaces in a disordered way can contribute for important changes in the environment, favoring the pollution and the use of natural resources, and contributing for the proliferation of some parasitic diseases, in special waterborne and vector-borne diseases. Schistosomiasis, one of these diseases, is caused by a trematode parasite, Schistosoma mansoni, which requires a freshwater snail to serve as intermediate host. This is an illness of large distribution and represents an important problem of public health in Brazil. This study was carried out in Pindamonhangaba, city located in the Valley of the Paraíba river, where the first cases of schistosomiasis were reported in 1955; with great irrigated rice fields and different types of agricultural activities, requiring streams and irrigation channels, the region showed some environmental aspects that favored the proliferation of snails, which used to shed high number of cercariae, due to the poor sanitation conditions of the population and contamination of the environment. The objective of the present study was to verify the occurrence and distribution of schistosomiasis cases in the different localities of the city, by relating the data collected in the last 15 years (1992 to 2006) with the observed environmental transformations. A total of 275 cases were notified in the studied period, and the localities with higher number of cases were Colméia and Mombaça, respectively with 144 and 29 cases. The prevalence indices, in 100.000 inhabitants, varied from 57.24 to 3.58, respectively in 1992 and 2005. A low prevalence was also observed in a sero-epidemiological survey conducted with children from 2nd to 4th elementary school levels, living in localities historically considered as areas of risk for the disease; from the total of 544 blood samples submitted to detection of anti-Schistosoma antibodies, only one showed to be positive. The reduction in the number of schistosomiasis cases can be related to the changes in the habits of the population and the urbanization processes, with substitution of the agricultural activities for those related to the business and the industry; it was observed the mechanization of the rice fields and substitution of the farming for pastures areas. Improvements in the basic sanitation conditions, associated to the increasing of the scholar index can also be contributed for the control of the schistosomiasis.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-11-28T12:32:36Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Emerth Mayra Hungria Pinto - 2013.pdf: 1722909 bytes, checksum: e6a82b8a35ca4753b2bb8ca10dd21280 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-11-28T13:14:01Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Emerth Mayra Hungria Pinto - 2013.pdf: 1722909 bytes, checksum: e6a82b8a35ca4753b2bb8ca10dd21280 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-28T13:14:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Emerth Mayra Hungria Pinto - 2013.pdf: 1722909 bytes, checksum: e6a82b8a35ca4753b2bb8ca10dd21280 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2013-02-27 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The development of laboratory tests applicable for the diagnosis/classification of the different clinical forms of leprosy is considered a research priority. The completion of Mycobacterium leprae genome together with new gene cloning/expression techniques and new bioinformatic tools have promoted the production and availability of new M. leprae recombinant proteins for immunologic assessment. Goal: This study assessed the serologic reactivity to M. leprae recombinant proteins among leprosy patients and controls from two hiperendemic regions in Brazil: “Rondonópolis/MT” and “Vila do Prata/Igarapé-Açú/PA” (former leprosy colony). Material and Methods: IgG antibodies to M. leprae recombinant proteins (92f, 46f, LID-1, ML0405 e ML1213; 2 g/ml) and IgM antibodies for the PGL-I synthetic trissacaride (NT-P-BSA; 0.01 g/ml) were detected by ELISA. The following study groups were included (n=847): newly diagnosed untreated leprosy patients (paucibacillary- PB and multibacillary- MB), household contacts of MB patients (HHC), healthy endemic controls (EC) and former MB that concluded leprosy multidrug therapy (MDT) (post MDT). Results: Among participants from Rondonópolis/MT (n=764), the seropositivity of MB patients (n=58) was 59% for 92f, 81% for 46f, 89% for LID-1, 84% for ML0405; 83% were anti-PGL-I positives. Among 10 anti PGL-I negative MB patients, 5 recognized LID-1 e 4 had IgG antibodies to 92f, 46f and ML0405. Among PB leprosy patients (n=93) seropositivity rates to M. leprae recombinant proteins ranged from 5-16%; 8% were anti PGL-I positives. In the HHC (n=192) and in the EC groups (n=282) low reactivity rates were detected ranging from 3-7%. For the post MDT group, positivity rates ranged from 17-45%. Among participants from “Vila do Prata” 3-8% of HHC were seropositives for recombinant proteins; 11% were anti- PGL-I positives. In the post MDT group from “Vila do Prata” (n=47) 33-50% were seropositives for recombinant proteins. Conclusion: High positivity rates to M. leprae- 46f, ML0405 e LID-1 were detected among MB leprosy patients with different genetic/ethnic profiles from distinct geographical regions. These results indicate that the development of a serologic test for leprosy employing both M. leprae recombinant proteins and PGL-I can potentially detect the majority of MB patients from different hiperendemic regions. The use of this diagnostic tool by the public health system can contribute for the early diagnosis and treatment of MB disease which are crucial for the control/elimination of leprosy in Brazil. / O desenvolvimento de testes laboratoriais para o diagnóstico/classificação das diferentes formas clínicas da hanseníase é tema prioritário em pesquisa. O sequenciamento completo do genoma do Mycobacterium leprae, avanços em técnicas de clonagem e expressão gênica e novas ferramentas de bioinformática promoveram a produção e a disponibilidade de novas proteínas recombinantes para avaliação imunológica. Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar reatividade sorológica a proteínas recombinantes do M. leprae em pacientes com hanseníase e controles de duas áreas hiperendêmicas para hanseníase do Brasil: Rondonópolis/MT e Vila do Prata/Igarapé-Açú/PA. Materiais e Métodos: A presença de anticorpos IgG para as proteínas recombinantes do M. leprae (92f, 46f, LID-1, ML0405 e ML1213; 2 g/ml) e IgM para o trissacarídeo sintético do PGL-I (NT-P-BSA; 0.01 g/ml) foi avaliada por ELISA. Os grupos de estudo incluíram (n=847): pacientes recém diagnosticados com hanseníase (paucibacilar- PB e multibacilar- MB) virgens de tratamento, contatos domiciliares de MB (CD), controles saudáveis de área endêmica (CS) e casos antigos de hanseníase MB que concluíram a multidrogaterapia (MDT) (pós MDT). Resultados: Entre os participantes de Rondonópolis/MT (n=764), a soropositividade de pacientes MB (n=58) foi de 59% para 92f, 81% para 46f, 89% para LID-1, 84% para ML0405; 83% apresentaram IgM para PGL-I. Dentre 10 pacientes MB soronegativos para PGL-I, 5 reagiram com LID-1 e 4 reconheceram 92f, 46f e ML0405. Entre os pacientes PB (n=93) as taxas de sororeatividade para as proteínas recombinantes variaram de 5-16% e 8% apresentaram sorologia anti- PGL-I positiva. Nos CD (n=192) e CS (n=282) as taxas de reatividade variaram de 3-7%. No grupo pós MDT as taxas de positividade variaram de 17-45%. Na Vila do Prata a taxa de positividade para as proteínas recombinantes nos CD (n=36) variou de 3-8% e 11% dos CD apresentaram anticorpos anti-PGL-I. Entre os indivíduos pós MDT (n=47) as taxas de reatividades variaram de 33-50%. Conclusões: Taxas de positividade acima de 80% foram detectadas para proteínas recombinantes do M. leprae- 46f, ML0405 e LID-1 em pacientes com hanseníase MB com diferentes características genéticas/ étnicas de distintas regiões geográficas. Estes resultados indicam que o desenvolvimento de um teste sorológico para hanseníase que associe proteínas recombinantes e PGL-I tem o potencial de detectar a grande maioria dos pacientes MB provenientes de diferentes regiões hiperendêmicas. O uso deste teste pelo sistema de saúde pública poderá contribuir para o diagnóstico e tratamento precoces da hanseníase MB que são cruciais para o controle/eliminação da doença no Brasil.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-12-27T11:53:11Z No. of bitstreams: 2 Tese - Emerith Mayra Hungria Pinto - 2016.pdf: 2353103 bytes, checksum: b1bbe820e4f67491cf8298bcd67dc8b5 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-12-27T11:57:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Emerith Mayra Hungria Pinto - 2016.pdf: 2353103 bytes, checksum: b1bbe820e4f67491cf8298bcd67dc8b5 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-27T11:57:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Emerith Mayra Hungria Pinto - 2016.pdf: 2353103 bytes, checksum: b1bbe820e4f67491cf8298bcd67dc8b5 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-11-11 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / This thesis concerns two immunologic issues which are relevant for leprosy control activities: laboratory diagnosis of paucibacillary leprosy/PB and evaluation of the prognostic value of Mycobacterium leprae specific serology for leprosy reactions. Immunodiagnostic laboratory tests for PB leprosy (PB) depend on cellular immunity and these tests and this study evaluated a whole blood assay/WBA prototype using antigen combinations in PB and multibacillary leprosy patients (MB) and controls from two Brazilian endemic regions (Goiânia/GO and Fortaleza/CE). The M. leprae specific cellular immunity was evaluated by WBA using heparinized tubes containing different antigen combinations: 46f+LID-1 and ML0276+LID-1; controls: PBS, PHA, MLCS-M. leprae cell sonicate, PPD. After 24 hours incubation (37°C, 5% CO₂) plasma was collected and ELISA used to detect IFNγ (QuantiFERON/Qiagen, cut-off: 50pg/mL) and CXCL10 (Sigma-Aldrich®, St. Louis, Missouri, USA, cut-off: 500 pg/mL). Newly diagnosed, untreated leprosy patients (MB, n=30, PB, n=38) and controls (27 household contacts/HHC, 61 endemic controls/EC) were tested. The new platform in tube validated previous IFNγ results obtained in culture plates. Production of IFNγ to 46f+LID-1 was detected in 84% PB patients, 55% HHC; for ML0276+LID-1: 71% PB, 55% HHC. For both antigen combinations, the IFNγ response of PB leprosy patients differed from the EC (p<0.0001), however the response in PB leprosy and HHC was similar (p>0.05). Studies in tuberculosis/TB have shown that the CXCL10 response differentiate individuals with active TB from those with latent Mycobacterium tuberculosis infection. In leprosy, CXCL10 levels did not differentiate PB leprosy from HHC. Despite this limitation, our results show that WBA in tube could be a supplementary tool in assessing M. leprae infection rates and evaluating the impact of control measures. The application of leprosy serology as a predictor for the occurrence of leprosy reactions observed during clinical monitoring post treatment was evaluated by ELISA tests to detect M. leprae-specific antibodies, IgM anti PGL-I, IgG anti LID-1 and IgM and IgG anti ND-O-LID. Serum samples from 452 patients were tested and these patients participated of Clinical Trial for Uniform Multidrug Therapy Regimen for Leprosy Patients in Brazil/U-MDT/CT-B who were clinically monitored for more than six years post treatment for the development of leprosy reactions. Serological tests were performed in samples collected in untreated patients at diagnosis (baseline) and the results were analyzed taking into account the clinical outcome post treatment (reaction and reaction-free). Reactional patients (RR and ENL) had higher seropositivity rates and optical density/OD medians for PGL-I, LID-1 and ND-O-LID compared to reaction-free patients (p<0.0001). In leprosy, both the development of reactions and the serologic response are strongly influenced by the patients’ bacillary index (BI) and a positive correlation was found between both the BI and the proportion of reactional patients and the antibody levels. Negative BI group: 10% reactional patients, intermediary BI (>0<3): 50% reactional patients, high BI (>=3): 66% reactional patients. The serological results stratified according to the BI showed: in BI negative patients higher anti-PGL-I levels in RR patients compared to reaction-free ones (p=0.014); group IB> 0<3: reactional patients (RR) showed higher anti-PGL-I (p=0.014) and anti-LID-1 (p=0.035) antibody levels compared to reaction-free patients; group IB => 3: patients who developed ENL showed higher levels of anti-LID-1 antibodies (p=0.028) when compared with reaction-free ones. The accuracy of a serological test to predict the occurrence of leprosy reactions as determined by ROC curve showed that only anti-PGL-I serology provided limited value to predict RR (area-under-the-curve/AUC=0.702). The anti-PGL-I serology showed low sensitivity for RR prognosis, indicating the need to identify other plasma biomarkers for prediction of RR. In patients who developed ENL during follow-up was observed high positivity in the anti-LID-1 serology at diagnosis indicating the potential application of serology in the identification of patients at higher risk of developing ENL. / Esta tese aborda dois temas imunológicos importantes para o controle da hanseníase: diagnóstico laboratorial da hanseníase paucibacilar/ PB e valor prognóstico da sorologia específica para Mycobacterium leprae para reações hansênicas. O diagnóstico laboratorial da hanseníase PB se baseia em testes que avaliam a imunidade celular e este estudo avaliou um protótipo de ensaio de sangue total/EST com combinações antigênicas do M. leprae em pacientes multibacilares-MB e PB e controles de duas regiões endêmicas (Goiânia/GO e Fortaleza/CE). A avaliação da imunidade celular específica se baseou em EST em tubos heparinizados contendo diferentes combinações de antígenos do M. leprae: 46f+LID-1 e ML0276+LID-1; controles: PBS, PHA, MLCS-M. leprae cell sonicate, PPD. Após 24 horas de cultura (37ºC, 5% CO₂), o plasma foi coletado e ELISA utilizado para mensurar IFNγ (QuantiFERON/Qiagen, cut-off: 50pg/mL) e CXCL10 (Sigma-Aldrich®, St. Louis, Missouri, USA, cut-off: 500 pg/mL). Pacientes com hanseníase, recém diagnosticados, não tratados (30 MB, 38 PB) e controles (27 contatos domiciliares/CD, 61 controles saudáveis/CS) foram avaliados. A nova plataforma de tubos foi validada demonstrando produção de IFNγ similar a obtida em placas de cultura. A produção específica de IFNγ para a combinação 46f+LID-1 foi: 84% pacientes PB, 55% CD; para ML0276+LID-1: 71% PB, 55% CD. Para ambas as combinações antigênicas a resposta de IFNγ em pacientes PB diferiu da obtida para os CS (p<0,0001), contudo foi similar em pacientes PB e CD (p>0,05). Estudos em tuberculose/TB mostraram que a produção de CXCL10 discrimina indivíduos com TB ativa daqueles com infecção latente pelo Mycobacterium tuberculosis. Avaliamos na hanseníase se a produção de CXCL10 é capaz de diferenciar pacientes PB/infecção ativa de CD com infecção “latente”, assintomática. Nossos resultados mostraram produção de CXCL10 induzida por combinações antigênicas do M. leprae, entretanto sem diferenciar resposta de infecção ativa em PB de infecção assintomática em CD. Apesar desta limitação, nossos resultados mostram que o EST em tubo poderia ser uma ferramenta para avaliar as taxas de infecção PB pelo M. leprae e o impacto das medidas de controle. A aplicabilidade da sorologia específica para hanseníase como ferramenta preditora de reações hansênicas foi avaliada por ELISA para detectar anticorpos para específicos do M. leprae, IgM anti PGL-I, IgG anti LID-1 e IgM e IgG anti ND-O-LID Utilizamos amostras de soro de 452 pacientes que participaram do Ensaio Clínico para Avaliação da Eficácia de um Esquema Único de Multidrogaterapia em pacientes com hanseníase no Brasil (U-MDT/ CT-BR) que foram monitorados por mais de 6 anos após o tratamento quanto ao desenvolvimento de reações. Resultados da sorologia realizada em amostras coletadas ao diagnóstico, antes do início da terapia (baseline) foram analisados segundo os desfechos clínicos (ocorrência ou não de reações hansênicas). Independente do tipo de reação (reação reversa/RR ou eritema nodoso hansênico/ENH), pacientes reacionais apresentaram maior soropositividade e medianas de D.O para PGL-I, LID-1 e ND-O-LID comparados com pacientes não reacionais (p<0,0001). Na hanseníase o desenvolvimento de reações e a soropositividade são fortemente influenciadas pelo índice bacilar (IB) do paciente. Nossos resultados corroboram este paradigma mostrando associação positiva do IB tanto com a proporção de pacientes reacionais como com os níveis de anticorpos. Grupo de pacientes com IB negativo: 10% reação, IB intermediário (IB>0<3) 50% reacionais e IB >3, 66% de pacientes reacionais. Os resultados da sorologia, estratificados de acordo com o IB mostrou no grupo com IB negativo que pacientes que desenvolveram RR apresentaram maiores níveis de anticorpos anti PGL-I comparados com pacientes não reacionais (p=0,014); Grupo com IB>0<3: pacientes reacionais (RR) apresentaram maiores níveis de anticorpos para PGL-I (p=0,014) e LID-1 (p=0,035) comparados com pacientes não reacionais; Grupo IB=>3: pacientes que desenvolveram ENH apresentaram maiores níveis de anticorpos anti LID-1 comparados com pacientes não reacionais (p=0,028). De acordo com resultados da curva ROC para avaliar a acurácia de um teste sorológico para prever o desenvolvimento de reações durante o monitoramento, a sorologia anti PGL-I apresentou limitado valor para prever o desenvolvimento futuro de RR (área sob a curva/AUC=0,702). A sorologia para LID-1 mostrou capacidade de prever o desenvolvimento de ENH (AUC= 0,85). A sorologia anti-PGL-I apresentou baixa sensibilidade para prognóstico da RR, indicando a necessidade da identificação outros biomarcadores plasmáticos para predição da RR. Já em pacientes que desenvolveram ENH durante o seguimento apresentaram alta positividade na sorologia anti LID-1 ao diagnóstico, indicando a potencial aplicação da sorologia na identificação de pacientes com maior risco de desenvolver ENH.

A infecção por Cryptosporidium serpentis é uma das enfermidades mais importantes em répteis e se caracteriza por infecção crônica, clínica ou subclínica, e presença de gastrite hipertrófica severa, regurgitação, perda de peso progressiva, mortalidade eventual e eliminação contínua e intermitente de oocistos em fezes. O objetivo deste estudo foi padronizar um teste imunoenzimático (ELISA) indireto para detecção de anticorpos contra C. serpentis, e acompanhar a evolução clínica, parasitológica e da resposta imune humoral em serpentes naturalmente infectadas com C. serpentis. Foram utilizadas 21 serpentes naturalmente infectadas com C. serpentis e alojadas no Instituto Butantan, São Paulo, Brasil. As análises clínica e parasitológica foram realizadas em 21 serpentes por meio do registro diário dos sinais clínicos apresentados e pesquisa mensal da eliminação fecal de oocistos, em lâminas coradas pela técnica de Kinyoun. A avaliação sorológica foi realizada mensalmente utilizando o ELISA indireto para pesquisa de anticorpos anti-C. serpentis, pelo período de 12 meses em 8 animais, 8 meses em 3 animais e 6 meses em 1 animal. O ELISA indireto foi padronizado em bloco com utilização de antígeno produzido a partir de oocistos de C. serpentis, IgY de galinha anti-gamaglobulinas de serpentes e conjugado contendo IgG de coelho anti-IgY de galinha ligada à peroxidase. Os sintomas clínicos observados foram regurgitação, inapetência alimentar e perda de peso progressiva. A análise parasitológica revelou eliminação de quantidade variável de oocistos, de forma intermitente, em todas as serpentes, com positividade de 92% (116/126). O ELISA indireto apresentou positividade em 42,9% (54/126) das amostras. Foi observada resposta imune humoral na maioria dos animais, no entanto, com presença título flutuante de anticorpos e alternância de resultados positivos e negativos, em um mesmo animal. / Infection by Cryptosporidium serpentis is one of the most important diseases in reptiles, and is characterized by chronic infection, clinical or subclinical, and the presence of severe hypertrophic gastritis, food regurgitation, progressive weight loss, mortality, and intermittent and continuous shedding of oocysts in feces. The objective of this study was to standardize an indirect enzyme immunoassay (ELISA) to detect antibodies against C. serpentis, and evaluate the clinical, parasitological and humoral immune response in snakes naturally infected with C. serpentis. Twenty one snakes naturally infected with C. serpentis and housed at the Instituto Butantan, São Paulo, Brazil, were used for accomplish clinical and parasitological analyzes of C. serpentis infection, through the daily record of clinical signs and monthly survey of fecal shedding of oocysts using Kinyoun staining technique. The serological evaluation was performed monthly using the indirect ELISA for the detection of anti-C. serpentis antibodies, for a period of 12 months in eight animals, eight months in three animals, and six months in one animal. The indirect ELISA was standardized on the basis of block titration using antigen produced from oocysts of C. serpentis, chicken IgY anti-snake gamaglobulins and a conjugate containing rabbit IgG anti-chicken IgY linked to peroxidase. Clinical symptoms consisted in food regurgitation, inappetence, and progressive weight loss. The parasitological analysis revealed intermittent fecal shedding of variable number of oocysts in all snakes, with positivity in 92% (116/126) of the samples. The indirect ELISA was positive in 42.9% (54/126) of the samples. Humoral immune response was observed in most animals, however, fluctuating antibodies levels with rotation of positive and negative results were observed in some snakes.

Os vírus da influenza A (IA) provocam epidemias e pandemias em humanos. As aves selvagens são os reservatórios naturais desses vírus, dentre essas, as migratórias possuem um importante papel como transmissores da doença. A região subantártica abriga populações de aves marinhas, as quais reproduzem-se no verão austral formando colônias com milhares de aves, o que potencializa a importância do estudo do vírus IA em aves marinhas neste ambiente. Os objetivos deste trabalho foram analisar a presença do vírus IA em swabs orotraqueal e cloacal, e de anticorpos anti-IA em soro de aves marinhas da região subantártica, caracterizar molecularmente as amostras positivas, e conhecer mais a ecologia deste vírus. Foram coletadas amostras biológicas de pinguim-papua, pinguim-de-barbicha, pinguim-de-adelie, skua-subantártica, pomba-do-cabo, e petrel-gigante-do-sul, entre 2010-13, nas ilhas Elefante e Rei George. Das 615 amostras de swab, 13 foram positivas por One Step Real Time RT-PCR, e uma foi caracterizada como H6N8. Das 673 amostras de soro, 108 foram positivas por Ensaio Imonoenzimático competitivo (cELISA). O estudo contribuiu para o conhecimento do vírus IA na região e foram feitas recomendações para a prevenção a introdução de patógenos na Antártica. / Influenza A (IA) viruses cause epidemics and pandemics in humans. Wild birds are the natural reservoir of these viruses, among these, migratory ones have an important role as transmitters of disease. The subantarctic region is home to seabird populations, which breed in the austral summer forming colonies with thousands of birds, which enhances the importance of the study of AI viruses in waterfowl in this environment. The objectives of this study were to analyze the presence of IA virus in tracheal and cloacal swabs, and anti-IA antibodies in serum of seabirds from subantarctic region, molecular characterization of positive samples, and learn more about this virus ecology. Biological samples were collected of gentoo penguin, chinstrap penguin, adelie penguin, brown skua, cape petrel, and southern giant petrel, from Elephant and King George islands, between 2010-13.Of the 615 swab samples, 13 were positive by Real Time One Step RT-PCR, and one was characterized as H6N8. Of the 673 serum samples, 108 were positive by competitive enzyme-linked immunosorbent assay (cELISA). The study contributed to AI virus knowledge in the region and recommendations for preventing the introduction of pathogens in Antarctica were made.