Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-05Bitstream added on 2014-06-13T19:45:15Z : No. of bitstreams: 1 cruz_tf_dr_botfmvz.pdf: 667109 bytes, checksum: b54ec5fc8ecf8d9aaadfe47b8708a295 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A quantificação de anticorpos é muito importante para monitoramento sorológico em granjas e associação com proteção contra o circovírus suíno tipo 2 (PCV2). Dessa forma este trabalho teve como objetivo padronizar e aplicar ELISA indireto com anticorpo de captura e utilizá-lo na quantificação de anticorpos contra o PCV2 em soros de suínos. Na padronização, os soros teste e os imunoreagentes básicos, incluindo, anticorpo de coelho anti-PCV2 purificado utilizado como captura e suspensão viral tiveram suas concentrações de uso ótimas determinadas. Aplicou-se o índice ELISA (IE) nos resultados dos soros de suínos para correção de variações entre testes. O teste mostrou-se específico do ponto de vista analítico e com alta reprodutibilidade podendo adequadamente ser utilizado na quantificação de anticorpos em soros de suínos contra o PCV2. Na aplicação, um total de 138 amostras de soros foi testado sendo cinco de porcas na gestação e 133 de leitões nascidos dessas porcas, acompanhados nas fases de maternidade ao crescimento em uma granja comercial com SMDS. Na avaliação da resposta de anticorpos contra o vírus, houve uma diminuição dos anticorpos da maternidade para a creche, coincidindo com o declínio dos anticorpos de origem materna e com a ocorrência da soroconversão simultaneamente com a detecção de PCV no sangue total pela PCR quantitativa. Em dois leitões com alta carga relativa de DNA viral e sinais clínicos sugestivos de SMDS, a quantidade de anticorpos detectada foi extremamente baixa / Antibody quantification is important for serological monitoring in swine herds and association with protection against porcine circovirus type 2 (PCV2). The aim of this work was to standardize and apply indirect trapping ELISA and use it in the quantification of antibodies against PCV2 in sera from pigs. The immunoreagents, including rabbit antibody anti-purified PCV2 used as trapping antibody and viral suspension had their optimum use dilution previously determined. The absorbance index (ELISA Index, EI), was used to determine the antibody concentration in pig serum directed against PCV2. The test showed high analytical specificity and reproducibility. A total of 138 serum samples was tested including five sows in gestation and 133 piglets accompanied by phases from lactation to growth in a commercial swine herd where PCV2 was previously detected. In anti PCV2 antibody response it was observed a decreasing in the phases of lactation to nursery due to decline of maternal antibodies. The seroconversion was concurrent with PCV DNA detection by quantitative PCR in total blood. In two piglets with high relative DNA viral load and compatible clinical signs of PMWS, the anti PCV2 antibody concentration was very low

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-07-10Bitstream added on 2014-06-13T20:26:20Z : No. of bitstreams: 1 silva_rc_me_botfmvz.pdf: 997441 bytes, checksum: 50d67e0480990ba5c46186e06fb9f216 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O Toxoplasma gondii é um protozoário parasita de grande importância no contexto de produção animal e saúde pública, envolvendo alterações fetais e abortos na espécie humana e em animais, sendo ainda importante patógeno oportunista em pacientes imunocomprometidos. A técnica de aglutinação direta modificada (MAT) destaca-se por independer da origem dos anticorpos e permitir diferenciar os estágios da infecção toxoplásmica. Assim, padronizou-se a técnica de sedimentação espontânea, verificando-se que com 60 minutos, a parte líquida da suspensão apresentava predominantemente taquizoítos e raras células pequenas. O antígeno inativado pelo metanol (AM) permitiu a exposição de antígenos de fase aguda somente, enquanto que a formalina (AF) expõe tanto os de fase aguda como crônica. Testou-se o antígeno para três grupos experimentais: G1, ratas infectadas com 104 bradizoítos da cepa BTU10, genótipo I, via oral; G2, ratas infectadas com 104 bradizoítos da cepa BTU10, via oral, e imunodeprimidas com corticóide; G3, grupo controle. A comparação das MATs permitiu a diferenciação dos anticorpos IgG de fase aguda, dos de fase crônica. Gradativamente foi obtida a maturação dos anticorpos, sendo observada pela avidez das mesmas no teste de ELISA. Os anticorpos do grupo experimental se comportaram semelhantemente para as provas sorológicas, até a 13ª semana. A reagudização no G2 foi detectada na bioprova da musculatura antes que no cérebro. Com isso, verificou-se que a MAT-AM e a MAT-AF permitem a diferenciação dos estágios agudo e crônico, e ainda a caracterização da reagudização da infecção em pacientes imunocomprometidos. / Toxoplasma gondii is a parasite protozoan with great importance to animal production and public health, involving foetal alterations and abortions in human and animal species, being an important opportunistic pathogen in immunocompromised patients. Modified agglutination test (MAT) has great importance to independ of the origin of antibody, and to allow differentiating the periods of the Toxoplasma infection. Thus, the protocol of spontaneous sedimentation we standardized, verifying that with 60 minutes, the liquid part of the suspension showed predominantly the presence of tachyzoites and rare small cells. The antigen inactivated with methanol (AM) allowed the exposition of antigens of acute phase only, while formalin (AF) as much the acute as chronic phase. Antigen was tested to three experimental groups: G1, rats infected with 104 bradyzoites of BTU10 strain, genotype I, orally; G2, rats infected with 104 bradyzoites of BTU10 strain, orally, and immunodepressed with corticoid; G3, control group. The comparation of MATs allows the differentiation of IgG from acute phase of the ones from chronic phase. A gradual maturation of immunoglobulins was gotten, being observed through the avidity of the same ones, and surveyed for ELISA. The antibodies of the experimental groups showed similar profile for all serological tests, until the 13th week. Reacutization of the infection in G2 was detected earlier in bioassay of musculature than brain. Thus, we verified that MAT-AM and MAT-AF allow the differentiation of the acute and chronic stages, and still the characterization of the reacutization of the infection in immunocompromised patients. / FAPESP: 2003/08063-0

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-09-18Bitstream added on 2015-03-03T12:06:33Z : No. of bitstreams: 1 000805696.pdf: 6632041 bytes, checksum: f21057eb86ff7718d46756ca3ee20a00 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Geografia da saúde busca analisar padrões de morbimortalidade de acordo com a distribuição da doença no espaço. Através da análise espacial dos sistemas de saúde, equipamentos e serviços e sua utilização, considera a influência biogeográfica e antrópica, demonstrando a importância do meio geográfico no aparecimento e distribuição de doenças, visando fornecer bases seguras para os programas de saúde pública. Quando aliada ao uso de tecnologias do geoprocessamento, por exemplo, os Sistemas de Informação Geográfica (SIGs), tem oferecido importantes subsídios para a área da saúde, identificando fatores e condicionantes na ocorrência de uma doença. Tendo por base a abordagem geográfica da saúde, o objetivo deste trabalho foi analisar a evolução espacial e temporal dos casos de Leishmaniose Visceral Canina (LVC), bem como seus condicionantes, identificando padrões de comportamento no município de Presidente Prudente – SP. Para isso, elaboramos um banco de dados com os casos de LVC e do Inquérito Sorológico Canino (ISC) – dados do Centro de Controle de Zoonoses da Secretaria Municipal de Saúde de Presidente Prudente - e com as variáveis ambientais – com imagens de satélite e levantamentos de campo na área urbana. Aplicamos técnicas estatísticas, epidemiológicas e de estatística espacial e foi gerada uma coleção de mapas, interpretada e analisada conforme a espacialização de eventos pontuais e de área, de acordo com a necessidade de transposição de escalas. A Leishmaniose Visceral (LV) é uma doença grave que atinge milhares de pessoas no mundo... / The Geography of Health seeks to analyze patterns of morbidity and mortality according to disease distribution in the space. The spatial analysis of health facilities and services, and the systems they use, considers the biogeographic and anthropogenic influences, demonstrating the importance of the geographical environment in the appearance and distribution of diseases, aiming to provide a secure basis for public health programs. When combined with technology, for example, Geographic Information Systems (GIS), this has offered important insights into the area of health, identifying and conditioning factors in disease occurrence. Based on the geographical approach to health, the aim of this study was to analyze the spatial and temporal evolution of the cases of Canine Visceral Leishmaniasis (LVC) as well as their constraints, identifying patterns of behavior in the city of Presidente Prudente, São Paulo state, Brazil. For this, we developed a database with cases of LVC and Canine Serological Survey (ISC) - data from the Presidente Prudente’s Centro de Controle de Zoonoses in Municipal Secretariat of Health - and with environmental variables - via satellite images and field surveys in an urban area. Using statistical techniques, epidemiological and spatial statistics were generated and a collection of maps (interpreted and analyzed as the spatial distribution of point events and area), according to the necessity of transposing scales...

O presente estudo teve por objetivo acompanhar um lote de suínos durante todas as fases zootécnicas de produção, de forma a demonstrar em que momento os animais eram expostos à contaminação por Salmonella sp. e quando observava-se a soroconversão nos mesmos. A unidade produtora de leitões foi escolhida por ter apresentado uma alta prevalência de leitoas de reposição positivas (32%), em avaliação bacteriológica prévia. As matrizes incluídas no estudo (n=19) foram selecionadas de acordo com a idade gestacional (100 dias), identificadas e amostradas para teste bacteriológico e sorológico. Aos 15 dias de lactação, 15 fêmeas deste grupo foram novamente amostradas, sendo 99 leitões, pertencentes às suas leitegadas, igualmente identificados e incluídos no estudo. Subseqüentemente, todos os leitões foram amostrados aos 38 dias e um subgrupo destes (n=56), aos 59 e 80 dias. Em todas as visitas foram coletados sangue e fezes dos animais, amostras de ração e suabe de arrasto das instalações. Ao abate, de 26 animais do grupo acompanhado no estudo foram coletados sangue, conteúdo intestinal e linfonodos mesentéricos. As baias de espera do frigorífico e o caminhão que transportou o lote de animais para o abate foram amostrados por suabes de arrasto. O isolamento de Salmonella sp. foi confirmado por caracterização bioquímica e sorotipificação. No teste de ELISA foi utilizado antígeno LPS de Salmonella Typhimurium e o ponto de corte foi definido por média de densidade ótica de uma população negativa somado a quatro desvios padrões. Entre as fêmeas da gestação, 94,7% (18/19) foram soropositivas, mas nenhuma apresentou isolamento de Salmonella. Por outro lado, aos 15 dias de lactação, a soroprevalência do grupo reduziu para 66,7% (10/15), mas duas fêmeas estavam excretando Salmonella nas fezes. Os leitões foram negativos no isolamento e na sorologia durante todo período de maternidade e creche. Entretanto, já na primeira coleta realizada na terminação (80 dias de idade), 28,6% (16/56) foram soropositivos e 75% (42/56) estavam excretando Salmonella. Ao abate, houve um aumento na soroprevalência 20/26 (76,9%), e 5/26 (19,2%) animais tiveram isolamento de Salmonella no conteúdo intestinal e/ou linfonodos mesentéricos. A avaliação da contaminação ambiental realizado na granja demonstrou que, apenas após o aparecimento de animais excretores no lote, foram encontrados suabes de arrasto positivos nas instalações. Ao lado disto, foi possível isolar Salmonella de 2/26 amostras de ração, sendo todas as amostras positivas provenientes do período final da terminação. As baias de espera do frigorífico apresentaram 25% dos suabes de arrasto positivos antes da entrada do lote. Em todos os animais positivos durante a terminação foi encontrado o sorovar Typhimurium; dois animais tiveram isolamento concomitante do sorovar Senftenberg. Ao abate, os sorovares Typhimurium e Senftenberg foram encontrados em três e dois animais, respectivamente. Todas as amostras de Salmonella isoladas de ração pertenciam ao sorovar Senftenberg, enquanto que as amostras de baias de espera eram S. Panama. A presença do sorovar Senftenberg em animais durante a terminação e ao abate demonstra a possível relação com a contaminação encontrada nas amostras de ração.

Orientador: José Osmar Gaspar / Banca: Mário Tyago Murakami / Banca: Marinônio Lopes Cornélio / Resumo: No Brasil, foram descritas mais de dez viroses em feijoeiro, citando-se aquela causada pelo Southern bean mosaic virus (SBMV) do gênero Sobemovirus. Este vírus tem uma restrita gama de hospedeiras, confinada quase exclusivamente a espécies da família das leguminosas, sendo algumas de interesse econômico como o feijoeiro comum e a soja. O SBMV é a espécie tipo do gênero, possui partículas isométricas (28-30nm) contendo RNA genômico de 4-4,5kb com polaridade positiva e proteína capsidial com massa molecular de 29-30 kDa. O genoma do SBMV é constituído por quatro Open Reading Frames (ORFs) com sobreposição entre elas. A ORF 1 codifica uma possível proteína do movimento, a ORF 2 uma poliproteína, que por clivagem, origina três produtos funcionais: uma serino protease, uma proteína ligadora do genoma viral (VPg) e uma polimerase com atividade relacionada à replicação do RNA viral (RNA polimerase RNA-dependente, RpRd). Dentro da ORF 2 encontra-se a ORF 3, que codifica uma proteína de função desconhecida. A ORF 4 codifica a proteína capsidial, traduzida a partir de um RNA subgenômico. O presente trabalho consiste na expressão da proteína P1 do SBMV-SP em Escherichia coli, sua purificação e a posterior utilização para a produção de antissoro policlonal. As atividades realizadas compreenderam a purificação das partículas virais do SBMV isolado São Paulo (SBMV-SP) a partir de folhas infectadas de Phaseolus vulgaris 'Jalo', obtenção do RNA viral a partir de partículas purificadas, produção de cDNA utilizando primer anti-senso, amplificação do gene da proteína do movimento, purificação do fragmento amplificado, ligação em vetor de multiplicação pGEM-T, transformação em células competentes de Escherichia coli linhagem TOP 10, purificação do vetor, corte enzimático com as enzimas Bam HI e Hind III, subclonagem nos vetores de expressão... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In Brazil, more than ten bean viroses were described, including the one caused by Southern bean mosaic virus (SBMV) from genus Sobemovirus. This virus has a strict host range, confined almost exclusively to species from leguminosas family, and some of them have economic importance, like the common bean and soya. SBMV is the type species from this genus, has isometric particles (28-30nm) that contains genomic RNA of 4-4,5kb with positive polarity and a capsidal protein with molecular mass of 29-30kDa. SBMV genome consistis of four Open Reading Frames (ORFs) with overlap between them. ORF 1 encodes a possible movement protein, ORF 2 a poliprotein, which origin three functional products by clivage: a serin protease, a viral genomic biding protein (VPg) and a polimerase. Inside ORF 2 is situated the ORF 3, that encodes a protein with unknow function. ORF 4 encodes the capsidal protein, translated by a subgenomic RNA. The activities performed until this moment were the purification of SBMV isolated São Paulo(SBMV-SP) viral particles, obtention of viral RNA from SBMV purified partcles, cDNA production using anti-sense primer, amplification of the supposed gene of movement protein, purification of the amplified fragment and later biding on expression vector pGEM-T. The recombinat vector were transformed in Escherichia coli cells competent and than purified and digested with Bam HI and Hind III enzime. The released fragment was subcloned in pMAL and pET28a, which were used on competent cells for expression tests. Analysis of gel poliacrialamida showed the efficiency of tests of expression. Using pET28a was observed an expression of a protein of approximately 22 kDa (17 kDa relating to MP + 5 kDa relating to the tail of histidine) which was purified in resin Ni-NTA by affinitive chromatography.Using pMAL was observed an expression of a protein of approximately... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-08-27Bitstream added on 2014-06-13T20:55:59Z : No. of bitstreams: 1 salgado_vr_me_botfmvz.pdf: 342250 bytes, checksum: b60d6784559654ba5442f18a243ca0e7 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A brucelose canina causada pela Brucella canis (B. canis) é uma das principais causas infecciosas de desordens reprodutivas em cães. O presente trabalho teve como objetivo comparar as técnicas de Cultivo Microbiológico e Soroaglutinação Rápida em Cartão (SAR) com e sem o emprego de 2-Mercaptoetanol (2-ME) no diagnóstico da brucelose canina. Adicionalmente foram avaliados sangue, urina, swab vaginal, prepucial e sêmen como materiais a serem processados no diagnóstico microbiológico. Foram avaliados 236 cães quanto à infecção por B. canis, muitos com histórico de problemas reprodutivos, dos quais 24,2% resultaram positivos na SAR, 10,2% na SAR-2ME, 28% na hemocultura, 9,2% na urocultura, 2,1% na cultura de swab vaginal, 13,6% na cultura dos swabs prepuciais e 28,6% no cultivo de sêmen. Dos 71 animais positivos no cultivo microbiológico, 92,9% apresentaram-se positivos na hemocultura. Nos demais materiais foram obtidos percentuais menores. A sensibilidade relativa da SAR resultou em 66,2% e a especificidade relativa 93,9%. A SAR-2ME apresentou sensibilidade relativa de 29,5% com ligeiro aumento na especificidade relativa 98,2%. Quando associados SAR e hemocultura foram observados 97,6% e 93,9% de sensibilidade e especificidade, respectivamente. Os resultados sugerem a utilização associada da SAR à hemocultura sem realização em paralelo com 2-ME. / Canine brucellosis caused by Brucella canis (B. canis) is one of the major infectious causes of reproductive disorders in dogs. The present study aimed to compare the performance of bacteriological methods and Rapid Slide Agglutination Test (RSAT) with or without 2-Mercaptoethanol (2-ME) in canine brucellosis diagnosis. Additionally, blood, urine, vaginal and prepucial swabs and semen were evaluated regarding their use in bacteriological diagnostic. Two hundred thirty six dogs, many of them showing reproductive problems, were submitted to investigation for diagnosis of B. canis infection. Among them, 24.2% were positive in RSAT, 10.2% 2ME-RSAT, 28% blood culture, 9.2% urine culture, 2.1% vaginal swab culture, 13.6% prepucial swab culture and 28.6% semen culture. Among the 71 positive dogs in bacteriological culture, 92.9% were positive in blood culture. The percentage of positivity was variable in others samples. The relative sensitivity of RSAT was 66.2% and the relative specificity was 93.9%. The 2ME-RSAT presented lower sensitivity 29.5% and greater specificity 98.2%. The use of blood culture and RSAT associated presented 97.6% e 93.9% of sensibility and specificity, respectively. These results suggest that RSAT should be used with blood cultures independently of the use of 2ME-RSAT.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-27Bitstream added on 2014-06-13T20:35:27Z : No. of bitstreams: 1 blankenheim_tm_me_jabo.pdf: 1604167 bytes, checksum: 4a1bd2c15849129ba10ee344bb637ad3 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O trabalho teve como objetivo analisar a resposta sorológica induzida pela vacinação com a dose padrão de 60-120x109 organismos da amostra B19 de Brucella abortus em bezerras da raça Tabapuã, com idade entre 3 e 8 meses, pelos testes sorológicos preconizados pelo Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose (PNCEBT) para diagnóstico da brucelose bovina. Foram examinadas amostras de soro sanguíneo de 72 animais em quatro provas sorológicas: antígeno acidificado tamponado (AAT), teste de soroaglutinação lenta juntamente com o teste de 2-mercaptoetanoll (2-ME), reação de fixação de complemento (RFC) e teste de polarização fluorescente (TPF), o qual foi interpretado de duas formas: ponto de corte variável e ponto de corte fixo. As amostras de soro sanguíneo foram colhidas imediatamente antes da vacinação, e após 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330 e 360 dias. Foi calculada a especificidade dos testes, e os resultados foram comparados pelo indicador kappa e pelo teste ² de McNemar. O TPF apresentou especificidade mais elevada do que os outros testes nas amostras colhidas dos 30 aos 90 dias após a vacinação, mas com o passar do tempo a diferença entre a especificidade do TPF e a dos outros testes diminuiu. Aos 270 dias de vacinação, observou-se especificidade de 93,74% no AAT, no 2-ME e na RFC. No TPF com ponto de corte variável a especificidade foi 87,5%, e com ponto de corte fixo foi 100,0%. Foi possível concluir que o TPF apresentou maior capacidade de discriminação dos títulos de anticorpos vacinais logo após a vacinação, quando comparado com os outros testes preconizados pelo PNCEBT, apresentando-se, portanto, como uma ferramenta útil para o diagnóstico da brucelose bovina, além de ser de execução fácil e rápida / The study aimed to analyze the antibody response induced by vaccination with the standard dose of 60-120x109 organisms of Brucella abortus strain 19 in Tabapuã heifers, aged between 3 and 8 months, by serological tests recommended by the National Program for Brucellosis and Tuberculosis Control and Eradication (PNCEBT) for the diagnosis of bovine brucellosis. Serum samples of 72 animals were examined by four serological tests: rose Bengal test (RBT), standard agglutination test with the 2-mercaptoetanol (2-ME) test, complement fixation test (CFT) and fluorescence polarization assay (FPA), which was interpreted in two ways: variable cutoff and fixed cutoff. Heifers were bled immediately prior to vaccination, and after 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330 and 360 days. Specificity of the tests were calculated, and the results were compared using the kappa statistic and the McNemar's ² test. The FPA had a higher specificity than the other tests on the samples collected from 30 to 90 days after vaccination, but over time this difference decreased. At 270 days of vaccination, the specificity of RBT, 2-ME and RFC was 93.74%. The specificity of the FPA with variable cutoff was 87.5%, and with fixed cutoff was 100.0%. It was concluded that FPA had a higher discrimination ability for vaccination antibody titers shortly after vaccination, when compared with other tests recommended by the PNCEBT, and is a useful tool for the diagnosis of bovine brucellosis, besides being easy and quick to perform

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-20Bitstream added on 2014-06-13T19:55:44Z : No. of bitstreams: 1 sobrinho_lsv_me_araca.pdf: 921356 bytes, checksum: 29d3e58899a35e5de14b32e263c2fe77 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo do presente estudo foi determinar em uma população de 302 gatos provenientes de área endêmica para leishmaniose visceral, a prevalência da infecção por Leishmania spp. e a presença de coinfecção pelo Toxoplasma gondii, vírus da imunodeficiência felina (FIV) e vírus da leucemia felina (FeLV). Foram evidenciadas formas amastigotas de Leishmania spp. em 9,93% (30/302) dos animais. A prevalência da leishmaniose observada por meio dos métodos de ELISA-proteína A, ELISA-IgG ou exame parasitológico direto foi de 21,85% (66/302), sendo 13,64% (9/66) positivos no exame parasitológico direto e sororeagentes nas técnicas de ELISA indireto. Doze animais (70,59%) foram sororeagentes para o FIV e a Leishmania spp., enquanto 17 (25,76%) apresentaram anticorpos anti-Toxoplasma gondii e anti-Leishmania spp. e cinco (71,43%) apresentavam infecção pelos três agentes. Não foi observada coinfecção entre Leishmania spp. e o FeLV. Houve associação estatisticamente significante entre a coinfecção por Leishmania spp. e pelo vírus da imunodeficiência felina, bem como entre a presença de Leishmania spp., do vírus da imunodeficiência felina e do Toxoplasma gondii. A sensibilidade e a especificidade dos métodos de ELISA-proteína A, ELISA-IgG e reação de imunofluorescência indireta para o diagnóstico de leishmaniose felina foram de 56,6% e 89,47%, 55,55% e 90,96% e 54,55% e 96,80%, respectivamente. As concordâncias entre a RIFI e as técnicas de ELISA-proteína A e ELISA-IgG foram fracas. No entanto, houve boa concordância entre as duas últimas técnicas. O presente estudo verificou que gatos residentes em área endêmica para leishmaniose visceral são predispostos à coinfecção por Leishmania spp. e vírus da imunodeficiência felina, e que parte deles desenvolvem sintomas inespecíficos e devem ser investigados em um diagnóstico diferencial / The aim of this study was to determine, in a population of 302 cats from an endemic area for visceral leishmaniasis, the prevalence of the infection by Leishmania spp. and the presence of co-infection by Toxoplasma gondii, feline immunodeficiency virus (FIV) and feline leukemia virus (FeLV). Amastigote forms of Leishmania spp were evidenced in 9.93% (30/302) of the animals. Prevalence of leishmaniasis by ELISA-prot A, ELISA-IgG or direct parasitological examination was 21.85% (66/302), being 13.64% (9/66) positive in both direct parasitological examination and ELISA. Twelve animals (70.59%) were seroreagent for FIV and Leishmania spp., while 17 (25.76%) showed antibodies against Toxoplasma gondii and Leishmania spp. and five (71.43%) showed antibodies against those three agents. Co-infection was not observed between Leishmania spp. and FeLV. There was statistically significant correlation between the co-infection by Leishmania spp. and by the immunodeficiency virus, as well as among the present of Leishmania spp, feline immunodeficiency virus and Toxoplasma gondii. The susceptibility and the specificities of (the methods) ELISA-prot A, ELISA-IgG and reaction of indirect immunofluorescence for the diagnosis of feline leishmaniasis were 56.6% and 89.47%, 55.55% and 90.96% and 54.55% and 96.80%, respectively. The agreements between RIFI and ELISA-prot A and ELISA-IgG techniques were weak. However, there was a good agreement between the last two techniques. This study verified that cats from endemic areas for visceral leishmaniasis are predisposed to co-infection by Leishmania spp. and feline immunodeficiency virus, and that part of them developed nonspecific symptoms and should be investigated in a differential diagnosis

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-06-22Bitstream added on 2014-06-13T19:55:51Z : No. of bitstreams: 1 mariutti_rb_me_sjrp.pdf: 594995 bytes, checksum: 89516139d0654c33b1221cfd31a27c6d (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / No Brasil, foram descritas mais de dez viroses em feijoeiro, citando-se aquela causada pelo Southern bean mosaic virus (SBMV) do gênero Sobemovirus. Este vírus tem uma restrita gama de hospedeiras, confinada quase exclusivamente a espécies da família das leguminosas, sendo algumas de interesse econômico como o feijoeiro comum e a soja. O SBMV é a espécie tipo do gênero, possui partículas isométricas (28-30nm) contendo RNA genômico de 4-4,5kb com polaridade positiva e proteína capsidial com massa molecular de 29-30 kDa. O genoma do SBMV é constituído por quatro Open Reading Frames (ORFs) com sobreposição entre elas. A ORF 1 codifica uma possível proteína do movimento, a ORF 2 uma poliproteína, que por clivagem, origina três produtos funcionais: uma serino protease, uma proteína ligadora do genoma viral (VPg) e uma polimerase com atividade relacionada à replicação do RNA viral (RNA polimerase RNA-dependente, RpRd). Dentro da ORF 2 encontra-se a ORF 3, que codifica uma proteína de função desconhecida. A ORF 4 codifica a proteína capsidial, traduzida a partir de um RNA subgenômico. O presente trabalho consiste na expressão da proteína P1 do SBMV-SP em Escherichia coli, sua purificação e a posterior utilização para a produção de antissoro policlonal. As atividades realizadas compreenderam a purificação das partículas virais do SBMV isolado São Paulo (SBMV-SP) a partir de folhas infectadas de Phaseolus vulgaris ‘Jalo’, obtenção do RNA viral a partir de partículas purificadas, produção de cDNA utilizando primer anti-senso, amplificação do gene da proteína do movimento, purificação do fragmento amplificado, ligação em vetor de multiplicação pGEM-T, transformação em células competentes de Escherichia coli linhagem TOP 10, purificação do vetor, corte enzimático com as enzimas Bam HI e Hind III, subclonagem nos vetores de expressão... / In Brazil, more than ten bean viroses were described, including the one caused by Southern bean mosaic virus (SBMV) from genus Sobemovirus. This virus has a strict host range, confined almost exclusively to species from leguminosas family, and some of them have economic importance, like the common bean and soya. SBMV is the type species from this genus, has isometric particles (28-30nm) that contains genomic RNA of 4-4,5kb with positive polarity and a capsidal protein with molecular mass of 29-30kDa. SBMV genome consistis of four Open Reading Frames (ORFs) with overlap between them. ORF 1 encodes a possible movement protein, ORF 2 a poliprotein, which origin three functional products by clivage: a serin protease, a viral genomic biding protein (VPg) and a polimerase. Inside ORF 2 is situated the ORF 3, that encodes a protein with unknow function. ORF 4 encodes the capsidal protein, translated by a subgenomic RNA. The activities performed until this moment were the purification of SBMV isolated São Paulo(SBMV-SP) viral particles, obtention of viral RNA from SBMV purified partcles, cDNA production using anti-sense primer, amplification of the supposed gene of movement protein, purification of the amplified fragment and later biding on expression vector pGEM-T. The recombinat vector were transformed in Escherichia coli cells competent and than purified and digested with Bam HI and Hind III enzime. The released fragment was subcloned in pMAL and pET28a, which were used on competent cells for expression tests. Analysis of gel poliacrialamida showed the efficiency of tests of expression. Using pET28a was observed an expression of a protein of approximately 22 kDa (17 kDa relating to MP + 5 kDa relating to the tail of histidine) which was purified in resin Ni-NTA by affinitive chromatography.Using pMAL was observed an expression of a protein of approximately... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-25Bitstream added on 2014-06-13T18:56:53Z : No. of bitstreams: 1 andre_mr_me_jabo.pdf: 427316 bytes, checksum: 366b68e3f9cae8ab0938b9ab1032ffb9 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Poucos relatos têm sido feitos sobre o diagnóstico da erliquiose e babesiose em felinos domésticos e selvagens brasileiros, os quais são baseados diretamente pela presença de mórulas em leucócitos e piroplasmas em eritrócitos, e indiretamente pela detecção de anticorpos anti-Ehrlichia canis. O presente estudo teve como objetivo realizar a detecção molecular de E. canis e B. canis e a presença de anticorpos da classe IgG contra esses hemoparasitas em amostras de sangue e soro, respectivamente. Neste utilizamos 72 felídeos selvagens brasileiros mantidos em cativeiro em algumas instituições e zoológicos. Pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), dezoito (25%) e cinqüenta e três (73,6%) dos 72 animais amostrados foram sororeagentes frente aos antígenos de E. canis e B. canis, respectivamente. Na PCR para E. canis, onze (15,3%) dos 72 animais amostrados foram positivos. Os amplicons foram confirmados por seqüenciamento e o DNA de E. canis encontrado mostrou grande similaridade genética com amostras de E. canis isoladas no Brasil, México, Portugal, Grécia e Taiwan, com 98% de similaridade. Nenhuma das amostras foi positiva na PCR para B. canis. Destaca-se a importância e a primeira detecção molecular de E. canis e presença de anticorpos anti-E. canis e anti-B. canis em felídeos selvagens brasileiros mantidos em cativeiro. / Few are the reports that have been carried out on ehrlichiosis and babesiosis diagnostic in Brazilian domestic and wild felids, which are based directly on the presence of morulae in leucocytes and piroplasms in erythrocytes, and indirectly by detection of antibodies against E. canis. The aim of this study was to detect molecularly E. canis and B. canis and the presence of anti-E. canis and B. canis IgG antibodies in the blood and sera samples, respectively, from 72 Brazilian wild captive felids maintained in some instituitions and zoos. Eighteen (25.0%) and fifty-three (73.6%) out of 72 animals were seroreagent for E. canis and B. canis antigen, respectively, by IFA (Indirect Immunofluorescent Assay). Eleven (15.3%) of the 72 samples were positive for nPCR E. canis. The amplicons were confirmed by sequencing and the E. canis DNA found appeared to be closely related to E. canis samples from Brazil, Mexico, Portugal, Greece and Taiwan with 98% percent identity. None of the 72 samples were positive for B. canis by PCR. This is the first molecular detection of E. canis and presence of seroreactivity for both B. canis and E. canis in Brazilian wild captive felids.