Introduction: L'homéostasie du cholestérol est indispensable à la synthèse de la testostérone dans le tissu interstitiel et la production de gamètes mâles fertiles dans les tubules séminifères. Les facteurs enzymatiques contribuent au maintien de cet équilibre intracellulaire du cholestérol. L'absence d'un ou de plusieurs enzymes telles que la HMG-CoA réductase, la HSL et l'ACAT-1 a été associée à l'infertilité masculine. Toutefois, les facteurs enzymatiques qui contribuent au maintien de l'équilibre intra-tissulaire du cholestérol n'ont pas été étudiés. Cette étude a pour but de tester l'hypothèse que le maintien des taux de cholestérol compatibles avec la spermatogenèse nécessite une coordination de la fonction intracellulaire des enzymes HMG-CoA réductase, ACAT1 et ACAT2 et la HSL. Méthodes: Nous avons analysé l'expression de l’ARNm et de la protéine de ces enzymes dans les fractions enrichies en tubules séminifères (STf) de vison durant le développement postnatal et le cycle reproductif annuel et dans les fractions enrichies en tissu interstitiel (ITf) et de STf durant le développement postnatal chez la souris. Nous avons développé deux nouvelles techniques pour la mesure de l'activité enzymatique de la HMG-CoA réductase et de celle de l'ACAT1 et ACAT2. En outre, l'immunohistochimie a été utilisée pour localiser les enzymes dans le testicule. Enfin, les souris génétiquement déficientes en HSL, en SR-BI et en CD36 ont été utilisées pour élucider la contribution de la HMG-CoA réductase, l'ACAT1 et l'ACAT2 et la HSL à l'homéostasie du cholestérol. Résultats: 1) HMG-CoA réductase: (Vison) La variation du taux d’expression de l’ARNm de la HMG-CoA réductase était corrélée à celle de l'isoforme de 90 kDa de la protéine HMG-CoA réductase durant le développement postnatal et chez l'adulte durant le cycle reproductif saisonnier. L'activité enzymatique de la HMG-CoA réductase augmentait de façon concomitante avec le taux protéinique pour atteindre son niveau le plus élevé à 240 jours (3.6411e-7 mol/min/μg de protéines) au cours du développement et en Février (1.2132e-6 mol/min/μg de protéines) durant le cycle reproductif chez l’adulte. (Souris), Les niveaux d'expression de l'ARNm et l'activité enzymatique de la HMG-CoA réductase étaient maximales à 42 jours. A l'opposé, le taux protéinique diminuait au cours du développement. 2) HSL: (Vison), l'expression de la protéine de 90 kDa de la HSL était élevée à 180- et 240 jours après la naissance, ainsi qu'en Janvier durant le cycle saisonnier chez l'adulte. L'activité enzymatique de la HSL augmentait durant le développement pour atteindre un pic à 270 jours (36,45 nM/min/μg). Chez l'adulte, l'activité enzymatique de la HSL était maximale en Février. (Souris) Le niveau d’expression de l'ARNm de la HSL augmentait significativement à 21-, 28- et 35 jours après la naissance concomitamment avec le taux d'expression protéinique. L'activité enzymatique de la HSL était maximale à 42 jours suivie d'une baisse significative chez l'adulte. 3) ACAT-1 et ACAT-2: Le présent rapport est le premier à identifier l’expression de l'ACAT-1 et de l'ACAT-2 dans les STf de visons et de souris. (Vison) L'activité enzymatique de l'ACAT-2 était maximale à la complétion du développement à 270 jour (1190.00 CPMB/200 μg de protéines) et en janvier (2643 CPMB/200 μg de protéines) chez l'adulte. En revanche, l'activité enzymatique de l'ACAT-1 piquait à 90 jours et en août respectivement durant le développement et chez l'adulte. (Souris) Les niveaux d'expression de l'ARNm et la protéine de l'ACAT-1 diminuait au cours du développement. Le taux de l'ARNm de l'ACAT-2, à l’opposé du taux protéinique, augmentait au cours du développement. L'activité enzymatique de l'ACAT-1 diminuait au cours du développement tandis que celle de l'ACAT-2 augmentait pour atteindre son niveau maximal à 42 jours. 4) Souris HSL-/ -: Le taux d’expression de l'ARNm et l'activité enzymatique de la HMG-CoA réductase diminuaient significativement dans les STf de souris HSL-/- comparés aux souris HSL+/+. Par contre, les taux de l'ARNm et les niveaux des activités enzymatiques de l'ACAT-1 et de l'ACAT-2 étaient significativement plus élevés dans les STf de souris HSL-/- comparés aux souris HSL+/+ 5) Souris SR-BI-/-: L'expression de l'ARNm et l'activité enzymatique de la HMG-CoA réductase et de l'ACAT-1 étaient plus basses dans les STf de souris SR-BI-/- comparées aux souris SR-BI+/+. A l'opposé, le taux d'expression de l'ARNm et l'activité enzymatique de la HSL étaient augmentées chez les souris SR-BI-/- comparées aux souris SR-BI+/+. 6) Souris CD36-/-: L'expression de l'ARNm et l'activité enzymatique de la HMG-CoA réductase et de l'ACAT-2 étaient significativement plus faibles tandis que celles de la HSL et de l'ACAT-1 étaient inchangées dans les STf de souris CD36-/- comparées aux souris CD36+/+. Conclusion: Nos résultats suggèrent que: 1) L'activité enzymatique de la HMG-CoA réductase et de la HSL sont associées à l'activité spermatogénétique et que ces activités ne seraient pas régulées au niveau transcriptionnel. 2) L'ACAT-1 et de l'ACAT-2 sont exprimées dans des cellules différentes au sein des tubules séminifères, suggérant des fonctions distinctes pour ces deux isoformes: l'estérification du cholestérol libre dans les cellules germinales pour l'ACAT-1 et l'efflux du cholestérol en excès dans les cellules de Sertoli au cours de la spermatogenèse pour l'ACAT-2. 3) La suppression génétique de la HSL diminuait la HMG-CoA réductase et augmentait les deux isoformes de l'ACAT, suggérant que ces enzymes jouent un rôle critique dans le métabolisme du cholestérol intratubulaire. 4) La suppression génétique des transporteurs sélectifs de cholestérol SR-BI et CD36 affecte l'expression (ARNm et protéine) et l'activité des enzymes HMG-CoA réductase, HSL, ACAT-1 et ACAT-2, suggérant l'existence d’un effet compensatoire entre facteurs enzymatiques et non-enzymatiques du métabolisme du cholestérol dans les fractions tubulaires. Ensemble, les résultats de notre étude suggèrent que les enzymes impliquées dans la régulation du cholestérol intratubulaire agissent de concert avec les transporteurs sélectifs de cholestérol dans le but de maintenir l'homéostasie du cholestérol intra-tissulaire du testicule. / Introduction: Cholesterol homeostasis is essential for the synthesis of testosterone in interstitial tissue and the production of fertile gametes in the seminiferous tubules of the testis. Intracelluar cholesterol equilibrium in the testis is delicately maintained and regulated by enzymatic factors. The absence of one or more enzymes (HMG-CoA reductase, HSL and ACAT) has been implicated in the development of male infertility. However, the enzymatic factors that contribute to the maintenance of cholesterol equilibrium have not been investigated. This study is to test the hypothesis that the coordinated function of intracellular enzymes, HMG-CoA reductase, HSL and ACAT isoforms, are the basis of a system that helps to maintain cholesterol equilibrium during spermatogenesis. Methods: We characterized mRNA and protein expression levels of these enzymes in mink seminiferous tubules-enriched fraction (STf) during development and the annual reproductive cycle; or in mouse interstitial tissue-enriched fraction (ITf) and STf during postnatal development. Two novel techniques were developed to measure the HMG-CoA reductase, HSL and ACAT activities in mink and mouse STf. Additionally, immunohistochemistry was used to localize the enzymes in the testis. Finally, HSL knockout (KO) infertile male mice and selective cholesterol transporter (SR-BI, CD36) KO mice were used to elucidate the contribution of HMG-CoA reductase, HSL and ACAT isoforms in testicular cholesterol homeostasis when the enzyme or cholesterol transport system was genetically impeded. Results: 1) HMG-CoA reductase: (In mink STf), HMG-CoA reductase mRNA levels were relatively independent of 90kDa protein expression during development and the seasonal cycle. HMG-CoA reductase activity increased independently of its protein expression and reached maximal values by day 240 (3.6411e-7 mol/min/μg protein) during development and peaked in February (1.2132e-6 mol/min/μg protein) during the seasonal cycle. (In mouse STf), HMG-CoA reductase mRNA levels and enzymatic activity peaked by 42 days before decreasing while the protein levels tended to decrease steadily. 2) HSL: (In mink STf), an increase of 90kDa HSL protein expression by day 180- and 240 after birth as well as in January in seasonal cycle, was not related to the enzyme mRNA expression. HSL activity increased progressively through development and peaked by 270 days (36.45 nM/min/μg); another high HSL activity was shown in February. (In mouse STf), three significant elevations in HSL mRNA levels by day 21, 28, and 35 corresponded to a steady elevation of HSL protein expression throughout development. HSL activity peaked by day 42 but decreased remarkably in the adult. 3) ACAT-1 and ACAT-2: This is the first report to establish the presence of both ACAT-1 and ACAT-2 in the mink and mouse testis. (In mink STf), ACAT-2 activity reached its maximal value at 1190.00 CPMB/200μg protein by day 270 and 2643 CPMB/200μg protein in January. In contrast, ACAT-1 activity peaked by day 90 or in August during the seasonal cycle. (In mouse STf), ACAT-1 mRNA and protein levels were both decreased throughout development; ACAT-2 mRNA levels changes in the opposite direction of the protein levels, increasing throughout development. ACAT-1 activity in STf decreased throughout the development; while ACAT-2 activity increased significantly during development and peaked by day 42. 4) HSL-/- mice: KO HSL gene caused a decrease of HMG-CoA redutase mRNA expression and enzymatic activity in STf. However, ACAT-1 and ACAT-2 mRNA levels and enzymatic activities significantly increased in STf. 5) SR-BI-/- mice: The mRNA expression and activity of HMG-CoA reductase as well as ACAT-1 were statistically decreased in STf; whereas HSL mRNA level and activity were increased. 6) CD36-/- mice: The mRNA expression and activity of HMG-CoA reductase as well as ACAT-2 were significantly decreased in STf; while HSL and ACAT-1 mRNA levels and activities remained constant. Conclusion: These results suggest that 1) Activation of HMG-CoA reductase and HSL is associated with spermatogenetic activity, while the enzymatic activities may not only be regulated transcriptionally. 2) ACAT-1 and ACAT-2 are expressed in different cells of the tubules, suggesting distinct functions for these two closely related enzyme isoforms, with ACAT-1 being related to cholesterol esterification in germ cells and with ACAT-2 being associated with the removal of excessive cholesterol by Sertoli cells during spermatogenesis. 3) Genetically blocking HSL reduced the activity of HMG-CoA reductase while increasing activity of ACAT isoforms, suggesting the turn-off the enzyme in the cholesterol ester cycle may be essential for the accumulation of cholesterol esters in the tubules. 4) The dysfunction of intracellular cholesterol transporters affects regulation of the enzymes (HMG-CoA reductase, HSL and ACAT-1 and ACAT-2), which is presumably in response to compensatory extracellular cholesterol uptake. This study suggests that the enzymes implicated in the regulation of intracellular cholesterol may act cooperatively to maintain cholesterol homeostasis in testis.

No description available.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karolinska institutet, 2007. / Härtill 4 uppsatser.

The goal of this experiment was to describe the testicular biometry, the morphology of seminiferous tubules, determine the intrinsic income of spermatogenesis, and estimate the daily sperm production and the support capacity of Sertoli cells of Crioulo horses out of the breeding season. Ten stallions with a mean age of 48 months were used in this study. The mean body weight of the stallions was of 377.5 kg. The mean testicular weight was of 162.9 grams, the gonadosomatic index was 0.087% and the tubulosomatic index was 0.067%. The proportion of seminiferous tubuli and of intertubular tissue was of 77.97% and 22.03%, respectively. The tubular diameter was of 205μm and the seminiferous epithelium height was of 70μm. The length of the seminiferous tubuli per gram of testicle was of 26.09 meters. The spermatogonial mitosis efficiency coefficient was estimated in 3.9 preleptotene/leptotene spermatocytes produced from each type A spermatogonia. The meiotic index was of 3.9 cells, and the estimated value of cell loss during prophase in meiosis was of 10%. The overall rate of spermatogenesis was of 13.9 cells. The estimated number of Sertoli cells per gram of testis was of 54.8 million, and each Sertoli cell had the capacity to support 9.0 germ cells. The total sperm reserve was an estimated 46.8 billion, and the daily sperm production was of 3.8 billion sperm per testicle, which is equivalent to 23.5 million of sperm per gram of testicle. It was concluded that the data found in this study were similar to other horse breeds. However, the number of Sertoli cells per gram of testicle, the total and per gram daily sperm production was higher to those published in other breeds of horses, which indicate a possible superiority of potential fertility of the Crioulo breed. / Os objetivos deste experimento foram descrever a biometria testicular, a morfologia dos túbulos seminíferos, determinar o rendimento intrínseco da espermatogênese, estimar a produção espermática diária e a capacidade de suporte das células de Sertoli em equinos Crioulos, fora da temporada de monta, utilizando-se 10 garanhões com idade e peso médio de 48 meses e 377Kg, respectivamente. O peso médio dos garanhões foi de 377,5kg, o peso testicular médio foi de 162,9g, o índice gonadossomático de 0,087% e o índice tubulossomático de 0,067%. A proporção de túbulos seminíferos foi de 77,97% e a de tecido intertubular foi de 22,03%. O diâmetro tubular corrigido foi de 205μm e a altura do epitélio seminífero de 70μm. O comprimento dos túbulos seminíferos por grama de testículo foi 26,09m. Estimou-se o índice de eficiência das mitoses espermatogoniais em 3,9 espermatócitos primários em pré-leptóteno/leptóteno produzidos a partir de cada espermatogônia A. O rendimento meiótico foi de 3,9 células, e o valor estimado de perdas celulares durante a prófase meiótica de 10%. O rendimento geral da espermatogênese foi de 13,9 células. O número de células de Sertoli por grama de testículo estimado foi de 54,80 milhões e, cada uma, teve capacidade para sustentar 10,4 células germinativas. A reserva espermática total foi estimada em 46,8 bilhões, e a produção espermática diária de 3,8 bilhões de espermatozóides por testículo, o que equivale a 23,5 milhões de espermatozóides por grama de testículo. Conclui-se que os dados da biometria testicular, os da morfologia dos túbulos seminíferos, o rendimento meiótico, o índice de perdas celulares e a capacidade de suporte das células de Sertoli aqui encontrados foram semelhantes as demais raças de eqüinos. Já o número de células de Sertoli por grama de testículo, a produção espermática diária total e por grama de testículo foram superiores, indicando uma possível superioridade da fertilidade potencial da raça Crioula.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-19Bitstream added on 2014-06-13T20:33:40Z : No. of bitstreams: 1 mendonca_pp_me_sjrp.pdf: 681812 bytes, checksum: d7353da4e0742a18d8d505b0587fda7b (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Os triatomíneos são insetos hematófagos de grande importância para a parasitologia humana, pois são transmissores do Trypanosoma cruzi, protozoário causador da doença de Chagas. Além de sua importância médico-sanitária, os triatomíneos destacam-se pela sua citogenética, pois possuem cromossomos holocêntricos e um modelo de meiose incomum, com meiose invertida para os cromossomos sexuais. Recentes pesquisas com marcadores moleculares em triatomíneos tentam compreender a ancestralidade do grupo. Uma das formas de se compreender a evolução entre espécies é a partir da análise de seqüências do DNA ribossômico (DNAr). Por pertencer a famílias multigênicas, cópias individuais do DNAr não acumulam mutações independentemente, resultando em pequena variação intra-específica e relevante diferenciação interespecífica. No presente trabalho foi realizado um estudo comparativo entre as espécies Triatoma maculata e Triatoma pseudomaculata, com base no uso das técnicas citogenéticas convencionais de orceína lacto-acética, impregnação por íons prata, bandamento-C, reação de Feulgen; da técnica de citogenética molecular de bandamento- C CMA/DAPI; e também por meio da análise da região ITS-1 do DNAr, com base no sequenciamento, com o objetivo de avaliar o grau de homologia entre as espécies estudadas. Os cariogramas das duas espécies indicaram dez pares de autossomos (um deles de tamanho maior) e um par de cromossomos sexuais (2n = 22). No ciclo meiótico foi possível observar a fragmentação da região nucleolar no final do estágio difuso. Corpúsculos nucleolares foram observados em alguns dos núcleos em metáfases meióticas de T. pseudomaculata, evidenciando a persistência nucleolar. A técnica de bandamento-C revelou que o cromossomo Y é heterocromático em ambas as espécies. O sequencimento da região ITS-1, indicou que as espécies apresenta... / The triatomines are hematophagous insects of great concern in public health because they are vectors of Trypanosoma cruzi, a protozoan that causes Chagas disease. Triatomines are also of great genetic interest, because that they present holocentric chromosomes and an unusual form of meiosis with post-reductional segregation of sex chromosomes. Recent studies based on molecular markers try to understand the evolutionary history of triatomines. To understand the evolution of a given species, ribosomal DNA (rDNA) analyses are frequently used, which can help to infer evolutionary relationships among species. Individual copies of rDNA do not accumulate mutations independently because they belong to multigene families, resulting in slight intraspecific and important interspecific variation. In this study, a comparative analysis was performed between the species Triatoma maculata and Triatoma pseudomaculata, based on the cytogenetic techniques of lacto-acetic orcein, silver ion impregnation, Cbanding, Feulgen reaction; and CMA/DAPI C-banding. We also compared the species by sequencing the ITS-1 rDNA internal transcribed region in order to evaluate the degree of homology among the studied species. The cariograms of the two species revealed ten autosomes and one pair of sexual chromosomes (2n= 22). In the meiotic cycle, nucleolar fragmentation during the final stages of meiotic prophase I was found. Nucleolar corpuscles were found in some meiotic metaphases of T. pseudomaculata, which is evidence of nucleolar persistence. The C-banding technique revealed that the Y chromosome is heterochromatic in both species. The ITS-1 rDNA sequences showed that the species presented a discharge proximity to each other, and had a high degree of homology (98.5%). The knowledge obtained in this study contributes to the understanding of the interrelation and distribution of those species, and offers... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:02:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 993981 bytes, checksum: 6248f33efc521385bbe0151f2cb62419 (MD5) Previous issue date: 2009-02-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / In comparison to mammals of the family Cervidae from other continents, the South American cervids are the most understudied. Moreover, approaches aiming to establish the reproductive biology of neotropical cervids are scarce. In this way, the objective of this study was to characterize morphologically and morphometrically the testis of the brown brocket deer (Mazama gouazoubira), providing information to improve the understanding of the reproductive biology of this species. For that, we have used seven adult male brown brocket deers, kept in captivity. Testicular fragments were obtained by testicular biopsy incision. The average body weight of brown brocket deer was 17.14kg, from which 0.40% were allocated in gonads and 0.33% in seminiferous tubules, which represented 85.86% of the testis parenchyma. The brown brocket deer presented high percentage of corporal mass allocated to testes and seminiferous tubules, exhibiting the greatest values described for most of studied mammalian species. The calculated volume of albuginea of right and left testis was 3.52mL, representing 5.33% of the testis mass. The volume of both mediastina was 1g, corresponding to 1.53% of testis mass. Therefore, the testicular parenchyma corresponds to 93.14% of the testis in brown brocket deers, making up a volume of 64.88mL. The average diameter of seminiferous tubules was 224.43µm and the average thickness of the seminiferous epithelium was 69.58µm. The brown brocket deer has around 1418m of seminiferous tubules in both testes, or an average of 21.47m of seminiferous tubules per gram of testis. The testicular parenchyma in the brown brocket deer was composed of 4.48% of Leydig cells, 4.41% of connective tissue, 2.89% of lymphatic vessels, and 2.36% of blood vessels. The Leydig cells occurred in groups of varied number of cells, with no particular pattern of distribution, and were observed around blood vessels, near to lymph vessels or associated with the lamina propria of seminiferous tubules. The average volume of Leydig cells was 677.52μm3 and their average nuclear diameter was 7.18µm. The average nuclear volume of Leydig cells was 194.33µm3. The nuclei of Leydig cells corresponded, in average, to 29.01% of total cell volume. The average total volume of Leydig cells in both testes was 2.90mL. The Leydigosomatic index was 0.0084% and the total number of Leydig cells per gram of testis was more than 60 millions. This number of Leydig cells per gram of testis is higher than that reported for most mammals studied. The organizational pattern of the testicular parenchyma of the brown brocket deers used in this study was similar to that described for most studied mammalian species, although with specific variations in the proportion and volume of some elements of the testicular parenchyma. Regarding the intertubular compartment, the organizational pattern of the elements of this region was in accordance with the standard type II, described by Fawcett, but presented variations in the connective tissue, which was slightly swollen. The qualitative and quantitative description of testicular histology of Brown brocket deer help to understand its spermatogenic process, and to establish parameters of the reproductive biology of this wild species. Furthermore, the preliminary data presented in this study could help subsequent research using other species of Brazilian cervids, especially those endangered, making possible the preservation of those species. / Em comparação com os mamíferos da família Cervidae de outros continentes, os cervídeos da América do Sul são os menos estudados. São escassas as pesquisas com a finalidade de estabelecer parâmetros para a biologia reprodutiva dos cervídeos neotropicais. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi caracterizar morfológica e morfometricamente o testículo do veado-catingueiro (Mazama gouazoubira), fornecendo informações que permitam compreender os aspectos básicos da biologia reprodutiva desta espécie. Foram utilizados sete veados-catingueiros adultos mantidos em cativeiro. Os fragmentos testiculares foram obtidos por meio de biópsia testicular incisional. O peso corporal médio dos veados-catingueiros foi de 17,14kg dos quais 0,40% estão alocados em gônada e 0,33% em túbulos seminíferos que representaram 85,86% do parênquima testicular. O veado-catingueiro apresentou um alto percentual de massa corporal alocada em testículo e túbulos seminíferos, enquadrando-se entre os maiores valores descritos para a maioria dos mamíferos estudados. Os volumes calculados para as albugíneas dos testículos direito e esquerdo foram de 3,52mL, representando 5,33% da massa testicular. O volume do mediastino em ambos os testículos foi de 1g, representando 1,53% da massa dos testículos. Portanto, o parênquima testicular ocupa, em veados-catingueiros adultos, 93,14% do testículo, perfazendo um volume de 64,88mL. O diâmetro médio dos túbulos seminíferos foi de 224,43µm e a espessura média do epitélio seminífero foi de 69,58µm. O veado-catingueiro apresenta em torno de 1418 metros de túbulos seminíferos em ambos os testículos, perfazendo uma média de 21,47 metros de túbulos seminíferos por grama de testículo. A organização do parênquima testicular de veados- catingueiros adultos é semelhante ao padrão descrito para os mamíferos, porém com variações específicas quanto à proporção e volumetria dos elementos do parênquima testicular. No veado-catingueiro, 4,48% do parênquima testicular é ocupado por células de Leydig, 4,41% por tecido conjuntivo, 2,89% por vasos linfáticos e 2,36% por vasos sanguíneos. As células de Leydig ocorrem em grupos de tamanhos variados não apresentando padrão de distribuição definido, podendo ser observadas ao redor dos vasos sanguíneos, próximas aos vasos linfáticos ou associadas com a lâmina própria dos túbulos seminíferos. O volume médio das células de Leydig foi de 677,52µm3 e o seu diâmetro nuclear médio foi de 7,18µm. O volume nuclear médio da célula de Leydig foi de 194,33μm3. O núcleo da célula de Leydig correspondeu, em média, a 29,01% do seu volume total. O volume médio total das células de Leydig em ambos os testículos foi de 2,90mL. O índice Leydigossomático foi de 0,0084% e o número total de células de Leydig por grama de testículo foi superior a 60 milhões. O número de células de Leydig por grama de testículo foi superior ao relatado para a maioria dos mamíferos já estudados. O intertúbulo de veado- catingueiro apresenta população celular semelhante ao descrito para mamíferos. O padrão de organização dos elementos do compartimento intertubular se enquadra no padrão tipo II descrito por Fawcett, mostrando tecido conjuntivo frouxo pouco edemaciado. A descrição e quantificação histológica testicular realizadas neste estudo auxiliam na compreensão dos padrões espermatogênicos desta espécie, estabelecendo parâmetros da sua biologia reprodutiva básica. Além disso, esses conhecimentos preliminares podem subsidiar trabalhos subseqüentes com outras espécies de cervídeos existentes no Brasil, especialmente as ameaçadas de extinção, possibilitando a obtenção de dados importantes para a conservação das mesmas.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1681295 bytes, checksum: 41cbc7f4bb36b7a1d7c8d9f98b41a88f (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / The coati (Nasua nasua) belonging the order Carnivora and the family Procyonidae, does not configure the List of species in Brazilian fauna threatened of extinction from the Ministry of the Environment. On the contrary, its unstoppable population growth near urban areas has been causing economic, environmental and sanitary problems. The detailed study about reproductive characteristics of this species proves to be an important tool in reproductive biotechnologies application concerning to conservation as well as to its population control. The objectives on this work were to describe the stages of the seminiferous epithelium combining the techniques of tubular morphology method and acrossomic system method, besides determining the total duration of seminiferous epithelium cycle (SEC) with the incorporation of bromodeoxyuridine (BrdU). In this experiment six captive adult male animals were used. All six animals were used in the description of the stages, but only two were used in the measurement of SEC duration. The total duration of the seminiferous epithelium cycle in this species was calculated in 8,13 days and, as long as it takes approximately 4,5 cycles so that the whole spermatogenic process is complete, about 36,58 days are spent in the production of spermatozoa from a spermatogonia. / O quati (Nasua nasua) pertencente a ordem Carnívora e a família Procyonidae, não configura a Lista das Espécies da Fauna Brasileira Ameaçada de Extinção do Ministério do Meio Ambiente (MMA). Pelo contrário, seu desenfreado crescimento populacional próximo à áreas urbanas, vem causando transtornos de ordem econômica, ambiental e sanitária. O estudo detalhado acerca das características reprodutivas desta espécie é uma potencial ferramenta na aplicação de biotécnicas reprodutivas voltadas a programas tanto de conservação quanto para seu controle populacional em locais onde atuam sinantropicamente. Os objetivos deste estudo foram descrever os estádios do ciclo do epitélio seminífero associando as primícias do método da morfologia tubular com o método do sistema acrossômico, além de calcular a duração total do ciclo do epitélio seminífero (CES) com incorporação da bromodeoxiuridina (BrdU). Foram utilizados seis animais machos adultos provenientes de cativeiro. Todos os animais foram utilizados na descrição dos estádios, mas somente dois destes para o cálculo da duração do CES. A duração total do ciclo do epitélio seminífero foi calculada em 8,13 dias e com aproximadamente 4,5 ciclos do epitélio seminífero são necessários para que todo o processo espermatogênico seja completado, cerca de 36,58 dias são despendidos na produção de espermatozóides a partir de uma espermatogônia.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 459969 bytes, checksum: 684ba7361082f44d749b2627833c1178 (MD5) Previous issue date: 2014-02-21 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Morphofunctional studies on the testis allied to studies in endocrinology, embryology and cryopreservation of gametes, generate information that can be applied in assisted reproduction, favoring the development of methodologies used in conservation of species. The objectives of this study were to quantify morphological and functional structures of the testicular parenchyma, calculate gonadosomatic, tubulosomatic, leydigosomatic and Sertoli cell indices; describe the duration of the seminiferous epithelium cycle (SEC) by identifying the most advanced germ cells labeled by 5- bromodeoxyuridine (BrdU); characterize the various stages that constitute the seminiferous epithelium cycle based on tubular morphology and calculate daily sperm production per gram of testis of jaguarundi (Pumayagouaroundi). For this purpose we used five adult males, one from Centro de Triagem de AniamaisSilvestres at Universidade Federal de Viçosa and four from ParqueZoológico de São Paulo. After chemical restraint animals had their body weight, body size, and diameter of the chest measured, and underwent testicular biopsies in order to obtain biological material for histological and immunohistochemical evaluation. In the studied Jaguarundis the average weight was 6.6 kg, being that 0.032% of it was allocated in testis (gonadosomatic index), which has 57.36 m of seminiferous tubule, coming to a tubulosomatic index of 0.027% . The total number of Leydig cells found in this species was 72.96 million cells and leydigosomatic index was calculated at 0.001%. Eight stages of the SEC were described and had their relative frequencies determined based on the tubular morphology method. At SEC, pre- meiotic stage of the spermatogenic process was higher than the other ones (48.66 %). Through the use of a cell proliferation marker (BrdU) injected in the testicles, labeled cells were observed in round spermatids of stage V after 14 days of application. From this, we can conclude that a seminiferous epithelium cycle of the Jaguarundi lasts 8.4 days, and the total spermatogenic process duration is 37.8 days. The Jaguarundi presented in the seminiferous epithelium, in each cross section of the seminiferous tubule at stage I of the cycle, an average of 1.03 spermatogonia type A; 9.78 primary spermatocytes at pre-leptotene/leptotene; 10.68 primary spermatocytes in pachytene; 25.3 round spermatids. The spermatogenesis general yield in this species was approximately 18.9 cells, and each Sertoli cell was able to sustain and maintain 14.24 round spermatids. The daily sperm production found demonstrates that the Jaguarundi is an animal with a high level of production, since its production is about 51.52 million sperm per gram of testis. / As pesquisas morfofuncionais sobre o testículo aliadas aos estudos em endocrinologia, embriologia e criopreservação de gametas, produzem informações que podem ser aplicadas na reprodução assistida, favorecendo o desenvolvimento de metodologias utilizadas na conservação de espécies. Os objetivos deste estudo foram quantificar as estruturas morfofuncionais do parênquima testícular, calcular os índices gonadossomáticos, tubulossomáticos e leydigossomáticos e de célula de Sertoli; descrever a duração do ciclo do epitélio seminífero pela identificação das células germinativas mais avançadas marcadas pela 5-bromodeoxiuridina (BrdU); caracterizar os diversos estádios que constituem o ciclo do epitélio seminífero com base na morfologia tubular e calcular a produção espermática diária por grama de testículo de gato mourisco (Puma yagouaroundi). Para isso foram utilizados cinco animais machos adultos, sendo um proveniente do Centro de Triagem de Animais Silvestres da Universidade Federal de Viçosa e quatro do Parque zoológico de São Paulo. Após contenção químicaos animais tiveram suas medidas corporais de peso, tamanho corporal, e diâmetro de tórax mensurados, foram também submetidos a biópsias testiculares a fim de se obter material biológico para avaliação histológica e imunohistoquímica. Nos gatos mourisco estudados a média de peso foi de 6,6 kg sendo desses, 0,032% alocados em testículo (índice gonadossomático) que possui 57,36 m de túbulo seminífero perfazendo um índice tubulossomático de 0,027%. O número total de células de Leydig encontradas nessa espécie foi de 72,96 milhões de células e o índice leydigossomático foi calculado em 0,001%. Foram descritos e determinada a frequência relativa de oito estádios do ciclo do epitélio seminífero (CES) com base no método da morfologia tubular. No CES a fase pré-meiótica do processo espermatogênico foi maior que as outras (48,66%). Através do uso de um marcador de proliferação celular injetado intratesticularmente (BrdU) foram observadascélulas marcadas em espermátides arredondadas do estádio V, após 14 dias da aplicação. A partir daí, pode-se concluir que um ciclo do epitélio seminífero do gato mourisco dura 8,4 dias, e o processo espermatogênico duração total de 37,8 dias. O gato mourisco apresentou no epitélio seminífero, em cada secção transversal do túbulo seminífero no estádio I do ciclo, em média, 1,03 espermatogônias do tipo A; 9,78 espermatócitos primários em pré-leptóteno/leptóteno; 10,68 espermatócitos primários em paquíteno; 25,3 espermátides arredondadas. O rendimento geral da espermatogênese nesta espécie foi de aproximadamente 18,9 células, e cada célula de Sertoli foi capaz de sustentar e manter 14,24 espermátides arredondadas. A produção espermática diária encontrada demonstra que o gato mourisco é um animal com alto nível de produção, uma vez que sua produção é cerca de 51,52 milhões de espermatozoides por grama de testículo.

A poluição atmosférica de centros urbanizados e industrializados é associada a diversos efeitos nocivos, incluindo alterações na fertilidade masculina. A toxicidade da poluição atmosférica da cidade de São Paulo já foi demonstrada em estudos experimentais e especula-se que seus efeitos sejam mediados por estresse oxidativo, porém, os mecanismos envolvidos ainda não são totalmente conhecidos. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da exposição à poluição atmosférica da cidade de São Paulo sobre os testículos de camundongos. Para isso, os animais foram expostos à fração da poluição atmosférica mais implicada em danos à saúde, o material particulado inalável fino, que é uma complexa mistura de substâncias com 2,5 ?m ou menos de diâmetro aerodinâmico (MP2,5). Um grupo de camundongos foi exposto ao MP2,5 durante o período gestacional e após o nascimento, no período entre o pós-desmame e a idade adulta (grupo pré-natal e pós-desmame - GPNPD); um segundo grupo de camundongos foi exposto ao MP2,5 apenas durante o período gestacional (grupo pré-natal - GPN); o terceiro grupo foi exposto ao MP2,5 apenas após o nascimento, depois do desmame até a idade adulta (grupo pós-desmame - GPD); e o quarto grupo foi o controle (GC), formado por camundongos que foram expostos ao ar filtrado, tanto durante o período gestacional quanto após o nascimento até a idade adulta. Os efeitos do MP2,5 foram avaliados nos testículos de animais adultos, com 90 dias de vida. Técnicas estereológicas foram aplicadas para analisar aspectos estruturais do testículo e o escore de Johnsen foi utilizado para avaliar qualitativamente a espermatogênese. A expressão gênica foi realizada pela técnica de microarranjos de DNA. Na comparação com o GC, os animais do GPNPD apresentaram peso e volume dos testículos, área de superfície dos túbulos seminíferos, volume do epitélio seminífero e peso dos epidídimos maiores, bem como menor qualidade da espermatogênese, com p < 0,05 em todos esses parâmetros. O GPD teve comportamento semelhante, porém, apenas o volume do epitélio seminífero e a qualidade da espermatogênese diferiram significativamente do GC. O volume do epitélio seminífero do GPN foi menor que o do GC e esse foi o único parâmetro com diferença estatística em relação ao GC. A análise de expressão gênica evidenciou alteração de expressão de genes envolvidos na espermatogênese e na esteroidogênese, além de vários outros genes envolvidos nas vias de resposta imune, estresse oxidativo, dano de DNA e apoptose. Os resultados deste estudo mostraram que a exposição ao MP2,5 da cidade de São Paulo foi capaz de causar alterações nas funções testiculares de camundongos / Air pollution in industrial and urban centers is related to negative effects in living organisms, including alterations in male fertility. Experimental studies had already showed toxicity aspects related to the air pollution of the city of Sao Paulo. The hypothesis surrounding its toxicity is based on oxidative stress, but the mechanisms are not yet completed understood. The objective of this study was to evaluate the effects of the exposure to air pollution of the city of Sao Paulo on mice testes. To do so, animals were exposed to the most deleterious fraction of the air pollution, the fine inhalable particulate matter, which consists of a complex mixture of particles sized 2,5 ?m or less of aerodynamic diameter (PM2,5). A group of mice was exposed to PM2,5 during gestational period and after birth, from the weaning day until adulthood (pré-natal and post-weaning group - PNPWG); another group was exposed to PM2,5 during gestational period only (pré-natal group - PNG); a third group was exposed to PM2,5 after birth, from the weaning day until adulthood only (post-weaning group - PWG); and finally, a fourth group of mice was exposed to filtered air during gestational period and from post-weaning day until adulthood (control group - CG). The analyses were performed on testes from adult animals. Stereological techniques were used to analyze structures of the testes and Johnsen\'s score to evaluate spermatogenesis in a qualitative way. DNA microarray were used to evaluate gene expression. Significant differences (p < 0,05) between the PNPWG and the CG were found for testis weight and volume, surface area of the seminiferous tubules, volume of the seminiferous epithelium and epididymis weight. For all these parameters the mean values of the PNPWG were higher. The quality of spermatogenesis in the PNPWG was also significant differently from CG, showing a worse quality of spermatogenesis. The PWG had similar results, however the only parameters with significant difference from the CG were the volume of the seminiferous epithelium and the quality of spermatogenesis. The volume of the seminiferous epithelium from the PNG showed significant lower mean compared to the CG. The gene expression analysis showed differential expression of genes related to spermatogenesis and steroidogenesis. Also, altered expression was found for genes related to oxidative stress, immune response, DNA damage and apoptosis ways. The results of the present study showed that the exposition to the PM2,5 of the city of Sao Paulo was capable of elicit testes alterations in mice

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-05-31T15:10:49Z No. of bitstreams: 1 Bruno Mendes Tenorio.pdf: 4101398 bytes, checksum: d81bf09fb306302eb9abbcd6d926a6a7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-31T15:10:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bruno Mendes Tenorio.pdf: 4101398 bytes, checksum: d81bf09fb306302eb9abbcd6d926a6a7 (MD5) Previous issue date: 2011-12-12 / In recent decades, humans have been exposed to various exogenous physical agents, such as high temperatures emitted by industrial devices and electromagnetic fields emitted by the electricity distribution networks and electronic devices. Researches demonstrated that these agents can cause reproductive disorders. The chapter 1 of this study aimed to investigate the possible effects of low frequency EMF exposure of 60 Hz and 1 mT from day 13 of gestation up to puberty at 21 postnatal days. The results showed that exposure to EMF reduced parameters related to the lumen, epithelium and seminiferous tubules. It was also observed an increase in the volume of blood vessels and connective tissue cells in animals exposed to EMF. The plasma testosterone did not change due to EMF exposure. The exposure to EMF of 60 Hz and 1 mT from gestation to puberty can induce a delay in testicular development. In chapter 2, the aim was to evaluate the effects of exposure to low frequency EMF (60 Hz and 1 mT) from the 13th day of gestation up to 90 postnatal days (adult). The plasma testosterone concentration was not changed by EMF exposure. However, the histopathological and histomorphometrical analysis showed testicular degeneration in a subset of animals exposed to EMF. The degenerative process severity varied among affected animals, indicating an individual sensitivity to EMF. The electron microscopy analysis also showed testicular degeneration, the main change was high electrodense mitochondria with loss of normal organization and cristae. The exposure to EMF of 60 Hz and 1 mT seems to alter spermatogenesis and reduce the fertility. Chapter 3 aimed to analyze the effects of heat shock (43 °C / 15 min.) and Hsp90 inhibition on CaV3 T-type calcium channels and calciumactivated potassium channels (BKCa) in Leydig cells. The results showed that exposure to heat shock induced a reduction in BKCa channels steady-state current (49.8%), maximum conductance (68.9%) and activation time constant (31.9%). Heat shock slowed the BKCa channels activation and reduced its voltage dependence. Hsp90 inhibition did not change BKCa channels. The CaV3 channels current was not affected by heat shock or Hsp90 inhibition. The heat shock can inhibit BKCa channels, the Hsp90 does not seem to be involved in this process. / Nas últimas décadas, os seres humanos vêm sendo expostos a vários agentes físicos exógenos, como temperaturas elevadas induzidas por equipamentos industriais e a exposição aos campos eletromagnéticos (CEM) emitidos por aparelhos eletrônicos. Pesquisas vêm demonstrando que estes agentes podem gerar distúrbios reprodutivos. O objetivo do capítulo 1 do presente trabalho foi investigar o possível efeito da exposição ao CEM de baixa frequência de 60 Hz e 1 mT desde o 13º dia de gestação até a puberdade aos 21 dias pós-natal. Os resultados demonstraram que a exposição ao CEM reduziu os parâmetros relacionados ao lúmen, epitélio e túbulos seminíferos. Também foi observado o aumento no volume dos vasos sanguíneos e das células do tecido conjuntivo nos animais expostos ao CEM. A testosterona plasmática não se alterou devido à exposição ao CEM. A exposição ao CEM de 60 Hz e 1 mT desde a gestação até a puberdade pode induzir o retardo no desenvolvimento testicular. No capítulo 2, o objetivo foi avaliar o efeito da exposição ao CEM de baixa frequência (60 Hz e 1 mT) desde o 13º dia de gestação até os 90 dias pós-natal (adulto). A concentração da testosterona plasmática não foi alterada devido à exposição ao CEM. Entretanto, as análises histopatológicas e histomorfométricas demonstraram degeneração testicular em um sub-grupo dos animais expostos ao CEM. A gravidade do processo degenerativo variou entre os indivíduos afetados, indicando uma sensibilidade individual ao CEM. A análise de microscopia eletrônica também demonstrou degeneração testicular, sendo a principal alteração observada a presença de mitocôndrias eletrodensas e com perda da sua organização e cristas. A exposição ao CEM de 60 Hz e 1 mT parece alterar a espermatogênese e reduzir a fertilidade. No capítulo 3, o presente trabalho objetivou analisar os efeitos do choque térmico (43ºC / 15 min.) e da inibição da Hsp90 nos canais de cálcio CaV3 tipo-T e potássio ativado por cálcio (BKCa) em células de Leydig. Os resultados obtidos revelaram que nos canais BKCa o choque térmico reduziu a corrente do estado estacionário em 49,8%, a condutância máxima em 68,9% e a constante de tempo de ativação em 31,9%. O choque térmico tornou mais lenta a ativação dos canais BKCa e reduziu sua dependência de voltagem. A inibição da Hsp90 não alterou os canais BKCa. A corrente dos canais CaV3 tipo-T não foi afetada pelo estresse térmico ou pela inibição da Hsp90. A exposição das células de Leydig à temperatura elevada pode inibir os canais BKCa, a Hsp90 parece não estar envolvida neste processo.