Made available in DSpace on 2018-08-01T21:35:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_11503_30ª Ata de Defesa de Tese_Josivany Valério.PDF: 74 bytes, checksum: 930ec4f1baf5a2516568337ce757bf49 (MD5) Previous issue date: 2016-08-30 / A obesidade é uma doença crônica inflamatória caracterizada pelo excesso de gordura e vem aumentando de forma significativa entre crianças e adolescentes levando a várias complicações na infância e na idade adulta, como: hipertensão arterial sistêmica, intolerância diminuiada à glicose, dislipidemia e diabetes tipo 2 (DT2). Uma série de fatores contribuem para a obesidade na infância e podem ser: genéticos,ambientais e comportamentais. Estudos têm investigado fatores genéticos que predispõem à obesidade, embora estes fatores ainda sejam pouco compreendidos. Os genes candidatos à predisposição à obesidade estão relacionados com a regulação da fome, balanço energético, metabolismo de lipídeos e glicose; e diferenciação de adipócitos. Neste contexto, análises de polimorfismos do gene transcription factor 7 like-2 (TCF7L2) que codifica um fator de transcrição envolvido na sinalização Wnt cateninadependente, via importante para funções de crescimento, metabolismo e sobrevivência celular, e no gene ADIPOQ que regula a sensibilidade à insulina, e está envolvido na resposta inflamatória e regulação do balanço energético, representam uma interessante oportunidade de identificar os determinantes genéticos primários envolvidos na susceptibilidade à obesidade e diabetes tipo 2 em crianças e adolescentes, uma vez que estas constituem um dos principais grupos-alvo para estratégias de pesquisa, prevenção e controle do sobrepeso e obesidade. Este trabalho teve como objetivo analisar as frequências dos genótipos para o polimorfismo rs7903146 no gene TCF7L2 e nos polimorfismos rs2241766 (+45T>G) e rs1501299 (+276 G>T) no gene ADIPOQ em adolescentes e verificar se algum genótipo e/ou modelo genético está associado à presença de obesidade e/ou diabetes tipo 2. Adolescentes matriculados em escolas públicas estaduais da Região Metropolitana de Vitória-ES, provenientes de uma amostra representativa do estudo Prevalência de sobrepeso e obesidade em adolescentes no Estado do Espírito Santo e sua associação com algumas variáveis da síndrome metabólica foram incluídos aleatoriamente no estudo genético. As avaliações antropométricas e coleta de sangue, após jejum de 12 horas, foram realizadas na própria escola. Para classificação do estado nutricional foi considerado o índice de massa corpórea/idade (IMC/I), em escore z. O DNA genômico foi extraído de amostras de sangue periférico. Para o gene TCF7L2, o DNA foi amplificado por reação em cadeia da polimerase alelo-específica e os produtos desta reação foram analisados por eletroforese em gel de poliacrilamida (12%), visualizados pela coloração em nitrato de prata a 0,1%. Para o gene ADIPOQ, o DNA foi amplificado por metodologia Taqman. A análise estatística foi realizada no software SPSS versão 23.0. Dados dos indivíduos relativos à raça, sexo, idade, IMC/I , glicemia e HOMA-IR (Homeostasis Model Assessment-Insulin Resistance) foram analisados. Para o gene TCF7L2 foram investigados 326 adolescentes (idade: 10-14 anos) divididos em grupo sem obesidade (n=299) e com obesidade (n = 27). Também foram analisadas as frequências para os modelos genéticos dominante ( TT+CT x CC), recessivo (CC+CT x TT) e aditivo (TT x CC), porém apenas para o modelo dominante foi verificada uma associação marginal (P= 0,054). Como a idade diferiu entre os grupos (P= 0,011), a amostra foi estratificada em dois subgrupos: ≤12 anos e >12 anos. O modelo genético dominante (CT+TT X CC) para o polimorfismo rs7903146, junto com o HOMA-IR e a idade explicaram a obesidade em adolescentes. Os demais parâmetros analisados nos dois grupos, não foram associados a nenhum genótipo ou modelo genético. Não foi observada associação entre o polimorfismo rs 7903146 e alterações precoces do metabolismo da glicose, mas ao risco aumentado de obesidade na primeira fase da adolescência (p=0,04). Para o gene ADIPOQ, foram investigados 355 adolescentes com idade variando de 10-14 anos, os quais foram divididos em dois grupos: com excesso de peso (n=110) e sem excesso de peso (n=245). Para o polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) rs2241766 (+45T>G) observamos associação dos genótipos com excesso de peso (p=0,04) e dos modelos genéticos dominante para o alelo T e aditivo com o excesso de peso (p=0,03), este SNP também foi associado aumento do IMC/I. Para o SNP rs1501299 (+276 G>T) não observamos associação dos genótipos com excesso de peso e o genótipo GT (p=0,02) e o modelo modelo genético dominante para o alelo T (p=0,02) neste SNP foram associados a maiores níveis de glicemia de jejum nos adolescentes deste estudo. Concluímos que os SNPs rs2241766 (+45T>G) e rs1501299 (+276 G>T) estão associados respectivamente ao aumento de IMC/I e Glicemia de jejum em adolescentes numa faixa etária entre 10 14 anos.

Submitted by FERNANDA DA SILVA VON PORSTER (fdsvporster@univates.br) on 2014-10-07T18:55:19Z No. of bitstreams: 3 license_text: 22302 bytes, checksum: 1e0094e9d8adcf16b18effef4ce7ed83 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) 2014CristianedosSantosCosta.pdf: 736932 bytes, checksum: 2f628152da789bab39257ffb16648018 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Lisboa Monteiro (monteiro@univates.br) on 2014-10-08T13:45:05Z (GMT) No. of bitstreams: 3 license_text: 22302 bytes, checksum: 1e0094e9d8adcf16b18effef4ce7ed83 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) 2014CristianedosSantosCosta.pdf: 736932 bytes, checksum: 2f628152da789bab39257ffb16648018 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-08T13:45:05Z (GMT). No. of bitstreams: 3 license_text: 22302 bytes, checksum: 1e0094e9d8adcf16b18effef4ce7ed83 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) 2014CristianedosSantosCosta.pdf: 736932 bytes, checksum: 2f628152da789bab39257ffb16648018 (MD5) / ntrodução: O Diabetes Mellitus tipo 2 (DM2) é uma doença complexa, metabólica e multifatorial que afeta a qualidade de vida dos acometidos. Estima-se que até 2025 ocorra um aumento de 170 % em sua prevalência. O DM2 tem como principal característica a hiperglicemia que a longo prazo leva à disfunções em diversos tecidos e órgãos. As causas da doença envolvem fatores ambientais e fatores genéticos. Dentre os principais genes envolvidos na patogênese dessa doença está o transcription factor 7 like- (TCF7L2) estando fortemente associado ao DM2. Objetivo: O objetivo deste estudo foi investigar a associação dos polimorfismos rs7903146 e rs12255372 do gene TCF7L2 em uma população de diabéticos e não diabéticos do RS. Metodologia: Participaram da pesquisa 579 indivíduos, sendo 261 portadores de DM2 e 318 saudáveis. Os indivíduos eram provenientes da região do Vale do Taquari e da região metropolitana de Porto Alegre. As amostras do DNA encontravam-se extraídas e estocadas no Laboratório de Biotecnologia da UNIVATES. Os parâmetros bioquímicos (glicose e hemoglobina glicada) foram determinados utilizando kits comerciais da marca Bioclin®. Os polimorfismos foram genotipados através da técnica de descriminação alélica Teqman (Applied Biosystems), em equipamento de PCR em tempo real (StepOne). O equilibrio de Hardy-Weinberg foi calculado através do teste do qui-quadrado. As análises estatísticas foram calculadas comparando diabéticos e não diabéticos e as associações entre os polimorfismos genéticos e as variáveis de gravidade dos indivíduos com DM2 foram avaliadas através do ANOVA para amostras independentes. Resultados: Foram observadas diferenças significativas em relação ao Índice de Massa Corporal (IMC), hemoglobina glicada e glicose nos pacientes diabéticos da região metropolitana. Observou-se uma diferença significativa em relação à frequência alélica do polimorfismo rs7903146 nos pacientes com DM2. Por outro lado, não se encontrou associação positiva comparando portadores do alelo T com as variáveis clínicas (glicose em jejum e hemoglobina glicada). Conclusão: O alelo T, considerado de risco, apresentou-se fortemente associado nos indivíduos diabéticos, confirmando a associação dessa variante com o DM2, sugerindo que ele possa estar influenciando no desenvolvimento do DM2, mas não atue modulando a severidade da doença, uma vez que não encontramos marcadores genéticos para as diferenças bioquímicas. Ressalta-se a importância de novas pesquisas para confirmar esses achados.

No description available.

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:01:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3081_1.pdf: 3854771 bytes, checksum: 12945eba1d50bff0e15c2bf021c535ae (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A diabetes é uma doença crônico-degenerativa que envolve alterações no metabolismo de carboidratos, lipídios e proteínas. Caracteriza-se por deficiência de secreção e/ou de ação da insulina com consequente hiperglicemia. É preocupante saber que dados da Organização Mundial de Saúde (OMS) prevêem um aumento no número de diabéticos de 171 milhões no ano de 2000 para 336 milhões em 2030, o que se assemelha a uma epidemia. A diabetes mellitus tipo 2 (DM2) é a principal responsável pelo incremento da doença no mundo atual. Este estudo teve como objetivo analisar a ocorrência das principais mutações do gene TCF7L2 (fator de transcrição 2 semelhante ao 7) relacionadas a DM2. Usando a técnica de PCR em tempo real com sondas TaqMan, foram genotipados quatro polimorfismos de um único nucleotídeo (Single Nucleotide Polymorphisms - SNPs) do gene TCF7L2: rs7903146 (C/T), rs7901695 (T/C), rs12255372 (G/T) e rs11196205 (G/C). A partir do resultado da genotipagem dos 340 indivíduos residentes no município de Triunfo - Pernambuco (112 diabéticos e 228 não diabéticos) foram calculadas as frequências alélicas, genotípicas e haplotípicas para o conjunto de SNPs, utilizando o programa UNPHASED. Uma associação significativa foi encontrada entre os SNPs rs7901695 e rs12255372 com DM2 (p = 0,0379 e p = 0,0119, respectivamente) na população estudada. As frequências alélicas corroboraram o que foi observado com os genótipos para o SNP rs7901695. Na análise haplotípica, os pares rs7901695 x rs11196205 e rs11196205 x rs12255372 apresentaram associação com DM2 (p = 0,007 e p = 0,015, respectivamente). Entre os haplótipos triplos, apenas um conjunto (rs7901695 x rs7903146 x rs12255372) não mostrou associação com diabetes (p = 0,2903). Portanto, no presente estudo, os SNPs do TCF7L2 encontraram-se em associação com DM2, sendo que se estes haplótipos forem estendidos, com a adição de outros do mesmo gene, podem-se ter haplótipos que, segregando nas famílias e caracterizando-as, permitam estabelecer um diagnóstico probabilístico preventivo a partir dessas mutações. Uma vez que esses dados sejam replicados, essa associação pode ser utilizada como marcador genético de risco para famílias, cujos ancestrais mais recentes tenham DM2, bem como para monitoração das mesmas. Neste estudo, foi também realizado um levantamento de dados das famílias do distrito de Canaã em Triunfo, a fim de estabelecer a prevalência de DM2 nessa população. Numa amostragem de 198 indivíduos, a prevalência de DM2 correspondeu a 13,6% da população adulta deste distrito, demonstrando que também no sertão nordestino esse é um quadro preocupante

It is estimated by the World Health Organization (WHO) that 422 million people had diabetes worldwide in 2014, including 30.3 million people in the US. The cost of treating the disease is has tripled from 2003-2013 due to the increased number of patients. One of the genes strongly associated with type 2 diabetes (T2D) is the transcription factor 7 like 2 (TCF7L2). A single nucleotide polymorphism (SNP) of the TCF7L2 results in increased expression of long chain acyl-CoA synthetase 5 (ACSL5) while deletion of this part of the TCF7L2 gene reduces ACSL5 mRNA level. The regulation of ACSL5 gene expression by the high risk TCF7L2 allele highlights the importance of investigating the role of ACSL5 in T2D. ACSL5 is one of a family of enzymes that activates FA to its CoA ester and is required for FA metabolism within cells. Mice lacking this protein have reduced fat mass and are more insulin sensitive. Chronic exposure of clonal pancreatic ß-cells to excess nutrients has been shown to result in increased intrinsic lipid droplets, reduced insulin content, a left-shift in glucose dose-dependent insulin secretion curve characterized by basal insulin hypersecretion (IH) and blunted glucose stimulated insulin secretion (GSIS). We tested the hypothesis that the use of a putative ACSL5 inhibitor (Adipo C) can reduce accumulated lipid droplets, rescue insulin content and reverse the left-shift in glucose dose-dependent insulin secretion curve. INS-1 (823/13) cells were cultured in either 4 mM or 11 mM glucose media representing physiological and excess nutrients environment. Adipo C (10-25 µM) was added to cells to both acutely (2 hrs) and chronically (72 hrs) inhibit ACSL5 activity. Thin layer chromatography with C11 Bodipy fatty acid (BFA) was used to detect acute fatty acid incorporation into neutral lipids. Nile red was used to visualize intrinsic lipid droplets inside cells. Intracellular Ca2+ activity was detected using fura 2. Insulin assay was measured by HTRF. Acute fatty acid incorporation and lipid accumulation were reduced in cells exposed to Adipo C. An Adipo C concentration dependent right shift of glucose dose-dependent insulin release and increased insulin content were observed. 11 mM glucose cells cultured in 25 µM Adipo C showed decreased intracellular Ca2+ activity at 3 mM glucose and increased Ca2+ activity at 12 mM glucose, which are characteristic of cells cultured in 4 mM glucose having reduced lipid stores. These results all indicate possible protective effects on -cells exposed to excess nutrients. Islets of T2D patients who have a physiologically elevated blood glucose level are exposed to a similar excess nutrient environment. Therefore, the results illustrated here warrant further research on Adipo C compound to explore its therapeutic potential on T2D.

Introdução: Estudos prévios têm confirmado genes de susceptibilidade para Diabetes Mellitus tipo 2 em diferentes populações. Nesse contexto, os polimorfismos do gene TCF7L2 são considerados as mais importantes variantes genéticas de risco para o diabetes tipo 2, que, por sua vez, é um dos principais fatores de risco cardiovascular conhecidos, especialmente para doença arterial coronariana. Contudo, a hipótese de que variantes de risco do TCF7L2 ou a informação combinada de marcadores genéticos associados ao diabetes também podem predizer eventos cardiovasculares ainda não foi testada. Objetivos: este estudo objetivou avaliar a associação entre o polimorfismo rs7903146 do gene TCF7L2 e doença arterial coronariana em indivíduos diabéticos e não-diabéticos e determinar se a informação combinada de variantes genéticas de risco para diabetes também está associada com eventos cardiovasculares incidentes e diabetes. Métodos: Oitocentos e oitenta e nove indivíduos, que foram referenciados para cateterismo cardíaco, foram avaliados em um formato transversal para lesões coronárias (carga aterosclerótica) e 559 indivíduos do estudo MASS II, um estudo randomizado em pacientes portadores de doença coronariana multiarterial, foram seguidos prospectivamente e avaliados para a incidência de eventos cardiovasculares. Em outra análise, 425 indivíduos, também do estudo MASS II, foram genotipados para 10 polimorfismos associados com diabetes tipo 2. Escores genotípicos foram criados se utilizando da informação combinada destes polimorfismos. Resultados: Os indivíduos não-diabéticos portadores do alelo T do TCF7L2 apresentaram uma frequência significativamente maior de lesões coronarianas que os não-diabéticos que não carreavam o alelo de risco (OR = 2,32 IC95% 1,27-4,24, p = 0,006). O mesmo não foi encontrado para indivíduos diabéticos. Da mesma forma, na análise prospectiva, os indivíduos não-diabéticos portadores dos genótipos CT/TT apresentaram significativamente maior número de eventos cardiovasculares compostos que o genótipo CC (p = 0,049), principalmente devido à mortalidade (p = 0,004). A informação genética combinada também foi capaz de prever a incidência de eventos cardiovasculares e mortalidade global em indivíduos não-diabéticos em 5 anos. Os indivíduos não-diabéticos com alto risco genético tiveram uma incidência de eventos similar aos sujeitos diabéticos. A adição da informação do TCF7L2, isoladamente, a um modelo de predição clínica de risco de diabetes não foi capaz de aumentar a sua precisão, mas a adição de informação genética combinada à informação clínica melhorou significativamente a capacidade diagnóstica para diabetes. Conclusões: o alelo de risco T do polimorfismo rs7903146 está associado com diabetes e, em indivíduos não-diabéticos, com maior prevalência e gravidade da doença arterial coronária, bem como eventos cardiovasculares combinados. A informação de variantes genéticas de risco para diabetes está associada à incidência de eventos cardiovasculares em indivíduos nãodiabéticos com doença arterial coronária / Background: studies have confirmed and have identified novel susceptibility genes for type 2 Diabetes Mellitus in different populations In this context, polymorphisms in TCF7L2 gene are considered the main genetic risk variants for type 2 diabetes, which is a major risk factor for cardiovascular disease, especially for coronary artery disease. Nevertheless, the hypothesis that either TCF7L2 variants or combined information from genetic markers associated with diabetes can also predict major cardiovascular events has not been tested. Objectives: this study aimed to evaluate the association between TCF7L2 polymorphism rs7903146 and coronary artery disease in diabetic and non-diabetic subjects and to determine whether information from combined genetic risk variants for diabetes is also associated with cardiovascular events incidence and with diagnosis of diabetes. Methods: eight-hundred and eighty nine subjects who were referred for cardiac catheterization were cross-sectionally evaluated for coronary lesions (atherosclerotic burden) and 559 subjects from the MASS II Study population, a randomized study in patients with multi-vessel coronary artery disease, were prospectively followed-up for 5 years and assessed for major cardiovascular events incidence. In another analysis, 425 subjects from the MASS II Study were also genotyped for single-nucleotide polymorphisms at 10 loci associated with type 2 diabetes. Genotype scores using information from genetic markers were created. Results: non-diabetic individuals carrying the TCF7L2 T allele were associated with a significantly higher frequency of coronary lesions than non-diabetic non-carriers of the risk allele (adjusted OR = 2.32 95%CI 1.27-4.24, p = 0.006). This results were not found for diabetic subjects. Similarly, from the prospective sample analysis, non-diabetics individuals carrying the CT/TT genotypes had significantly more composite cardiovascular end-points than CC genotype (p = 0.049), mainly due to death (p = 0.004). Combined genetic information was also able to predict 5-year incidence of major cardiovascular events and overallmortality in non-diabetic individuals. Non-diabetic individuals with high genetic risk had a similar incidence of events then diabetic individuals. Addition of single polymorphism rs7903146 of TCF7L2 gene to an established clinical risk prediction score did not increased model accuracy, but the addition of combined genetic information to clinical information significantly improved the prediction of diabetes. Conclusions: rs7903146 T allele is associated with diabetes and, in non-diabetic individuals, with a higher prevalence and severity of coronary artery disease and cardiovascular events. Combined information of genetic variants for diabetes risk is associated to major cardiovascular events incidence in non-diabetic individuals with coronary artery disease

Introdução: Estudos prévios têm confirmado genes de susceptibilidade para Diabetes Mellitus tipo 2 em diferentes populações. Nesse contexto, os polimorfismos do gene TCF7L2 são considerados as mais importantes variantes genéticas de risco para o diabetes tipo 2, que, por sua vez, é um dos principais fatores de risco cardiovascular conhecidos, especialmente para doença arterial coronariana. Contudo, a hipótese de que variantes de risco do TCF7L2 ou a informação combinada de marcadores genéticos associados ao diabetes também podem predizer eventos cardiovasculares ainda não foi testada. Objetivos: este estudo objetivou avaliar a associação entre o polimorfismo rs7903146 do gene TCF7L2 e doença arterial coronariana em indivíduos diabéticos e não-diabéticos e determinar se a informação combinada de variantes genéticas de risco para diabetes também está associada com eventos cardiovasculares incidentes e diabetes. Métodos: Oitocentos e oitenta e nove indivíduos, que foram referenciados para cateterismo cardíaco, foram avaliados em um formato transversal para lesões coronárias (carga aterosclerótica) e 559 indivíduos do estudo MASS II, um estudo randomizado em pacientes portadores de doença coronariana multiarterial, foram seguidos prospectivamente e avaliados para a incidência de eventos cardiovasculares. Em outra análise, 425 indivíduos, também do estudo MASS II, foram genotipados para 10 polimorfismos associados com diabetes tipo 2. Escores genotípicos foram criados se utilizando da informação combinada destes polimorfismos. Resultados: Os indivíduos não-diabéticos portadores do alelo T do TCF7L2 apresentaram uma frequência significativamente maior de lesões coronarianas que os não-diabéticos que não carreavam o alelo de risco (OR = 2,32 IC95% 1,27-4,24, p = 0,006). O mesmo não foi encontrado para indivíduos diabéticos. Da mesma forma, na análise prospectiva, os indivíduos não-diabéticos portadores dos genótipos CT/TT apresentaram significativamente maior número de eventos cardiovasculares compostos que o genótipo CC (p = 0,049), principalmente devido à mortalidade (p = 0,004). A informação genética combinada também foi capaz de prever a incidência de eventos cardiovasculares e mortalidade global em indivíduos não-diabéticos em 5 anos. Os indivíduos não-diabéticos com alto risco genético tiveram uma incidência de eventos similar aos sujeitos diabéticos. A adição da informação do TCF7L2, isoladamente, a um modelo de predição clínica de risco de diabetes não foi capaz de aumentar a sua precisão, mas a adição de informação genética combinada à informação clínica melhorou significativamente a capacidade diagnóstica para diabetes. Conclusões: o alelo de risco T do polimorfismo rs7903146 está associado com diabetes e, em indivíduos não-diabéticos, com maior prevalência e gravidade da doença arterial coronária, bem como eventos cardiovasculares combinados. A informação de variantes genéticas de risco para diabetes está associada à incidência de eventos cardiovasculares em indivíduos nãodiabéticos com doença arterial coronária / Background: studies have confirmed and have identified novel susceptibility genes for type 2 Diabetes Mellitus in different populations In this context, polymorphisms in TCF7L2 gene are considered the main genetic risk variants for type 2 diabetes, which is a major risk factor for cardiovascular disease, especially for coronary artery disease. Nevertheless, the hypothesis that either TCF7L2 variants or combined information from genetic markers associated with diabetes can also predict major cardiovascular events has not been tested. Objectives: this study aimed to evaluate the association between TCF7L2 polymorphism rs7903146 and coronary artery disease in diabetic and non-diabetic subjects and to determine whether information from combined genetic risk variants for diabetes is also associated with cardiovascular events incidence and with diagnosis of diabetes. Methods: eight-hundred and eighty nine subjects who were referred for cardiac catheterization were cross-sectionally evaluated for coronary lesions (atherosclerotic burden) and 559 subjects from the MASS II Study population, a randomized study in patients with multi-vessel coronary artery disease, were prospectively followed-up for 5 years and assessed for major cardiovascular events incidence. In another analysis, 425 subjects from the MASS II Study were also genotyped for single-nucleotide polymorphisms at 10 loci associated with type 2 diabetes. Genotype scores using information from genetic markers were created. Results: non-diabetic individuals carrying the TCF7L2 T allele were associated with a significantly higher frequency of coronary lesions than non-diabetic non-carriers of the risk allele (adjusted OR = 2.32 95%CI 1.27-4.24, p = 0.006). This results were not found for diabetic subjects. Similarly, from the prospective sample analysis, non-diabetics individuals carrying the CT/TT genotypes had significantly more composite cardiovascular end-points than CC genotype (p = 0.049), mainly due to death (p = 0.004). Combined genetic information was also able to predict 5-year incidence of major cardiovascular events and overallmortality in non-diabetic individuals. Non-diabetic individuals with high genetic risk had a similar incidence of events then diabetic individuals. Addition of single polymorphism rs7903146 of TCF7L2 gene to an established clinical risk prediction score did not increased model accuracy, but the addition of combined genetic information to clinical information significantly improved the prediction of diabetes. Conclusions: rs7903146 T allele is associated with diabetes and, in non-diabetic individuals, with a higher prevalence and severity of coronary artery disease and cardiovascular events. Combined information of genetic variants for diabetes risk is associated to major cardiovascular events incidence in non-diabetic individuals with coronary artery disease

Submitted by FERNANDA DA SILVA VON PORSTER (fdsvporster@univates.br) on 2014-10-07T18:56:14Z No. of bitstreams: 3 license_text: 22790 bytes, checksum: 5583a4be1f6dbb777e1501f0e06a0664 (MD5) license_rdf: 23748 bytes, checksum: b92763cfc0af52c7c868455edfaf3266 (MD5) 2014CristianoRossadaRocha.pdf: 647057 bytes, checksum: 5283ff0a3ecf01f1715926e3d2020946 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Lisboa Monteiro (monteiro@univates.br) on 2014-10-08T13:46:40Z (GMT) No. of bitstreams: 3 license_text: 22790 bytes, checksum: 5583a4be1f6dbb777e1501f0e06a0664 (MD5) license_rdf: 23748 bytes, checksum: b92763cfc0af52c7c868455edfaf3266 (MD5) 2014CristianoRossadaRocha.pdf: 647057 bytes, checksum: 5283ff0a3ecf01f1715926e3d2020946 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-08T13:46:40Z (GMT). No. of bitstreams: 3 license_text: 22790 bytes, checksum: 5583a4be1f6dbb777e1501f0e06a0664 (MD5) license_rdf: 23748 bytes, checksum: b92763cfc0af52c7c868455edfaf3266 (MD5) 2014CristianoRossadaRocha.pdf: 647057 bytes, checksum: 5283ff0a3ecf01f1715926e3d2020946 (MD5) / O diabetes mellitus é uma doença crônica, multifatorial que já atinge milhões de pessoas em todo o mundo. Tratada como um problema de saúde pública em nível mundial, os gastos diretos e indiretos com o diabetes tendem a aumentar. A forma com maior ocorrência é do diabetes mellitus tipo 2 (DM2), que está relacionado ao estilo de vida, fatores ambientais e genéticos. Nessa perspectiva, este estudo, de caráter descritivo-exploratório e abordagem qualitativa, tem por objetivo avaliar a relação entre fatores ambientais e dois polimorfismos genéticos do gene TCF7L2 no DM2 em indivíduos do Vale do Taquari. A amostra foi constituída por 46 indivíduos com DM2, usuários de Unidades Básicas de Saúde de municípios do Vale do Taquari-RS/BR. A extração do DNA, a partir de sangue periférico, já foi realizada em 2011-2012, utilizando-se uma adaptação do método de salting out, descrito por Lahiri e Nurnberger (1991). Os polimorfismos rs7903146 e rs12255372 no gene TCF7L2 foram genotipados através do sistema de discriminação alélica Taqman (Applied Biosystems). Os dados foram analisados empregando-se estatística descritiva e inferencial. Os resultados serão apresentados em tabelas e gráficos e os dados descritos apresentados na forma de média (desvio padrão). Para verificar a normalidade dos dados foi aplicado o teste de Kolmogorov Smirnov. Os testes t de Student, ANOVA e Tukey foram utilizados para comparação dos grupos. Para avaliação da reprodutibilidade dos alelos de risco nos dois polimorfismos foi utilizado o Teste Kappa. O teste de sinal foi utilizado para avaliar a associação entre o sexo e a presença ou ausência do alelo de risco. Os resultados permitiram determinar replicabilidade na presença dos polimorfismos rs7903146 e rs12255372, sendo que 26 indivíduos apresentam os dois polimorfismos. Porém, não se evidenciaram interações entre os polimorfismos do gene TCF7L2 com os fatores ambientais associados (consumo de álcool, tabagismo e índice de massa corpórea) ao DM2 na população em estudo.

Diabetes mellitus represents a group of metabolic disorders caused by both environmental and genetic factors. The two most common forms of diabetes are type 2 diabetes (T2D) and type 1 diabetes (T1D). T2D is associated with obesity and the disease is caused by insulin resistance and pancreatic b-cell dysfunction. T1D is an autoimmune disease in which the insulin- producing b-cells in the pancreas are destroyed by infiltration of lymphocytes. The aim of this thesis was to identify genes conferring susceptibility to diabetes. This was approached using genetic methods, both linkage and association studies, within the population of northern Sweden. The northern Swedish population is well suited for genetic studies of familial forms of disease, since an internal expansion of the northern Swedish population, coupled with a low frequency of immigration and a high frequency of consanguineous marriages, has resulted in a relatively homogeneous gene pool. This simplified genetic background increases the probability of identifying genes contributing to disease. The family-based material used for the type 2 diabetes studies (papers I and II) consisted of 231 individuals from 59 families originating in northern Sweden. The type 2 diabetes case-control material (papers I and II) consisted of 872 cases and 857 matched controls, all from northern Sweden. In paper I we performed a genome-wide linkage scan, seeking T2D susceptibility loci. Linkage to the previously identified Calpain-10 region was found, however, association studies in the case-control material revealed no association to the CAPN10 gene. Using both the family-based and the case-control material, we were able to confirm the association of polymorphisms in the TCF7L2 gene to T2D in the population of northern Sweden (paper II). CTLA-4 is a negative regulator of T cell activity, belonging to the CD28 co-stimulatory receptor family. Numerous reports, including our own, have associated CTLA-4 variants with T1D as well as other autoimmune diseases, such as autoimmune thyroid disease (AITD). Allelic variation in the 3ÚTR of the CTLA-4 gene was associated to human T1D and this variant has also been suggested to affect the level of mRNA encoding the soluble form of the molecule (sCTLA-4). We confirmed the association of allelic variation in the 3ÚTR of the CTLA-4 gene in a T1D/AITD case-control material from northern Sweden, consisting of 104 individuals with ATID, 149 individuals with T1D and 865 matched controls. However, we were unable to identify any correlation between allelic variants in the 3ÚTR of the CTLA-4 gene and expression of sCTLA-4 (paper III). Based on recently published genome-wide association (GWA) scans, 33 single-nucleotide polymorphisms (SNPs) located within 16 genes were selected for an association analysis in T1D/AITD families from northern Sweden. The T1D/AITD family-based material consisted of 253 cases and 206 healthy individuals from 97 northern Swedish families. Analysis revealed association to T1D for SNPs in PTPN22, COL1A2, IL-2Ra and INS. In addition, SNPs in CTLA-4, IL-2 and C12orf30 were shown to be associated to AITD (paper IV). Together, these results underpin the notion that the population of northern Sweden is well suited for the detection of genes involved in complex diseases. The use of our more restricted patient material, compared to materials used in published GWA scans, enables the discovery of disease associated genes in a more cost effective manner and show that our population is capable of detecting general susceptibility genes.

Specific SNPs in intronic regions of the human TCF7L2 gene are associated with an elevated risk of T2D development and progression. Several investigations have suggested a role of TCF7L2 in pancreatic β-cells. Whether this transcription factor is indeed expressed in the pancreatic islets of rodent species, however, has been a controversial issue. Here, we found that TCF7L2 mRNA level was significantly lower in the pancreas compared to the gut or Ins-1 cell line. In addition, TCF7L2 mRNA abundance in the pancreas was decreased by insulin. Finally, both TCF7 and TCF7L1 but not LEF-1 could be detected in the mouse pancreas. mRNA abundance for these two transcription factors was also decreased by insulin, and the level of TCF7, TCF7L1, and TCF7L2 mRNAs could be down-regulated by HFD. We speculate that reduced expression of these TCF genes during hyperinsulinemia may alter the Wnt signalling pathway and therefore impair the function of β-cells.