Made available in DSpace on 2011-12-27T14:14:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 000417616-0.pdf: 2517822 bytes, checksum: d191e13dad2e957e454b49b6e2293ddf (MD5) license.txt: 581 bytes, checksum: 44ea52f0b7567232681c6e3d72285adc (MD5) / O presente estudo teve por objetivo avaliar, por meio da análise histomorfometria, a biomodulação do processo de osteogênese em defeitos confeccionados em calotas craninas de ratos, submetidos a radiação com laser infravermelho (GaAlAs). Foram utilizados 30 ratos machos da linhagem Wistar, com peso entre 250 a 300 gramas, distribuídos aleatoriamente em 2 grupos, grupo teste (GT) e grupo controle (GC). Nos dois grupos temos 3 tempos de observação, 7, 14 e 21 dias, de forma que foram formados 6 subgrupos. Foram confeccionados defeitos de 4mm de diâmetro nos ossos parietais e em cavidades separadas, enxertados os biomateriais, α-TCP e β-TCP/HA. Os grupos testes receberam a terapia laser de baixa potência (LLLT), no espectro infrevermelho (S= 830 nm, 2 J/cm2, 90mW, 27 s), no defeito ósseo de 4mm confeccionado nos ossos parietais do animal. Nos grupos controles, todo o protocolo cirúrgico foi realizado, porém sem a aplicação do laser. O protocolo de radiação foi estabelecido com intervalos de 48horas, iniciando-se imediatamente apos a sutura do procedimento cirúrgico e seguindo-se até o sexto dia de pós-operatório. Os animais foram eutanasiados aos 7, 14 e 21 dias após o procedimento cirúrgico. As lâminas foram estudadas segundo análise histomorfométrica. Para a análise morfométrica determinaram-se as médias das áreas de trabeculado ósseo neoformado em relação a área total do defeito. Os resultados obtidos demonstraram que, segundo a análise morfométrica, há biomodulação óssea positiva evidenciada nos grupos testes, com resulatado significativo para o grupo teste 21 dias β-TCP/HA, apresentando maior área de trabeculado ósseo quando comparado aos grupos controles.Os resultados permitiram sugerir que a terapia laser no protocolo estabelecido atua como biomoduladora óssea, estimulando a osteogênese em áreas enxertadas, podendo ser utilizada como coadjuvante no processo de reparo ósseo.

Made available in DSpace on 2011-12-27T14:14:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 000419164-0.pdf: 3317808 bytes, checksum: 3055ad6dec4d94e51a963ca86fb7d7e0 (MD5) license.txt: 581 bytes, checksum: 44ea52f0b7567232681c6e3d72285adc (MD5) / Isotretinoin is a vitamin A derivative that is indicated for dermatologic treatment in patients with severe acne, which shows various side effects on bone metabolism. The aim of the present study was to evaluate the bone repair process in cavities made in the calvarial bone of rats, submitted to oral administration of 7. 5 mg/kg/day isotretinoin, and to determine the serum calcium level in blood samples of the retro-orbital plexus before drug administration and on day of euthanasia. Thirty-three male albino rats (Rattus novergicus albinus, Wistar) were used, which were approximately 60 days old and weighed 250 to 500 g; they were distributed randomly into two groups, control (n=15) and experimental (n=18). A cavity of 2 mm in diameter was made in the calvarial bone of each animal. The animals were killed at 21, 28 and 90 days postoperative. The parietal bone, containing the cavity previously made, was removed and the surgical pieces were submitted to histological processing, followed by H&E staining. Computerized histomorphometric analysis was performed to determine the area of neoformed bone relative to the total defect area at different times of observation. The results expressed as mean percent of neoformed bone in the experimental group were: 25. 37% (± 9. 14) at 21 days, 41. 78% (±7. 00) at 28 days, and 57. 51% (±11. 62) at 90 days. In the control group the results were 17. 10% (±9. 23) at 21 days, 34. 42% (±7. 70) at 28 days, and 48. 49% (±16. 40) at 90 days. Therefore, bone neoformation was greater in the experimental group, but the difference versus control was not statistically significant (p≤0. 05). The serum calcium level showed a statistically significant decrease between the first and second blood sampling in all groups. Based on the results of this study, it was concluded that, despite not being statistically significant, isotretinoin promoted acceleration in the process of bone neoformation in the calvarial bone of rats, along with a reduction in serum calcium levels. / A isotretinoína é um derivado da vitamina A, indicada para o tratamento dermatológico em pacientes com acne severa, que apresenta diversos efeitos colaterais sobre o metabolismo ósseo. O presente estudo teve por objetivo avaliar o processo de reparo ósseo em cavidades confeccionadas em calota craniana de ratos, submetidos à ingestão oral de 7,5 mg/Kg/dia de isotretinoína e avaliar o nível sérico de cálcio através da coleta de sangue do plexo venoso orbital antes de iniciarem o uso da medicação e no dia da eutanásia. Foram utilizados 33 ratos albinos machos (Rattus novergicus albinus, Wistar) com aproximadamente 60 dias e peso corporal médio de 250 a 500 gramas, distribuídos aleatoriamente em dois grupos controle (n=15) e experimental (n=18). Na calota craniana de cada animal foi confeccionada uma cavidade de 2mm de diâmetro. Os animais foram eutanasiados aos 21, 28 e 90 dias de pós-operatório. O osso parietal, contendo a cavidade previamente confeccionada, foi removido e as peças operatórias submetidas a processamento histológico, seguida de coloração pela técnica de HE. Foi realizada análise histomorfométrica computadorizada que permitiu mensurar a proporção entre área do osso neoformado e a área total dos defeitos nos diferentes períodos de observação. Os resultados expressos em porcentagem média de osso neoformado no grupo experimental foram: 25,37% (± 9,14) aos 21 dias, 41,78% (±7,00) aos 28 dias e 57,51% (±11,62) aos 90 dias. No grupo controle os resultados foram de 17,10% (±9,23) aos 21 dias, 34,42% (±7,70) aos 28 dias e 48,49% (±16,40) aos 90 dias. Após análise histológica descritiva observou-se um aumento da neoformação óssea no grupo experimental, mas sem diferença estatisticamente significativa (p≤0,05). O nível sérico de cálcio teve uma diminuição estatisticamente significativa entre a 1° e a 2° coleta de sangue em todos os grupos. Com base nos resultados, foi possível concluir que, mesmo não sendo estatisticamente significativa, a isotretinoína promoveu uma aceleração no processo de neoformação óssea em calota craniana de ratos, bem como redução dos níveis séricos de cálcio.

Made available in DSpace on 2011-12-27T14:14:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 000417612-0.pdf: 13276136 bytes, checksum: fcf6be3ae9697b26aac5dc7599e9eca0 (MD5) license.txt: 581 bytes, checksum: 44ea52f0b7567232681c6e3d72285adc (MD5) / The purposes of this thesis were: verifying if the quantity of platelets found in PRP influences the healing proccess of bone tissue when added to autogenous bone as graft material; evaluating if the simplified protocols to obtain PRP concentrate a number of platelets enough to accelerate the healing of bone tissue, when PRP is added to autogenous bone tissue as graft material. Throughout the experiment twenty four male white new zealand rabbits (Oryctolagus cuniculus) were used as test subjects, being aquired when sixteen weeks old and weighing approximately six pounds. The surgical wounds were placed in the skull where four bone perforations were made (1- blood cloth (negative control), 2- particuled autogenous bone tissue (positive control), 3- PRP obtained at 160G + particuled autogenous bone tissue, 4- PRP obtained at 560G + particuled autogenous bone tissue); A trephine drill 0. 5 mm wide and 0. 2 mm deep was used to come up with standard bone tissue deffects; the animals were sacrifice after 15, 30 and 45 days after undergoing surgery, establishing three groups with 08 test subjects each and four subgroups in each group.The material collected from each rabbit was submitted to routine lab processing; The microscopical evaluation consisted in histomorfometric analysis (Software Image Pro-Plus 4. 5. 1) from slices (obtained from the most central area of the bone tissue deffect in transversal cuts coloured by hematoxylin), by measuring the proportion of the neoformed bone tissue inside the four surgical cavities and at the three different observation times as well as the histological decription of the slice for each subgroup. The results obtained were submitted to variance analysis by one factor (ANOVA) and afterwards the groups were compared to each other through the multiple comparation test Bonferroni and allow us to conclude that: 1) the use of PRP in association with particuled autogenous bone tissue participated positively in bone healing when compared to control groups particuled autogenous bone tissue and blood cloth only in groups 01; 2) Among the concentration patterns obtained both in the 160G and the 560G protocols, the platelet count had no influence on bone tissue healing in the surgical cavities. / Os objetivos desta tese foram: verificar se a quantidade de plaquetas presente no PRP influencia no processo de reparo do tecido ósseo quando utilizado em adição a osso autógeno como material de enxerto; avaliar se os protocolos simplificados, para obtenção de PRP, concentram plaquetas em número suficiente para acelerar o reparo do tecido ósseo, quando o PRP é utilizado em adição a osso autógeno como material de enxerto. Para a realização do experimento foram utilizados 24 coelhos machos da raça Oryctolagus cuniculus (Brancos da Nova Zelândia). As cobaias foram adquiridas com 16 semanas de vida (aproximadamente 3 kg). As feridas cirúrgicas foram confeccionadas na calvária e correspondem a 04 lojas cirúrgicas (1- coágulo sanguíneo (controle negativo), 2- osso autógeno particulado (controle positivo), 3 - PRP obtido a 160G + osso autógeno particulado, 4 - PRP obtido a 560G + osso autógeno particulado), foi utilizado uma broca trefina de diâmetro 05mm e marcação de 02mm de profundidade, criando defeitos em medidas padronizadas; o sacrifício dos animais ocorreu após 15, 30 e 45 dias da cirurgia, formando-se assim 3 grupos com 08 cobaias cada e 4 subgrupos em cada grupo. O material coletado de cada coelho seguiu para processamento laboratorial de rotina; A avaliação microscópica consistiu em análise histomorfométrica (Software Image Pro-Plus 4. 5. 1) das lâminas (obtidas da área mais central do defeito em cortes transversais e coradas com HE) através da mensuração da proporção de osso neo formado no interior das 04 cavidades nos 03 tempos de observação bem como a descrição histológica de uma lâmina de cada subgrupo.Os resultados obtidos foram submetidos à análise de variância a um fator (ANOVA) e posteriormente os grupos foram comparados pelo teste de comparações múltiplas Bonferrroni e permitem concluir que: 1) o uso de PRP associado a osso autógeno particulado atuou positivamente na cicatrização óssea quando comparado aos grupos controle osso autógeno particulado e coágulo sangüíneo, somente no grupo 01; 2) Dentro das faixas de concentração plaquetária obtidas no protocolo de 160G e 560G, a contagem plaquetária não influenciou no reparo do tecido ósseo das lojas cirúrgicas tratadas com PRP.

O uso crônico de etanol prejudica diretamente o processo biológico de reparo ósseo, principalmente pela inibição das células osteoblásticas, podendo causar retardo de consolidação ou pseudoartrose. Vários biomateriais naturais ou sintéticos, têm sido utilizados como uma alternativa aos enxertos ósseos. Os biomateriais sintéticos, como o Beta Fosfato Tricálcico (-TCP) são biocompatíveis, biodegradáveis e osteocondutíveis, por orientar as células osteoblásticas, promovendo a neoformação óssea. Sendo assim, objetivou-se avaliar a influência da ingestão crônica de etanol no processo de reparo ósseo de defeitos cranianos tratados com -TCP® comparativamente aos preenchidos com coágulo sanguíneo e a sua interferência sobre a massa corporal. Foram utilizados 40 ratos machos (Rattus norvegicus), distribuídos aleatoriamente em 2 grupos: GAG - receberam água como dieta liquida, e GAL - receberam etanol a 25%. O GAL foi submetido inicialmente à adaptação gradativa ao álcool e depois permaneceu a 25% por 90 dias. Após o término desse período, todos os animais foram submetidos à cirurgia experimental. Nos ossos parietais de cada animal, foram confeccionadas duas cavidades 5,0 mm de diâmetro ao lado da sutura sagital, de forma que o parietal direito foi preenchido com -TCP® e o esquerdo com coágulo. Dessa forma, os grupos GAG e GAL foram divididos de acordo com o preenchimento dos defeitos: GC-AG (Grupo Coágulo Água), GC-AL (Grupo Coágulo Álcool), GB-AG (Grupo Biomaterial Água) e GB-AL (Grupo Biomaterial Álcool). O reparo ósseo foi observado de acordo com o período de eutanásia: 10, 20, 40 e 60 dias após a cirurgia. Após inclusão histológica, as peças foram submetidas à análises histomorfológica e histomorfométrica. Na análise da variação da massa corporal, observou-se que as massas iniciais do GAG foram maiores que GAL e as massas finais de GAG aumentou significativamente apenas em 60 dias e no GAL em todos os períodos. Na análise histomorfológica, observou-se nos períodos iniciais de todos os grupos a presença de tecido conjuntivo fibroso preenchendo toda área central do defeito. Os grupos com os defeitos preenchidos com -TCP apresentaram tecido reacional com as partículas envoltas por células inflamatórias. No período final de análise, observou-se em todos os grupos pequena neoformação óssea com a área central preenchida por tecido conjuntivo fibroso. Nos grupos GC-AL, GB-AG e GB-AL evidência de reação inflamatória menos intensa. Na análise histomorfométrica em relação à influência do tempo na neoformação óssea, os grupos GC-AG e GC-AL apresentaram o mesmo perfil gráfico em todos os períodos exceto 60 dias. O grupo GB-AG houve aumento substancial de neoformação em todo experimento e GB-AL pequeno aumento, mas não foi significante. Em relação à interferência da dieta, observou-se maior percentual de formação óssea nos grupos que consumiram água nos períodos 40 e 60 dias. E em relação ao tipo de preenchimento, observou-se no grupo GC-AG maior formação nos períodos de 20 e 40 dias. Já nos GB-AG e GB-AL a formação foi similar durante todo experimento. Conclui-se que o -TCP® não foi capaz de contribuir para melhor regeneração óssea, apresentando desempenho inferior nos animais que consumiram álcool. / Chronic use of ethanol directly affects the biological process of bone repair, primarily by inhibition of osteoblastic cells. This may cause delayed consolidation or nonunion. Various natural and synthetic biomaterials have been used as alternatives to bone grafting. Synthetic biomaterials such as beta tricalcium phosphate (-TCP) are biocompatible, biodegradable, and osteoconductive, guiding osteoblastic cells and promoting bone formation. Thus, the objective was to evaluate the influence of chronic ethanol intake on the bone healing process of cranial defects treated with - TCP® compared to those filled with blood clot. Forty male rats were used (Rattus norvegicus), randomly divided into two groups: GAG received water as a liquid diet, and GAL received 25% ethanol. The GAL group was initially subjected to gradual adaptation to the alcohol and then maintained at 25% for 90 days. At the end of this period, all animals were submitted to experimental surgery. In the parietal bone of each animal, two cavities were prepared, 5.0 mm in diameter on the side of the sagittal suture, and the right parietal was filled with -TCP® and left to clot. Thus, the GAG and GAL groups were divided according to the filling of defects: GC-AG (Clot Water Group); GC-AL (Clot Alcohol Group); GB-AG (Biomaterial Water Group); and GB-AL (biomaterial Alcohol Group). The bone repair was observed according to the euthanasia period: 10; 20; 40; and 60 days after surgery. After a histological inclusion, the pieces were submitted to histomorphological and histomorphometric analysis. The histomorphological analysis was observed in the initial periods of all groups fibrous connective tissue filling the entire central area of the defect. The groups of defects filled with -TCP showed tissue reaction to particles surrounded by inflammatory cells. At the end of the period of analysis, it was observed that in all groups there was little bone formation, with the central area filled with fibrous connective tissue. In the GC-AL, GB-AG, and GB-AL groups there was evidence of less intense inflammatory reaction. In histomorphometric analysis regarding the influence of time in osteogenesis, the GC-AG and GC-AL groups had the same graphic profile in all periods except 60 days. In the GB-AG group there was a substantial increase of formation in every experiment, and in the GB-AL a small increase, but it was not significant. Regarding the influence of diet, there was a higher percentage of bone formation in the group that consumed water in the 40- and 60-day periods, and in the type of filling, increased formation in the periods of 20 and 40 days was observed in the GC-AG group. In the GB-AG and GB-AL groups, the formation was similar throughout the experiment. It is concluded that the -TCP® was not able to contribute to better bone regeneration, with underperformance in animals that consumed alcohol.

A óxido nítrico sintase induzível (iNOS) é uma enzima responsável pela síntese do óxido nítrico, envolvido na regulação de vários processos fisiológicos, com destaque para relevantes efeitos sobre o tecido ósseo. Entretanto, o papel da iNOS no reparo ósseo alveolar permanece pouco conhecido. Assim, o objetivo deste estudo foi caracterizar o papel da iNOS no processo de reparo ósseo alveolar pósexodontia em condições homeostáticas (controle) e infecciosas em camundongos. Para isso, foram utilizados animais das linhagens WT (C57Bl/6) e iNOSKO, divididos em 2 grupos, condição homeostática (exodontia do incisivo superior direito) e alveolite experimental (induzida pela inoculação de uma suspensão de cultura bacteriana), e analisados de acordo com os diferentes períodos experimentais (0, 7, 14 e 21 dias pós-exodontia), através da análise histomorfométrica e molecular. Na análise histomorfométrica, avaliou-se a densidade de volume das estruturas referentes ao coágulo sanguíneo, tecido conjuntivo e tecido ósseo. Na análise molecular, quantificou-se a expressão de mRNA codificando genes de marcadores do metabolismo ósseo; marcadores de osteoclastos; citocinas e quimiocinas, através de reações de RealTimePCR. A expressão de iNOS esteve presente durante todo o processo de reparo ósseo alveolar nos camundongos C57Bl/6, porém de maneira mais expressiva no período de 7 dias pós-exodontia, e se mostrou aumentada pela indução de alveolite. A análise histomorfométrica demonstrou discretas alterações no processo de reparo ósseo alveolar, na ausência de iNOS, tanto em condições homeostáticas quanto infecciosas. Em condições homeostáticas, a ausência de iNOS não impactou de forma significativa o processo de reparo ósseo alveolar pósexodontia, mas se mostrou associada à modulação de vasos sanguíneos. Já em condições infecciosas, a ausência de iNOS se mostrou associada à modulação de células inflamatórias, osteoblastos e osteoclastos. De forma geral, conclui-se que embora a enzima iNOS module certos aspectos do processo de reparo ósseo alveolar de forma pontual, sua ausência não interferiu de forma significativa nesse processo. / The inducible nitric oxide synthase (iNOS) is an enzyme responsible for the synthesis of nitric oxide, a reactive molecule involved in the regulation of several physiological processes, highlighting relevant effects on bone tissue. However, the role of iNOS in alveolar bone repair remains unknown. The aim of this study was to characterize the role of iNOS in alveolar bone healing process after dental extraction in homeostatic and infectious conditions in mice. With this aim, WT (C57Bl/6) and iNOSKO mice strains were divided into 2 groups, homeostatic condition (extraction of the upper right incisor) and experimental alveolitis (induced by inoculation of a suspension of bacterial culture), and analyzed according to the different experimental periods (0, 7, 14 and 21 days post-extraction), through molecular and histomorphometric analysis. In histomorphometric analysis, the volume density of structures related to blood clot, tissue and bone were evaluated. The molecular analysis quantified the expression of mRNA encoding genes of defined as bone metabolism markers; osteoclast markers, as well cytokines and chemokines through RealTimePCR reactions. The expression of iNOS was detected during the all process of the alveolar bone repair in C57Bl/6 mice, with an expression peak at 7 days post-extraction time point, and was significantly enhanced by alveolitis induction. Histomorphometric analysis showed small changes in alveolar bone repair process in the absence of iNOS, in both homeostatic as infectious conditions. Under homeostatic conditions, the absence of iNOS did not impact significantly the process of alveolar bone healing after dental extraction, but it was associated with modulation of blood vessels formation. In the infectious conditions scenario, the absence of iNOS was associated with modulation of inflammatory cells, osteoblasts and osteoclasts counts. In general, it is concluded that even the enzyme iNOS module some aspects of alveolar bone repair in a particular and punctual manner, their absence does not interfere significantly in the overall outcome of alveolar bone repair process.

O processo de reparo ósseo depende de uma resposta inflamatória inicial e transitória, a qual envolve a participação de diversos leucócitos, como células da linhagem monócito/macrófago. O receptor CCR2 é importante para o recrutamento de macrófagos durante as respostas imunes, além de ter um papel na regulação da osteoclastogênese. Assim, o objetivo do presente estudo foi investigar papel de células CCR2+ no processo de reparo ósseo alveolar pós-exodontia em camundongos, por meio de análises microscópicas (MicroCT, histomorfometria, análise de birrefringência e imuno-histoquímica) e moleculares (PCRArray) comparativas entre as linhagens C57Bl/6 (WT) e CCR2KO, ao longo dos períodos de 0 hora, 7, 14 e 21 dias pós-exodontia do incisivo superior direito. Como resultado geral das análises microscópicas, constatamos que a ausência de células CCR2+ não afetou o resultado final do reparo ósseo alveolar em camundongos CCR2KO, mas levou a alterações transitórias e estatisticamente significantes (p<0,05) para quantificação de infiltrado inflamatório, vasos sanguíneos, fibroblastos, fibras colágenas, osteoblastos e osteoclastos. Além disso, a ausência de células CCR2+ resultou em diminuição (p<0,05) de células F4/80+ e CCR5+ no infiltrado inflamatório ao longo do processo de reparo ósseo alveolar de camundongos CCR2KO, demonstrando o papel do receptor CCR2 no recrutamento de macrófagos (células F4/80+), bem como sugerindo que as células F4/80+ apresentam dupla positividade para os receptores CCR2 e CCR5. Neste contexto, o receptor CCR5 seria o responsável pela migração remanescente, ainda que reduzida, de células F4/80+ nos animais CCR2KO. Considerando os resultados moleculares, a ausência de CCR2 resultou na alteração da expressão de diferentes marcadores em camundongos CCR2KO, tais como: o fator de crescimento TGF1, marcadores de matriz COL1, MMP1a, MMP2 e MMP9, marcadores ósseos RUNX2, DMP1, RANKL, RANK e CTSK, e marcadores de MSCs CD106, COT-4, NANOG, CD146 e CD105, bem como de marcadores imunológicos como as citocinas IL-6 e TNF-a, receptores de quimiocinas CCR1, CCR5 e CXCR1,e as quimiocinas CCL12, CCL20, CCL25 e CXCL12. Em conclusão, estes resultados indicam que células CCR2+ desempenham diferentes funções no reparo ósseo alveolar em camundongos, influenciando tanto a resposta inflamatória, como os eventos teciduais observados ao longo deste processo. / The bone repair process depends of an initial and transitory inflammatory response, which involves the participation of various leukocytes subsets, as of the monocyte/macrophage lineage. The CCR2 receptor is important to macrophage recruitment during immune responses, and play an active role in the regulation of osteoclastogenesis. Thereby, the purpose of this study was to investigate the role of CCR2+ cells in the alveolar bone repair process in mice, by means of microscopic (MicroCT, histomorphometry, birefringence analysis and immunohistochemistry) and molecular (PCRArray) comparative analysis between C57BL / 6 (WT) and CCR2KO mice during periods of 0 hour, 7, 14 and 21 days post-extraction of the right upper incisor. As a result of the microscopic analysis, we noted that the absence of CCR2+ cells did not affect in the overall outcome of alveolar bone repair in CCR2KO mice, but resulted in transient and statistically significant (p<0.05) alterations of inflammatory infiltrate, blood vessels, fibroblasts, collagen fibers, osteoblasts and osteoclasts counts. Furthermore, the absence of CCR2+cells resulted in a decrease (p<0.05) of CCR5+ and F4/80+ cells in the inflammatory infiltrate along the alveolar bone repair process in CCR2KO mice, demonstrating the role of CCR2 receptor in macrophages migration (F4/80+ cells), as well as suggesting that the F4/80+ cells are double positive for CCR2 and CCR5. In this context, CCR5 receptor could be responsible for the remaining (but reduced) migration, of the F4/80 + cells in CCR2KO mice. According to molecular results, the absence of CCR2 resulted in an altered expression of different markers in CCR2KO mice, such as: growth factor TGF1, the matrix markers COL1, MMP1a, MMP2 and MMP9, the bone markers RUNX2, DMP1 RANKL, RANK and CTSK, and MSCs markers CD106, OCT-4, NANOG, CD146 and CD105, as well as immunological markers as IL-6 and TNF-, chemokine receptors CCR1, CXCR1 and CCR5, and the chemokines CCL12, CCL20, CCL25 and CXCL12. In conclusion, these results indicate that CCR2+ cells have different functions in alveolar bone repair in mice, influencing the inflammatory response and also tissue events observed throughout the process events.

O Banco de Tecidos do Instituto de Ortopedia e Traumatologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo está desenvolvendo uma linha de estudos experimentais com o intuito de apresentar novos métodos de armazenamento de aloenxertos. Este estudo tem como objetivo comparar o método da criopreservação (- 80° C) com o da conservação em glicerol a 98% em temperatura ambiente. Foram analisadas tanto a capacidade de inibição de crescimento bacteriano e fúngico quanto às eventuais alterações histológicas. Para isso, foram estudadas 30 amostras de tecido ósseo trabecular coletadas de 10 pacientes submetidos à artroplastia total do quadril. Estas amostras foram divididas em três grupos de 10 espécimes, a saber: grupo controle, grupo criopreservado e grupo conservado em glicerol a 98% à temperatura ambiente. O período de armazenamento das amostras foi de um ano. Os resultados foram analisados estatisticamente pelo método de McNemar, com índice de significância de 0,10. No que diz respeito à preservação da matriz óssea, não houve variações significativas nos dois grupos estudados em relação ao grupo controle. Não ocorreu crescimento bacteriano ou de fungos nas amostras armazenadas durante um ano em glicerol a 98%. Por ser extremamente reduzido em relação à criopreservação, o custo do método da conservação em glicerol a 98% o indica para uso em Bancos de Tecidos de pequena monta. Contudo, são ainda necessários posteriores estudos sobre as propriedades biomecânicas, remoção do glicerol do tecido ósseo e o processo de integração biológica dos mesmos com o receptor. / The Tissue Bank of Instituto de Ortopedia e Traumatologia do Hospital das Clínicas da Universidade de São Paulo is developing a line of experimental studies with the intention to present new methods of allografts storage. This study has the objective to compare the method of cryopreservation (-80 ºC) with glycerol 98% preservation at room temperature. It even analyses, in such way, the inhibition capacity of bacterial and fungal growth and any eventual histological changes. For this, 30 samples of trabecular bone tissue have been collected from 10 patients submitted to total hip arthroplasty. These samples were separated in three groups of 10 specimens, as following: a control group, a cryopreserved group and a glycerol 98% preserved group at room temperature. They were stored during a period of one year. The results were analysed by the McNemar statistic method, with a significance of 0,10. Concerning to bone matrix, no significant changes occurred to the two studied groups compared to the control group. Bacterial and fungal growth do not occurred in the stored samples for one year in glycerol 98%. For being extremely reduced when compared with cryopreservation method, the preservation cost in glycerol 98% indicates its use on small sum tissue banks. However, posterior studies about biomechanical properties, glycerol removal of bone tissue and their biological process of integration with the receiver are necessary.

O conceito de que estimulação elétrica promove o reparo de fraturas tem uma longa história, datada de 1812. O mecanismo pelo qual estimulação elétrica promove a osteogênese ainda é assunto de especulação científica, entretanto esse método não farmacológico, utilizado no presente trabalho, já mostrou efeitos positivos na promoção e estímulo da osteogênese. O presente trabalho objetivou analisar a influência da aplicação de campo elétrico pulsado nas características histológicas e propriedades mecânicas do tecido ósseo em osteotomias experimentais realizadas em tíbias de ratos. Foram utilizados 52 ratos com fraturas cirúrgicas unilaterais do terço médio da tíbia, sem lesão dos músculos e do periósteo. Os animais foram divididos em dois grupos: grupo controle, que não recebeu estimulação e grupo tratado com campo elétrico. Esses foram divididos em dois subgrupos: animais sacrificados no 19º pós-operatório e animais sacrificados no 27º pós-operatório. O membro fraturado foi tratado com campo elétrico pulsado com freqüência fundamental de 1,5 MHz e 200 \'mü\'s de largura de pulso, em sessões diárias de 20 minutos. Realizou-se radiografia desse membro no dia da cirurgia e do sacrifício. Após o tratamento sacrificaram-se os ratos e extraíram-se suas tíbias para a obtenção de material para a análise morfométrica e ensaio mecânico de flexão. Os ensaios biomecânicos revelaram que houve diferença significativa entre as médias dos grupos tratado 18 e 12 dias somente para a tensão, sendo esta maior para o grupo tratado 18 dias, para as demais propriedades mecânicas analisadas não houve diferença significativa. A análise morfométrica determinou que a relação entre os grupos controle 18 dias com tratado 18 dias bem como entre os grupos tratado 12 dias e tratado 18 dias das médias das áreas de osso formado apresentaram diferenças estatisticamente significantes. Esses resultados sugerem que existe um incremento na síntese de matriz orgânica no grupo tratado, não acompanhado linearmente pela síntese mineral. A diferença estatisticamente significativa nas tensões de ruptura, por outro lado, sugere que o aumento no grau de mineralização encontra-se em curso. / The concept that electrical stimulation promotes the repair of fractures has a long history, dated of 1812. The mechanism for which electrical stimulation promotes osteogenesis is still subject of scientific speculation, however that method non-pharmacological, used in the present work has already showed positive effects in the promotion and incentive of osteogenesis. The present work objectified to analyze the influence of the application of electric field pulsed in the histological characteristic and mechanical properties of the bone tissue in experimental osteotomy accomplished in tibias of rats. 52 rats were used with unilateral surgical fractures of the medium third of the tibia, without lesion of the muscles and of the periosteum. The animals were divided in two groups: group control, that didn\'t receive stimulation and treated group with electric field. These were divided in two subgroups: animals sacrificed in the 19th after operation and animals sacrificed in the 27th after operation. The fracture member was treated with electric field pulsed with fundamental frequency of 1,5 MHz and 200 \'mü\'s of pulse width, in daily sessions of 20 minutes. The x-ray of that member took place in the day of the surgery and of the sacrifice. After the treatment the rats were sacrificed and their tibias were extracted for the material obtaining for analysis morfometric and mechanical rehearsal of flexion. The mechanical rehearsals revealed that there was only significant difference among the averages of the treated groups 18 and 12 days for the tension, the treated group 18 days had a larger tension, for the other analyzed mechanical properties there was not significant difference. The averages of the moment of inertia and area went significantly larger for the treated group 18 days compared with the respective averages of the control group controls. The treated group 12 days presented averages significantly larger when compared to the properties: moment of inertia, neutral line and area with the control group 12 days. These results suggest that an increment exists in the synthesis of organic matrix in the treated group, not accompanied lineally by the mineral synthesis. The difference significant statistic in the rupture tensions, on the other hand, suggests that the increase in the mineralization degree meets in course.

Apesar do grande potencial de regeneração do tecido ósseo, em algumas situações a extensão da lesão impede que o tecido se repare completamente. Como uma alternativa em relação aos tratamentos convencionais, a terapia celular tem sido considerada como promissora para o reparo de defeitos ósseos. No entanto, poucos estudos investigaram a terapia celular utilizando osteoblastos, portanto, avaliamos o efeito da injeção direta de osteoblastos na regeneração do tecido ósseo. Como os osteoblastos têm origens embrionárias diferentes, foi comparado in vitro o potencial osteogênico de osteoblastos derivados da crista neural, do mesoderma e de ambas as origens embrionárias. Considerando a necessidade de grande número de células para a terapia, foi comparado o efeito de uma subcultura, como meio de aumentar a quantidade de células, no potencial osteogênico dos osteoblastos. Para avaliação da regeneração dos defeitos, osteoblastos foram injetados diretamente nesses defeitos. Osteoblastos foram obtidos da calvária de ratos recém-nascidos (Wistar), sendo que os derivados da crista neural foram isolados dos ossos frontais (OB-CN); os do mesoderma isolados dos ossos parietais (OB-MS); e de ambas as origens embrionárias isolados de toda a calvária (OB-Cal). O efeito da subcultura no potencial osteogênico foi avaliado em OB-Cal ou na primeira passagem dessa cultura (OB-Cal P1). Após até 14 dias em cultura, foram avaliadas a proliferação celular, atividade de fosfatase alcalina (ALP), formação de matriz extracelular mineralizada e a expressão dos genes marcadores osteoblásticos: fator de transcrição runt-related 2 (RUNX2), ALP, osteocalcina (OC) e sialoproteína óssea (BSP). Para avaliar a regeneração do tecido ósseo, foram criados defeitos de 5 mm de diâmetro na calvária de ratos Wistar, que após 2 semanas foram tratados com 5 x 106 osteoblastos derivados de OB-Cal P1, por meio de injeção local. Ao final de 4 semanas, a formação óssea foi avaliada por microtomografia computadorizada e análise histológica. Os dados foram comparados por ANOVA, seguido do teste de Student-Newman-Keuls, ou teste t, quando apropriado, considerando o nível de significância de 5%. A comparação do potencial osteogênico em relação à origem embrionária mostrou que, os OB-MS apresentaram maior proliferação mas não houve diferença entre as culturas no evento final da diferenciação osteoblástica, que é a formação de matriz mineralizada. No entanto, como as culturas de OB-Cal apresentaram maior expressão gênica de marcadores iniciais, intermediários e finais dessa diferenciação; e considerando que, essas culturas são aquelas nas quais é possível obter o maior número de células, optamos por utilizar essas culturas na avaliação da formação óssea induzida pela terapia celular. Além disso, os resultados mostraram que os OB-Cal P1 tem seu potencial osteogênico reduzido, mas considerando que a subcultura permite a obtenção de maior número de células, são uma boa escolha para a terapia celular. Tanto que, ao avaliar in vivo a capacidade regenerativa das OBCal P1 no reparo dos defeitos ósseos, as análises microtomográficas e histológicas mostraram que que a terapia celular com injeção local de osteoblastos obtidos de fragmentos ósseos da calvária constitui uma estratégia adequada para estimular o reparo ósseo / Despite of the great potential of regeneration of the bone tissue, in some situations the extension of the lesion prevents the tissue from repairing completely. As an alternative to conventional treatments, cell therapy has been considered a promising strategy for the repair of bone defects. However, few studies investigated cell therapy using osteoblasts, therefore, we evaluated the effect of direct injection of osteoblasts on the regeneration of bone tissue. Since osteoblasts have different embryonic origins, the osteogenic potential of osteoblasts derived from neural crest, mesoderm and both embryonic origins was compared in vitro. Considering the need for a large number of cells for the therapy, the effect of a subculture, a common way to increase the amount of cells, on the osteogenic potential was also compared. Then, osteoblasts were injected directly into bone defects to evaluate the regeneration of bone tissue. Osteoblasts were obtained from the calvaria of newborn rats (Wistar), the neural crest derivatives were isolated from the frontal bones (OB-CN); those of the mesoderm isolated from the parietal bones (OB-MS); and from both embryonic origins isolated from the entire calvaria (OB-Cal). The effect of the subculture on the osteogenic potential was evaluated in OB-Cal and in its firstpassage (OB-Cal P1). After up to 14 days, all cultures were assayed for cell proliferation, alkaline phosphatase activity (ALP), mineralized extracellular matrix formation and the expression of the osteoblastic marker genes: runtrelated transcription factor 2 (RUNX2), ALP, osteocalcin (OC) and bone sialoprotein (BSP). To evaluate the effect of cell injection on bone regeneration, defects of 5 mm diameter were created in the calvaria of Wistar rats, that after 2 weeks were injected with 5 x 106 OB-Cal P1-derived osteoblasts. Vehicle injections were used as control. At the end of 4 weeks, the bone formation was evaluated by computerized microtomography and histological analysis. Data were compared by ANOVA, followed by the Student-Newman-Keuls test, or ttest, when appropriate, and the level of significance was set at 5%. The comparison of the osteogenic potential related to the embryonic origin showed that the OB-MS presented a greater proliferation but there was no difference between the cultures in the final event of the osteoblastic differentiation, that is the formation of mineralized matrix. However, as OB-Cal cultures showed greater gene expression of initial, intermediate and final markers of this differentiation; and considering that these cultures are those in which it is possible to obtain the largest number of cells, we selected these cultures for evaluating the bone formation induced by the cell therapy. In addition, the results showed that OB-Cal P1 still holds its osteogenic potential and despite being lower than that of OB-Cal as the subculture allows obtaining more cells, it has been considered as a good choice for cell therapy. In agreement with this, OB-Cal P1-derived osteoblasts injected into the bone defects were capable of inducing more bone formation than control, as revealed by microtomographic and histological analyzes. Therefore, it supports the idea that cell therapy with local injection of osteoblasts obtained from calvarial bone fragments is an adequate strategy to stimulate bone formation

O ultra-som de baixa intensidade tem demonstrado ser um recurso acelerador do processo de consolidação óssea em fraturas. Este estudo experimental investigou a influência da estimulação ultra-sônica de baixa intensidade no processo de reparo ósseo em fraturas de tíbias tratadas por meio de fixação flexível. O estudo foi desenvolvido no laboratório de Bioengenharia da FMRP da Universidade de São Paulo Campus de Ribeirão Preto, utilizando 20 coelhos machos adolescentes da raça Nova Zelândia, que foram submetidos a uma osteotomia no terço médio da tíbia e tratados com fixador externo unilateral. Após o procedimento cirúrgico os animais foram divididos em três grupos: controle com n = 7 (membro contralateral, não fixado), grupo controle lesão com n = 7 (fixados e mantidos em gaiolas) e grupo ultra-som com n = 7, que recebeu estimulação com equipamento de ultra-som de baixa intensidade (30mW/'CM POT.2') e ciclo de trabalho de 1/5. No final de 20 dias de tratamento suas tíbias foram retiradas e submetidas a ensaio mecânico de torção. Na avaliação das propriedades mecânicas torque máximo e rigidez, não foi observada diferença significativa (p '< OU =' 0,05) entre os grupos estimulados e controle lesão. Estes resultados sugerem que a estimulação ultra-sônica de baixa intensidade aplicada ao reparo de fraturas na presença de fixação flexível não influencia a velocidade e o padrão de consolidação da fratura / The low-intensity ultrasound has demonstrated to be an accelerator device on the process of recovering of bone fractures. This experimental study investigated the influence of the low-intensity ultrasound stimulation on the process of bone repairing of fractures of tibia treated with flexible fixator. The study was developed at the FMRP Bioengineering laboratory, of the University of Sao Paulo, campus of Ribeirao Preto, using 20 teenager male rabbits from the New Zealand breed which were subjected to an osteomy in the median third of the tibia and treated with an unilateral external fixator. After the surgical procedure the animals were divided into three groups: control with n = 7 (paw contralateral, not fixed), group control injury with n = 7 (fixed and kept in cages) and group ultrasound with n = 7, that received stimulation with low-intensity ultrasound equipment (30mW/'CM POT.2') and duty cycle 1/5. At the end of 20 days of treatment, their tibia were removed and subjected to a mechanical twist test. At the evaluation of the mechanical properties: maximum torque and hardness, it was not observed significant differences (p '< OU =' 0,05) among the stimulated groups and the control injury. These outcomes suggest that the low-intensity ultrasound applied for fractures healing in the presence of flexible fixation does not have influence on the velocity nor the standard of the fracture recovering