Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2008. / Submitted by Diogo Trindade Fóis (diogo_fois@hotmail.com) on 2009-09-10T12:21:36Z No. of bitstreams: 1 2008_DanielleGuimaraesADiniz.pdf: 2199801 bytes, checksum: cc54ee6af3a845a15b11244303389829 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2009-10-30T15:39:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_DanielleGuimaraesADiniz.pdf: 2199801 bytes, checksum: cc54ee6af3a845a15b11244303389829 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-10-30T15:39:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_DanielleGuimaraesADiniz.pdf: 2199801 bytes, checksum: cc54ee6af3a845a15b11244303389829 (MD5) Previous issue date: 2008 / Os retinoides são compostos derivados da vitamina A capazes de regular o crescimento e Diferenciação celular. O uso dos retinoides para o tratamento do câncer tem progredido, particularmente para os casos de leucemia, neuroblastoma, cânceres de próstata e pulmão. O uso terapêutico dos retinoides e limitado devido as graves reações adversas apresentadas e a baixa solubilidade destes compostos. A encapsulação dos retinoides em nanocarreadores, como lipossomas e nanocapsulas, pode modificar seu perfil de farmacocinetica, aumentar o aporte celular e melhorar a estabilidade destes compostos. Os lipossomas foram preparados pelo método de hidratação do filme lipidico seco e caracterizados quanto a sua estabilidade por Alves em 2005. As nanocapsulas foram preparadas pelo método de deposição interfacial do polímero pré-formado. As nanocapsulas de PLA foram caracterizadas quanto a estabilidade por Teixeira em 2007. O diâmetro médio dos nanocarreadores foi de 90, 169 e 170 nm para os lipossomas, nanocapsulas de PLGA e nanocapsulas de PLA respectivamente. As nanocapsulas exibiram maior eficiência de encapsulacao para a isotretinoina. A citotoxicidade do fármaco, quando encapsulado, foi dose e tempo dependentes sendo possível observar redução nos valores do IC50. Na avaliação da citotoxicidade tanto pelo método de azul de trypan quanto pelo MTT, foi possível observar que a nanoencapsulacao promoveu aumento na atividade antiproliferativa da isotretinoina tanto em células K562 quanto em células de pacientes, quando comparada a sua forma nao encapsulada. Ja com 24 horas de incubação, foi observado um aumento expressivo no índice terapêutico do fármaco encapsulado quando incubado com células de pacientes. No presente trabalho também foi observada a presença de tretinoina e isotretinoina tanto dentro das células K562 quanto no meio de cultura, demonstrando a isomerização destes compostos durante a incubação. Nos ensaios de biodistribuição tissular foi possível observar que as nanocápsulas de PLGA foram rapidamente sequestradas pelo fígado e pulmão. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Retinoic acid (RA) is the main Vitamim A related compound capable of regulating cellular differentiation and growth. The use of retinoids for the treatment of cancer has progressed, particularly for leukemia, neuroblastoma, prostate and lung tumors. Therapeutic uses of retinoids are limited due to severe adverse reactions, and also their very low aqueous solubility. Encapsulating retinoids in colloidal carriers, such as liposome and nanocapsules, can modify their pharmacokinetic profile, increase the drug uptake into neoplasic cells and also improve the stability of these compounds. Preparation methods of liposomes include the hydration of lipidic film followed by sonication. After preparation, the vesicles are characterized by size, chemical constitution, and amount of encapsulated material for Alves, 2005. Nanocapsules were prepared by solvent displacement method. After preparation, PLA nanocapsules are characterized by size, chemical constitution, and amount of encapsulated material forTeixeira, 2007. The average diameter of the nanocarriers was 90, 167 and 170 nm for liposomes, PLGA and PLA nanocapsules respectively. Nanocapsules exhibited the highest encapsulation efficiency for 13cis RA. Citotoxicity of the drug inside the nanocarrier systems was dose and time dependent and also a marked reduction of IC50 for cultured cells was observed. Nanoencapsulation was able to promote an increase in the in vitro therapeutic index of 13cisRA against the proliferation of both K562 and patient myeloid leukimia cells when compared to that of free drug. With 24 hours of incubation, was noticed a significant increase in therapeutic index of encapsulated drug when incubated with patients cells. In this work it was observed the presence of tretinoin and isotretinoin both within the K562 cells as the growth medium, demonstrating the isomerization of these compounds during incubation. In tests of tissue biodistribution it was possible to see that the nanocapsules of PLGA were quickly kidnapped by the liver and lung.

Orientador: Juliano Vilaverde Schmitt / Resumo: Fundamentos: Apesar da isotretinoína oral ser um tratamento eficaz para casos graves e persistentes de acne, existe significativa preocupação e controvérsia sobre seus efeitos adversos psicológicos. Por outro lado, a acne apresenta significativo impacto psicossocial nos portadores. Objetivos: Avaliar adolescentes e adultos jovens sob tratamento com isotretinoína oral para acne moderada a grave quanto a sintomas depressivos e suas relações com variáveis demográficas e clínicas. Métodos: Estudo tipo coorte com portadores de acne tratados com isotretinoína oral. Foram avaliados Cardiff Acne Disability Index (CADI), escala de depressão de Beck (EDB), gravidade da acne e cicatrizes e escore de efeitos adversos mucocutâneos (EEAM). Resultados: Foram incluídos 42 pacientes, 43% do sexo feminino, com idade mediana de 18 [1q-3q:16-21], seguidos por um período de 9 [6-9] meses. EDB passou de 7,5 [2-16] pré-tratamento para 1 [0-5] ao final do seguimento (p<0,01), sendo que 43% apresentavam pontuação para depressão leve ou superior pré-tratamento, contra 14% ao final do seguimento (RP=0,33 (IC 95%: 0,15 a 0,76); p<0,01). EDB pré-tratamento associou-se à presença de antecedentes psiquiátricos, menor renda familiar e maior CADI (p<0,05), enquanto durante o tratamento associou-se à maior duração prévia da acne, a maiores EEAM, à menor dose acumulada e a maiores EDB iniciais (p<0,05). Limitações: Perdas de seguimento, não apresentar grupos controle, monocêntrico. Conclusões: Há melhora nos e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Background: Despite the effectiveness of oral isotretinoin for severe and persistent acne, there is concern and controversy about its possible psychological adverse effects. On the other hand, acne causes significant psychosocial impact on patients. Objective: Assess treatment with oral isotretinoin for moderate to severe acne in adolescents and young adults regarding depressive symptoms and their relationships with demographic and clinical variables. Methods: Cohort study with patients with acne under treatment with oral isotretinoin. Four aspects were considered: Cardiff Acne Disability Index (CADI), Beck Depression Inventory (BDI), acne and scars severity and Mucocutaneous Adverse Effects Score (MAES). Results: Forty-two participants were included, 43% were female, median age 18 years old [1q-3q:16-21], followed up for 9 [6-9] months. The BDI went from 7.5 [2- 16] before the treatment to 1 [0-5] after the follow up (p<0.01). 43% had score for mild depression or worse before treatment – the number dropped to 14% in the end of the study (RP=0.33 (IC 95%: 0.15 to 0.76); p<0.01). The BDI before treatment correlates to psychiatric history, lower family income and higher CADI (p<0.05), while during the treatment it correlates to the duration of acne, higher MAES, lower cumulative dose and higher initial BDI (p<0.05). Study Limitations: Loss of follow-up, lack of a control group, monocentric. Conclusion: There is improvement on the depression scores when acne vulgaris is treated ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Francisco Benedito Teixeira Pessine / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-22T06:49:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martins_MileneHeloisa_D.pdf: 5657297 bytes, checksum: 0591f1d89a55f401bdc492136908b11b (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Este trabalho teve como objetivos preparar, caracterizar, verificar a estabilidade e avaliar a permeação na pele e a irritação cutânea de formulações lipossomais contendo isotretinoína (ISOTN), destinadas ao tratamento dermatológico de casos severos de acne, com a finalidade de reduzir os efeitos adversos e a degradação do fármaco. As formulações lipossomais foram obtidas através da técnica de hidratação do filme lipídico seco. Foi observado que nos lipossomas constituídos apenas de fosfatidilcolinas saturadas (HPC) houve vazamento do fármaco inicialmente encapsulado. O máximo de encapsulação (> 98%), com aumento da fluidez das bicamadas lipídicas, foi obtido com as seguintes suspensões lipossomais: (a) mistura de HPC com 40% mol de surfatante insaturado Lipopeg 4DO (DO) - Lipo_HPC/DO; (b) mistura de HPC com 40% mol de fosfatidilcolinas insaturadas (PC) - Lipo_HPC/PC; (c) lipossomas contendo apenas PC - Lipo_PC; (d) mistura de PC com 20% mol de colesterol (Col) - Lipo_PC/Col e (e) mistura de PC com 10% mol de fosfatidilserina (PS) - Lipo_PC/PS. Devido ao elevado teor de encapsulação da ISOTN nestes lipossomas, foi desnecessário separar o fármaco não encapsulado. A razão molar ISOTN/lipídios foi ~0,026:1. Análises usando microscopia eletrônica de transmissão e de varredura das suspensões lipossomais confirmaram a estrutura lamelar e a geometria esférica dos lipossomas, respectivamente. A encapsulação da ISOTN nas bicamadas lipossomais foi monitorada por microscopia óptica, avaliando a presença de cristais do fármaco na suspensão. A comprovação da encapsulação da ISOTN nas bicamadas lipídicas foi verificada através da fluorescência de pireno (aumento do grau de anisotropia e diminuição da intensidade de fluorescência da sonda). As suspensões lipossomais mantiveram-se estáveis durante 3 meses de armazenamento a 8 oC, em relação ao diâmetro médio (~300 nm) e à porcentagem de ISOTN encapsulada. A encapsulação lipossomal de ISOTN diminuiu sua fotodegradação em comparação com este fármaco dissolvido em etanol. Géis aquosos contendo ISOTN lipossomal apresentaram maior estabilidade fotoquímica que o gel alcoólico convencional contendo ISOTN. Os géis lipossomais apresentaram menor fluxo através da pele de orelha de porco, indicando menor absorção sistêmica in vivo. Géis contendo Lipo_PC/PS e Lipo_HPC/DO retiveram mais fármaco na pele em comparação ao fármaco permeado. Com exceção do gel contendo Lipo_HPC/DO, todos os demais géis lipossomais foram menos irritantes à pele de coelho em relação aos géis alcoólicos convencionais. Portanto, a encapsulação da ISOTN em lipossomas aumentou sua estabilidade e diminuiu efeitos adversos em relação aos produtos comerciais / Abstract: The mail goals of this work were the preparation, characterization, verification of the stability, skin permeation and cutaneous irritation of isotretinoína (ISOTN) liposomal formulations used in dermatological treatment and designed to reduce adverse effects and drug degradation. The liposomal formulations were obtained by the technique of dry film hydration. Liposomes made of only saturated phosphatidylcholine (HPC) caused leakage of the encapsulated drug. The maximum encapsulation was obtained (> 98%) by increasing the fluidity of the lipidic bilayers, with the following liposomal suspensions: (a) a mixture of HPC with 40% mol of the unsaturated surfactant Lipopeg4DO (DO) - Lipo_HPC/DO; (b) a mixture of HPC with 40% mol of unsaturated phosphatidylcholine (PC) - Lipo_HPC/PC; (c) liposomes with only PC - Lipo_PC; (d) a mixture of PC with 20% mol of cholesterol (Col) - Lipo_PC/Col, and (e) a mixture of PC with 10% mol of phosphatidylserine (PS) - Lipo_PC/PS. Due to the high yield of encapsulation of ISOTN in these liposomes, the suspensions didn't require separation of non encapsulated drug. The molar ratio ISOTN/lipids was approximately 0,026: 1. Transmission and scanning electron microscopy of the liposomal suspensions showed the lamellar structure and spherical geometry of the vesicles. ISOTN encapsulation in the lipid bilayers was monitored by optical microscopy, since this drug crystallizes outside the vesicles. This encapsulation was also confirmed by increase of the degree of anisotropy of the fluorescent probe pyrene and the decrease of its fluorescence intensity due to quenching processes. The liposomal suspensions were stable for 3 months at 8 oC, maintaining the diameter and the percentage of encapsulated drug. The encapsulation in liposomes decreased ISOTN photodegradation in comparison to the drug dissolved in ethanol. Aqueous gels containing liposomal ISOTN were more protect after photolysis than ISOTN in the conventional alcoholic gel. The liposomal gels presented a slower rate of permeation through the skin of a piglet ear, indicating a tendency of present a lower systemic absorption in vivo. Gels containing Lipo_PC/PS and Lipo_HPC/DO were able to retain more drug at the skin than the free drug. With the exception of the gel containing Lipo_HPC/DO, the other liposomal gels were less irritating to the rabbit skin in relation to the conventional alcoholic gels. Therefore, the encapsulation of ISOTN in liposomes increased its stability and diminished its adverse effects in comparison to the commercial products / Doutorado / Físico-Química / Doutor em Ciências

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2014-08-06T11:34:54Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Estudo_da_Encapsulacao_da_isotretinoina_nas_formas_livres_e_associada_a_ciclodextrinas_em_niossomas.pdf: 2030155 bytes, checksum: 19eecf0e1e4b0f42b01d0975d4634686 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-06T11:34:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Estudo_da_Encapsulacao_da_isotretinoina_nas_formas_livres_e_associada_a_ciclodextrinas_em_niossomas.pdf: 2030155 bytes, checksum: 19eecf0e1e4b0f42b01d0975d4634686 (MD5) Previous issue date: 2009-12-15 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Fundação de Apoio à Pesquisa - FUNAPE / Non-ionic surfactant vesicles (niosomes) and cyclodextrins (CDs) are able to modify physical-chemical properties of incorporated drugs. One of the major challenges for the topical administration of retinoids, such as isotretinoin (31cisRA), is the stability of these compounds in formulations capable of reducing their toxicity during the treatment. The purpose of this research was to develop vesicular carries capable to transport and deliver isotretinoin for topical application during acne treatment. The niosomes were obtained from Bryj®30:Cholesterol:DCP (50:25:10) by the film hydration method. The HP CDs:isotretinoin complex was obtained by agitation for 8 days in phosphate buffer pH 7.4. The vesicles were characterized and it was possible to encounter a large amount of morphological varieties, flexible structures and fluid membrane, after inclusion of free isotretinoin. The fluidness of the membrane that contains isotretinoin allowed leaking of the drug when in concentration above 5 mM. The HP CDs:Isotretinoin (20:1) increased the vesicle size considerably, also allowing drug leaking. The systems developed presented themselves as potential carries of isotretinoin for topical application and played the roll of drug delivery system, / Os niossomas, vesículas formadas por tensoativos não-iônicos, e as ciclodextrinas (HP CDs) são sistemas capazes de alterar as características físico-químicas originais de diversos fármacos. O maior desafio da administração tópica de retinóides, como isotretinoína (ácido 13-cis-retinóico), é a manutenção de sua estabilidade em formulações capazes de reduzir a sua toxicidade durante o tratamento. A proposta deste trabalho foi desenvolver sistema para o transporte e liberação da isotretinoína com potencial para aplicação na terapêutica tópica da acne. Os niossomas foram formados a partir de Brij®30:Colesterol:DCP (50:25:10) pelo método de hidratação do filme lipídico. O complexo HP Ciclodextrinasisotretinoína foi obtido por agitação durante 8 dias em tampão fosfato pH 7,4. Os niossomas foram caracterizados sendo possível verificar grande variedade morfológica, estruturas flexíveis e membrana fluída após a inclusão da isotretinoína livre. A fluidez da membrana que contém isotretinoína permitiu o vazamento de fármaco quando em concentrações maiores que 5 mM. O complexo HP CDs:isotretinoína (20:1) aumentou consideravelmente o tamanho das vesículas, também permitindo vazamentos. Os sistemas desenvolvidos possuem potencial para uso como carreadores da isotretinoína na aplicação tópica demonstrando comportamento de “sistema de liberação modificado”.

Objetivos: objetivo geral deste trabalho foi avaliar a penetração cutânea da isotretinoína nanoencapsulada e livre utilizando técnicas de microdiálise e tape stripping in vitro. Métodos: A viabilidade da utilização da técnica de microdiálise para avaliar o perfil farmacocinético da isotretinoína após aplicação tópica foi investigada através da determinação da recuperação relativa (RR) in vitro por diálise e retrodiálise. A influência da concentração, do fluxo de perfusão e a ligação do fármaco à tubulação das sondas de microdiálise foram investigadas. A metodologia analítica para quantificação do fármaco em microdialisado foi validada. Em seguida, as penetrações cutâneas da isotretinoína livre e nanoencapsulada incorporada em géis hidrofílicos foram comparadas através da técnica de tape stripping in vitro em células de difusão de Franz utilizando pele humana e pele de porco. Para garantir a integridade das formulações, a estabilidade físico-química das mesmas foi avaliada. Os resultados de penetração cutânea foram comparados com os resultados in vivo obtidos em trabalho prévio do grupo de pesquisa. Resultados e Conclusões: Um método analítico simples e rápido para a determinação de isotretinoína em microdialisado foi validado de acordo com o FDA. A RR mostrou-se concentração independente e observou-se que há diferenças significativas entre as RR avaliadas pelos dois métodos utilizados, sendo a recuperação por retrodiálise 2,7 a 3,5 vezes superior que a obtida por diálise para os fluxos investigados. O fármaco aderiu às tubulações da sonda de microdiálise devido à sua lipofilicidade. Os hidrogéis de isotretinoína apresentaram estabilidade durante 2 meses de estocagem à 4 °C. Os experimentos de tape stripping in vitro mostraram que a isotretinoína não foi encontrada no compartimento receptor após 8 h, para ambas as formulações. A nanoencapsulação aumentou a penetração e prolongou a liberação da isotretinoína no estrato córneo de ambas as peles. A penetração cutânea em ambas as peles mostrou proporções similares para as duas formulações embora diferentes quantidades de fármaco tenham sido detectadas no estrato córneo. A pele de porco, mais permeável que a pele humana, é apropriada para prever a penetração cutânea da isotretinoína no estrato córneo humano in vitro (R = 0,79). O método in vitro não foi capaz de prever a penetração cutânea da isotretinoína in vivo. / Objectives: The aim of the present work was to assess the cutaneous penetration of isotretinoin free and loaded into polymeric nanocapsules using microdialysis and tape stripping in vitro. Methods: The feasibility of using microdialysis to determine the pharmacokinetic profile of isotretinoin after topical application was investigated through assessment of relative recovery (RR) in vitro by dialysis and retrodialysis. The influence of isotretinoin concentration, perfusion flow rate and drug binding to the probes were determined. The analytical method for quantification of microdialysate samples was validated. Furthermore the cutaneous penetration of isotretinoin free and loaded nanocapsules incorporated in hydrogel formulations were compared by tape stripping in vitro using Franz-type diffusion cells with excised human and pig skin. In order to ensure the integrity of the formulations used in this study, the chemical and physical stabilities were evaluated. The results of cutaneous penetration were compared with the results of tape stripping in vivo acquired in a previous study of our group. Results and Conclusions: A simple and rapid analytical method for quantification of isotretinoin in microdialysate samples was validated according to FDA. RR was concentration independent but method dependent under the conditions investigated being the retrodialysis recovery 3.5 to 2.7 times higher than the dialysis. Isotretinoin bound to the microdialysis tubing due to its high lipophilicity. The hydrogels showed storage stability for 2 months at 4 °C. In vitro tape stripping in human and pig skin showed that no isotretinoin reaches the receptor compartment for both formulations up to 8 h. Nanoencapsulation increased isotretinoin skin penetration for both stratum cornea and prolonged drug release. Similar proportion of cutaneous penetration for human and pig skin were observed although different amounts of drug were detected at the stratum corneum of both skin specimens. Pig skin, more permeable than human skin, is suitable for predicting cutaneous penetration of isotretinoin in humans in vitro (R = 0.79). The in vitro experiments were not suitable to reflect the in vivo results for percutaneous penetration of isotretinoin.

Objetivos: objetivo geral deste trabalho foi avaliar a penetração cutânea da isotretinoína nanoencapsulada e livre utilizando técnicas de microdiálise e tape stripping in vitro. Métodos: A viabilidade da utilização da técnica de microdiálise para avaliar o perfil farmacocinético da isotretinoína após aplicação tópica foi investigada através da determinação da recuperação relativa (RR) in vitro por diálise e retrodiálise. A influência da concentração, do fluxo de perfusão e a ligação do fármaco à tubulação das sondas de microdiálise foram investigadas. A metodologia analítica para quantificação do fármaco em microdialisado foi validada. Em seguida, as penetrações cutâneas da isotretinoína livre e nanoencapsulada incorporada em géis hidrofílicos foram comparadas através da técnica de tape stripping in vitro em células de difusão de Franz utilizando pele humana e pele de porco. Para garantir a integridade das formulações, a estabilidade físico-química das mesmas foi avaliada. Os resultados de penetração cutânea foram comparados com os resultados in vivo obtidos em trabalho prévio do grupo de pesquisa. Resultados e Conclusões: Um método analítico simples e rápido para a determinação de isotretinoína em microdialisado foi validado de acordo com o FDA. A RR mostrou-se concentração independente e observou-se que há diferenças significativas entre as RR avaliadas pelos dois métodos utilizados, sendo a recuperação por retrodiálise 2,7 a 3,5 vezes superior que a obtida por diálise para os fluxos investigados. O fármaco aderiu às tubulações da sonda de microdiálise devido à sua lipofilicidade. Os hidrogéis de isotretinoína apresentaram estabilidade durante 2 meses de estocagem à 4 °C. Os experimentos de tape stripping in vitro mostraram que a isotretinoína não foi encontrada no compartimento receptor após 8 h, para ambas as formulações. A nanoencapsulação aumentou a penetração e prolongou a liberação da isotretinoína no estrato córneo de ambas as peles. A penetração cutânea em ambas as peles mostrou proporções similares para as duas formulações embora diferentes quantidades de fármaco tenham sido detectadas no estrato córneo. A pele de porco, mais permeável que a pele humana, é apropriada para prever a penetração cutânea da isotretinoína no estrato córneo humano in vitro (R = 0,79). O método in vitro não foi capaz de prever a penetração cutânea da isotretinoína in vivo. / Objectives: The aim of the present work was to assess the cutaneous penetration of isotretinoin free and loaded into polymeric nanocapsules using microdialysis and tape stripping in vitro. Methods: The feasibility of using microdialysis to determine the pharmacokinetic profile of isotretinoin after topical application was investigated through assessment of relative recovery (RR) in vitro by dialysis and retrodialysis. The influence of isotretinoin concentration, perfusion flow rate and drug binding to the probes were determined. The analytical method for quantification of microdialysate samples was validated. Furthermore the cutaneous penetration of isotretinoin free and loaded nanocapsules incorporated in hydrogel formulations were compared by tape stripping in vitro using Franz-type diffusion cells with excised human and pig skin. In order to ensure the integrity of the formulations used in this study, the chemical and physical stabilities were evaluated. The results of cutaneous penetration were compared with the results of tape stripping in vivo acquired in a previous study of our group. Results and Conclusions: A simple and rapid analytical method for quantification of isotretinoin in microdialysate samples was validated according to FDA. RR was concentration independent but method dependent under the conditions investigated being the retrodialysis recovery 3.5 to 2.7 times higher than the dialysis. Isotretinoin bound to the microdialysis tubing due to its high lipophilicity. The hydrogels showed storage stability for 2 months at 4 °C. In vitro tape stripping in human and pig skin showed that no isotretinoin reaches the receptor compartment for both formulations up to 8 h. Nanoencapsulation increased isotretinoin skin penetration for both stratum cornea and prolonged drug release. Similar proportion of cutaneous penetration for human and pig skin were observed although different amounts of drug were detected at the stratum corneum of both skin specimens. Pig skin, more permeable than human skin, is suitable for predicting cutaneous penetration of isotretinoin in humans in vitro (R = 0.79). The in vitro experiments were not suitable to reflect the in vivo results for percutaneous penetration of isotretinoin.

Made available in DSpace on 2011-12-27T14:14:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 000422015-0.pdf: 1602565 bytes, checksum: 324d0d02a035f3dd359f6b20951663de (MD5) license.txt: 581 bytes, checksum: 44ea52f0b7567232681c6e3d72285adc (MD5) / The objective of this study was to evaluate the effects of daily intake of isotretinoin in standard therapeutic doses (7,5mg/kg) for cystic acne vulgaris’ treatment on the alveolar repair after extraction of upper incisors, in rats. Thirty two male Wistar rats were used, with medium age of 60 days, that were allocated in the Control group (CG= 12 rats) and in the Experimental group (EG= 20 rats). Each group was subdivided in 4 subgroups according to 7, 21, 28 and 90 days’ periods in which they were euthanasied after surgery. All animals from experimental group received daily doses of isotretinoin during a period of 30 days before surgery. After this period, the extractions were carried out and animals continued to receive the medication until the respective day of sacrifice. All animals from experimental group were submitted to a peripheral blood collection through orbital venous plexus to analysis of calcium serum level before beginning the use of the medicine and at the time of euthanasia. The obtained operatory pieces (maxilla) were processed and, submitted to histological sections of 6 μm thickness, and staining in HE. Histological slides were submitted to descriptive microscopic analysis, under light microscopy. Results showed that there was an acceleration in alveolar repair process among all rats from experimental group (7, 21, 28 e 90 days), when compared to respective control groups. Calcium serum levels had a decrease statistically significant between 1st and 2nd blood collections in groups 21, 28 and 90 days. Based on results, it was possible to conclude that all animals from experimental group presented a more accelerated alveolar healing compared to animals from corresponding control groups, indicating that isotretinoin accelerated the repair. / O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da administração diária de 7,5 mg/Kg de isotretinoína por via oral, para o tratamento de acne vulgar cística sobre o reparo alveolar após exodontia de incisivos superiores, em ratos. Foram utilizados 32 ratos machos (Wistar), com idade média de 60 dias que foram distribuídos em grupo Controle (12 ratos) e grupo Experimental (20 ratos). Cada grupo foi dividido em quatro subgrupos de acordo com os períodos de observação em 7, 21, 28 e 90 dias após a extração. Os animais do grupo experimental receberam doses diárias de isotretinoína por um período de 30 dias antes da cirurgia. Após este período, foram realizadas as extrações e os animais continuaram a receber a medicação até os respectivos dias das eutanásias. Os animais do grupo experimental foram submetidos à coleta de sangue periférico através do plexo venoso orbital para análise do nível sérico de cálcio antes de iniciarem uso da medicação e no dia da eutanásia. As peças operatórias obtidas (hemimaxila direita) foram processadas, submetidas aos cortes histológicos de 6μm de espessura, e coradas em HE. As lâminas histológicas foram analisadas de forma descritiva sob microscopia de luz. Os resultados mostraram que houve uma aceleração no processo de reparo alveolar no grupo experimental, em todos os períodos (7, 21, 28 e 90 dias), quando comparados aos seus respectivos grupos controles. O nível sérico de cálcio teve uma diminuição estatisticamente significativa entre a 1º e a 2º coleta de sangue nos grupos de 21, 28 e 90 dias. Com base nos resultados, foi possível concluir que os animais do grupo experimental mostraram uma cicatrização alveolar mais acelerada do que os animais do grupo controle, indicando que a ingestão diária de isotretinoína em dose correspondente para o tratamento de acne cística acelerou o reparo alveolar.

Made available in DSpace on 2011-12-27T14:14:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 000419164-0.pdf: 3317808 bytes, checksum: 3055ad6dec4d94e51a963ca86fb7d7e0 (MD5) license.txt: 581 bytes, checksum: 44ea52f0b7567232681c6e3d72285adc (MD5) / Isotretinoin is a vitamin A derivative that is indicated for dermatologic treatment in patients with severe acne, which shows various side effects on bone metabolism. The aim of the present study was to evaluate the bone repair process in cavities made in the calvarial bone of rats, submitted to oral administration of 7. 5 mg/kg/day isotretinoin, and to determine the serum calcium level in blood samples of the retro-orbital plexus before drug administration and on day of euthanasia. Thirty-three male albino rats (Rattus novergicus albinus, Wistar) were used, which were approximately 60 days old and weighed 250 to 500 g; they were distributed randomly into two groups, control (n=15) and experimental (n=18). A cavity of 2 mm in diameter was made in the calvarial bone of each animal. The animals were killed at 21, 28 and 90 days postoperative. The parietal bone, containing the cavity previously made, was removed and the surgical pieces were submitted to histological processing, followed by H&E staining. Computerized histomorphometric analysis was performed to determine the area of neoformed bone relative to the total defect area at different times of observation. The results expressed as mean percent of neoformed bone in the experimental group were: 25. 37% (± 9. 14) at 21 days, 41. 78% (±7. 00) at 28 days, and 57. 51% (±11. 62) at 90 days. In the control group the results were 17. 10% (±9. 23) at 21 days, 34. 42% (±7. 70) at 28 days, and 48. 49% (±16. 40) at 90 days. Therefore, bone neoformation was greater in the experimental group, but the difference versus control was not statistically significant (p≤0. 05). The serum calcium level showed a statistically significant decrease between the first and second blood sampling in all groups. Based on the results of this study, it was concluded that, despite not being statistically significant, isotretinoin promoted acceleration in the process of bone neoformation in the calvarial bone of rats, along with a reduction in serum calcium levels. / A isotretinoína é um derivado da vitamina A, indicada para o tratamento dermatológico em pacientes com acne severa, que apresenta diversos efeitos colaterais sobre o metabolismo ósseo. O presente estudo teve por objetivo avaliar o processo de reparo ósseo em cavidades confeccionadas em calota craniana de ratos, submetidos à ingestão oral de 7,5 mg/Kg/dia de isotretinoína e avaliar o nível sérico de cálcio através da coleta de sangue do plexo venoso orbital antes de iniciarem o uso da medicação e no dia da eutanásia. Foram utilizados 33 ratos albinos machos (Rattus novergicus albinus, Wistar) com aproximadamente 60 dias e peso corporal médio de 250 a 500 gramas, distribuídos aleatoriamente em dois grupos controle (n=15) e experimental (n=18). Na calota craniana de cada animal foi confeccionada uma cavidade de 2mm de diâmetro. Os animais foram eutanasiados aos 21, 28 e 90 dias de pós-operatório. O osso parietal, contendo a cavidade previamente confeccionada, foi removido e as peças operatórias submetidas a processamento histológico, seguida de coloração pela técnica de HE. Foi realizada análise histomorfométrica computadorizada que permitiu mensurar a proporção entre área do osso neoformado e a área total dos defeitos nos diferentes períodos de observação. Os resultados expressos em porcentagem média de osso neoformado no grupo experimental foram: 25,37% (± 9,14) aos 21 dias, 41,78% (±7,00) aos 28 dias e 57,51% (±11,62) aos 90 dias. No grupo controle os resultados foram de 17,10% (±9,23) aos 21 dias, 34,42% (±7,70) aos 28 dias e 48,49% (±16,40) aos 90 dias. Após análise histológica descritiva observou-se um aumento da neoformação óssea no grupo experimental, mas sem diferença estatisticamente significativa (p≤0,05). O nível sérico de cálcio teve uma diminuição estatisticamente significativa entre a 1° e a 2° coleta de sangue em todos os grupos. Com base nos resultados, foi possível concluir que, mesmo não sendo estatisticamente significativa, a isotretinoína promoveu uma aceleração no processo de neoformação óssea em calota craniana de ratos, bem como redução dos níveis séricos de cálcio.

Objetivos: objetivo geral deste trabalho foi avaliar a penetração cutânea da isotretinoína nanoencapsulada e livre utilizando técnicas de microdiálise e tape stripping in vitro. Métodos: A viabilidade da utilização da técnica de microdiálise para avaliar o perfil farmacocinético da isotretinoína após aplicação tópica foi investigada através da determinação da recuperação relativa (RR) in vitro por diálise e retrodiálise. A influência da concentração, do fluxo de perfusão e a ligação do fármaco à tubulação das sondas de microdiálise foram investigadas. A metodologia analítica para quantificação do fármaco em microdialisado foi validada. Em seguida, as penetrações cutâneas da isotretinoína livre e nanoencapsulada incorporada em géis hidrofílicos foram comparadas através da técnica de tape stripping in vitro em células de difusão de Franz utilizando pele humana e pele de porco. Para garantir a integridade das formulações, a estabilidade físico-química das mesmas foi avaliada. Os resultados de penetração cutânea foram comparados com os resultados in vivo obtidos em trabalho prévio do grupo de pesquisa. Resultados e Conclusões: Um método analítico simples e rápido para a determinação de isotretinoína em microdialisado foi validado de acordo com o FDA. A RR mostrou-se concentração independente e observou-se que há diferenças significativas entre as RR avaliadas pelos dois métodos utilizados, sendo a recuperação por retrodiálise 2,7 a 3,5 vezes superior que a obtida por diálise para os fluxos investigados. O fármaco aderiu às tubulações da sonda de microdiálise devido à sua lipofilicidade. Os hidrogéis de isotretinoína apresentaram estabilidade durante 2 meses de estocagem à 4 °C. Os experimentos de tape stripping in vitro mostraram que a isotretinoína não foi encontrada no compartimento receptor após 8 h, para ambas as formulações. A nanoencapsulação aumentou a penetração e prolongou a liberação da isotretinoína no estrato córneo de ambas as peles. A penetração cutânea em ambas as peles mostrou proporções similares para as duas formulações embora diferentes quantidades de fármaco tenham sido detectadas no estrato córneo. A pele de porco, mais permeável que a pele humana, é apropriada para prever a penetração cutânea da isotretinoína no estrato córneo humano in vitro (R = 0,79). O método in vitro não foi capaz de prever a penetração cutânea da isotretinoína in vivo. / Objectives: The aim of the present work was to assess the cutaneous penetration of isotretinoin free and loaded into polymeric nanocapsules using microdialysis and tape stripping in vitro. Methods: The feasibility of using microdialysis to determine the pharmacokinetic profile of isotretinoin after topical application was investigated through assessment of relative recovery (RR) in vitro by dialysis and retrodialysis. The influence of isotretinoin concentration, perfusion flow rate and drug binding to the probes were determined. The analytical method for quantification of microdialysate samples was validated. Furthermore the cutaneous penetration of isotretinoin free and loaded nanocapsules incorporated in hydrogel formulations were compared by tape stripping in vitro using Franz-type diffusion cells with excised human and pig skin. In order to ensure the integrity of the formulations used in this study, the chemical and physical stabilities were evaluated. The results of cutaneous penetration were compared with the results of tape stripping in vivo acquired in a previous study of our group. Results and Conclusions: A simple and rapid analytical method for quantification of isotretinoin in microdialysate samples was validated according to FDA. RR was concentration independent but method dependent under the conditions investigated being the retrodialysis recovery 3.5 to 2.7 times higher than the dialysis. Isotretinoin bound to the microdialysis tubing due to its high lipophilicity. The hydrogels showed storage stability for 2 months at 4 °C. In vitro tape stripping in human and pig skin showed that no isotretinoin reaches the receptor compartment for both formulations up to 8 h. Nanoencapsulation increased isotretinoin skin penetration for both stratum cornea and prolonged drug release. Similar proportion of cutaneous penetration for human and pig skin were observed although different amounts of drug were detected at the stratum corneum of both skin specimens. Pig skin, more permeable than human skin, is suitable for predicting cutaneous penetration of isotretinoin in humans in vitro (R = 0.79). The in vitro experiments were not suitable to reflect the in vivo results for percutaneous penetration of isotretinoin.

A administração oral de isotretinoína (IST) é eficaz no tratamento da acne; no entanto, seu uso está associado a efeitos adversos, como ressecamento da pele, epistaxe, distúrbios imunológicos e psiquiátricos, enquanto a eficácia da aplicação tópica é prejudicada pela intensa irritação causada na pele. Proteger a IST do contato direto com a pele e direcionar sua liberação para os folículos pilosos, local onde a acne se desenvolve, pode reduzir a irritação e aumentar a eficácia do tratamento. O polímero Delonix (DLX), galactomanano natural derivado da semente de Delonix regia, pode ser manipulado para produzir nanopartículas para a liberação direcionada de IST na pele. Desta forma, o objetivo deste estudo foi desenvolver nanopartículas poliméricas de DLX (IST-DLX) contendo IST e avaliar seu potencial para o tratamento tópico da acne. O DLX foi coletado, purificado e caracterizado quanto a composição de monossacarídeos e massa molecular (MM). Nanopartículas DLX sem IST (branco), nanopartículas fluorescentes de DLX (nanopartículas contendo BODIPY (BOD-DLX)) e nanopartículas IST-DLX foram preparadas e caracterizadas por tamanho, índice de polidispersividade (PdI), potencial zeta (pz) e eficiência de encapsulação (EE). O estudo de liberação in vitro das nanopartículas IST-DLX foi realizado utilizando células de difusão e membrana sintética, enquanto a penetração cutânea das nanopartículas BOD-DLX e IST-DLX foi avaliada por microscopia confocal e tape stripping diferencial em pele de orelha de porco dermatomizada, respectivamente. A influência das nanopartículas IST-DLX na modulação de IL-6, IL-10 e TNF-? foi avaliada in vitro utilizando células de macrófagos AMJ-2 estimuladas com lipopolisacarídeos (LPS) e a atividade antimicrobiana foi avaliada em meio de cultura de Propionibacterium acnes. In vivo, as nanopartículas IST-DLX foram avaliadas quanto a penetração e irritação cutânea em ratos Wistar (protocolo de aprovação CEUA-FCFRP nº 17.5.213.60.3). A MM do polímero DLX foi de ~177 kDa, contendo predominantemente manose e galactose na proporção de 6,3:1. O tamanho das nanopartículas IST-DLX, determinado por dispersão de luz, foi entre 215 a 232 nm, PdI < 0,2, pz < -30 mV e EE > 25%. As nanopartículas IST-DLX sustentaram a liberação da IST, com cerca de 37% de IST sendo liberado em 48 h. As imagens de microscopia confocal mostraram que as nanopartículas BOD-DLX concentraram-se na epiderme e nos folículos pilosos em comparação com a solução de BODIPY livre, a qual permeou até a derme. Foi observada uma penetração de IST significativamente maior e descontrolada em todas as camadas da pele de orelha de porco quando a solução de polímero de IST-DLX foi usada em comparação com um acúmulo de IST menor e controlado quando as nanopartículas IST-DLX foram aplicadas. As nanopartículas IST-DLX direcionaram a IST para os folículos pilosos (26%) em comparação com a solução de IST (6,5%) que permeou por todas as camadas da pele. As nanopartículas IST-DLX reduziram significativamente a produção de IL-6 em células de macrófagos estimuladas por LPS, mesmo após 48 h, em comparação com a solução de IST livre, que reduziu significativamente a produção de IL-6 apenas até 24 h. Tanto as nanopartículas ISTDLX quanto a solução de IST livre não inibiram o crescimento de P. acnes. Não foi observado nenhum sinal de eritema nos ratos tratados com nanopartículas IST-DLX, com ou sem irradiação UVA, enquanto os tratados com solução de IST apresentaram eritema. A espessura da epiderme dos ratos tratados com as nanopartículas foi significativamente menor do que daqueles tratados com IST livre, com ou sem irradiação UVA. Conclui-se que as nanopartículas IST-DLX direcionam e sustentam a liberação de IST na pele em concentrações ótimas, modulam a resposta inflamatória da IL-6 e previnem o eritema inflamatório relacionado ao IST in vivo. Sendo assim, o polímero DLX pode ser considerado um polímero promissor para a liberação sustentada e direcionada de fármacos. / Oral isotretinoin (IST) has been effective in acne treatment; however, its use is associated with side effects such as skin dryness, epistaxis, immune disorder and psychiatric concerns while its topical gel application\'s effectiveness is hampered by irritancy. Protecting IST from direct skin contact and targeting its release to the hair follicles where the acne develops can reduce irritation and increase the effectiveness of treatment. Delonix (DLX) polymer is a natural galactomannan derived from Delonix regia seed that may be engineered to yield nanoparticles for IST skin targeting. Therefore, the aim of this study was to develop IST-loaded DLX (IST-DLX) polymeric nanoparticles and assess its skin targeting prospects for acne treatment. DLX was collected, purified and characterized by monosaccharide composition and molecular weight (Mw). Blank DLX nanoparticles, fluorescent DLX nanoparticles (BODIPY-loaded (BOD-DLX) nanoparticles) and IST-DLX nanoparticles were prepared and characterized by size, polydispersibility index (PdI), zeta potential (zp) and encapsulation efficiency (EE). In vitro release study of IST-DLX nanoparticles was performed using diffusion cells and synthetic membrane, while skin targeting of BOD-DLX and IST-DLX nanoparticles were assessed by confocal microscopy and differential tape stripping technique in dermatomed pig ear skin respectively. IST-DLX polymeric nanoparticles\' IL-6, IL-10 and TNF-? modulation was assessed in vitro using lipopolysaccharide (LPS) stimulated AMJ-2 macrophage cells and antimicrobial activity was assessed in Propionibacterium acnes culture medium. IST-DLX nanoparticles\' skin penetration and irritation were evaluated in vivo in Wistar rats (ethics committee approval protocol CEUA-FCFRP nº 17.5.213.60.3). DLX polymer Mw was ~177 kDa, containing predominantly mannose and galactose in ratio 6.3:1. IST-DLX nanoparticles\' size determined by light scattering was between 215 to 232 nm, PdI < 0.2, zp < -30 mV, EE > 25 %. IST-DLX nanoparticles sustained IST release, with about 37% IST being released in 48 h. Confocal images showed that BOD-DLX nanoparticles accumulated in the epidermis and hair follicles as compared to free BODIPY solution which permeated into the dermis. Significantly higher and uncontrolled IST penetration into all layers of pig ear skin with IST-DLX polymer solution was observed as compared to lower, controlled but optimum IST accumulation into the pig ear skin when IST-DLX nanoparticles were used. IST-DLX nanoparticles targeted the hair follicle (26 %) as compared to IST solution (6.5 %) which permeated through all skin layers. IST-DLX polymeric nanoparticles significantly reduced IL-6 production in LPS stimulated macrophage cells at 48 h as compared to free IST solution which significantly reduced IL-6 production only at 24 h. Both IST-DLX nanoparticles and free IST solution did not inhibit P. acnes growth. No sign of inflammatory erythema was observed in IST-DLX nanoparticles treated Wistar rats with or without UVA irradiation as compared to free IST treated ones. Epidermal thickness of rats treated with IST-DLX nanoparticles was significantly smaller than those treated with free IST with or without UVA irradiation. It can be concluded that IST-DLX nanoparticles can target, deliver and sustain IST release to the skin at optimum concentrations, modulate IL-6 inflammatory responses and may prevent IST related inflammatory erythema in vivo. DLX polymer could be promising polymer for drug delivery.