Orientador: Liana Maria Cardoso Verinaud / Texto em português e inglês / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-25T08:26:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thome_Rodolfo_D.pdf: 18503134 bytes, checksum: f4906f6cd7d52ca62d211efbbca1732a (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A malária permanece como a maior doença infecciosa do mundo, sendo que metade da população mundial se encontra em risco de ser infectada. A destruição do agente causador, protozoários do gênero Plasmodium, é essencial para a resolução da moléstia e é mediada pela atuação coordenada entre linfócitos T e B. Foi noticiado a presença de auto-anticorpos em pacientes portadores de malária, e em alguns casos o agravamento de doenças autoimunes como o lúpus e, possivelmente, a esclerose múltipla. Estudos conduzidos em nosso laboratório demonstraram que a infecção por P. berghei NK65 em camundongos promoveu atrofia do timo e subsequente migração de células T CD4+CD8+ (DP) para órgãos linfoides secundários. Tendo em vista que o timo é o órgão linfoide primário responsável pela maturação e desenvolvimento de linfócitos T, desempenhando um papel primordial em gerar a tolerância central, o presente estudo teve por objetivo investigar o efeito da infecção por P. berghei sobre a evolução clínica da Encefalomielite Autoimune Experimental (EAE) e também sobre o perfil de ativação de células dendríticas. Os resultados obtidos mostraram que camundongos curados da malária apresentaram quadro clínico exacerbado de EAE quando comparados com animais que não entraram em contato com o plasmódio. A piora no quadro clínico de EAE se associou com a migração precoce de células T-DP para o Sistema Nervoso Central (SNC) e pela produção de citocinas inflamatórias por tais células. Camundongos resistentes a EAE desenvolveram a doença após a infecção por plasmódio, indicando que a atrofia tímica induzida pela infecção é capaz de alterar a susceptibilidade ao desenvolvimento de doenças autoimunes. Por outro lado, o tratamento de células dendríticas (DCs) com extratos derivados do plasmódio modificou seu estado de maturação/ativação para um perfil tolerogênico. A transferência adotiva de células dendríticas moduladas com extratos de plasmódio foi capaz de reduzir a EAE, bem como a neuro-inflamação do SNC pela supressão da resposta imune celular a neuro-antígenos. Tomados em conjunto, os resultados obtidos neste estudo mostram que a infecção por Plasmodium berghei NK65 promove alterações significativas no sistema imune que auxiliam na exacerbação da neuro-inflamação autoimune. Por outro lado, a utilização de extratos do plasmódio pode se tornar uma alternativa inovadora na modulação da inflamação por meio da transferência adotiva de células dendríticas tornadas tolerogênicas com tais extratos / Abstract: Malaria remains as the most frequent infectious disease in the world, where half of the world population is at risk. Destruction of the causative agent, protozoan of the Plasmodium gender, is essential for the resolution of the disease and this is mediated by the coordinated action of both T and B lymphocytes. It has been demonstrated that malaria-bearing patients possess auto-antibodies, e in some cases, the worsening of autoimmune diseases such as lupus and multiple sclerosis. Studies, conducted by our group, have shown that P. berghei NK65 infection promoted thymic atrophy and the subsequent migration of CD4+CD8+ (DP) T cells towards the peripheral immune system. Since the thymus is the primary lymphoid organ responsible for the generation and maturation of T cells, playing a major role in the shaping of T cells repertoire, the present study aimed to investigate the influence of P. berghei infection in the clinical course of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE), the mouse model for multiple sclerosis, and also over the maturation/activation status of dendritic cells. Results showed that malaria-cured mice developed a more severe EAE clinical course compared with control mice. The worsening in EAE score was related to the migration of DP-T cells towards the Central Nervous System (CNS), where these cells produced high amounts of inflammatory cytokines. Interestingly, EAE-resistant BALB/c mice developed the disease after plasmodia infection, indicating that the thymic atrophy induced by the infection is able to alter the susceptibility to autoimmune diseases. On the other hand, treatment of dendritic cells (DCs) with P.berghei extracts (PbX) modified their activation/maturation status towards a tolerogenic profile. The adoptive transfer of DC-PbX was able to suppress the development of EAE, as well as neuro-inflammation, through the reduction in cellular immune responses towards neuro-antigens. Taken together, the results collected in this study show that Plasmodium berghei NK65 infection promotes significant alterations in the immune system that aid the development of autoimmune neuro-inflammation. On the other hand, the use of plasmodia extracts may become an interesting approach to modulate inflammation through the adoptive transfer of tolerogenic dendritic cells / Doutorado / Imunologia / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

A tolerância imunológica é a propriedade essencial do sistema imune que controla as reações patológicas contra antígenos do próprio. O timo é visto como o principal órgão envolvido com a indução de tolerância aos antígenos próprios que são expressos pelas células tímicas (tolerância central), enquanto que a indução de tolerância aos antígenos relacionados a outros tecidos (TRAs) tem sido atribuída aos mecanismos de tolerância extratímica (tolerância periférica). Entretanto, a evidência da expressão de TRAs de órgãos e tecidos parenquimais no timo pelas células medulares epiteliais (mTECs) de camundongos e de humanos a qual foi referida como expressão gênica promíscua (PGE) reforçou a concepção de tolerância central de TRAs. O controle molecular dessa expressão tem sido atribuído ao gene Aire (Auto immune regulator) que é um regulador de transcrição. No presente estudo, procurou-se retratar a expressão gênica promíscua no timo de camundongos NOD (Non Obese Diabetic) por meio da análise da expressão gênica em grande escala, ou seja, descrevendo seu transcriptoma usando a tecnologia de cDNA microarrays. Para a análise dos dados utilizamos programas de bioinformática dedicados a microarrays bem como dados de bancos para a caracterização da PGE e susceptibilidade genética ao diabetes melitus do tipo 1 (DM-1). Três conjuntos de resultados puderam ser evidenciados. No primeiro conjunto observou-se a ocorrência da PGE de antígenos tecidos/órgãos parenquimatosos (TRAs) em timos recém removidos e em in vitro em cultura ATOC de camundogos NOD pré-autoimunes e autoimunes (diabéticos). O segundo conjunto de resultados consistiu na análise do efeito da inativação do transcrito de gene Aire na expressão gênica do timo de camundongos NOD in vitro em cultura ATOC. Finalmente, no último conjunto de dados, demonstrou-se que certos genes de TRAs com expressão promíscua, se encontram em regiões cromossômicas de susceptibilidade ao DM - 1 (idds). Como três deles (Il-4, Cd4 e Cdk4) são diretamente relacionados com a patogenia do DM-1 em camundongos foi possível estabelecer um paralelo entre PGE e susceptibilidade genética. / Immunologic tolerance is an essential property of the immune system, which controls immune reactions directed against the body self components. The thymus is seen as the main organ involved with the tolerance induction to self antigens, which are expressed by the thymic cells (central tolerance), while the tolerance induction to the diverse other peripheral tissues and organs is attributed to extra thymic mechanisms (peripheral tolerance). Nevertheless, the evidence for the expression of peripheral tissue related antigens (TRAs) in the thymus by the medullary thymic epithelial cells (mTECs) of mice and humans, which have been termed to as promiscuous gene expression (PGE), has contributed to the concept of central tolerance to TRAs. The molecular control of such gene expression has been attributed to the Aire (autoimmune regulator) gene, which plays a role as a transcriptional regulator. In the present study, we searched to picture PGE in the thymus of NOD (non obese diabetic) mice by means of high throughput gene expression, analyzing the transcriptome by the cDNA microarray method. To analyzing data we used bioinformatics programs dedicated to microarrays and specialized data banks to characterize PGE and genetic susceptibility to type 1 diabetes mellitus (DM-1). Studying pre and autoimmune NOD mice, we evidentiate three sets of results. In the first set, it was observed the occurrence of PGE of parenchymal tissue/organs antigens (TRAs) in fresh thymuses and in thymuses cultured in vitro in adult thymus organ cultures (ATOC). The second set of results consisted in the analysis of the effect of in vitro (ATOC) Aire gene silencing on PGE. Finally, in the third data set, we demonstrated that certain promiscuously expressed genes are positioned in DM-1 genetic susceptibility chromosomal regions (idds). As three of such genes (IL4, Cd4 and Cdk4) are directly associated to the DM-1 pathogenesis in mice, it was possible to establishing a parallel between PGE in the thymus and genetic susceptibility to this autoimmune disease.

A tolerância imunológica é a propriedade essencial do sistema imune que controla as reações patológicas contra antígenos do próprio. O timo é visto como o principal órgão envolvido com a indução de tolerância aos antígenos próprios que são expressos pelas células tímicas (tolerância central), enquanto que a indução de tolerância aos antígenos relacionados a outros tecidos (TRAs) tem sido atribuída aos mecanismos de tolerância extratímica (tolerância periférica). Entretanto, a evidência da expressão de TRAs de órgãos e tecidos parenquimais no timo pelas células medulares epiteliais (mTECs) de camundongos e de humanos a qual foi referida como expressão gênica promíscua (PGE) reforçou a concepção de tolerância central de TRAs. O controle molecular dessa expressão tem sido atribuído ao gene Aire (Auto immune regulator) que é um regulador de transcrição. No presente estudo, procurou-se retratar a expressão gênica promíscua no timo de camundongos NOD (Non Obese Diabetic) por meio da análise da expressão gênica em grande escala, ou seja, descrevendo seu transcriptoma usando a tecnologia de cDNA microarrays. Para a análise dos dados utilizamos programas de bioinformática dedicados a microarrays bem como dados de bancos para a caracterização da PGE e susceptibilidade genética ao diabetes melitus do tipo 1 (DM-1). Três conjuntos de resultados puderam ser evidenciados. No primeiro conjunto observou-se a ocorrência da PGE de antígenos tecidos/órgãos parenquimatosos (TRAs) em timos recém removidos e em in vitro em cultura ATOC de camundogos NOD pré-autoimunes e autoimunes (diabéticos). O segundo conjunto de resultados consistiu na análise do efeito da inativação do transcrito de gene Aire na expressão gênica do timo de camundongos NOD in vitro em cultura ATOC. Finalmente, no último conjunto de dados, demonstrou-se que certos genes de TRAs com expressão promíscua, se encontram em regiões cromossômicas de susceptibilidade ao DM - 1 (idds). Como três deles (Il-4, Cd4 e Cdk4) são diretamente relacionados com a patogenia do DM-1 em camundongos foi possível estabelecer um paralelo entre PGE e susceptibilidade genética. / Immunologic tolerance is an essential property of the immune system, which controls immune reactions directed against the body self components. The thymus is seen as the main organ involved with the tolerance induction to self antigens, which are expressed by the thymic cells (central tolerance), while the tolerance induction to the diverse other peripheral tissues and organs is attributed to extra thymic mechanisms (peripheral tolerance). Nevertheless, the evidence for the expression of peripheral tissue related antigens (TRAs) in the thymus by the medullary thymic epithelial cells (mTECs) of mice and humans, which have been termed to as promiscuous gene expression (PGE), has contributed to the concept of central tolerance to TRAs. The molecular control of such gene expression has been attributed to the Aire (autoimmune regulator) gene, which plays a role as a transcriptional regulator. In the present study, we searched to picture PGE in the thymus of NOD (non obese diabetic) mice by means of high throughput gene expression, analyzing the transcriptome by the cDNA microarray method. To analyzing data we used bioinformatics programs dedicated to microarrays and specialized data banks to characterize PGE and genetic susceptibility to type 1 diabetes mellitus (DM-1). Studying pre and autoimmune NOD mice, we evidentiate three sets of results. In the first set, it was observed the occurrence of PGE of parenchymal tissue/organs antigens (TRAs) in fresh thymuses and in thymuses cultured in vitro in adult thymus organ cultures (ATOC). The second set of results consisted in the analysis of the effect of in vitro (ATOC) Aire gene silencing on PGE. Finally, in the third data set, we demonstrated that certain promiscuously expressed genes are positioned in DM-1 genetic susceptibility chromosomal regions (idds). As three of such genes (IL4, Cd4 and Cdk4) are directly associated to the DM-1 pathogenesis in mice, it was possible to establishing a parallel between PGE in the thymus and genetic susceptibility to this autoimmune disease.

Forest plantations provide essential services for human beings. More recently, population and economic growth has increasingly intensified the demand for forest products. Forest activities are expanding to new areas due to low land prices and governmental incentives in Brazil. Among others; Timberland Investment Management Organizations (TIMOs) are the type of invertors that have significantly increased their participation in the timberland market. The purpose of this thesis is to investigate investor\'s strategies and the mains aspects related to forest investments in Brazil. The thesis is divided into two chapters. The first chapter investigates the strategies used by TIMOs in Brazil and their declared expectations on returns. The second chapter offers a comprehensive analysis of the level and variability of the return rate for three different regions in Brazil. / As plantações florestais fornecem serviços vitais para os seres humanos. Devido ao crescimento populacional e econômico, a demanda por produtos oriundos de florestas plantadas cresceu rapidamente nos últimos anos.Entre os países que possuem uma forte base florestal, Brasil ocupa um papel essencial como produtor de florestas plantadas. A disponibilidade de terra e a alta produtividade atraíram diversos tipos de investidores para o país. As Timberland Investment Management Organization (TIMOs) estão entre os tipos de investidores ampliou seus investmentos no mercado florestal brasileiro. Em paralelo, o setor florestal brasileiro tem expandido para novas áreas devido ao menor custo da terra e incentivos governamentais. Essa dissertação tem como principal objetivo investigar as estratégias e espectativas dos investidores estrangeiros e os principais aspectos relacionados a projetos florestais no Brasil. A dissertação está dividida em dois capítulo. O primeiro capítulo investiga as principais estratégias e os retornos esperados das TIMOs em investimentos florestais no país. O segundo capítulo analiza os níveis de atratividade e seus retornos em três diferentes regiões do país.

Forest plantations provide essential services for human beings. More recently, population and economic growth has increasingly intensified the demand for forest products. Forest activities are expanding to new areas due to low land prices and governmental incentives in Brazil. Among others; Timberland Investment Management Organizations (TIMOs) are the type of invertors that have significantly increased their participation in the timberland market. The purpose of this thesis is to investigate investor\'s strategies and the mains aspects related to forest investments in Brazil. The thesis is divided into two chapters. The first chapter investigates the strategies used by TIMOs in Brazil and their declared expectations on returns. The second chapter offers a comprehensive analysis of the level and variability of the return rate for three different regions in Brazil. / As plantações florestais fornecem serviços vitais para os seres humanos. Devido ao crescimento populacional e econômico, a demanda por produtos oriundos de florestas plantadas cresceu rapidamente nos últimos anos.Entre os países que possuem uma forte base florestal, Brasil ocupa um papel essencial como produtor de florestas plantadas. A disponibilidade de terra e a alta produtividade atraíram diversos tipos de investidores para o país. As Timberland Investment Management Organization (TIMOs) estão entre os tipos de investidores ampliou seus investmentos no mercado florestal brasileiro. Em paralelo, o setor florestal brasileiro tem expandido para novas áreas devido ao menor custo da terra e incentivos governamentais. Essa dissertação tem como principal objetivo investigar as estratégias e espectativas dos investidores estrangeiros e os principais aspectos relacionados a projetos florestais no Brasil. A dissertação está dividida em dois capítulo. O primeiro capítulo investiga as principais estratégias e os retornos esperados das TIMOs em investimentos florestais no país. O segundo capítulo analiza os níveis de atratividade e seus retornos em três diferentes regiões do país.

O tubarão-azul, Prionace glauca (Linnaeus, 1758) é uma espécie cosmopolita, de alto valor comercial, principalmente capturado por embarcações que operam em alto mar e vendido em mercados e feiras-livres. Poucos dados biológicos estão disponíveis sobre esta espécie, principalmente quanto à sua sanidade e, o conhecimento do desenvolvimento de seus órgãos linfoides pode trazer importantes informações neste contexto. Desta forma, o objetivo do trabalho é descrever o desenvolvimento embrionário dos órgãos linfoides em embriões de tubarão-azul: timo, órgão epigonal, baço e órgão de Leydig, quanto à estrutura e arquitetura macroscópica, microscópica e ultraestrutural, pelas técnicas de microscopia de luz e eletrônica de transmissão. Foram coletados cinco espécimes de cada fase representativa do desenvolvimento embrionário: I, II, III e IV e do animal adulto. O timo foi visível macroscopicamente nas fases III e IV e microscopicamente da fase I a IV. O órgão de Leydig está presente nas fases II, III e IV. O baço e o órgão epigonal estão presentes em todas as fases embrionárias e no adulto. O timo apresentou principalmente populações de timócitos em diversos estágios de maturação e melanomacrófagos, o baço apresentou melanomacrófagos linfócitos em diversos estágios de maturação, neutrófilos, trombócitos e grande quantidade de eritrócitos. O órgão epigonal apresentou um grande número de células imaturas, principalemente de linfócitos e células polimorfonucleares. A função do órgão de Leydig é perdida quando adulta, sendo substituída pelo órgão epigonal. Os resultados desse trabalho permitem sugerir que esses órgãos apresentam uma função hematopoiética desde o inicio da embriogênese até a fase adulta. / The blue shark (Prionace glauca) is a cosmopolitan species of high commercial value, easily caught by vessels operating on the high seas and sold in markets and street fairs. Few biological data are available on this species, mainly from their sanity. Studies on development of these lymphoid organs can provide important information in this regard. Thus, the aim of this study is to describe the gross, microscopic and ultraestrutural morphology of the embryonic development of lymphoid organs: thymus, epigonal organ, spleen and the Leydig organ by light microscopy and transmission electron techniques. Five specimens were collected from each representative stage of embryonic development: II, III and IV besides adult specimens. Thymus was visible macroscopically at phases III and IV and microscopically from phase I to IV. Leydig organ is presente in phases II, III and IV. Spleen and epigonal organ are present in all embrionic phases and adult. Thymus presented mainly thymocytes populations in several maturation stages and melanomacrophages, spleen presentes melanomacrophages and lymphocytes, neutrophyls, trombocytes and huge amount of erytrocytes. Epigonal organ presented many immature cells, mainly lymphocytes and polimorphonuclear cells. Leidigs organ function is lost in adulthood being replaced by the epigonal organ. The results of this work allow to suggest that these organs present a hematopoietic function since the early development until the adult phase.

Cannabis sativa (maconha) é a droga ilícita mais conhecida e utilizada em todo o mundo. Recentemente, o uso recreativo da droga por jovens aumentou muito, especialmente entre as gestantes. Estudos indicam que seu uso na gestação causa efeitos fetotóxicos adversos, no entanto, poucos estudos avaliam esses efeitos durante este período crítico sobre o desenvolvimento do sistema imunológico. Neste estudo, avaliamos o impacto da exposição gestacional à fumaça de maconha resultante da queima de cigarros sobre o desenvolvimento do baço e do timo de proles de camundongos BalbC. Utilizamos um modelo que se aproxima das reais condições de uso humano (inalação) sob os aspectos de dose e média exposição. Camundongos fêmeas gestantes (n = 20) foram expostas ao fumo da maconha ou ao ar filtrado (grupo controle) do 5,5° ao 17,5° dia gestacional (DG) por 5 minutos diariamente. Para isso, foi utilizado um aparelho para inalação da fumaça desenvolvido em nosso laboratório, onde os cigarros de maconha (200mg de Cannabis sativa) foram queimados e a fumaça conduzida para a câmara de exposição dos animais (exposição somente inalatória). Os baços e timos das proles foram coletados no 18,5° dia gestacional (DG), 20° e 60° dias pós-natais (DPN) para a realização das análises histológica e histoquímica. Avaliações morfológicas e quantitativas dos órgãos foram realizadas utilizando-se métodos estereológicos e por meio da semi quantificação de fibras do sistema colágeno. Os resultados indicam um aumento no peso corporal dos animais com 60 DPN cujas mães foram expostas ao fumo de Cannabis sativa durante a gravidez. Os machos com 60 DPN expostos apresentaram redução no volume total do timo, assim como em seus principais compartimentos, medula e córtex, onde também foi observado um aumento de fibras do sistema colágeno, quando comparados aos animais controles. Além disso, o baço desses animais também apresentou redução significativa em seu volume, porém não houve redução significativa no volume total da polpa vermelha. Machos e fêmeas com 60 DPN do grupo exposto apresentaram redução no volume total da polpa branca e aumento de fibras do sistema colágeno na região das trabéculas do parênquima do baço. Em suma, a exposição gestacional à maconha causa efeitos fetotóxicos que podem ser observados por alteração no baço e no timo da prole (sendo os efeitos distintos para machos e fêmeas) e estas alterações se tornam mais marcantes com o avanço da idade do animal, com potencial comprometimento da resposta imune nesses indivíduos. / Cannabis sativa (marijuana) is one of the most well-known and used illicit drugs worldwide. Recently, recreational use of that drug among young people has increased greatly, especially among pregnant women. Studies indicate that its use in pregnancy causes adverse fetotoxic effects, however there are few studies evaluating the effects of marijuana use during this critical period on the developing immune system. In this study, we evaluated the impact of gestational exposure to smoke marijuana resulting from burning cigarettes on the spleen and thymus development of BalbC mice offspring. We have used a model that approximates the real conditions of human use (inhalation) under the dose and medium exposure aspects. Pregnant mice (n=20), were exposed to marijuana smoke or filtered air (control group) from 5.5° to 17.5° gestational day (GD) for 5 minutes daily. Thus, we used a smoke inhalation apparatus developed in our laboratory where the marijuana cigarettes (200mg of Cannabis sativa) were burned and conducted to exposure chamber reaching the animals (nose-only exposure). Spleen and thymus of the offspring were collected on the 18.5° gestational day (GD), 20° and 60° postnatal day (PND) for the histological and histochemical analysis. Morphological and quantitative evaluations of these organs were performed using stereological methods and semi quantification of collagen fibers. The results indicate an increase in the mice body weight at PND 60 whose mothers were exposed to Cannabis sativa smoke during pregnancy. The PND 60 males from exposed group showed lower thymus total volume, as well as its main compartments such as medulla and cortex, where collagen fibers was also observed, when compared with males from the control group. Also, the spleen of these animals also presented a significant reduction, however no significant reduction was showed in the total volume of the red pulp. In addition, males and females from the exposed group at PND 60 presented reduction in total volume in the white pulp and increased of collagen fibers in the trabeculae region of the spleen. In summary, gestational exposure to marijuana causes fetotoxic effects that can be observed due to alteration in the spleen and thymus of the offspring (the effects being different for males and females), and these changes being marked with the advancement of the age, with potential impairment of the immune response in these individuals.

O sistema linfoide é composto de órgãos linfoides primários e secundários. O timo é um órgão linfoide primário responsável pela maturação, diferenciação e seleção da linhagem linfocitária do tipo T que é responsavel pela imunidade celular do individuo. Para cumprir estas funções, o timo possui uma disposição peculiar das suas células epiteliais morfologicamente distintas e de suas estruturas vasculares. Seus vasos sanguíneos possuem um papel na oxigenação tecidual e no processo de migração das células precursoras de linfócitos T para o interior do parênquima tímico e por isso apresentam uma arquitetura típica caracterizada por vasos de grande calibre, localizados na junção cortico-medular e uma fina rede de ramos e anastomoses que se estendem para o córtex. Este processo de estruturação e arquitetura vascular ainda possui sua base molecular desconhecida, assim como os mecanismos que provocam a involução do órgão. O VEGF é um fator angiogênico que atua na formação vascular e na modulação de funções relacionadas à vascularização, sendo um importante marcador da angiogênese. A fim de se melhor compreender o comportamento vascular na formação e involução tímica, propôs-se avaliar a expressão gênica e proteica deste fator durante fases de desenvolvimento e involução do órgão, além da quantificação da vascularização do timo pela técnica estereológica, análise do parênquima tímico pela técnica de microscopia eletrônica de varredura e análise dos tipos celulares presentes em cada estágio etário. Para tal utilizou-se amostras de timo de gato em quatro estágios de desenvolvimento fetal (35, 45, 55, 65), e dois estágios pós-natal (6 meses e 1 ano) para a realização da imuno-histoquímica, PCR em tempo real e MEV,e para a técnica estereológica 2 estágios pós-natal (6 meses e 1 ano). Na microscopia eletrônica de varredura foram observados os timócitos de diferentes tamanhos, em estágios de maturação distintos. As proteinas do VEGF-A e dos receptores Fit-1 e KDR foram identificadas no timo de gatos em todas as fases do desenvolvimento foram localizadas no citoplasma de células epiteliais e no interior dos corpúsculos tímicos. A expressão do mRNA no período de 1 ano de idade a expressão do mRNA do VEGF e seus receptores tem um aumento significativo, coincidindo com a diminuição do Nvasc e do Nv(vasc) podendo causar um estado de hipóxia no órgão levando a um aumento compensatório de sistema VEGF. A curva de crescimento vascular obedece a um padrão de desenvolvimento e involuçãio do órgão. / The lymphoid system is composed by primary and secondary lymphoid organs. The thymus is a primary lymphoid organ responsible for maturation, differentiation and selection of the lymphoid T cell lineage that is responsible for cellular immunity. To accomplish these functions has a peculiar arrangement with morphologically distinct epithelial cells and vascular structures. The blood vessels have a role in tissue oxygentation and the migration of T cells into the thymic parenchyma, therefore they presents large vessels in cortico-medullary junction and a fine network branches to the cortex. This process has its molecular basis unknown as well as the involution process of the thymus. VEGF is an angiogenic factor that plays a role in the formation and modulation of vascular functions, being an important marker of angiogenesis. We proposed to evaluate the gene and protein of VEGF during the thymus development and involution, stereological quantification and scanning electronic microscopy. Samples of cat´s thymus from 35, 45, 55, 65 days of development and 6 months and 1 year of age. In scanning electronic microscopy different stages maturation thymocytes were observed. Protein expression of VEGF and its receptors were identified in all development stages in epithelial cells, endothelial cells and thymic corpuscles. The VEGF mRNA expression and its receptors in 1 year old animals was significantly increased, coinciding with the decreasing Nvasc and the Nv(vasc) causing a hypoxic condition in the thymus resulting in a compensatory increase of VEGF system. The vascular growth curve follows a pattern of development and involution of the organ.

Verificou-se o metabolismo e as repercussões morfológicas no timo de forma qualitativa e quantitativa através de morfometria e estereologia.Utilizaram-se 30 ratos wistar () nos grupos Nutrido (N=10), Desnutrido (D=10) e Renutrido (R=10). O peso corporal e a ingestão foi maior no N, menor no D, e os R apresentaram valores médios em relação a estes grupos. Todos os outros parâmetros (ingestão de água, excreção de fezes e urina, %ingestão/peso corporal, %fezes/ingestão, água/peso corporal, %urina/água consumida e peso tímico) não obtiveram diferença estatística entre o N e R. O grupo D mostrou exuberante alteração nos componentes elásticos e fibrosos, menor calibre dos seus vasos, atrofia dos lóbulos tímicos (com limite córtex-medular muitas vezes indefinido), e grande quantidade de timócitos em apoptose no córtex e na medula. Poucos corpúsculos tímicos foram verificados no grupo D, diferindo dos animais N e R. Deste modo, afirma-se que os animais R conseguiram restituir a morfologia da glândula após intervenção nutricional. / The Metabolism and morphologic repercussions on thymus were verified in a qualitative and quantitative way by morfometric and stereologycal assessment. 30 wistar rats were used () in the Nourishment (N=10), Undernourishment (UN=10) and Re-nourishment (RN=10) groups. The body weight and ingestion were higher in N, lower in UN, and RN presented medium values in relation to the others groups. All the addicional parameters as water ingestion, faeces and urine excrecion, %ingestion/corporal weigh, %faeces/ingestion, water/corporal weight, %urine/water consumed and thymic weight, had no statistics difference between N and RN. The UN group showed exuberant modification on elastic and fibrous components, smaller caliber of their vessels, thymic lobule atrophy (with many times indefinite cortex-medular limit), and apoptose of timocytes in the cortex and medulla. Few thymic corpuscles were verified in UN group differing of the N and RN. Therefore, after nutricional intervencional, the gland morphology was reestablished.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão de fatores de crescimento responsáveis pelo processo vasculogênico durante o desenvolvimento e involução do timo em cães. Para este propósito, timos de fetos de cães (30, 40 50 e 60 dias de desenvolvimento), cães jovens (6 meses de idade) e cães adultos (1 ano de idade) foram coletados. Os tecidos foram analisados estereológicamente e submetidos à imunohistoquímica, PCR tempo real e western blot para os componentes do sistema VEGF (VEGF-A, VEGF-C, Flt-1, KDR e Flt-4) e endocrine gland-derived (EG)-VEGF. Pela estereologia, observamos um aumento no número dos vasos durante o desenvolvimento do órgão e uma diminuição durante a involução (p<0.05). Todos os componentes do sistema VEGF e do EG-VEGF foram detectados em todos os estágios durante o desenvolvimento e involução. As proteínas correspondentes foram localizadas nas células endoteliais e células epiteliais da região cortical e medular, sendo que o EG-VEGF foi observado apenas nas células epiteliais da região medular. A expressão do RNAm do sistema VEGF e do EG-VEGF apresentou um perfil tempo-dependente durante o desenvolvimento e involução. O sistema VEGF apresentou uma expressão constante durante o desenvolvimento e um aumento progressivo durante a involução, com exceção do KDR que se mostrou crescente durante todo o período de desenvolvimento e involução e do VEGF-C que apresentou alta expressão durante a involução. A expressão do RNAm do EG-VEGF foi crescente durante as fases estudadas, já a expressão da sua proteína foi alta no início do desenvolvimento do timo e diminui na involução, onde permanece praticamente constante durante todo o período. Nossos resultados sugerem que o sistema VEGF e o EG-VEGF possuem atividades biológicas similares nas glândulas endócrinas e diferentes papéis durante o desenvolvimento e involução, o qual pode ser especificado em estudos futuros. Possíveis funções incluem um efeito modulatório na vasculogênese tímica e microambiente, influenciando na diferenciação e proliferação de timócitos, maturação de células T, interação célula-célula e secreção de hormônios tímicos. / The aim this study was therefore to evaluate the expression of growth factors responsible for the vasculogenic process throughout development and initial involution of the canine thymus. For that purpose, thymuses from fetuses (30, 40, 50 and 60 days), juvenile (6 months) and adult (1 year) dogs were collected. The tissues were examined stereologically and subjected to immunohistochemistry, Real Time PCR and western blot for components of the VEGF-system (VEGF-A, VEGF-C, Flt-1, KDR and Flt-4) and endocrine gland-derived (EG)-VEGF. By means of stereology, the total number of blood vessels increased during development and decreased during involution. These changes were statistically significant (p<0.05). All components of the VEGF-system and EG-VEGF were detected in all stages during development and involution. The corresponding proteins were localized in endothelial and epithelial cells of cortical and medullar regions, and EG-VEGF was detected only in epithelial cells of medular region. The VEGF-system and EG-VEGF protein and mRNA expression showed a specific time-dependent profile during development and involution. The VEGF system showed a constant expression during development and a progressive increase during involution, except KDR that showed increased during all development and involution and VEGF-C that showed high expression during involution. The EG-VEGF RNAm expression was increased during development and involution, but protein expression was high in early thymus development and decreased in involution, and remains constant during all period. Our results suggest that VEGF-system and EG-VEGF have similar biological activities in endocrine glands and different roles during thymus development and involution which have to be specified in further studies. Possible functions include a modulatory effect on thymic vasculogenesis and microenvironment, influencing thymocyte proliferation and differentiation, T-cell maturation, cell-cell interaction and thymic hormonal secretion.