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Células derivadas da medula óssea no reparo de lesões causadas por infecções parasitárias em camundongos quiméricos

Azevedo, Carine Machado January 2013 (has links)
Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2014-05-22T15:50:32Z No. of bitstreams: 1 Carine Machado Azevedo. Células derivadas...2013.pdf: 3773108 bytes, checksum: 06792c88bd29e905b54c5a3d77de8db6 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-22T15:50:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carine Machado Azevedo. Células derivadas...2013.pdf: 3773108 bytes, checksum: 06792c88bd29e905b54c5a3d77de8db6 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A contribuição das células de medula óssea na regeneração de tecidos não hematopoiéticos tem sido intensamente investigada desde a descoberta de células-tronco multipotentes neste órgão. Estudos prévios tem demonstrado que células derivadas da medula óssea podem contribuir para a formação de novos hepatócitos e cardiomiócitos. No presente estudo avaliamos a participação endógena das células-tronco de medula óssea no processo de reparo de lesões teciduais na fase crônica da doença de Chagas e esquistossomose experimentalmente induzidas. Para isso, camundongos quiméricos de medula óssea foram gerados após irradiação com dose letal e posterior reconstituição com células de medula óssea provenientes de camundongos transgênicos para a proteína fluorescente verde (GFP). Um mês após a reconstituição, as quimeras foram infectadas pelo T. cruzi ou S. mansoni. Animais quiméricos saudáveis foram mantidos como controles. Camundongos foram eutanasiados em diferentes períodos para análise morfológica, morfométrica e de marcadores específicos através de imunofluorescência do coração e músculo esquelético ou fígado de acordo com o grupo. As infecções por S. mansoni e T. cruzi causaram a mobilização de diferentes populações celulares para o sangue periférico, tais como monócitos, células-tronco hematopoiéticas e mesenquimais e progenitores endoteliais. Nos dois modelos estudados, observamos um aumento no número de células GFP+ após estímulo lesivo nos tecidos analisados. No modelo de doença de Chagas, há um aumento da expressão de MCP-1, 2 e 3 e SDF-1 no coração e músculo esquelético em comparação com animais não infectados, o que pode contribuir para o recrutamento destas células. As células GFP+ contribuem tanto para a formação da lesão, compondo o infiltrado inflamatório, como para a regeneração tecidual através da formação de miofibras, cardiomiócitos, hepatócitos e vasos sanguíneos. As poucas células GFP+ encontradas nos tecidos de camundongos quimeras normais não possuíam morfologia de células parenquimatosas. Concluímos que a medula óssea pode contribuir para a regeneração dos tecidos lesados através de células-tronco ou progenitores que originam células dos músculos cardíaco e esquelético, hepatócitos e vasos sangüíneos. / The contribution of bone marrow cells in non-hematopoietic tissue regeneration has been intensely investigated since the discovery of multipotent stem cells in this organ. Previous studies have shown that bone marrow derived cells may contribute to the formation of new hepatocytes and cardiomyocytes. In the present study, we evaluated the participation of endogenous bone marrow stem cells in the repair of tissue injury in experimentally induced chronic phases of Chagas disease and schistosomiasis. For this purpose, chimeric mice were generated from bone marrow after a lethal irradiation dose and subsequent reconstitution with bone marrow cells from green fluorescent protein (GFP) transgenic mice. A month after reconstitution, chimeras were either infected with Trypanosoma cruzi or Schistosoma mansoni, or kept healthy as controls. Mice were euthanized at different time points for histological, morphometric and specific markers by immunofluorescence analysis in heart and skeletal muscle or in the liver, according to the group. Infections caused by S. mansoni and T. cruzi resulted in the mobilization of different cell populations to the peripheral blood, including monocytes, hematopoietic and mesenchymal stem cells, and endothelial progenitors. In the two models studied, we observed an increase in the number of GFP+ cells after injury stimulus in the tissues analyzed. In the model of Chagas disease, there is an increased expression of MCP-1, 2, 3 and SDF-1 in heart and skeletal muscle compared to uninfected animals, which can contribute to the recruitment of these cells. The GFP+ cells both contribute to lesion formation, comprised of inflammatory infiltrate, as well as tissue regeneration by forming myofibers, cardiomyocytes, hepatocytes and blood vessels. The few GFP+ cells found in control chimera mice tissue lacked parenchymal cell morphology. We concluded that bone marrow may contribute to the regeneration of injured tissues through stem or progenitor cells, which gives rise cardiac and skeletal muscle cells, hepatocytes and blood vessels.
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Efeitos da associação de biomateriais com doadores de óxido nítrico no reparo tecidual cutâneo de camundongos / Effects of biomaterials association with nitric oxide donors in skin tissue repair in mice

Fernanda Seabra Schanuel 24 February 2015 (has links)
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A aplicação tópica de doadores de óxido nítrico é conhecida pelos seus efeitos benéficos no reparo tecidual cutâneo. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da associação de biomateriais com doadores de óxido nítrico no reparo tecidual cutâneo de camundongos. Camundongos swiss machos foram submetidos a lesões excisionais por punch de biópsia de 8 mm no dorso. Os animais foram separados em 4 grupos (n=6 em cada grupo) de acordo com a aplicação do curativo de polivinil álcool e hidrogel sobre a lesão de punch: a) grupo polivinil álcool com grupos tiol e Pluronic F-127 (PVA-SH/F127) - tratado com hidrogel sem S- nitrosoglutationa (GSNO) e filme sem óxido nítrico; b) grupo polivinil álcool S-nitrosado (PVA-SNO/F127-GSNO) - tratado com hidrogel contendo GSNO e filme com óxido nítrico; c) grupo PVA-SNO - tratado apenas com filme óxido nítrico e d) grupo PVA-SNO/ F127 - tratado com hidrogel sem GSNO e filme com óxido nítrico. Os animais foram tratados por 7 dias consecutivos com aplicação diária de curativos com seus respectivos biomateriais. Após 7 dias de tratamento, foram retirados os curativos e as lesões foram deixadas cicatrizar por segunda intenção. O grupo tratado com filme de PVA-SNO (d) associado ao hidrogel F127, comparado com os demais grupos descritos acima, apresentou melhora no reparo tecidual, melhora da contração da lesão, diminuição do gap epitelial e densidade celular, aceleração da fase inflamatória, aumento da diferenciação miofibroblástica e aumento da expressão de colágeno do tipo III (p<0,05, ao menos). Com base nesses dados, a combinação de filmes PVA liberadores de óxido nítrico com F-127 pode representar uma nova abordagem para o tratamento de lesões cutâneas. / Topical application of nitric oxide donors is known for its beneficial effects on skin tissue repair. The objective of this study was to evaluate the effects of biomaterials association with nitric oxide donors in skin tissue repair in mice. Males swiss mice underwent excisional lesion 8 mm biopsy punch on the back. The animals were separated in 4 groups (n=6 in each group) in according with dressing application of polyvinyl alcohol and hydrogel on punch lesion: a) poly (vynil alcohol) with thiol groups and Pluronic F-127 hydrogels (PVA-SH/F127) group - treated with hydrogel without S- nitrosoglutathione (GSNO) and film without nitric oxide; b) poly(vinyl alcohol) S-nitrosated (PVA-SNO/F127-GSNO) group - treated with hydrogel with GSNO and film with nitric oxide; c) PVA-SNO group - treated only with film containing nitric oxide and d) PVA-SNO/ F127 group - treated with hydrogel without GSNO and film with nitric oxide. The animals were treated for 7 consecutive days with daily application of dressings to the respective biomaterial. After 7 days of treatment, the dressings were removed and the lesions were allowed to heal by second intention. The group treated with PVA-SNO film associated with the hydrogel F127 (d), compared with the other groups described above, showed improvement in tissue repair, enhancing wound contraction, decreased wound gap and cellular density, acceleration of the inflammatory phase, increased myofibroblast differentiation and increased expression of collagen type III (p<0,05, at least). Based on these data, the combination of PVA films releasing nitric oxide with F-127 may represent a new approach treatment of cutaneous lesions.
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Desenvolvimento de arcabouços a base de polímeros biocompatíveis PLA e PCL com agentes antibacterianos

Silva, Fernanda Waitman de Oliveira January 2015 (has links)
Orientador: Prof. Dr. Jean Jacques Bonvent / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biotecnociência, 2015. / Arcaboucos polimericos sao de interesse crescente no campo da engenharia de tecidos. Alguns biopolimeros tais como PLLA -poli (acido latico) e PCL . poli(¿Ã- caprolactona) tem sido amplamente utilizados na composicao destes arcaboucos devido a sua biocompatibilidade, biodegradabilidade e baixa toxicidade. Alem disso, estes biomateriais precisam ter uma boa adesao celular e proliferacao para serem eficazes na reparacao de tecidos. A fim de evitar a invasao de microorganismos, durante o processo de cicatrizacao, e importante a incorporacao de um agente antimicrobiano, para servir como uma barreira protetora e prevenir a infeccao no local da lesao. Tres tipos de arcaboucos foram desenvolvidos a base de PLLA e PCL, e da blenda PCL/PLA - 50/50. A porosidade das membranas de biopolimero foi controlada pela incorporacao de particulas de cloreto de sodio com determinada faixa de tamanho, como agente porogenico, na solucao polimerica, a qual foi, em seguida, removido apos a evaporacao do solvente, por imersao da membrana para a agua para dissolver o sal. A tetraciclina tem sido incorporados a membrana como um agente antibiotico. A morfologia da membrana, estrutura molecular e incorporacao da tetraciclina foram analisados por microscopia eletronica de varredura (MEV), FTIR e microscopia de fluorescencia. A cinetica de libertacao do farmaco foi investigadam atraves da monitorizacao da concentracao de tetraciclina difundida em solucao de PBS (pH 7,4), por meio de espectroscopia de UV-VIS. Os dados experimentais mostraram que a uma porosidade de cerca de 69% foi obtida. A incorporacao de tetraciclina mostrou ser bastante eficaz e uniforme nos arcaboucos, contudo observa-se melhores resultados no caso de PCL puro. A cinetica de libertacao do farmaco e de primeira ordem para arcaboucos com PLA e PCL, puros. No entanto, no caso da blenda, o processo de libertacao do farmaco nao segue nenhum modelo cinetico estabelecido. Tais resultados sugerem que estes suportes de biopolimero podem ser eficazmente produzida com caracteristicas porosas e com a incorporacao de antibioticos, a fim de promover uma libertacao controlada da droga para o processo de reparo tecidual. / Polymeric scaffolds are of growing interest in the field of tissue engineering . Some biopolymers such as PLA - poly lactic acid and PCL - polycaprolactone have been widely used in the composition of these scaffolds due to their biocompatibility, biodegradability and low toxicity. In addition, these biomaterials need to have a good cell adhesion and proliferation to be effective in tissue repair. Furthermore, the formation of pores in the scaffolds is directly related to a better adhesion of material to the cells. In order to avoid microorganism invasion that during the healing process it is important to incorporate an antimicrobial such as tetracycline, to serve as a protective barrier and prevents infection at the site of the injury. Three types of scaffolds were develop, based on PCL, and their blend 50/50, by means of casting process. The porosity of the biopolymer membranes was controlled achieved by the incorporation of sodium chloride particles of given size, as a porogene agent, into the polymer solution, which was then removed after the solvent evaporation by immersion of the membrane into water to dissolve the salt. Tetracycline has been incorporated into to the membrane as an antibiotic agent. The membrane morphology, molecular structure e incorporation of the tetracycline were analyzed by Scanning Electron Microscopy (SEM), FTIR and Fluorescence Microscopy. The drug release kinetic was investigated by monitoring the concentration of tetracycline that diffused to a PBS solution (pH 7.4), by means of uv-vis spectroscopy. The experimental data showed that a medium porosity, of about 69%, could be reached. The incorporation of tetracycline was found to be quite effective and uniform into the scaffolds, tending to lead to better results in the case of pure PCL. The drug release kinetic is of first order for the pure PLA and PCL scaffold. Nevertheless, in the case of the blend, any of the usual kinetic model could describe the drug release process.Such results suggested these biopolymer scaffolds could be effectively produced with porous characteristics and with incorporation of antibiotics in order to promote a controlled drug liberation for wound healing process.
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Efeitos da associação de biomateriais com doadores de óxido nítrico no reparo tecidual cutâneo de camundongos / Effects of biomaterials association with nitric oxide donors in skin tissue repair in mice

Fernanda Seabra Schanuel 24 February 2015 (has links)
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A aplicação tópica de doadores de óxido nítrico é conhecida pelos seus efeitos benéficos no reparo tecidual cutâneo. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da associação de biomateriais com doadores de óxido nítrico no reparo tecidual cutâneo de camundongos. Camundongos swiss machos foram submetidos a lesões excisionais por punch de biópsia de 8 mm no dorso. Os animais foram separados em 4 grupos (n=6 em cada grupo) de acordo com a aplicação do curativo de polivinil álcool e hidrogel sobre a lesão de punch: a) grupo polivinil álcool com grupos tiol e Pluronic F-127 (PVA-SH/F127) - tratado com hidrogel sem S- nitrosoglutationa (GSNO) e filme sem óxido nítrico; b) grupo polivinil álcool S-nitrosado (PVA-SNO/F127-GSNO) - tratado com hidrogel contendo GSNO e filme com óxido nítrico; c) grupo PVA-SNO - tratado apenas com filme óxido nítrico e d) grupo PVA-SNO/ F127 - tratado com hidrogel sem GSNO e filme com óxido nítrico. Os animais foram tratados por 7 dias consecutivos com aplicação diária de curativos com seus respectivos biomateriais. Após 7 dias de tratamento, foram retirados os curativos e as lesões foram deixadas cicatrizar por segunda intenção. O grupo tratado com filme de PVA-SNO (d) associado ao hidrogel F127, comparado com os demais grupos descritos acima, apresentou melhora no reparo tecidual, melhora da contração da lesão, diminuição do gap epitelial e densidade celular, aceleração da fase inflamatória, aumento da diferenciação miofibroblástica e aumento da expressão de colágeno do tipo III (p<0,05, ao menos). Com base nesses dados, a combinação de filmes PVA liberadores de óxido nítrico com F-127 pode representar uma nova abordagem para o tratamento de lesões cutâneas. / Topical application of nitric oxide donors is known for its beneficial effects on skin tissue repair. The objective of this study was to evaluate the effects of biomaterials association with nitric oxide donors in skin tissue repair in mice. Males swiss mice underwent excisional lesion 8 mm biopsy punch on the back. The animals were separated in 4 groups (n=6 in each group) in according with dressing application of polyvinyl alcohol and hydrogel on punch lesion: a) poly (vynil alcohol) with thiol groups and Pluronic F-127 hydrogels (PVA-SH/F127) group - treated with hydrogel without S- nitrosoglutathione (GSNO) and film without nitric oxide; b) poly(vinyl alcohol) S-nitrosated (PVA-SNO/F127-GSNO) group - treated with hydrogel with GSNO and film with nitric oxide; c) PVA-SNO group - treated only with film containing nitric oxide and d) PVA-SNO/ F127 group - treated with hydrogel without GSNO and film with nitric oxide. The animals were treated for 7 consecutive days with daily application of dressings to the respective biomaterial. After 7 days of treatment, the dressings were removed and the lesions were allowed to heal by second intention. The group treated with PVA-SNO film associated with the hydrogel F127 (d), compared with the other groups described above, showed improvement in tissue repair, enhancing wound contraction, decreased wound gap and cellular density, acceleration of the inflammatory phase, increased myofibroblast differentiation and increased expression of collagen type III (p<0,05, at least). Based on these data, the combination of PVA films releasing nitric oxide with F-127 may represent a new approach treatment of cutaneous lesions.
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Lectinas de Cratylia mollis (Cramoll-1,4) : estudo de uma formulação em gel irradiado e seu efeito no processo de reparação tecidual in vivo

RIBEIRO, Maria Helena Madruga Lima 12 December 2011 (has links)
Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-06-02T15:12:58Z No. of bitstreams: 1 Maria Helena Madruga Lima Ribeiro.pdf: 3817531 bytes, checksum: 93081e285e6770d3e380d0a2eea00ee0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-02T15:12:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria Helena Madruga Lima Ribeiro.pdf: 3817531 bytes, checksum: 93081e285e6770d3e380d0a2eea00ee0 (MD5) Previous issue date: 2011-12-12 / Lectins Cratylia mollis (Cramoll-1,4) have been structurally characterized and their biological and pharmacological effects remain under investigation, since its use as a biopharmaceutical requires further elaboration. The objective of this study was to propose and characterize a gel formulation radiated Cramoll-1,4, and the preservation of properties of lectins in vitro, under the influence of gamma radiation and its activity in tissue repair processes in vivo (skin and bone). Initially, we made the extraction and purification of Cramoll-1,4, was developed a gel formulation using Carbopol as a vehicle, which was irradiated with 60Co gamma rays at a dose of 7,549 kGy h-1. To evaluate the biodistribution, Cramoll-1,4 was incubated with Tc-99 and to characterize the marking was made thin-layer chromatography. Then the gel was used in protocols for tissue repair in vivo, specifically bone tissue and epithelial. The proposed formulation at a concentration of 300 μg retained the hemagglutinating activity in vitro, suggesting a role of "protection", making the inactivation of Cramoll-1,4 radiation. The biodistribution of this gel was evaluated from the labeling with technetium showed that this lectin was captured by the intestine, metabolized by the liver and excreted by the kidneys and does not cross the blood brain barrier. The application of the topical gel irradiated Cramoll-1,4 at a concentration of 300 μg in bone defects was observed that the formulation, promoted an immediate boost in soft tissue, making it difficult, however, direct contact between the formulation and bone tissue. Thus, we observed the formation of fibrous tissue and not the expected new bone formation. In parallel, regular topical application of gel irradiated Cramoll-1,4 at a concentration of 100 μg for the treatment of second-degree skin burns, experimentally induced, sped up the process of granulation, reepithelialization and wound contraction. / Camaratu ou feijão Camaratuba é uma leguminosa da região semi-árida do Nordeste do Brasil. Lectinas de Cratylia mollis (Cramoll-1,4), foram estruturalmente caracterizadas e seus efeitos biológicos e farmacológicos continuam sob investigação, pois seu uso como um produto biofarmacêutico requer maior aprofundamento. O objetivo deste estudo foi propor e caracterizar uma formulação em gel irradiada de Cramoll-1,4, quanto à preservação das propriedades in vitro das lectinas, sob o efeito de radiação gama e sua atividade em processos de reparo tecidual in vivo. Inicialmente foi feita a extração e purificação da Cramoll-1,4, foi desenvolvida uma formulação em gel utilizando-se Carbopol como veículo, que foi irradiada com raios gama de Co60 em uma dose de 7,549 kGy h-1. Para avaliação da biodistribuição, a Cramoll-1,4 foi incubada com Tc-99 e para caracterizar a marcação foi feita cromatografia em camada fina. Em seguida o gel foi empregado em protocolos de reparação tecidual in vivo, mais especificamente tecido ósseo e epitelial. A formulação proposta na concentração de 300 μg manteve a atividade hemaglutinante in vitro, sugerindo um papel de ―proteção‖, dificultando a inativação da Cramoll-1,4 pela radiação. A biodistribuição do referido gel foi avaliada a partir da marcação com tecnécio, mostrou que esta lectina foi captada pelo intestino, metabolizada pelo fígado e excretada pelos rins e não ultrapassa a barreira hematoencefálica. Quanto à aplicação tópica do gel irradiado da Cramoll-1,4 na concentração de 300 μg em defeitos ósseos foi observado que a formulação, promoveu um estímulo imediato no tecido conjuntivo mole, dificultando, entretanto, o contato direto entre a formulação e o tecido ósseo. Assim, observou-se a formação de tecido fibroso e não a esperada neoformação óssea. Em paralelo, a aplicação tópica regular do gel irradiado da Cramoll-1,4 na concentração de 100 μg para o tratamento de queimaduras cutâneas de segundo grau experimentalmente induzidas, acelerou os processos de granulação, reepitelização e retração da ferida.
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Avaliação da influência da lipoxina A4 encapsulada em micropartículas de PLGA na cicatrização de úlceras cutâneas em ratos / Influence of Lipoxin A4 encapsulated in PLGA microparticles on wound healing in rats

Mouzarllem Barros dos Reis 27 June 2016 (has links)
Lipoxina A4 (LXA4) é um eicosanoide derivado do metabolismo do ácido araquidônico pelas lipoxigenases (5, 12 e 15-LO), tendo propriedades antiinflamatórias e pró-resolução. A estratégia de uso de LXA4 encapsulada em micropartículas de PLGA como fármaco tem fundamento nas propriedades que tais polímeros têm de preservar as atividades biológicas de moléculas diversas, como dos lipídeos, e promover liberação prolongada e sustentada das mesmas. No presente estudo, tivemos como hipótese de trabalho que a encapsulação de LXA4 em micropartículas de PLGA (LXA4-MS) preserva suas atividades biológicas, e mais eficientemente, acelera o fechamento de úlceras induzidas na pele de ratos. Para tanto, um modelo de úlceras cutâneas na região dorsal de ratos foi utilizado. As LXA4-MS foram fixadas em pele com adesivo biológico de fibrina, e seus efeitos comparados com aqueles induzidos por micropartículas vazias (Un-MS), LXA4 solúvel ou veículo (PBS). Nossos resultados mostraram que LXA4-MS aceleram a cicatrização da ferida, pois no 7º dia após a lesão, reduziu em 80% o diâmetro da úlcera inicial, enquanto no mesmo período, nas úlceras tratadas com LXA4 solúvel, Un-MS ou veículo ocorreu diminuição de somente 60%, 45% e 39%, respectivamente. O aumento do índice de cicatrização induzido pelo tratamento das úlceras com LXA4-MS foi acompanhado pela diminuição das citocinas pró-inflamatórias IL- 1?, TNF-?, e aumento de TGF- ?, uma citocina antiinflamatória indutora da deposição de colágeno. Além disso, nas úlceras tratadas com LXA4-MS o infiltrado inflamatório foi reduzido no tecido de cicatrização, como demonstrado pela diminuição de infiltrado celular, de MPO e de mRNA da metaloproteinase MMP8. Por outro lado, LXA4-MS induziu aumento da deposição de colágeno e do número de vasos sanguíneos, de NAG e de IL-4, quando comparado com os demais tratamentos. Quando as úlceras foram tratadas concomitantemente com LXA4-MS e o antagonista do receptor de LXA4 (ciclosporina H), observamos reversão de cerca de 50% no índice de cicatrização promovido pelo mediador encapsulado, sugerindo que os efeitos tópicos do tratamento com LXA4 são devidos à sua interação com seu receptor específico. Nossos resultados sugerem que novas formulações farmacêuticas para tratamento de úlceras cutâneas poderão ser obtidas com LXA4-MS. / Lipoxin A4 (LXA4) is an eicosanoid derived from the metabolism of arachidonic acid by lipoxygenases (5, 12, and 15-LO), having anti-inflammatory and pro-resolution properties. The strategy of using LXA4 encapsulated in PLGA microparticles as drug is due to some properties that such polymers have to preserve the biological activity of several molecules such as lipids, and promote a prolonged and sustained release of these molecules. In the present study, we hypothesized that the encapsulation of LXA4 in PLGA microparticles (LXA4-MS) preserves its biological activities, and more efficiently accelerates the closing of ulcers induced in the skin of rats. Thus, a model for cutaneous ulcers in the dorsal region of rats was used. The LXA4-MS were fixed in skin using biological adhesive of fibrin, and their effects compared to those induced by empty microparticles (Un-MS), soluble LXA4 or vehicleOur results showed that LXA4-MS accelerate wound healing, once on day 7 after injury, reduced by 80% the diameter of the initial ulcer, while at the same time, the ulcers treated with soluble LXA4, Un-MS or vehicle was decreased of only 60%, 45% and 39%, respectively. The increased healing rate of ulcers induced by treatment with LXA4-MS was accompanied by the decrease of pro-inflammatory cytokines IL-1?, TNF-?, and a TGF-? increasing, an anti-inflammatory cytokine-inducing collagen deposition. In addition, the inflammatory infiltrate was reduced in scar tissue as demonstrated by the decrease of neutrophils, MPO and MMP8 metalloproteinase mRNA. Moreover, LXA4-MS induced increase in collagen deposition and the number of blood vessels when compared with the other controls. When the ulcers were treated concomitantly with LXA4-MS and the antagonist LXA4 receptor (ALX), cyclosporine H, we observed the reversal of about 50% in healing rates promoted by the encapsulated agent, suggesting that topical treatment effects of LXA4 are due to interaction with its own receptor. Our results suggest that new pharmaceutical formulations for the treatment of skin ulcers can be obtained with LXA4-MS.
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Análise funcional e histológica da utilização da hialuronidase durante a anestesia local em nervo ciático de ratos / Functional and histological analysis of hyaluronidase use during local anesthesia of the rat sciatic nerve

Anna Carolina Ratto Tempestini Horliana 29 August 2008 (has links)
O uso concomitante da enzima hialuronidase (H) ao anestésico local (AL) é muito utilizado para melhorar a eficácia anestésica em oftalmologia; em odontologia, no entanto, não mostrou vantagens. Um novo protocolo foi testado com o objetivo de prolongar a anestesia local sem a realização de complementação anestésica. Esta possibilidade seria especialmente interessante para pacientes que apresentam restrição de dose máxima recomendada de AL ou vasoconstritor (ex. cardiopatas). Utilizou-se cloridrato de lidocaína 2% com epinefrina para bloqueio sensitivo, motor e proprioceptivo no nervo ciático em ratos (Truant,1958). Hialuronidase 75 UTR (unidade de turbidade reduzida) foi injetada no mesmo local 30 minutos após o início da analgesia (antes do término do efeito anestésico), utilizando-se a pata contralateral como controle (injeção de solução anestésica e veículo da hialuronidase solvente). A duração do bloqueio sensitivo foi avaliada através da ausência do reflexo de retirada da pata, utilizando-se um analgesímetro. O bloqueio motor foi avaliado pela duração da claudicação e da ausência do reflexo de estiramento da pata, enquanto o bloqueio proprioceptivo foi avaliado pela perda dos reflexos de salto e do reposicionamento da pata (Thalhammer et al., 1995). Foi também estudada a alteração tecidual induzida pela hialuronidase nos períodos de 1 h, 24 h, 48 h e 72 h pós-injeção. Foram avaliados os grupos: (1) falso operado (Sham); (2) AL +H; (3) AL+ solvente (Solv) e (4) Solv+Solv. Concluiu-se que a hialuronidase prolonga a duração de ação anestésica local quando injetada isoladamente antes da regressão do bloqueio de condução do nervo ciático de rato. Em todos os grupos analisados, exceto o grupo falso-operado, observou-se reação inflamatória após as injeções. Esta inflamação foi mais acentuada no grupo hialuronidase, que mostrava sinais de regressão após 72 horas. É possível que o mecanismo de ação da hialuronidase envolva a desorganização do tecido conjuntivo na região da injeção, facilitando a difusão da solução anestésica residual até o nervo. / The concomitant use of the enzyme hyaluronidase (H) and local anesthetics (LA) is widely employed in ophthalmology in order to improve the effectiveness of anesthesia; in dentistry, however, this association did not seem advantageous. A new protocol was tested with the aim of drawing out local anesthesia without supplementary anesthesia. This possibility is especially interesting for patients with restriction of maximum recommended dose of LA or vasoconstrictor due to pathological conditions (e.g. heart disease). We used 2% lidocaine hydrochloride with epinephrine for sensitive, motor and proprioceptive blockade of the sciatic nerve in rats (Truant, 1958). Hyaluronidase 75 UTR was injected 30 minutes after the beginning of the anesthesia (before the recovery of the sensory function), using the contralateral limb as control (injection of LA plus the H vehicle solvent). The duration of the sensitive blockade was evaluated through the absence of the paw withdrawal reflex, using an analgesymeter. The motor blockade was evaluated by the duration of claudication (complete absence of extensor postural thrust) and by the absence of the paw stretching reflex, while the proprioceptive blockade was evaluated by the absence of hopping and tactile placing response (Thalhammer et al., 1995). Histological changes induced by H were analyzed 1h, 24h, 48h, and 72 h after the injection in the following groups: (1) Sham; (2) LA + H; (3) LA + H solvent (solv) and (4) Solv + Solv. We concluded that H draws out local anesthesia when injected before the recovery of the sciatic nerve blockade in the rat. In all groups studied, with the exception of the Sham, there was an inflammatory reaction after the injections. Inflammation was more intense after H injection, showing signs of regression after 72 hours. It is possible that the mechanism of action of H involves disorganization of the connective tissue, thus facilitating the diffusion of the residual anesthetic solution to the nerve.
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Développement d'une thérapie matricielle associée ou non à une thérapie cellulaire pour le traitement des dommages cérébraux et les déficits fonctionnels après une ischémie cérébrale chez le rat / Development of a matrix-based therapy combined to a cellular therapy for the brain neuroprotection and regeneration following ischemic stroke

Khelif, Yacine 12 September 2018 (has links)
L’AVC représente la première cause d’handicap acquis chez l’adulte. L’AVC ischémique, représentant 87% des AVCs, est une pathologie complexe dont le premier facteur de risque aggravant est l’hypertension artérielle. À l’heure actuelle les seuls traitements disponibles sont la thrombolyse et la thrombectomie. Cependant, ces traitements présentent de nombreuses contre-indications et effets secondaires limitant leurs applications chez les patients. L’objectif des travaux menés dans cette thèse est l’évaluation d’un traitement pharmacologique, le RGTA (ReGeneraTing Agent), combiné ou non à un traitement cellulaire utilisant les cellules souches mésenchymateuses (CSMs), chez des rats normo- et hyper-tendus. Les résultats obtenus dans cette thèse montrent qu’à la suite d’une ischémie cérébrale, les traitements évalués offrent une neuroprotection et une récupération fonctionnelle persistantes, chez les animaux noromo- et hyper-tendus. Cette récupération est expliquée par la réduction du volume lésionnel, par une meilleure plasticité cérébrale (angiogenèse, neurogenèse), ainsi par la potentialisation de l’effet des CSMs par le RGTA. En conclusion, nos études démontrent l’efficacité d’une thérapie robuste de neurorprotection chez le rongeur à la suite d’une ischémie cérébrale. / Stroke is the leading cause worldwide of adult severe disability. The limited available treatments for ischemic stroke, which accounts for 87% of strokes, makes it necessary to develop new therapeutical approaches. Stroke is a complex pathology and chronic hypertension (CAH) represents the first aggravating risk factor for ischemic stroke. At the present time, the only two available treatments for ischemic stroke, thrombolysis and thrombectomy, present several side effects limiting their clinical use. Here we evaluate the effect of a molecular RGTA (ReGeneraTing Agent) based therapy combined or not to a cellular therapy based on the use of mesenchymal stem cells (MSCs) for the treatment of ischemic stroke in normo- and hyper-tensive rats. The results demonstrate that the evaluated therapies confer a long lasting neuroprotection accompanied by animals’ functional recovery. Further analysis suggest that RGTA enhances brain plasticity (angiogenesis, and neurogenesis), protects the extracellular matrix structure, and potentiates MSCs’ beneficial effects. In conclusion, our studies demonstrate the efficacy of a molecular and cellular combined therapy conferring a persistent neuroprotection and functional recovery for the treatment of ischemic stroke.
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HÉMO-IONIC®,un nouvel hémostatique actif sur la réparation tissulaire : de l'hémostase à la phase de maturation / HÉMO-IONIC®, a new hemostatic active in tissue repair : from hemostasis to maturation phase

Ponsen, Anne-Charlotte 11 January 2019 (has links)
Suite à une lésion, la réparation d’un tissu à l’identique est l’objectif clinique recherché. Ainsi un hémostatique, au-delà de sa capacité à arrêter un saignement, se doit au minimum de ne pas être délétère pour la réparation tissulaire. Or, malgré une efficacité hémostatique démontrée Tachosil® et Surgicel®, couramment utilisés en chirurgie, peuvent générer en raison de leur persistance in situ associée à une résorption incomplète, des évènements indésirables graves (nécrose, hypersensibilité, allergie, sténose, complication thromboembolique, sepsis…). Dans ce contexte, nous avons étudié les effets d’un nouvel hémostatique non implantable, HÉMO-IONIC®, sur toutes les étapes de la réparation tissulaire : de l’hémostase à la phase de maturation. HÉMO-IONIC®, Tachosil® et Surgicel® ont été évalués in vitro sur la fonctionnalité des Endothelial Colony Forming Cells (ECFCs) ; et in vivo dans deux modèles murins, un modèle d’hémostase et un de réparation tissulaire. Grâce à ces travaux, constituant une approche originale de l’évaluation des hémostatiques, nous avons démontré que seul HÉMO-IONIC®, en plus d’être un hémostatique efficace, maintient l’ensemble des propriétés fonctionnelles des cellules endothéliales et agit, à plus long terme, positivement sur l’ensemble des étapes de la réparation tissulaire. Ces données ouvrent des perspectives particulièrement intéressantes, notamment dans la prise en charge des brûlures nécessitant la restitution d’un tissu cutané de qualité (souple et élastique). Ainsi, l’association d’HÉMO-IONIC® à l’expertise du Service de Santé des Armées (SSA) dans l’utilisation des cellules stromales mésenchymateuses comme Médicament de Thérapie Innovante (MTI) pourrait représenter, dans la prise en charge des brûlures, une avancée thérapeutique en améliorant les résultats fonctionnels et esthétiques. / After an injury, the clinical objective is to faithfully repair tissues. Thus, a hemostatic agent, beyond its ability to stop bleeding, must at least not be deleterious for tissue repair. However, despite proven hemostatic efficacy, Tachosil® and Surgicel®, which are commonly used in surgery, can lead to serious adverse events (necrosis, hypersensitivity, allergy, stenosis, thromboembolic complication, sepsis…) due to their in situ persistence associated with their incomplete resorption. In this context, we studied the effects of a new non-implantable hemostatic agent, HÉMO-IONIC®, on all stages of tissue repair : from hemostasis to maturation phase. The effects of HÉMO-IONIC®, Tachosil® and Surgicel® were assessed in vitro on Endothelial Colony Forming Cell function (ECFCs) and in vivo in two mouse models of hemostasis and tissue repair. Using an original approach to the assessment of hemostatic agents, we showed that only HÉMO-IONIC®, in addition to being effective, maintained all the functional properties of endothelial cells and acted positively on all stages of tissue repair in the longer term. These data open up very interesting perspectives, in particular in the management of burns where restoring a quality cutaneous tissue (supple and elastic) is required. Thus, in burn management, combining HÉMO-IONIC® with the French Defence Health service expertise in the use of mesenchymatous stromal cells as an advanced therapy medicinal product could be a therapeutic advance by improving the functional and esthetic outcomes.
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M1 to M2 Macrophage Induction Using Retinoic Acid and Mesenchymal Stem Cells Loaded on an Electrospun Pullulan/Gelatin Scaffold To Promote Healing of Chronic Wounds

Assani, Kaivon 28 August 2018 (has links)
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