Submitted by Maurílio Figueiredo (maurilioafigueiredo@yahoo.com.br) on 2013-03-14T19:36:53Z No. of bitstreams: 1 TESE_EvoluçãoCardiopatiaChagásica.PDF: 1220929 bytes, checksum: 92df77d49886732ca062b4388ffa7e78 (MD5) / Approved for entry into archive by Neide Nativa (neide@sisbin.ufop.br) on 2013-03-18T18:25:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TESE_EvoluçãoCardiopatiaChagásica.PDF: 1220929 bytes, checksum: 92df77d49886732ca062b4388ffa7e78 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-18T18:25:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE_EvoluçãoCardiopatiaChagásica.PDF: 1220929 bytes, checksum: 92df77d49886732ca062b4388ffa7e78 (MD5) Previous issue date: 2010 / A eficácia do tratamento com Benznidazol (Bz) na fase crônica da infecção e conseqüente prognóstico da cardiopatia chagásica permanece controversa. Neste estudo foram avaliados os efeitos do tratamento com Bz na evolução da cardiopatia chagásica crônica, utilizando cães infectados com a cepa Berenice-78 como modelo experimental. Os animais infectados foram divididos em dois grupos experimentais: (i) 12 cães tratados na fase crônica com 7,0 mg de Bz/kg, divididos em duas doses diárias, durante 60 dias; (ii) 12 cães mantidos como controles não tratados. Outros 8 animais constituíram o grupo controle não-infectado. A parasitemia foi monitorada pela PCR realizada em amostras de sangue e tecido muscular cardíaco coletados no 1o e 12o mês após o tratamento (MAT). A potente supressão da parasitemia, induzida pelo tratamento com Bz, foi observada pelos resultados negativos em 81,9% (9 de 11) dos animais tratados em relação a 36,3% (4 de 11) nos animais não tratados quando realizada a PCR no sangue coletado no 1o MAT. Resultados semelhantes foram observados na PCR do tecido muscular cardíaco, realizada no mesmo período, quando o kDNA do parasito foi detectado somente em 33%,3 (2 de 6) dos animais tratados e em 100% dos animais não tratados. Um aumento dos resultados positivos na PCR do sangue e tecido foi detectado 12 MAT. Este resultado foi verificado em 60% (3 de 5) no sangue e 80% (4 de 5) no tecido muscular cardíaco dos animais tratados. Para avaliação da cardiomegalia e função sistólica ou diastólica os animais foram examinados por ecocardiograma no 1o e 12o MAT. Foram mensurados os parâmetros fração de encurtamento, volume do Átrio Esquerdo (AE), fração de ejeção, volume diastólico e diâmetro sistólico do Ventrículo Esquerdo (VE). Após essa avaliação, metade dos animais foi eutanaziada para realização das análises histopatológicas no coração. O tratamento induziu uma redução de 20% a 36% de células inflamatórias e deposição intrafascicular de colágeno no 1o MAT. Nesta fase da infecção, não houve diferença significativa nos parâmetros ecocardiográficos mensurados entre os grupos de animais infectados (tratados ou não) e não infectados. Diferentemente, 12 MAT, as lesões cardíacas foram semelhantes entre os animais infectados (tratados ou não) e significativamente maiores que naqueles não infectados. Variáveis ecocardiográficas relacionadas com cardiomegalia e disfunção diastólica também foram semelhantes entre os animais infectados (tratados ou não) e significativamente maiores que nos animais não infectados. De modo interessante, o tratamento preveniu alterações na função sistólica, uma vez que não ocorreram diferenças na fração de ejeção e fração de encurtamento entre os animais tratados e não infectados. Esses resultados demonstram que o tratamento com Bz na fase crônica da infecção de cães é eficiente em prevenir as lesões cardíacas imediatamente após o tratamento e a função sistólica um longo tempo após o término do tratamento. ___________________________________________________________________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: The analysis of available information reveals that the efficacy of benznidazole treatment in chronic chagasic infection is doubtful. In this study we evaluated the effect of Bz-treatment on the cardiac alterations using dogs infected with Berenice-78 strain as experimental model. The infected animals were divided in two experimental groups: (i) 12 dogs were Bz-treated at 7.0 mg/kg bid (Q12) for 60 days during the chronic phase; (ii) 12 dogs were maintained as non-treated control. Another 8 animals were maintained as non-infected control group. After the benznidazole-treatment the parasite load was monitored by blood and heart tissue PCR performed in the 1 st and 12 th months post-treatment (MPT). The potent suppression of parasitemia induced by Bz-treatment was associated with negative results of blood PCR performed in the 1 st MPT in 81.8% (9 of 11) of treated animals in relation to 36,3% (4 of 11) in those infected and non-treated animals. Similar results were observed in heart tissue PCR in the same period, when the parasite kDNA was detected only in 33,3% (2 of 6) of the treated animals. In contrast, 100% of infected and non-treated animals showed positive tissue PCR tests. An increase of positive results in blood and tissue PCR was detected 12 MPT. This result was verified in 60% (3 of 5) of blood and 80% (4 of 5) of tissue samples obtained of Bz-treated animals. For cardiomegaly and systolic or diastolic function evaluation the animals were examined by echocardiography in the 1 st and 12 th MPT. The parameters fractional shortening, Left Atrium (LA) volume, Left-ventricle (LV) ejection fraction, diastolic volume and systolic diameter were measured. After this evaluation a half of animals were euthanized in the same period for histopathological analysis of heart tissue. Bz-treatment led to a reduction of around 20% to 36% of inflammatory cells and intrafascicular collagen deposition when compared to non-treated animals in the first MPT. Additionally, all animals evaluated showed echocardiographic parameters similar to non-infected animals. M Differently, 12 MPT the intensity of cardiac lesions were similar to treated and non-treated animals and significantly larger than those detected in non-infected animals. Also, the echocardiographic parameters, related with cardiomegaly (LV and LA volume, LV systolic diameter) and diastolic function (LA volume), were similar among treated and non-treated animals and significantly higher than those observed in non-infected animals. Interestingly, the Bz-treatment was able to prevent alterations related to cardiac systolic functions (LV ejection and shortening fraction) such these parameters were similar to treated and non-infected animals. Taken together, the results indicate that Bz-treatment performance during the chronic phase of the dogs' infection is efficient in preventing cardiac lesions immediately after the treatment and systolic cardiac function long-time post-treatment.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-12-09T19:15:38Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAngiogêneseInflamatória.pdf: 1296094 bytes, checksum: 2850ce4e1829a2e43314ad1a6ed5f2f5 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-12-09T20:54:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAngiogêneseInflamatória.pdf: 1296094 bytes, checksum: 2850ce4e1829a2e43314ad1a6ed5f2f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-09T20:54:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAngiogêneseInflamatória.pdf: 1296094 bytes, checksum: 2850ce4e1829a2e43314ad1a6ed5f2f5 (MD5) Previous issue date: 2012 / O protozoário Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, possui proteínas de superfície ou glicoproteínas, como a GPI–mucina que se liga a receptores primitivos Toll like de células fagocíticas desencadeando a ativação de fatores de transcrição responsáveis pela produção e liberação de mediadores pró-inflamatórios que participarão efetivamente da resposta inflamatória ativando e recrutando células imunes para o sítio inflamatório auxiliando no controle da replicação parasitária. A neovascularização é um mecanismo necessário durante o processo inflamatório, tanto para o fornecimento de nutrientes quanto para o aumento do recrutamento celular no sítio em questão. Neste estudo, avaliamos a angiogênese inflamatória induzida por implantes sintéticos, alojados no espaço subcutâneo em camundongos e estimulados, 24 horas pós-implante, com antígenos de 108 formas tripomastigotas sanguíneos da cepa Y do T. cruzi. Os implantes foram retirados nos dias 1, 4, 7 e 14 pós-implantes para análise bioquímica (hemoglobina, enzima mieloperoxidase, enzima N-acetil-b-Dglicosaminidase), imunológica (citocinas e quimiocinas) e avaliação histológica. Foi observado que os antígenos do T. cruzi elevaram os níveis de mediadores inflamatórios (TNF-alfa, CCL2, CCL5) e pró-angiogênicas (VEGF) no 7º dia pós-implante e o aumento do conteúdo de hemoglobina no 14º dia pós-implante. Além disso, observou-se aumento do infiltrado de monócitos no 7º dia pós-implante, provavelmente responsável pela angiogênese descrita no 14o dia, sendo estes dados confirmados pela análise histológicas dos implantes. O infiltrado de neutrófilos e a deposição de colágeno não foram alterados com o estímulo dos antígenos nos dias avaliados. Os resultados obtidos através deste estudo sugerem que os antígenos do T. cruzi (cepa Y) atuaram como um agente angiogênico (angiogênese inflamatória) no modelo de esponja subcutânea. Novas perspectivas de estudos esclarecerão se este padrão de angiogênese observado é reprodutível no sítio cardíaco e, se o mesmo é dependente da cepa do T. cruzi utilizada. ______________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Acute inflammatory cells (granulocytes, macrophages, endothelial cells and fibroblasts) ordinarily lead to the resolution of a series events promoting mantainance of local tissue. Angiogenesis and inflammation are persistent features of several pathological conditions induced by pathological agents. Particularly, glycoproteins derived from the protozoan Trypanosoma cruzi are suggested to induce this inflammatory angiogenesis. In this study, we investigated the effects of total antigen from 108 trypomastigote forms of T. cruzi (Y strain), inoculated in sponge implantes of mice, on angiogenesis, inflammatory cell pattern and endogenous production of inflammatory and angiogenic mediators on days 1, 4, 7 and 14 post implant. There was an elevation of hemoglobin content on the 14th day, assessed by hemoglobin of the implants, but with no difference between those sponges stimulated with T. cruzi antigen or vehicle (PBS). However, parasite antigens induced high production of vascular endothelial growth factor (VEGF) and inflammatory mediators TNF-alpha, CCL2 and CCL5 on the 7th day in sponges when compared to the unstimulated group. Accumulation of neutrophils and macrophages was determined by measuring of myeloperoxidase (MPO) and N-acetyl-b-D-glucosaminidase (NAG) enzymes activitiy, respectively. MPO activity was unaffected by T.cruzi antigen, but macrophage accumulation was increased after stimulation with antigens initiating at day 4 and peaking at day 7. Morphometric analysis of the sponges suggested that inflammatory and angiogenic mediators, particularly induced by macrophages, increased blood vascularization in the matrix of the sponges peaking at 14th day. Together, our results suggest that T.cruzi molecules are the pivotal reason to the magnification of inflammatory angiogenesis in the sponge model and this process might be trigger by T.cruzi-induced inflammatory mediators.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2015-04-08T20:09:06Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AlteraçõesFuncionaisHistopatológicas.pdf: 1365918 bytes, checksum: 3c23abbe07a97867bba6f9102e41282f (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-04-09T10:57:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AlteraçõesFuncionaisHistopatológicas.pdf: 1365918 bytes, checksum: 3c23abbe07a97867bba6f9102e41282f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-09T10:57:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AlteraçõesFuncionaisHistopatológicas.pdf: 1365918 bytes, checksum: 3c23abbe07a97867bba6f9102e41282f (MD5) Previous issue date: 2014 / A cardiopatia chagásica (CC) sustenta-se pela presença do Trypanosoma cruzi e de seus antígenos no tecido cardíaco e na circulação, induzindo uma complexa resposta inflamatória ocasionando fibrose miocárdica, além de alterações estruturais e funcionais ao órgão. Estratégias farmacológicas para amenizar a inflamação na CC e a busca de marcadores de prognóstico clínico têm se tornado focos de investigação nas últimas décadas. Nesse contexto, os inibidores da enzima HMG-CoA redutase (estatinas) tem se mostrado importantes fármacos reguladores da resposta inflamatória em modelo experimental e, em paralelo, o papel da troponina I (cTnI) na interação actina-miosina nos músculos estriados e sua liberação na corrente sanguínea também tem sido reforçado na relação direta com lesões irreversíveis às células miocárdicas, tornando a cTnI um importante marcador de lesão cardíaca. Neste trabalho, avaliou-se o papel terapêutico da Sinvastatina sobre (i) a resposta inflamatória e (ii) a função cardíaca empregando-se cães, de ambos os sexos e sem raça definida (n=5) infectados pela cepa Y do T. cruzi. Esses animais foram tratados com 20mg/dia de Sinvastatina durante 3 meses (fase aguda) e 6 meses (fase crônica recente) e parâmetros parasitológicos, bioquímicos (cTnI), histopatológicos (inflamação e fibrose), eletrocardiográficos (ECG) e funcionais (ecocardiografia) avaliados nesses respectivos tempos. Nossos dados demonstraram que a concentração sérica de cTnI em cães infectados, na fase aguda, encontrava-se elevada quando comparado ao grupo controle e aos animais tratados com Sinvastatina. Além disso, a Sinvastatina foi capaz de reduzir a fibrose e o infiltrado inflamatório no tecido cardíaco de cães infectados pelo T. cruzi, refletindo na melhoria dos parâmetros de função ventricular. Em suma, no modelo canino, que melhor mimetiza os aspectos fisiopatológicos e clínicos observados na doença de Chagas, a cTnI mostrou-se um bom marcador de lesão miocárdica em fase aguda e o tratamento diário com Sinvastatina uma promissora estratégia para estabilizar/melhorar as funções cardíacas em cães infectados pelo T. cruzi. ________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: The chagasic cardiomyopathy (CC) is a clinical condition sustained by the presence of Trypanosoma cruzi and its antigens in the cardiac tissue and/or blood circulation, driven a complex inflammatory response able to induce fibroses and alternate structural and functional parameters in this organ. Pharmacological strategies aiming reducing inflammation in CC and the new proposes of biochemical markers with prognosis function have been the target of clinical investigations in the last decades. In this way, the inhibitors of HMG-CoA redutase (statins) have been shown as promising drugs capable to interfering in the inflammatory response in experimental models and, in parallel, the regulatory role of cardiac troponine I (cTnI) in the interaction of actin-myosin in striated muscle and its release in blood has also been associated with irreversible lesion to myocardial cells become cTnI a promising marker of cardiac lesion. In this study, the therapeutic role of Sinvastatin was evaluated on (i) the inflammatory response and (ii) the cardiac function using male and female mongrel dogs (n=5) infected with Y strain of T. cruzi. These animals were treated with 20mg/day of Sinvastatin during 3 (acute phase) and 6 (recent chronic phase) months and parasitological, biochemical (cTnI), histopathological (inflammation and fibrosis), electrical (ECG) and functional (echocardiography) evaluated in these respective times. Our data demonstrated that serum concentrations of cTnI in infected dogs, during acute phase, were higher in those animals non-infected and infected under Sinvastatin treatment. Beside, Sinvastatin was able to reduce fibrosis and inflammatory infiltration in cardiac tissue in infected dogs ameliorating the ventricular functional parameters. In summary, using the dog model that is considered the best adequate animal model to reflect clinical findings observed in Chagas disease, the cTnI showed be a good marker of myocardium lesion in acute phase and, the daily treatment with Sinvastatin a promising pharmacological strategy to stabilize/ameliorate cardiac functions in dogs infected by T. cruzi.

Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) - Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2016. / Submitted by giuliana silveira (giulianagphoto@gmail.com) on 2016-01-18T15:46:10Z No. of bitstreams: 1 TESE_AvaliaçãoTratamentoBenidazol.pdf: 2072475 bytes, checksum: e8946c895e79f2cec92bd67935900399 (MD5) / Approved for entry into archive by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2016-01-18T16:19:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TESE_AvaliaçãoTratamentoBenidazol.pdf: 2072475 bytes, checksum: e8946c895e79f2cec92bd67935900399 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-18T16:34:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE_AvaliaçãoTratamentoBenidazol.pdf: 2072475 bytes, checksum: e8946c895e79f2cec92bd67935900399 (MD5) Previous issue date: 2016 / Estima-se que 7 a 8 milhões de indivíduos estejam infectados pelo Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas (DC) (W.H.O., 2014), em especial na América Latina, onde essa doença é endêmica (Schofield e Dias, 1999). Desde a descoberta da DC, em 1909 por Carlos Chagas, a heterogeneidade do parasito foi considerada um fator relacionado às diferentes formas clínicas da doença. A classificação dos subtipos do T. cruzi foi determinada conforme as características biológicas, parasitismo tecidual, morfologia, virulência e patogenicidade do parasito na infecção murina (Brener, 1973; Andrade, 1974). Sendo o T. cruzi foi agrupado em três fenótipos, denominados como Biodemas I, II e III (Andrade e Magalhães, 1997). De modo geral, o Biodema I, correspondente ao Zimodema Z2b, foi caracterizado por apresentar cepas predominantemente de forma fina e macrofagotrópica na fase inicial da infecção, com alta virulência com 100% de mortalidade em 12 dias, e pico de parasitemia e mortalidade entre o 7º e o 11º dia pós-infecção (d.p.i.). O Biodema II, correspondente ao Zimodema Z2, apresenta cepas de forma predominantemente larga, miotrópica, com tropismo pelo músculo cardíaco e taxa de multiplicação lenta, cujo pico de parasitemia ocorre de maneira irregular entre o 12º e o 20º d.p.i. Cepas pertencentes a este tipo de Biodema podem apresentar diferentes níveis de virulência. Já o Biodema III, correspondente ao Zimodema Z1, exibe cepas de forma predominantemente larga e miotrópica, com envolvimento de músculo esquelético, pico de parasitemia tardio entre o 25º e o 30º d.p.i. e baixa mortalidade aos 30 dias (Andrade e Magalhães, 1997). Posteriormente, o parasito foi agrupado em dois grupos principais denominados como T. cruzi I e T. cruzi II, que anteriormente se encaixavam na classificação como Biodema III (Zimodema Z1) e Biodema II (Zimodema Z2), respectivamente. As cepas híbridas e com caracterização incerta foram denominadas apenas como T. cruzi até a realização de novos estudos (Anonymous, 1999). Recentemente, as populações de T. cruzi foram reagrupadas, conforme a expressão fenotípica e as características moleculares, em unidade de tipagem (do inglês “Discrete Typing Units” - DTU), denominadas TcI, TcII, TcIII, TcIV, TcV e TcVI, as quais foram caracterizadas por marcadores genéticos (Zingales et al., 2009). Estudos geográficos e epidemiológicos apontam distribuições distintas dessas DTUs, sendo os TcI e TcII mais abrangentes, visto que o TcI é prevalente na América Central e na região norte do Brasil, e o TcII é encontrado predominantemente na América do Sul (Zingales et al., 2009). Essas distintas DTUs, aparentemente, apresentam diferentes padrões de tropismo e parasitismo tecidual (Vago et al., 2000). O padrão do parasitismo tecidual e o grau de resistência ao tratamento por sua vez tem relação com as propriedades biológicas do parasito, uma vez que de modo geral a infecção com o T. cruzi I e o T. cruzi II estão relacionadas com casos de cardiomiopatia chagásica crônica (CCC). Ainda, a DTU I foi considerada resistente frente ao único fármaco disponível comercialmente no Brasilpara o tratamento da DC, o Benznidazol (Bz). Por outro lado, o T. cruzi II foi considerado macrofagotrópico e parcialmente susceptível ao tratamento com Bz (Filardi e Brener, 1987; Toledo et al., 2003; Toledo et al., 2004). Em estudos clínicos randomizados, o tratamento com Bz na fase aguda favorece a redução da carga parasitária e sororeversão dos pacientes tratados (de Andrade et al., 1996; Coura et al., 1997; Sosa-Estani et al., 1998). Sugere-se que o tratamento etiológico com Bz deva ser iniciado nos estágios iniciais da DC, pois quando iniciado na fase aguda pode alcançar níveis de 70% de cura (Rodrigues Coura e de Castro, 2002). Outros trabalhos tem revelado que a intervenção com o tratamento de pacientes na forma indeterminada melhora o prognóstico da doença (Lana et al., 1992; Macchado-de-Assis et al., 2013). O Bz ativa a resposta imune inata com aumento dos níveis de monócitos, todavia com diminuição dos monócitos TNF-γ + e IL-12+ (Sathler-Avelar et al., 2009). Na resposta imune adaptativa, o tratamento com Bz favorece mecanismos imunomoduladores mediados por IL-10 produzido por linfócitos T CD4 e B, além de aumentar o número de células NK ativas no sangue periférico, que tem participação na produção e citocinas pró-inflamatórias e moduladoras (Sathler-Avelar et al., 2006). Isto demonstra a importância da inter-relação entre a resposta imune inata e adaptativa no controle da resposta imune exacerbada, que poderá acarretar na lesão tecidual (Sathler-Avelar et al., 2009). Por outro lado, os casos de falha terapêutica, aparentemente, dependem de mecanismos que interferem na expressão de genes relacionados à resistência de algumas cepas do parasito (Campos et al., 2014). Apesar de estar elucidado que o Bz alcança níveis de cura importantes nos pacientes tratados na fase aguda da DC, ainda se faz necessário compreender a participação das diferentes DTUs de T. cruzi na patogênese da doença, bem como elucidar as alterações imunológicas e histopatológicas cardíacas frente ao tratamento na infecção com cepas do T. cruzi que apresentam diferentes graus de susceptibilidade ao tratamento com Benznidazol. Portanto, neste trabalho avaliamos a infecção com duas cepas de DTUs distintas, a cepa Y, caracterizada como TcII e considerada parcialmente resistente ao tratamento com Bz no modelo murino e susceptível no modelo canino, e a cepa Colombiana, classificada como TcI e resistente à terapia com Bz nos modelos murino e canino (Filardi e Brener, 1987; Veloso et al., 2001; Guedes et al., 2002). _________________________________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Trypanosoma cruzi infection may be caused by different strains of distinct discrete typing units (DTUs), characterized by different biological and genetic patterns, which result in variable clinical forms of chronic Chagas disease. These biological differences of the parasite are apparently related to the distinct patterns of resistance to the Benznidazole treatment, the only drug available for Chagas disease treatment in Brazil. In randomized clinical trials, Benznidazole treatment presents a higher cure rate in the acute phase, with reduction of the parasite load and negative seroreversion of treated and cured patients, but there are still questions about the immunopathological changes resulting from this treatment. This study evaluates the immune response and cardiac lesions in dogs experimentally infected with different strains of distincts T. cruzi DTUs that showing different degrees of susceptibility to treatment with Benznidazole, namely Y and Colombian from TcI and TcII DTU, respectively. For this, mongrel dogs were experimentally infected with 2000 Y or Colombian T. cruzi trypomastigotes and undergoing Benznidazole treatment at oral dose of 7 mg/kg, divised in two by day, for 45 days. The infection with the Y strain led to increased levels of alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase, leucopoenia, thrombopoenia, inversion of the ratio of CD4+/CD8+ T-lymphocytes and alterations in monocyte number. In addition, Y strain infection stimulated the production of IFN-γ by CD4+ and CD8+ T-lymphocytes and IL-4 by CD8+ T-cells. In the chronic phase, significant heart inflammation and fibrosis were observed. During infection with the Colombian strain, increased levels of alanine aminotransferase, erythrocytes, haematocrit and haemoglobin were observed. In addition, CD8+ T-lymphocytes isolated from the peripheral blood produced higher levels of IL-4. The latter results suggests that during the acute phase, infection with the Colombian strain may remain unnoticed by circulating mononuclear cells. In the chronic phase, a significant increase in the number of inflammatory cells was detected in the right atrium, demonstrating that strains of different DTUs interact differently with the host. When was evaluated the Benznidazole treatment of dogs infected with the Y strain it was observed increase levels of alanine aminotransferase, urea and hemoglobin, lymphopenia, neutropenia, monocytopenia and inversion of the ratio of CD4+/CD8+ T-lymphocytes. The infection with the Y strain and Benznidazole treatment stimulated the production of IFN-γ and IL-4 by CD4+ T-lymphocytes. In dogs infected with the Colombian strain and Benznidazole treatment, it was observed increase of alanine aminotransferase and hemoglobin, and decrease the monocyte number. So the treatment in Colombian infection controlled the increased amount of red blood cells. Moreover, in chronic phase, dogs with Y and with Colombian strains infection and Benznidazole treatment do not showed significant difference in the number of inflammatory cells and collagen area in the right atrium compared to the not infected and treated group. Therefore, the Benznidazole treatment despite having changed some cell populations in peripheral blood, had significant participation for decrease the IgG level and the inflammation and cardiac fibrosis. So, in this work, the Y strain was apparently first recognized by the immune system, while the Colombian strain escaped from the immune response in the acute phase of Chagas disease, which would impact the progression of cardiomyopathy in the chronic phase. Moreover, the Benznidazole treatment in acute experimental infection controlled the cardiac damage in chronic phase.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2012-10-21T07:38:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 190708.pdf: 1203767 bytes, checksum: 476a33b37e262bc8eabf659f27b8d289 (MD5) / O Trypanosoma rangeli, assim como o T. cruzi, são protozoários hemoflagelados, parasitas de uma grande variedade de mamíferos domésticos e silvestres, incluindo humanos, numa ampla extensão da América do Sul e Central. Apesar da aparente apatogenicidade para mamíferos, o T. rangeli determina reações sorológicas cruzadas com T. cruzi, dificultando desta forma o diagnóstico sorológico da doença de Chagas. Uma grande heterogeneidade intra-populacional destes parasitas foi comprovada pelas marcantes diferenças no comportamento biológico tanto em hospedeiros vertebrado como invertebrados e, mais recentemente, por vários marcadores moleculares. Nesse sentido, o presente estudo avaliou comparativamente os espaçadores ITS-1 e ITS-2 que flanqueiam a subunidade 5,8S do gene do RNA ribossomal (rRNA) entre diferentes cepas de T. rangeli isoladas de hospedeiros e origens geográficas distintas. Tendo revelado um baixo nível de variabilidade de ambos os espaçadores entre as cepas estudadas, os resultados revelaram a existência de polimorfismos de mononucleotídeos (SNP's) na subunidade 5,8S do gene do rRNA. Apesar da observação que o espaçador ITS-1 demonstrou-se menos polimórfico que o ITS-2, não foi possível realizar nenhuma inferência epidemiológica. A inclusão de seqüências homólogas do gene do rRNA de cepas de T. cruzi e Leishmania sp. demonstrou a possível utilização deste marcador na diferenciação interespecífica de tripanosomatídeos.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Medicina Tropical, 2017. / Texto parcialmente liberado pelo autor. Conteúdo restrito: Subcapítulos 5.3 e 6.3. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2018-04-12T19:00:07Z No. of bitstreams: 1 2017_TamaraOliveiraMachado_PARCIAL.pdf: 7203052 bytes, checksum: 6786c9c953d5af025014b7721f8ac98d (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-04-20T21:31:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_TamaraOliveiraMachado_PARCIAL.pdf: 7203052 bytes, checksum: 6786c9c953d5af025014b7721f8ac98d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-20T21:31:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_TamaraOliveiraMachado_PARCIAL.pdf: 7203052 bytes, checksum: 6786c9c953d5af025014b7721f8ac98d (MD5) Previous issue date: 2018-04-20 / Secretaria de Vigilância em Saúde (SVS). / O conhecimento das espécies de flebotomíneos e de seus níveis de infecção natural por Leishmania é necessário para a identificação do risco de ocorrência das leishmanioses. Considerando o pouco conhecimento da fauna flebotomínica em Palmas, Tocantins, e a inexistência de dados de ocorrência de espécies de Leishmania em flebotomíneos nesse município, o presente trabalho objetivou: investigar a fauna flebotomínica em fragmentos de matas de galeria e em unidades domiciliares (UDs) bem como a infecção natural por tripanosomatídeos nas fêmeas de flebotomíneos capturados em dois períodos distintos, seco e chuvoso. Quatro fragmentos de matas de galeria e quatro áreas domiciliares adjacentes foram amostradas utilizando armadilhas luminosas HP e Shannon. Após a identificação, 752 fêmeas foram agrupadas em 154 pools para a extração do DNA. A qualidade do DNA foi verificada por PCR do gene cacophany da região IVS6 de flebotomíneos. A detecção de tripanossomatídeos nas fêmeas de flebotomíneos foi realizada a partir da amplificação da região SSU rDNA e as amostras positivas foram submetidas a PCR ITS-1. A identificação das espécies de tripanossomatídeos foi realizada por sequenciamento. A caracterização ambiental das 40 casas amostradas foi realizada a partir de questionários. Variáveis estruturais do intra, do peridomicílio e da circunvizinhança foram obtidas. Foram capturados 949 (28 spp.) e 578 (22 spp.) espécimes em julho e novembro, respectivamente. Nyssomyia whitmani foi a mais abundante (n = 743). Em julho, a maioria dos espécimes foram capturados nas matas de galeria (n = 762, 80%) e em novembro, a maioria dos espécimes foi encontrada nas UDs (n = 551, 95%) com predominância de Ny. whitmani. Lu. longipalpis foi a mais frequente em áreas domiciliares e Bi. flaviscutellata em matas de galeria. A PCR SSU rDNA identificou L. amazonensis, L. infantum e Crithidia fasciculata em Ny. whitmani. A PCR SSU rDNA identificou Leishmania amazonensis, L. infantum e Crithidia fasciculata em Ny. whitmani; L. amazonensis em Lu. longipalpis; Trypanosoma sp. e L. amazonensis em Pintomyia christenseni; L. amazonensis em Psathyromyia hermanlenti e Evandromyia walkeri. Determinadas UDs de Palmas (no centro de Palmas e no distrito de Taquaruçu) apresentaram características que permitem a manutenção da população de flebotomíneos no peridomicílio, tais como a presença de árvores frutíferas, matéria orgânica e animais, como cães e galinhas. As matas de galeria são importantes para manter os flebotomíneos vetores de Leishmania em Palmas e as UDs são receptivas à manutenção da população de flebotomíneos no peridomicílio. Dessa forma, recomenda-se uma vigilância mais ativa principalmente nas UDs próximas a matas de galeria. / Knowledge on phlebotomine species and levels of natural infection by Leishmania are necessary to identify potential areas of risk of leishmaniasis. Given the limited knowledge on phlebotomine fauna in the city of Palmas, State of Tocantins, Brazil and the lack of data on the occurrence of Leishmania species in phlebotomines in this municipality, this study aimed to: to investigate the phlebotomine fauna in fragments of gallery forests and in household units (HUs) as well as the natural infection by trypanosomatids in females of sandflies captured in two different periods, dry and rainy. Four fragments of gallery forests and four adjacent HUs were sampled using HP light traps and Shannon traps. After their identification, 752 females were grouped into 154 pools for DNA extraction. The quality of the DNA was determined by PCR of the cacophany gene of the IVS6 region in Phlebotominae. Trypanosomatids were detected in Phlebotominae females through the amplification of the SSU rDNA region, and the positive samples were tested using ITS1-PCR. Trypanosomatids species were identified using sequencing. The environmental status of the 40 houses sampled was characterized using questionnaires. Structural variables within the HUs, around the HUs, and in the surrounding neighborhood were obtained. A total of 949 specimens (28 spp.) and 578 specimens (22 spp.) were captured in July and November, respectively. Nyssomyia whitmani was the most frequent species (n=743). In July, the majority of specimens were captured in the gallery forests (n=762; 80%), while in November, most of the specimens were found in the HUs (n=551; 95%). The specimens found were predominantly Ny. whitmani. Lutzomyia longipalpis was most frequent in domestic areas (84/86), while Bichromomyia flaviscutellata in gallery forests. The SSU rDNA PCR identified Leishmania amazonensis, L. infantum and Crithidia fasciculata in Ny. whitmani, as well as L. amazonensis in Lu. longipalpis; Trypanosoma sp. and L. amazonensis in Pintomyia christenseni; and L. amazonensis in Psathyromyia hermanlenti and Evandromyia walkeri. Certain HUs in Palmas (some in downtown Palmas and others in the Taquaruçu district) exhibited characteristics that allow the maintaining of Phlebotominae population in the peridomestic environment, such as the presence of fruit trees, organic matter, and animals such as dogs and chickens. The gallery forests are important to maintain the phlebotomine vectors of Leishmania in the city and the HUs are receptive to maintain Phlebotomine populations in peridomestic environments. Therefore, more active surveillance is recommended, particularly in the HUs close to gallery forests.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2016. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-08-29T14:48:46Z No. of bitstreams: 1 2016_AgneloRodriguesdeSouza.pdf: 1916299 bytes, checksum: 92e8cd180025da449e27b13a19f259c3 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-09-01T21:44:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_AgneloRodriguesdeSouza.pdf: 1916299 bytes, checksum: 92e8cd180025da449e27b13a19f259c3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-01T21:44:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_AgneloRodriguesdeSouza.pdf: 1916299 bytes, checksum: 92e8cd180025da449e27b13a19f259c3 (MD5) / Durante o processo de divisão celular os tripanossomatídeos e alguns microrganismos do reino Fungi mantém o núcleo intacto em um processo denominado de mitose fechada. Além disso, os tripanossomatídeos não apresentam condensação da cromatina e ocorre um alongamento do núcleo para acomodar os cromossomos já replicados. Em leveduras e metazoários, a manutenção das cromátides irmãs juntas durante a divisão celular até a sua separação na transição metáfase e anáfase é realizada pelo complexo coesina. Análise dos genomas de tripanossomatídeos mostrou que genes do complexo coesina e de proteínas centrinas estão presentes e são conservados. Para investigar a função da subunidade TcSCC1 do complexo coesina e das cinco proteínas centrinas preditas em T. cruzi, o agente etiológico da doença de Chagas, foram feitas clonagens dos genes TcSCC1 e TcCEN1 a 5. Para a análise de citolocalização dessas proteínas no parasita, os genes TcSCC1, TcCEN2, 4 e 5 foram subclonados no vetor de expressão transiente pRTEGFP que contém o promotor ribossomal, a região 5’UTR do gene para a amastina, o gene para a proteína fluorescente verde (EGFP) e a região 3’UTR do gene TCR27. A subclonagem foi realizada de modo que as proteínas de estudo foram expressas como fusão no N-terminal da EGFP. Esses plasmídeos foram utilizados em transfecção transiente e a expressão da EGFP com e sem as fusões proteicas foram visualizadas por microscopia de fluorescência. As centrinas 2, 4 e 5 e a subunidade TcSCC1 da coesina fusionadas com EGFP apresentaram uma localização predominantemente nuclear, embora não exclusivo, quando comparado com a EGFP sem fusão. Para verificar se as proteínas estudadas são expressas em T. cruzi foram realizadas análises de PCR quantitativa nas suas três formas de vida: amastigotas, epimastigotas e tripomastigotas. Verificamos que todos os genes são expressos na forma de mRNA. As centrinas 2 e 5 apresentaram a maior expressão relativa nas três formas enquanto que as centrinas 1 e 3 apresentaram expressão equivalente à GAPDH em amastigotas e epimastigotas, mas em tripomastigotas uma expressão maior. A centrina 4 apresentou uma expressão relativa muito menor que a GAPDH e às outras centrinas nas três formas do parasita. Deste modo, concluímos que as cinco centrinas e a subunidade SCC1 são expressas em T. cruzi com uma possível localização nuclear. ________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / During cell division the trypanosomatids and some fungi microorganisms keeps the nucleus intact in a so-called closed mitosis. Furthermore, the trypanosomes do not show chromatin condensation and it occurs nucleus elongation to accommodate the replicated chromosomes. In yeast and metazoan, maintenance of sister chromatids together during cell division until their separation in metaphase and anaphase transition is performed by cohesin complex. Analysis of trypanosomatid genomes showed that genes for the cohesin complex and for centrin proteins are present and conserved. To investigate the function of TcSCC1 subunit of cohesin complex and the five predicted centrin proteins in T. cruzi, the causative agent of Chagas disease, cloning of the TcSCC1 gene and all five TcCEN genes was performed. For cytolocalization analysis of these proteins in the parasite, TcSCC1 and TcCEN2, 4 and 5 genes were subcloned into the transient expression vector pRTEGFP that contains the ribosomal promoter, the 5'UTR region of the amastin gene, the gene for green fluorescent protein (EGFP) and the 3'UTR region of the TCR27 gene. Subcloning was performed so that the proteins were expressed as fusion proteins at the N-terminus of EGFP. These plasmids were used in transient transfection and expression of EGFP with and without the protein fusions were visualized by fluorescence microscopy. The centrins 2, 4 and 5 and TcSCC1 cohesin subunit fused to EGFP showed a predominantly nuclear localization, although not unique, when compared to EGFP without fusion. To verify that the studied proteins are expressed in T. cruzi quantitative PCR analysis was performed in its three forms of life: amastigotes, epimastigotes and trypomastigotes. We found that all genes are expressed as mRNA. The centrins 2 and 5 had the highest relative expression in three forms while centrins 1 and 3 had equivalent expression to GAPDH in amastigotes and epimastigotes, but higher expression in trypomastigotes. The centrin 4 showed a much smaller relative expression to GAPDH and the other centrins in the three forms of the parasite. Thus, we conclude that the five centrins and the SCC1 subunit are expressed in T. cruzi with a possible nuclear localization.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-03-24T11:22:58Z No. of bitstreams: 1 2013_ManuelaMacielBrittoAragao.pdf: 3783906 bytes, checksum: 311c40bb58b437085282bc5efc1bba24 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-03-24T11:52:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_ManuelaMacielBrittoAragao.pdf: 3783906 bytes, checksum: 311c40bb58b437085282bc5efc1bba24 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-24T11:52:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_ManuelaMacielBrittoAragao.pdf: 3783906 bytes, checksum: 311c40bb58b437085282bc5efc1bba24 (MD5) / A transferência lateral (TL) e vertical (TV) de minicírculos de DNA (kDNA) do Trypanosoma cruzi foram investigadas em 26 pessoas de quatro famílias. A infecção ativa foi documentada em cinco pessoas com o DNA nuclear do T. cruzi. Evidência da integração do kDNA foi documentada em todos esses casos. Foram obtidas sequências quimeras kDNA-DNA humano de 157 eventos de TL e TV as quais foram analisadas em bancos de dados. As integrações do kDNA foram mapeadas em 19 dos 23 cromossomos, e 72,4% das integrações ocorreram em elementos transponíveis: 80% dessas mutações ficaram retidas em retroelementos LINE-1. O gene do receptor olfatório RO1-17 reteve 10 das 18 integrações de kDNA em regiões codificadoras. A técnica tpTAIL-PCR específica para este gene gerou mais 37 quimeras, totalizando 194 mutações de kDNA-DNA humano. Em 105 eventos (54%) das mutações estavam inseridas em loci de indivíduos consanguíneos, verdadeiros eventos de TGV herdados pelas progênies. Em 15 desses eventos (14%) as quimeras kDNA-DNA hospedeiro tinham topologia sugestiva de herança Mendeliana. Os demais 90 eventos (86%) apresentaram diversidade nas sequências de nucleotídeos dos minicírculos integradas no mesmo sitio do genoma de parentais e progênies. Este achado sugere que a maioria das mutações do kDNA no genoma humano apresentam padrão não Mendeliano. Verificou-se ainda que a diversidade de sequências de minicírculos integradas foi aumentada pelos fenômenos de recombinação, truncamento, mobilização e embaralhamento de regiões dos minicírculos nas mutações herdadas. A demonstração de crescimento do genoma com diversidade genética sugere especiação sem limite conhecido. Ademais, TL e TV contribuem para o magnífico fenômeno da evolução, definida por Darwin como “descendentes com modificações”. / The lateral and the vertical gene transfers (LT and VT) of Trypanosoma cruzi kDNA minicircles was sought among 26 people in four families. The live T. cruzi infection was documented in five people showing the parasite nuclear DNA. The evidence of the kDNA integration was shown in all those cases. The kDNA-human DNA chimera sequences were obtained from 157 LT and VT events that were analyzed in databank. The kDNA mutations were found in 19 out of 23 chromosomes, and 72,4% of these integrations occurred in transposable elements; 50% of these mutations were present in the retrotransposable LINE-1. At the locus of the olfactory receptor OR1-17 there were 10 among 18 integrations. The tpTAIL-PCR technique with primers specific to the OR1-17 gene generated, additionally, 37 chimeras among a total of 194 chimeras kDNA-DNA disclosed in the human genome. A total of 105 (54%) mutations were inserted at various loci from bloodline individuals in four families, whose are truly events inherited from progeny. Among 15 of those events (14%) there were kDNA-host DNA mutations showing topology that suggests the Mendelian inheritance. The remaining 90 mutations (86%) revealed a broad genetic diversity arising from different minicircle sequences integrated at single loci in the parental and progeny. This finding indicates that a great majority of the kDNA mutations in the human genome is non-Mendelian. Additionally, it was shown an increasing diversity of minicircle sequences as a consequence of recombination, reshuffling, hitchhiking, and truncated minicircle at the inherited mutation sites. The documented genome growth and diversity of the minicircles flanking the host DNA at the mutation sites suggested unlimited speciation, hence LT and VT contribute for the magnificent unstoppable evolution, which was defined by Charles Darwin as “descendents with modifications”.

Submitted by Ramon Santana (ramon.souza@ufpe.br) on 2015-03-10T19:43:05Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Miria de Oliveira Barbosa.pdf: 1891641 bytes, checksum: 5418e93f232ae4badc49c2702841d383 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-10T19:43:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Miria de Oliveira Barbosa.pdf: 1891641 bytes, checksum: 5418e93f232ae4badc49c2702841d383 (MD5) Previous issue date: 2014-07-25 / CNPq e FACEPE / A doença de Chagas é considerada pela Organização Mundial da Saúde uma das doenças mais negligenciadas do mundo, cerca de 6 a 8 milhões de pessoas estão infectadas e 25 milhões sob risco de adquirir a doença. A quimioterapia para a enfermidade é composta por apenas um medicamento disponível no mercado, o benznidazol. O tratamento com o fármaco necessita de um longo período e apresenta graves efeitos colaterais. Haja vista a grande parcela da população afetada e com uma quimioterapia restrita, a busca de novos protótipos a fármacos antichagásicos se torna necessária e emergencial. Para o planejamento da série química utilizaram-se dois heterociclos, os 1,3-tiazóis e as 4-tiazolinonas. Estes constituem classes de compostos bastante exploradas no âmbito da Química Medicinal, devido a sua versatilidade química e ampla gama de atividades biológicas, com destaque para sua potencial atividade tripanocida. Para o planejamento da síntese utilizou-se técnicas de bioisosterismos e hibridação molecular. Com base nisso, este trabalho apresenta o planejamento, a síntese e avaliação farmacológica de 31 compostos, dos quais 21 se classificam como 1,3-tiazóis e 10 como 4-tiazolinonas.Todos os compostos tiveram sua estrutura química determinada por técnicas espectroscópicas como infravermelho, ressonância magnética nuclear 1H e 13C e espectrometria de massas. A atividade tripanocida foi determinada em epimastigotas (DM28c) e tripomastigota (cepa Y), além da citotoxicidade que foi estimada em esplenócitos de camundongos BALB/c. Os compostos compostos cíclicos produzidos não demonstraram atividade tripanocida relevante sobre a forma tripomastigota, no entanto, os tiazóis apresentaram em sua maioria uma boa citotoxicidade, que pode ser até quatro vezes inferior ao benznidazol. A atividade frente à forma epimastigota foi até 10 vezes superior ao benznidazol,

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:52:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4590_1.pdf: 2364872 bytes, checksum: f24749346bedcbc3c6bc648961872005 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos do ácido barbático (BARB) na viabilidade celular, no crescimento e na ultra-estrutura da forma epimastigota do Trypanosoma cruzi, o agente etiológico da doença de Chagas. A fim de aumentar a biodisponibilidade do ácido barbático, este composto foi incorporado a nanocápsulas (BARB-NC) de ácido poli-láctico- glicol (PLGA). O crescimento e a viabilidade celular foram avaliados através da contagem na câmara de Neubauer nos tempos 24, 48 e 72 horas. Os parasites foram incubados a diferentes concentrações de BARB e BARB-NC por 72 horas após 24 horas de cultivo. Parasitas cresceram em meio livre de droga que foi usado como controle. A incubação dos parasites com nanocápsulas vazias não resultaram em atividade inibitória quando comparados ao controle, embora mudanças estruturais terem sido verificadas. Tratamento dos parasitas tanto com BARB e BARB-NC resultaram em uma inibição do cresciemtno dose-dependente. Verificou no BARB uma inibição de apenas 32% nas primeiras 24 horas com a concentração de 62,5 μg/ml. No entanto, o valor da IC50 da BARB-NC nas 24h foi 24.66 μg/ml. A incorporação do BARB dentro de nanocápsulas potencializou o efeito tripanosomicida deste. Embora, o tratamento com BARB e BARB-NC cause trágicas mudanças morfológicas, essas alterações foram mais severas nos parasites tratados com BARB-NC