Introdução: A frequência de detecção de bandas oligoclonais (BOC) em doentes com esclerose múltipla (EM) na cidade de São Paulo é significativamente mais baixa do que em outras cidades do Brasil e de outros países, principalmente da Europa e da América do Norte. Não se conhece o motivo pelo qual isso ocorre. Uma das hipóteses mais interessantes relacionada à imunopatogenia da EM é a chamada Hipótese Higiênica, que postula uma relação inversamente proporcional entre a prevalência de infecções por parasitas e a frequência da EM. Objetivo: verificar se há relação entre a ocorrência de anticorpos contra parasitas no soro sanguíneo e a detecção de BOC em pacientes diagnosticados com EM na cidade de São Paulo. Métodos: Foram estudados 164 pacientes do Ambulatório de Doenças Desmielinizantes da Divisão de Neurologia Clínica e da Divisão de Anestesia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo dos quais foram obtidas as amostras de LCR e de soro em que foi realizado este estudo. Esses pacientes foram separados em 4 grupos (EM, CIS, Grupo Controle com Pacientes de DNI e Grupo Controle com Pacientes sem Queixas Neurológicas) nos quais foram identificadas as presenças de BOC e de anticorpos parasitários. Para a detecção de anticorpos parasitários, foi utilizada a técnica de eletroforese unidimensional de proteínas em gel de poliacrilamida em sistema descontínuo, com antígenos LV-Tcra (líquido vesicular de Taenia crassiceps) e ES-Tcra (líquido excreção/secreção de Taenia crassiceps). Resultados: Dos 164 pacientes estudados, separados em seus respectivos grupos, foram pesquisados anticorpos antiparasitários de baixo e de alto peso molecular. Esses anticorpos foram observados em 103 pacientes nos quais não havia 13 BOC. Destes, 2 apresentaram anticorpos de baixo peso molecular e 59 anticorpos de alto peso molecular. Dos 61 pacientes em que havia BOC, foram encontrados anticorpos de baixo peso molecular em um; 16 apresentaram anticorpos de alto peso molecular. Conclusão: Em doentes com EM clinicamente definida anticorpos anti-Taenia foram detectados com a mesma frequência em pacientes com BOC e em pacientes sem BOC / Introduction: The frequency of oligoclonal bands (OCB) detection in patients with multiple sclerosis (MS) in the city of São Paulo is significantly lower than in other cities of Brazil and other countries, mainly Europe and North America. To date, the reason for its occurrence is still unknown. One of the most interesting hypotheses related to the immunopathogenesis of MS is the so-called Hygiene Hypothesis, which postulates an inverse relationship between the prevalence of parasitic infections and the frequency of MS. Objective: This study examined whether there is a relationship between the occurrence of antibodies against parasites in blood serum and the detection of OCB in patients diagnosed with MS in the city of São Paulo. Methods: We have studied 164 patients from the Demyelinating Diseases Clinic of the Division of Clinical Neurology and Division of Anesthesia Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo from whom CSF and serum samples were obtained and which were used to conduct the present study. These patients were divided into 4 groups: MS, Clinically Isolated Syndrome (CIS), control group with patients with Inflammatory Neurologic Diseases (IND) and Control Group with patients without neurologic complaints, in whom the presence of OCB and anti- parasitic antibodies was identified. For the detection of parasitic antibodies, the unidimensional electrophoresis of proteins in polyacrylamide gel in a batch system with LV-Tcra antigens (Taenia crassiceps vesicular fluid) and ES-Tcra (net excretion / secretion of Taenia crassiceps) was used. Results: Of the 164 patients studied, separated into their respective groups, anti- parasite antibodies of low and high molecular weight were analyzed. A total of 103 patients presented no OCB, and of these, 2 had antibodies of low molecular weight and 59 presented antibodies of high molecular weight. Of the 61 patients with OCB positive, one showed antibodies of low molecular weight and 16 antibodies of high molecular weight. Conclusion: This study showed that in patients with clinically established MS. anti-Taenia antibodies occurred with the same frequency in patients with OCB and in patients without OCB

Neurocisticercose (NCC) é uma infecção parasítica freqüente do sistema nervoso central, principalmente em países em desenvolvimento. Os custos elevados dos exames de neuroimagem (Ressonância Magnética e Tomografia Computadorizada), hoje em dia considerados como os métodos mais precisos no diagnóstico da doença, podem ser inviáveis nestas regiões, além disso, há que se considerar os problemas na correta interpretação dos diversos testes imunológicos disponíveis, freqüentemente difíceis e delicados devido o alto número de falso-positivos e/ou falso-negativos. Nós demonstramos neste trabalho que o DNA de Taenia solium está presente no líquido cefalorraquiano (LCR) de pacientes infectados, permitindo o diagnóstico molecular desses pacientes através da metodologia da PCR (Polymerase Chain Reaction). Neste caso em específico, foi possível estabelecer um diagnóstico preciso para 29/30 (96.7 %) pacientes avaliados, com especificidade de 100%. A presença do DNA do parasita no LCR dos pacientes tem implicações consideráveis no diagnóstico desta importante doença. Além disso, ampliamos significativamente o conhecimento sobre o transcriptoma da Tênia solium produzindo as primeiras 2880 ESTs (Expressed Sequence Tags) deste cestódeo. Em nossas análises encontramos, pelo menos sete novos genes, importantes por poderem exercer um papel importante na luta contra a NCC, pois é através deste conhecimento que se torna identificar os aspectos mais consideráveis desta doença, sendo aperfeiçoando as estratégias de prevenção, encontrando novos antígenos para aperfeiçoar o imunodiagnóstico e/ou possibilitando o desenvolvimento de uma vacina que seja eficiente em proteger e imunizar os hospedeiros. / Neurocysticercosis is a frequent parasitic infection of the central nervous system, mainly in developing countries. High costs of magnetic resonance images (nowadays the most accurate method of diagnosis) may be prohibitive in these regions and the interpretation of the multiple immunologic tests available is often difficult. We demonstrate in this work that Taenia solium DNA is present in the cerebrospinal fluid (CSF) of patients and enabled the correct diagnosis of 29/30 patients (96.7 %) with 100\% specificity through the PCR methodology. The presence of parasite DNA in the CSF of patients may have important consequences over the diagnosis of this important disease. Besides, we enlarge significant the knowledge about Taenia´s transcriptome producing the first 2880 ESTs (Expressed Sequence Tags) of Taenia solium cysticerci. We were able to found at least seven new important genes that may be a important role in a battle against neurocysticercosis because through them it is possible identify considerable aspects of this disease, even though establishing other and efficient strategies of prevention, founding new antigens to improve the immunodiagnosis or building a vaccine to protect the hosts that carry on this important parasite.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1867425 bytes, checksum: f26d8b051d4ec39dd9de144658e3edf1 (MD5) Previous issue date: 2008-07-09 / The in vitro action of the nematophagous fungi Pochonia chlamydosporia (VC1 and VC4), Paecilomyces lilacinus, Duddingtonia flagrans (AC001) and Monacrosporium thaumasium (NF34), on eggs of Taenia saginata and capsules eggs of Dipylidium caninum was evaluated. A hundred fifty thousand eggs of T. saginata (experimental assay 1) and a hundred fifty thousand eggs capsules of D. caninum (experimental assay 2) were used. These eggs were maintained in plates of Petri containing the isolated fungi and without fungi (controls), in medium water-agar 2% (AA2%), where they grew for 10 days, being made 25 repetitions for each group. In of five, 10 and 15 days, about a hundred eggs were removed of each plate and placed in glass sheets with a drop of Amam blue 1%, and evaluated in agreement with the following parameters: type 1, physiologic and biochemical effect without morphological damage to the eggshell, with hyphae adhered to the eggshell; type 2, lytic effect with morphological change of the embryo and eggshell, without hyphal penetration through eggshell; and type 3, lytic effect with morphological change of the embryo and eggshell, besides hyphal penetration and internal egg colonization. In the experimental assay 1, the isolated fungi P. chlamydosporia (VC1 and VC4) and P. lilacinus presented ovicidal activity for the effects of the types 1, 2 and 3 on eggs of T. saginata, while the isolated fungi D. flagrans (AC001) and M. thaumasium (NF34) only presented effect of the type 1. In the experimental assay 2, the isolated fungi D. flagrans (AC001) and M. thaumasium (NF34) only presented effect of the type 1 for all the analyzed intervals. The isolated fungi of the P. chlamydosporia (VC1 and VC4) and P. lilacinus, presented effects of the type 1, 2 and 3 in the intervals of five, 10 and 15 days. At the end of the experiments 1 and 2, was demonstrated that the isolated P. chlamydosporia (VC1 and VC4) and P. lilacinus acted in a negative effect on eggs of T. saginata and capsules eggs of D. caninum, and the effect can be considered promising candidates in the biological control of those helminths. / Com o objetivo de avaliar a ação in vitro dos fungos nematófagos Pochonia chlamydosporia (VC1 e VC4), Paecilomyces lilacinus, Duddingtonia flagrans (AC001) e Monacrosporium thaumasium (NF34), sobre ovos de Taenia saginata e cápsulas ovígeras de Dipylidium caninum, foram utilizados cento e cinqüenta mil ovos de T. saginata (ensaio experimental 1) e cento e cinqüenta mil cápsulas ovígeras de D. caninum (ensaio experimental 2). Esses ovos foram vertidos em placas de Petri contendo os isolados fúngicos e sem fungo (controle), em meio ágar-água 2% (AA2%), onde cresceram por 10 dias, sendo feitas 25 repetições para cada grupo. Nos intervalos de cinco, 10 e 15 dias, cerca de cem ovos foram retirados de cada placa e colocados em lâminas de vidro com uma gota de azul de Amam 1%, para serem avaliados de acordo com os seguintes parâmetros: efeito do tipo 1: efeito fisiológico e bioquímico sem prejuízo morfológico à casca, onde são visualizadas as hifas aderidas à casca do ovo; efeito do tipo 2: efeito lítico com alteração morfológica da casca e embrião; e efeito do tipo 3: efeito lítico com alteração morfológica do embrião e da casca, além de penetração de hifas e colonização interna do ovo. No ensaio experimental 1, os isolados fúngicos P. chlamydosporia (VC1 e VC4) e P. lilacinus, apresentaram atividade ovicida para todos os efeitos dos tipos 1, 2 e 3 sobre ovos de T. saginata, enquanto os isolados fúngicos D. flagrans (AC001) e M. thaumasium (NF34), só apresentaram efeito do tipo 1. No ensaio experimental 2, os isolados fúngicos D. flagrans (AC001) e M. thaumasium (NF34), também só apresentaram efeito do tipo 1, para todos os intervalos analisados. Já os isolados fúngicos do fungo P. chlamydosporia (VC1 e VC4) e P. lilacinus, apresentaram efeitos do tipo 1, 2 e 3 nos intervalos de cinco, 10 e 15 dias. Ao final dos ensaios experimentais 1 e 2, ficou demonstrado que os isolados P. chlamydosporia (VC1 e VC4) e P. lilacinus, agiram de forma negativa sobre ovos de T. saginata e cápsulas ovígeras de D. caninum, e desta forma, podem ser considerados candidatos promissores no controle biológico desses helmintos.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006Bitstream added on 2014-06-13T18:48:34Z : No. of bitstreams: 1 menosso_jc_me_botfmvz.pdf: 1568332 bytes, checksum: 5f6742d0d4281777a48557024d7871e0 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A cisticercose bovina é resultante da ingestão de ovos de T. saginata proveniente de pastagens e águas contaminadas fornecidas aos animais. É causa de preocupações na área de saúde pública por ocasionar a teníase em humanos, mas causa sérios prejuízos na indústria agropecuária e aos pecuaristas, devido às condenações ou tratamentos de frio ou salga pelas quais as carcaças consideradas positivas são submetidas. O método de diagnóstico rotineiramente utilizado para a cisticercose bovina tem sido a inspeção post-mortem. Muitos pesquisadores têm desenvolvido métodos de diagnóstico antemortem, com especificidade e sensibilidade variadas. O presente estudo teve como objetivo avaliar a aplicação da amplificação de DNA circulante de T. saginata, através da Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR), como ferramenta diagnóstica para cisticercose bovina. Para a realização da pesquisa foram utilizadas amostras de sangue de bovinos abatidos em frigoríficos sob S.I.F., segundo apresentarem ou não cisticercose. Inicialmente avaliaram-se cinco pares de oligonucleotídeos iniciadores através da determinação do limiar de detecção da PCR de cada um deles. Objetivou-se ainda estabelecer qual a fração do sangue experimentalmente contaminado resultaria em amplificação de fragmentos de DNA através da PCR, para posteriormente avaliar a aplicabilidade da PCR em amostras de sangue de bovinos naturalmente infectados com T. saginata. O melhor limiar de detecção foi observado com o uso do par de oligonucleotídeos iniciadores SCAR K, nas frações de sangue denominadas pellet e sobrenadante. As amostras de sangue de animais positivos para cisticercose na inspeção de rotina e submetidos a PCR não resultaram em amplificação do fragmento de DNA desejado, sugerindo que a baixa carga parasitária possa ter influenciado os resultados. / Bovine cysticercosis is caused by the ingestion of T. saginata eggs from contaminated pastures and water provided to animals. It is a public health problem by causing the taeniasis in human beings, but it also causes serious damages in the agro-cattle industry and to the cattle raisers by de condemnation or treatment by coldness or salting of carcass detected as positive. Routinely bovine cysticercosis diagnosis has been the post-mortem inspection. Several researchers have developed ante-mortem diagnosis methods, with variable specificity and sensitivity. The present study aimed at evaluating the amplification of circulating DNA of T. saginata, by the Polymerase Chain Reaction (PCR), as a diagnostic tool to bovine cysticercosis. Blood samples from bovines slaughtered under Federal Meat Inspection abattoirs were taken according to the presence or absence of cyst forms. Initially, we evaluated five primers and established which blood fraction experimentally contaminated resulted in DNA fragment amplification by PCR. The best detection limit was observed with the use of the SCAR K primers, in the blood fractions denominated “pellet” and “supernatant”. Blood samples of naturally infected animals considered positive in the routine inspection didn’t result in the desired DNA fragment amplification by PCR.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-28T10:08:59Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marco Vítor Silva de Melo Costa - 2015.pdf: 1166542 bytes, checksum: bcdd5fa5766049e7e29869d0734d92c8 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-28T10:10:53Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marco Vítor Silva de Melo Costa - 2015.pdf: 1166542 bytes, checksum: bcdd5fa5766049e7e29869d0734d92c8 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-28T10:10:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marco Vítor Silva de Melo Costa - 2015.pdf: 1166542 bytes, checksum: bcdd5fa5766049e7e29869d0734d92c8 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-03-09 / Experimental studies with Taenia crassiceps have been used to demonstrate its metabolic alterations in biochemical pathways (energetic and respiratory) in response to the presence of drugs. The use of T. crassiceps as an experimental model offers conditions to reproduce the neurocysticercosis infection one of the most severe form of human cysticercosis. This study aimed the analysis of the in vitro influence of niclosamide, an antihelminthic drug, on the metabolism of carbohydrates and fatty acids of T. crassiceps cysticerci (ORF strain). 20 larval stage cysticerci were cultured into 5mL of RPMI (Gibco) supplemented culture media, in 6 well culture plates, exposed or not to niclosamide (1, 2, and 3 uM). The control groups were performed with cysticerci not exposed to the drug, exposed to ethanol in the concentration used to dissolve the drug. The cysticerci were cultured at 37ºC for 24 hours. After this period the cysticerci were removed from the culture medium and both were frozen with liquid nitrogen. Afterward, the samples were processed for the HPLC analysis. Accordingly to the mode of action of this drug, which is to interfere in the electrons chain transport, the succinate concentrations were altered in the secretion/excretion of this parasite. Therefore, it is possible to conclude that in the concentrations used, this drug caused little alteration in the metabolic pathways of the parasite. / Os estudos experimentais com o parasito Taenia crassiceps têm demonstrado alterações nas vias metabólicas (energética e respiratória) desse parasito, em resposta ao tratamento com fármacos. A utilização de Taenia crassiceps como modelo experimental oferece condições de se reproduzir a neurocisticercose, uma das formas mais graves da cisticercose humana. Este estudo tem como objetivo analisar a influência in vitro do fármaco anti-helmintico niclosamida, sobre o metabolismo de carboidratos e ácidos graxos de cisticercos de Taenia crassiceps (cepa ORF). Na realização deste estudo foram usados cisticercos em estágios larval de T. crassiceps (cepa ORF) e meio de cultura RPMI suplementado (Gibco). Foram utilizados 100 cisticercos, que foram alocados em placas de microcultura contendo seis poços, expostos ou não a niclosamida (1, 2 e 3 uM). Os grupos controle foram compostos por cisticercos não expostos ao fármaco e ao etanol na concentração utilizada para diluir o fármaco. Em seguida as placas foram à estufa a 37°C por 24 horas. Após esse período, os cisticercos foram retirados da cultura e ambos, parasito e meio de cultura, foram congelados em nitrogênio líquido. Na sequência os cisticercos foram processados para análise em HPLC. De acordo com o mecanismo de ação do fármaco, ou seja, interferência na cadeia transportadora de elétrons, nas concentrações utilizadas, observou-se uma alteração na secreção/ excreção do ácido orgânico succinato. As outras vias metabólicas não foram influenciadas pela ação deste fármaco. Portanto, conclui-se que a niclosamida apresenta baixa influencia no metabolismo dos cisticercos nas concentrações utilizadas.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_hidelbertoM.pdf: 803099 bytes, checksum: 6b3724faf96c2ed68508b711948c6a27 (MD5) Previous issue date: 2011-07-21 / Neurocysticercosis (NCC) is caused by Taenia solium cysticercus and is the main cerebral infection caused by a parasite which can produce seizures and hydrocephaly. Besides the considerable economic losses it is also responsible for over than 50 thousand annual deaths. The use of experimental models has become a good method to the study of human cysticercosis in several organs including the central nervous system. The most used parasite is T. crassiceps cysticerci due to its rapid cycle of development and the antigenic similarity to T. solium and its intraperitoneal model is the most diffused. The inoculation of Mesocestoides corti cysticerci is the most common model of NCC used. Objectives: present a new experimental model to NCC studies by using T. crassiceps cysticerci inoculated into four different mice lineages (BALB/c, BALB/c KO-IL-4, C57BL/6 e C57BL/6 KO-IFNγ) and evaluate the inflammatory response of these animals to the infection during 7, 30, 60 and 90 days after the infection (DAI). This new model showed itself useful into reproducing the disease in animals resulting into lesions and alterations similar to the ones found in humans and without significant damages in the control groups, which enables the study. We observed that BALB/c mice are the less resistant to the infection, presenting greater ventriculomegaly, inflammatory response with the prevalence of acute phase cells and late destruction of the cysticerci when compared to C57BL/6 mice. The latter showed inflammation with prevalence of mononuclear cells and greater efficiency in the destruction of the parasites. When comparing the inflammatory response of conventional BALB/c mice to KO-IL-4 ones it was possible to observe that the absence of IL-4 induces greater parasitism which favors the cysticerci survival, less intensity of the inflammatory response, ventriculomegaly and perivasculitis. Both lineages destroyed the cysticerci at the end of the late phase of the inflammation process. When comparing the inflammatory response of conventional C57BL/6 mice to KO-IFNγ ones, the presence of IFNγ induced greater ventriculomegaly, chronification of the inflammation, microgliosis and precocious destruction of the cysticerci. In the absence of IFNγ the inflammatory response showed less intensity and late destruction of the cysticerci. / A Neurocisticercose (NCC) causada pelo cisticerco da Taenia solium é a principal infecção parasitária cerebral que pode resultar em sintomas clínicos como crises convulsivas e hidrocefalia. Além de consideráveis perdas econômicas, sendo responsável por mais de 50 mil mortes anuais. Os modelos experimentais tornaram-se ótimas ferramentas para o estudo da cisticercose humana em diversos órgãos, incluindo sua foma mais grave a NCC. O parasito mais utilizado nos modelos experimentais da cisticercose é a Taenia crassiceps, devido ao seu rápido ciclo de desenvolvimento e similaridade antigênica com T. solium, sendo o modelo intraperitoneal o mais difundido. A inoculação intracranial de cisticercos de Mesocestoides corti, é o modelo experimental mais utilizado no estudo da NCC. Os objetivos deste trabalho foram apresentar um novo modelo experimental para o estudo da NCC utilizando cisticercos de T. crassiceps, inoculados intracranialmente em quatro linhagens diferentes de camundongos (BALB/c, BALB/c KO-IL-4, C57BL/6 e C57BL/6 KO-IFNγ), bem como avaliar a resposta inflamatória desses animais frente à neuroinfecção, aos 7, 30, 60 e 90 dias após a infecção (DAI). Os animais foram pesados, anestesiados com solução de xilazina/cetamina, realizada a antissepsia e tricotomia local e em seguida realizado o orifício de trepanação para a inoculação dos cisticercos. O orifício era então fechado com massa plástica estéril, suturada a incisão e os animais eutanasiados de acordo com o dia experimental com dose subletal de anestésico para a retirada do encéfalo. O novo modelo apresentado mostrou-se útil em reproduzir a doença nos animais, resultando em lesões e alterações semelhantes às que ocorrem nos seres humanos, baixa perda de animais e sem danos significantes nos controles, facilitando o estudo da doença. Observou-se que os animais BALB/c são menos resistentes à infecção, apresentando uma tendência maior à ventriculomegalia, resposta inflamatória com predomínio de células da fase aguda e destruição tardia dos cisticercos, em relação aos animais C57BL/6. Estes, mostraram uma inflamação com uma tendência ao predomínio de células mononucleares e maior eficiência na destruição dos parasitos. Comparando a resposta inflamatória nos animais BALB/c convencionais e KO-IL-4, ficou evidenciado que a ausência da IL-4 induziu maior parasitismo, favorecendo a sobrevida dos cisticercos, menor intensidade na resposta inflamatória, ventriculomegalia e perivasculite. Ambas as linhagens destruiram os cisticercos no final da fase tardia da inflamação. Na comparação da resposta inflamatória dos camundongos C57BL/6 convencionais e KO-IFNγ, a presença do IFNγ induziu maior ventriculomegalia, cronificação da inflamação, microgliose e destruição precoce dos cisticercos. Na ausência do IFNγ, a resposta inflamatória apresentou menor intensidade e destruição tardia dos cisticercos.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-09-27T19:13:57Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Guaraciara de Andrade Picanço - 2016.pdf: 2488180 bytes, checksum: d4bf0f4c94bf841c42ea4763fd1fcf0e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-09-28T12:22:47Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Guaraciara de Andrade Picanço - 2016.pdf: 2488180 bytes, checksum: d4bf0f4c94bf841c42ea4763fd1fcf0e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-28T12:22:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Guaraciara de Andrade Picanço - 2016.pdf: 2488180 bytes, checksum: d4bf0f4c94bf841c42ea4763fd1fcf0e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-08-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The high prevalence of intestinal and tissue parasites combined with the breakthrough of parasites resistat to albendazole, encouraged the search for new drugs. Studies on the biochemical response of Taenia crassiceps metacestode to drugs has been shown to be important for the detection of modes of action of drugs within the parasite metabolic pathways. In order to develop new anti-parasitic drugs, the benzimidazole derivative 6-Chloro-5- (2,3-dichlorophenoxy) -2- (trifluoromethyl) -1H-benzimidazole (RCB15) was synthesized. The objective of this study was to determine the in vitro effect of a benzimidazole derivative, RCB15, in the energetic and respiratory metabolism of T. crassiceps cysticerci. For this, 30 larval stage cysticerci were plated in culture plates containing supplemented RPMI and albendazole sulfoxide (ABZSO) (6,5 μM, 13 μM, 26 μM, 52 μM or 104 μM) or RCB15 (6,5 μM, 13 μM, 26 μM, 52 μM or 104 μM) diluted in dimethyl sulfoxide (DMSO). After 24 hours of cultivation, the cysticerci were separated from the culture medium and frozen in liquid nitrogen. Analysis on high-performance liquid chromatography to assess the energetic and respiratory metabolism were performed. There was a decrease in glucose concentrations detected in vesicular fluid in all groups treated with RCB15 and the groups treated with the highest dosages of ABZSO. The non detection of lactate in the culture medium of the groups treated with RCB15 indicates that this acid was used as a precursor of gluconeogenesis. The group treated with RCB15 52 uM performed the aerobic energetic pathways due to the non detection of lactate neither in the vesicular fluid nor in the culture medium. With respect to the tricarboxylic acid (TCA) cycle, low concentrations of α-ketoglutarate or non-detection of this organic acid, indicates that the parasite has preferably used the fumarate reductase pathway. Probably the detected α-ketoglutarate was from the protein catabolism. The alternative routes of energy production, were observed in the groups treated with RCB15 26 uM and 104 uM and ABZSO 13 uM. In those groups acetate was used to produce β-hydroxybutyrate which was completely excreted in other treatments and in the control group acetate was excreted due to excess of acetyl-CoA which was not used in the TCA cycle. It is possible to conclude that the TCB15 treatment influenced glycolysis, diminished the energetic sources as it induced the parasite to use other sources to produce energy such as gluconecogenesis and fatty acid oxidation. Cysticerci that were treated with RCB15 and ABZSO preferred the fumarate reductase pathway. The drugs used in this study did not influence the proteins catabolism. The RCB15 treatment presented greater influence in the glucose uptake and consequently in glycolytic pathway when compared to the ABZSO treatment. / A alta prevalência de parasitoses intestinais e teciduais aliada ao surgimento de casos de resistência parasitária ao albendazol, incentivou a busca por novos fármacos. Os estudos da resposta bioquímica de Taenia crassiceps exposto a fármacos tem se mostrado importante para a detecção dos mecanismos de ação dos fármacos sobre as vias metabólicas do parasito. A fim de desenvolver-se novos fármacos anti-parasitários, sintetizou-se o derivado benzimidazólico 6-Cloro-5-(2,3-diclorofenoxi)-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol (RCB15). O objetivo deste trabalho foi determinar o efeito in vitro do derivado benzimidazólico, RCB15, no metabolismo energético e respiratório de cisticercos de T. crassiceps. Para tanto, 30 cisticercos em estádio larval foram semeados em placas de cultura contendo meio RPMI suplementado e acrescido de sulfóxido de albendazol (ABZSO) (6,5 μM, 13 μM, 26 μM, 52 μM ou 104 μM) ou RCB15 (6,5 μM, 13 μM, 26 μM, 52 μM ou 104 μM) diluídos em Dimetilsulfóxido (DMSO). Após 24 horas de cultivo, os cisticercos foram separados do meio de cultura e ambos congelados em nitrogênio líquido. Foram realizadas análises em Cromatografia Líquida de Alta Eficiência para avaliação do metabolismo energético e respiratório dos cisticercos, e por espectrofotometria para dosar glicose, ureia, creatinina e proteínas totais. Observou-se uma diminuição nas concentrações de glicose detectada no fluído vesicular em todos os grupos tratados com RCB15 e nos grupos tratados com as dosagens mais altas de ABZSO. A não detecção de lactato no meio de cultura dos grupos tratados com RCB15 indica que este ácido foi utilizado como precursor da glicose na via da gliconeogênese, o grupo tratado com RCB15 52 μM fez aerobiose, isto é comprovado pelo fato de não haver lactato nem no fluido vesicular nem no meio de cultura. Com relação ao ciclo do ácido cítrico, as baixas concentrações de α-cetoglutarato ou a não detecção deste ácido, indicam que o parasito deu preferência pela via da fumarato-redutase, assim o α-cetoglutarato detectado foi oriundo do catabolismo de proteínas. Quanto as vias alternativas de produção de energia, observou-se que nos grupos tratados com RCB15 26 μM e 104 μM e com ABZSO 13 μM o acetato foi utilizado para produzir β-hidroxibutirato que foi totalmente excretado, nos demais tratamentos e no grupo controle o acetato foi excretado devido ao excesso de acetil-CoA que não foi utilizado no ciclo do ácido cítrico. Conclui-se que o tratamento com RCB15 influenciou a glicólise, diminuiu as fontes energéticas induzindo o parasito a utilizar outras vias para a produção de energia, tais como, a gliconeogênese e a oxidação de ácidos graxos. Os cisticercos que receberam o tratamento com RCB15 e ABZSO preferiram utilizar a via da fumarato redutase. Os compostos utilizados neste estudo não influenciaram no catabolismo de proteínas. O tratamento com RCB15 teve maior impacto na captação de glicose e consequente maior influência na via glicolítica em comparação ao ABZSO.

Neurocisticercose (NCC) é uma infecção parasítica freqüente do sistema nervoso central, principalmente em países em desenvolvimento. Os custos elevados dos exames de neuroimagem (Ressonância Magnética e Tomografia Computadorizada), hoje em dia considerados como os métodos mais precisos no diagnóstico da doença, podem ser inviáveis nestas regiões, além disso, há que se considerar os problemas na correta interpretação dos diversos testes imunológicos disponíveis, freqüentemente difíceis e delicados devido o alto número de falso-positivos e/ou falso-negativos. Nós demonstramos neste trabalho que o DNA de Taenia solium está presente no líquido cefalorraquiano (LCR) de pacientes infectados, permitindo o diagnóstico molecular desses pacientes através da metodologia da PCR (Polymerase Chain Reaction). Neste caso em específico, foi possível estabelecer um diagnóstico preciso para 29/30 (96.7 %) pacientes avaliados, com especificidade de 100%. A presença do DNA do parasita no LCR dos pacientes tem implicações consideráveis no diagnóstico desta importante doença. Além disso, ampliamos significativamente o conhecimento sobre o transcriptoma da Tênia solium produzindo as primeiras 2880 ESTs (Expressed Sequence Tags) deste cestódeo. Em nossas análises encontramos, pelo menos sete novos genes, importantes por poderem exercer um papel importante na luta contra a NCC, pois é através deste conhecimento que se torna identificar os aspectos mais consideráveis desta doença, sendo aperfeiçoando as estratégias de prevenção, encontrando novos antígenos para aperfeiçoar o imunodiagnóstico e/ou possibilitando o desenvolvimento de uma vacina que seja eficiente em proteger e imunizar os hospedeiros. / Neurocysticercosis is a frequent parasitic infection of the central nervous system, mainly in developing countries. High costs of magnetic resonance images (nowadays the most accurate method of diagnosis) may be prohibitive in these regions and the interpretation of the multiple immunologic tests available is often difficult. We demonstrate in this work that Taenia solium DNA is present in the cerebrospinal fluid (CSF) of patients and enabled the correct diagnosis of 29/30 patients (96.7 %) with 100\% specificity through the PCR methodology. The presence of parasite DNA in the CSF of patients may have important consequences over the diagnosis of this important disease. Besides, we enlarge significant the knowledge about Taenia´s transcriptome producing the first 2880 ESTs (Expressed Sequence Tags) of Taenia solium cysticerci. We were able to found at least seven new important genes that may be a important role in a battle against neurocysticercosis because through them it is possible identify considerable aspects of this disease, even though establishing other and efficient strategies of prevention, founding new antigens to improve the immunodiagnosis or building a vaccine to protect the hosts that carry on this important parasite.

Introdução: A frequência de detecção de bandas oligoclonais (BOC) em doentes com esclerose múltipla (EM) na cidade de São Paulo é significativamente mais baixa do que em outras cidades do Brasil e de outros países, principalmente da Europa e da América do Norte. Não se conhece o motivo pelo qual isso ocorre. Uma das hipóteses mais interessantes relacionada à imunopatogenia da EM é a chamada Hipótese Higiênica, que postula uma relação inversamente proporcional entre a prevalência de infecções por parasitas e a frequência da EM. Objetivo: verificar se há relação entre a ocorrência de anticorpos contra parasitas no soro sanguíneo e a detecção de BOC em pacientes diagnosticados com EM na cidade de São Paulo. Métodos: Foram estudados 164 pacientes do Ambulatório de Doenças Desmielinizantes da Divisão de Neurologia Clínica e da Divisão de Anestesia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo dos quais foram obtidas as amostras de LCR e de soro em que foi realizado este estudo. Esses pacientes foram separados em 4 grupos (EM, CIS, Grupo Controle com Pacientes de DNI e Grupo Controle com Pacientes sem Queixas Neurológicas) nos quais foram identificadas as presenças de BOC e de anticorpos parasitários. Para a detecção de anticorpos parasitários, foi utilizada a técnica de eletroforese unidimensional de proteínas em gel de poliacrilamida em sistema descontínuo, com antígenos LV-Tcra (líquido vesicular de Taenia crassiceps) e ES-Tcra (líquido excreção/secreção de Taenia crassiceps). Resultados: Dos 164 pacientes estudados, separados em seus respectivos grupos, foram pesquisados anticorpos antiparasitários de baixo e de alto peso molecular. Esses anticorpos foram observados em 103 pacientes nos quais não havia 13 BOC. Destes, 2 apresentaram anticorpos de baixo peso molecular e 59 anticorpos de alto peso molecular. Dos 61 pacientes em que havia BOC, foram encontrados anticorpos de baixo peso molecular em um; 16 apresentaram anticorpos de alto peso molecular. Conclusão: Em doentes com EM clinicamente definida anticorpos anti-Taenia foram detectados com a mesma frequência em pacientes com BOC e em pacientes sem BOC / Introduction: The frequency of oligoclonal bands (OCB) detection in patients with multiple sclerosis (MS) in the city of São Paulo is significantly lower than in other cities of Brazil and other countries, mainly Europe and North America. To date, the reason for its occurrence is still unknown. One of the most interesting hypotheses related to the immunopathogenesis of MS is the so-called Hygiene Hypothesis, which postulates an inverse relationship between the prevalence of parasitic infections and the frequency of MS. Objective: This study examined whether there is a relationship between the occurrence of antibodies against parasites in blood serum and the detection of OCB in patients diagnosed with MS in the city of São Paulo. Methods: We have studied 164 patients from the Demyelinating Diseases Clinic of the Division of Clinical Neurology and Division of Anesthesia Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo from whom CSF and serum samples were obtained and which were used to conduct the present study. These patients were divided into 4 groups: MS, Clinically Isolated Syndrome (CIS), control group with patients with Inflammatory Neurologic Diseases (IND) and Control Group with patients without neurologic complaints, in whom the presence of OCB and anti- parasitic antibodies was identified. For the detection of parasitic antibodies, the unidimensional electrophoresis of proteins in polyacrylamide gel in a batch system with LV-Tcra antigens (Taenia crassiceps vesicular fluid) and ES-Tcra (net excretion / secretion of Taenia crassiceps) was used. Results: Of the 164 patients studied, separated into their respective groups, anti- parasite antibodies of low and high molecular weight were analyzed. A total of 103 patients presented no OCB, and of these, 2 had antibodies of low molecular weight and 59 presented antibodies of high molecular weight. Of the 61 patients with OCB positive, one showed antibodies of low molecular weight and 16 antibodies of high molecular weight. Conclusion: This study showed that in patients with clinically established MS. anti-Taenia antibodies occurred with the same frequency in patients with OCB and in patients without OCB

Background: Despite the acknowledged importance of economic assessments for public health interventions at the human-animal-ecosystem interface, there are currently limited economic methodologies for doing so. In this thesis studies were undertaken to ascertain the economic impact of interventions to control trypanosomiasis and taeniasis/cysticercosis in south-east Uganda and northern Lao PDR respectively. Also, in Uganda studies were done to find out if demand of draft cattle would be an important economic driver for spreading trypanosomiasis due to inter-district trade. Method: In Uganda, a one year recall cross-sectional baseline survey and an 18 month longitudinal survey of 660 households was conducted; to determine the benefits and changes due to restricted application of deltamethrin insecticide to only the legs, belly and ears of cattle. During the 18 month study, the households participating in the study were divided into six regimes depending on the type of intervention done in their cattle and these were; diminazine injection only, deworming only, no treatment and those had 25%, 50% and 75% of the total village cattle sprayed. Thus, the first three regimes were those households that had their cattle not sprayed with insecticide at all as opposed to the last three. Additionally, cattle trade data was collected for network and value chain analysis in all markets in Tororo and Namutamba districts from 199 cattle traders. In northern Lao PDR, stochastic modelling was done to determine the burden of neurocysticercosis associated epilepsy and soil transmitted helminthes. A cross-sectional study was carried out in 49 households, focusing on the prevalence of cysticercosis and soil transmitted helminths before and after a twelve month intervention to control a hyperendemic focus of Taenia solium. The village data was then extrapolated to the wider northern Lao PDR population. Results: The Uganda study indicated that the restricted application of deltamethrin in cattle induced change of USD 31 per head of adult bovine per year; this was the change in income that directly occurred due to restricted spraying of cattle with deltamethrin. During the intervention period, the annual difference in income between those households that had their cattle sprayed using restricted application protocol and those that did not was USD 123; and this was significant (t= 7.18, p= < 0.001). Analysis of variance using households that had their cattle receive no treatment as control showed that restricted application of deltamethrin significantly increased household income compared to diminazine aceturate injection and deworming of cattle only. The incremental benefit cost ratio of spraying 0% to 25% of the cattle was found to be the highest (16:1) compared to spraying 25% to 50% (3:1) and 50% to 75% (1:1) of the cattle. Cattle trade network and value chain analysis revealed that the key cattle markets from which trypanosomiasis is likely to spread into Tororo District are Molo, Namutumba and Soroti. Also, it was found that the risk of spread of human African trypanosomiasis from south-east to north-west Uganda is high due to the increased demand for male cattle for draft work. In northern Lao PDR, 5,094 (95% CI: 25.6-28,940) DALYs were estimated to be imposed annually due to Taenia solium associated epilepsy, with 446.4 (95% CI: 2.2- 2,536) DALY imposed per 100,000 person-years. Due to the high benefits to pig production, the net monetary cost per DALY averted for simultaneously controlling T. solium, soil transmitted helminthes and classical swine fever was only USD 14, which fell to USD 11 if the separable cost method were applied. If the intervention did not target pigs, then the cost per DALY averted was USD 44; well below the current standard for ’very cost effective ‘of the 1 year’s per capita GDP. Conclusion: This study provided empirical evidence for evaluating the impact of quantifying the benefits of controlling zoonotic diseases in the livestock sector (Uganda case study) and in both livestock and human health populations (Lao PDR case study); this economic assessment approach can be used for planning future integrated health interventions. The results of this study support the policy of preventing the spread of infection by spraying at least 25% of the cattle using RAP, as well as injecting all cattle in key livestock markets in south east Uganda with diminazine aceturate to prevent HAT. In northern Lao PDR, simultaneous control of T. solium, soil transmitted helminths and classical swine fever is the most cost-effective approach. There are still difficulties in incorporating human and animal parameters into a single analytical framework; consequently there is a need to adapt the approaches undertaken in this study to the analysis of other zoonotic diseases in different settings to improve on their robustness.