The cells from the inner cell mass (ICM) of an early embryo have the potential to differentiate into all the different cell types present in an adult organism. Cells from the ICM can be isolated and cultured in vitro, becoming embryonic stem cells (ESCs). ESCs have several properties that make them unique: they are unspecialized, can self-renew indefinitely in culture, and given the appropriate cues can differentiate into cells from all three germ layers (ecto-, meso-, and endoderm), including the germline, both in vivo and in vitro. Induced pluripotent stem cells (iPSCs) can be generated from adult, terminally differentiated somatic cells by transient exogenous expression of four transcription factors (Oct4, Sox2, Klf4, and cMyc; OSKM) present normally in ESCs. It has been shown that iPSCs are equivalent to ESCs in terms of morphology, gene expression, epigenetic signatures, in vitro proliferation capacity, and in vitro and in vivo differentiation potential. However, unlike ESCs, iPSCs can be obtained from a specific individual without the need for embryos. This makes them a promising source of pluripotent cells for regenerative medicine, tissue engineering, drug discovery, and disease modelling; additionally, in livestock species such as the bovine, they also have applications in genetic selection, production of transgenic animals for agricultural and biomedical purposes, and species conservancy. Nevertheless, ESC and iPSC lines that meet all pluripotency criteria have, to date, only been successfully produced in mice, rats, humans, and non-human primates. In the first part of this dissertation, we attempted reprogramming of three types of bovine somatic cells: fetal fibroblasts (bFFs), adult fibroblasts (bAFs), and bone marrow-derived mesenchymal stem cells (bMSCs), using six different culture conditions adapted from recent work in mice and humans. Using basic mouse reprogramming conditions, we did not succeed in inducing formation of ESC-like colonies in bovine somatic cells. The combination of 2i/LIF plus ALK5 inhibitor II and ascorbic acid, induced formation of colony-like structures with flat morphology, that occasionally produced trophoblast-like structures. These trophoblast-like vesicles did not appear when an inhibitor of Rho-associated, coiled-coil containing protein kinase 1 (ROCK) was included in the medium. We screened for expression of exogenous OSKM vector with RT-PCR and found upregulation of OSKM vector 24h after Dox was added to the medium; however, expression was sharply decreased on day 2 after Dox induction, and was not detectable after day 3. In a separate experiment, we induced reprogramming of bFF and bAFs using medium supplemented with 50% of medium conditioned by co-culture with the bovine trophoblast CT1 line. These cells expressed both OCT4 and the OSKM vector 24h after Dox induction. However, similar to our previous observations, both markers decreased expression until no signal was detected after day 3. In summary, we were unable to produce fully reprogrammed bovine iPSCs using mouse and human protocols, and the exact cause of our lack of success is unclear. It is possible that a different method of transgene expression could play a role in reprogramming. However, these ideas would be driven by a rather empirical reasoning, extrapolating findings from other species, and not contributing in our understanding of the particular differences of pluripotecy in ungulates. Our inability to produce bovine iPSCs, combined with the only partial reprogramming observed by others, justifies the need for in depth study of bovine pluripotency mechanisms, before meaningful attempts to reprogram bovine somatic cells to plutipotency are made. Therefore, we focused on getting a better understanding of bovine nuclear reprogramming. This would allow us to rationally target the specific requirements of potential bovine pluripotent cells. Cell fusion is a process that involves fusion of the membrane of two or more cells to form a multinucleated cell. Fusion of a somatic cell to an ESC is known to induce expression of pluripotency markers in the somatic nucleus. In the second part of this dissertation, we hypothesized that fusion of bFFs to mouse ESCs (mESCs) would induce expression of pluripotency markers in the bFF nucleus. We first optimized a cell fusion protocol based on the use of polyethylene glycol (PEG), and obtained up to 11.02% of multinucleated cells in bFFs. Next, we established a method to specifically select for multinucleated cells originated from the fusion of mESCs with bFFs (heterokaryons), using indirect immunofluorescence. With this in place, flow cytometry was used to select 200 heterokaryons which were further analyzed using RNA-seq. We found changes in bovine gene expression patterns between bFFs and heterokaryons obtained 24h after fusion. Focusing on the bovine transcriptome, heterokaryons presented upregulation of early pluripotency markers OCT4 and KLF4, as well as hypoxia response genes, contrasted with downregulation of cell cycle inhibitors such as SST. The cytokine IL6, known to increase survival of early embryos in vitro, was upregulated in heterokaryons, although its role and mechanism of action is still unclear. This indicates that the heterokaryon cell fusion model recapitulates several of the events of early reprogramming, and can therefore be used for further study of pluripotency in the bovine. The cell fusion model presented here can be used as a tool to characterize early changes in bovine somatic nuclear reprogramming, and to study the effect of different reprogramming conditions on the bovine transcriptome. / Ph. D. / The cells of an early embryo have the potential to give rise to any cell type found in the adult body. When these cells are transferred to a culture dish and kept under the right conditions, they become Embryonic Stem Cells (ESCs), and they retain the same developmental potential as the original embryonic cells they were derived from. In 2006, researchers in Japan found that it is possible to “reprogram” the cells of an adult individual (for example, fibroblast skin cells taken from a biopsy) to an embryonic state, by forcing the cells to express extra copies of genes that are normally active in embryos. These reprogrammed cells are called induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs), and similarly to ESCs, they also have the potential to produce any cell type found in an adult organism. Lines of iPSCs from livestock species have possible applications in agriculture, species conservancy, biomedical industry, and veterinary and human health. Unfortunately, for reasons that are to date not fully understood, the technology to produce iPSCs has, so far, only worked in mice, rats, humans, and non-human primates. We first attempted to produce bovine iPSCs by adapting methods and conditions used to derive iPSCs in mice and humans. We observed partial reprogramming of bovine cells, but were ultimately not able to produce true bovine iPSCs. This suggests that the bovine requires alternative/additional factors to induce reprogramming in adult cells. However, not knowing exactly what conditions or reagents will induce the reprogramming process in the cow, we decided to take a different approach. We focused on trying to understand how nuclear reprogramming works in the bovine. This would allow us to rationally target the specific requirements of potential bovine pluripotent cells. It is known that the fusion (“merging”) of an adult cell with a stem cell, causes the adult cell to change its gene expression pattern to resemble a stem cell. We therefore fused mouse ESCs with bovine fibroblasts, and observed changes in bovine gene expression pattern as early as 24 hours after fusion. The gene expression changes observed resemble those found during early reprogramming of human and mouse iPSCs, and are accompanied by silencing of fibroblast specific genes. This suggests that our cell fusion model recreates the changes that happen during reprogramming, and can therefore be used as a tool to better understand pluripotency in the cow. The cell fusion method described in this dissertation can in theory be adapted to other species; by fusing somatic cells from other species to mouse ESCs, this model can be used to find species specific relevant pluripotency genes.

No description available.

Orientador: Fernando Sebastián Baldi Rey / Resumo: A compreensão de processos regulatórios e organização molecular dos organismos vivos progrediram consideravelmente na última década. As metodologias também evoluíram com o sequenciamento de DNA e RNA e de ferramentas genômicas permitindo a análise de centenas ou milhares de genes, proteínas ou metabólitos. O uso simultâneo dessas informações auxilia na obteção de informações relevantes sobre as variáveis que envolvem as variações fenotípicas de características de interesse. O objetivo do presente estudo foi integrar dados fenotípicos, genotípicos e transcriptômicos em busca de aprimoramento sobre os mecanismos genéticos e metabólicos que determinam o perfil de ácidos graxos na carne de bovinos Nelore, a fim de contribuir para o melhoramento da composição de ácidos graxos da carne. Foram utilizados machos da raça Nelore terminados em confinamento, abatidos com média de idade 24 meses. Amostras do músculo L. thoracis, entre a 12ª a 13ª costela foram coletadas para as análises de perfil de ácidos graxos, extração de RNA e de DNA. Os resultados foram apresentados nos capítulos 2 e 3. No capítulo 2, o objetivo foi identificar genes diferencialmente expressos pelo método RNA-seq e perfil de ácidos graxos no músculo L. thoracis com uso de componentes principais (principal components: PC). Foram selecionados dois grupos de 10 animais, os quais possuíam valores de PC1 e PC2 extremos (Alto x Baixo) para os grupos somatórios de ácidos graxos (AG): ácidos graxos saturados (AGS), ácidos g... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The understanding of regulatory processes and molecular organization of organisms has progressed considerably in the last 10 years.The methodologies also evolved with the sequencing of DNA, RNA and genomic tools allowing the analysis a lot of genes, proteins or metabolites. The simultaneous use of this information should help to obtain relevant information about the variables that result the phenotypic variations of traits of interest. The objective of the present study was to integrate phenotypic, genotypic and transcriptomic studies in order to clarify the genetic and metabolic mechanisms that determine the fatty acid profile in Nelore beef, in order to contribute to the improvement of the fatty acid composition of the meat. Nelore males were used in feedlot, coming from farms that integrate three breeding programs and slaughtered with an average of 24 months. Samples of the L. thoracis muscle between the 12th to 13th rib were collected for analysis of fatty acid profile, RNA and DNA extraction. The results were presented in chapters 2 and 3. In chapter 2, the objective was to identify genes differentially expressed by RNA-seq method and fatty acid profile in the L. thoracis muscle with the use of Principal Components (PC). Two groups of 10 animals were selected, which had PC1 and PC2 extreme values (High x Low) for the fatty acids (FA) groups: saturated fatty acids (SFA), monounsaturated fatty acids (MUFA), polyunsaturated fatty acids (PUFA), omega 3 (n-3) and omega 6 (n-6... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Em diferentes programas de melhoramento genético, o acompanhamento do progresso genético é essencial para possibilitar ajustes necessários à sua utilização. No Brasil, além de ser considerada uma das raças mais utilizadas para a produção de fêmeas mestiças leiteiras, a raça Gir Leiteiro lidera a lista das raças exportadoras de sêmen. Por conta disso, este estudo objetivou estimar os parâmetros e as tendências genéticas para vinte características de produção, conformação e manejo de animais puros da raça, integrantes do Programa Nacional de Melhoramento do Gir Leiteiro, além das tendências fenotípicas e das tendências genéticas para quatro trajetórias de seleção para produção de leite e de gordura. A metodologia utilizada foi a da Máxima Verossimilhança Restrita em um modelo animal. As tendências genéticas para todas as características foram obtidas via regressão linear das médias dos valores genéticos em função do ano de nascimento dos animais, que em geral, variou de 1935 a 2013. As herdabilidades foram de 0,23 (leite), 0,10 (gordura) e variaram de 0,01 a 0,53 para as características lineares de conformação e manejo. Para produção de leite em 305 dias, houve favorável progresso genético ao longo do tempo, para fêmeas mensuradas (14,04 kg/ano), fêmeas (8,27 kg/ano) e machos (6,12 kg/ano), quanto para as quatro trajetórias de seleção (pais de touros, pais de vacas, mães de touros e mães de vacas). As tendências genéticas para produção de gordura em 305 dias, embora positivas, foram de baixa magnitude. As mudanças genéticas nas características lineares foram em geral, variáveis e inexpressivas, sugerindo que a seleção no Gir Leiteiro tenha sido direcionada essencialmente para maior produção de leite. A provável maior adesão pelos criadores ao uso de reprodutores comprovadamente geneticamente superiores e as melhorias ambientais (nutrição e manejo), possibilitaram incrementos fenotípicos nas produções de leite (55,38 kg/ano) e de gordura (0,91 kg/ano) em bovinos puros da raça Gir Leiteiro no Brasil. / In different breeding programs for genetic improvement, the monitoring of genetic progress is essential to allow for the necessary adjustments to its use. In Brazil, besides being considered one of the most used breeds for the production of crossbred dairy females, the Dairy Gir breed leads the list of semen export breeds. The objective of this study was to estimate parameters and genetic trends for nineteen traits of production, conformation and management of purebred animals of the National Breeding Program for Dairy Gir, in addition to the phenotypic trends and genetic trends for four selection trajectories for the milk yield and fat yield productions. The methodology used was that of Restricted Maximum Likelihood in an animal model. The genetic trends for all traits were obtained through linear regression of the means of genetic values according to the year of birth of the animals, which generally varied from 1935 to 2013. The heritabilities were 0.23 (milk), 0.10 (fat) and ranged from 0.01 to 0.53 for the linear conformation and management traits. The milk yield in 305 days presented favorable genetic progression over time for both mensured females (14.04 kg/year), females (8.27 kg/year) and males (6.12 kg/year), and for the four selection trajectories. The genetic trends for fat yield production in 305 days, although positive, were of low magnitude. The genetic changes in the linear characteristics were in general, variable and inexpressive, suggesting that the selection in Dairy Gir has been directed essentially to a greater milk yield. The probable higher adhesion by breeders to the use of genetically superior breeding herds and environmental improvements (nutrition and management), allowed for phenotypic increases in the milk yield (55.38 kg/year) and fat yield (0.91 kg/year) in the Dairy Gir cattle in Brazil.

Beef quality in Brazil is important for both consumers and the food industry due to high demand and competitiveness in the domestic and international markets. Therefore, it is necessary to develop research to improve beef quality of Nellore cattle (Bos indicus), mainly tenderness, one of the main features to add value to meat. New-generation technologies provide accurate, rapid and inexpensive information on the entire genome, showing great advantage over conventional methods for sequencing and gene expression. However, these new technologies generate large database, which require the use of bioinformatics tools for data analyses of sequencing and for a better understanding of biological regulation mechanisms , cellular control, gene interactions, among other applications. In a previous study, samples were collected from the Longissimus dorsi muscle of 790 animals from Nellore cattle and shear force assessments were made 24 hours after slaughter, with seven and 14 days of aging. Aiming to identify differentially expressed (DE) genes, 34 samples from Nellore animals with extreme levels of estimated breeding value (EBV) for shear force (SF) were selected, sequenced by the method of RNA sequencing (RNA-Seq) (Illumina HiScanSQ). This study performed the processing of data generated by RNA-Seq using software QuasiSeq and Cuffdiff. In the QuasiSeq analysis, 22 DE genes were found, while in the Cuffdiff analysis, 113 DE genes were found. To better understand the biological process involved in meat tenderness, integrative analysis identified possible regulators that can explain the activity of transcriptional regulation in this process using partial correlation coefficient with information theory (PCIT), phenotypic impact factor (PIF) and regulatory impact factor (RIF) methods. The genes found in the PCIT analysis USP2, GBR10, ANO1 and TMBIM4; microRNAs found in RIF analysis bta-mir-133a-2 and bta-mir-22, and the genes with high PIF value MB, ENO3, CA3 could be fundamental to unravel the complex molecular mechanisms that control the meat tenderness in Nellore cattle. / A qualidade da carne bovina no Brasil é importante tanto para o consumidor, como para a indústria alimentícia devido à alta competitividade e exigência do mercado nacional e internacional. Portanto, é necessário o desenvolvimento de pesquisas para melhorar a qualidade da carne bovina da raça Nelore (Bos indicus), principalmente a maciez, que é considerada uma das principais responsáveis por agregar valor à carne. Tecnologias de nova geração proporcionam informações precisas, rápidas e baratas de todo genoma, mostrando grande vantagem em relação aos métodos convencionais de sequenciamento e de estudos de expressão gênica. Essas novas tecnologias geram um grande volume de dados, sendo necessário o uso de ferramentas de bioinformática para realizar as análises de sequenciamento e ter uma maior compreensão de mecanismos biológicos de regulação, controle celular, interações gênicas, entre outras aplicações. Em um estudo prévio, foram coletadas amostras do músculo Longissimus dorsi de 790 animais da raça Nelore e foram realizadas avaliações da força de cisalhamento 24 horas após abate, e com sete e 14 dias de maturação. Com o objetivo de identificar genes diferencialmente expressos (DE), foram selecionadas no total 34 amostras de animais da raça Nelore com valores extremos de valor genético estimado (EBV) para força de cisalhamento (SF), e sequenciados pelo método de sequenciamento de RNA (RNA-Seq) (Illumina HiScanSQ). Neste estudo foi realizado o processamento dos dados gerados pelo RNA-Seq através dos softwares QuasiSeq e Cuffdiff. Foram encontrados 22 genes DE para as análises do QuasiSeq e 113 genes DE para as análises do Cuffdiff. Para melhor compreensão dos processos biológicos envolvidos na maciez da carne, análises integrativas identificaram possíveis reguladores que podem explicar a atividade de regulação transcricional neste processo utilizando os métodos do Coeficiente de Correlação Parcial com Teoria da Informação (PCIT), Fator de Impacto Fenotípico (PIF) e Fator de Impacto Regulatório (RIF). Os genes encontrados nas análises análises do PCIT USP2, GBR10, ANO1 e TMBIM4, assim como os microRNAs encontrados nas análises do RIF, bta-mir-133a-2 e bta-mir-22 e os genes de maior valor de PIF MB, ENO3, CA3 podem ser fundamentais para desvendar os complexos mecanismos moleculares que controlam a maciez da carne na raça Nelore.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-25Bitstream added on 2014-06-13T20:13:50Z : No. of bitstreams: 1 rosa_fs_me_botib.pdf: 208583 bytes, checksum: 815e421ed7e171ad3f2ddc3c714c6710 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / The protocol called P-36 has been broad/y used to induce multiple ovulations, due to the fact that it allows fixed-time artificial insemination (FTAI), and facilitates embryo donors handling. Recent studies with P-36 protocol, have shownthat replacement of the last two doses of FSH by eCG improves embryo yield. However, after consecutive use, eCG may induce antibody and decrease bovine embryo production. The objective of the present study is to verify the efficiency of protocol P-36/eCG in Angus breed, and to test the replacement of eCG by LH in the last day of superestimulatory treatment. In experiment 1, 22 Angus cows were randomly allotted to 4 groups: LH60 (Control), LH60/eCG, LH60/LH and LH60/FSH+LH. Each donor was superovulated 3 times, in such a way that each animal received 3 of 4 treatments, totaling 17 cows in the first two groups and 16 in the others (incomplete block design). At a random stage of the estrous cycle (DO), the embryo donors received an intravaginal device (lVO) containing 1.0 9 of progesterone and estradiol benzoate (3.0 mg, i.m.). In the control group the animais were superestimulated with pFSH (i.m., total dose = 200 mg) twice a day in decreasing doses from 04 to 7, whereas in groups LH60/eCG and LH60/LH the last two doses of FSH were replaced by eCG (i.m, total dose = 400 lU) or LH (i.m., total dose = 2.0 mg), respectively. Finally, the cows trom group LH60/FSH+LH received two doses of 1.0 mg of LH simultaneously with the last two doses of FSH. Ali animais were treated with dc1oprostenol (150 mg, i.m.) on day 6, and the IVD was removed 36 h after PGF2a administration. Ovulation was induced with 12.5 mg of pLH (i.m.), on day 8, and the animais were FTAI 12 and 24 h after pLH. In experiment 2, 17 cows were randomly allocated in 3 groups: LH48, LH60 and LH48/FSH+LH. The difference between the first and the second experiment is that in groups LH48 and LH48/FSH+LH ... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Ciro Moraes Barros / Banca: Roberto Sartori / Banca: Ronaldo Luiz Ereno / Resumo:O protocolo denominado P-36 tem sido amplamente utilizado para induzir ovulação múltipla, por permitir a inseminação artificial em tempo fixo (IATF) e facilitar o manejo de doadoras de embriões. Estudos recentes com o P-36, mostram que a substituição das últimas duas doses de FSH por eCG melhora a produção de embriões. Entretanto, aplicações sucessivas de eCG podem induzir a formação de anticorpos e diminuir a produção de embriões bovinos. Objetiva-se com o presente trabalho verificar a eficiência do Protocolo P- 36/eCG em vacas da raça Angus e testar a possibilidade de substituir a eCG pelo LH, no último dia do tratamento superestimulatório. No primeiro experimento, 22 vacas Angus foram distribuídas em 4 grupos: LH60 (controle) LH6ü/eCG, LH60/LH e LH60/FSH+LH. Cada doadora foi superovulada 3 vezes, de forma que um mesmo animal recebeu 3 dos 4 tratamentos, totalizando 17 vacas nos dois primeiros grupos e 16 nos demais, em um delineamento experimental de blocos incompletos. Em dia aleatório do ciclo estral (DO), as doadoras receberam um dispositivo intravaginal contendo 1,0 g de progesterona (DIV) e benzoato de estradiol (3 mg, via 1M). No grupo controle, os animais foram superestimulados com pFSH (via 1M, dose total = 200 mg) duas vezes ao dia em doses decrescentes do 04 ao 07, enquanto que no grupo LH60leCG e LH60/LH as duas últimas doses de FSH foram substituídas por eCG (totalizando 400 UI via 1M) ou pLH (totalizando 2 mg, via 1M), respectivamente. Finalmente, as vacas do grupo LH60/FSH+LH receberam duas doses de 1,0 mg de pLH juntamente com as duas últimas doses de pFSH. Todas as vacas foram tratadas com d-c1oprostenol (150 mg, via 1M) no dia 6, e o DIV foi removido 36 h após a administração da PGF2a. No dia 8, a ovulação foi induzida com 12,5 mg de pLH (via 1M,) e os animais foram IATF 12 e 24 h após a aplicação de pLH. No segundo experimento, ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The protocol called P-36 has been broad/y used to induce multiple ovulations, due to the fact that it allows fixed-time artificial insemination (FTAI), and facilitates embryo donors handling. Recent studies with P-36 protocol, have shownthat replacement of the last two doses of FSH by eCG improves embryo yield. However, after consecutive use, eCG may induce antibody and decrease bovine embryo production. The objective of the present study is to verify the efficiency of protocol P-36/eCG in Angus breed, and to test the replacement of eCG by LH in the last day of superestimulatory treatment. In experiment 1, 22 Angus cows were randomly allotted to 4 groups: LH60 (Control), LH60/eCG, LH60/LH and LH60/FSH+LH. Each donor was superovulated 3 times, in such a way that each animal received 3 of 4 treatments, totaling 17 cows in the first two groups and 16 in the others (incomplete block design). At a random stage of the estrous cycle (DO), the embryo donors received an intravaginal device (lVO) containing 1.0 9 of progesterone and estradiol benzoate (3.0 mg, i.m.). In the control group the animais were superestimulated with pFSH (i.m., total dose = 200 mg) twice a day in decreasing doses from 04 to 7, whereas in groups LH60/eCG and LH60/LH the last two doses of FSH were replaced by eCG (i.m, total dose = 400 lU) or LH (i.m., total dose = 2.0 mg), respectively. Finally, the cows trom group LH60/FSH+LH received two doses of 1.0 mg of LH simultaneously with the last two doses of FSH. Ali animais were treated with dc1oprostenol (150 mg, i.m.) on day 6, and the IVD was removed 36 h after PGF2a administration. Ovulation was induced with 12.5 mg of pLH (i.m.), on day 8, and the animais were FTAI 12 and 24 h after pLH. In experiment 2, 17 cows were randomly allocated in 3 groups: LH48, LH60 and LH48/FSH+LH. The difference between the first and the second experiment is that in groups LH48 and LH48/FSH+LH ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / The purpose of this study is to evaluate the amount of transcripts from the Major Histocompatibility Complex (MHC) class I classical (BoLA-N *) and non-classical (BoLA-NC*), as well as of TNF-α (Tumor Necrosis Factor alpha) and TGF-β1 (Transforming Growth Factor beta 1) cytokines in bovine non-pregnant uterus, caruncles, cotyledons and blastocysts throughout the pregnancy period, in order to understand the immune and physiological mechanisms that occur in pregnancy in cows. The samples were analyzed by qPCR, the qualification (presence or absence) by conventional RT-PCR and the immune fluorescence with sheep monoclonal antibody against MHC class I. As positive control we used a sample of tissue from the bovine lymph node and/or spleen in all experimental tests. The amount of transcript BoLA-N* and BoLA-NC* was small (fold change 0 to 3) in blastocysts and cotyledons. Cotyledons transcription BoLA-NC* is greater than the transcription of BoLA-N*. Blastocysts transcription of BoLA-N* was higher than BoLA-NC*. Blastocysts transcribed more BoLA-NC2 than in cotyledons. Blastocysts not transcribed BoLA-NC4. Cotyledons transcribed BoLA-NC4 more than BoLA-NC2. The caruncles showed large amounts of transcripts (fold change 5 to 400), which were higher for pregnancy period of \"8-9\" month to BoLA-N* and one month for BoLA-NC*. Caruncles BoLA-NC2 transcription was higher than the BoLA-NC4. The uterus non pregnant had fewer transcripts BoLA-N* and BoLA-NC* than in caruncles. The uterus non pregnant no have transcripts of BoLA-NC2, but they had a small amount of transcripts of BoLA-NC4. Caruncles had large amounts of transcripts (fold change 50 to 500) of BoLA-NC2 with pregnancy age greater than one month; those are seemed to protect the fetus from rejection. TNF-α appears in greater amount in late gestation (8 and 9 months), showing the beginning of an inflammatory reaction, necessary to the adequate removal of the fetus and the placenta during delivery. Since TGF-β1 has a peak of expression in the sixth and seventh months of gestation, just when the fetus has its greatest growth, demonstrating a probable involvement of this cytokine in this phenomenon. / Com o intuito de entender os mecanismos imunofisiológicos da gestação em vacas esta tese teve como objetivo avaliar a quantidade de transcritos do Complexo de Histocompatibilidade Principal (MHC) de classe I clássico (BoLA-N*) e não clássico (BoLA-NC*), bem como das citocinas TNF-α (Fator de Necrose Tumoral alfa) e TGF-β1 (Fator de Crescimento Transformador beta 1) em úteros não gestantes, carúnculas, blastocistos e cotilédones bovino durante todo o período gestacional. Utilizou-se a quantificação por qPCR, a qualificação (presença ou ausência) via RT-PCR convencional e a imunofluorescência com anticorpo primário monoclonal MHC de classe I ovino. Como controle positivo foi utilizado uma amostra de tecido de linfonodo e/ou baço bovino em todos os ensaios experimentais. A quantidade de transcrito de BoLA de classe I clássico e não clássico foi pequena (fold change variando de 0 a 3) nos blastocistos e cotilédones. Nos cotilédones a transcrição de BoLA-NC* foi maior do que a transcrição de BoLA-N*. Nos blastocistos houve maior transcrição de BoLA-N* do que de BoLA-NC*. BoLA-NC2 transcreveu mais nos blastocisto do que nos cotilédones. BoLA-NC4 não transcreveu nos blastocistos. Os cotilédones transcreveram mais BoLA-NC4 do que BoLA-NC2. As carúnculas apresentaram grandes quantidades de transcritos (fold change variando de 5 a 400), que foram maiores nos períodos gestacionais de 8 a 9 para BoLA_N* e até 1 mês para BoLA-NC*. A transcrição de BoLA-NC2 foi maior do que a de BoLA-NC4 nas carúncula. O útero não gestante teve menor quantidade de transcritos de BoLA-N* e BoLA-NC* do que nas carúnculas. Não há transcrição de BoLA-NC2 no útero não gestante, mas há uma pequena quantidade de transcritos de BoLA-NC4 neste tecido. A presença de grandes quantidades de transcritos (fold change variando de 50 a 500) de BoLA-NC2 nas carúnculas, com idade gestacional maior do que um mês, parece proteger o feto da rejeição. Nas carúnculas parece existir um pico de transcrição de TGF-β1 no sexto e sétimo meses de gestação, justamente quando o feto tem seu maior crescimento, sinalizando um provável envolvimento desta citocina neste fenômeno. O TNF-α surge em maior quantidade no final da gestação, tanto nas carúnculas quanto nos cotilédones, demonstrando o início de uma reação inflamatória, necessária para a adequada expulsão do concepto e da placenta durante o parto. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-05-04T12:31:58Z No. of bitstreams: 1 Guilherme Aniceto Veras.pdf: 755618 bytes, checksum: abf9279c842f5f903daa9429771d78c0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-04T12:31:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guilherme Aniceto Veras.pdf: 755618 bytes, checksum: abf9279c842f5f903daa9429771d78c0 (MD5) Previous issue date: 2013-08-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The aim of this study was to evaluate the effect of different progesterone concentrations (P4) on follicular dynamics in Holstein heifers (Bos taurus) subjected to synchronization of estrus and ovulation. The experiment was conducted at the Experimental Station of São Bento do Una/PE Agronomic Institute of Pernambuco / IPA, between September and December 2012. There were used 19 pubertal Holstein heifers presenting BSC between 3.0 and 3.5 and kept in intensive system. The heifers were divided into two groups, receiving an intravaginal devices at D0 containing 0.75 g of P4 in G1 (n = 10) and 1 g of P4, in G2 (n = 9) along with 2 mg BE im. At D7, there were applied 530μg of cloprostenol and 300 IU of eCG im, at D8 intravaginal devices were removed. At D9, heifers in both groups received 1mg of EB im and at D10 TAI were preceded. The ovarian activity was monitored at D0, D4, D8, D10 and at each 6 hours after TAI until ovulation. Pregnancy diagnosis were performed 30 days after TAI. The data were subjected to analysis of variance (ANOVA) and means were compared by the test of Turkey at 5% by the statistical program SPSS 16 for Windows. Binomial variables were analyzed by chi-square. No significant effect was observed between wave synchronization (100 vs. 100%), ovulation rate (70 vs. 89%), time of ovulation (60.5 ± 2.65 vs. 64.5 ± 0.33 h) and conception rate (40 vs. 44.4%) between G1 and G2, respectively. The dominant follicle average diameter at D9 between heifers that ovulated from G1 was 14,8±0,6 mm and in G2 11,2±1,6mm presenting no statistical difference (P=0.07) the same way was not also observed statistical difference between heifers that did not ovulate from G1 (9.6±0.7mm and in G2 (7.7±0.03)(P=0.42). .) Already when comparing the average diameters of dominant follicles in D9 between the heifers that ovulated (14.8 ± 0.6 mm) and those that did not ovulate (9.6 ± 0.7 mm) from G1, it was observed significant difference (P ˂ 0.05), as well as from G2 (11,2 ± 1.6 vs. 7.7 ± 0.03 mm). The ovulation rate increased significantly in the follicles larger than 11 mm, measured on D9 However, conception rates were higher when the follicles were larger than 8 mm on D9. In the present study, no significant effect was observed in DFØ, OFØ, time of ovulation, ovulation and conception rates in pubertal Holstein heifers, but animals receiving device with lower concentrations of P4 in D0 showed higher daily rate growth follicular. / O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de diferentes concentrações de progesterona (P4) sobre a dinâmica folicular em novilhas Holandesas (Bos taurus) submetidas à sincronização de estro e ovulação. O experimento foi realizado na Estação Experimental de São Bento do Una/PE do Instituto Agronômico de Pernambuco/IPA, entre setembro e dezembro de 2012. Foram utilizadas 19 novilhas púberes Holandesas, com ECC entre 3,0 e 3,5 e mantidas em sistema intensivo. Foram distribuídas em dois grupos, onde no D0, receberam implantes intravaginal contendo 0,75g de P4 no G1 (n=10) e 1g de P4 no G2 (n=9), associado a 2 mg de BE i.m. No D7, foram aplicados 530μg de cloprostenol sódico e 300 UI de eCG i.m. e no D8 os implantes intravaginais foram removidos. No D9, foi aplicado 1mg de BE i.m. em ambos os grupos e no D10 a IATF. A atividade ovariana foi acompanhada no D0, D4, D8, D10 e após a IA de 6/6 horas até a ovulação. O diagnóstico de gestação, realizado 30 dias após a IATF. Os dados foram analisados pelo SPSS 16.0, empregando-se a análise de variância (ANOVA). Sendo evidenciada diferença estatística, aplicou-se o teste de Turkey. As variáveis binominais foram analisadas pelo Qui-quadrado. Não foi observado efeito significativo entre a sincronização da onda (100 vs. 100%), taxa de ovulação (70 vs. 89%), momento da ovulação (60,5±2,65 vs. 64,5±0,33 h) e taxa de concepção (40 vs. 44,4%) entre G1 e G2, respectivamente. O diâmetro do folículo dominante no D9 (ØFD) (13,5±0,1 vs. 10,8±1,7 mm) não diferiu entre os grupos, assim como o Ø máx. FD (14,3±1,5 vs. 11,9±0,86 mm) e do Ø máx. FO (14,7±0,74 vs. 12,3±1,37 mm), porém a taxa de crescimento diário dos folículos foi significativamente maior no G1 que no G2 (1,6±0,12 vs. 1,0±0,18 mm/dia). O diâmetro médio do folículo dominante no D9 entre as novilhas que ovularam do grupo G1 foi 14,8±0,6 mm e no G2 11,2±1,6 mm não se observando diferença estatística entre os tratamentos (P=0,07), da mesma forma que também não se observou diferença estatística entre novilhas que não ovularam do G1 (9,6±0,7) e do G2 (7,7±0,03)(P=0,42). Já ao se comparar os diâmetros médios dos folículos dominantes no D9 entre as novilhas que ovularam (14,8±0,6 mm) e as que não ovularam (9,6±0,7 mm) do G1, observou-se diferença significativa (P˂0,05), assim como no G2 (11,2±1,6 vs. 7,7±0,03 mm. A taxa de ovulação aumentou significativamente nos folículos maiores de 11 mm, mensurados no D9, no entanto, as taxas de concepção foram maiores quando os folículos se encontravam maiores que 8 mm, no D9. No presente estudo não foi observado efeito significativo da concentração de P4 no ØFD, ØFO, momento da ovulação, taxas de ovulação e concepção em novilhas púberes Holandesas, porém os animais que receberam dispositivo com menor concentração de P4 no D0 apresentaram maior taxa de crescimento folicular diário.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2017-09-05T18:12:00Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Renata Vaz Ribeiro - 2017.pdf: 2249013 bytes, checksum: 0bd0b321ae6da92f9a89087a71545385 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-09-15T15:29:25Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Renata Vaz Ribeiro - 2017.pdf: 2249013 bytes, checksum: 0bd0b321ae6da92f9a89087a71545385 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-15T15:29:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Renata Vaz Ribeiro - 2017.pdf: 2249013 bytes, checksum: 0bd0b321ae6da92f9a89087a71545385 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-08-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The productive chain of beef cattle breeding has been growing every year and also consumers have been increasing their demand regarding the quality of the meat consumed. The castration of the bovine has as benefits the improvement of the quality of the carcass, mainly as for the thickness of subcutaneous fat and tenderness of the meat. In order to avoid stress and problems related to the technique of surgical castration, the immunocast vaccine has been studied in order to determine the influence of this in the performance of the animals and the quality of the carcass and meat. The present work was carried out with the purpose of evaluating the performance, carcass characteristics and meat quality of crossbred and complete immuno-confined bovine animals. The experiment was carried out in São Luís de Montes Belos, in the state of Goiás, composed of thirty crossbred cattle Dutch / Gir in a completely randomized design (DIC), with fifteen animals per treatment (immature and uncastrated). For each group, healthy, clinically healthy cattle with mean initial age of 12 to 14 months and mean initial weight of 235 kg (± 20 kg) were used. After seven days of adaptation the first dose of one ml of the immunocast (Bopriva®, Zoetis Indústria de Produtos Veterinária LTDA, São Paulo, SP, Brazil) (IC - immunocompromised group) was applied in each animal and after 30 days repeated the same dose (as recommended by the manufacturer). It was evaluated the quantitative and qualitative characteristics of the carcass, being the area of loin eye (AOL), subcutaneous fat thickness (EGS), measurement of finishing fat of the picanha (P8), marbling, sensory analysis of coloration and texture. Measurements of the morphological characteristics were performed: carcass length, arm length, arm perimeter, thigh length and thigh perimeter in the right half carcasses. For performance, mean daily weight gain was evaluated; GPT: total weight gain; PAB: slaughter weight; PCQ: warm carcass weight; RC: carcass yield. Regarding meat, analyzes of softness, thaw losses and cooking losses were performed. The GPMD, GPT, PAB and PCQ values did not present significant differences between the treatments (P> 0.05), with the CCOX and RC variables being the only ones that differed statistically (P <0.05). The thickness of the subcutaneous fat was higher in the CI, whereas the marbling value was higher in the NC, but both did not present statistically significant differences (P> 0.05). The values of HR, PCOC and PD did not show significant differences between the treatments (P> 0.05). In conclusion, it was obtained that the use of the immunocast changed only the carcass yield and thigh perimeter characteristics, the other productive performance characteristics as well as the morphometric characteristics were not statistically different, as well as none of the carcass characteristics evaluated. For the meat quality, it was found that the immunoassay vaccine did not influence meat tenderness or water loss by thawing and cooking, demonstrating the need for further studies using the efficiency and economic values of this technique in animals in this age group. / A cadeia produtiva da bovinocultura de corte vem crescendo a cada ano e igualmente os consumidores vem aumentando sua exigência quanto a qualidade da carne consumida. A castração dos bovinos traz como benefícios a melhoria da qualidade da carcaça, principalmente quanto a espessura de gordura subcutânea e maciez da carne. A fim de evitar o estresse e problemas relacionados a técnica de castração cirúrgica, a vacina imunocastradora vem sendo estudada a fim de determinar a influência dessa no desempenho dos animais e da qualidade da carcaça e da carne. O presente trabalho foi proposto com o intuito de avaliar o desempenho, características da carcaça e qualidade da carne de bovinos mestiços imunocastrados e inteiros terminados em confinamento O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por O experimento foi realizado em São Luís de Montes Belos, no estado Goiás, composto por trinta bovinos mestiços trinta bovinos mestiços trinta bovinos mestiços trinta bovinos mestiços trinta bovinos mestiços trinta bovinos mestiços Holandês/Gir em um delineamento inteiramente casualizado (DIC), com quinze animais por tratamento (imunocastrados e não castrados). Para cada grupo foram utilizados bovinos, clinicamente saudáveis com idade inicial média de 12 a 14 meses e peso inicial médio de 235 kg (± 20 kg). Após sete dias de adaptação foi aplicada a primeira dose de um ml do imunocastrador (Bopriva®, Zoetis Indústria de Produtos Veterinária LTDA, São Paulo, SP, Brasil) (IC - grupo imunocastrado) em cada animal e após 30 dias repetido a mesma dose (conforme recomendação do fabricante). Foi avaliado características quantitativas e qualitativas da carcaça, sendo a área de olho de lombo (AOL), espessura de gordura subcutânea (EGS), medida de gordura de acabamento da picanha (P8), marmoreio, análise sensorial de coloração e textura. Foram realizadas mensurações das características morfológicas: comprimento de carcaça, comprimento de braço, perímetro de braço, comprimento de coxa e perímetro de coxa nas meias carcaças direita. Para desempenho foi avaliado ganho de peso médio diário; GPT: ganho de peso total; PAB: peso de abate; PCQ: peso de carcaça quente; RC: rendimento de carcaça. Quanto a carne, foram realizados análises da maciez, perdas por descongelamento e perdas por cocção. Os valores GPMD, GPT, PAB e PCQ não apresentaram diferenças significativas entre os tratamentos (P>0,05), sendo as variáveis CCOX e RC as únicas que diferiram estatisticamente (P<0,05). A espessura de gordura subcutânea foi maior nos IC, já em relação ao valor de marmoreio foi maior nos NC, porém ambos não apresentaram diferenças significativas estatisticamente (P>0,05). Os valores de FC, PCOC e PD não apresentaram diferenças significativas entre os tratamentos (P>0,05). Como conclusão, obteve-se que a utilização do imunocastrador alterou apenas as características rendimento de carcaça e perímetro de coxa, as demais características de desempenho produtivo assim como as características morfométricas não foram diferentes estatisticamente, bem como nenhuma das características de carcaça avaliadas. Para a qualidade da carne, resultou-se que a vacina imunocastradora não influenciou na maciez da carne e nem na perda de agua por descongelamento e cocção, demonstrando a necessitando de mais estudos utilizando a eficiência e os valores econômicos dessa técnica em animais nessa faixa etária.