MELO, Charlline Vládia Silva de. Atividade antifúngica in vitro e mecanismo de ação de análogos químicos da isoniazida frente a Coccidioides posadasii. 2014. 80 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by Eliene Nascimento (elienegvn@hotmail.com) on 2015-03-11T14:16:58Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_cvlmelo.pdf: 1418913 bytes, checksum: 8e7ca0b761e03c5831be6c466907127d (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-03-11T14:19:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_cvlmelo.pdf: 1418913 bytes, checksum: 8e7ca0b761e03c5831be6c466907127d (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-11T14:19:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_cvlmelo.pdf: 1418913 bytes, checksum: 8e7ca0b761e03c5831be6c466907127d (MD5) Previous issue date: 2014 / Coccidioidomicose é uma micose sistêmica que acomete o homem e outros animais domésticos e silvestres, causada pelo fungo dimórfico geofílico Coccidioides posadasii. Nos últimos anos, a melhoria dos métodos de diagnóstico micológico e o aumento da ocorrência de doenças imunossupressoras causaram grande impacto na incidência das micoses profundas e oportunistas no mundo. Apesar da existência de terapias antifúngicas eficazes contra a coccidioidomicose, a busca por novas drogas para o tratamento desta doença se faz necessária. O objetivo desse estudo foi determinar o efeito inibitório, in vitro, e o mecanismo de ação dos análogos químicos da isoniazida, isolados e em combinação com os antifúngicos anfotericina B (AMB) e itraconazol (ITC), frente a cepas de Coccidioides posadasii (n=12). Para isso 12 cepas de C.posadasii, foram repicadas em ágar dextrose batata e utilizadas na realização dos testes de sensibilidade frente ao agente antituberculose isoniazida (INH) e seus análogos químicos. Os ensaios foram conduzidos por meio do teste de macrodiluição em caldo ou definição da concentração inibitória mínima (CIM) e o sinergismo foi avaliado pelo método do tabuleiro. Os análogos químicos inibiram o crescimento de todas as cepas de C. posadasii testadas isoladamente, com valores de CIM para cada composto que variaram de 100 a 400 µg/mL, para os análogos P3-[N’-(1- (4-methoxifeniletilideno) isonicotinohidrazida] P5- [N’- (1-m-tolileilidene) isonicotinohidrazida] e P6- [N’-(1-(4-metilfenil) etilideno) isonicotinohidrazida], de 25 a 100 µg/mL para a PACT- N’- (1-feniletilideno) isonicotinohidrazida e de 0,0625 a 0,125 µg/mL para AMB e 0,125 a 0,5 µg/mL para ITC. Quanto a combinação entre as drogas antifúngicas e os análogos químicos da droga isoniazida, todos foram capazes de inibir o crescimento in vitro das cepas de C. posadasii. Sinergismo foi detectado em 8 combinações não sendo observado nenhum antagonismo em nenhuma delas. Os análogos da isoniazida apresentaram valores de CIM de 2, 4, 8, 16, 32 vezes superior à atividade da droga antituberculose padrão. A extração dos esteróis e a permeabilidade da membrana fúngica foram averiguadas, respectivamente, por saponificação com aquecimento e por meio da leitura do sobrenadante da suspensão fúngica em comprimento de onda de 260 e 280 nm. Todos os compostos inibiram o crescimento in vitro das cepas de C. posadasii. Foi observado que os análogos da isoniazida isolados e em combinação com antifúngicos foram capazes de causar redução do teor de ergosterol celular; apenas os análogos P3 e P6 foram capazes de alterar a permeabilidade da membrana plasmática nas condições testadas. Em conclusão, os resultados mostram que os análogos derivados da isoniazida possuem atividade inibitória frente a C. posadasii

ROCHA, Liliane Brito da Silva. Lesão no DNA, alterações cromossômicas e sua correlação com polimorfismos genéticos em pacientes com anemia falciforme tratados com hidroxiuréia. 2014. 95 f. Tese (Doutorado em Desenvolvimento e Inovação Tecnológica em Medicamentos) – Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-10-22T15:27:04Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_lbsrocha.pdf: 662021 bytes, checksum: 05745d369d8a7a630b63069dbfb35ad4 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-10-22T15:55:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_lbsrocha.pdf: 662021 bytes, checksum: 05745d369d8a7a630b63069dbfb35ad4 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-22T15:55:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_lbsrocha.pdf: 662021 bytes, checksum: 05745d369d8a7a630b63069dbfb35ad4 (MD5) Previous issue date: 2014 / Introduction: The sickle cell anemia is the result of a point mutation in the β-globin gene, leading to a substitution of glutamic acid by valine at the sixth position of the polypeptide chain. The Hydroxyurea (HU) is the chemotherapeutic agent considered as the main pharmacologic agent capable of preventing the complications and improving the quality of life of sickle cell anemia (SCA) patients. Although HU has been associated with an increased risk of neoplasia in some patients with myeloproliferative disorders and SCA, the mutagenic and carcinogenic potential of HU has not been established. Objective: Investigate the levels of DNA damage in peripheral blood leukocytes and possible chromosomal abnormalities of bone marrow cells and correlate with the therapy with HU and with the genetic polymorphisms in patients with SCA in Fortaleza, Ceara. Methods: We analyzed 41 patients with SCA. In a second step, we selected 10 patients who had the highest levels of DNA damage. The control group was composed of 26 healthy individuals. All patients were adults of both sexes. The presence of HbS and the analysis of the haplotypes of the beta S gene cluster were done by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP); to measure levels of DNA damage was done by comet assay; and the analysis of possible chromosomal abnormalities was done by G banding cytogenetics. The significance level was 0.05 for all tests, and data were presented as mean ± standard error of the mean (SEM). Results: The damage index (DI) in the group of patients with sickle cell anemia treated with hydroxiurea (SCAHU) was significantly higher than in controls (p < 0,001). Gender and age were not associated DNA damage in controls or SCAHU patients. In the group of SCAHU patients, DI was significantly influenced by length of HU treatment (p=0,0039) and BMI (p= 0.001). Patients with length of HU treatment ≥ 20 months and BMI ≤ 20 kg/m2 had a significantly greater DI than those with length of HU treatment < 20 months and BMI > 20 kg/m2. No influence significant of mean dose of HU was observed on DI (p=0,950), however patients who received a mean HU dose ≥ 20,0 mg/kg/day showed a higher DI than those who received < 20.0 mg/kg/day. Futhermore, an association was observed between DI damage and beta-globin gene haplotypes. DI values for the Bantu/Bantu haplotype was greater when compared to the Benin/Benin haplotype; and the Bantu/Benin haplotype had a less DI than Bantu/Bantu haplotype and greater than Benin/Benin haplotype. Any chromosomal abnormality was identified in 10 patients who showed higher levels of DNA damage. Conclusions: The result shows that the DNA damage in SCA is not only associated to treatment with HU, but in addition to genetic polymorphisms. Furthermore, was found that the presence of genotoxicity and favorable genetic polymorphism do not mean the presence of mutagenicity. / Introdução: A anemia falciforme é o resultado de uma mutação pontual (GAGGTG) no códon do gene da globina β, conduzindo a uma substituição de ácido glutâmico por valina na sexta posição da cadeia polipeptídica. A Hidroxiuréia (HU) é o quimioterápico considerado como principal agente farmacológico capaz de prevenir as complicações e aumentar a qualidade de vida dos pacientes com anemia falciforme (AF). Embora a HU tenha sido associada com um aumento do risco de neoplasias em alguns pacientes com doenças mieloproliferativas e AF, seu potencial mutagênico e carcinogênico ainda não está bem estabelecido. Objetivo: Investigar os níveis de lesão no DNA em leucócitos de sangue periférico e possíveis alterações cromossômicas em células de medula óssea e correlacioná-los com o tratamento com HU e com os polimorfismos genéticos em pacientes com AF em Fortaleza, Ceará. Metodologia: Foram analisadas amostras de 41 pacientes com AF. Em um segundo momento, foram selecionados os 10 pacientes que apresentaram os maiores níveis de lesão no DNA. O grupo controle foi composto por 26 indivíduos saudáveis. Todos os pacientes eram adultos e de ambos os sexos. A presença de HbS e a análise dos haplótipos do cluster do gene da beta-globina foram realizadas por meio da técnica da reação em cadeia mediada pela polimerase para polimorfismo dos comprimentos dos fragmentos de restrição (PCR-RFLP); a determinação dos níveis de lesão no DNA foi realizada pelo teste do cometa; e a análise de possíveis alterações cromossômicas foi realizada pela técnica de citogenética por bandeamento G. O nível de significância foi de 0,05 para todos os testes, e os dados foram apresentados como média ± erro padrão da média (EPM). Resultados: O índice de dano (ID) no grupo dos pacientes com anemia falciforme tratados com hidroxiuréia (AFHU) foi significantemente maior do que no grupo controle (p < 0,001). Sexo e idade não foram associados à lesão no DNA nos controles ou pacientes com AFHU. No grupo de pacientes com AFHU, o ID foi significantemente influenciado pelo tempo de tratamento com HU (p=0,0039) e índice de massa corporal (IMC) (p= 0.001). Pacientes com tempo de tratamento ≥ 20 meses e IMC ≤ 20 kg/m2 tiveram um ID significantemente maior do que aqueles com tempo de tratamento < 20 meses e IMC > 20 kg/m2. Nenhuma diferença significante em relação à dose média diária de HU foi observada sobre o ID (p=0,950), contudo pacientes que receberam uma dose de HU ≥ 20,0 mg/kg/dia mostraram um maior ID do que aqueles que receberam < 20.0 mg/kg/dia. Além disso, foi observada uma associação entre ID e haplótipos do gene da beta-globina. Os valores de ID para o haplótipo Bantu/Bantu foram maiores quando comparados ao haplótipo Benin/Benin; e o haplótipo Bantu/Benin teve um menor ID do que o haplótipo Bantu/Bantu e maior do que o haplótipo Benin/Benin. Nenhuma alteração cromossômica foi identificada nos 10 pacientes que apresentaram os maiores níveis lesão no DNA. Conclusões: O resultado mostra que a lesão no DNA na AF não está somente associada ao tratamento com HU, mas também a polimorfismos genéticos. Além disso, foi encontrado que a presença de genotoxicidade e polimorfismo genético favorável não significam a presença de mutagenicidade.

OLIVEIRA, Jonathas Sales de. Sensibilidade a antifúngicos, atividade exoenzimática e produção de biofilme por cepas de Candida tropicalis de origem animal. 2013. 73 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-10-26T13:14:07Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_jsoliveira.pdf: 1514038 bytes, checksum: 3a341580d1179e9935016a3b2969f3c8 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-10-26T13:27:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_jsoliveira.pdf: 1514038 bytes, checksum: 3a341580d1179e9935016a3b2969f3c8 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-26T13:27:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_jsoliveira.pdf: 1514038 bytes, checksum: 3a341580d1179e9935016a3b2969f3c8 (MD5) Previous issue date: 2013 / In recent years there has been a significant increase in the incidence of fungal infections caused by Candida species. Although C. albicans be considered the principal representing of the genus, other species have been gaining prominence. C. tropicalis, for example, has been associated with serious invasive cadidiases, being the first or second type of non-Candida albicans Candida most commonly isolated in humans with candidemia and candiduria and is frequently isolated from healthy animals and animals with candidiasis. To establish infection, C. tropicalis expresses many virulence factors such as the secretion of enzymes phospholipases and proteases, biofilm production, among others. This study aimed to evaluate the in vitro antifungal susceptibility profile and production of virulence factors in strains of C. tropicalis (n=100) isolated from several animal species. The strains were subjected to in vitro susceptibility testing by broth microdilution test, M27-A3 protocol, standardized by the Clinical and Laboratory Standards Institute against amphotericin B, itraconazole and fluconazole. We also evaluated the virulence attributes, such as proteases and phospholipases production and biofilm formation. Regarding the susceptibility of C. tropicalis strains, 38% were resistant to itraconazole, 40% were resistant to fluconazole and 34% were resistant to both azoles. None of the strains were resistant to amphotericin B. Regarding the production of proteases, 84% of the strains secreted these enzymes in the medium with pH 5.0, whereas only 40% of the strains were active at pH 3.5. Only 8% of the strains produced phospholipases. The strains showed different pattern in biofilm production, which 63,2% were strong producers, 17,6% were moderate producers, and 13,3% were weak producers. In sumary, the C. tropicalis strains isolated from animals showed high rate of resistance to azoles and expressed important virulence factors, indicating a potential threat to human and animal health. / Nos últimos anos houve um aumento significativo na incidência de infecções fúngicas causadas por leveduras do gênero Candida. Apesar de C. albicans ser considerada a principal representante do gênero, outras espécies vêm ganhando destaque. C. tropicalis, por exemplo, tem sido associada à cadidíases invasivas graves, sendo a primeira ou segunda espécie de Candida não-albicans mais comumente isolada em candidemia e candidúria em humanos, além de ser frequentemente isolada da microbiota de animais saudáveis e com candidíase. Para estabelecer a infecção, C. tropicalis expressa diversos fatores de virulência, como a secreção de enzimas protease e fosfolipase, a produção de biofilme, dentre outros. O presente trabalho buscou avaliar o perfil de sensibilidade antifúngica in vitro e produção de fatores de virulência de cepas de C. tropicalis (n=100) isoladas de diferentes espécies animais. As cepas foram submetidas a teste de sensibilidade in vitro por meio do método de microdiluição em caldo, protocolo M27-A3, padronizado pelo Clinical and Laboratory Standards Institute, frente anfotericina B, itraconazol e fluconazol. Foram avaliados ainda os atributos de virulência: produção de enzimas proteases e fosfolipases e produção de biofilme. Quanto ao perfil de sensibilidade das cepas de C. tropicalis, 38% foram resistentes a itraconazol, 40% resistentes a fluconazol e 34% foram resistentes a ambos os derivados azólicos. Nenhuma cepa apresentou resistência a anfotericina B. Quanto a produção de proteases, 84% das cepas secretaram estas enzimas em meio com pH 5,0, enquanto somente 40% das cepas foram ativas em pH 3,5. Somente 8% das cepas produziram fosfolipases. As cepas apresentaram padrão diferenciado na produção de biofilme, em que 63,2% foram consideradas fortes produtoras, 17,6% foram consideradas moderadas produtoras e 13,3% foram consideradas fracas produtoras. Em suma, os isolados de C. tropicalis provenientes de animais apresentaram resistência a derivados azólicos e expressaram fatores de virulência importantes, indicando potencial risco à saúde humana e animal.

MEDRANO, Delia Jessica Astete. Perfil de sensibilidade e genotipagem de leveduras isoladas de pacientes com candidemia em dois hospitais de referência terciária de Fortaleza - Ceará. 2004. 146 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2004. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-01-04T15:52:19Z No. of bitstreams: 1 2004_dis_djamedrano.pdf: 1543027 bytes, checksum: bf8abffaae3f0d8ea1a8c267957fc295 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-02T16:19:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2004_dis_djamedrano.pdf: 1543027 bytes, checksum: bf8abffaae3f0d8ea1a8c267957fc295 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-02T16:19:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2004_dis_djamedrano.pdf: 1543027 bytes, checksum: bf8abffaae3f0d8ea1a8c267957fc295 (MD5) Previous issue date: 2004 / The systemic infections caused by yeasts of the genus Candida are considered opportunist mycoses of high risk in hospital environments. These infections represent important therapeutical challenge, by reason of arising of species resistent to some antifungals, associated with high rate of mortality. Therefore, this work sought: To verify the frequency of fungemias at Dr. César Cals Hospital and Albert Sabin Children Hospital; identify the etiological agents implicated; determine the sensitivety profile to antifulgal and evaluate the genotypical profile of the species isolated from patients with recurrency. For this, were recuperated from 4627 hemcultures, 55 yeast-positive hemocultures at HGCC and from 5316 hemocultures 87 yeast-positive hemocultures at HIAS. From them, 23 patients at HGCC and from 43 at HIAS that had clinical histories with complet data entered this study. The mycological diagnosis was performed through biochemical and morphological characteristics of the etiological isolated. The test of sensitivety to antifungal- amphotericin B, fluconazole, itraconazole and cetoconazole- utilized the microdilution method in broth, reported in the document M27-A2 of the NCCLS. The genotyping techniques were performed through PFGE (Pulsed Field Gel Electrophresis), RAPD (Randomly amplified polymorphic DNA analysis). Within the period from june of 2000, to june of 2002 at HGCC, were analysed 4627 hemocultures, being positives 1051, of which 55 (5,2%) were positive for yeast of the genus Candida. On the other hand, in the period from june of 2001 to july of 2002 at HIAS, were analysed 5316 hemocultures, of which 87 (5,72%) were yeast-positive of the genus Candida and Rhodotorula.The main specie involved in the genus Candida, was C. parapsilosis with 36% and 42% of the cases at HGCC and HIAS respectively. The main risk factors associated with candidemia, were: the previous antibiotic therapy, central venous catheter, parenteral nutrition, gastric probe, mechanical ventilation, surgery and prematurity. About the resistance to antifungals drugs was observed that amphotericin B showed a resistance level of 4%, fluconazole-56%, itraconazole-52% and cetoconazole- 86%. The PFGE technique caracterized a cromossomic profile of 6 bands for C. parapsilosis and 4 for C. tropicalis. This technique permited the diferentiation of one cepa with changed pattern of bands for the last episode of the patient 4. The technique of RAPD chacacterized a distribution pattern of predominant bands for C. parapsilosis and was capable of characterize 4 genetical profiles, denoting reinfection in 3 patients and 2 genomic profiles were found for C. tropicalis. This assay shows the emergency of the non- albicans Candida, specially the C. parapsilosis, as main responsible for the cases of candidemia in the two hospitals of tertiary indication of Fortaleza, associated with a high resistance in vitro to antifungals. The genetical variability found in C. parapsilosis and C. tropicalis through the PFGE and RAPD techniques, revealed reinfection pictures, which rises the possibility that these be due to a contamination among patients or indirectly through the healthy workers. / As infecções fúngicas sistêmicas causadas por leveduras do gênero Candida são consideradas micoses oportunistas de alto risco em ambientes hospitalares. Essas infecções representam importante desafio terapêutico, em razão do surgimento de espécies resistentes a antifúngicos, associados a altos índices de mortalidade. Por esta razão, este trabalho objetivou: Verificar a freqüência de fungemias no Hospital Geral Dr. César Cals (HGCC) e Hospital Infantil Albert Sabin (HIAS); identificar os agentes etiológicos implicados; determinar o perfil de sensibilidade aos antifúngicos e avaliar o perfil genotípico das espécies isoladas de pacientes com quadros de recorrência. Para isso foram recuperadas, de 4 627 hemoculturas, 55 hemoculturas positivas para leveduras do HGCC, e, de 5 316 hemoculturas, 87 positivas para leveduras do HIAS. Destas, 23 do HGCC e 43 pacientes do HIAS que possuíam histórias clínicas com dados completos entraram neste estudo. O diagnóstico micológico foi realizado por meio das características bioquímicas e morfológicas dos agentes etiológicos isolados. O teste de sensibilidade aos antifúngicos - anfotericina B, fluconazol, itraconazol e cetoconazol - utilizou o método de microdiluição em caldo, descrito no documento M27-A2 do NCCLS. As técnicas de genotipagem foram realizadas por eletroforese em campo pulsátil (PFGE) e amplificação aleatória do DNA (RAPD). Entre o período do junho do 2000 a junho do 2002, no HGCC, foram analisadas 4 627 hemoculturas, sendo positivas 1051, das quais 55 (5,2%) foram positivas para leveduras do gênero Candida. Em contrapartida, no período de junho do 2001 a junho do 2002, no HIAS, foram analisadas 5316 hemoculturas, sendo positivas 1520 amostras, das quais 87 (5,72%) foram positivas para leveduras dos gêneros Candida e Rhodotorula. A principal espécie envolvida, dentro do gênero Candida, foi a C. parapsilosis com 36% e 42% no HGCC e HIAS, respectivamente. Os principais fatores de risco foram: a antibioticoterapia prévia (n=19; 90%), cateter venoso central, nutrição parenteral, sondagem gástrica , ventilação mecânica, cirurgia e prematuridade. Quanto à resistência a drogas antifúngicas, foi observado que anfotericina B apresentou um índice de resistência de 4%, fluconazol- 52%, itraconazol- 50% e cetoconazol- 86%. A técnica do PFGE caracterizou um perfil cromossômico de 6 bandas para C. parapsilosis e 4 para C. tropicalis. Esta técnica permitiu a diferenciação de uma cepa com padrão de bandas alterado para o último episódio do paciente 4. A técnica de RAPD caracterizou um padrão de distribuição de bandas predominante para C. parapsilosis e foi capaz de caracterizar 4 perfis genômicos, indicando re-infecção em 3 pacientes e 2 perfis genômicos foram encontrados para C. tropicalis . Este ensaio demonstra a emergência das Candida não-albicans, especialmente a C. parapsilosis, como principal responsável pelos casos de candidemias em dois hospitais de indicação terciária de Fortaleza, associado a uma alta resistência in vitro aos antifúngicos. A variabilidade genética encontrada nas C. parapsilosis e C. tropicalis, mediante as técnicas do PFGE e RAPD, revelaram quadros de re-infecção, os quais erguem a possibilidade de que estas sejam decorrentes de uma contaminação entre pacientes ou indiretamente, por intermédio de trabalhadores da saúde.

CAETANO, Erica Pacheco. Efeito inibitório in vitro de ciprofloxacina isolada e em combinação com antifúngicos frente a Coccidioides posadasii e histoplasma capsulatum var. capsulatum. 2010. 131 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2010 / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-01-04T16:03:22Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_epcaetano.pdf: 2722032 bytes, checksum: 8a97fd1a7318aff3175fd4c40d1a04a7 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-02T16:22:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_epcaetano.pdf: 2722032 bytes, checksum: 8a97fd1a7318aff3175fd4c40d1a04a7 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-02T16:22:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_epcaetano.pdf: 2722032 bytes, checksum: 8a97fd1a7318aff3175fd4c40d1a04a7 (MD5) Previous issue date: 2010 / Coccidioidomycosis and histoplasmosis are systemic mycoses that occur in humans and other animals and are caused by the dimorphic fungi Coccidioides posadasii and Histoplasma capsulatum var. capsulatum, respectively. They are considered important deep mycoses that can lead to several secondary complications. In the past years, the improvement of the techniques applied in mycological diagnosis and the increase in the occurrence of immunocompromising diseases have caused a great impact in the incidence of deep and opportunistic mycoses in the world. In spite of the existence of effective antifungal therapy against coccidioidomycosis and histoplasmosis, the pursue of new drugs to treat theses diseases is necessary. Ciprofloxacin is a classic antibacterial drug that belongs to the group of fluoroquinolones, which inhibit the catalytic activity of DNA gyrase and topoisomerase IV, which are essential in bacterial DNA replication and transcription. Some studies have shown that ciprofloxacin can act on fungal DNA gyrase. Thus, the present study aimed at evaluating the in vitro inhibitory effect of ciprofloxacin (CIP), when associated with amphotericin B (AMB), itraconazole (ITC), voriconazole (VRC) or caspofungina (CAS), on C. posadasii and H. capsulatum var. capsulatum. Sixteen strains of C. posadasii in the filamentous phase and 16 and 9 strains of H. capsulatum in the filamentous and yeast-like phase, respectively, were used. Broth macrodilution and microdilution assays were performed, as described in the documents M38-A and M27-A2, respectively, of the Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). Drug interaction was analyzed by calculating the fractional inhibitory concentration index (FICI), which is defined as the sum of the ratios between the minimal inhibitory concentration (MIC) of each combined drug and the MIC of the same drug isolatedly. Values of FICI smaller or equal to 0.5 indicate the occurrence of synergy. Concerning the isolates of C. posadasii, synergistic interactions were observed for all combinations, especially for the associations of CIP (3.125≤CIM≤12.5 ug mL-1) with ITC (0.0078≤CIM≤0.125 ug mL-1) (n=13/16), CIP (3.125≤CIM≤12.5 ug mL-1) with VRC (0.0078≤CIM≤0.0312 ug mL-1) (n=13/16) and CIP (3.125≤CIM≤12.5 ug mL-1) with CAS (2≤CIM≤8 ug mL-1) (n=14/16). For the isolates of H. capsulatum in the filamentous phase synergistic interactions were also observed for all combinations, with emphasis to the associations of CIP (3.906≤CIM≤62.5 ug mL-1) with ITC (0.00006≤CIM≤0.0078 ug mL-1) (n=14/16) and CIP (31.25≤CIM≤125 ug mL-1) with VRC (0.0156≤CIM≤0.125 ug mL-1) (n=16/16). For H. capsulatum in yeast-like phase, few synergistic interactions were observed for the tested drug combinations. None of the tested combinations presented antagonism. The obtained data may point at a new alternative for the treatment of coccidioidomycosis and histoplasmosis. Thus, it is necessary to investigate the mechanisms of action of these drug combinations on the fungal cellular metabolism and to perform in vivo experiments to confirm the relevance of these findings. / A coccidioidomicose e a histoplasmose são micoses sistêmicas que acometem o homem e animais, causadas por espécies de fungos dimórficos, com ênfase para Coccidioides posadasii e Histoplasma capsulatum var. capsulatum, respectivamente. São consideradas doenças profundas importantes, podendo culminar em diversas complicações secundárias. Nos últimos anos, a melhoria dos métodos de diagnóstico micológico e o aumento da ocorrência de doenças imunossupressoras causaram grande impacto na incidência das micoses profundas e oportunistas no mundo. Apesar da existência de terapias eficazes com antifúngicos contra a coccidioidomicose e a histoplasmose, a busca por novas drogas para o tratamento destas doenças se faz necessária. Ciprofloxacina é uma droga antibacteriana clássica do grupo das fluoroquinolonas, que inibe a atividade catalítica da DNA girase e topoisomerase IV, essenciais na replicação e transcrição do DNA bacteriano. Estudos verificaram que ciprofloxacina pode atuar na DNA girase dos fungos. Assim, o presente estudo visou avaliar o efeito inibitório in vitro de ciprofloxacina (CIP) isolada e em combinação com os antifúngicos anfotericina B (AMB), itraconazol (ITC), voriconazol (VRC) e caspofungina (CAS) frente à C. posadasii e Histoplasma capsulatum var. capsulatum. Foram utilizados 16 cepas de C. posadasii na fase filamentosa, 16 cepas de H. capsulatum var. capsulatum na fase filamentosa e 9 cepas de H. capsulatum var. capsulatum na fase leveduriforme. O estudo foi conduzido em ensaio de macrodiluição e microdiluição em caldo, descritos nos documentos M-38A e M-27A2, padronizados pelo Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI), sendo utilizados para C. posadasii e Histoplasma capsulatum var. capsulatum, respectivamente. A interação das drogas foi analisada através do cálculo do Índice da Concentração Inibitória Fracionária (FICI), definido como a soma das relações entre a concentração inibitória mínima (CIM) de cada droga em combinação e a CIM da mesma droga isolada, considerando os valores menores ou iguais a 0,5 indicativos de sinergismo. Com relação às cepas de C. posadasii, foram observadas interações sinérgicas em todas as combinações, com destaque para as associações de CIP (3,125≤CIM≤12,5 ug mL-1) com ITC (0,0078≤CIM≤0,125 ug mL-1) (n=13/16), CIP (3,125≤CIM≤12,5 ug mL-1) com VRC (0,0078≤CIM≤0,0312 ug mL-1) (n=13/16) e CIP (3,125≤CIM≤12,5 ug mL-1) com CAS (2≤CIM≤8 ug mL-1) (n=14/16). Para as cepas de H. capsulatum na fase filamentosa, também foram observadas interações sinérgicas em todas as combinações, com destaque para as associações de CIP (3,906≤CIM≤62,5 ug mL-1) com ITC (0,00006≤CIM≤0,0078 ug mL-1) (n=14/16) e CIP (31,25≤CIM≤125 ug mL-1) com VRC (0,0156≤CIM≤0,125 ug mL-1) (n=16/16). No tocante às cepas de H. capsulatum na fase leveduriforme, foram observadas poucas interações sinérgicas nas combinações de drogas testadas. Nenhuma das associações de drogas testadas apresentou antagonismo. Os dados obtidos apontam uma nova alternativa para o tratamento da coccidioidomicose e da histoplasmose, sendo necessários novos estudos que visem investigar os mecanismos de ação dessas combinações de drogas no metabolismo celular fúngico, bem como o delineamento de experimentos in vivo para confirmar a significância desses achados.

MARQUES, Francisca Jakelyne de Farias. Efeito inibitório in vitro de drogas antituberculose, antifúngicas e análogos químicos da isoniazida frente a Histoplasma capsulatum var. capsulatum. 2009. 130 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-01-04T16:15:53Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_fjfmarques.pdf: 1958302 bytes, checksum: 215586f2e098a7dee17df6403a12292e (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-02T16:23:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_fjfmarques.pdf: 1958302 bytes, checksum: 215586f2e098a7dee17df6403a12292e (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-02T16:23:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_fjfmarques.pdf: 1958302 bytes, checksum: 215586f2e098a7dee17df6403a12292e (MD5) Previous issue date: 2009 / In the past years, the improvement of mycological diagnosis methods and immunosuppressive diseases have caused a great impact in the incidence of opportunistic and deep mycoses all around the world, which motivated the performance of new antifungal drugs prospective studies. Histoplasmosis is a systemic mycosis caused by the fungus Histoplasma capsulatum var. capsulatum, which may mimic tuberculosis, in healthy individuals, concerning clinical and radiological aspects.ome cases of histoplasmosis that are refractory to the treatment with conventional antifungal drugs have been described. The aim of this study was to determine the in vitro inhibitory effect of the antituberculosis drugs: isoniazid (INH), pyrazinamide (PZA) and ethambutol (EMB); antifungal drugs: amphotericin B (AMB), fluconazole (FLC), itraconazole (ITC) and voriconazole (VRZ) and chemical analogs of isoniazid against strains of H. capsulatum (n=30), as well as to evaluate the use of different culture media for the performance of the susceptibility tests. For such, first, the antituberculosis agents INH, PZA and EMB and the analogs of isoniazid were tested isolatedely, and then, in association with the antifungal drugs FLC, ITC and VRZ, against 18 strains of H. capsulatum, previously grown onto BHI agar, through broth macrodilution technique. Each of the 12 remaining strains grown onto potato agar, BHI agar, 2% malt extract agar and lactritmel agar were microscopically analyzed, concerning the presence of tuberculate macroconidia, which were quantified as follows: 0-10, 10-50 and >50 macroconidia/field. Fungal cultures were used to determine the susceptibility of H. capsulatum to the antifungal agents AMB, FLC, ITC and VRZ, through broth microdilution methodology. The antituberculosis drugs inhibited the in vitro growth of the fungal strains, with MICs ranging from 0.04 to 0.30 mg/mL for INH; 0.55 to 3.13 mg/mL for PZA and 1.56 to 6.25 mg/mL for EMB. Concerning antifungal drugs, all the strains were susceptible, with MIC values ranging from 0.0625 to 0.25 µg/mL for AMB; 15.62 to 62.5 µg/mL for FLC; 0.0039 to 0.0312 µg/mL for ITC, and 0.00156 to 0.25 µg/mL for VRZ. When associating antituberculosis drugs with azole derivatives, all associations inhibited the in vitro growth of H. capsulatum strains, and synergy was observed for the nine combinations tested. Analogs of isoniazide presented MICs of 2, 4, 8 and 15-fold better than the standard antituberculosis drug. Basing on micromorphological analysis, the lowest quantification of macroconidia/field (0-10) was observed for 11, 10, 6 and 7 strains previously grown onto potato agar, BHI agar, malt agar and lactritmel agar, respectively. Malt agar was the most adequate medium for the production of macroconidia, 10-50 and >50/field, with a total of six strains; followed by lactritmel agar, with 5 strains. Concerning the relationship between MIC and culture medium used during the test, it was observed that inoculum from strains grown onto malt agar and BHI agar allowed the detection of the MIC for 11 strains. On the other hand, for those inocula grown onto potato agar and lactritmel agar, the MIC values were not detected for 8 and 5 strains, respectively. The results of this study provide additional data on the antifungal potential of antituberculosis drugs and their interactions with azole derivatives. However, new studies are necessary in order to determine the mechanism of action of these compounds on fungal cellular metabolism. / Nos últimos anos, a melhoria dos métodos de diagnóstico micológico e as doenças imunossupressoras causaram grande impacto na incidência das micoses profundas e oportunistas em todo o mundo, fato que impulsionou a realização de estudos de prospecção por novas drogas antifúngicas. A histoplasmose é uma micose sistêmica, causada pelo fungo Histoplasma capsulatum var. capsulatum que, em pacientes hígidos, pode mimetizar a tuberculose quanto aos aspectos clínicos e radiológicos. Alguns casos de histoplasmose refratária ao tratamento com drogas antifúngicas convencionais vêm sendo descritos. O objetivo deste trabalho foi determinar o efeito inibitório, in vitro, das drogas antituberculose: isoniazida (INH), pirazinamida (PZA) e etambutol (EMB); antifúngicas: anfotericina B (AMB), fluconazol (FLC), itraconazol (ITC) e voriconazol (VRZ) e de análogos químicos da isoniazida frente a cepas de H. capsulatum (n=30), assim como avaliar o emprego de diferentes meios de cultura para a realização dos testes de sensibilidade. Para isso, primeiramente, foram repicadas 18 cepas de H. capsulatum em ágar BHI e utilizadas na realização dos testes de sensibilidade frente aos agentes antituberculose citados e análogos químicos da isoniazida, isolados e em combinação com os antifúngicos FLC, ITC e VRZ por meio da técnica de macrodiluição em caldo. Cada uma das 12 cepas restantes foi repicada em ágar batata dextrose, ágar BHI, ágar malte a 2% e ágar lactrimel e, analisadas ao microscópio óptico quanto a presença de macroconídios tuberculados, sendo quantificados de acordo com os parâmetros: (0-10); (10-50); (>50) macroconídios/campo. As culturas foram empregadas na determinação dos testes de sensibilidade frente aos agentes antifúngicos AMB, FLC, ITC e VRZ, utilizando a técnica de microdiluição em caldo. As drogas antituberculose inibiram o crescimento das cepas in vitro com valores de CIM de 0,04 a 0,30 mg/mL para INH, 0,55 a 3,13 mg/mL para PZA e 1,56 a 6,25 mg/mL para EMB. No tocante às drogas antifúngicas, todas as cepas foram sensíveis apresentando valores de CIM que variaram de 0,0625 a 0,25 µg/mL para AMB; 15,62 a 62,5 µg/mL para FLC; 0,0039 a 0,0312 µg/mL para ITC e 0,00156 a 0,25 µg/mL para VRZ. Quanto às combinações entre os fármacos antituberculose e os derivados azólicos, todas foram capazes de inibir o crescimento in vitro das cepas de H. capsulatum, sendo detectado sinergismo nas nove combinações. Os análogos da isoniazida apresentaram valores de CIM 2, 4, 8 e 15 vezes superior a atividade da droga antituberculose padrão. A partir da análise micromorfológica do fungo repicados nos quatro meios de cultura foi identificado a menor quantificação (0-10 macroconídios/campo) para ágar batata, ágar BHI, ágar malte e ágar lactrimel, perfazendo um total de 11, 10, 6 e 7 cepas, respectivamente. O meio de cultura ágar malte foi o mais adequado para produção de macroconídios (10-50) e (>50), norteando um total de 6 cepas, seguido do meio lactrimel, 5 cepas. Em relação a determinação da CIM e o meio de cultura utilizado para o procedimento, observou-se que quando o inóculo era proveniente de cepas em ágar malte e ágar BHI foi possível a visualização da CIM em 11 cepas. Enquanto repiques feitos em ágar batata e lactrimel não foi possível determinar os valores de CIM para 8 e 5 cepas, respectivamente. Os resultados deste estudo fornecem dados adicionais sobre o potencial antifúngico das drogas antituberculose e suas interações com os derivados azólicos. Entretanto, novos estudos se fazem necessário, visando determinar os mecanismos de ação desses compostos no metabolismo celular dos fungos.

ARAÚJO, Ana Jérsia. Estudo das propriedades citotóxica da nor-ß-lapachona e seu derivado nitrofenilamino em células HL-60. 2009. 95 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-03-05T15:41:13Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_ajaraújo.pdf: 1934517 bytes, checksum: 316a2f473392dc4b8e5c026431688ffa (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-03-07T11:36:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_ajaraújo.pdf: 1934517 bytes, checksum: 316a2f473392dc4b8e5c026431688ffa (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-07T11:36:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_ajaraújo.pdf: 1934517 bytes, checksum: 316a2f473392dc4b8e5c026431688ffa (MD5) Previous issue date: 2009 / The quinone moiety has been identified as an important pharmacophoric group for cytotoxic activity of several compounds clinically used, constituting just one of the major classes of anticancer agents. β-lapachone is one of the most studied quinones in the last years. Its most important applications are related to its action against several cancer cells. Its derivative, nor-β-lapachone (compound 1), has similar anticancer activity. Thus, the aim of this work was to evaluate the mechanism of action involved in nor--lapachone and its nitrophenylamino derivative (compound 2) cytotoxicity in a leukemia cells model of HL-60 cell line. Initially it was investigated the effect of both the compounds on HL-60 cells viability after 24 hours of incubation, showing IC50 values of 2.92 and 0.48 μM to compounds 1 and 2, respectively. Considering the selectivity, compound 1 showed strong selectivity to cancer cells, while its derivative was only partially selective. Studies performed in HL-60 cells, after 24 hours, indicated that compound 2 induces cell death by apoptosis as showed by morphological changes, DNA fragmentation, mitochondrial membrane depolarization and phosphatidylserine externalization. Both tested compounds increased generation of reactive oxygen species (ROS). Our results suggest that a nitrophenylamino radical introduction at position 3 of the furane ring enhances the cytotoxicity of nor--lapachone in HL-60 cell line. These findings highlight the potential of these synthetic quinones as prototypes molecules to produce new compounds with anticancer properties. / O esqueleto quinona foi identificado como um importante grupo farmacofórico para atividade citotóxica de vários compostos utilizados na clínica, constituindo ainda uma das maiores classes de agentes anticâncer. A β-lapachona é uma das quinonas mais estudadas nos últimos anos. Suas aplicações mais importantes estão relacionadas às ações contra várias células tumorais. Seu derivado, nor-β-lapachona (composto 1), tem atividade anticâncer similar. Assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar o mecanismo de ação envolvido na citotoxicidade do composto 1 e de seu derivado nitrofenilamino (composto 2) em células leucêmicas HL-60. Inicialmente foi investigado o efeito desses compostos na viabilidade de células HL-60 após 24 horas de incubação, mostrando CI50 de 2,92 e 0,48 μM para os compostos 1 e 2, respectivamente. Acerca da seletividade celular, o composto 1 mostrou forte seletividade para células tumorais, enquanto que o seu derivado foi apenas parcialmente seletivo. Estudos feitos em células HL-60 indicaram que o composto 2 induz morte celular por apoptose como mostrado pelas mudanças morfológicas, fragmentação do DNA, despolarização da membrana mitocondrial e externalização da fosfatidilserina. Ambos compostos aumentaram a geração de espécies reativas de oxigênio (EROs). Nossos resultados sugerem que a introdução do radical nitrofenilamino na posição 3 do anel furano aumenta a citotoxicidade da nor--lapachona em células HL-60. Esses achados apontam para o potencial dessas quinonas sintéticas como modelo para a produção de novos compostos com propriedades anticâncer.

GOMES, Isabele Bessera Santos. Avaliação dos parâmetros hematológicos e bioquímicos de voluntários sadios da Unidade de Farmacologia Clínica da UFC. 2005. 114 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2003. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-04-04T16:07:37Z No. of bitstreams: 1 2005_dis_ibsgomes.pdf: 550207 bytes, checksum: 80d50cef05f47a73fa217f55f771e3cf (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-04-09T16:03:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2005_dis_ibsgomes.pdf: 550207 bytes, checksum: 80d50cef05f47a73fa217f55f771e3cf (MD5) / Made available in DSpace on 2012-04-09T16:03:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2005_dis_ibsgomes.pdf: 550207 bytes, checksum: 80d50cef05f47a73fa217f55f771e3cf (MD5) Previous issue date: 2005 / The values of reference of laboratorial parameters are defined on the basis of statistical criteria for a random sample of individuals. The published parameters of reference are proceeding from a variety of samples, including blood donors, participants of job admission examinations and normal voluntaries that are submitted to routine examinations for clinical assays. This research is of the documentary type with quantitative approach. The sample was constituted by 1.947 laboratorial parameters of healthy volunteers, of both genders, with average of 25 years, which had participated of clinical assays in the Clinical Pharmacological Unit (UNIFAC – UFC), between the years of 1999 and 2003. For the accomplishment of the study, the following information had been obtained from case report files: identification of the volunteer, besides the hematological and biochemical parameters. Seventy five clinical assays have been investigated. The results demonstrated statistical differences between the genders, for the majority of the analyzed parameters. The normal reference intervals have been calculated by the method of percentiles, being found the following values for the hematological analysis for women and men, respectively: erytrocytes – from 3.9 to 5.0 millions/mm3 and from 4.4 to 5.7 millions/mm3; hemoglobin – from 14.8 to 15.3 g/dL, and from 13.6 to 16.9 g/dL; leukocytes – between 4.400 and 10.500/mm3, and between 4.200 and 10.100//mm3; platelets – from 165.000 to 397.000/mm3, and from 155.600 to 354.400/mm3. For the biochemical parameters, there were found the following values for women and men, respectively: creatinine – from 0.5 to 0.9 mg/dL, and from 0.7 to 1.2 mg/dL; glucose – between 69 and 96 mg/dL, and between 71 and 100 mg/dL; cholesterol – between 118 and 224 mg/dL, and between 112 and 219 mg/dL; triglycerides – from 38 to 171 mg/dL, and from 42 to 197 mg/dL. Our findings suggest that the reference values of investigated parameters, for the metropolitan population of Fortaleza, must be redefined as that enclosed in the interval between the 2.5 and 97, which correspond to 95% of the total distribution of the values of each parameter. / Os valores de referência de exames laboratoriais são definidos com base em critérios estatísticos para uma amostra aleatória de indivíduos. Os parâmetros de referência publicados são provenientes de uma variedade de amostras, incluindo doadores de sangue, participantes de exames admissionais e voluntários normais que fazem exames de rotina para ensaios clínicos. Esta pesquisa é do tipo documental com abordagem quantitativa. A amostra foi constituída por 1.947 exames laboratoriais dos voluntários sadios, de ambos os sexos, com idade média de 25 anos, que participaram de ensaios clínicos na UNIFAC, entre os anos de 1999 e 2003. Para a realização do estudo, foram colhidos dos prontuários as seguintes informações: dados de identificação do voluntário, além dos parâmetros hematológicos e bioquímicos. Foram investigados setenta e cinco ensaios clínicos, tendo os resultados demonstrado diferença estatística entre os sexo, para a maioria dos parâmetros analisados. As faixas de referência foram calculadas pelo método dos percentis, sendo encontrado os seguintes valores para a análise hematológica para mulheres e homens, respectivamente: eritrócitos - de 3,9 a 5,0 milhões/mm3 e 4,4 a 5,7 milhões/mm3; hemoglobina - de 14,8 a 15,3 g/dL e 13,6 a 16,9 g/dL; leucócitos - de 4.400 a 10.500/ mm3 e 4.200 a 10.100/mm3; plaquetas – de 165.000 a 397.000/ mm3 e 155600 a 354400/ mm3. Já para os parâmetros bioquímicos, verificaram-se os seguintes valores para mulheres e homens, respectivamente: creatinina - de 0,5 a 0,9 mg/dL e 0,7 a 1,2 mg/dL; glicose - de 69 a 96 mg/dL e 71 a 100 mg/dL; colesterol - de 118 a 224 mg/dL e 112 a 219 mg/dL; triglicerídeos - de 38,0 a 171 mg/dL e 42 a 197 mg/dL. Os nossos achados sugerem que os valores de referência dos parâmetros investigados, para a população metropolitana de Fortaleza, sejam redefinidos como aqueles incluídos no intervalo entre os percentis 2,5o e 97o, os quais correspondem a 95% da distribuição total dos valores de cada parâmetro.

EVANGELISTA, Janaína Serra Azul Monteiro. Estudo de efeitos vasculares, renais e citotóxicos do veneno da serpente Crotalus durissus cascavella. 2008. 178 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-06-13T12:32:42Z No. of bitstreams: 1 2008_tese_jsamevangelista.pdf: 5846569 bytes, checksum: 95e07a530bc842bb394b2949ffdb755e (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-06-13T13:28:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_tese_jsamevangelista.pdf: 5846569 bytes, checksum: 95e07a530bc842bb394b2949ffdb755e (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-13T13:28:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_tese_jsamevangelista.pdf: 5846569 bytes, checksum: 95e07a530bc842bb394b2949ffdb755e (MD5) Previous issue date: 2008 / The snakes from the genus Crotalus in Brazil are represented by only one specie, Crotalus durissus. The poisoning by a sub-specie Crotalus durissus cascavella leads to systemic alterations, and is responsible for preliminary cause of death after the ophidic accident. This study aimed to evaluate the pharmacological effects of the snake venom Crotalus durissus cascavella - Ce (Cdcasca). This work looked at the actions of Cdcasca on the vascular system, assessing the physiological parameters of blood pressure and analyzing the histological changes in the heart, kidney, lung, brain and liver removed after the trials of blood pressure. The cytotoxic activity of Cdcasca was examined in four lines of human tumor cells: leukemia, breast tumor, colon tumor and nervous system tumor. There was an investigation of the likely mechanism of action of Cdcasca using the methods of viability cell by the exclusion of Trypan Blue, inhibition in the synthesis of ADN, antiproliferative activity of mononuclear cells (Alamar Blue). The integrity of the cell membrane, the ADN fragmentation and alteration of the mitochondrial transmembranic potential were analyzed by flow cytometry. It was Investigated the action of a Natriuretic Peptide (NPcasca) isolated from the venom of Cdcasca on a blood pressure system, on aortic rings assay and renal perfusion. After renal perfusion, the kidneys were subjected to histological analysis and study of its molecular biology. All parameters studied were analyzed by ANOVA and Student t-test, p <0.05. It was observed that the Cdcasca on the vascular system caused a significant decrease in heart and respiratory rates, and in the mean arterial pressure, with an increase in the production of nitric oxide in the blood of treated animals. There was made a pharmacological blockade with L-Name and the effects on heart and respiratory rates and mean arterial pressure were abolished. The total venom Cdcasca did not produced effects on the arteriolar mesenteric vascular bed. The whole venom Cdcasca was strongly cytotoxic on tumor line for leukemia, where there was a decrease in cell viability, as well as an increase in fragmentation of ADN. The NPcasca produced a decreased in heart and respiratory rates, and in the mean arterial pressure, with an increase in the production of nitric oxide in the blood of treated animals. In the experiments using NPcasca on aortic rings, there was a vasorelaxation dependent on endothelium. The NPcasca promoted a significant increase in perfusion pressure, and in renal vascular resistance. The urinary flow and the glomerular filtration rate also increased significantly. The perfused kidneys histological alterations were discrete, compared to the changes observed by the total venom Cdcasca. In experiments with isolated kidneys there was no change in gene expression of inflammatory mediators. Through these results we conclude that any component of poison Cdcasca is responsible for lowering effect and cytotoxicity in tumor cells. The NPcasca presented a hypotensive effects and increased the diuresis and natriurese. There was no change in gene expression of inflammatory mediators in kidney tissue. / As serpentes do gênero Crotalus estão representadas no Brasil por apenas uma espécie, a Crotalus durissus, o envenenamento pela sub-espécie Crotalus durissus cascavella conduz à alteração sistêmica, sendo responsável pela causa preliminar de morte após o acidente ofídico. Este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos farmacológicos do veneno da serpente Crotalus durissus cascavella – Ce (Cdcasca). Neste trabalho estudou-se as ações do Cdcasca no sistema vascular, avaliando os parâmetros fisiológicos da pressão arterial e analisando as alterações histológicas no coração, pulmão, rim, cérebro e fígado retirados após os experimentos de pressão arterial. A atividade citotóxica do Cdcasca foi avaliada em quatro linhas humanas de células tumorais: leucemia, tumor de mama, tumor de cólon e tumor do sistema nervoso. Realizou-se uma investigação do provável mecanismo de ação do Cdcasca utilizando-se as metodologias de viabilidade celular por exclusão de Azul de Tripan, inibição na síntese de DNA, atividade antiproliferativa de células mononucleares (Alamar Blue). A integridade da membrana celular, fragmentação do DNA e a alteração do potencial transmembrânico mitocondrial foram analisados por citometria de fluxo. Investigou-se a ação do Peptídeo Natriurético (NPcasca) isolado do veneno da Cdcasca nos sistemas de pressão arterial, anel de aorta e perfusão renal. Após a perfusão renal, os rins foram submetidos à análise histológica e ao estudo da biologia molecular. Todos os parâmetros estudados foram analisados pelo ANOVA e Student t-test, com p<0,05. Observou-se que o Cdcasca no sistema vascular causou uma diminuição significativa nas freqüências cardíaca e respiratória, bem como na pressão arterial média, havendo um aumento na produção de óxido nítrico no sangue dos animais tratados. Realizou-se o bloqueio farmacológico com L-Name e os efeitos nas freqüências cardíaca e respiratória e na pressão arterial média foram abolidos. O veneno bruto Cdcasca não apresentou efeitos no leito vascular arteriolar mesentérico. O veneno bruto da Cdcasca foi fortemente citotóxico na linhagem tumoral de leucemia, onde ocorreu uma diminuição na viabilidade celular, bem como um aumento na fragmentação do DNA. O NPcasca diminuiu as freqüências cardíaca e respiratória e pressão arterial média. Ocorreu um aumento na produção de nitrito no sangue dos animais tratados. Nos experimentos de anel de aorta onde utilizou-se o NPcasca, observou-se um relaxamento dependente de endotélio. O NPcasca promoveu aumento significativo na pressão de e na resistência vascular renal. O fluxo urinário e o ritmo de filtração glomerular também aumentaram significativamente. As alterações histológicas dos rins perfundidos foram discretas, comparando-as com as alterações observadas com o veneno total. Nos experimentos com rim isolado não houve alteração de expressão gênica de mediadores inflamatórios. Através destes resultados concluímos que algum componente do veneno Cdcasca seja responsável pelo efeito hipotensor e citotoxicidade em células tumorais. O NPcasca apresentou um efeito hipotensor e aumentou a diurese e natriurese. Não houve alteração de expressão gênica de mediadores inflamatórios no tecido renal.

ALVES, Renata de Sousa. Efeitos biológicos induzidos pelo veneno total de Tityus serrulatus e suas frações TsTx-V, toxina gama e peptídeo natriurético. 2008. 188 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdde de Medicina, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-10-01T12:57:50Z No. of bitstreams: 1 2008_tese_rsalves.pdf: 5032108 bytes, checksum: 5ea41178c3160a3542ecbbb0db2c7c2d (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-10-01T16:30:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_tese_rsalves.pdf: 5032108 bytes, checksum: 5ea41178c3160a3542ecbbb0db2c7c2d (MD5) / Made available in DSpace on 2012-10-01T16:30:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_tese_rsalves.pdf: 5032108 bytes, checksum: 5ea41178c3160a3542ecbbb0db2c7c2d (MD5) Previous issue date: 2008 / The venom of Tityus serrulatus has a mixture of toxic and non toxic peptides presenting diverse systemic and local effects. The aim of this work was to investigate the cardiovascular and renal effects promoted by the crude venom of the scorpion Tityus serrulatus and its isolated components such as Tityus serrulatus toxin V (TsTx-V), Gamma Toxin and the newly isolated Natriuretic Peptide. The experiments of isolated perfused rat kidney, isolated mesenteric bed, arterial pressure and in vivo perfusion were performed using male Wistar rats weighing 250-300g. The assays with vas deferens were done using Swiss mice weighing 30-40g. The crude venom presented autonomic nervous system effects showed by the contraction of vas deferens. Adrenergic effects were demonstrated specially with the decrease of renal vascular resistance (RVRVTs = 7.51 ± 0.96 vs RVRPz = 5.51 ± 0.43 mmHg/mL.g-1.min-1*,*p<0.05) and renal perfusion pressure (PPVTs = 150.1 ± 18.40 vs PPPz = 118.1 ± 4.00 mmHg*,*p<0.05) induced by the crude venom after kidneys pre-treatment with prazosin. The venoms isolated components showed kidney addictional effects, where TsTx-V caused diuresis while Gamma Toxin increased perfusion pressure. We could also observe the presence of protein inside the tubules and in glomerular spaces after renal histopathologic evaluation in the groups treated with the isolated components. However, only Gamma Toxin promoted an increase of the mesenteric bed perfusion pressure. The Natriuretic Peptide (0.03 and 0.1µg/mL) increased renal perfusion pressure. In addition, the natriuretic peptide increased cyclic guanosine monophosphate (cGMP) urinary excretion, but reduced electrolytes reabsorption in a dependent-concentration manner. The crude venom and the natriuretic peptide increased the arterial blood pressure, but decreased the hematocrit values, evaluated after in vivo experiments. However, the natriuretic peptide increased urinary flow and heartbeat frequency. In vivo renal function was evaluated by the clearance of inulin. The scorpion crude venom decreased the clearance of inulin, but this parameter was increased after natriuretic peptide treatment. The renal cortex blood flux, estimated by the clearance of p-aminohippurate, was reduced after the crude venom treatment. In conclusion, we demonstrated that Tityus serrulatus venom induced renal hemodynamic effects that were blocked in vitro by prasozin. In vivo experiments showed how the crude venom and its isolated components act increasing arterial blood pressure, heartbeat frequency and altered renal function. / O veneno do escorpião Tityus serrulatus é uma mistura de peptídeos tóxicos e não tóxicos com diversas ações locais e sistêmicas. O objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos cardiovasculares e renais induzidos pelo veneno total do escorpião T. serrulatus e de suas frações TsTx-V, Toxina γ e Natriurética. Foram utilizados ratos Wistar machos (250-300g) para os experimentos de perfusão de rim isolado, leito mesentérico, pressão arterial e perfusão in vivo. Para os ensaios de canal deferente foram utilizados camundongos Swiss (30-40g). O veneno de T. serrulatus apresentou efeito sobre o sistema nervoso autônomo observado através da contração do vaso deferente. O veneno total mostrou efeito adrenérgico demonstrado pela reversão dos seus efeitos renais após pré-tratamento dos rins com antagonista α-adrenérgico prazosin, especialmente sobre a resistência vascular renal (RVRVTs = 7,51 ± 0,96 vs RVRPz = 5,51 ± 0,43 mmHg/mL.g-1.min-1*,*p<0,05) e pressão de perfusão (PPVTs = 150,1 ± 18,40 vs PPPz = 118,1 ± 4,00 mmHg*,*p<0,05). As frações isoladas mostraram efeitos renais somatórios, haja visto que TsTx-V promoveu aumento da diurese e a Toxina γ causou efeitos pressóricos. Após avaliação histopatológica dos efeitos renais das frações isolados do veneno de T. serrulatus, observamos a presença de material protéico nos espaços urinários glomerulares e nos túbulos. Entretanto, no leito vascular mesentérico, somente a toxina γ mostrou-se ativa. Os efeitos renais induzidos pela fração natriurética (0,03 e 0,1µg/mL) revelaram aumento da pressão e, de maneira concentração-dependente, diminuição da reabsorção de eletrólitos e aumento da excreção urinária de guanosina monofosfato cíclico (GMPc). Nos experimentos in vivo, tanto o veneno total quanto a fração natriurética causaram aumento da pressão arterial média (PAM) e diminuição do hematócrito. Em adição, a fração natriurética causou ainda a elevação do fluxo urinário e da freqüência cardíaca. O clearance de inulina foi utilizado para a avaliação da função renal in vivo. O veneno total diminui significativamente o clearance da inulina, enquanto a fração natriurética causou elevação. O fluxo plasmático renal cortical, avaliado através do clearance de p-aminohipurato, foi reduzido por ação do veneno total de T. serrulatus. Em conclusão, o veneno de Tityus serrulatus promoveu efeitos hemodinâmicos renais que foram prontamente revertidos in vitro pelo prazosin. Os experimentos in vivo mostraram que o veneno de Tityus serrulatus induziu a elevação da pressão arterial média, taquicardia e alteração da função renal.