A ocitocina (OT) é um neuropeptídio hipotalâmico, que dentre suas funções na fêmea destaca-se a contração uterina durante o parto e a ejeção do leite. No entanto, estudos vêm demonstrando importantes funções endócrinas e parácrinas no trato reprodutivo masculino. Evidenciando a possível ação conjunta entre OT e a Globulina ligadora de hormônios sexuais (SHBG). Entretanto, em cães não existem informações disponíveis quanto sua atuação. Assim, estudos direcionados aos receptores de ocitocina (OTR) e SHBG e suas funções no sistema reprodutor masculino, mais especificamente na fisiologia espermática, são de suma importância para os conhecimentos da fisiologia reprodutiva para posterior aplicação em biotecnologias reprodutivas em pequenos animais e humanos, fomentando também novas perspectivas para a utilização terapêutica da ocitocina em enfermidades reprodutivas. Portanto, o objetivo deste estudo é verificar a expressão gênica e proteica do OTR e SHBG no testículo e epidídimo de cães, correlacionando tais dados com a qualidade espermática e dosagem de testosterona. Para tal, foram coletados testículos e epidídimos de 26 cães em idade reprodutiva (1 a 5 anos). Após a orquiectomia, foi realizada a coleta dos espermatozoides provenientes da cauda do epidídimo e então, as amostras foram analisadas quanto à motilidade computadorizada do sêmen (CASA), integridade de membrana plasmática (Eosina/Nigrosina), integridade de membrana acrossomal (Fast Green / Rosa Bengala) e atividade mitocondrial (3´3 Diaminobenzidine). A imunolocalização do OTR e SHBG foi realizada através de imunoistoquímica e imunofluorescência. E a análise de expressão gênica, através da Reação em cadeia da polimerase em tempo real (qRT PCR). E da expressão proteica, através do Western Blotting. Foram encontradas correlações significantes e positivas entre as expressões gênicas do OTR e do SHBG, tanto no testículo como no epidídimo. Além disto, a expressão do OTR no testículo correlacionou-se positivamente com espermatozoides com membrana acrossomal íntegra e negativamente com a porcentagem de células com baixa atividade mitocondrial. Já o SHBG do testículo, correlacionou-se positivamente com a concentração de espermatozoides, porcentagens de células com membrana plasmática e acrossomal íntegras, motilidade, motilidade progressiva e velocidade rápida, e negativamente com a porcentagem de células com baixa atividade mitocondrial. Por outro lado, no epidídimo, a expressão gênica do SHBG apresentou correlação positiva com a porcentagem de células com membrana plasmática íntegra e expressão proteica de SHBG no testículo. Quanto a expressão proteica, o OTR no testículo obteve correlação positiva com testosterona e negativa com atividade mitocondrial nula, já no epidídimo, ocorreu correlação positiva com integridade de membrana acrossomal e negativa também com atividade mitocondrial nula. Em relação ao SHBG, houve correlação positiva com a expressão gênica do SHBG no epidídimo, células normais e padrões de velocidade. E na imunoistoquímica foi possível observar a imunomarcação do OTR e SHBG na musculatura lisa e células de Leydig do testículo e OTR na musculatura lisa do epidídimo. No entanto, não houve imunomarcação do SHBG no epidídimo, assim como expressão proteica. Nossos resultados demonstraram que o OTR e SHBG são expressos nos testículos e epidídimos de cães e que estão relacionados a funções espermáticas importantes, sendo essenciais para o sucesso reprodutivo / Oxytocin (OT) is a hypothalamic neuropeptide that plays important and well known roles in the female such as uterine contraction during childbirth and milk ejection. Notwithstanding, studies have shown important endocrine and paracrine functions also in the male reproductive tract, highlighted by the possible joint action between OT and sex hormone-binding globulin (SHBG). In dogs, however, there is no information available with regards to the role of these hormones in the reproductive function. Thus, studies directed to oxytocin (OTR) and SHBG receptors and their functions in the male reproductive system, specifically with regards to sperm physiology. Such knowledge is essential to understand the reproductive physiology for the subsequent use in reproductive biotechnologies in small animals and humans, especially by providing new perspectives for the therapeutic use of oxytocin in reproductive disorders. Therefore, the aim of this study is to assess the gene and protein expression of OTR and SHBG in the testis and epididymis of dogs, correlating these data with sperm quality and testosterone dosage. To this end, testis and epididymis were collected from 26 dogs in reproductive age (1 to 5 years). After orchiectomy, collection of sperm from the cauda epididymis was carried out and then the samples were analyzed for computerized motility of semen (CASA), plasma membrane integrity (eosin / nigrosine), acrosome membrane integrity (Fast Green / rose Bengal) and mitochondrial activity (3\'3 Diaminobenzidine). The immunolocalization of OTR and SHBG was performed by immunohistochemistry and immunofluorescence. Gene expression analysis was performed by real time polymerase chain reaction (qRT - PCR). The protein expression was further assessed by Western Blotting. Significant positive correlations were found between the gene expressions of OTR and SHBG in both the testis and epididymis. Furthermore, the OTR expression in testis was positively correlated to sperm with intact acrosome membrane and negatively to the percentage of cells with low mitochondrial activity. On the other hand, testicular SHBG was positively correlated with sperm concentration, percentage of sperm with intact plasma membrane and acrosome, motility, progressive motility and the percentage of RAPID sperm. Also, negative correlation was found between testicular SHBG and the percentage of cells with low mitochondrial activity. Furthermore, in the epididymis, SHBG gene expression was positively correlated to the percentage of cells with intact plasma membrane and protein expression of SHBG in the testis. In relation to the protein expression, the OTR in the testis correlated positively with blood plasma testosterone and negatively with sperm with no mitochondrial activity. In the epididymis, OTR protein expression correlated positively with sperm showing intact acrosome and negatively with cells with no mitochondrial activity. With regards to SHBG proteins expression, there was a positive correlation to SHBG gene expression in the epididymis, normal cells and some patterns of sperm velocity. In the immunohistochemistry, we observed the OTR and SHBG immunostainings in the smooth muscle and Leydig cells of the testis while, in the epididymis, the OTR immunostaining could be observed only in the smooth muscle. Interestingly, there was no immunostaining or protein expression of SHBG in the epididymis. Our results demonstrated that OTR and SHBG are expressed in the testis and epididymis of dogs and are related to important sperm functions, essential for reproductive success

Introdução: Hexamerinas são proteínas de estocagem sintetizadas pelo corpo gorduroso de larvas de insetos e secretadas na hemolinfa, onde se acumulam. A função canônica das hexamerinas consiste em servir de reserva de aminoácidos e energia para a reconstrução de tecidos e órgãos durante a metamorfose. Este trabalho teve como objetivo a busca por evidências de funções alternativas das hexamerinas durante o ciclo de vida de abelhas A. mellifera. Resultados: Os perfis temporais de expressão das quatro hexamerinas (HEX 70a, HEX 70b, HEX 70c e HEX 110), verificados por meio de SDS-PAGE e western blot, corroboram sua função canônica na metamorfose. Consistente com esta função, as quatro hexamerinas foram localizadas no citoplasma das células do corpo gorduroso utilizando-se anticorpos específicos e microscopia confocal. No entanto, funções adicionais puderam ser inferidas com base nos seguintes resultados: (1) Foci das quatro hexamerinas foram localizados nos núcleos de algumas células do corpo gorduroso em metamorfose, levando à hipótese de que têm função anti-apoptótica durante este período crítico do desenvolvimento; (2) Além disso, HEX 70a e HEX 110 foram localizadas no citoplasma e núcleo de células ovarianas e testiculares, indicando função no desenvolvimento e maturação das gônadas; (3) A co-localização de um análogo de timidina (EdU) e HEX 70a nos núcleos das células dos ovaríolos, sugeriu fortemente uma função na proliferação celular. O knockdown de HEX 70a in vivo por meio de injeção de anticorpo específico prejudicou o crescimento dos ovaríolos de rainhas, reforçando a hipótese de função na proliferação celular, (4) interferiu na esclerotização da cutícula de operárias, indicando função na formação do exoesqueleto e (5) provocou a antecipação da ecdise adulta, provavelmente em resposta à ausência (ou diminuição) dos aminoácidos derivados das hexamerinas. Foram investigados também aspectos da regulação dos genes de hexamerinas. A manipulação experimental da dieta alimentar e dos títulos do hormônio juvenil (HJ) interferiram claramente na expressão dos genes de hexamerinas. A potencial ação reguladora do HJ foi reforçada pelos resultados de análises por bioinformática da região 5 UTR de cada gene de hexamerina (Martins et al., 2010) que revelaram potencial motivo de ligação à proteína Ultraspiracle (Usp), um membro do complexo receptor do HJ no DNA. Procedimentos para expressar as hexamerinas in vitro em sistema de bactérias e purificá-las estão em progresso visando a caracterização da estrutura e de interações entre as subunidades. Conclusão: Estes resultados ressaltam que as hexamerinas têm outras funções no ciclo de vida de A. mellifera, além da função já bem estabelecida de reserva de aminoácidos para a metamorfose. / Background: Insect hexamerins are storage proteins synthesized by the larval fat body and secreted into the hemolymph, where they accumulate. The canonical function of hexamerins is to provide amino acids and energy for the reconstruction of tissues and organs during pupal-to-adult development. The aim of the current study was to search for evidence of alternative roles for the hexamerins in the life cycle of the honey bee, A. mellifera. Results: The canonical role of insect hexamerins received support from our data on the temporal expression profiles of the four honey bee hexamerin subunits (HEX 70a, HEX 70b, HEX 70c and HEX 110), as verified by SDS-PAGE and western blot using hemolymph and fat body samples. Consistent with the canonical function, the four hexamerins were localized in the cytoplasm of fat body cells, during metamorphosis, by using specific antibodies and confocal laser-scanning microscopy. However, additional functions could be inferred by the following findings: (1) The four hexamerins were also localized in the nuclei of some fat body cells, thus tentatively suggesting an anti-apoptotic role during metamorphosis; (2) Furthermore, HEX 70a and HEX 110 were localized in the cytoplasm and nucleus of ovarian and testicular cells, pointing to a role in gonad development and maturation. Co-labeling of the thymidine analog EdU and HEX 70a in the ovariole cell nuclei, strongly suggested a role in cell proliferation; HEX 70a depletion via injection of the specific antibody in queen pupae impaired ovariole growth, thus strengthening our hypothesis on a role in cell proliferation, (3) HEX 70a depletion also impaired cuticle sclerotization, indicating a function in exoskeleton formation, and (4) led to a precocious adult ecdysis, perhaps in response to the lack (or decrease) in hexamerin-derived amino acids. We also investigated aspects of the regulation of hexamerin genes. The experimental manipulation of diet consumption and juvenile hormone (JH) titer clearly interfered in the expression of hexamerin genes. Regulation by JH was also supported by a previous bioinformatics analysis of the 5 UTR region of each hexamerin gene (Martins et al., 2010), which revealed a potential binding site for Ultraspiracle (Usp), a member of the JH receptor complex in the DNA. Experiments are in progress for in vitro expression and purification of the four hexamerins aiming to further characterize their structures and interactions. Conclusion: Taken together, these results imply in novel roles for hexamerins in the life cycle of A. mellifera in addition to their well-established role as amino acids sources for metamorphosis.

A ocitocina (OT) é um neuropeptídio hipotalâmico, que dentre suas funções na fêmea destaca-se a contração uterina durante o parto e a ejeção do leite. No entanto, estudos vêm demonstrando importantes funções endócrinas e parácrinas no trato reprodutivo masculino. Evidenciando a possível ação conjunta entre OT e a Globulina ligadora de hormônios sexuais (SHBG). Entretanto, em cães não existem informações disponíveis quanto sua atuação. Assim, estudos direcionados aos receptores de ocitocina (OTR) e SHBG e suas funções no sistema reprodutor masculino, mais especificamente na fisiologia espermática, são de suma importância para os conhecimentos da fisiologia reprodutiva para posterior aplicação em biotecnologias reprodutivas em pequenos animais e humanos, fomentando também novas perspectivas para a utilização terapêutica da ocitocina em enfermidades reprodutivas. Portanto, o objetivo deste estudo é verificar a expressão gênica e proteica do OTR e SHBG no testículo e epidídimo de cães, correlacionando tais dados com a qualidade espermática e dosagem de testosterona. Para tal, foram coletados testículos e epidídimos de 26 cães em idade reprodutiva (1 a 5 anos). Após a orquiectomia, foi realizada a coleta dos espermatozoides provenientes da cauda do epidídimo e então, as amostras foram analisadas quanto à motilidade computadorizada do sêmen (CASA), integridade de membrana plasmática (Eosina/Nigrosina), integridade de membrana acrossomal (Fast Green / Rosa Bengala) e atividade mitocondrial (3´3 Diaminobenzidine). A imunolocalização do OTR e SHBG foi realizada através de imunoistoquímica e imunofluorescência. E a análise de expressão gênica, através da Reação em cadeia da polimerase em tempo real (qRT PCR). E da expressão proteica, através do Western Blotting. Foram encontradas correlações significantes e positivas entre as expressões gênicas do OTR e do SHBG, tanto no testículo como no epidídimo. Além disto, a expressão do OTR no testículo correlacionou-se positivamente com espermatozoides com membrana acrossomal íntegra e negativamente com a porcentagem de células com baixa atividade mitocondrial. Já o SHBG do testículo, correlacionou-se positivamente com a concentração de espermatozoides, porcentagens de células com membrana plasmática e acrossomal íntegras, motilidade, motilidade progressiva e velocidade rápida, e negativamente com a porcentagem de células com baixa atividade mitocondrial. Por outro lado, no epidídimo, a expressão gênica do SHBG apresentou correlação positiva com a porcentagem de células com membrana plasmática íntegra e expressão proteica de SHBG no testículo. Quanto a expressão proteica, o OTR no testículo obteve correlação positiva com testosterona e negativa com atividade mitocondrial nula, já no epidídimo, ocorreu correlação positiva com integridade de membrana acrossomal e negativa também com atividade mitocondrial nula. Em relação ao SHBG, houve correlação positiva com a expressão gênica do SHBG no epidídimo, células normais e padrões de velocidade. E na imunoistoquímica foi possível observar a imunomarcação do OTR e SHBG na musculatura lisa e células de Leydig do testículo e OTR na musculatura lisa do epidídimo. No entanto, não houve imunomarcação do SHBG no epidídimo, assim como expressão proteica. Nossos resultados demonstraram que o OTR e SHBG são expressos nos testículos e epidídimos de cães e que estão relacionados a funções espermáticas importantes, sendo essenciais para o sucesso reprodutivo / Oxytocin (OT) is a hypothalamic neuropeptide that plays important and well known roles in the female such as uterine contraction during childbirth and milk ejection. Notwithstanding, studies have shown important endocrine and paracrine functions also in the male reproductive tract, highlighted by the possible joint action between OT and sex hormone-binding globulin (SHBG). In dogs, however, there is no information available with regards to the role of these hormones in the reproductive function. Thus, studies directed to oxytocin (OTR) and SHBG receptors and their functions in the male reproductive system, specifically with regards to sperm physiology. Such knowledge is essential to understand the reproductive physiology for the subsequent use in reproductive biotechnologies in small animals and humans, especially by providing new perspectives for the therapeutic use of oxytocin in reproductive disorders. Therefore, the aim of this study is to assess the gene and protein expression of OTR and SHBG in the testis and epididymis of dogs, correlating these data with sperm quality and testosterone dosage. To this end, testis and epididymis were collected from 26 dogs in reproductive age (1 to 5 years). After orchiectomy, collection of sperm from the cauda epididymis was carried out and then the samples were analyzed for computerized motility of semen (CASA), plasma membrane integrity (eosin / nigrosine), acrosome membrane integrity (Fast Green / rose Bengal) and mitochondrial activity (3\'3 Diaminobenzidine). The immunolocalization of OTR and SHBG was performed by immunohistochemistry and immunofluorescence. Gene expression analysis was performed by real time polymerase chain reaction (qRT - PCR). The protein expression was further assessed by Western Blotting. Significant positive correlations were found between the gene expressions of OTR and SHBG in both the testis and epididymis. Furthermore, the OTR expression in testis was positively correlated to sperm with intact acrosome membrane and negatively to the percentage of cells with low mitochondrial activity. On the other hand, testicular SHBG was positively correlated with sperm concentration, percentage of sperm with intact plasma membrane and acrosome, motility, progressive motility and the percentage of RAPID sperm. Also, negative correlation was found between testicular SHBG and the percentage of cells with low mitochondrial activity. Furthermore, in the epididymis, SHBG gene expression was positively correlated to the percentage of cells with intact plasma membrane and protein expression of SHBG in the testis. In relation to the protein expression, the OTR in the testis correlated positively with blood plasma testosterone and negatively with sperm with no mitochondrial activity. In the epididymis, OTR protein expression correlated positively with sperm showing intact acrosome and negatively with cells with no mitochondrial activity. With regards to SHBG proteins expression, there was a positive correlation to SHBG gene expression in the epididymis, normal cells and some patterns of sperm velocity. In the immunohistochemistry, we observed the OTR and SHBG immunostainings in the smooth muscle and Leydig cells of the testis while, in the epididymis, the OTR immunostaining could be observed only in the smooth muscle. Interestingly, there was no immunostaining or protein expression of SHBG in the epididymis. Our results demonstrated that OTR and SHBG are expressed in the testis and epididymis of dogs and are related to important sperm functions, essential for reproductive success

Introdução: Hexamerinas são proteínas de estocagem sintetizadas pelo corpo gorduroso de larvas de insetos e secretadas na hemolinfa, onde se acumulam. A função canônica das hexamerinas consiste em servir de reserva de aminoácidos e energia para a reconstrução de tecidos e órgãos durante a metamorfose. Este trabalho teve como objetivo a busca por evidências de funções alternativas das hexamerinas durante o ciclo de vida de abelhas A. mellifera. Resultados: Os perfis temporais de expressão das quatro hexamerinas (HEX 70a, HEX 70b, HEX 70c e HEX 110), verificados por meio de SDS-PAGE e western blot, corroboram sua função canônica na metamorfose. Consistente com esta função, as quatro hexamerinas foram localizadas no citoplasma das células do corpo gorduroso utilizando-se anticorpos específicos e microscopia confocal. No entanto, funções adicionais puderam ser inferidas com base nos seguintes resultados: (1) Foci das quatro hexamerinas foram localizados nos núcleos de algumas células do corpo gorduroso em metamorfose, levando à hipótese de que têm função anti-apoptótica durante este período crítico do desenvolvimento; (2) Além disso, HEX 70a e HEX 110 foram localizadas no citoplasma e núcleo de células ovarianas e testiculares, indicando função no desenvolvimento e maturação das gônadas; (3) A co-localização de um análogo de timidina (EdU) e HEX 70a nos núcleos das células dos ovaríolos, sugeriu fortemente uma função na proliferação celular. O knockdown de HEX 70a in vivo por meio de injeção de anticorpo específico prejudicou o crescimento dos ovaríolos de rainhas, reforçando a hipótese de função na proliferação celular, (4) interferiu na esclerotização da cutícula de operárias, indicando função na formação do exoesqueleto e (5) provocou a antecipação da ecdise adulta, provavelmente em resposta à ausência (ou diminuição) dos aminoácidos derivados das hexamerinas. Foram investigados também aspectos da regulação dos genes de hexamerinas. A manipulação experimental da dieta alimentar e dos títulos do hormônio juvenil (HJ) interferiram claramente na expressão dos genes de hexamerinas. A potencial ação reguladora do HJ foi reforçada pelos resultados de análises por bioinformática da região 5 UTR de cada gene de hexamerina (Martins et al., 2010) que revelaram potencial motivo de ligação à proteína Ultraspiracle (Usp), um membro do complexo receptor do HJ no DNA. Procedimentos para expressar as hexamerinas in vitro em sistema de bactérias e purificá-las estão em progresso visando a caracterização da estrutura e de interações entre as subunidades. Conclusão: Estes resultados ressaltam que as hexamerinas têm outras funções no ciclo de vida de A. mellifera, além da função já bem estabelecida de reserva de aminoácidos para a metamorfose. / Background: Insect hexamerins are storage proteins synthesized by the larval fat body and secreted into the hemolymph, where they accumulate. The canonical function of hexamerins is to provide amino acids and energy for the reconstruction of tissues and organs during pupal-to-adult development. The aim of the current study was to search for evidence of alternative roles for the hexamerins in the life cycle of the honey bee, A. mellifera. Results: The canonical role of insect hexamerins received support from our data on the temporal expression profiles of the four honey bee hexamerin subunits (HEX 70a, HEX 70b, HEX 70c and HEX 110), as verified by SDS-PAGE and western blot using hemolymph and fat body samples. Consistent with the canonical function, the four hexamerins were localized in the cytoplasm of fat body cells, during metamorphosis, by using specific antibodies and confocal laser-scanning microscopy. However, additional functions could be inferred by the following findings: (1) The four hexamerins were also localized in the nuclei of some fat body cells, thus tentatively suggesting an anti-apoptotic role during metamorphosis; (2) Furthermore, HEX 70a and HEX 110 were localized in the cytoplasm and nucleus of ovarian and testicular cells, pointing to a role in gonad development and maturation. Co-labeling of the thymidine analog EdU and HEX 70a in the ovariole cell nuclei, strongly suggested a role in cell proliferation; HEX 70a depletion via injection of the specific antibody in queen pupae impaired ovariole growth, thus strengthening our hypothesis on a role in cell proliferation, (3) HEX 70a depletion also impaired cuticle sclerotization, indicating a function in exoskeleton formation, and (4) led to a precocious adult ecdysis, perhaps in response to the lack (or decrease) in hexamerin-derived amino acids. We also investigated aspects of the regulation of hexamerin genes. The experimental manipulation of diet consumption and juvenile hormone (JH) titer clearly interfered in the expression of hexamerin genes. Regulation by JH was also supported by a previous bioinformatics analysis of the 5 UTR region of each hexamerin gene (Martins et al., 2010), which revealed a potential binding site for Ultraspiracle (Usp), a member of the JH receptor complex in the DNA. Experiments are in progress for in vitro expression and purification of the four hexamerins aiming to further characterize their structures and interactions. Conclusion: Taken together, these results imply in novel roles for hexamerins in the life cycle of A. mellifera in addition to their well-established role as amino acids sources for metamorphosis.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_viviane_rohrig_rabassa.pdf: 822002 bytes, checksum: 6cb1224c07c478b2394f81620c16151f (MD5) Previous issue date: 2012-02-28 / The somatotropin (ST), which has its effects mediated by insulin-like growth factor I, has positive effects on gametogenesis and steroidogenesis, and can be used as an alternative treatment for infertile men. Exogenous somatotropin supplementation improves testicular development, gametogenesis and steroidogenesis, anticipating onset of puberty. However, no studies aiming to determine the mechanisms of action of this hormone on testicular function and age at puberty in healthy young boars were performed. Thus the hypothesis of this study were: 1) prepubertal male pigs receiving exogenous ST have accelerated testicular growth due to the mitogenic actions of IGF-I; 2) an increase in gametogenesis and teroidogenesis with consequent antecipation of age at puberty and 3) improvement of semen quality after the establishment of puberty. To confirm this hypothesis four experiments were performed. The Experiment 1 aimed to determine the interval between applications of porcine ST (pST), based on the determination of IGF-I. Experiment 2 aimed to measure the proliferation of testes cells in boars subjected to pST administration, as well as its effect on the metabolism. In Experiment 1, the mean concentration of serum IGF-I for pST Group was higher (P<0.05) than for Control Group, with differences between groups within the first three days after injection, determining the interval between injection to be used in the following experiments. In Experiment 2 there was a increase in the testicular weight (P=0.06) in pST Group, but a decrease in the number of seminiferous tubules and sertoli cells in this group (P<0.05). Experiment 3 aimed to determine the effect of pST administration during the prepubertal period on the metabolic profile, testicular development and anticipation of the sexual maturity. The pST Group had higher circulating concentration of testosterone after five months of age (P<0.05), which was concomitant with the onset of reproductive activity. These boars also had higher libido (P<0.05). The Experiment 4 aimed to determine the effect of pST on the semen quality after the establishment of puberty. It was observed an increase in vigor, volume, total sperm concentration and total number of inseminating doses (P<0.05). Still, the pST Group had a higher testicular weight at 12 months of age (P<0.05). In conclusion, the use of pST in young pigs is present positive effects on the testicular development, testosterone levels, libido and semen quality after the establishment of puberty. an alternative to increase reproductive efficiency, increasing the semen quality and the number of inseminating doses produced from one ejaculate. / A somatotrofina (ST), a qual tem muitos de seus efeitos mediados pelo fator de crescimento semelhante à insulina I (IGF-I), tem efeito positivo sobre a gametogênese e a esteroidogênese, sendo utilizada como alternativa de tratamento em homens com infertilidade. Quanto ao seu efeito sobre a idade à puberdade, em humanos com deficiência endógena, a sua suplementação causa maior desenvolvimento testicular, gametogênese e esteroidogênese e antecipação da puberdade. Porém, não há estudos que determinem os mecanismos de ação deste hormônio sobre a função testicular e idade à puberdade em suínos sadios. Dessa forma as hipóteses deste estudo foram: 1) machos suínos pré-púberes recebendo ST exógena tem seu crescimento testicular acelerado, devido à ação mitogênica do IGF-I; 2) incremento na gametogênese e esteroidogênese, com consequente antecipação da idade à puberdade; e 3) melhora da qualidade espermática após o estabelecimento da puberdade. Para confirmar estas hipóteses foram realizados quatro experimentos. O Experimento 1 teve o objetivo de determinar o intervalo entre aplicações de ST suína (pST), a partir da determinação dos níveis de IGF-I. O Experimento 2 teve o objetivo de avaliar a proliferação de células testiculares em animais submetidos à administração de pST, bem como seu efeito sobre o metabolismo de leitões. No Experimento 1, os níveis séricos médios de IGF-I do Grupo pST foram superiores (P<0,05) aos do Grupo Controle, com diferença entre grupos até o 3º dia após aplicação do hormônio, determinando o intervalo entre doses a ser utilizado nos próximos experimentos. No Experimento 2 houve um aumento no peso testicular (P=0,06) no Grupo pST, porém uma diminuição do número de túbulos seminíferos e células de Sertoli neste grupo (P<0,05). O Experimento 3 teve o objetivo de determinar o efeito da administração de pST durante o período pré-puberdade sobre o perfil metabólico, desenvolvimento testicular e início do desenvolvimento sexual de suínos jovens. O grupo pST apresentou maiores níveis circulantes de testosterona a partir dos cinco meses de idade (P<0,05), o qual coincidiu com o início da atividade reprodutiva destes animais, além de apresentar maior libido (P<0,05). O Experimento 4 teve o objetivo de determinar o efeito do pST sobre a qualidade espermática após o estabelecimento da puberdade. Na avaliação da qualidade espermática foi observado aumento do vigor, volume espermático, da concentração espermática total e do número de doses inseminantes no grupo pST (P<0,05). Ainda, o grupo pST apresentou maior peso testicular aos 12 meses de idade em relação ao grupo controle (P<0,05). Concluindo, o uso de pST em suínos jovens apresenta efeitos positivos sobre o desenvolvimento testicular, níveis de testosterona, libido e qualidade espermática após o estabelecimento da puberdade.

No description available.

Orientador: Enio Pedone Bandarra / Banca: Renee Laufer Amorim / Banca: Veridiana Maria Dignani de Moura / Resumo: Pouco se conhece sobre a ocorrência de alterações testiculares e epididimárias nos cães nas diferentes regiões do país e sua influência sobre a fertilidade na espécie canina, assim como sobre as características morfométricas destes órgãos em cães sem raça definida (srd). Com o intuito de acrescentar dados à literatura buscou-se determinar a incidência de alterações histopatológicas testiculares e epididimárias em cães srd, bem como estabelecer o padrão morfométrico destes órgãos e suas possíveis correlações com porte dos animais, peso, volume e dimensões dos órgãos. Para tal, colheram-se testículos e epidídimos de 60 cães adultos oriundos de campanha de castração e do Centro de Controle de Zoonoses, subdivididos em três grupos, sendo 28 animais de pequeno porte (até 10Kg), 18 de médio porte (de 10 a 20Kg) e 14 de grande porte (acima de 20Kg). Na avaliação microscópica dos 120 testículos observou-se a ocorrência de 107 casos de degeneração, 89 de atrofia tubular, 16 de hipoplasia, seis de orquite, três de leydigocitoma, dois normais, um caso de sertolioma e um de edema. Na avaliação epididimária observaram-se 55 epidídimos normais, 36 casos de epididimite, 22 de hiperplasia epitelial papilar, 14 de degeneração, 12 de cistos, três de fibrose, um de edema, um de adenomiose e um de granuloma espermático. Foram utilizados animais srd, devido ao predomínio destes na população canina brasileira, e os resultados, além de determinarem as características reprodutivas dos SRD, servirão para efeitos comparativos em relação aos dados existentes em animais de raça pura. / Abstract: Issues like testicles and epididymis changes and their influence on canine fertility are insufficient on current literature, as well as morphometric features on mongreel dogs organs. The aim of this work was to determine the incidence of testicles and epididymis histopathological changes and establish a morphometric standart of these organs with possible correlation with animals weight, breed, organs volume and dimension. Sixty adult dogs from castration campaing and Zoonosis Control Center were used and divided in: 28 animals up to 10 kg (small breed), 18 medial breed animals (from 10 to 20 kg) and 14 large breed dogs (above 20 kg). One hundred and twenty testicles were analyzed on microscopic evaluation and were diagnosed the occurrence of 107 degeneration, 89 tubular atrophy, 16 hypoplasia, 6 orquitis, 3 leydig cell tumor, 2 normal, 1 Sertoli cell tumor case and 1 edema. On epididymics evaluation were observed 55 normal epididymis, 36 epididymitis cases, 22 papilar epididymal hyperplasia, 14 degeneration, 12 cysts, 3 fibrosis, 1 swelling, 1 adenomyosis and 1 espermatic granuloma. Were used mongreel animals on this study, due to the prevalence of them in Brazilian canine population, and the results, besides reproductive feature determination, will serve to comparative effects for pure breed animals database. / Mestre

O Laboratório de Poluição Atmosférica Experimental da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo desenvolve várias linhas de pesquisa sobre os efeitos da poluição nos organismos vivos. O objetivo deste trabalho foi estudar as alterações no sistema reprodutor de camundongos balb-c machos expostos a água de manancial localizado próximo a depósito de resíduos químicos. Oitenta camundongos balb-c foram divididos em quatro grupos: Grupo A (controle) recebeu água mineral, grupo B recebeu água de nascente na região do depósito, grupo C recebeu água de cidade abastecida por água originada na região do depósito e grupo D recebeu água de rio que passa ao lado do depósito. A exposição foi do desmame até a idade adulta. Ao atingir a idade reprodutiva eles foram acasalados e posteriormente sacrificados. Os parâmetros avaliados foram: peso das gônadas, espermograma, taxa de gravidez, proporção de machos na prole e contagem de células de Sertoli. A análise da água do grupo A e C não mostrou presença de poluentes, a do grupo B mostrou presença de cádmio nas concentrações de 3,58 ± 0,50 microgramas/L e de 2,92 ± 0,10 microgramas/L, a do grupo D mostrou a presença de hidrocarbonetos aromáticos policíclicos, de chumbo nas concentrações de 113 ± 11 microgramas/L e de 221 ± 16 microgramas/L, cádmio nas concentrações de 11,33 ± 0,50 microgramas/L, 12,6 ± 1,2 microgramas/L e 3,78 ± 0,35 microgramas/L e de mercúrio nas concentrações de 4,58 ± 0,92 microgramas/L e 5,3 ± 1,1 microgramas/L. Foram utilizados os testes de Levene e Kolmogorov-Smirnov para se verificar a homogeneidade das variâncias e a aderência a curva normal, respectivamente. Para as variáveis que apresentaram esses dois princípios satisfeitos foram utilizados testes paramétricos (ANOVA- analise de variância), caso contrario foram utilizados testes não paramétricos (Teste de Kruskall-Wallis). Quando diferenças foram observadas foi utilizado o teste de comparações múltiplas de Tukey (KLEIBAUM). Os resultados mostraram que houve redução significativa da proporção de machos na prole dos animais do grupo B e uma redução marginalmente significante nos animais do grupo D. Os outros parâmetros avaliados não mostraram diferenças entre os grupos. A alteração verificada na proporção de machos do grupo B não pode ser explicada pela presença de cádmio na água, pois o grupo D foi exposto a doses muito maiores e não apresentou a mesma alteração. No presente trabalho não identificamos diferenças que permitam afirmar que a exposição à água da região do depósito de lixo químico cause alterações no sistema reprodutivo de camundongos / The Atmospheric Pollution Laboratory of The Sao Paulo University Medical College develops research on the effects of environmental pollution in health. This study investigated the effects on the reproductive system of balb-c mice exposed to water from a river near a deactivated waste depositary. Eighty male mice were separated in four groups: Group A (mineral water); Group B (water from the water treatment station); Group C (water from Cubatao city); Group D (water from the waste depositary region). They were exposed to water since they were weaned until they reached sexual maturity. They were coupled with females in reproductive age and after this mating time they were sacrificed. The evaluated parameters had been testicle weight, sperm analysis, pregnancy rate, sex ratio of the offspring and Sertoli cell count. The analysis of the water did not show presence of pollutants in the group a and group c water. Group b showed low levels of cadmium, 3,58 ± 0,50 g/L and 2,92 ± 0,10g/L. Group d showed the presence of PAHs and high levels of lead (113 ± 11 g/L and 221 ± 16 g/L), cadmiun (11,33 ± 0,50 g/L and 12,6 ± 1,2 g/L) and mercury (4,58 ± 0,92 g/L and 5,3 ± 1,1 g/L . The tests of Levene and Kolmogorov-Smirnov had been used to verify the homogeneity of the variances and the tack to the normal curve, respectively. The parametric tests used ANOVA and the non parametric tests used Kruskall-Wallis test and the test of multiple comparisons of Tukey (Kleibaun). Results: There were no differences between groups in testicle weight, sperm analysis, pregnancy rate and Sertoli cell count. There was a significant reduction in sex-ratio of the offspring in group b. This alteration cannot be explained by the cadmium levels in group b water. In the present work we cannot associate the exposition to water from the waste depositary and reproductive alterations

O Laboratório de Poluição Atmosférica Experimental da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo desenvolve várias linhas de pesquisa sobre os efeitos da poluição nos organismos vivos. O objetivo deste trabalho foi estudar as alterações no sistema reprodutor de camundongos balb-c machos expostos a água de manancial localizado próximo a depósito de resíduos químicos. Oitenta camundongos balb-c foram divididos em quatro grupos: Grupo A (controle) recebeu água mineral, grupo B recebeu água de nascente na região do depósito, grupo C recebeu água de cidade abastecida por água originada na região do depósito e grupo D recebeu água de rio que passa ao lado do depósito. A exposição foi do desmame até a idade adulta. Ao atingir a idade reprodutiva eles foram acasalados e posteriormente sacrificados. Os parâmetros avaliados foram: peso das gônadas, espermograma, taxa de gravidez, proporção de machos na prole e contagem de células de Sertoli. A análise da água do grupo A e C não mostrou presença de poluentes, a do grupo B mostrou presença de cádmio nas concentrações de 3,58 ± 0,50 microgramas/L e de 2,92 ± 0,10 microgramas/L, a do grupo D mostrou a presença de hidrocarbonetos aromáticos policíclicos, de chumbo nas concentrações de 113 ± 11 microgramas/L e de 221 ± 16 microgramas/L, cádmio nas concentrações de 11,33 ± 0,50 microgramas/L, 12,6 ± 1,2 microgramas/L e 3,78 ± 0,35 microgramas/L e de mercúrio nas concentrações de 4,58 ± 0,92 microgramas/L e 5,3 ± 1,1 microgramas/L. Foram utilizados os testes de Levene e Kolmogorov-Smirnov para se verificar a homogeneidade das variâncias e a aderência a curva normal, respectivamente. Para as variáveis que apresentaram esses dois princípios satisfeitos foram utilizados testes paramétricos (ANOVA- analise de variância), caso contrario foram utilizados testes não paramétricos (Teste de Kruskall-Wallis). Quando diferenças foram observadas foi utilizado o teste de comparações múltiplas de Tukey (KLEIBAUM). Os resultados mostraram que houve redução significativa da proporção de machos na prole dos animais do grupo B e uma redução marginalmente significante nos animais do grupo D. Os outros parâmetros avaliados não mostraram diferenças entre os grupos. A alteração verificada na proporção de machos do grupo B não pode ser explicada pela presença de cádmio na água, pois o grupo D foi exposto a doses muito maiores e não apresentou a mesma alteração. No presente trabalho não identificamos diferenças que permitam afirmar que a exposição à água da região do depósito de lixo químico cause alterações no sistema reprodutivo de camundongos / The Atmospheric Pollution Laboratory of The Sao Paulo University Medical College develops research on the effects of environmental pollution in health. This study investigated the effects on the reproductive system of balb-c mice exposed to water from a river near a deactivated waste depositary. Eighty male mice were separated in four groups: Group A (mineral water); Group B (water from the water treatment station); Group C (water from Cubatao city); Group D (water from the waste depositary region). They were exposed to water since they were weaned until they reached sexual maturity. They were coupled with females in reproductive age and after this mating time they were sacrificed. The evaluated parameters had been testicle weight, sperm analysis, pregnancy rate, sex ratio of the offspring and Sertoli cell count. The analysis of the water did not show presence of pollutants in the group a and group c water. Group b showed low levels of cadmium, 3,58 ± 0,50 g/L and 2,92 ± 0,10g/L. Group d showed the presence of PAHs and high levels of lead (113 ± 11 g/L and 221 ± 16 g/L), cadmiun (11,33 ± 0,50 g/L and 12,6 ± 1,2 g/L) and mercury (4,58 ± 0,92 g/L and 5,3 ± 1,1 g/L . The tests of Levene and Kolmogorov-Smirnov had been used to verify the homogeneity of the variances and the tack to the normal curve, respectively. The parametric tests used ANOVA and the non parametric tests used Kruskall-Wallis test and the test of multiple comparisons of Tukey (Kleibaun). Results: There were no differences between groups in testicle weight, sperm analysis, pregnancy rate and Sertoli cell count. There was a significant reduction in sex-ratio of the offspring in group b. This alteration cannot be explained by the cadmium levels in group b water. In the present work we cannot associate the exposition to water from the waste depositary and reproductive alterations

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-06-26Bitstream added on 2014-06-13T18:56:58Z : No. of bitstreams: 1 thome_he_me_botfmvz.pdf: 1562851 bytes, checksum: 21eb08feb50c78b3871c24c6a0d75c3b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Pouco se conhece sobre a ocorrência de alterações testiculares e epididimárias nos cães nas diferentes regiões do país e sua influência sobre a fertilidade na espécie canina, assim como sobre as características morfométricas destes órgãos em cães sem raça definida (srd). Com o intuito de acrescentar dados à literatura buscou-se determinar a incidência de alterações histopatológicas testiculares e epididimárias em cães srd, bem como estabelecer o padrão morfométrico destes órgãos e suas possíveis correlações com porte dos animais, peso, volume e dimensões dos órgãos. Para tal, colheram-se testículos e epidídimos de 60 cães adultos oriundos de campanha de castração e do Centro de Controle de Zoonoses, subdivididos em três grupos, sendo 28 animais de pequeno porte (até 10Kg), 18 de médio porte (de 10 a 20Kg) e 14 de grande porte (acima de 20Kg). Na avaliação microscópica dos 120 testículos observou-se a ocorrência de 107 casos de degeneração, 89 de atrofia tubular, 16 de hipoplasia, seis de orquite, três de leydigocitoma, dois normais, um caso de sertolioma e um de edema. Na avaliação epididimária observaram-se 55 epidídimos normais, 36 casos de epididimite, 22 de hiperplasia epitelial papilar, 14 de degeneração, 12 de cistos, três de fibrose, um de edema, um de adenomiose e um de granuloma espermático. Foram utilizados animais srd, devido ao predomínio destes na população canina brasileira, e os resultados, além de determinarem as características reprodutivas dos SRD, servirão para efeitos comparativos em relação aos dados existentes em animais de raça pura. / Issues like testicles and epididymis changes and their influence on canine fertility are insufficient on current literature, as well as morphometric features on mongreel dogs organs. The aim of this work was to determine the incidence of testicles and epididymis histopathological changes and establish a morphometric standart of these organs with possible correlation with animals weight, breed, organs volume and dimension. Sixty adult dogs from castration campaing and Zoonosis Control Center were used and divided in: 28 animals up to 10 kg (small breed), 18 medial breed animals (from 10 to 20 kg) and 14 large breed dogs (above 20 kg). One hundred and twenty testicles were analyzed on microscopic evaluation and were diagnosed the occurrence of 107 degeneration, 89 tubular atrophy, 16 hypoplasia, 6 orquitis, 3 leydig cell tumor, 2 normal, 1 Sertoli cell tumor case and 1 edema. On epididymics evaluation were observed 55 normal epididymis, 36 epididymitis cases, 22 papilar epididymal hyperplasia, 14 degeneration, 12 cysts, 3 fibrosis, 1 swelling, 1 adenomyosis and 1 espermatic granuloma. Were used mongreel animals on this study, due to the prevalence of them in Brazilian canine population, and the results, besides reproductive feature determination, will serve to comparative effects for pure breed animals database.