Dentro do gênero Rhipicephalus, há o chamado complexo sanguineus formado por várias espécies presentes apenas no Velho Mundo, das quais apenas a espécie Rhipicephalus sanguineus é considerada de ocorrência no Novo Mundo. Como as espécies deste complexo apresentam grande similaridade morfológica, é possível que mais de uma espécie do complexo sanguineus esteja ocorrendo nas Américas. Um trabalho recente relatou parâmetros biológicos e genéticos significativamente diferentes entre uma população de R. sanguineus do Brasil e outra da Argentina, sugerindo que o status biosistemático de R. sanguineus na América do Sul deva ser revisto. Diante disto, e da inquestionável importância medico-veterinária de R. sanguineus na América do Sul, este projeto objetivou realizar uma análise genética de 32 populações de R. sanguineus, sendo 17 do Brasil (englobando 13 estados), 3 do Chile, 2 da Venezuela, 2 da Colômbia e 1 de cada um dos seguintes países: Argentina, Uruguai, Itália, Espanha, África do Sul, Costa Rica, Panamá, México. Uma amostra de Rhipicephalus turanicus da Espanha e uma da África do sul também foram analisadas. Para tal, carrapatos oriundos das diferentes populações foram analisados geneticamente através de seqüências dos genes mitocondriais 16S rDNA. O resultado deste trabalho permitiu inferir sobre a possibilidade da existência no mínimo de dois grupos distintos de carrapatos sob o táxon R. sanguineus na América Latina, um se aproximando dos carrapatos de origem africana e com distribuição na América tropical e subtropical e outro se aproximando das amostras européias e com distribuição temperada do sul da América do Sul / Among the genus Rhipicephalus, there is the sanguineus complex composed by many species of distribution restricted to the Old World. It has been considered that Rhipicephalus sanguineus is the only species from this complex to be present in the New World. Due to the high similarity between the sanguineus complex species, it is possible that more than one species is present in the Americas, as suggested by recent papers. The present study performed a genetic evaluation based on 16S rDNA mitochondrial gene sequences of ticks representative 26 R. sanguineus populations from South America, one from: Italy, Spain, South Africa, Costa Rica, Panama, Mexico. Additionally, Rhipicephalus turanicus ticks from South Africa and Spain were also used. The results confirm the existence of genetically distinct populations of the \"sanguineus\" complex in the Americas

Avaliou-se o impacto da fragmentação florestal na diversidade de carrapatos de vida-livre e a presença de patógenos nestes carrapatos em remanescentes florestais do Pontal do Paranapanema, estado de São Paulo, Brasil. Estes fragmentos florestais abrigam uma rica e importante biodiversidade, com espécies endêmicas e ameaçadas como o mico-leão-preto (Leontopithecus chrysopygus), a anta (Tapirus terrestris), a onça pintada (Panthera onca), o macuco (Tinamus solitarius) e várias outras espécies de aves, mamíferos, répteis, anfíbios e peixes. Aproximadamente 90% das espécies de carrapatos parasitam exclusivamente hospedeiros selvagens. O restante pode ter animais domésticos e humanos como hospedeiros. Embora a maioria das pesquisas tenha sido dirigida a espécies de importância econômica, os carrapatos que parasitam animais selvagens possuem relevante papel na manutenção dos níveis de patógenos em populações de vida livre. Algumas destas espécies, por exemplo, demonstraram que podem parasitar hospedeiros não selvagens e promover o surgimento de zoonoses. Em habitats fragmentados, a diversidade de espécies vertebradas é menor se comparado a habitats com pouca alteração antrópica. Portanto, a fragmentação do habitat diminui a diversidade de espécies de carrapatos também. Para estudar a relação entre a fragmentação florestal e a ecologia das populações de carrapatos foram coletados carrapatos em 8 fragmentos florestais pelo método de arrasto de flanela e inspeção visual da vegetação. Os índices de comparação utilizados foram de similaridade de Jaccard, de diversidade de Shannon e complexidade do fragmento florestal de Patton. Utilizou-se o modelo de regressão linear para compara os índices de Shannon e Patton. Um total de 2149 ninfas de Amblyomma spp foi coletado e foram identificadas as espécies de 629 carrapatos. As espécies coletadas foram Amblyomma cajennense (94,28%), A. coelebs (1,59%), A. naponense (2,86%), A. ovale (0,64%), A. nodosum (0,32%), A. brasiliense (0,16%) e Haemaphysalis juxtakochi (0,16%). Nenhum indivíduo testado foi positivo pelo teste da hemolinfa. Os resultados mostraram uma tendência de correlação entre a fragmentação floresta, e a diversidade de espécies de carrapatos. / This study evaluated the impact of forest fragmentation on diversity of freeliving ticks and prevalence of tick pathogens in remaining forest fragments in the Pontal do Paranapanema, São Paulo state, Brazil. These forest fragments shelter rich and important biodiversity, with endemic and threatened species such as the black lion tamarin (Leontopithecus chrysopygus), the tapir (Tapirus terrestris), jaguar (Panthera onca), the solitary tinamou (Tinamus solitarius) and various other species of birds, mammals, reptiles, amphibians and fish. Approximately 90% of tick species parasitize exclusively wild hosts. The remainder can also have domestic animals and humans as hosts. Although most research has been directed to species of economic importance, ticks that parasitize wild animals are also relevant due to their role in maintaining enzootic pathogen levels in wild populations. Some of these species, for example, have been shown to cross-over onto non-wild hosts and promote emergent zoonoses. In fragmented habitats, the diversity of vertebrate species is normally lower than comparable habitats with minimal anthropic alteration. Thus, habitat fragmentation decreases the diversity of tick species too. To study the relationship between forest fragmentation and population ecology of ticks, ticks were collected in 8 forest fragments using dragging and visual inspection of vegetation. The index used were Jaccard´s similarity, diversity f Shannon and Patton. The linear regression model was used to compare Shannon and Patton indexes. A total of 2149 nymphs of Amblyomma spp. And 629 identified ticks was collected. The species of ticks collected was Amblyomma cajennense (94,28%), A. coelebs (1,59%), A. naponense (2,86%), A. ovale (0,64%), A. nodosum (0,32%), A. brasiliense (0,16%) e Haemaphysalis juxtakochi (0,16%). All ticks were negative by hemolimph test. The results showed a tendency of correlation between forest fragmentation and diversity of tick species.

No período de julho de 2004 a junho de 2012, foram realizadas 104 capturas de lobos-guará. Os animais foram contidos quimicamente para coleta de material biológico. Carrapatos foram encontrados em 94 lobos e enviados ao Laboratório de Doenças Parasitárias da FMVZ-USP, onde foram identificados com auxílio de estereomicroscópio e chaves taxonômicas. Das amostras analisadas, foram encontradas 72 larvas, 188 ninfas e 911 carrapatos adultos, pertencetes as espécies Rhipicephalus microplus, Amblyomma spp., Amblyomma cajennense, Amblyomma ovale, Amblyomma brasiliense, Amblyomma tigrinum. O presente trabalho registra pela primeira vez larva de R. microplus e adulto de A. brasiliense parasitando C. brachyurus no país, reforçando os achados prévios da literatura destas espécies de carrapatos utilizarem os lobos-guará como hospedeiros. Sangue e soro também foram coletados durante contenção química, 67 amostras de sangue total de lobos guará e 52 carrapatos adultos foram testados através da técnica de Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) para a pesquisa de DNA de Anaplasma spp., Babesia spp., Ehrlichia spp., Hepatozoon spp. e Rickettsia spp. Foi realizada a sorologia para a pesquisa de anticorpos anti-Rickettsia spp. para 210 amostras de soro de cães domésticos e 43 foram positivas. Quatro indivíduos apresentaram reação homóloga para R. parkeri, dois para R. rhipicephali, um para R. rickettsii. Alem disso, foram testadas 88 amostras de soro de lobo guará e, destas, 84 foram positivas para pelo menos uma das espécies de Rickettsia e indicaram reação homóloga para R. parkeri e R. rhipicephali. Foram testadas 84 amostras de soro de lobo-guará na sorologia para Ehrlichia canis e, destas, 16 foram positivas. Nos testes moleculares foi detectada e confirmada a presença de H. canis, H. felis, R. parkeri já descritas para os hospedeiros vertebrados e invertebrados testados no estudo e ainda o primeiro registro em A. tigrinum de Candidatus R. andeanae e Candidatus Midichloria mitocondrii / From July 2004 to June 2012, 104 maned wolves were captured. The animals were chemically restrained in order to collect biological material. Ticks were found in 94 wolves and sent to the Laboratory of Parasitic Diseases FMVZ USP, and were identified using a stereomicroscope and taxonomic keys. Of the samples analyzed, 72 were larvae, 188 nymphs and 911 adult ticks, from the species Rhipicephalus microplus , Amblyomma spp , A. cajennense, Amblyomma ovale, Amblyomma brasiliense e Amblyomma tigrinum. This paper reports for the first time larvae of R. b. microplus and adult of A. brasiliense parasitizing C. brachyurus in the country, reinforcing the findings in previous studies of these species of ticks using the maned wolves as hosts . Blood and serum samples were also collected during chemical restraint, 67 blood samples of maned wolves and 52 adult ticks were tested using the technique of Polymerase Chain Reaction (PCR) for the detection of DNA of Anaplasma spp., Babesia spp. Ehrlichia spp., Hepatozoon spp. and Rickettsia spp. Serology was performed for the detection of antibodies to Rickettsia spp. 210 serum samples of domestic dogs were tested and 43 were positive. Four individuals showed reaction homologous to R. parkeri, two for R. rhipicephali and one for R. rickettsia. In addition, we tested 88 serum samples of maned wolf and 84 were positive for at least one species of Rickettsia and indicated homologous reaction to R. parkeri and R. rhipicephali. 84 maned wolf serum samples were in serology for Ehrlichia canis and 16 were positive. In molecular tests was detected and confirmed the presence of H. canis, H. felis and R. parkeri had already been described for the vertebrate and invertebrate hosts tested in the study. This is also the first report of Candidatus R. andeanae and Candidatus Midichloria mitocondrii in A. tigrinum

Rickettsia rickettsii é uma bactéria intracelular obrigatória e agente etiológico da febre maculosa brasileira, uma grave enfermidade para humanos. Na América do Sul, o principal vetor para o agente é o carrapato Amblyomma cajennense. Alguns animais exercem um papel importante na manutenção da bactéria na natureza, uma vez que a mantêm em níveis altos na corrente sanguínea por alguns dias ou semanas, garantindo que novos carrapatos se infectem. Os equinos são um dos principais hospedeiros para A. cajennense, porém sua importância como hospedeiro amplificador de R. rickettsii ainda não havia sido estudada. Objetivou-se no presente trabalho detectar, em equinos experimentalmente infectados com R. rickettsii, possíveis alterações clínicas, ocorrência e duração de riquetsemia e ocorrência de transmissão da bactéria dos equinos para carrapatos A. cajennense, além de observar a curva de anticorpos IgG anti-R. rickettsii nestes animais. Para tanto, quatro equinos foram infectados com a amostra Taiaçu de R. rickettsii, sendo dois por meio de infestação com carrapatos A. cajennense infectados e dois por meio de inoculação intraperitoneal. Durante 30 dias, os animais foram examinados diariamente e amostras de sangue foram coletadas a cada dois dias para realização de hemograma, PCR em tempo real do sangue para detecção de Rickettsia e inoculação do sangue em cobaias. Adicionalmente, exames bioquímicos foram realizados a cada seis dias e RIFI para detecção de anticorpos IgG foi realizada até os animais se tornarem soronegativos. Para verificar a capacidade de transmissão para carrapatos, os equinos foram infestados com larvas, ninfas e adultos de A. cajennense não infectados. Após serem retirados dos equinos, estes carrapatos foram alimentados em coelhos e/ou testados pela PCR em tempo real e PCR convencional para detecção de Rickettsia. Os equinos não apresentaram sinais clínicos nem alterações significativas no hemograma e testes bioquímicos. Todas as amostras de sangue foram negativas na PCR em tempo real e nenhuma cobaia inoculada com sangue dos equinos apresentou sinais clínicos compatíveis com infecção por R. rickettsii, nem soroconversão. Os equinos apresentaram anticorpos detectáveis a partir de 10 ou 12 dias pós-inoculação ou infestação e permaneceram soropositivos por no mínimo 177 dias. Nenhum coelho infestado com carrapatos previamente alimentados nos equinos apresentou sinais clínicos ou soroconversão após 21 dias da infestação. Apenas um carrapato, originário de um equino infectado via carrapatos infectados, foi positivo concomitantemente na PCR em tempo real e PCR convencional. Conclui-se que equinos experimentalmente infectados com uma amostra brasileira de R. rickettsii não apresentam alterações clínicas nem bacteremia detectável e transmitem a bactéria para uma quantidade ínfima de carrapatos, porém desenvolvem boa resposta humoral. Pode-se inferir que, em condições naturais, equinos não são importantes como hospedeiros amplificadores para R. rickettsii. / Rickettsia rickettsii is an obligate intracellular bacterium and the etiological agent of Brazilian spotted fever, a severe illness of humans. In South America, the main vector for the agent is the tick Amblyomma cajennense. Some animals play an important role in maintenance of the bacterium in nature, since they develop high levels of bacteremia for a few days or weeks, ensuring that new ticks become infected. Horses are one of the major hosts for A. cajennense, but its importance as an amplifier host for R. rickettsii had not yet been studied. This study aimed to evaluate possible clinical changes, the occurrence and duration of rickettsemia, and the occurrence of transmission of the bacterium from horses to A. cajennense ticks in horses experimentally infected with R. rickettsii, in addition to observe the kinetics of anti-R. rickettsii IgG antibodies. Therefore, four horses were infected with R. rickettsii strain Taiaçu, two by infestation with infected A. cajennense ticks and two by intraperitoneal injection. For 30 days, the animals were examined daily and blood samples were collected every two days for hemogram, real-time PCR of whole blood for the detection of Rickettsia, and inoculation of guinea pigs with blood. Additionally, biochemical tests were performed every six days and IFA test for detection of IgG antibodies was performed until the animals become seronegative. In order to verify the ability of the horses to transmit the infection to ticks, horses were infested with uninfected A. cajennense larvae, nymphs and adults. After being removed from horses, these ticks were fed on rabbits and/or tested by real-time PCR and conventional PCR. The horses showed no clinical signs or significant changes in the blood count and biochemical tests. All blood samples were negative in the real-time PCR and no guinea pig inoculated with the horse blood showed clinical signs consistent with infection by R. rickettsii, neither seroconversion. Horses had detectable antibodies from 10 or 12 days post-inoculation or infestation and remained seropositive for at least 177 days. None of the rabbits infested with ticks previously fed on the horses showed clinical signs or seroconversion after 21 days of infestation. Only one tick fed on a horse infected by infected ticks was positive in the real-time PCR and conventional PCR. The results allows to conclude that horses, experimentally infected with a Brazilian strain of R. rickettsii, do not exhibit clinical changes or detectable bacteremia, and transmit the bacterium to a very small amount of ticks, but develop good humoral response. We can infer that horses are not important as amplifiers hosts for R. rickettsii under natural conditions.

A diapausa comportamental em carrapatos é caracterizada pela perda temporária da agressividade do indivíduo, tendo como conseqüência o prolongamento do período sem alimentação, sendo detectada em larvas de Amblyomma cajennense. Esta espécie destaca-se como principal vetor da Febre Maculosa no Sudeste brasileiro. Este estudo objetivou avaliar os efeitos do fotoperíodo e da temperatura na regulação da diapausa comportamental em larvas não-alimentadas de A. cajennense. Para isso, fêmeas ingurgitadas foram obtidas de eqüinos naturalmente infestados de Janeiro à Fevereiro de 2005 e 2006. No laboratório, cada grupo experimental foi composto por oito fêmeas ingurgitadas colocadas em vaso contendo capim braquiária (Brachiaria decumbens). Cada vaso foi exposto a uma condição de temperatura e fotoperíodo dentro de incubadoras B.O.D. (Marconi MA 402). A fotofase foi estabelecida por 4 lâmpadas (Philips TLT 75RS Extra luz do dia 20w) e a escotofase pela ausência total de luz. Os parâmetros biológicos observados foram período de pré-postura, incubação dos ovos, de permanência das larvas debaixo do capim e de presença de larvas na ponta do capim (comportamento de busca pelo hospedeiro). Paralelamente, verificou-se o poder infestante de larvas em diapausa para frangos (Gallus gallus), em comparação com larvas em não diapausa. Os resultados obtidos demonstram que, sob variação de fotoperíodo com temperatura constante de 25oC, a duração do intervalo de pré-postura e de incubação dos ovos foi semelhante em todos os grupos experimentais (1 a 2 semanas para período de pré-postura e 5 semanas para período de incubação dos ovos). Observou-se que a combinação de fotoperíodo 14:10 (claro:escuro) induziu a diapausa, sendo que o fotoperíodo de 12:12 ou 10:14 determinaram o término da diapausa. Em outras combinações de fotoperíodo, onde larvas estiveram no fotoperíodo de 12:12 ou 10:14 desde a eclosão, a aglomeração nas pontas do capim ocorreu dentro das primeiras semanas de vida das larvas. Larvas mantidas em fotoperíodo 12:12 e 10:14 não entraram em dormência e larvas mantidas em condição de fotoperíodo de 14:10 permaneceram no solo por tempo maior que as outras. No entanto, a diminuição da temperatura de 25 para 15oC, no fotoperíodo constante de 14:10, induziu o término da diapausa. Em todos os experimentos realizados sob fotoperíodo de 10:14, nenhum dos regimes de temperatura foi eficiente para induzir a diapausa. Houve diferença no intervalo de incubação dos ovos entre grupos experimentais com temperatura de 25 e 20oC. Não houve diferenças significantes (P > 0,05) entre proporções de larvas em diapausa e em não diapausa que se ingurgitaram nos frangos, embora larvas em diapausa apresentaram período parasitário significativamente mais longo (P < 0,05). Conclui-se que a diapausa em larvas de A. cajennense é induzida somente se a condição de fotoperíodo estiver com maior número de horas de claro (14:10) durante a eclosão das larvas. Temperaturas de 20 ou 25oC não são capazes de induzir a diapausa, quando mantidas em fotoperíodo 12:12 ou 10:14. O término da diapausa é desencadeado tanto pela mudança de fotoperíodo (14:10 para 12:12 ou 10:14) como pela diminuição da temperatura de 25 para 15oC. / Behavioral diapause in ticks is characterized by the temporary loss of aggressiveness, and consequently, to the extension of the starvation period, as recently detected in Amblyomma cajennense larvae. This species is the main vector of spotted fever in southeastern Brazil. The present study aimed to evaluate the effect of photoperiod and temperature on the regulation of behavioral diapause of A. cajennense unfed larvae. For this purpose, engorged females were obtained from horses naturally infested from January to February in each of the years 2005 and 2006. In the laboratory, each experimental group was composed by eight engorged females, which were placed in a grass plot composed by the grass Brachiaria decumbens, held in a small basket (40 cm diameter). Each plot was exposed to a particular condition of temperature and photoperiod within a BOD incubator (Marconi MA 402). Photoperiod was provided by 4 lamps (Philips TLT 75RS 20w) and scotophase by total darkness. Evaluated tick biological parameters were preoviposition and incubation periods, as well as the period of time the larvae remained under the grass after hatching, and the period of time that larvae were seen questing on the top of the grass leaves (host questing). The infestation capacity of diapause larvae to feed on chickens (Gallus gallus) was compared to larvae without being in diapause. The results showed that under variation of photoperiod and constant temperature of 25oC, the duration of preoviposition and incubation periods were similar in all the experimental groups (1 to 2 weeks to preoviposition and 5 weeks for egg incubation). Photoperiod 14:10 (light: dark) induced recently hatched larvae to enter diapause, whereas photoperiod 12:12 or 10:14 determined the end of diapause. In other combinations of photoperiod, where larvae were in photoperiod 12:12 or 10:14 from the eclosion, formation of larval clusters on the top of grass leaves occurred within the first weeks after larval eclosion. Larvae kept in photoperiod 12:12 and 10:14 did not enter in dormancy, whereas larvae maintained in photoperiod 14:10 since eclosion remained in the soil under the grass for longer periods. However, the decrease in temperature from 25 to 15oC under constant photoperiod of 14:10 triggered the end of diapause. In all experiments performed under photoperiod of 10:14, none of the temperature regimes was effective to induce diapause. There were different incubation periods between experimental groups held at 25 and 20oC. There were no significant differences (P > 0.05) between the proportions of diapause and non-diapause larvae that engorged on chickens, although the period of parasitism of larvae in diapause was significantly longer (P < 0.05). As conclusions for the present study, diapause in A. cajennense larvae is induced only if the condition of photoperiod is with more hours of light (14:10) during larval eclosion. Temperatures of 20 or 25oC are not able to induce diapause, when kept in photoperiod 12:12 or 10:14. The end of diapause is triggered both by the change in photoperiod (14:10 to 12:12 or 10:14) and the decrease in temperature from 25 to 15oC.

Estudos filogenéticos recentes mostram que na América Latina há dois grupos distintos de carrapatos identificados como R. sanguineus. Carrapatos R. sanguineus da chamada América Latina temperada (Chile, Argentina, Uruguai e estado do Rio Grande do Sul) formam um grupo monofilético, claramente distinto de um segundo grupo monofilético, formado por R. sanguineus da denominada América Latina tropical (desde México ao estado Brasileiro de Santa Catarina), com claras possibilidades desses dois grupos estarem representados por duas espécies distintas dentro do complexo sanguineus. Estudos sobre erliquiose canina (causada por Ehrlichia canis) na América Latina indicam que E. canis é altamente prevalente em países da América Latina tropical, porém rara ou escassa na América Latina temperada. Desta forma, a hipótese primária do presente projeto foi que a ausência ou escassez de casos de erliquiose canina na América Latina temperada se deve à baixa competência vetorial dos carrapatos sob o táxon R. sanguineus presentes nessa região, ao contrário da América tropical, em que os carrapatos presentes sob o táxon R. sanguineus possuem alta competência vetorial para E. canis. Baseado no exposto acima, o objetivo geral do presente projeto foi avaliar de forma comparativa a competência vetorial de quatro populações de R. sanguineus da região Neotropical, uma representando a América Latina tropical e três representando a América Latina temperada. Carrapatos nas fases de larvas e ninfas, derivados de quatro populações de R. sanguineus, provenientes da Argentina (América Latina temperada), Estado do Rio Grande do Sul (América Latina temperada), Uruguai (América Latina temperada) e da cidade de São Paulo, Brasil (América Latina tropical) foram expostos a E. canis, ao se alimentarem em cães infectados com E. canis, na fase aguda da doença. Em paralelo, larvas e ninfas não infectadas de cada uma das quatro populações foram levadas a infestar cães não infectados (grupo controle). As larvas e ninfas ingurgitadas, recuperadas nessa primeira fase, foram deixadas em estufa para realizarem ecdise para ninfas e adultos, respectivamente. Parte destas ninfas e adultos foi separada para análises moleculares. Outra parte dessas ninfas e adultos foi levada a infestar cães susceptíveis, a fim de se verificar a competência vetorial desses carrapatos das quatro populações. Nas infestações realizadas, amostras de sangue dos cães infestados foram colhidas semanalmente durante sessenta dias. Parte desse sangue foi processado imediatamente para hemograma, mostrando que somente os cães infestados com adultos de R. sanguineusde São Paulo, expostos a E. canis na fase de ninfa, apresentaram alterações marcantes de números de eritrócitos, volume globular, hemoglobina e plaquetas abaixo do valor mínimo de referência para cães sadios. Todos os demais cães infestados apresentaram valores de hemograma sem grandes alterações significativas. Nenhum cão apresentou febre. A outra parte do sangue colhido semanalmente foi separada para processamento por PCR em tempo real para pesquisa de DNA de E. canis e sorologia para pesquisa de anticorpos anti-E. canis. As análises moleculares (PCR em tempo real para pesquisa de DNA de E. canis) e sorológicas (imunofluorescência indireta) de todos esses cães foram realizadas, assim como as análises moleculares dos carrapatos, a fim de se verificar a freqüência de carrapatos de cada população que se infectou, após se alimentarem em cães infectados. Os resultados indicam que somente os carrapatos da colônia de São Paulo (América Latina tropical) foram competentes para transmitir a doençaa três cães sadios, que se mostraram positivos na PCR em tempo real e na soroconversão para E. canis. Todos os cães infestados com carrapatos das colônias da América Latina temperada (Chile, Argentina, Uruguai e estado do Rio Grande do Sul) não se infectaram por E. canis, mesmo que esses carrapatos haviam se alimentado, num estágio anterior, em um cão sabidamente infectado. Os testes moleculares dos carrapatos corroboram esses resultados, uma vez que nenhum carrapato adulto (exposto E. canis na fase de ninfa) das colônias da Argentina e Uruguai se mostrou positivo na PCR em tempo real, ao passo que pelo menos 1% das ninfas e 28% dos adultos de R. sanguineus da colônia São Paulo se mostraram positivos, após se alimentarem como larvas e ninfas, respectivamente, no mesmo cão infectado que serviu de alimento para os carrapatos da América Latina temperada (Uruguai, Argentina e Rio Grande do Sul). Em relação aos carrapatos provenientes do estado do Rio Grande do Sul, 4% dos adultos analisados logo após a ecdise se apresentaram positivos na PCR em tempo real, mas nenhum adulto foi positivo 30 dias após a ecdise. Como os carrapatos dessa população não foram competentes para transmitir a bactéria para cães susceptíveis, presume-se que os resultados positivos na PCR logo após a ecdise se deva a DNA residual da bactéria ingerida na alimentação da ninfa no cão infectado. Carrapatos adultos das quatro populações estudadas foram inoculados pela via intracelomática com emulsão de células DH82 infectadas com E. canis. Após ficarem incubados por 10 dias numa incubadora BOD a 25oC, se alimentaram por cinco dias em coelhos, quando então foram manualmente retirados e tiveram suas glândulas salivares dissecadas e submetidas a extração de DNA. Pela PCR em tempo real, somente 1 (10%) de 10 carrapatos da população de São Paulo foi positivo para E. canis, ao passo que nenhum carrapato das demais populações (10 carrapatos por população) foi positivo.Amostras de carrapatos adultos do grupo R .sanguineus coletados a campo em diferentes regiões do Brasil foram analisadas através da técnica de PCR em tempo real para verificar a presença da bactéria E. canis. Foram coletados R.sanguineus dos seguintes locais (30 a 374 carrapatos por localidade): São Paulo/SP, Cuiabá/MT, Campo Grande/MS, Paulo Afonso/BA, Cachoeira do Sul/RS, São Luís/MA, Uberlândia/MG, Bandeirantes/PR, Petrolina/PE, Ji-Paraná/RO; e amostras de Montevidéu (Uruguai) e Rafaela (Argentina). Apenas os carrapatos de Cachoeria do Sul/RS, Campo Grande/MS, Montevidéu (Uruguai) e Rafaela (Argentina) foram todos negativos na PCR. Nas demais localidades, o percentual de carrapatos positivos para E. canis variou de 2,0 a 7.9%. Os resultados deste trabalho servem para uma melhor compreensão da ausência de casos de infecção canina por E. canis na América Latina temperada (cone sul) e reforçam a hipótese de que tal fato se deve à baixa competência vetorial dos carrapatos sob o táxon R. sanguineus presentes nessa região, ao contrário da América tropical, onde os carrapatos presentes sob o táxon R. sanguineus possuem alta competência vetorial. / Philogenetic studies have shown that in Latin America two different groups of the tick species Rhipicephalus sanguineus. These two groups found apart in two different regions, the Temperate region (Chile, Argentina, Uruguay and Southern Brazil) and the Tropical region (From Southern Brazil up to Mexico). It is likely that those two groups are represented by two different species within R. sanguineus group. Studies on ehrlichiosis (caused by Ehrlichiacanis) in the Latin America point thet E. canis is highly prevalent in the Tropical region whereas is rarely report in Temperate region. The present study tests the hypothesis that the distribution of ehrlichiosis are related to the low vectorial competence of the tick within the taxon group R. sanguineus found in the Temperate area and the high vectorial competence of the tick within the taxon group R. sanguineus found in the Tropical area. The objective of this study was to evaluate comparatively the vectorial competence of four R. sanguineus tick population, where three were collected in Temperate Area, from Argentina, Uruguay and State of Rio Grande do Sul (Brazil) and one from Tropical Area from the State of São Paulo (Brazil). Ticks from all four populations were exposed to E. canins through feeding upon infected dogs in acute disease phase, a control group were set up for each population by feeding larvae and nymphs on non infected dogs. All larvae and nymphs collected in this part of the study were allowed to molt in incubator (27oC,>85%RH) to nymphs and adults, respectively. Part of the ticks were selected to underwent molecular analysis, other part were released on susceptible dogs, in order to determine the vectorial competence for each of the tick populations. From the carried out infestations, samples of blood from the infested dogs were drawn weekly during 60 days. Part of the drawn blood was processed for hemogram that yielded that dogs infested with ticks from the São Paulo population, exposed to E. canis during the nymphal stage, showed important alteration on the number of erytrocytes, hemoglobine, packed cell volume, and platelets underneath the threshold for health dogs. All other dogs showed no important alteration in blood parameters. No fever was detected in any of the dogs. The other part of the weekly drawn blood from each dog was processed by real time PCR targeting E. canis DNA and processed by serology (Indirect immunofluorescence) seeking for anti-E. canis antibodies. Molecular analysis (real time PCR) on ticks were carried out in order to detect the prevalence of infected ticks on each population. Results show that only the ticks from the São Paulo population (Tropical Region) were competent in transmitting E. canis to three susceptible dogs, since material from these three fogs yielded positive in real time PCR and sorology tests. All dogs infested with ticks from the Argentina, Urugay and State of Rio Grande do Sul (Temperate Regions) population have not being infected by E. canis. The molecular tests on the ticks support this find since no tick from Argentina and Uruguay population yielded positive in the real time PCR, whereas about 1% of the nymphs and 28% of the adults of ticks from São Paulo population yielded positive in the real time PCR. The ticks from the State of Rio Grande do Sul population showed 4% of positive for real time PCR among the adult ticks tested, but when these ticks fed on susceptible dogs, they were not competent in transmitting the bacterium, what may shown that these PCR positive ticks might have residual bacterium DNA in the midgut. Analysis on the salivary gland from the adult ticks from all four tick populations that were either incoculates in vitro with E. canis or feeding upon infected dogs, showed positive for E. canis DNA only in the São Paulo population. Samples of ticks collected from different regions of Brazil were analyzed by real time PCR in order to detect E. canis bacterium DNA. There were collected R. sanguineus from the cities of São Paulo, Cuiabá, Campo Grande, Paulo Afonso, Cachoeira do Sul, São Luís, Uberlândia, Bandeirantes, Petrolina, Ji-Paraná; e amostras de Montevidéu (Uruguay) e Rafaela (Argentina). The State of Maranhão showed 7.94% of positive ticks, that being the highest prevalence found. Samples from State of Rio Grande do Sul, Campo Grande City, alongside with cities of Rafaela (Argentina) and Montevidéu (Uruguay), showed none positive tick for E. canins bacterium DNA. All presented data contribute for a better understanding on the absence of canine ehrlichiosis cases in the Temperate Latin America (Southern South America) and therefore support the hypothesis that this fact is related to the low vetorial competence of the ticks within the R. sanguineus taxon founded in this region, on the other hand, ticks within the R. sanguineus taxon found in Tropical Latin America show high vectorial competence in E. canis transmission.

Introdução: A OMS recomendou às Américas, em 2004, implementar e aperfeiçoar sistemas específicos de vigilância epidemiológica das rickettsioses, caracterizando as áreas de transmissão dos diferentes agravos, investindo em vigilância epidemiológica e ambiental ativas. Estas são zoonoses relacionadas aos fatores fundamentais da expansão urbana, bem como ao aumento populacional de vetores e hospedeiros em contato com a população humana. Nas regiões do Vale do Paraíba paulista não há situação de endemia reconhecida, porém esta apresenta semelhanças ambientais e socioeconômicas com outras regiões ditas endêmicas, do Estado de São Paulo, não rara é a ocorrência de carrapatos das espécies descritas como vetores de doenças e ocorre importante intercâmbio de pessoas com objetivos de trabalho e lazer ao longo desta região, inclusive com freqüente fluxo internacional. Método: Avaliação do potencial de risco de transmissão de zoonoses por carrapatos em áreas selecionadas. Através de informações ambientais, prevalência de carrapatos transmissores de zoonoses e acessibilidade da população humana a áreas infestadas, criou-se uma escala para caracterização do risco. Resultados: Em 252 áreas das 6 microrregiões do Vale do Paraíba Paulista, no período de mai./2008 a mar./ 2009, foram encontrados 7.800 carrapatos adultos, além de ninfas e larvas, muitas das quais em criações familiares de coelhos e galinheiros. A classificação final apontou 42,5% das áreas inspecionadas em situação de risco iminente de transmissão de zoonoses por carrapatos. Outros 33% correspondeu ao risco limitado ou moderado. Nos restantes 24% da área estudada a classificação foi risco potencial para transmissão rickettsioses. Recomendações: Às áreas sob risco iminente, de situação de risco de transmissão de zoonoses por carrapatos, recomenda-se que os serviços de saúde locais mantenham uma vigilância acarológica programada e orientações à população. Às áreas sob risco limitado ou moderado, recomenda-se a manutenção de rotina de vigilância acarológica e inclusão da vigilância ambiental, com envolvimento da população. Às áreas sob risco potencial para transmissão de zoonoses, recomenda-se imediata elaboração de estratégias controle para as espécies encontradas, envolvendo os setores de saúde e a população. O aprimoramento da articulação com os serviços regionais e profissionais veterinários é de fundamental importância. Além disso, a estruturação dos serviços de saúde da região, adequação da área física, recursos humanos e materiais, são indispensáveis. / Introduction: OMS recommended America, in the year of 2004, implement and to improve specific systems of epidemic surveillance of the rickettsiasis, characterizing the areas of transmission of the different offences and investing in active epidemic and environmental surveillance. Those zoonosis are related to the fundamental factors of the urban expansion, as well as to the population increase of vectors and hosts in contact with the human population. In the areas called Vale do Paraíba from State of São Paulo there is no situation of recognized endemy, however this presents environmental and socioeconomic similarities with other recognized endemic areas of the State of São Paulo, no rare it is the occurrence of ticks described as vectors of diseases and it happens important exchange of people with work and leisure purposes there, besides with frequent international flow. Method: Evaluation of potential risk of zoonosis transmission by ticks in selected categorized areas. Through environmental information, the prevalence of vector ticks and accessibility of the human population to infested areas, a scale for characterization of the risk was build. Results: In 252 areas of the 6 districts of the Vale do Paraíba, in the Estado de São Paulo, on period between may/2008 and march/ 2009, they were found 7.800 adult ticks, also nymphs and larvas, many of which in family nurturing of rabbits and hen houses. The final classification pointed 42,5% of the inspected areas corresponding to the situation of imminent risk of transmission of zoonosis by ticks. Other 33% correspond to limited risk in the scale. In the remaining 24% of the studied area the classification went potential risk for transmission of tick related rickettsiasis. Recommendations: For the imminent risk areas, it is recommended that the local health services maintain proper vector surveillance and educational programmes for its populations. For the limited risk areas, it is recommended the maintenance of a proper vector surveillance routine and also the inclusion of an environmental surveillance. For the areas under potential transmission risk of those illnesses, priority elaboration of vectors control strategies is strongly recommended with proper engagement of all local health services, as well as the population. The enhancement of the articulation with the regional services and professional veterinarians is fundamental. Besides, an adequate structuring for the local health services administration, with rational and efficient managing of material and human resources, is indispensable.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-04-04T14:29:38Z No. of bitstreams: 1 caiomarciodeoliveiramonteiro.pdf: 1857142 bytes, checksum: 6df29461b8db39b06498cf5c935d15f1 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-04-04T15:38:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 caiomarciodeoliveiramonteiro.pdf: 1857142 bytes, checksum: 6df29461b8db39b06498cf5c935d15f1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-04T15:38:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 caiomarciodeoliveiramonteiro.pdf: 1857142 bytes, checksum: 6df29461b8db39b06498cf5c935d15f1 (MD5) Previous issue date: 2009-02-18 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Em vista do atual quadro de resistência do carrapato dos bovinos aos carrapaticidas comerciais, somando-se ainda a necessidade de preservação ambiental e de alimentos livres de resíduos, novas alternativas no controle deste artrópode vem ganhando maior atenção. Entre estas podemos destacar a utilização de nematóides entomopatogênicos como promissores agentes de controle biológico de ixodídeos e, desta forma, a Embrapa Gado de Leite vem desenvolvendo uma linha de pesquisa que investiga interações entre este ixodídeo e estes nematóides. Com objetivo de avaliar a eficiência de duas espécies de nematóides no controle do carrapato dos bovinos, o presente trabalho foi dividido em três experimentos que avaliaram o potencial “in vitro” de Heterorhabditis bacteriophora HP88 e Heterorhabditis amazonensis RSC-5 como controladores biológicos de Rhipicephalus (Boophilus) microplus. O estudo foi desenvolvido no Laboratório de Parasitologia da Embrapa Gado de Leite, Juiz de Fora, Minas Gerais. No primeiro experimento foi avaliada a eficiência de diferentes dosagens de juvenis infectantes de H. bacteriophora HP88 no controle do carrapato dos bovinos. A eficácia dos tratamentos foi superior a 90% em todas as concentrações utilizadas, demonstrando que este isolado foi altamente eficaz na redução da prole de R. (B.) microplus em condições de laboratório. No segundo experimento, foi feita a mesma avaliação, xiv entretanto foi empregado o nematóide H. amazonensis RSC-5. Os resultados alcançados com H. amazonensis RSC-5 foram inferiores aos obtidos com H. bacteriophora HP88, sendo que a melhor eficácia foi de 67% no tratamento com 300 NEPs/fêmea. Por ter sido mais eficiente, H. bacteriophora HP88 foi à espécie selecionada para o desenvolvimento do terceiro experimento, que buscou avaliar o efeito de diferentes tempos de exposição de fêmeas ingurgitadas de R. (B.) microplus a juvenis infectantes deste nematóide. Os resultados alcançados mostram que tempos de exposição inferiores a 24h não são suficientes para que o nematóide exerça controle eficiente sobre este ixodídeo. Entretanto, a partir de 24h de exposição o percentual de controle foi de 82%, e com 48 e 72h esta eficácia chegou a 100%. Os resultados alcançados no presente estudo demonstram que “in vitro” estes nematóides são eficientes no controle do carrapato dos bovinos, entretanto, ainda é necessária a realização de estudos futuros para investigar o potencial destes agentes de controle biológico em condições de campo e os possíveis impactos que esta utilização possa causar. / Because of the widespread resistance of cattle ticks to commercial carrapaticides and the need to protect the environment and food supply from chemical residues, there is increasing interest in finding new control alternatives. Among these is the use of entomopathogenic nematodes as biological control agents. In this effort, the Embrapa Dairy Cattle Research Center (Embrapa Gado de Leite) has been conducting a line of research investigating the interactions between cattle ticks and these nematodes. The present work examines the efficiency of two nematode species in the control of cattle ticks. We conducted three experiments to evaluate the in vitro potential of Heterorhabditis bacteriophora HP88 and Heterorhabditis amazonensis RSC-5 as biological controls of Rhipicephalus (Boophilus) microplus. The study was conducted in the Parasitology Laboratory of Embrapa Gado de Leite in Juiz de Fora, Minas Gerais, Brazil. In the first experiment the efficiency was evaluated of different concentrations of infective juveniles of H. bacteriophora HP88 to control the ticks. The efficiency of the treatment was greater than 90% at all the concentrations tested, demonstrating this isolate is highly effective in reducing the reproductive capacity of R. (B.) microplus in laboratory conditions. In the second experiment, the same evaluation was carried out employing different concentrations of the nematode H. amazonensis RSC-5. The results were inferior to those obtained with H. bacteriophora HP88. The best efficacy xvi was 67% in the treatment with 300 EPNs/female. Because it was more efficient, we chose H. bacteriophora HP88 for the third experiment, which evaluated the effect of different exposure times of engorged females of R. (B.) microplus to infective juveniles of this nematode. The results obtained show that exposure times shorter than 24 hours are not sufficient for the nematode to have a significant control effect on this tick. However, with exposure for longer than 24 h the control percentage rose to 82%, and at 48 and 72h it reached 100%. The results obtained in this study show that in vitro these nematodes are efficient in controlling cattle ticks, but further studies are necessary to investigate the of these biological control agents under field conditions and the possible impacts this can cause.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-06-22T11:15:51Z No. of bitstreams: 1 marcioscoralickgoldner.pdf: 1368658 bytes, checksum: 524048ed973021e443fbeb565aadcf5d (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-06-24T13:12:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 marcioscoralickgoldner.pdf: 1368658 bytes, checksum: 524048ed973021e443fbeb565aadcf5d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-24T13:12:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marcioscoralickgoldner.pdf: 1368658 bytes, checksum: 524048ed973021e443fbeb565aadcf5d (MD5) Previous issue date: 2011 / O uso indiscriminado de carrapaticidas sintéticos e o quadro de resistência aos produtos utilizados no mercado impulsionaram novas pesquisas e alternativas ao combate aos parasitos hematófagos. Dentre as alternativas mais promissoras, pode-se evidenciar o uso de substâncias e seus derivados provenientes de plantas com objetivo de implementar de carrapaticidas de origem natural que podem ser menos prejudiciais ao meio ambiente. O presente trabalho teve por objetivo potencializar ‘’in vitro’’ a eficácia carrapaticida do timol frente a larvas de R. (B.) microplus. No primeiro experimento, foram elaboradas três formulações, visando à escolha do preparado com melhor custo-benefício sem que os diferentes componentes das formulações interferissem na eficácia carrapaticida. A formulação de escolha demonstrou a mortalidade de 96,65% das larvas mantendo a eficácia carrapaticida do timol a 2% acima dos limites preconizados pelo Ministério da Agricultura de 95% para produtos comerciais. No segundo experimento, foram testadas, na formulação eleita, as concentrações de 0,25%%, 0,5% e 1% de timol sobre larvas de R. (B.) microplus, sendo que a taxa de mortalidade obtida com 0.25% foi de 94%, demonstrando que mesmo com baixa concentração de timol a eficácia carrapaticida foi considerável. Os resultados alcançados mostram que, in vitro, a eficácia carrapaticida do timol pode ser não somente mantida, como potencializada se for levada em consideração a metodologia de preparo da formulação, bem como características físico-químicas dos seus componentes, visando minimizar perdas do princípio ativo. Entretanto, são necessárias pesquisas futuras para ratificar o potencial acaricida do timol em ambiente de campo, modificando e testando diferentes apresentações. / The indiscriminate use of synthetic acaricides and the picture of resistance to products used in the market spurred new research and alternatives to combat these hematophagous parasites. Among the most promising alternatives, it can be highlight the use of substances and their derivatives from plants, aiming to implement the carrapaticide products of natural origin that may be less harmful to the environment. This study aimed to ''enhance'' the in vitro acaricide efficacy of thymol against the larvae of R. (B.) microplus. In the first experiment, three formulations were prepared, in order to choose the most cost-prepared without any of the different components interfere with the efficacy of insecticide formulations. The formulation of choice showed 96.65% mortality of larvae still remain effective insecticide of the thymol 2% above the limits established by the Ministry of Agriculture of 95% for commercial products. In the second experiment, were tested in the formulation choice, the concentrations of 0.25%, 0.5% and 1% of thymol on larvae of R. (B.) microplus, with a mortality rate of 94% with 0.25% of thymol, demonstrating that even in low concentrations of thymol acaricide efficacy was considerable. The results show that in vitro, acaricide efficacy of thymol can be not only maintained, as increased if it is taken into account the preparation method of the formulation and the physicochemical characteristics of its components in order to minimize losses of active. However, further research is needed to ratify the acaricidal potential of thymol in a field environment, modifying and testing different presentations and to assess its impact on the environment.

The Lyme disease causing spirochaete Borrelia burgdorferi sensu lato is transmitted by ticks within the genus Ixodes. These ticks are liberal host seekers and parasitise mammals, birds and reptiles. Prior to this study, the distribution of I. ricinus ticks and Lyme disease was thought to be restricted to the southern half of Sweden. On the island Norrbyskär, located in the Bothnian Gulf, there were reports of a high incidence of tick infestation on humans. To investigate the occurrence of B. burgdorferi s.l. in these ticks and to characterise presumptive isolates at the molecular level we sampled a number of I. ricinus ticks. Three different isolates were obtained from two different ticks, NBS16 from a nymph and NBS23a and NBS23b from an adult female tick. The seabird associated tick I. uriae is circumpolar distributed in both hemispheres. On the island Bonden, which house one of the largest seabird colonies in the Baltic Sea, I. uriae were collected and surveyed for spirochaetes. One isolate of B. burgdorferi s.l. was obtained. This B. burgdorferi s.l. isolate is identical to the Lyme disease Borrelia strain NBS16 isolated from Norrbyskär. To investigate the role of seabirds in the epidemiology of B. burgdorferi s.l., I. uriae were collected from seabird colonies in the southern and northern hemispheres. Borrelia DNA was extracted from the ticks and from cultured spirochaetes. Sequence analysis of the flagellin gene revealed that the DNA obtained was from B. garinii, regardless of the geographical origin of the sample. Identical fla gene fragments in ticks collected in both hemispheres indicate a transhemispheric exchange of B. garinii. A marine ecological niche and epidemiological route for Lyme disease Borrelia are proposed. The prevalence of B. burgdorferi s.l. infected ticks on migrating passerine birds was studied. A total of 22, 998 birds were caught and examined for ticks. The presence of spirochaetes in the 967 collected ticks was determined by DNA amplification by PCR on all ticks. To determine which B. burgdorferi s.l. species were present, classification was performed by DNA amplification using species-specific 16S rDNA primers and by DNA sequencing. Flagellin gene sequences of all species of B. burgdorferi s.l. previously recorded in Europe were found. B. garinii was the most prevalent. These data support the notion that passerine birds are at least partly responsible for the distribution of Lyme disease Borrelia spirochaetes in Europe. To elucidate the distribution of B. burgdorferi s.l. in subarctic regions, strains isolated from I. ricinus and I. uriae ticks found on islands in the northern Atlantic and Baltic Sea were characterised molecularly. All isolates were verified as B. garinii by 16S-rRNA gene analysis and immunoblotting using monoclonal antibodies specific for the outer surface proteins A and C. Three ribotypes (RT's) of B. garinii were found. The I. ricinus associated RT1 is phenotypically the most heterogeneous. RT2 is restricted to the islands in the northern Baltic Sea, whereas RT3 was also recovered from ticks found on islands in the North Atlantic. The heterogeneity of the B. garinii population in the Baltic Sea might be influenced by two geographically opposite directions, North Atlantic (RT3) and Euroasia (RT1). / digitalisering@umu.se