Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-graduação em Biologia Molecular, 2015. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-04-29T17:53:00Z No. of bitstreams: 1 2015_BeatrizElenaSarmientoCertuche.pdf: 2010818 bytes, checksum: 44239020dbd54eefb4f5d8cd7d338b78 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2015-04-30T14:13:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_BeatrizElenaSarmientoCertuche.pdf: 2010818 bytes, checksum: 44239020dbd54eefb4f5d8cd7d338b78 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-30T14:13:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_BeatrizElenaSarmientoCertuche.pdf: 2010818 bytes, checksum: 44239020dbd54eefb4f5d8cd7d338b78 (MD5) / Os acidentes gerados pelos animais aquáticos, marinhos e fluviais, são muito comuns e a maioria deles ocorre de maneira ocasional gerando processos dolorosos como necroses, mutilações, perda de movimento e até morte. A sintomatologia dos acidentes gerados por peixes marinhos é amplamente conhecida; entretanto, ainda são poucos os estudos de caracterização dos acidentes provocados por peixes de água doce. A maioria dos acidentes envolvendo animais aquáticos no Brasil é causada por bagres marinhos e de água doce. Pimelodus maculatus é um peixe de água doce muito comum nas bacias brasileiras, responsável pela maioria dos acidentes, principalmente entre os pescadores. As características do veneno e seus mecanismos patológicos são pouco conhecidos. No presente estudo, foram caracterizados os principais efeitos (dor e edema) causados pelo extrato proteico do ferrão do peixe P. maculatus. Em termos de concentração de proteína, estima-se que o extrato proteico de um ferrão de P. maculatus contém aproximadamente 100 μg de proteína (equivalente a 62,5% do peso seco do extrato aquoso), provavelmente a quantidade de material proteico envolvido no envenenamento. O extrato proteico de um ferrão de P. maculatus gerou um acentuado efeito nociceptivo e edematogênico. O efeito inflamatório observado está relacionado a alterações na permeabilidade vascular e à expressão dos mediadores inflamatórios IL- 1β, IL- 6 e anti-inflamatório IL-10. Além disso, o extrato proteico do ferrão do peixe P. maculatus induziu uma pequena diminuição na força de contração no coração in situ em rã na dose de 200 μg, e não provocou hemorragia ou alterações nos tempos de coagulação (tempo de protrombina e tromboplastina parcial ativada), mas induziu alterações significativas nos níveis de CK e CK-MB em camundongos. Foi observada ação proteolítica sobre caseína, elastina e colágeno, evidenciando a presença de proteases no veneno que favorecem sua difusão no tecido, que consequentemente favorece o envenenamento. Portanto, o presente estudo apresentou uma correlação entre os efeitos obtidos experimentalmente e os principais sintomas observados nos acidentes com o peixe P. maculatus, em decorrência só, da ação biológica do extrato proteico do ferrão. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Accidents generated by marine and freshwater animals are very common, and the most of them occur accidentally generating painful processes such as necrosis, mutilation, loss of movement and even death. The symptoms of accidents generated by marine fish are widely known; however, there are few studies to characterize accidents caused by freshwater fish. Most accidents involving aquatic animals in Brazil is caused by marine and freshwater catfish. Pimelodus maculatus is a very common freshwater fish in Brazilian basins, responsible for most accidents, mainly among fishermen. The characteristics of the venom and its pathological mechanisms are poorly understood. In this study, the mainly effects (pain and edema) generated by protein extract of thorn of P. maculatus fish. It is estimated that the protein extract of P. maculatus thorn contains about 100 μg of protein (equivalent to 62.5% of the dry weight of the aqueous extract), probably the amount of protein material involved in the envenomations. The protein extract of P. maculatus generated a strong nociceptive and edematogenic effect. The inflammatory effect is related to changes in vascular permeability and expression of inflammatory mediators IL-1β, IL-6 and IL-10 anti-inflammatory. Moreover, the protein extract of thorn of P. maculatus fish induced a slight slight decrease in the contraction force in in situ frog heart at dose of 200 μg, did not cause hemorrhage or alterations in clotting times (prothrombin time and activated partial thromboplastin time), but induced significant changes in the levels of CK and its isoenzyme CK-MB in mice. A proteolytic activity was observed for casein, elastin and collagen, indicating the presence of proteases in the venom favoring its diffusion in the tissue, which help the poisoning. Therefore, the present study present a correlation between the effects obtained experimentally and the main symptoms observed in accidents provoked by P. maculatus, as a result only of the biological action of the protein extract thorn.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2012. / Submitted by Sabrina Silva de Macedo (sabrinamacedo@bce.unb.br) on 2012-07-11T14:16:20Z No. of bitstreams: 1 2012_VanessaCarvalhoMoreira.pdf: 10228696 bytes, checksum: 8be80b8cdf424d6c81e47b6c0ae89b9f (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-07-18T12:07:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_VanessaCarvalhoMoreira.pdf: 10228696 bytes, checksum: 8be80b8cdf424d6c81e47b6c0ae89b9f (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-18T12:07:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_VanessaCarvalhoMoreira.pdf: 10228696 bytes, checksum: 8be80b8cdf424d6c81e47b6c0ae89b9f (MD5) / A nanotecnologia representa, atualmente, uma área de grande interesse.Materiais nanoestruturados, como as nanopartículas magnéticas (NPMs) são uma ferramenta promissora para várias aplicações biomédicas como. por exemplo,sistemas entregadores de drogas, agente de contraste em imagem de tomografia computadorizada e ressonância magnética. No entanto, é necessário avaliar os efeitos causados por múltiplas administrações destas nanopartículas, para que estas possam se tornar uma ferramenta segura e amplamente utilizada. Desta forma, este trabalho tem o intuito de avaliar a biocompatibilidade e toxicidade de nanopartículas magnéticas a base de maguemita recobertas com ácido meso-2,3-dl mercaptosuccínico (NPMs-DMSA). Após múltiplas Injeções endovenosas, em camundongos Swiss macho. Para atingir este objetivo. 100 uL de NPMs-DMSA contendo cerca de 2,78x101E partículas/mL foram administrados a cada 15 dias até completar um período total de 45 dias, sendo eutanasiados 90 dias após o início da administração de NPMs-DMSA. Nos tempos de 30, 45, 60 e 90 dias os animais foram submetidos à microtomografia computadorizada. O tamanho e o potencial de carga de superfície das NPMs foram estudados e apresentaram diâmetro médio de8 nm e carga negativa (- 53.7 mV). A análise dos animais no microtomógrafo mostrou que as nanopartículas magnéticas não causaram alterações pulmonares visíveis e nem promoveram diferença significativa entre as densidades do pulmão. Após 90 dias do início da aplicação de múltiplas injeções de NPMs-DMSA testes hematológicos e bioquímicos realizados no sangue não mostraram alterações relevantes; a viabilidade de células da medula óssea e peritoneais não foi afetada ea análise histopatológica, por microscópio de luz, revelou a presença de aglomerados de NPMs no rim, pulmão, baço e fígado. Não foram observadas alterações morfológicas nestes órgãos, apenas pequenos nódulos linfocitários perivasculares no rim (não observado nos controles). Os resultados mostraram que múltiplas administrações de NPMs-DMSA não geraram danos ao organismo dos camundongos, sugerindo ser um material biocompatível e com potencial para aplicações biomédicas. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Nowadays, nanotechnology represents an area of increasing interest. Nanostructured materials, such as magnetic nanoparticles (MNPs) are a promissigtool for several biomedical applications, for example, drug delivery systems, contrast agent for tomography computed imaging and magnetic resonance. However, it is necessary to evaluate the effects caused by multiple administrations of the senanoparticles, so that they can become a safe and widely used. This way, this study aims to evaluate the biocompatibility and toxicity of maghemite based magneticnano particles coated with meso 2,3-dimercaptosuccinic acid (NPMs-DMSA), aftermultiple intravenous injections in male Swiss mice. 100 uL of NPMs-DMSA containing about 2,78x1015 particles/mL were administered every 15 days to complete a total period of 45 days. 90 days after the start of administration of NPMs-DMSA the animals were killed. In experimental times 30, 45. 60 e 90 days, the animals were submitted a microtomography analysis. The particle size and surface charge potencial of MNPs were determined. They presented a mean particle size of8 nm and a negative surface charge, as determined by measuring the zeta potencial (-53,7 mV). The microtomography analysis showed that the magnetic nanoparticlesdid not cause lung changes visible neither promoted significant difference between the densities of the lung. After 90 days of the beginning of administration of multiples injections of NPMs-DMSA hematological and biochemical blood tests showed no significant changes; the viability of bone marrow and peritoneal cells was not affected. Histological analysis showed the presence of clusters MNPs in the kidney,lung, spleen and liver. There were no morphological changes in these organs, onlysmall perivascular lymphocytic nodules in the kidney (not observed in controls). The results showed that multiple administration of NPMs-DMSA did not cause damage to the mice organism, suggesting being a biocompatible material with potential for biomedical applications.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-01-25T13:04:19Z No. of bitstreams: 1 2012_EvertonLuisSantosRosa.pdf: 14261948 bytes, checksum: a595deada5e0408cb827506c88a1d850 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2013-01-28T10:34:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_EvertonLuisSantosRosa.pdf: 14261948 bytes, checksum: a595deada5e0408cb827506c88a1d850 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-28T10:34:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_EvertonLuisSantosRosa.pdf: 14261948 bytes, checksum: a595deada5e0408cb827506c88a1d850 (MD5) / O crescente uso de nanomateriais como dióxido de titânio (TiO 2) em seres humanos na área biomédica, cosmética, alimentícia entre outras, tem estimulado pesquisas sobre toxicidade pelo potencial risco à saúde humana. Alguns aspectos da resposta inflamatória ao titânio no organismo ainda não foram completamente elucidados. Sabe-se que a exposição celular a nanopartículas (NPs) de TiO 2 pode induzir estresse oxidativo que desencadeia uma cascata de eventos com sinalização celular, respostas inflamatórias, proliferativas e genotóxicas. Os neutrófilos (PMNs) representam a primeira linha de defesa celular imunológica do organismo, sendo ativados e rapidamente recrutados para as regiões onde as NPs de TiO 2 foram implantadas. Este estudo teve como objetivo analisar as interações de neutrófilos humanos com NPs de TiO 2 in vitro, em diferentes tempos de exposição (1, 5, 30 e 60 minutos). A análise morfológica da interação foi obtida por microscopias de luz, eletrônica de varredura e de transmissão enquanto a espectroscopia de força atômica permitiu a análise das modificações mecânicas dos PMNs. A expressão de moléculas de adesão, CD-11b e CD-62L foi analisada por Citometria de Fluxo e o teste do Nitroblue tetrazolium (NBT) possibilitou a avaliação da produção de ânion superóxido pelos PMNs após incubação com NPs de TiO 2 . A eletroforese bidimensional de extratos protéicos de neutrófilos quiescentes e ativados por TiO 2 no tempo 30 minutos permitiu a comparação de mapas proteômicos e a identificação de proteínas por PMF (Peptide Mass Fingerprinting). As análises por microscopia de luz, de varredura e transmissão demonstraram que o fator tempo teve um efeito significativo sobre a capacidade de fagocitose e as alterações da morfologia dos PMNs. As análises de citometria de fluxo não demonstraram correlação entre as alterações morfológicas e do citoesqueleto e a expressão de moléculas de adesão (CD-11b e CD-62L). Ativação celular e produção de ânion superóxido foram demonstrados pelo teste do NBT ao longo do tempo. A espectroscopia de força atômica demonstrou aumento das forças de atração, de adesão bem como da rigidez, elasticidade e energia dissipada nos PMNs. A análise comparativa dos géis bidimensionais resultou em 7 spots com diferença significativa de abundância (p≤0,05), dos quais 3 proteínas foram identificadas por PMF. Tais proteínas têm funções relacionadas à regulação da organização do citoesqueleto, fagocitose e ao ciclo celular. O presente estudo representa uma contribuição para o esclarecimento dos mecanismos fisiológicos celulares envolvidos na interação de nanomateriais com o organismo. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The increasing use of nanomaterials such as titanium dioxide (TiO 2) in humans in the biomedical, cosmetics, food and other fields, has stimulated the research on toxicity, due to the potential risk to human health. Some molecular aspects of the inflammatory response after implantation of titanium in the body has not yet been fully elucidated. It is known that the exposure of cells to nanoparticles (NPs) can induce oxidative stress that triggers a cascade of events resulting in cell signaling, inflammatory, proliferative and genotoxic responses. Neutrophils are the first line of cellular immunological defense and are quickly recruited to the titanium implantation areas. The present study aimed to analyze the interactions of human neutrophils with TiO 2 NPs in vitro at different incubation times (1, 5, 30 and 60 minutes). The morphological characteristics of this interaction were analyzed by light, electron scanning and transmission microscopy, whilst atomic force spectroscopy allowed PMNs mechanical forces analysis. The expression of adhesion molecules, CD-11b and CD-62L, was analyzed by Flow Cytometry and the Nitroblue tetrazolium (NBT) test enabled the evaluation of superoxide anion production by PMN after incubation with TiO 2 NPs. The two-dimensional electrophoresis of protein extracts from quiescent and TiO 2 activated neutrophils after 30 minutes of incubation allowed the comparison of proteomic maps and protein identification by PMF (Peptide Mass Fingerprint). Light, scanning and transmission microscopies results showed that the time factor had a significant effect on PMNs phagocytosis and morphology changes. Flow cytometry analysis showed no correlation between adhesion molecules expression (CD-11b and CD-62L) and morphological alterations. The NBT test demonstrated PMNs activation and superoxide anion production after exposure to TiO 2 NPs. Moreover, atomic force spectroscopy demonstrated increased parameters for attractive and adhesion forces, stiffness, elasticity and dissipated energy in PMNs along the time course. The comparative analysis of two-dimensional gels resulted in 7 spots with statistically significant abundance (p ≤ 0.05), among which 3 proteins were identified by PMF. The identified proteins are related to the regulation of cytoskeleton organization, phagocytosis and cell cycle. This study represents a contribution to the elucidation of the physiological mechanisms involved in cellular interactions of nanomaterials with the body.

O cádmio é um metal pesado com propriedades tóxicas e carcinogênicas. A toxicidade deste metal pode ser resultado da sua habilidade de (i) formar complexos com a glutationa, gerando aumento do estresse oxidativo, (ii) competir com o zinco por sítios de ligação em proteínas, (iii) causar quebras de fita simples no DNA e (iv) inibir a via associada ao reparo de erros no emparelhamento de bases do DNA. A absorção de cádmio para o interior celular pode ser feita por proteínas que transportam metais essenciais como zinco, cálcio, manganês e ferro, tal como a proteína Zrt1 de leveduras (transportador de alta afinidade para zinco). Em Saccharomyces cerevisiae, o mecanismo de desintoxicação de cádmio mais conhecido envolve a conjugação do metal com glutationa, formandos complexos Cd.[GS]2, que são transportados para o interior do vacúolo pela proteína Ycf1. Além disso, sabe-se que alguns poucos metais essenciais são capazes de reduzir a toxicidade do cádmio. O objetivo do presente estudo foi verificar o efeito protetor de íons de magnésio e cálcio contra os danos causados pelo cádmio em linhagens de S. cerevisiae mutantes para proteínas envolvidas com a homeostase de cádmio (gsh1 , ycf1 e zrt1 ). Além disso, foi avaliado o envolvimento de proteínas transportadoras de cálcio presentes no complexo de Golgi e vacúolo (Pmr1p e Pmc1p, respectivamente) com a desintoxicação de cádmio por vesículas da via secretória de S. cerevisiae. Os resultados demonstram que, tanto na linhagem selvagem quanto nas mutantes gsh1 , ycf1 e zrt , a presença de íons de cálcio ou magnésio é capaz de proteger as células contra os efeitos tóxicos do cádmio. Essa proteção está associada a uma redução do conteúdo intracelular de cádmio que ocorre nos tratamentos simultâneos com magnésio e cálcio. Em relação aos transportadores de cálcio, foi possível observar que a linhagem pmc1 não é sensível à cádmio enquanto que a linhagem pmr1 é altamente sensível a presença do metal. Para confirmar o envolvimento da proteína Pmr1 com a desintoxicação de cádmio, a linhagem pmr1. foi submetida a um ensaio de complementação fenotípica utilizando-se um vetor centromérico contendo o gene PMR1. Os resultados deste ensaio confirmaram que o fenótipo de sensibilidade a cádmio da linhagem pmr1. pode ser revertido pela presença de uma cópia funcional do gene PMR1. Adicionalmente, os resultados utilizando PIXE (Particle Induced X- Ray Emission) para quantificar o conteúdo intracelular de cádmio mostraram que na pmr1. o acúmulo intracelular de íons Cd2+ é três vezes maior doque na linhagem selvagem e na linhagem pmr1. contendo o vetor com o gene PMR1 funcional. A proteína Pmr1 é responsável pelo acúmulo de cálcio em vesículas do complexo de Golgi, as quais podem ser destinadas para a via secretória de S. cerevisae. Considerando os resultados obtidos neste trabalho e a similaridade entre os íons Ca2+ e Cd2+ em termos de raio atômico, é possível inferir que o cádmio, assim como o cálcio, pode ser bombeado para o interior do Golgi pela Pmr1p e posteriormente transportado pela via secretória. Sendo assim, este trabalho descreve desintoxicação de cádmio envolvendo a eliminação do metal pela via secretória de S. cerevisiae. / Cadmium is a heavy metal with toxic and carcinogenic properties. The toxicity of this metal depends on its ability to: (I) produce complexes with glutathione, therefore increasing oxidative stress, (II) compete with zinc for binding to proteins, (III) cause DNA chain single breaks, and (IV) inhibit the mismatch repair pathway associated. Cadmium uptake into the cell occurs through proteins that transport essential metals, such as calcium, zinc, manganese, and iron, such as the yeast Zrt1 protein transporter with high zinc affinity. In Saccharomyces cerevisiae, the best known cadmium detoxification mechanism involves metal coupling with glutathione, forming the complex Cd[GS]2, which is carried inside to the vacuole through the Ycf1 protein. Moreover, it is well known that some essential metals are capable of reducing cadmium toxicity. The aim of the present study was to verify the protective effect of magnesium and calcium ions against the damages caused by cadmium in S. cerevisiae strains mutant for proteins involved with cadmium homeostasis (gsh1 , ycf1 e zrt1 ). In addition, the involvement of a calcium transporter present in the Golgi apparatus and in the vacuole (Pmr1p and Pmc1p, respectively) with the detoxification of cadmium by vesicles of the secretory pathway of S. cerevisiae was evaluated.The results demonstrated that both in the wild type strain and in gsh1 , ycf1 , and zrt mutant strains, the presence of calcium or magnesium ions was able to protect cells against the toxic effect of cadmium. This protection was associated with a reduction of intracellular cadmium content that occurs in the simultaneous treatments with magnesium and calcium As to calcium transporters, it was possible to observe that pmc1. is not sensitive to cadmium, whereas pmr1. is highly sensitive to the presence of this metal. In order to confirm the involvement of Pmr1p with cadmium detoxification, pmr1. strains were submitted to a phenotypic complementation assay using centromeric vector containing PMR1 gene. The results of this assay confirmed that pmr1. cadmium sensitive phenotype can be reversed by the presence of a functional copy of PMR1 gene. Additionally, when using PIXE (Particle Induced X Ray Emission) to quantify intracellular cadmium content, results showed that pmr1. intracellular accumulation of Cd2+ ions is three times higher than in the wild type strain, and the pmr1. containing the vector with PMR1 functional gene.Pmr1 protein is responsible for the accumulation of calcium in vesicles of Golgi apparatus, which can be directed to the secretory pathway of S. cerevisae. Considering the results obtained in this study, and the similarity between Ca2+ and Cd2+ ions in terms of atomic radius, it is possible to infer that both cadmium and calcium can be pumped inside the Golgi apparatus by Pmr1p, and later transported by the secretory pathway. Therefore, this work describes cadmium detoxification involving the elimination of this metal by the secretory pathway of S. cerevisiae.

O presente estudo avaliou a segurança de um fitoterápico, constituído de extrato fluído de Gossypium herbaceum (algodoeiro) (Tintura de Algodoeiro Cangeri®), através de estudos de toxicidade subcrônica, tendo como base a resolução Nº 90, de 16 de março de 2004 da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA). O objetivo era verificar se o presente fitoterápico causava toxicidade sistêmica de doses repetidas em ratos Wistar. Para o teste de toxicidades repetidas constituiu-se quatro grupos de ratos Wistar, cada um composto por 10 machos e dez fêmeas, tratados por via oral (gavagem) com 0,4ml.kg-1, 2ml.kg-1e 4ml.kg-1, respectivamente a dose terapêutica indicada pelo fabricante para seres humanos adultos, 5 vezes e 10 vezes a dose terapêutica, além de um grupo controle, que recebeu o veículo do fitoterápico. Os resultados revelaram que os animais tratados com a dose terapêutica não mostraram alterações sistêmicas que indique toxicidade. As alterações observadas nas variáveis de ganho de massa corporal, dados hematológicos e de bioquímica sangüínea nos grupos tratados com as doses 5 e 10 vezes a dose terapêutica revelaram a ocorrência de toxicidade sistêmica, agravada com a elevação da mesma. / The phytoterapic constituted by Gossypium herbaceaum (cotton plant) (Tintura de Algodoeiro Cangeri®) was investigated from the potential of toxicological effects when orally administered to male and female Wistar rats for 30 days. The studies were based in the resolution n. 90, March 16th, 2004 from National Agency of Sanitary Vigilance (ANVISA). The aim of the study was watch if daily doses of the fitoterapic would became in to systemic toxicity. Four experimental groups were formed (10 animals/sex/dose) receiving daily doses of 0.4ml, 2ml and 4ml.kg-1 respectively the therapeutic dose recommended by the producer for adult humans, 5 times and 10 times the therapeutic dose, besides a control group treated with the phytotherapic vehicle. The results revealed the absence of systemic toxicity with the therapeutic dose. The alterations observed in the weight gain, hematological values and biochemical blood analyses in the doses equivalent to 5 and 10 times the therapeutic doses revealed systemic toxicity, in a dose related manner.

O arroz (Oryza sativa L.) é um dos alimentos mais importantes para a nutrição humana, sendo a base alimentar de mais de três bilhões de pessoas no mundo. O Brasil está entre os principais produtores mundiais de arroz e o estado do Rio Grande do Sul é o maior produtor brasileiro. O nitrogênio é considerado um nutriente limitante para a produção de arroz, o que provoca o intenso uso de fertilizantes químicos nessa cultura, uma prática altamente prejudicial ao meio ambiente. Neste contexto, têm-se procurado novas tecnologias que visam o aumento de produtividade, a melhoria da qualidade e a rentabilidade no cultivo dessa gramínea. Uma das alternativas para o aumento da produção é a utilização de bactérias promotoras do crescimento vegetal. Bactérias promotoras do crescimento vegetal (Plant growth-promoting bacteria, PGPB) são bactérias que podem promover o crescimento de plantas e induzir a tolerância para diferentes estresses, através de uma grande variedade de mecanismos. Os objetivos deste estudo foram isolar e caracterizar putativas PGPBs associadas ao solo rizosférico e raízes de arroz, cultivado em diferentes regiões produtoras do sul do Brasil, bem como de cultivares de arroz que apresentam diferentes níveis de tolerância ao excesso de ferro, cultivadas em duas regiões: Camaquã (solo com excesso de ferro) e Cachoeirinha (controle para o excesso de ferro). Os isolados bacterianos foram avaliados para a produção de compostos indólicos, sideróforos, ACC deaminase e solubilização de fosfato. A fixação biológica do nitrogênio in vitro foi avaliada para os isolados bacterianos usados em experimentos de inoculação em câmara de crescimento e a campo em Cachoeira do Sul e/ou Camaquã. Seiscentos e sessenta e cinco estirpes bacterianas foram seletivamente isoladas com base no seu desenvolvimento em meio seletivo e foram identificadas por análise parcial do gene 16S rRNA e metodologia de sequenciamento. Estirpes pertencentes aos gêneros Enterobacter e Burkholderia foram as mais abundantes entre os isolados Gram negativos, enquanto que aquelas pertencentes aos gêneros Paenibacillus e Bacillus foram as mais abundantes entre os isolados Gram positivos. Um grande número de PGPBs de diferentes gêneros bacterianos apresentou diferentes características promotoras de crescimento vegetal. Produtores de compostos indólicos foram os mais abundantes entre os isolados. Plantas de arroz inoculadas com os isolados Herbaspirillum sp. (AC32), Burkholderia sp. (AG15), Pseudacidovorax sp. (CA21) e Azospirillum sp. (UR51) em conjunto com a metade da dose de fertilizante nitrogenado (60 kg de ureia ha-1) atingiram resultados semelhantes àquelas tratadas com a dose total de fertilizante, sem inoculação (120 kg de ureia ha-1). Estirpes pertencentes aos gêneros Burkholderia, Chryseobacterium, e Paenibacillus apresentaram potencial para promover o crescimento da planta e a captação de nutrientes, em diferentes condições de ferro. Neste trabalho, a inoculação de arroz através da utilização de estirpes bacterianas confirmou o potencial dessas bactérias em interagir positivamente com o arroz. / Rice (Oryza sativa L.) is one of the most important crops for human nutrition been the food base for more than three billion of people in the world. Brazil is one of the top rice producers and Rio Grande do Sul state is the biggest producer in Brazil. Nitrogen is the most frequent limiting nutrient for rice production and the chemical fertilization usage is among agricultural practices that are most prejudicial to environment. New technologies are being search to increase productivity, to improve quality and profitability in the cultivation of this grass. One of the alternatives for the increase in rice production is the use of plant-growth-promoting bacteria. Plant growthpromoting bacteria (PGPB) are bacteria that can enhance plant growth and induce tolerance in plants under different stresses using a wide variety of mechanisms. The objectives of this study were to isolate and characterize putative PGPBs associated with rhizospheric soil and roots of rice plants cropped in different areas of southern Brazil, as well of rice cultivars that present distinct tolerance to iron toxicity grown in two areas: one with a well-established history of iron toxicity (Camaquã) and another without iron toxicity (Cachoeirinha). Bacterial isolates were evaluated for their ability to produce indolic compounds, siderophores, ACC deaminase, and solubilize phosphate. In vitro biological nitrogen fixation was evaluated for bacterial isolates used in the inoculation experiments in a growth chamber and under field conditions in Cachoeira do Sul and/or Camaquã. A total of 665 bacterial strains were selectively isolated based on their growth in selective media and were identified by analysis of the 16S rRNA gene and partial sequencing methodologies. Strains belonging to the Burkholderia and Enterobacter genera were the most abundant among all the Gram negative isolates whereas those belonging to Paenibacillus and Bacillus genera were the most abundant among the Gram positive isolates. A large number of PGPBs belonging to different bacterial genera presented several plant growth promotion traits. Indolic compounds producers were widely found among isolates. Plants inoculated with isolates Herbaspirillum sp. (AC32), Burkholderia sp. (AG15), Pseudacidovorax sp. (CA21), and Azospirillum sp. (UR51) together with half-fertilization level (60 kg of urea ha-1) achieved growth similar to those that received the full-fertilization level without inoculation (120 kg of urea ha-1). Strains belonging to Burkholderia, Chryseobacterium, and Paenibacillus genera presented the potential to promote the plant growth and nutrient uptake in different iron conditions. In this work, the rice inoculation through the utilization of bacterial strains confirmed the bacterial potential to positively interact with rice.

Submitted by Milena Dias (milena.dias@ufpe.br) on 2015-03-12T18:06:42Z No. of bitstreams: 2 Dissertaçao Renata Raele.pdf: 3359515 bytes, checksum: 46b18a28bc6517d1fd8e4e64d2c2680f (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-12T18:06:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertaçao Renata Raele.pdf: 3359515 bytes, checksum: 46b18a28bc6517d1fd8e4e64d2c2680f (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / Quantum Dots (QDs) são nanocristais fluorescentes de semicondutores que vêm ganhando espaço em Ciências da Saúde como sondas fluorescentes para estudos de sistemas biológicos tanto in vitro como in vivo. Entretanto, para assegurar sua aplicabilidade em organismos vivos, são necessários testes de avaliação de toxicidade. Tendo em vista estes aspectos, o objetivo deste trabalho foi avaliar e comparar o efeito de diferentes concentrações de QDs de CdTe e ZnSe funcionalizados com Ácido Mercaptopropiônico (AMP) e/ou Ácido Mercaptosuccínico (AMS) sobre cultura de macrófagos da linhagem RAW 264.7, células imuno efetoras que desempenham papel relevante na defesa do organismo frente a patógenos. Para tanto, foram realizados testes de: (1) viabilidade celular através de MTT para definição de IC50 em 24 horas de exposição aos QDs, (2) viabilidade por exclusão de Iodeto de Propídio (PI) e análise de ciclo celular por PI na IC50 por 24 horas, e por fim (3) avaliação dos níveis de Ca2+ citoplasmático utilizando o Fluo-3. O teste estatístico utilizado foi One-Way ANOVA com nível de significância p ≤ 0,05. O teste MTT mostrou que após um período de 24 h de exposição aos QDs de CdTe houve redução da viabilidade para ~35 e 70% nas concentrações máximas e mínimas utilizadas (35,3+2% e 71+3,5% respectivamente) sendo a IC50 obtida para em ~76 nM (AMP=51,7+3,5% e AMS=56,3+8,6%). Essa toxicidade se apresentou de forma dose-dependente. Já o ZnSe se mostrou menos tóxico com IC50 em ~380 nM (48,7+11,3%). A análise da viabilidade com PI em 76 nM para todas as nanopartículas, indicou que não há lesão significativa da membrana plasmática após 24 h de incubação. O teste de ciclo celular, também em 76 nM, indicou que as amostras expostas aos QDs de CdTe apresentaram mais debris (AMP=27,4+3,8;%; AMS=28,4+3,9% e C=4,4+1,3) e menos células em S e G2 (AMP=7,3+0,3 e 4,7+0,5%; AMS=7,6+0,6 e 3,9+0,5% e C=16,1+2,3 e 13+1,7 % respectivamente). Já os resultados de ZnSe não diferiram do controle. As análises com Fluo-3 mostraram, para os QDs de CdTe, um aumento significativo de cálcio citoplasmático a partir da concentração de 76 nM (AMP=263,1+17,8; AMS=255,1+16,2 e C=102,5+6,5). Entretanto para o ZnSe só foi observado aumento significativo desse íon para concentrações a partir de 260 nM (ZnSe=188+15,8 e C=107,2+4,6). Concluímos que QDs de CdTe apresentam toxicidade consideravelmente maior que de ZnSe para as células RAW 264.7, independente do agente estabilizante/funcionalizante ou tamanho do QD. Isso indica que a toxicidade está provavelmente ligada à liberação do Cádmio. Com relação ao CdTe, acredita-se que danos posteriores à membrana plasmática nessas células podem ser reflexo dos eventos precoces ocorridos na mitocôndria e nos níveis de Ca2+. Por fim, de acordo com os resultados apresentados, observamos que a morte celular de RAW 264.7 devido à exposição aos QDs é um evento crescente e contínuo diretamente relacionado com o tempo de exposição e com a concentração de QDs ministrada.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1560_1.pdf: 1445052 bytes, checksum: 334f3bd99a8b1e3c11b2c9898b77c3a5 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As pirimidinonas são compostos heterocíclicos de seis membros com dois átomos de nitrogênio nas posições 1 e 3, e com ao menos uma carbonila ligada ao heterociclo. Esses compostos são amplamente conhecidos pelo seu vasto espectro de atividades farmacológicas, como atividades antiinflamatórias, antimicrobianas, antitumoral, antiviral, entre outras. O presente trabalho tem como objetivo a obtenção de novos derivados pirimidinônicos do tipo 2,3-diidro-7-aril-5-oxotiazolo[3,2- a]pirimidina-6-carbonitrila, a fim de avaliar algumas de suas possíveis atividades biológicas, a saber, atividades citotóxica, antimicrobiana, e antiinflamatória. Uma série de quatro compostos pirimidinônicos condensados ao anel tiazolidínico foi sintetizada, purificada e caracterizada por espectrometria de ressonância magnética nuclear de hidrogênio (RMN 1H), espectrometria de massas e no infravermelho (IV). Os compostos tiveram as suas potencias atividades citotóxica, antimicrobiana e antiinflamatória avaliadas, respectivamente, pelos métodos do MTT com determinação da densidade óptica, de difusão em disco, e de peritonite induzida por carragenina. Não foram observadas atividades citotóxica ou antimicrobiana em nenhum dos compostos testados. No ensaio de toxicidade aguda, que seguiu o protocolo 423 da OECD, não se observou toxicidade nos camundongos, na dose de 2000mg.kg-1. Na avaliação da atividade antiinflamatória, os compostos apresentaram índices de inibição da migração celular que ficaram entre 49,95% e 62,24%, na dose de 200μMol.Kg-1. Conclui-se que as drogas possuem bom potencial como possíveis agentes antiinflamatórios

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:55:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6208_1.pdf: 2490581 bytes, checksum: 6989208390577460190d50e96c0af7d2 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2003 / Neste trabalho procuramos avaliar a segurança no uso do extrato bruto (EB) da Mentha crispa, único ingrediente ativo do Giamebil Plus®. Para tal, foram realizados estudos de toxicologia pré-clínica. O EB administrado em camundongos e ratos por via oral (0,1 a 2,0g/kg) não produziu alterações comportamentais em ambas as espécies, contudo, por via i.p. mostrou-se tóxico provocando a morte em camundongos e ratos respectivamente de 100 e 80% dos animais após 48h de observação. Em ratos, os valores estimados da DL50 (g/kg) de 24 horas por via i.p. foram 1,04 (0,98-1,09) e 0,63 (0,57-0,70) respectivamente para machos e fêmeas. Por via oral, não foi possível estimar a DL50, pois não observamos mortes, até 4,0g/kg. Nos estudos de fertilidade em ratos de ambos os sexos, o tratamento com EB (0,5 e 1,0g/kg, v.o.), durante 30 dias antes do acasalamento não induziu alterações nos parâmetros: relação prole/mãe; índices de fertilidade (relação de ratas prenhas por acasaladas); gestação (percentagem de fêmeas prenhas com fetos vivos); viabilidade (percentagem de sobrevida após quatro dias); lactação (percentagem de sobrevida após 28 dias) e o peso dos filhotes no 1o e 28o dia e proporção macho e fêmea. Da mesma forma, pela avaliação dos mesmos parâmetros anteriores, o tratamento, durante o período de gestação (cerca de 22 dias), não produziu alterações no desenvolvimento embrionário como também no período pós-natal. Em outro Protocolo, o tratamento com EB (0,5g/kg, v.o.) nas fases de fecundação (1o ao 7o dia), embriogênica (8o ao 14o dia) e fetal (15o ao 21o dia) não modificou o número de implantes e reabsorvições em relação ao grupo controle. Não foram observadas alterações nos pesos úmidos e na morfologia macroscópica do coração, fígado, baço, rim, cérebro, pulmão, glândula adrenal, ducto deferente, testículo, ovário e útero, após a administração prolongada por 30 dias com EB (1,0g/kg, v.o). Como também não ocorreram alterações na análise da microscópia e morfometria do coração, rim, córtex cerebral e genitálias acessórias. Os parâmetros bioquímicos e hematológicos após tratamento com EB (1,0g/kg, v.o.) por 30 dias, não foram alterados. O conjunto dos resultados permite concluir que o EB da Mentha crispa apresenta baixa toxicidade por via oral e não produz efeitos tóxicos sobre a reprodução em ratos

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-07-05T17:22:15Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação SABRINA _Versao Final.pdf: 1211156 bytes, checksum: e04bb37df92566361a9f4180ea5bba4b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-05T17:22:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação SABRINA _Versao Final.pdf: 1211156 bytes, checksum: e04bb37df92566361a9f4180ea5bba4b (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / CAPES / Tendo em vista o aumento da resistência bacteriana se busca alternativas terapêuticas, entre as quais se destaca o uso de produtos naturais. A quitosana é um biopolímero natural que apresenta biocompatibilidade e ação antimicrobiana, conhecida. Por outro lado, estudos estão sendo realizados utilizando óleos essenciais que são usados na medicina popular com uma aplicação bastante difundida. Os óleos essenciais apresentam diversas atividades biológicas como ação antimicrobiana, anti-infamatória, regenerativa, hidratante, anti-helmíntica entre várias outras ações. Cymbopongo martinii (CMEO), é uma planta herbácea da família das gramíneas que dele é extraído o óleo popularmente conhecido como Palmarosa que apresenta ação antimicrobiana frente a diversos microrganismos. Neste contexto, a presente pesquisa objetivou avaliar o potencial antimicrobiano, citotóxica do gel de quitosana enriquecido com óleo essencial de Cymbopogon martini. As quitosanas de alto e de baixo peso molar (QAB) adquiridas da Sigma® foram misturadas 1:1 e diluídas em ácido acético 1% para obtenção de um composto de quitosana (QAB) a 10mg/mL. O composto de quitosana obtido foi caracterizado quanto suas características estruturais, grau de desacetilação e peso molar, respectivamente, pelas técnicas de espectofotometria de infravermelho, ressonância magnetca nuclear de hidrogêncio e viscosidade. A quitosana apresentou grupos funcionais característicos do polímero, grau de desacetilação de 80,66% e peso molar de 6,03 x 104g/mol. CMEO foi adquirido da Ferquima®, que disponibilizou sua composição química, o qual teve como composto predominante Geraniol (81,8%). A atividade antimicrobiana da QAB, do CMEO e da associação QAB+CMEO foi determinada através da técnica de microdiluição, obtendo-se as Concentrações Inibitória Mínima (CIM) e Bactericia Mínima (CBM), frente cepas de Staphylococcus aureus e Escherichia coli. Os valores de CIM e de CBM frente à S. aureus foram iguais para QAB (4mg/mL) e para E. coli foram respectivamente de 2mg/mL e de 4mg/mL. Na determinação do CIM, utilizando o OECM frente a S.aureus e E. coli, foram encontradas as concentrações de 13,5 mg/mL e 22,5 mg/mL respectivamente. Contudo, a CBM não foi encontrada para o OECM, tanto para S. aureus como para E. coli, demonstrando que EOCM apresentou apenas efeito bacteriostático frente as cepas testes. Os valores de CIM e de CBM frente à cepa de S. aureus para a associação QAB + OECM 3mg/mL+ 13,3mg/mL e de 5mg/mL + 22,5 mg/mL, respectivamente. Para E. coli exposta a QAB+EOCM as concentrações CIM e CBM foram de 1,5mg/mL + 6,75mg/mL e de 4mg/mL + 18,5mg/mL, respectivamente. A análise para presença de sinergismo entre OECM e QAB foi realizada por planejamento fatorial 22 usando concentrações sub-CIM de ambas as drogas. Verificou-se que a associação foi classificada como indiferente. O potencial irritante das susbtâncias testes foi determinado através do teste da Membrana Corioalontoide do ovo de galinha (HET-CAM) fecundado e incubado por um período de 9-10 dias. Para determinar o grau de irritabilidade pelo HET-CAM, foram observadas a presença de lise, coagulação e hemorragia, até 5 minutos após a exposição às substâncias testes. Todas as substâncias testes foram não irritantes. De acordo com os resultados obtidos pode-se concluir que a quitosana não teve efeito de sinergismo esperado em associação com óleo, contudo a associação QAB + OECM conferiu um efeito bactericida ao óleo essencial, antes não observada. / In view of the increase in bacterial resistance, alternative therapies have been studied, among which stands out the use of natural products. Chitosan is a natural biopolymer that has biocompatibility and known antimicrobial action. Furthermore, studies are being carried out using essential oils that are used in folk medicine with a widespread application. Essential oils have various biological activities such as antimicrobial, anti-inflammatory-regenerative, moisturizing, anthelmintic among many other actions. Cymbopogon martinii (CM) is a family of herbaceous grasses that it is extracted from the oil popularly known as Palmarosa which has antimicrobial activity against various microorganisms. In this context, the present study aimed to evaluate the antimicrobial activity and cytotoxicity of chitosan gel enriched with essential oil of Cymbopogon martini. The chitosan high and low molecular weight (CHL), purchased from Sigma®, were mixed 1: 1 and diluted in 1% acetic acid to obtain a solution of 10mg / ml of polymer. The chitosan obtained was characterized about the structural characteristics, deacetylation degree and molecular weight, respectively, by techniques of IR spectrophotometry, nuclear magnetic resonance of hydrogen and viscosity. Chitosan has the characteristic functional groups of the polymer, degree of deacetylation of 80.66% and molecular weight of 6.03 x 104g / mol. Essential oil of Cymbopogon martinii was purchased from Ferquima®, which released its chemical composition, which has as the predominant compound Geraniol (81.8%). The antimicrobial activity of the CHL, the EOCM and CHL + EOCM association was determined by the microdilution technique, obtaining the Minimum Inhibitory Concentrations (MIC) and Minimum Bactericia (MBC) against Staphylococcus aureus and Escherichia coli. The values of MIC and MBC against S. aureus were the same for CHL (4mg/mL) and E. coli were respectively 2mg/mL and 4mg/mL. In the determination of MIC using EOCM against S. aureus and E. coli were found concentrations of 13.5 mg/mL and 22.5 mg/ml respectively. However, MBC was not found to EOCM for both S. aureus and E. coli, demonstrating that EOCM showed only bacteriostatic effect. The MIC and MBC values to S. aureus for CHL association EOCM were 3mg/mL + 13,3mg/mL and 5 mg/Ml + 22.5 mg/mL, respectively. For E. coli exposed to CHL + EOCM the MIC and MBC concentrations were 1.5 mg/mL + 6,75mg/mL and 4mg/mL + 18,5mg/mL, respectively. The analysis to measure the synergy between EOCM and CHL was performed by factorial analysis using the sub-MIC concentrations for either drug and the association of drugs was classified as indifferent. It was also examined the cytotoxicity of the drugs by Hen's Egg Test – Chorioallantoic Membrane (HET-CAM) fertilized and incubated for a period of 9-10 days. To determine the degree of irritability by the HET-CAM were observed the presence of lysis, coagulation and bleeding, up to 5 minutes after exposure to the test substances. All test substances were non-irritant. According to the results it can be concluded that the chitosan was not expected synergistic effect in combination with oil, yet the association CHL + EOCM gave a bactericidal effect to the essential oil, not previously observed.