Submitted by Fernanda Carvalho Silva null (fernanda.silva@fosjc.unesp.br) on 2017-04-06T18:23:43Z No. of bitstreams: 1 pelegrini_fc.pdf: 2348774 bytes, checksum: bca60336dc2d662dafd57e2de6d27952 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-12T19:38:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pelegrini_fc_me_sjc.pdf: 2348774 bytes, checksum: bca60336dc2d662dafd57e2de6d27952 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-12T19:38:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pelegrini_fc_me_sjc.pdf: 2348774 bytes, checksum: bca60336dc2d662dafd57e2de6d27952 (MD5) Previous issue date: 2017-02-08 / O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro a ação do gel de hipoclorito de sódio (NaOCl) 3 % e da medicação intracanal (MIC) de hidróxido de cálcio (CaOH2), agitados ou não por ultrassom sobre Enterococcus faecalis, Escherichia coli e ácido lipoteicóico (LTA). Para isso 80 dentes humanos unirradiculares tiveram suas coroas removidas padronizando seu comprimento em 16 mm +- 0,5 mm, sendo seus canais instrumentados inicialmente até instrumento R25 (Reciproc). Os canais foram contaminados com suspensões de E. faecalis e E. coli. Os canais foram instrumentados utilizando-se instrumento R40, sob irrigação com 2 ml de NaOCl 3% gel seguida de irrigação com 10 ml de solução salina estéril e apirogênica. Após os canais foram irrigados com EDTA 17%, seguido de irrigação com 5 ml de solução salina estéril e apirogênica, sendo por último preenchidos com medicação intracanal de hidróxido de cálcio mantida durante 7 ou 14 dias. Os espécimes foram divididos inicialmente em 2 grupos (n=40) de acordo com a agitação ultrassônica (US) ou não da substância química auxiliar. Sendo novamente divididos de acordo com a agitação ultrassônica ou não da medicação intracanal (MIC) e o tempo de ação desta (n=10): 1) NaOCl + Ca(OH)2 (7 dias). 2) NaOCl + Ca(OH)2 (14 dias). 3) NaOCl + Ca(OH)2 com US (7 dias) 4) NaOCl + Ca(OH)2 com US (14 dias). 5) NaOCl com US + Ca(OH)2 (7 dias). 6) NaOCl com US + Ca(OH)2 (14dias) 7) NaOCl com US + Ca(OH)2 com US (7dias). 8) NaOCl com US + Ca(OH)2 com US (14 dias). Foram realizadas coletas do canal radicular 28 dias após o início da contaminação dos espécimes (1ª coleta), logo após o preparo biomecânico (PBM) (2ª coleta), logo após o preenchimento com EDTA (3ª coleta) e após o tempo de ação da MIC (4ª coleta). Para todas as coletas foram avaliadas a atividade antimicrobiana (UFC/ml) e quantificação de LTA pelo teste de Elisa. Os resultados foram submetidos aos testes estatísticos Kruskal-Wallis e Dunn (5%). Verificou-se pela análise microbiana e quantificação de LTA, que o NaOCl 3% gel foi capaz de eliminar quase completamente os micro-organismos dos canais radiculares, mas não o ácido lipoteicóico, independente da ativação ultrassônica. A ativação da MIC de Ca(OH)2 não exerceu efeito sobre micro-organismos. Sobre LTA, a ativação da MIC de Ca(OH)2 não foi eficaz, sendo os grupos com maior percentual de redução os que não sofreram agitação da MIC, nem do NaOCl. Conclui-se que o NaOCl 3% gel boa tem capacidade antimicrobina, independente da ativação ultrassônica. O PBM não foi capaz de detoxificar o LTA dos canais radiculares. A MIC com ativação ultrassônica não foi eficiente na redução de LTA. / The aim of this study was to evaluate in vitro the action of sodium hypochlorite (NaOCl) 3% gel and calcium hydroxide as an intracanal medication, both activated by ultrasound on the reduction of E. faecalis e E. coli and lipotheicoic acid (LTA). Eight human single-rooted teeth with standardized size of 16 mm were prepared initially to R25 instrument (Reciproc) and distributed in microplate (n = 10). After sterilization (Co60 gamma radiation), the infection was carried out 8 microlitres of E. coli suspension, and after 7 days 8 microlitres of E. faecalis suspension, maintained for 21 days. Following the collection confirmation was performed (1st collection), then the root were instrumented using R40 instrument, irrigation with 2 ml of NaOCl 3% gel followed by washing with 10 ml of saline. The specimens were divided into 8 groups (n = 10) according to different ultrasonic irrigation protocols and different periods exposed to intracanal medication: 1) NaOCl + Ca(OH)2(7 days). 2) NaOCl + Ca(OH)2 (14 days). 3) NaOCl + Ca(OH)2 with PUI (7 dias) 4) NaOCl + Ca(OH)2 with PUI (14 days). 5) NaOCl with PUI + Ca(OH)2 (7 days). 6) NaOCl with PUI + Ca(OH)2 (14 days) 7) NaOCl with PUI + Ca(OH)2 (7 days). 8) NaOCl with PUI + Ca(OH)2 with PUI (14 days). Were made to sample colections of content of root canals, after instrumentation (2nd sample), after the use of EDTA (3rd sample) and after the Ca(OH)2 (4th Collection) . Microbiological culture and LTA quantification revealed that 3 % NaOCl gel was capable to eliminate E. faecalis and E. coli almost completely from root canals, but not lipotheicoic acid, regardless the use of ultrasonic activation. The ultrasonic activation of intracanal medication (Ca(OH)2) was not effective in removing neither microorganisms nor LTA. In addition, the groups with greatest reduction were the ones with no ultrasonic activation either of intracanal medication or NaOCl. It was concluded that 3% NaOCl gel is effective on antimicrobial activity regardless the use of ultrasonic activation. Biomechanical preparation was not capable to detoxify LTA from root canals. Ultrasonic activation of intracanal medication was not effetive on LTA reduction.

Orientador: Reinaldo Marchetto / Banca: Eduardo Maffud Cilli / Banca: Wilton Rogério Lustri / Banca: Vani Xavier de Oliveira Junior / Banca: Herida Regina Nunes Salgado / Resumo: O sistema ParE-ParD é um sistema toxina-antitoxina bacteriano, sendo ParE a toxina e ParD a antitoxina. ParD é capaz de neutralizar a ação de ParE formando um complexo com o mesmo, o qual é eficaz na autorregulação do operon parDE. Estudos têm mostrado que a atividade tóxica de ParE ocorre inibindo a atividade da DNA girase, mas nenhum efeito desta proteína sobre a atividade da topoisomerase IV foi observado até hoje. Baseando-se na estrutura primária da toxina ParE de Escherichia coli, bem como nos escassos dados em relação a esta toxina, a meta deste trabalho foi a obtenção de peptídeos sintéticos baseados nesta proteína a fim de avaliar as sequências de aminoácidos responsáveis pela interação com as diferentes topoisomerases bacterianas, além de tentar isolar uma sequência polipeptídica com potencial atividade inibitória sobre essas enzimas. Utilizando modelagem molecular por homologia, um modelo tridimensional para toxina ParE de E. coli foi obtido e validado. Com base nos dados estruturais inferidos a partir do modelo da estrutura tridimensional de ParE, 12 peptídeos foram racionalmente desenhados e sintetizados pela metodologia da fase sólida. Ensaios de inibição in vitro da atividade de superenovelamento de DNA pela girase e de relaxamento de DNA pela topoisomerase IV foram realizados e indicaram que os peptídeos ParE3 (ParE 80-100), ParE8 (ParE 61-105), ParE10 (ParE 61-87) e ParE12 (ParE 61-79) atuam como bons inibidores de ambas enzimas. Ensaios de fluorescência intrínseca e anisotropia de fluorescência, empregando peptídeos sintéticos derivados de ParE, evidenciaram que o processo de inibição da atividade da DNA girase pela toxina ParE deve ocorrer por interação com a proteína GyrA da enzima. Foi iniciado neste trabalho os primeiros testes usando lipossomas como veículos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The operon parDE encode a toxin-antitoxin system formed by ParE toxin and its antitoxin ParD. ParD is able to neutralize ParE action and is effective in autoregulation of the operon. Studies have shown that the toxic activity of the ParE occurs by inhibiting the activity of DNA gyrase, but no effect of this protein on the activity of topoisomerase IV has been observed yet. Based on the primary structure of the Escherichia coli ParE toxin, as well as the scarce data of this toxin, the aim of this work was to obtain synthetic peptides based on this protein in order to assess the amino acid sequences responsible for interaction with the bacterial topoisomerases, besides trying to isolate a polypeptide sequence with potential inhibitory activity against these enzymes. Using molecular homology modeling, a three-dimensional model for E. coli ParE toxin was obtained and validated. Based on structural data inferred from ParE threedimensional model, 12 peptides were rationally designed and synthesized by solid-phase method. Tests of inhibition of the supercoiling reaction of the DNA gyrase and inhibition of DNA relaxation by topoisomerase IV were performed and indicated that the peptides ParE3 (ParE 80-100), ParE8 (ParE 61-105), ParE10 (ParE 61 -87) and ParE12 (ParE 61-79) act as good inhibitors of both enzymes. Intrinsic fluorescence and fluorescence anisotropy assays, using synthetic peptides derived from ParE showed that inhibition process of activity of the DNA gyrase by ParE toxin must occur by interaction with the GyrA protein. In this work was started the first tests using liposomes as carrier vehicles for bioactive peptides derived from ParE. The peptides were efficiently encapsulated in soybean phosphatidyl choline liposomes. It was observed, although reduced, inhibition of bacterial growth when peptides encapsulated in liposomes were... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Saccharomyces cerevisiae é uma levedura que possui papel fundamental na transformação do mosto em vinho. Durante a fermentação, a levedura selecionada transfere para o meio, componentes resultantes de seu metabolismo como etanol, aldeídos, enzimas, proteínas, entre outros. Existem algumas que possuem ação definida, como a proteína killer. Este trabalho teve como objetivo determinar as condições necessárias para a detecção e expressão do fator killer produzido por linhagens de levedura Sacch. cerevisiae isoladas de mosto de uva. Como linhagens killer, foram utilizadas as linhagens Sacch. cerevisiae Embrapa 91B, Sacch. cerevisiae Embrapa 1B, e uma linhagem comercial Sacch. cerevisiae K1 (Lallemand). Como linhagem sensível, foi empregada Sacch. cerevisiae Embrapa 26B. Para detecção do fator killer foram avaliados meios de cultura sólidos, preparados com diferentes concentrações de mosto de uva e extrato de levedura não comercial (ELNC). Para a produção do fator killer foram avaliados meios líquidos com diferentes concentrações de mosto de uva, ELNC e sacarose. Foi avaliada a produção do fator em condições aeróbicas e anaeróbicas de crescimento. O meio de cultura definido para detecção do fator killer foi o meio contendo 80 % de mosto de uva e 20 % de ELNC em sua composição. O meio líquido que proporcionou melhores condições de síntese do fator killer foi o meio preparado com 5% de mosto e 95 % de ELNC contendo 100 g/L de sacarose. A expressão do fator killer foi inibida em condições aeróbicas, exceto quando as linhagens foram cultivadas em meio líquido com elevada concentração de sacarose. / The yeast Saccharomyces cerevisiae has a key role in the process of converting must into wine. During fermentation the selected yeast transfers to the medium compounds resulting from metabolism such as ethanol, aldehyde, enzymes and proteins. Some compounds have an antibiotic effect like killer proteins. The aim of this work was to verify the conditions for detection and expression of killer factor produced by Sacch. cerevisiae isolated from grape must. The killer yeast strains used for the experiments were Sacch. cerevisiae Embrapa 91B, Sacch. cerevisiae Embrapa 1B and a commercial yeast Sacch. cerevisiae K1 (Lallemand). The yeast Sacch. cerevisiae Embrapa 26B was used as sensitive strain. Solid media prepared with different concentrations of grape must and non-commercial yeast extract (ELNC), were used to detect the killer factor. Culture media prepared with different concentrations of grape must, ELNC and sucrose, were employed for killer factor expression. Synthesis of killer protein was evaluated under anaerobic and aerobic growth conditions. Detection of killer protein presented better results when using a culture medium prepared with 80 % of grape must and 20 % of ELNC. The liquid medium that provided the best conditions for killer factor expression was prepared with 5 % of grape must and 95 % of ELNC supplemented with 100 g/L of sucrose. Killer factor expression was inhibited under aerobic conditions, except when strains were growth in liquid media prepared with high concentrations of sucrose.

Made available in DSpace on 2018-08-02T00:16:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_2697_Disertação Lislane Rocha Schaeffer.pdf: 4940812 bytes, checksum: 977e32ac17d7897cd742c455c5bbc307 (MD5) Previous issue date: 2007-12-10 / RESUMO O presente trabalho foi realizado na região costeira próxima da área estuarina de Anchieta, ES, em uma área de malacocultura. As amostragens foram realizadas mensalmente no período de janeiro a dezembro de 2004 em 10 (dez) pontos: Rio, 1A, 1B, 1C, 2A, 2B, 2C, 3A, 3B, 3C. Foi realizada análise quali-quantitativa da comunidade fitoplanctônica e das variáveis ambientais, tais como temperatura da água, transparência, salinidade, pH e oxigênio dissolvido. Os resultados de temperatura da água e pH pouco variaram ao longo do ano. A pluviosidade interferiu na transparência da água e, portanto, foi a variável ambiental que mais influenciou na comunidade fitoplanctônica local. As diatomáceas foram as mais representativas (em análise qualitativa e quantitativa) das Classes. Os dados de densidade foram baixos se comparados a outras regiões costeiras, mas teve uma alta diversidade e equitabilidade demonstrando que a área de estudo ainda é uma região bem preservada, com poucos impactos ambientais. Os baixos valores de densidade e biovolume indicam que os mexilhões dependem muito pouco da comunidade fitoplanctônica como alimento. Em relação às espécies potencialmente tóxicas, a Classe Bacillariophyceae novamente teve a maior representatividade no número de ocorrências dos táxons ao longo do ano. As espécies fitoplanctônicas potencialmente tóxicas ainda não promovem florações, mas deve se considerar um alerta, uma vez que a população de Anchieta lançar seus efluentes domésticos no rio Benevente ou diretamente no mar. Esta pesquisa é um sub-projeto de maricultura sustentada do Projeto RECOS Milênio, financiado pelo CNPq a partir de 2004. Palavras-chave: fitoplâncton, toxinas, molusco.

Orientador : Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-02T20:21:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_JulianoFernandesde_M.pdf: 21030681 bytes, checksum: 655e7f6fcc823363d39f60d09044b1d9 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: o óxido nítrico (NO) é atualmente reconhecido como o mais importante neurotransmissor inibitório liberado de terminações nervosas não-adrenérgicas não-colinér gicas (NANC) responsável pelo relaxamento de corpo cavernoso. O NO relaxa os corpos cavernosos através da ativação da guanilato cic1ase solúvel, a qual causa um aumento nos níveis de GMP cíc1ico que leva como conseqüência ao relaxamento deste tecido. A excitabilidade elétrica das células musculares lisas que formam os corpos cavernosos do pênis é fundamental para o funcionamento deste órgão. Um grande número de toxinas biológicas exerce seus efeitos modificando as propriedades de canais de Na+ dependentes de voltagem, envolvidos na geração de potenciais de ação. O objetivo deste estudo foi investigar a capacidade de agonistas de canais de Na+ (aconitina, veratridina, toxina de anêmona, toxina gamma e brevetoxinas) em induzir relaxamento no corpo cavernoso isolado de coelho, bem como os mecanismos farmacológicos envolvidos neste processo. A adição de aconitina (30 11M),veratridina (30 11M)e de brevetoxina-3 (100 nM) ao banho causou relaxamento de desenvolvimento lento e gradual, os quais foram marcantemente reduzidos pelo L-NAME (100 11M)e restaurados pela L-arginina (1 mM). Os relaxamentos evocados por estes três agonistas também foram significativamente reduzidos pelo ODQ. OS bloqueadores de canais de Na+, tetrodotoxina (100 nM) e saxitoxina (100 nM), quando adicionados previamente ao banho, aboliram o relaxamento de corpo cavernoso induzido por estes agonistas. A adição de toxina gamma (1 11M)ao banho produziu relaxamento transitório seguido de retomo gradual à linha de base. A adição de L-NAME inibiu o relaxamento causado pela toxina gamma e a pré-incubação com L-arginina impediu este efeito inibitório. Além disso, o relaxamento evocado pela toxina gamma foi abolido na presença de ODQ, tetrodotoxina e saxitoxina. A adição do inibidor seletivo para fosfodiesterase tipo 5, sildenafil (100 nM), potencializou significativamente o relaxamento de corpo cavernoso de coelho induzido pela aconitina, veratridina, toxina gamma e brevetoxina-3. Nossos resultados demonstram que o relaxamento de corpo cavernoso evocado por estes agonistas são dependentes da liberação de NO de fibras nitrérgicas e da ativação da via NO-GMPc na musculatura lisa do tecido erétil / Abstract: Nitric oxide (NO) is now recognized as the most important inhibitory neurotransmitter released by the nitrergic NANC fibers responsible for the corpus cavernosum relaxations and penile erection. NO relaxes the corpus cavernosum through the stimulation of the soluble guanylyl ciclase, causing an increase in the levels of cyclic GMP in the smooth muscle cavernosal tissues. The electric excitability via voltage-dependent Na+ channels of the smooth muscle cells that form the corpus cavernosum is essential for the erectile function. A number of biological toxins exert their effects modifying the properties of voltage-gated Na+ channels. The objective of this study was to investigate the capacity of Na+ channels agonists (aconitine, veratridine, anemone toxin, gamma toxin and brevetoxins) to induce relaxation of rabbit isolated corpus cavemosum (RbCC), and the pharmacological mechanisms involved in this phenomenon. The addition of aconitine (30 ~M), veratridine (30 ~M) and brevetoxin-3 (100 nM) to the organ-bath preparations caused slow-onset RbCC relaxations, which were markedly reduced by the NO synthase inhibitor L-NAME (100 ~M) and reversed by L-arginine (1 mM). The RbCC relaxations evoked by these agents were also significantly reduced by the soluble guanylyl ciclase inhibitor ODQ (10 ~M). The Na+ channels blockers tetrodotoxin (100 nM) and saxitoxin (100 nM), when previously added to the bath, abolished the RbCC relaxations by these agonists. The addition of gamma toxin (1 ~M) produced transitory relaxations followed by a gradual retum to the base line. The addition of L-NAME inhibited the gamma toxin-induced RbCC relaxations caused and L-arginine prevented the inhibitory effect. Besides, these relaxations were abolished in the presence of ODQ, tetrodotoxin and saxitoxin. The selective inhibitors for hosphodiesterase type 5, sildenafil (100 nM), significantly potentiated the RbCC relaxations by the aconitine, veratridine, gamma toxin and brevetoxin-3. Our results indicate that the RbCC relaxations evoked by 151 Na+ channel agonists are dependent of the release of NO from nitrergic nerve fibres and of the activation of the pathway NO-GMPc in the smooth musc1ecells of the erectile tissue / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientadores: Edmur Franco Carelli, Elizabeth Maria Aparecida Barasnevicius Quagliato / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T01:14:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sanches_DelsonLuisEsteves_M.pdf: 5852738 bytes, checksum: 4494ab9934c166c64948950e054d79dc (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Objetivos: A proposta deste estudo foi verificar a eficácia da estimulação elétrica funcional para os movimentos de eversão e dorsiflexão do pé associado à fisioterapia tradicional e quanto a toxina botulínica pode atuar como agente facilitador para o tratamento proposto. Método: Foram estudados 16 pacientes de ambos os sexos, hemiparéticos por acidente vascular cerebral, com tempo de lesão entre nove a 120 meses que apresentavam as disfunções de eversão e dorsiflexão do pé durante a marcha. Estes foram distribuídos em dois grupos: GI composto por oito pacientes que receberam aplicação de toxina botulínica, fisioterapia e EEF e com idade entre 41 e 75 anos, com a média de 57,75 e o desvio padrão foi de 13,14 anos. O GIl foi composto por oito pacientes que receberam tratamento fisioterápico, EEF e aplicação de toxina botulínica e com idade entre 30 e 72 a média foi de 58,88 e o desvio padrão foi de 13,38 anos. Foram realizadas três avaliações em ambos grupos: GI-13fase inicial sem nenhum tipo de procedimento, 23após 15 dias da aplicação da toxina botulínica e a 33após 15 dias do término do término do tratamento fisioterápico e EEF. GIl-13 fase inicial sem nenhum tipo de procedimento, 23após 15 dias do término do tratamento fisioterápico e utilização da EEF e a 33 após 15 dias da aplicação da toxina botulínica. As medidas avaliadas foram: amplitude de movimento articular do pé, a velocidade e cadência da marcha, análise observacional da marcha e força muscular. Os 16 pacientes realizaram avaliação neurológica, fisioterápica e exames complementares de ressonância magnética para visuaH7.açãoe comprovação da mesma área de lesão. Resultados: O teste ANOVA nos Ranks através da comparação das 3 avaliações realizadas no GI e GIl mostrou valor de (P) significante indicando melhora para as medidas: GI- f8 vs 38 -eversão p= 0.0155; dorsiflexão p= 0.0118; cadência p= 0.0033; velocidade p= 0.0013; força muscular p= 0.0069. GI- 28 vs 38- eversão p= 0.0103; dorsiflexão p= 0.0221; cadência p= 0.0065; velocidade p= 0.0385; força muscular p= 0.0069. GII- 18 vs 28- eversão p= 0.0064; dorsiflexão p= 0.005J;'velocidade p= 0.0145; força I muscular p= 0.0502. A medida cadência do GIl foi significativa na 23vs 33com valor de p= 0.0425, porém indicando piora da cadência. Conclusão: Diante dos resultados abrem-se novas perspectivas quanto à abordagem terapêutica com Estimulação Elétrica Funcional e fisioterapia para a melhora da dorsiflexão e eversão do pé de pacientes hemiparéticos por acidente vascular cerebral. A toxina botulínica parece participar no conjunto global da marcha como elemento de harmonia, talvez proporcionando um aspecto mais fisiológico eliminando os movimentos bruscos / Abstract: Objective: The aim of this study was to verify the effectiveness of functional electric stimulation to both movements of eversion and dorsiflexion of the foot associated to the traditional physiotherapy and how much the botulinum toxin can act as a facilitator agent to the proposed treatment. Method: It was studied 16 patients from both genders, all of them are hemiparethics patients due to cerebrovascular accident with a lesion period between nine and 120 months that had presented disfunctions of eversion and dorsiflexion of the foot during the gait. These patients were divided in two groups: Group 1 was compounded by eigth patients who had recieved application of botulinum toxin, physiotherapy and FES and their ages were between 41 and 75 years old, with an average of 57,75 years old and a standard deviation 13,14 years ofage; Group 2 was'compounded by eight patients, who had recieved physiotherapy treatment, utilization of FES and application of botulinum toxin and their ages were between 30 and 72 years of age and the average was 58,88 and the standard deviation was of 13,38 years of age. lt was performed evaluations on both groups: Group 1 - 1st Initial phase without any type of procedures, 2nd 15 days afier the application of botulinum toxin and 3rd - 15 days afier the end of the physiotherapy treatment and utilization ofFES. Group 2 - 1st Initial phase without any type ofprocedures, 2nd 15 days afier the end of the physiotherapy treatment and utilization of FES and the 3rd phase afier 15 days of the application of botulinum toxin. All the 16 patients had neurologic, physiotherapy assessment and additional examinations of magnetic resonance in order to verify and to reaffirm the lesion site. lt was evaluated the amplitude ofthe joint movement ofthe foot, muscular endurance, velocity and cadence ofthe gait, observational analysis of the gait and muscular strength. Results: The test Anova in the Ranks through the comparison of the 3 evaluations performed at Group 1 and Group 2 had shown a p. value very significative indicate improvement for the following measures: Group 1 - 1st evaluation versus 3 rd evaluationeversion p=O.0155; dorsiflexion p=O.0118; cadence p=O.0033; velocity p=O.0013 and muscular endurance p=O.0069. Group 2 - 2nd evaluation versus 3rd evaluation - eversion p=0.01O3); dorsiflexion p=O.0221; cadence p=O.0065; velocity p=O.0385 and muscular endurance0.0069. Group 2 - 1st evaluationversus 2nd evaluation- eversion p=O.OO64 dorsiflexion p=O.OO57;velocity p=O.O145and muscular endurance p=O.O502.The cadence measure of Group 2 was significant at the 2nd evaluation versus 3rd evaluation with a value ofp=O.O425.Though it doesn't indicate any improvement ofthe cadence. Conclusion: As it was seen from the results' point ofview, new perspectives are open for the therapeutic with Functional Eletric Stimulation approach and for the technique of the procedure in order to improve the dorsiflexion and eversion ofthe foot ofthe hemiparethics patients due to cerebrovascular accident. The botulinum toxin seems participate in the global association as element of harmony, maybe providing an aspect physiological eliminating abrupt moviments / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Del veneno del escorpión Brachistosternus ehrenbergii, se ha aislado una toxina específica para ratones. La toxina denominada Be1 fue purificada mediante cromatografía de intercambio catiónico, en CM-Sephadex C-25 (16 x 1,1 cm) con buffer acetato de amonio 0,05 M a pH 7, y se caracteriza por ser una proteína básica que constituye el 8,1 % de la proteína total del veneno. La pureza de la toxina fue evaluada por electroforesis en condiciones nativas, de acuerdo al método de Reisfeld, y en condiciones denaturantes por el método de Schägger y von Jagow, determinándose que la toxina es de una sola cadena polipeptídica de 6,3 kDa. La toxina al ser inoculada en ratones albinos adultos; vía intraperitoneal (62 µg) produce la aparición de algunos signos locales como hipersecreción salival seguido por cuadros de afección respiratoria, arrastre de las patas posteriores, hasta causar la muerte. Vía intramuscular (7,6 µg), Be1 produce parálisis temporal de la extremidad inoculada. La toxina no tiene actividad de fosfolipasa, proteasa, acetilcolinesterasa ni actividad inhibidora de acetilcolinesterasa. / --- From Brachistosternus ehrenbergii scorpion venom a specific toxin to mice has been isolated. The toxin denominated Be1 was purificated by means of cationic exchange chromatography on CM-Sephadex C-25 column (16 x 1,1 cm) with ammonium acetate buffer 0,05 M at pH 7, and it characterizes to be a basic protein that constitute 8,1 % of venom total protein. Toxin purity was evaluated by electrophoresis in natives conditions, according to Reisfeld-method, and denaturants conditions by the Schägger-and-von Jagow-method, the toxin is a single chain polypeptide of 6,3 kDa has been determined. The toxin to be inoculated on albino mice; intraperitoneal way (62 mg of Be1) produces some local signals as salival hipersecretion followed by respiratory affection, drags hind feet until death. Intramuscular way (7,6 mg) produces temporal paralysis of the inoculated limb. The toxin has neither phospholipase, nor protease, nor acetylcholinesterase nor acetylcholinesterase inhibitor activity.

Se ha estudiado el veneno del escorpión Tityus sp. (aff. T. silvestris Pocock, 1897) habiéndose determinado que contiene 47,6% de proteína. Las proteínas del veneno fueron separadas a partir de 12,9 mg de veneno, mediante cromatografía de intercambio catiónico en CM Sephadex C-25, con buffer acetato de amonio 0,05 M pH 7,0 a temperatura ambiente y a un flujo de 11 mL/h. El perfil cromatográfico mostró la presencia de siete picos proteicos y por PAGE-SDS se diferenciaron por lo menos cinco bandas proteicas en el veneno crudo. Los ensayos de toxicidad han permitido identificar tres toxinas que afectan a Mus musculus y que se encuentran asociadas a los picos IV, V y VII; y asimismo se ha detectado toxicidad sobre Gryllus sp., la cual está asociada a los picos IV, V, VI y VII. Entre las actividades enzimáticas se ha determinado la presencia de actividad proteolítica sobre azocoll y caseína relacionada al pico I. También se ha encontrado actividad de hialuronidasa en el pico IV con una actividad específica de 205,6 μg/min/mg. Finalmente tanto en el veneno crudo como en las fracciones colectadas no se ha encontrado actividad de fosfolipasa, anticoagulante ni hemolítica. / This research has shown that 47,6% of Tityus sp. (aff. T. silvestris Pocock, 1897) venom consists of protein. The venom proteins were separated from 12,9 mg of venom using cationic exchange chromatography in CM Sephadex C-25 with a 0,05 M ammonium acetate buffer pH 7,0 at room temperature and 11 mL/h flow. The chromatography profiles show seven peaks of proteins and by PAGE-SDS, five protein bands were distinguished in the crude venom. The toxicity assays allowed the identification of three toxins that affect Mus musculus which were associated to peaks IV, V and VII. Toxic proteins to Gryllus sp. were also found associated to peaks IV, V, VI and VII. Through the enzymatic activity, the presence of proteolytic activity was found related to the first peak, which has activity over azocoll and casein. Hyaluronidase activity has also been found in the peak IV with a specific activity 205,6 μg/min/mg. However, the crude venom and collected fractions did not show any phospholipase, anticoagulant, nor hemolytic activity.

Orientador: Saulo Santesso Garrido / Banca: Reinaldo Marchetto / Banca: Fillipe Vieira Rocha / Resumo: O presente trabalho descreve o estudo de um mimético da proteína CcdB, o CcdBSG-2, para verificar a possibilidade de formação de um complexo metálico com o lantanídeo Térbio (III) e com o íon metálico Cobre (II), bem como avaliar o potencial dos complexos em inibir a atividade das enzimas bacterianas DNA-girase e Topoisomerase IV. Este peptídeo foi sintetizado pela metodologia de síntese em fase sólida (SPFS), purificado por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e identificado por espectrometria de massas (LC/ESI-MS). Posteriormente o peptídeo foi complexado com 3 equivalentes molares de Cu(II) e Tb(III) e acompanhou-se as alterações nos espectros de absorção e emissão de fluorescência do peptídeo e espectroscopia de luminescência após a adição dos metais. Estes mesmos estudos espectroscópicos foram realizados em função do tempo para verificar o intervalo necessário para a formação de cada complexo metal-peptídeo. Foram realizados também estudos de caracterização estrutural por espectroscopia de dicroísmo circular, avaliando o peptídeo na presença e ausência dos metais. Para avaliar o potencial de inibição dos peptídeos, utilizou-se ensaios de eletroforese em gel de agarose frente as enzimas DNA girase e Topoisomerase IV e ensaios de crescimento bacteriano em meio líquido frente as bactérias Escherichia coli enterohemorrágica e Staphylococcus aureus. Ambos os testes para avaliar o potencial de inibição mostraram que os metalopeptídeos Tb(III)-CcdBSG-2 e Cu(II)-CcdBS... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present work describes the study of a mimetic of the protein CcdB, the CcdBSG-2, to verify the possibility of formation of a metallic complex with the lanthanide Terbium(III) and with the metallic ion Copper (II), as well as to evaluate the potential of the complexes in inhibiting the activity of bacterial enzymes DNA-gyrase and Topoisomerase IV. This peptide was synthesized by the methodology of solid phase peptide synthesis (SPPS), purified by high performance liquid chromatography (HPLC) and identified by mass spectrometry (LC / ESI-MS). Later the peptide was complexed with 3 molar equivalents of Cu (II) and Tb (III), followed by changes in the spectra of absorption and emission of fluorescence of the peptide and luminescence spectroscopy after the addition of the metals. These same spectroscopic studies were performed as a function of time to verify the interval required for the formation of each metal-peptide complex. Structural characterization studies were also performed by circular dichroism spectroscopy, evaluating the peptide in the presence and absence of metals. To evaluate the inhibition potential, electrophoresis and bacterial growth assays were used in liquid medium against the peptides produced. Both tests to assess the inhibition potential showed that theTb (III) -CcdBSG-2 and Cu (II) -CcdBSG-2 metallopeptides exhibit about three times greater activity than the CcdBSG-2 peptide in the absence of the metal. These important results indicate that the increas... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Introducción: El formaldehído es un compuesto genotóxico, mutagénico y cancerígeno empleado copiosa y rutinariamente en los laboratorios de anatomía patológica; los niveles de exposición reportados en los ambientes de trabajo frecuentemente superan los límites permisibles y las medidas de prevención son insuficientes, esto plantea una problemática en salud ocupacional. Objetivos: Determinar el daño genotóxico en trabajadores expuestos a formaldehído de tres laboratorios de anatomía patológica de Lima Metropolitana. Diseño: Estudio descriptivo transversal. Lugar: Laboratorios de anatomía patológica del Hospital Nacional Guillermo Almenara Irigoyen, Instituto Nacional de Enfermedades Neoplásicas y Morgue Central de Lima. Participantes: Trabajadores de salud de laboratorios de anatomía patológica expuestos a formaldehído. Métodos: Se evaluó el daño genotóxico local mediante test de micronúcleos y anormalidades nucleares en células epiteliales bucales y daño genotóxico sistémico mediante ensayo cometa en linfocitos de sangre capilar de 42 trabajadores expuestos a formaldehído y 38 trabajadores no expuestos. Adicionalmente se midió la concentración de formaldehído en aire de cada laboratorio mediante método espectrofotométrico con acido cromotrópico y se comparó con el valor límite permisible. Principales medidas de resultados: Daño genotóxico local y sistémico y concentración de formaldehído en aire. Resultados: Se obtuvo una concentración media de 0.96 mg/m3 de formaldehído en aire, superando el valor limite permisible (TLV-ceiling 0.37 mg/m3). Se encontró que los trabajadores expuestos a formaldehído presentaron mayor frecuencia de micronúcleos, gemaciones y binucleaciones en comparación con el grupo de no expuestos (p<0.01). No se encontró diferencias significativas en ninguno de los parámetros del ensayo cometa entre ambos grupos de estudio (p>0.05). Conclusiones: Los trabajadores de laboratorios de anatomía patológica expuestos a formaldehído presentan daño genotóxico en el epitelio bucal. Estos resultados, junto con la presencia de altas concentraciones de formaldehído en el ambiente laboral y su naturaleza cancerígena, indican una situación de alto riesgo ocupacional, la cual debe ser atendida mediante la implementación de un programa de gestión de riesgos. / --- Introduction: Formaldehyde is a genotoxic, mutagenic and carcinogenic chemical heavy and routinely used in pathology laboratories, exposure levels reported in workplaces air often exceed the permissible limit and preventive measures are insufficient, which raise a problem in occupational health. Objectives: To evaluate occupational genotoxic damage and occupational exposure in anatomy pathology workers exposed to formaldehyde in three laboratories of Lima metropolitan area. Design: Cross sectional study. Location: Pathology laboratories of Guillermo Almenara Irigoyen National Hospital, National Institute of Neoplastic Diseases and Central Morgue of Lima. Participants: Health workers in pathology laboratories exposed to formaldehyde. Methods: Evaluation of local genotoxic effects was performed by application of micronucleus and nuclear abnormalities test in exfoliated epithelial cells from buccal mucosa and systemic gentotoxic effect by cometa assay in capillary blood lymphocytes. The study was carried out in 42 workers exposed to formaldehyde and 38 unexposed workers. Additionally, exposure assessment was performed by applying spectrophotometric method with chromotropic acid for determination of formaldehyde in air and compared with permissible exposure limit. Main outcome measures: Local and systemic genotoxic damage and formaldehyde concentration in air. Results: The average formaldehyde in air concentration was 0.96 mg/m3, exceeding permissible exposure limit (TLV-ceiling 0.37 mg/m3). It was found that workers exposed to formaldehyde had increased micronucleous, nuclear buds and binucleations frequencies in buccal epithelium compared to unexposed group (p <0.01). No significant differences were found in any of the comet assay parameters between study groups (p> 0.05). Conclusions: Workers in pathology laboratories exposed to formaldehyde show genotoxic damage in the buccal epithelium. These results, together with the presence of high formaldehyde concentrations in the workplace and its carcinogenic nature, point out high risk that must be prevented by implementing a comprehensive risk management program. / Tesis