Orientador: Mario Sergio Palma / Banca: Luiz Alberto Beraldo de Moraes / Banca: Ivo Lebrun / Banca: Ian Castro Gamboa / Banca: Osvaldo Augusto Brazil Esteves Sant'Anna / Resumo: Numerosos estudos produzidos nos últimos 30 anos, vêm elucidando estruturas e atividades biológicas de vários componentes de venenos animais, demonstrando suas complexas composições. Os venenos de escorpiões são misturas complexas de compostos biologicamente ativos, tais como: compostos de baixa massa molar, peptídeos e proteínas, sendo estas últimas as mais amplamente estudadas. Até então, pouco se conhece sobre os pequenos peptídeos e metabolitos dos venenos de escorpiões, sendo necessárias pesquisas para ampliar esse conhecimento. Este estudo visou a obtenção de um perfil peptídico detalhado dos venenos das espécies T. serrulatus, T. bahienis e T. obscurus, com foco principal nos pequenos peptídeos lineares, antes negligenciados em venenos de escorpiões. A extração em acetonitrila 50 % (v/v) foi uma das diferenças estratégicas para esse objetivo, e a separação e sequenciamento destes peptídeos foram realizados utilizando-se um sistema LCESI- IT-TOF. Os componentes peptídicos dos venenos dos escorpiões estudados estão distribuídos na faixa de massa molar de 400-4000 Da, sendo possível detectar a presença de 521 peptídeos distintos no veneno de T. serrulatus, 460 peptídeos no veneno de T. bahiensis e 517 peptídeos no veneno de T. obscurus. Também foi possível estabelecer os perfis peptídicos dos venenos das três espécies estudadas, assim como obter a sequencia de 66 peptídeos, dos quais alguns apresentaram semelhanças com toxinas já conhecidas de escorpiões. Treze dos novos peptídeos detectados, contendo entre 6 e 19 aminoácidos, foram sintetizados e caracterizados com relação às suas atividades biológicas em ensaios de antibiose, hemólise, desgranulação de mastócitos, LDH, ensaio de campo aberto, dor e inflamação em mamíferos, demonstrando algumas atividades principalmente com relação à hemólise, (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Numerous studies produced in the last 30 years, come elucidating structures and biological activities of various components of animal venoms, showing their complex compositions. The scorpion venoms are complex mixtures of biologically active compounds, such as low molecular weight compounds, peptides and proteins, the latter being the most widely studied. To the present time not much is known about the small peptides and metabolites of scorpion venoms, requiring research to expand this knowledge. This study aimed to obtain a detailed peptide profile of the venoms of T. serrulatus, T. bahienis and T. obscurus species, focusing primarily on small linear neglected peptides in scorpion venom. The extraction in 50% acetonitrile was one of the strategic differences for this purpose and the separation and sequencing of these peptides were performed "on-line" using an LC-ESI-ITTOF system. The peptide components of the scorpion venoms are distributed along the molar mass range of 400-4000 Da, and in this study we could detect the presence of 521 different peptides in T. serrulatus venom, 460 peptides in T. bahiensis and 517 in T. obscurus. It was also possible to establish the peptide profiles of the venoms of the three species studied, as well as to obtain the sequence of 66 peptides, some of which had similarities to known already toxins of scorpions. Thirteen of the newly detected peptides, containing between 6 and 19 amino acids, were synthesized and characterized with proposal to obtain their biological activities, such antibiosis, hemolysis, mast cell degranulation, LDH, open field test, pain and inflammation in mammals, showing some particularly activities in hemolysis, pain and mammals locomotion. This work also revealed the metabolites profile in these venoms with a LCMS-Q-TOF-MS system for qualitative and quantitative analysis. For this purpose, we (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Mario Sergio Palma / Resumo: Os escorpiões são artrópodes da classe Arachnida, ordem Scorpiones. São animais peçonhentos, ou seja, possuem órgão secretório ou glândulas conectadas a um dispositivo de injeção, o qual pode inocular o veneno produzido pela glândula ou células especializadas. O veneno pode ser descrito como sendo uma mistura complexa, contendo muco, sais inorgânicos, moléculas orgânicas de baixa massa molecular, muitos peptídeos neurotóxicos e proteínas. O envenenamento humano por picada de escorpião é um importante problema de saúde pública em vários países tropicais e subtropicais. No Brasil, Tityus serrulatus é uma das espécies mais perigosas, que causam grave envenenamento, podendo levar ao óbito. Em geral, o envenenamento pode causar sintomas de dor, febre, agitação psicomotora, salivação, lacrimejamento, aumento da mobilidade do trato gastrointestinal, insuficiência respiratória e arritmia cardíaca, hipertensão arterial seguida de hipotensão, insuficiência cardíaca, edema pulmonar e choque anafilático. O veneno dos escorpiões tem sido estudado ao longo dos anos, a fim de elucidar seus compostos juntamente com suas sequências e suas funções biológicas. Algumas espécies de escorpiões possuem em seu veneno compostos antimicrobianos, mediadores que ativam os processos inflamatórios, causam a desgranulação de mastócitos, como também, podem ser capazes de induzir quimiotaxia de neutrófilos. Até o presente momento a toxinologia de escorpiões tem concentrado o foco nas neurotoxinas, que são peptídeos contendo entre 30 e 70 resíduos de aminoácidos em suas sequências, com quatro ou cinco pontes dissulfeto em suas estruturas. A despeito de existir muitos pequenos peptídeos (apresentando entre 5 e 20 resíduos de aminoácidos em suas sequências), que apresentam conformações lineares, por não apresentarem pontes ... (Resumo completo clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Scorpions are arthropods of the class Arachnida, order Scorpiones. They are venonous animals, i. e, they have secretory organ or gland connected to an injection apparatus, which can inoculate the venom produced by specialized cells. The venom can be described as a complex mixture containing mucus, inorganic salts, organic molecules of low molecular mass, many neurotoxic peptides and proteins. The human enenvenoming by scorpion sting is an important problem of public health in many tropical and subtropical countries. In Brazil, Tityus serrulatus is one of the most dangerous species, which cause severe enenvenoming, that can lead to death. In general, the envenoming can cause symptoms of pain, fever, agitation, salivation, lacrimation, increasing motility of the gastrointestinal tract, respiratory failure and cardiac arrhythmia, hypertension followed by hypotension, heart failure, pulmonary edema and anaphylaxis. The venom of scorpions has been studied over the years in order to elucidate their biochemical composition, along with their sequences and biological functions. Some species of scorpions have antimicrobial compounds in their venom, mediators that trigger inflammatory processes, causing mast cell degranulation, and also may be capable of inducing neutrophil chemotaxis. To date, the toxinology of scorpions has concentrated the focus on neurotoxins, which are peptides containing between 30 and 70 amino acid residues in their sequences, with four or five disulfide bonds in their structures. Despite the existence of many small peptides (having between 5 and 20 amino acid residues in their sequences), that have linear conformations for not having disulfide bonds in their structures, this group of toxins has been neglected in the literature, due to the difficulty in isolating and determine molecular structures of these toxins ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza da Cunha / Banca: Elizabeth Pizzollito / Banca: Carlos Magno Castelo Branco Fortaleza / Resumo: Staphylococcus epidermidis e Staphylococcus haemolyticus são considerados patógenos oportunistas, cujas infecções estão principalmente associadas à produção de biofilme. As enterotoxinas, superantígenos relacionados a intoxicações alimentares, e as hemolisinas, moléculas capazes de causar lise de membranas celulares, parecem estar associadas à patogênese das infecções estafilocócicas, apesar de ainda ser questionado se elas constituem fatores de virulência importantes nesses organismos. O uso indiscriminado de antimicrobianos vem selecionando cepas resistentes à oxacilina com menor suscetibilidade à vancomicina. A resistência à oxacilina é codificada pelo gene mecA, contido em um elemento genético móvel, denominado SCCmec. Novos antimicrobianos, como a linezolida, tigeciclina, daptomicina e quinupristina/dalfopristina vêm sendo empregados no tratamento de infecções por estafilococos multirresistentes. Este estudo objetivou caracterizar S. epidermidis e S. haemolyticus isolados de hemoculturas quanto à presença de genes de hemolisinas, enterotoxinas, suscetibilidade aos antimicrobianos e perfil clonal. Cento e sessenta e nove isolados foram pesquisados quanto à presença do gene mecA por PCR em tempo real, estando presente em 100% dos S. haemolyticus e 92,9% dos S. epidermidis, cujos tipos de SCCmec mais frequentes, determinados por PCR Multiplex, foram, respectivamente, I e III. Os MICs (Concentração Inibitória Mínima) de linezolida, tigeciclina, daptomicina, quinupristina/dalfopristina e vancomicina foram obtidos por Etest® e revelaram 4,7% de isolados resistentes à tigeciclina, 1,2% resistentes ou com resistência intermediária à quinupristina/dalfopristina, sendo o MIC máximo de vancomicina igual a 3 μg/ml. A microdiluição em caldo para vancomicina mostrou MICs de 0,25 a 2 μg/ml, concordando em 88,2% com os resultados obtidos com Etest®. A tipagem por PFGE... / Abstract: Staphylococcus epidermidis and Staphylococcus haemolyticus are opportunistic pathogens that cause infections which are mainly related to the formation of a biofilm. Enterotoxins, superantigens related to food poisoning and hemolysins, molecules able to lyse mammalian cells, seem to be involved in the pathogenesis of staphylococcal infections, although the question remains whether they represent important virulence factors in these organisms. The indiscriminate use of antimicrobial drugs has selected strains that are resistant to oxacillin, in addition to isolates with reduced vancomycin susceptibility. Oxacillin resistance is encoded by the mecA gene which is carried on a mobile genetic element, SCCmec. New antimicrobial drugs such as linezolid, tigecycline, daptomycin and quinupristin/dalfopristin are being used for the treatment of infections caused by multidrug-resistant staphylococci. The objective of this study was to characterize S. epidermidis and S. haemolyticus strains isolated from blood cultures regarding the presence of hemolysin and enterotoxin genes, antimicrobial susceptibility, and clonal profile. Investigation of the mecA gene by real-time PCR in 169 isolates revealed the presence of the gene in 100% of S. haemolyticus isolates and 92.9% of S. epidermidis. The most frequent SCCmec types determined by multiplex PCR were types I and III, respectively. The minimum inhibitory concentrations (MICs) of linezolid, tigecycline, daptomycin, quinupristin/dalfopristin and vancomycin determined by the Etest® showed that 4.7% of the isolates were resistant to tigecycline and 1.2% were resistant or intermediate resistant to quinupristin/dalfopristin. The maximum MIC for vancomycin was 3 μg/ml. Broth microdilution revealed vancomycin MICs of 0.25 to 2 μg/ml, showing 88.2% agreement with the Etest results. Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) typing revealed the presence of S. epidermidis ... / Mestre

Submitted by Suelen Silva dos Santos (suelenunb@yahoo.com.br) on 2011-06-28T17:16:33Z No. of bitstreams: 1 2011_JessicaKeleArrudaMacedo.pdf: 2293994 bytes, checksum: e7e90ab7ad78952c1b1ecab8c28f79cc (MD5) / Approved for entry into archive by Guilherme Lourenço Machado(gui.admin@gmail.com) on 2011-06-29T16:49:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_JessicaKeleArrudaMacedo.pdf: 2293994 bytes, checksum: e7e90ab7ad78952c1b1ecab8c28f79cc (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-29T16:49:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_JessicaKeleArrudaMacedo.pdf: 2293994 bytes, checksum: e7e90ab7ad78952c1b1ecab8c28f79cc (MD5) / Aproximadamente 90% dos constituintes da peçonha botrópica e botropóica são protéicos, tratando-se de uma mistura com enorme variedade de substâncias farmacologicamente ativas que atuam na indução de alterações fisiopatológicas. Pesquisas demonstram uma grande diversidade funcional e estrutural de componentes isolados da peçonha de serpentes capazes de fornecer informações biológicas, com várias aplicações biotecnológicas como, por exemplo, antimicrobianos e antitumorais. O presente trabalho descreve a purificação, identificação e caracterização bioquímica e biológica de proteínas com atividade antimicrobiana e/ou antitumoral provenientes da peçonha de Bothropoides marmoratus. A peçonha de B. marmoratus foi fracionada com o emprego de cromatografia líquida de alta eficiência em coluna de fase reversa C18. Os ensaios para avaliação de atividade biológica foram realizados com a peçonha bruta e com todas as frações cromatográficas obtidas. A atividade citotóxica foi avaliada contra as linhagens celulares HeLa (câncer cervical), B16F10 (câncer de pele) e NHI3T3 (fibroblastos normais). Os ensaios para avaliação dos efeitos inibitórios sobre a proliferação de bactérias foram realizados com cinco linhagens de bactérias Gram-negativas e quatro Gram–positivas. As frações bioativas foram submetidas à recromatografia em sistema RP-HPLC para purificação dos componentes e, em seguida, analisadas por espectrometria de massa do tipo MALDI-TOF/TOF. Os resultados indicam que a peçonha bruta de B. marmoratus, bem como algumas frações cromatográficas, apresentaram efeitos citotóxicos sobre as linhagens celulares e bactérias utilizadas. As análises por espectrometria de massa de quatro frações de interesse revelaram similaridade com uma fosfolipase A2, uma lectina do tipo-C, uma serinoprotease e com uma metaloprotease. Os resultados apontam para o potencial terapêutico da peçonha de B. marmoratus e evidencia a necessidade de estudos mais aprofundados acerca dos componentes moleculares presentes nessa peçonha. Alguns desses compostos apresentam potencial biotecnológico podendo vir a servir como modelos para o desenvolvimento de novas drogas. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Approximately 90% of the bothropic and bothropoic constituents of the venom are proteins, and it is a mixture with a variety of pharmacologically active substances that act to induce pathophysiological changes. Research shows a wide variety of functional and structural components isolated from the venom of snakes capable of providing biological information, with various biotechnological applications, for example, antimicrobial and antitumoral. This work describes the purification, identification and biochemical and biological characterization of proteins with antimicrobial and/or antitumoral activity from the Bothropoides marmoratus venom. Fractionation was performed by HPLC using a C18 reverse phase. The biological activities were carried out with crude venom and with all the chromatographic fractions obtained. The antitumor activity was tested by MTT method against the HeLa (cervical cancer), B16F10 (skin cancer) and against normal lineage NHI3T3 (fibroblasts). The antimicrobial activity assays were performed with five strains of gram-negative and four Gram-positive and all fractions of interest were subjected to a second chromatography for separation of the components present and then were analyzed by mass spectrometry MALDI TOF-TOF . The results show that the crude venom and some fractions caused the death of the cell lines tested and also the bacteria. Analysis by mass spectrometry revealed that the four fractions of interest have a similarity to phospholipase A2, a C-type lectin, a serineprotease and a metalloprotease. The results indicate the therapeutic potential of venom from B. marmoratus and shows the need to better study its components separately. Some components may be unsuitable for immediate use, but have great biotechnological potential serving as models for the development of new drugs.

Orientador: Pedro Eduardo de Felicio / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-01T09:05:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Saiki_MargaretYuriko_M.pdf: 14197745 bytes, checksum: bdec19916d272db95beac0a2c6aa3cbc (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Produtos cárneos com baixo teor de sal e alta atividade de água têm vida de prateleira reduzida à temperatura ambiente. A carne de sol, um produto tipicamente brasileiro, é elaborada de forma artesanal e tem uma duração média de três a cinco dias. Os princípios de boas práticas de fabricação, associados ao armazenamento refrigerado adequado e à embalagem a vácuo, permitem a conservação de produtos cárneos tradicionais de baixo teor de sal, por um tempo maior, para a comercialização a longas distâncias. O presente trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar a segurança microbiológica de uma carne bovina salgada e levemente dessecada, com características físico-químicas similares à carne-de-sol, com teor de sal compatível ao paladar humano, sem necessidade de dessalga e acondicionada em dois tipos de embalagem a vácuo, de acordo com suas permeabilidades ao oxigênio (9,6cc02/m2/dia vs 40,Occ02/m2/dia). No processamento utilizou-se o coxão-mole bovino, cortado em fatias de 5,Ocm de espessura, salgadas com 4% de sal e mantidas a 0°C por quatro horas. Ems eguida, foi realizada a secagem em câmara climatizada durante quatro horas a uma temperatura média de 24,5°e e umidade relativa do ar de 52,3% ...Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digital. / Abstract: Meat products with low salt content and high water activity have a short shelf-life at ambient temperature. A typical Brazilian beef product, "carne-de-sol", is traditionally made in small quantities at local markets and has an average time for consumption of three to five days. Principies of good manufacturing practices associated with proper cold storage and vacuum packaging could allow the preservation of low salt traditional meat products for longer time to make possible their marketing to distant areas. However, it is important to take into account the potential hazard of toxin formation in these products at abusive temperatures. This research work was carried out to evaluate the microbiological safety of a beef product with physico-chemical characteristics similar to "carne-de-sol", having salt levei compatible to consumers acceptance without desalting, vacuum packaged in two types of packaging films according to their oxygen barrier (9.6ccO2/m2/diavs. 40.0ccO2/m2/dia).Boxed beef top round wholesale cuts were sliced in 5 cm thick steaks, added of 4% salt and kept in the cooler (O°C ] for four hours ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations. / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos

Orientadores: Debora de Queiroz Tavares, Marta Hiromi Taniwaki / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-01T16:26:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gollucke_AndreaPittelliBoiago_M.pdf: 15838973 bytes, checksum: 97d7f091724b503c2c9a2db6382ed5c4 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Esta investigação analisou café cru (verde) brasileiro exclusivamente destinado à exportação quanto ao teor de ocratoxina A (OTA), antecipando-se a possíveis medidas regulatórias européias que visam limitar a presença desta toxina em café. As amostras foram obtidas das principais regiões produtoras em seis estados brasileiros (SP, MG, BA, ES, RO, PR), das safras 1999/2000 e 2000/2001, englobando as variedades arábica e robusta, amostras de "café orgânico" e de estoque governamental. A primeira parte do estudo foi determinar a concentração de OTA nas amostras por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) com técnica aperfeiçoada por Pittet et aI. (1996). Os resultados apontaram que entre as 37 amostras estudadas, 20 apresentaram valores de OTA abaixo de 0,2 ng/g ou ppb (limite de detecção) e 16 amostras apresentaram contaminação entre 0,2 e 0,85 ng/g (contaminação média 0,16 ng/g entre as 36 amostras); uma amostra excluída da média apresentou 6,24 ng/g de OTA. Para a segunda etapa, 5 das 37 amostras foram divididas em duas sub-amostras: uma com grãos sadios e outra com grãos danificados ("pretos" e "ardidos"). Nas sub-amostras também foi determinado o teor de OTA com o objetivo de investigar a possível relação entre grãos danificados e ocorrência da toxina. Grãos de café das sub-amostras foram observados em Microscopia Ótica e Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) a fim de verificar a presença de microrganismos e/ou ocorrência de danos celulares. Dos 15 grãos analisados, apenas um grão, "preto", revelou a presença de fungos e esporos. A morfologia dos grãos sadios revelou endosperma organizado, enquanto que a dos grãos defeituosos apresentou endosperma parcialmente comprimido e conteúdo celular reduzido. Todas as amostras analisadas na primeira parte deste estudo apresentaram concentração de OTA abaixo dos valores mais rígidos exigidos atualmente (8 ng/g, na Itália) e 97,3% das amostras estavam dentro do limite sugerido pelos órgãos legisladores europeus (5 ng/g). Os resultados da análise de OTA em grãos danificados e sadios mostraram correlação entre grãos danificados e concentração da toxina. Considerando os resultados obtidos nesta investigação, o café verde brasileiro destinado à exportação está apto a cumprir as exigências sanitárias atualmente estabelecidas em relação a OTA e que poderão entrar em vigor em 2003. / Abstract: The present survey analyzed raw coffee for export obtained from the main producing regions of six Brazilian states: São Paulo, Minas Gerais, Espírito Santo, Rondônia, Paraná and Bahia and from two harvests (1999/2000 and 2000/2001) anticipating possible regulatory limits of ochratoxin A in coffee throughout the world, especially in the European Community. The sampling batch included Arabica and Robusta varieties as well as "organic coffee" and government stock samples. They were first investigated for their content of OchratoxinA by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) according to methodology used by Pittet et aI. (1996). Of the 37 samples, 20 presented OTA levels below the detection limit (0.2 ng/g or ppb). The toxin content ranged from <0.2 ng/g to 0.85 ng/g for 36 samples with an average of 0.16 ng/g. One sample, excluded from average and range, showed an OTA concentration of 6.24 ng/g. Following this, five of the original samples were divided into two sub-samples, one containing sound beans and the other damaged ones (black and sour), with the purpose of verifying a possible correlation between damage and OTA concentration. Beans from each of the sub-samples were observed under Optical and Scanning Electron Microscope in search of moulds and/or cellular modification that could indicate an infection by microorganisms. Morphology of sound and sour beans showed an organized endosperm while black ones showed an endosperm somewhat compressed and a badly defined cellular content. Of the 15 beans observed, one (black) showed the presence of moulds and spores. Ali samples investigated in the first part of the study presented an OTA concentration below the lowest limit already established in Europe (8 ppb, Italy) while 97.3% were below the suggested regulatory limit of 5 ppb. Some correlation between damaged beans and OTA concentration was found in the second part of the study. According to this investigation, Brazilian green coffee for export is able to comply to established regulatory limits and those suggested for 2002. / Mestrado / Mestre em Engenharia de Alimentos

Orientadores: Elizabeth Maria B. Quagliato / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T23:24:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kimaid_PauloAndreTeixeira_D.pdf: 4960062 bytes, checksum: 0abcd901ad911c0cf567d93e38fd75f3 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Eletromiografia da Laringe (EMGL) é método auxiliar utilizado na compreensão e diagnóstico de diferentes doenças neurológicas que comprometem a função da laringe. Esta tese consiste de 4 capítulos: 1) Eletromiografia da laringe: aspectos técnicos; 2) Eletromiografia da laringe: estudo normativo; 3) Eletromiografia da laringe: contribuição ao diagnóstico na imobilidade de pregas vocais; e 4) Eletromiografia da laringe nos distúrbios dos movimentos - dados preliminares. 1) Descrevem-se as técnicas de inserção percutânea de eletrodos de agulha nos músculos tireoaritenoideus (TA), cricotireoideus (CT), cricoaritenoideus lateralis (CAL) e cricoaritenoideus posterioris (CAP) em 80 pacientes, 47 do sexo feminino e 33 do masculino, com idades entre 18 a 86 anos (média 52,7). Para a abordagem do músculo TA utilizaram-se a inserção percutânea via membrana cricotireóidea em 68 pacientes, e a via cartilagem tireóidea em 12. Para abordagem do músculo CT utilizou-se a inserção percutânea direta em 58 pacientes, enquanto a do CAL utilizou a inserção percutânea via membrana cricotireóidea. Na abordagem do CAP utilizou-se inserção percutânea direta por rotação digital em 32 pacientes e via membrana cricotireóidea atravessando a luz da laringe em 24. Dos 80 pacientes estudados, 55 apresentavam imobilidade de pregas vocais e 25 eram portadores de distúrbios dos movimentos. 2) Descrevem-se os valores de duração e amplitude dos potenciais de ação das unidades motoras (P AUM) destes músculos em 14 voluntários sem alterações vocais, 9 do sexo feminino e 5 do masculino, com idades entre 18 e 55 anos (média 35,6); 3) Descrevem-se as contribuições da EMGL ao diagnóstico de 55 pacientes, 27 do sexo feminino e 28 do masculino, com idades entre 18 e 79 anos (média 53,4), com imobilidade de pregas vocais à laringoscopia, 32 à esquerda, 14 à direita e 9 bilateralmente. Os pacientes foram agrupados conforme a causa provável da imobilidade à anamnese: 1) Desconhecida ( 30 pacientes); 2) Traumatismo (14 pacientes); e 3) Tumor (11 pacientes). 4) Descrevem-se dados preliminares da EMGL em 25 pacientes, 18 do sexo feminino e 7 do masculino, com idades entre 21 e 86 anos (média 51,4), apresentando disfonia por distúrbios dos movimentos. A avaliação clínica e laringoscopia sugeriam diagnóstico de distonia laringea em 19 pacientes, tremor vocal em 5 e síndrome de Gilles de la T ourette em 1. Dos 25 pacientes, 18 apresentavam indicação para tratamento com toxina botulinica: 14 com distonia laringea, 3 com tremor essencial e 1 com GTS. Utilizou-se a aplicação unilateral de 2,5U de BOTOXR , diluído em solução fisiológica 0,9%, nos músculos TA nos 12 pacientes com distonia em adução, nos 3 com tremor vocal e no único paciente com GTS. Noutros 2 pacientes com distonia em abdução, o músculo alvo era o CAP. AS respostas foram consideradas satisfatórias em 15 pacientes e insatisfatório em 3 (2 com distonia laringea em abdução e 1 com tremor vocal essencial). Os 80 pacientes foram avaliados clinicamente pelo otorrinolaringologista, pela fonoaudióloga e por endoscopia da laringe antes da indicação da EMGL. Para os registros foram utilizados equipamento Nihon Kohden m de 4 canais e eletrodos concêntricos nos pacientes com imobilidade de pregas vocais e nos voluntários, e eletrodos monopolares nos pacientes com distúrbios dos movimentos. Conclui-se: 1) As técnicas de inserção percutânea permitem a localização correta dos músculos laríngeos nos pacientes que necessitam do exame. A abordagem do CAP, por rotação digital da cartilagem tÍreóidea mostrou-se a mais difícil, seguida da abordagem do CAL. Abordagens do TA e CT não representaram dificuldades, exceto em poucos pacientes idosos e obesos, respectivamente. Em apenas 1 caso observou-se complicação significativa na abordagem do TA através da cartilagem tÍreóidea: um hematoma obstruindo parcialmente a luz da laringe. 2) No estudo normativo, são descritas pela primeira vez em nosso meio as médias de duração e amplitude dos P AUM em voluntários sem alterações vocais, que foram respectivamente 3.8ms e 413_V para o TA, 4.9ms e 585_V para o CT, 4.1ms e 388_V para o CAL, e 4.5ms e 475_V para o CAP. Os valores encontrados não diferem dos apresentados na literatura para os músculos TA e CT. 3) A EMGL contribuiu para o diagnóstico nos 55 pacientes com imobilidade de pregas vocais, sendo consistente com o comprometimento do nervo periférico em 25 casos do grupo 1, 12 do grupo 2 e 11 do grupo 3. A EMGL foi normal em 4 pacientes, sugerindo fixação da articulação cricoaritenóidea. Em 2 pacientes a EMGL sugeriu comprometimento do SNC e em 1 miopatia. 4) Nos distúrbios dos movimentos, dos 25 pacientes estudados, a EMGL foi consistente com distonia laríngea em 14 (normal em 5), tremor essencial em 3 e Parkinson em 2. O tratamento com aplicação de toxina botulínica guiada por EMGL foi realizada em 18 pacientes, e mostrou resultados satisfatórios em 15 e insatisfatórios apenas em 2 pacientes com distonia em abdução e 1 com tremor essencial. Conclui-se ainda que a relação risco beneficio justifica a utilização da EMGL para o diagnóstico clínico e para o tratamento nos pacientes com alterações da mobilidade da laringe / Abstract: Laryngeal Electromyography (LEMG) is an auxiliary method used for the comprehension and diagnosis of different neurological diseases that compromise laryngeal function. This thesis was wrote in 4 chapters: 1) Laryngeal electromyography: technical features; 2) Laryngeal electromyography in normal brazilian population; 3) Laryngeal eletromyography contribution to vocal fold immobility diagnosis; 4) Laryngeal electromyography in movement disorders: preliminary data. 1) There were described techniques for inserting needle electrodes percutaneously into the tireoaritenoideus (TA), cricotireoideus (CT), cricoaritenoideus lateralis (CAL) and cricoaritenoideus posterioris (CAP) muscles in 80 patients, 47 female and 33 male, aged between 18 to 86 years (mean 52,7y). The TA technique achieved correct location in ali patients, via cricothyroid membrane technique in 68 cases, and via thyroid cartilage technique in 12 cases. CT direct approach was performed in 58, CAP approach in 56, with digital rotation technique in 32, and through laryngeallumen in 24 cases. In 80 patients, 55 presents with vocal fold immobility and 25 with movement disorders. 2) There were described normal values of motor unit action potentials duration and amplitude of these muscles in 14 adult volunteers with no vocal disturbs, 9 female and 5 male, aged between 18 to 55 years (mean 35,6y). 3) There were described the LEMG contribution to diagnosis in 55 patients, 27 female and 28 male, aged between 18 to 86 years (mean 53,4), with vocal fold immobility, 32 left-hand side, 14 right-hand side and 9 bilateral. Patients were grouped accord to prior clinical diagnosis: 1) unknown (30 patients) ; 2) traumatic (14 patients); or 3) tumoral (11 patients). 4) There were described preliminary LEMG data in 25 patients, 18 female and 7 male, aged between 21 to 86 years (mean 51,4), with dysphonia due to movement disorders. Laryngoscopy and clinical evaluation suggests sapasmodic dysphonia (SD) in 19 patients, vocal tremor (VT) in 5 and Gilles de Ia Tourette syndrome in 1. There were described also the response to botulinum toxin A treatment in 18 patients selected to tms treatment, 14 with SD, 3 with essential VT and 1 GTS patient. There was used unilateral 2,5 U of botulinum toxin A (BOTOXR) diluted in 0,9% saline solution. In 12 aduction SD, 3 essential VT and 1 GTS patients, TA was the target muscle. In 2 patients with abduction SD, CAP was the target muscle. The improvement was significant in 11, mild in 4 and poor in 3 patients. The response to botulinum toxin A treatment was poor in both patients with abduction SD. All of 80 dysphonic patients were submitted to otorhino1aryngological, phonoaudiological and laryngeal endoscopy before LEMG. The recordings were obtained by the four channel Nihon Kohden m using percutaneously inserted concentric needle electrode in volunteers and in patients with vocal fold immobility; and monopolar needle electrode in patients with movement disorders. There were concluded: 1) The percutaneous techniques allow the correct location of the laryngea1 in patients who require this examination. The CAP approach, by digital rotation of the thyroid cartilage was found to be the most diflicult, followed by the CAL approach. TA and CT approaches gave no major problems, except with some older and obese patients. A significant complication of the TA approach via thyroid cartilage was a hematoma in one patient which partially obstructed the laryngeallumen. 2) There were descn"bed at first time in our mean the normal values for duration and amplitude of PAUM, respectively 3.8ms and 413_V for TA, 4.9ms and 585_V for CT, 4.Ims and 388_V for CAL and 4.5ms and 475_V in CAP. 3) LEMG contributed to diagnosis in ali 55 patients with vocal fold immobility. LEMG showed peripheral nerve injury in 25 patients in group 1, 12 in group 2 and 11 in group 3. LEMG was normal in 4 patients, suggesting crico-arythenoid joint fixation. In 2 patients LEMG suggests central nervous system injury and myopathy in one. 4) In the 25 patients with movement disorders LEMG was consistent with SD in 14 (normal in 5), essential VT in 3, Parkinson VT in 2 and GTS in one. Botulinum toxin treatment guided by LEMG showed good response in 15 patients. In general, the risk-benefit relation justities 1aryngeal electromyography for clinical diagnosis and treatment / Doutorado / Neurologia / Doutor em Ciências Médicas

Orientadores: Lea Rodrigues Simioni, Stephen Hyslo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:34:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DalBelo_CharistonAndre_D.pdf: 2559941 bytes, checksum: cef748cf80569cf363755443847527ff (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O veneno da serpente elapídica Micrurus dumerilii carinicauda apresenta uma ação neurotóxica caracterizada por bloqueio da resposta contrátil em preparação de ave e mamíferos in vitro (SERAFIM et al., 2002). Através de cromatografia em HPLC de coluna fase reversa o veneno foi fracionado e dentre os 22 picos obtidos foram caracterizados bioquímica e farmacologicamente somente aqueles que exibiram atividade neurotóxica do tipo bloqueadora neuromuscular. Assim, os picos que exibiram atividade neurotóxica foram a PLA2 MiDCAI correspondente ao pico 16 e duas isoformas (as subfrações F6 e F7) correspondentes aos picos 6 e 7 e que determinaram bloqueio neuromuscular em preparações de camundongo. A PLA2 MiDCAI, que possui massa molecular de 15.552 Da e um pI de 7.8 compartilha uma alta homologia com outras PLA2 neurotóxicas MICNI A (77,68%) e B (73,12%) do veneno da serpente (Naja nigricollis). Em preparação músculo biventer cevicis de pintainho MiDCAI (2.4 µM) induziu 50% bloqueio em 30 ± 5 min inibindo completamente a resposta contrátil a estímulos indiretos em 120 min de observação. Além disso, as contraturas determinadas pelo carbacol (8 mM) e KCl (20 mM) em preparação biventer cervicis de pintainho permaneceram inalteradas na vigência do bloqueio neuromuscular completo, sugerindo uma ação do tipo pré-sináptica. Na preparação nervo frênico-diafragma de camundongo MiDCAI (0.6, 1.2, 2.4 µM) induziu alteração trifásica na resposta contrátil. Além disso, o registro intracelular dos potenciais de placa terminal em miniatura (PPTM) e potenciais de placa terminal (PPT) mostrou também que a MiDCAI causou uma alteração trifásica na freqüência dos PPTM além de aumentar o conteúdo quântico do controle para 386 ± 12% aos 10 min de incubação (n=14, p<0.05). O registro extracelular do potencial de ação composto do nervo ciático de camundongo mostrou que esta neurotoxina induz um aumento na amplitude desses potenciais (30 ± 9%, 0.6 µM, p<0.05) semelhante ao induzido pela 3,4-diaminopiridina (3,4-DAP) 10 µM. Também ficou claro que o efeito facilitador induzido por esta PLA2 esteja relacionado ao bloqueio de canais de potássio como demonstrado pelo bloqueio de 31 ± 1% (2.4 µM, p<0.05) das correntes de potássio evocadas em neurônios do gânglio da raiz dorsal usando-se a técnica de patch-clamp. Já as subfrações ativas F6 e F7 possuem um peso molecular de aproximadamente 14 kDa como ficou demonstrado pela eletroforese em gel de poliacrilamida a 12,5 %. Em preparações neuromusculares de camundongo estas duas isoformas induziram bloqueio neuromuscular irreversível a estímulos elétricos indiretos. Assim, um bloqueio de 50% da resposta contrátil foi obtido em aproximadamente 18 min quando estas toxinas foram ensaiadas a 5 µg/ml promovendo bloqueio completo em aproximadamente 55 min. Sucessivas lavagens da preparação e a adição de neostigmina (6 µM) e 3,4-DAP (10 µM) foram ineficazes em reverter o bloqueio neuromuscular instalado. Também não houve alteração da resposta aos estímulos diretos nem redução da polaridade da membrana da fibra muscular quando estas toxinas foram ensaiadas na concentração de 5 mg/ml. Em conclusão, a PLA2 MiDCAI é uma nova neurotoxina pré-sináptica que induz alteração trifásica em preparações neuromusculares de camundongo promovendo uma facilitação inicial e fugaz possivelmente causada pelo bloqueio de canais de potássio no terminal nervoso motor. Já, as características bioquímicas assim como os efeitos neuromusculares desencadeados pelas subfrações F6 e F7 sugerem se tratar de duas isoformas curaremiméticas ou do tipo a-neurotoxinas, como demonstrado para outros venenos elapídicos / Abstract: We have isolated a new PLA2 (MiDCAI) and two curaremimetic isoforms (F6 and F7) from the venom of Micrurus dumerilii carinicauda. With a molecular mass of 15.552 Da, MiDCA1 shared high sequence homology with MICNI A and B from Naja nigricollis venom showing a sequential and structural homology of 77.68 and 73.12%, respectively. Pharmacological tests showed a concentration dependent effect on nerve evoked twitches in both mammal and avian preparations. On mouse phrenic-nerve diaphragm preparation MiDCAI (2.4 mM; n=6) caused triphasic changes in twitch tension. On chick preparations complete blockade of the twitches occurred after 120 min (2.4 mM; n=6, p<0.05), while contractures elicited by exogenous applied carbachol (8 mM) and KCl (20 mM) remained unaltered. Intracellular recordings of endplate potentials (EPPs) and miniature endplate potentials (MEPPs) from mouse diaphragm preparations revealed that MiDCAI increased quantal content to 386 ± 12% of control after 10 min, (n=14; p<0.05) and caused a triphasic change in the frequency of MEPPs. Extracellular recordings of mouse sciatic-nerve compound action potentials revealed that MiDCAI increased the amplitude of compound action potentials (30 ± 9%, 0.6 µM, p<0.05). Potassium currents elicited in freshly dissociated DRG neurones were significantly blocked by 31 ± 1% (p<0.05) of control by the addition of 2.4 µM into the recording chamber. In addition, isoforms F6 and F7 exhibit a molecular mass of aproximatelly14 kDa demonstrated by polyacrilamide gel electrophoresis. These isoforms (5 µg/ml) induced 50% blockade of indirect stimulation in phrenic nerve-diaphragm preparation, in approximately 18 min and complete blockade in 55 min. Nor successive washes nor neostigmine (6 mM) or 3,4-DAP (10 µM) were able to reverse the blockade. In addition, there is no depolarisation of muscle fibber when these isoforms were assayed at 5 µg/ml. In conclusion, MiDCAI is a new presynaptic PLA2 that produce triphasic alterations in mammal neuromuscular preparations and the falicitatory actions are possibly caused by blockade of an as yet unknown class of nerve-terminal potassium channels. The two isoforms F6 and F7 need further evaluation but the biochemical and pharmacological results obtained suggest certain similarity with other curariform neurotoxins or a-neurotoxins / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-08-06Bitstream added on 2014-06-13T19:40:32Z : No. of bitstreams: 1 gomes_pc_dr_rcla.pdf: 875503 bytes, checksum: 13ea84ba63273890b35fe9374e841f94 (MD5) / As aranhas do gênero Phoneutria (Aranae, Ctenidae) são comumente conhecidas como aranha armadeira ou aranha da banana, devido à posição de ataque/defesa que elas assumem contra uma presa/competidor e devido sua alta incidência nas plantações de bananas. Estas aranhas são solitárias, errantes (não constroem teias), muito agressivas e responsáveis por muitos casos graves de acidentes por envenenamento e de morte registrados. Estas aranhas são amplamente distribuídas nas regiões temperadas da América do Sul, com várias espécies já descritas. A espécie Phoneutria nigriventer é mais comum nas regiões centroeste e sudeste do Brasil. Um grande número de neurotoxinas tem sido purificado de venenos de aranhas do gênero Phoneutria. No entanto, as neurotoxinas não – protéicas de baixa massa molecular precisam ser isoladas e caracterizadas estrutural e funcionalmente. Essas toxinas são de potencial interesse na neuroquímica como ferramentas para investigações do sistema nervoso. O objetivo do presente estudo foi a caracterização estrutural e funcional da Nigriventrina, uma nova neurotoxina não-protéica de baixa massa molecular, isolada da fração hidrofílica do veneno da aranha Phoneutria nigriventer por (RPHPLC) sob gradiente de acetonitrila. A elucidação estrutural foi realizada com HRESIMS, ESI-MS, ESI-MS/MS e espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear 1D e 2D. A toxina apresentou massa molecular de 422Da (C12H14N4O13) e foi caracterizada como hidrazil-dioxopiperidina. A caracterização biológica foi realizada pela aplicação icv da Nigriventrina em cérebro de rato, seguido pelo acompanhamento da expressão da proteína Fos e dupla marcação imunoistoquímica. Todos os neurônios duplamente marcados foram associados ao receptor ionotrópico de glutamato NMDA (N-metil-D-aspartato), subtipo NMDA-NR1. A Nigriventrina apresentou afinidade... / The spiders of the genus Phoneutria (Aranae, Ctenidae) are commonly known as “armed spider” or “banana spider”, because of the attack–defense position that they assume against a prey/competitor and their high incidence in banana plantations. These spiders are solitary, wandering (no web), very aggressive, responsible for many cases of severe envenomation and recorded mortality. These spiders are widely distributed in the warm regions of South America, and several species have been described. The Phoneutria nigriventer are the most common in central and south-eastern regions of Brazil. A large number of neurotoxins have been purified from the venoms of Phoneutria spiders. However, the non-proteic low molecular mass neurotoxins must be isolated and structural and functionally characterized. These toxins have an interesting potential in neurochemistry as tools for investigations of nervous system. The objective of the present study was the structural and functional characterization of “Nigriventrine”, a novel non-proteic low molecular mass neurotoxin, isolated from the hydrophilic fraction of Phoneutria nigriventer spider venom by (RP-HPLC) under gradient of acetonitrile. The structural elucidation was carried out with HRESIMS, ESI-MS, ESI-MS/MS and Nuclear Magnetic Resonance 1D and 2D spectroscopy. The toxin presented molecular mass of 422Da (C12H14N4O13) and was characterized as hydroxyl-hydrazyl-dioxopiperidine. The biological characterization was performed by the i.c.v application of nigriventrine in rat brain, followed by the monitoring of the expression of Fos protein and doublelabeling immunohistochemistry. All doubly labeled neurons were associated to Nmethyl- D- aspartate/subtype of ionotropic glutamate receptor (NMDA-NR1). The nigriventrine presented affinity mainly to cortical regions, which are linked to perceptions and the voluntary muscles control of the animals... (Complete abstract click electronic access below)

O desenvolvimento de biossensores é um tema de pesquisa bastante promissor, uma vez que permite monitorar diversas classes de substâncias, que muitas vezes apresentam grande interesse nas mais diversas áreas da ciência. Biossensores são pequenos dispositivos que utilizam componentes biológicos como elementos de reconhecimento, ligados a um sistema dedetecção, transdução e amplificação do sinal gerado na reação com o analito-alvo. Podem ser utilizados diversos elementos, sendo os principais, atualmente, aqueles baseados em aptâmeros e nanomateriais, por sua alta especificidade e sensibilidade. Seu potencial de utilização varia desde a detecção e tratamento de doenças ou a medição de componentes nos fluidos biológicos, até o monitoramento ambiental e prevenção de contaminação e bioterrorismo. Neste projeto foi desenvolvido um biossensor eletroquímico cujo objetivo é identificar toxinas inoculadas em pacientes que sofreram acidentes com animais peçonhentos. Foram utilizados os anticorpos/imuniglobulinas comerciais e a peçonha bruta de jararaca (Bothrops) para fazer o estudo/desenvolvimento do biossensor. Neste trabalho foram apresentados os resultados da imobilização dos anticorpos (imunoglobulinas) sobre o eletrodo de trabalho, bem como sua resposta eletroquímica utilizando voltametria cíclica. As soluções utilizadas foram de NaCl 0,9% e tampão fosfato (0,1 mol.L-1) com pH=7,4 por ser bem próximo ao pH fisiológico, pois, posteriormente quer se investigar em plasma sanguíneo. Os voltamogramas cíclicos e a microscopia eletrônica de varredura mostraram a diferença do eletrodo com e sem a imobilização das imunoglobulinas, evidenciando que o biossensor é eficaz para o sistema analisado, sendo promissor aos estudos. Com o biossensor construído, foi investigada a resposta eletroquímica relativa à interação antígeno-anticorpo (veneno-soro) para analisar a interação específica entre eles, sendo o resultado positivamente o esperado. / The development of biosensors is a research topic very promising, since it allows you to monitor various classes of substances, which often exhibit great interest in several areas of science. Biosensors are small devices that use biological recognition elements and components, bound to a selfAdetecting system, transduction and amplification of the signal generated in the reaction with the target analyte it. Various elements, the main currently those based on aptamers and nanomaterials for their high specificity and sensitivity can be used. Their potential use varies from the detection and treatment of diseases or measurement of components in biological fluids to the environmental monitoring and contamination prevention and bioterrorism. In this project we developed an electrochemical biosensor whose objetico is inoculated identify toxins in patients who have suffered accidents with poisonous animals. Antibodies / commercial imuniglobulinas and the crude venom of pit viper (Bothrops) were used to study / development of the biosensor. In this work the results of immobilization of antibodies (immunoglobulins) on the working electrode and its electrochemical response using cyclic voltammetry were presented. The solutions used were 0.9% NaCl and phosphate buffer (0.1 mol L-1) of pH = 7.4 to be close to physiological pH and therefore further investigated whether in blood plasma. Cyclic voltammetry and scanning electron microscopy showed the difference of the electrode with and without immobilization of immunoglobulins, indicating that the biosensor is effective for the system analyzed, and promising to studies. With the biosensor constructed, we investigated the electrochemical response on the antigen-antibody (venom antiserum) interaction to analyze the specific interaction between them, the result being positively expected.