Made available in DSpace on 2016-12-23T14:37:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luiz Flavio Viana Silveira.pdf: 245277 bytes, checksum: 26301d89e5bb37d0ef6f45525b380723 (MD5) Previous issue date: 2008-12-18 / A cultura do mamão tem grande importância econômica para o Brasil, sendo o maior produtor mundial, com área colhida de 36.650 hectares e 24% da produção mundial, e, para o Espírito Santo, segundo maior produtor, com 39,7% do total nacional, e responsável por 74% na exportação. O ataque de pragas nessa cultura pode reduzir consideravelmente a produção e a qualidade do produto colhido, sendo que, uma das principais pragas é o ácaro rajado Tetranychus urticae Koch (1836). O uso do controle químico de forma descontrolada leva a sérias conseqüências como a presença de resíduos em frutos acima do permitido e surgimento de populações resistentes. Faz-se necessário o uso de alternativas de manejo do ácaro, como o controle biológico, que vem sendo utilizado como ferramenta no manejo de diversas pragas de importância agrícola no mundo. Por isso, o objetivo deste trabalho foi selecionar isolados de Bacillus thuringiensis Berliner (1911) (Bt) que sejam patogênicos para o ácaro rajado na cultura do mamão. Foram avaliados 120 isolados de B. thuringiensis Berliner (1911) quanto à patogenicidade em T. urticae Koch (1836). Cada isolado, contendo 3 x 108 esporos viáveis/mL de água destilada autoclavada, constituiu em um tratamento com 8 repetições, em arenas de folhas de feijão-de-porco Canavalia ensiformes com 4,5 cm de diâmetro. Cada repetição continha 10 fêmeas adultas do ácaro e após 5 dias da transferência, a mortalidade foi quantificada e posteriormente corrigida pela fórmula de Abbott (1925). Os resultados foram submetidos ao teste de Scott Knott, ao nível de 5%. Os testes em condições de laboratório mostraram que há ação tóxica de Bacillus thuringiensis em Tetranychus urticae.

Orientadores: Marcos Hikari Toyama, Kléber Luiz de Araújo e Souza / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T12:34:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moure_MarianaCristinaRodriguez_M.pdf: 1080274 bytes, checksum: a6e3e078955c429c6eb371ccab0b187e (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A anémona do mar Bunodosoma caissarum possui mais de 40 proteínas diferentes, como mostrado através da eletroforese 2-D, o que pode levar a uma variedade de efeitos biológicos. Foram investigados também alguns parâmetros farmacológicos, onde se pode verificar a capacidade desta toxina em interagir com modelos de homeostase sanguínea, no caso em particular das agregações plaquetárias, assim como sua capacidade de indução à inflamação, através do edema de pata de rato, onde se observou um aumento de até 400% de modo proporcional a quantidade de material utilizada, sendo o máximo de 12ug/ml. Nos ensaios antibacterianos foi possível observar que o extrato de B caissarum apresentou diminuição de aproximadamente 97% da bactéria Xanihomonas axonopodis. O efeito toxicológico da Bunodosoma caissarum foi estudado através da utilização duas linhagens celulares pancreáticas tumorais RINm5F e RINm5F-Cat (esta última superexpressando a enzima catalase), onde após o período de exposição ao veneno (até 72 h) foi observado um aumento da morte na células RINm5F de modo dose-tempo depentende de até 60%, enquanto que as células RINm5F- Cat não apresentaram diminuição de sua viabilidade celular em nenhuma dose e tempo utilizada, mostrando que a B caissarum poderia causar a morte celular através do aumento do stress oxidativo. A determinação de espécies reativas de oxigênio no meio intracelular foi medido através da fluorescência do DCFH-DA, formados através da incubação com o extrato de B caissarum, mostrando um aumento na produção de espécies reativas de oxigênio de mais de 100% quando comparadas com as células controle. A análise das principais enzimas antioxidantes mostrou que o extrato de B caissarum causou um aumento da atividade da enzima Cu/ZnSOD, tanto para as células RINm5F controle como para as com superexpressão da enzima catalase (RINm5F. Cat), enquanto que, a atividade da enzima glutationa peroxidase não sofreu nenhuma diferença nas células RINm5F controle ou nas RINm5F.Cat. e a enzima catalase não aumentou na células RINm5F e se manteve alta nas células RINm5F.Cat. Sendo assim, Bc provocou um aumento das espécies reativas de oxigenio, sendo principalmente de oxigênio superóxido. Resumindo, este trabalho visa contribuir de forma modesta ao entendimento da ação de toxinas de anémonas do mar mostrando que a Bunodosoma caissarum possui características antibacteriana, cítotóxica, inflamatório e trombolíticos que podem ser de grande xi interesse biológico e farmacológico, e o possível mecanismo de citotoxicidade B. caissarum em células de mamíferos, que inclui aumento do estresse oxidativo com excessiva produção de peróxido de hidrogênio, pelo menos no caso das células produtoras de insulina / Abstract: Acording to our studies, we could notice that the sea anemone, Bunodosoma caissarum have more than 40 different protein, as showed through the electrophoresis 2-D, what may lead to a variety of biological effects. Also was investigated, some pharmacological parameters where we could confirm the ability of this toxin on interacting with models of blood homeostasis. In particular case of the platelet aggregation, as well as its ability to induce inflammation, trough the edema in rat paw, where we could observe an increased response proportional to the amount of used material. In the antibacterian tests it was possible to observe that the Be extracts presents a decrease in the numbers of severals bacterias in a dose dependent way. The toxicological effect of the Bunodosoma caissarum was studied through the use of two pancreatic tumor cell lines RINm5F and RINm5F-Cat (the last one overexpressing the enzyme catalase), where after the period of exposure to the poison (till 72h), was observed an increase in RINmSF cell death, much greater than when compared with cells RINm5F-Cat, in every doses and administrated time, showing that the Be could cause cell death through the oxidative stress increase. The DCFH-DA test measured the production of reactive oxygen species intracellularly formed by incubation with the Be extract, showing an increase in the production of reactive oxygen species of more than 100% when compared with control cells. The analysis of the main antioxidant enzymes showed that the Be extract caused an increase in enzyme Cu/ZnSOD activities, both cells Rinm5F control and for the overexpression of catalase (RINm5F. Cat), while the glutathione peroxidase did not suffered any difference in RINm5F cell control or in the RINm5F.Cat. and the catalase enzyme did not increase in the RINm5F cells and remained high in cells RINm5F.Cat. So, we could believe that Be caused an increase in the reactive oxygen species, being mainly the oxygen superoxide. Abstracting, this paper aims to contribute modestly to the understanding in molecular level of the sea anemone toxin action, showing that the Bunodosoma caissarum have antibacterial, cytotoxic, inflammatory and thrombolytic characteristics that can be of great biological and pharmacological interest, and the possible mechanism of cytotoxicity of the Bunodosoma caissarum in mammals cell, certainly includes increased oxidative stress with excessive production of hydrogen peroxide, at least in the case of insulin-producing cells / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:38:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:04:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 06006.pdf: 3042340 bytes, checksum: 62a6ebd206107cfeefee505a16da38f3 (MD5) / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:44:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:07:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 06882.pdf: 5110355 bytes, checksum: 668c71c778c1cbf8aaae51261934b794 (MD5) / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Submitted by Marco Antonio Oliveira da Silva (maosilva@ipen.br) on 2016-08-26T11:30:14Z No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2016-08-26T11:30:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Diversos estudos de serpentes têm mostrado que algumas substâncias componentes de seus venenos possuem eficiência na atividade antitumoral nos ensaios realizados em laboratório em células in vitro e in vivo. O veneno da cascavel Crotalus vegrandis possuem atividades neurotoxica, miotoxica e hemorrágica. A crotoxina simile é um importante componente desse veneno sendo formada por uma proteína que possui uma unidade ácida (Crotapotina) ligada a uma subunidade básica (PLA2). Devido ao fato de existirem poucos estudos relativos ao veneno de Crotalus vegrandis, torna-se necessário o isolamento e a caracterização de suas biomoléculas e uma maior investigação do seu potencial e sua eficácia como agente terapêutico contra células tumorais. No presente trabalho, foi realizado o isolamento e a caracterização da crotoxina simile de Crotalus vegrandis, bem como seu efeito citotóxico em células L929 e B16F10. Realizou-se o cultivo dessas células em placas com 96 poços, para, então, serem colocadas em contato direto com diferentes frações do veneno purificado de Crotalus vegrandis por um tempo total de 48 horas. Para efeitos de comparação realizou-se o mesmo ensaio com frações do veneno purificado da cascavel brasileira Crotalus durissus terrificus. Para a avaliação da viabilidade celular o tratamento com as frações do veneno purificado de Crotalus vegrandis e Crotalus durissus terrificus, realizou-se os ensaios com MTT. Os resultados mostraram uma atividade de grande toxicidade para ambos os venenos em células tumorais B16F10 e pouca toxicidade para as células normais L929. Ainda nos ensaios comparativos com os dois venenos, verificou-se que, para uma dada concentração, as frações do veneno de Crotalus vegrandis possuem uma maior eficiência que qualquer concentração do veneno de Crotalus durissus terrificus, havendo uma maior especificidade para as células B16F10. A crotoxina símile isolada do veneno de Crotalus vegrandis apresentou atividade citotóxica mais preponderante na linhagem celular tumoral B16F10, após 48 horas concentrações de 250 e 125 ug/mL. / Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Candida dubliniensis é uma espécie descrita como fenotipicamente semelhante a Candida albicans. Desde sua descrição, em 1995, em Dublin, Irlanda, por Sullivan et al, inúmeros relatos sobre esta levedura são encontrados com o objetivo de se conhecer a origem desta espécie, bem como distinguir as semelhanças e diferenças que existem entre elas. Alguns autores têm observado que esta levedura apresenta resistência a alguns antifúngicos, mais utilizados na prática médica, principalmente sob o ponto de vista imunológico, caso dos portadores de HIV. A gênese do processo de infecção se mostra pouco conhecida. A capacidade de adesão a superfície celular e a produção de exoenzimas são fatores determinantes para o desencadeamento da infecção. A susceptibilidade a toxinas Killer necessita ser estudada, pois permite determinar um significante número de tipos sensíveis de cepas de leveduras. Frente ao exposto, buscamos avaliar o comportamento desta espécie por meio da pesquisa de capacidade de adesão, produção de proteinase e fosfolipase, susceptibilidade a toxinas Killer e resistência a antifúngicos. O ensaio de adesão foi fortemente aderente para a amostra padrão ATCC 777, e aderente para os demais isolados. A atividade enzimática para produção de proteinase mostrou-se se fortemente positiva para a amostra padrão ATCC 777, amostra ATCC 778, CD 07 e CD 14 de C dubliniensis. Entre os isolados presuntivos de C dubliniensis 1 (038), positivo e nos demais 013, 058, 096 e 107, não se observou atividade enzimática. Para a produção de fosfolipase não houve um comportamento distinto entre as amostras de C dubliniensis e os isolados presuntivos. Nenhuma amostra deixou de produzir esta enzima. Os testes de sensibilidade das amostras frente às cepas padrão produtoras de toxinas Killer mostraram dois biótipos diferentes. Os mais freqüentes foram 888 e 688 do total dos 9 isolados estudados. O isolado biótipo 688 (ATCC- 777) de C dubliniensis foi sensível a toxina K2. As demais amostras de C dubliniensis, bem como os isolados presuntivos apesar de serem provenientes de indivíduos HIV+ foram resistentes a K2 e à todas as demais toxinas. Em relação à pesquisa de resistência a antifúngicos, as amostras e isolados presuntivos de C. dubliniensis utilizando se o E-test, foram sensíveis a família dos azóis com valores de CIM de 0.002 1.0 mg/ml e para Anfotericina B os valores de CMI estavam entre 0.002- 0.032. As condições desse estudo permitimo-nos comentar que excetuando a amostra padrão ATCC 777 que teve comportamento distinto em relação às demais amostras, identificadas por genotipagem, como C. dubliniensis e isolados presuntivos, todas apresentaram um comportamento semelhante entre si. Estudos com um maior número de amostras de C. dubliniensis e utilizando-se esses testes ainda são necessários para elucidar se realmente existe um comportamento fenotípico diferencial dessa levedura em relação a C. albicans. / Candida dubliniensis is a newly described specie which is closely related phylogenetically to Candida albicans. It was first identified as a new specie by Sullivan et al., in Dublin, Ireland, 1995.Numerous researches are attempting to identify more detailed characteristics of C. dubliniensis and similitudes and differences between the two related species.The resistence of C. dubliniensis to the usual drugs employed to treat candidosis, particularly in human immunodeficiency virus (HIV) infected individuals has been emphasizely described. The susceptibility to killer toxins may also contribute to explain some aspects of the resistence process in Candidal infection. Other characteristics such as adhesion capability and exoenzymes activity have been studied in comparision with this newer specie.The aim of this study was to evaluate adhesion capability, exoenzymes activity (proteinase and phospholipase), susceptibility to Killer toxins and sensibility to antifungal agents (azoles and amphotericin B) through E-test of 9 Candida dubliniensis isolates from HIV+ individuals.The adhesion test was strongly positive for the strain ATCC 777 and positive for the other strains. Proteinase activity was strongly posive for the strains ATCC 777, ATCC 778, CD 07, and CD 14, positive for the strain 038 and negative for the other. Phospholipase activity revealed strongly positive results for the strains ATCC 777, CD14, 038, 107. The strains ATCC 778, CD 07, 013, 058, and 096 had positive activity and activity was no absent. The Susceptibility to killer toxin showed to different biotypes: 888 and 688. Only the ATCC 777 strain was susceptible to K2 toxin. No strains presented resistance to azoles or amphotericin-B. The results showed MICs ranged between 0.002 1.0 mg/ml e 0.002- 0.032 respectively.

Microcystis são cianobactérias que apresentam formações de florações e produção de microcistina, uma hepatotoxina que causa envenenamentos e promove tumores hepáticos. Os objetivos deste trabalho foram estudar o efeito combinado da radiação gama com outros agentes físicos em células de Microcystis panniformis e investigar a atenuação da microcistina através da ação de feixes de nêutrons e elétrons e radiação gama. Observou-se que os tratamentos combinados aumentaram a inviabilidade celular e que houve atenuação da microcistina após a sua exposição aos três tipos de radiações ionizantes. Com a combinação de agentes físicos é possível reduzir as doses necessárias para o controle populacional de Microcystis panniformis e a exposição à feixes de elétrons é a radiação indicada para maior atenuação da microcistina. / Microcystis are cyanobacteria exhibiting blooms formation and production of microcystin, a hepathotoxin responsible for poisoning and consequent development of hepathic tumors. The goals of this work are the study of the combined effect between gamma radiation with other exogenous physical agents in cells of Microcystis panniformis, as well to investigate the attenuation of microcystin by neutron and electron beams and gamma radiation. It was found out that combined treatments, as radiation with another physical agent, caused lowering of the cellular viability and that had attenuation of microcystin after your exposition at three kind of ionizing radiation. The results showed that with the association of physical agents it is possible to reduce the doses needed for the population control of Microcystis panniformis and that exposition of electron beams have proved to be the most indicated radiation type for attenuation of microcystin.

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:48:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Loreno_Egidio_Taffarel.pdf: 1067313 bytes, checksum: 2fc028c7bc403d425a6d20d875f64557 (MD5) Previous issue date: 2011-12-08 / Three experiments were conducted with Tifton 85 grass. The first objective was to evaluate the structural characteristics and bromatological composition of forage under effect of different doses of nitrogen (0, 25, 50, 75 and 100 kg N ha-1 in each cut) and two ages of regrowth (28 and 35 days). The experimental design was a randomized block design with 5x2 factorial arrangement and four replications, and each cut harvest was analyzed independently. It was observed a greater length of stem, leaf size and rate of elongation and the increase in crude protein and lower content fiber in acid detergent and lignin with increasing dose of nitrogen. The greater efficiency of N use, considering the four cuts occurred in the 100 kg N ha-1 at the age of 35 days of regrowth (13.79 kg DM kg-1 of N). O N promoted higher content of crude protein (CP) at the age of 28 days, and happened the highest concentration in the fourth cut (208.2 g kg-1 DM) and lowest in the second cut (140.12 g kg-1 DM); there were no differences between ages in the concentration of mineral matter and acid detergent fiber (ADF). The variation of rainfall exceeding 200 mm between December 2010 and March 2011, influenced the production of MS and, consequently, the total output of nutrients. The second study aimed at assessing the effects on the bromatological composition of the hay in the steps of cut, baling and 30 days after stored under the five levels of nitrogen (N). The experimental design was randomized blocks in factorial scheme 3x5 (3 steps haying and 5 doses of N), with two cuts harvested for each age of regrowth (28 and 35 days) and for each age was carried out two types of drying hay: dried in field under the sun and in shed, in the shade. Analyses were performed separately for each cut, age and form of drying. It was observed increase in acid detergent indigestible protein (ADIP) after 30 days of storage, the levels of acid detergent fiber increased between 6 and 35% after storage, and the largest increases occurred in the hay dried in the shade; the crude protein (CP) varied according to each cut, but increased as a function of N levels. In absolute terms, there was a greater difference in CP content (less than 31 g kg-1 DM) and neutral detergent fiber (+58.4 g kg-1 DM) between the cut steps and 30 days storage in the dried hay shade. This suggests that is important for better quality hay, a quick drying process for the production of hay. The third study aimed to estimate the curves of dehydration, the occurrence of fungi and mycotoxins in Tifton 85 hay dried in the field under the sun and shade (in two cuts and regrowth ages of 28 and 35 days for each form of dehydration) . The experimental design was 5x4 to drying in the sun 5x12 and for drying in the shed, four sampling times (0, 8, 23 and 32 hours) for drying in the sun and twelve sampling times (0, 3, 18, 27, 42, 51, 66, 75, 90, 99, 114 and 123 hours) for drying in shed (in shade), both with five N rates and four replications, with turn over and scatter made by hand daily. For identification of fungi, we used the 5x3 randomized experimental design, five doses of N and three steps of haymaking (cutting, baling and storage of 30 days), with four replications for each age of regrowth and drying forms.Samples were seeded with forage article size of 5 mm on PDA culture medium and after growth were identified with the help of specific identification keys and with the aid of microscopy. To verify the presence of mycotoxins were collected 20 composite samples (each composite sample were from the four replicates of each dose of nitrogen) hay stored for 30 days, with 10 coming from hay dried in the sun and 10 from hay dried in shed. To produce hay with sun-dried fodder was necessary 32 hours of dehydration, water loss rates were greater than 6.10 g g-1 h-1 DM in the first 8 hours after cutting and average loss of water approached 2.0 g g-1 h-1 MS. For dehydrated fodder in the shed, it took 123 hours, with a rate of dehydration below 0.5 g g-1 h-1 for MS due to environmental conditions. There was a predominance of three genera of fungi: Fusarium, Penicillium and Aspergillus. The largest population was Fusarium, followed by Penicillium in the steps of baling and storage. The mycotoxin fumonisin were found in higher concentrations and there was no difference (p> 0.05) in the concentration of fumonisin in the hay dried in the sun (90 μg kg-1) and in the shed (60 μg kg-1). Although there is a low risk to animal health, occurred a higher production of aflatoxins (5,38 μg kg-1) and zearalenone (79,89 μg kg-1) in hay dried in the sun, indicating that the diurnal x nocturnal temperature variation with still high moisture of the material in hay favored the production of mycotoxins and that we must produce hay in a favorable environment, how the rapid dehydration and turning and spreading after harvest to inhibit the production of mycotoxins above permissible levels / Três experimentos foram realizados com capim Tifton 85. O primeiro visou avaliar as características estruturais e a composição bromatológica da forrageira sob efeito de cinco doses de nitrogênio (N) (0, 25, 50, 75 e 100 kg ha-1 de N por corte) e duas idades de rebrota (28 e 35 dias). O delineamento foi em blocos casualizados, com esquema fatorial 5x2 e quatro repetições. As doses de N promoveram maior comprimento do colmo, tamanho das folhas e taxa de alongamento. Houve incremento no teor de proteína bruta, redução no teor de fibra em detergente ácido e lignina com o aumento da dose de nitrogênio. A maior eficiência de utilização de N, considerando os quatro cortes, ocorreu na dose de 100 kg N ha-1 na idade de rebrota de 35 dias (13,79 kg de MS kg-1 de N). O N promoveu maior teor de proteína bruta (PB) na idade de 28 dias, sendo que a maior concentração ocorreu no quarto corte (208,2 g kg- 1 MS) e a menor no segundo corte (140,12 g kg-1 MS). Não houve diferenças entre idades na concentração de matéria mineral e de fibra em detergente ácido (FDA). A variação de precipitação, superior a 200 mm entre dezembro/2010 e março/2011, influenciou a produção de MS, e por consequência, a quantidade total de PB ha-1. O segundo estudo teve por objetivo a composição bromatológica do feno nas etapas de corte, enfardamento e 30 dias após armazenado, sob as cinco doses de nitrogênio. O delineamento experimental foi em blocos casualizados em esquema fatorial 3x5 (3 etapas de fenação e 5 doses de N), com dois cortes para cada idade de rebrota (28 e 35 dias) e para cada idade foi realizada duas formas de secagem do feno: no campo ao sol e em galpão, na sombra. As análises foram realizadas separadamente, para cada corte, idade e forma de secagem. Verificou-se aumento no teor de proteína bruta indigestível em detergente ácido (PIDA) após 30 dias de armazenamento, os teores de fibra em detergente ácido aumentaram entre 6 e 35% após o armazenamento, sendo que os aumentos maiores ocorreram no feno secado à sombra. Os teores de proteína bruta (PB) variaram de acordo com cada corte, mas aumentaram em função das doses de N. Em valores absolutos, houve maior diferença nos teores de PB (menos 31 g kg-1 MS) e fibra em detergente neutro (+ 58,4 g kg-1 MS) entre o corte e 30 dias de armazenamento no feno secado a sombra. Isto sugere a importância para a produção de feno de melhor qualidade, de um rápido processo de desidratação para produção de feno. O terceiro estudo objetivou estimar as curvas de desidratação, a ocorrência de fungos e de micotoxinas em feno de capim Tifton 85 seco a campo, sob o sol, e à sombra (em dois cortes e idades de rebrota de 28 e 35 dias para cada forma de desidratação). O delineamento experimental foi em parcelas subdivididas 5x4, sendo 5 doses de N (0, 25, 50, 75 e 100 kg ha) e quatro tempos de coleta (0, 8, 23 e 32 horas) para secagem ao sol, e 5x12, sendo 5 doses de N (0, 25, 50, 75 e 100 kg ha) e doze tempos de coleta (0, 3, 18, 27, 42, 51, 66, 75, 90, 99, 114 e 123 horas) para secagem em galpão, com quatro repetições. Realizou-se revolvimento de forma manual, diariamente. Para identificação dos fungos, foi utilizado o esquema de parcelas subdivididas 5x3, sendo cinco doses de N e três etapas de fenação (corte, enfardamento e 30 dias de armazenamento), com quatro repetições para cada idade de rebrota e formas de secagem. Foram semeadas amostras com partículas de forragem com tamanho de 5 mm, em meio de cultivo BDA e após o crescimento foram identificados com auxílio de chaves de identificação específicas e com auxílio de microscopia. Para verificar a presença de micotoxinas foram coletadas 20 amostras compostas (cada amostra composta foi oriunda das quatro repetições de cada dose de nitrogênio) dos fenos armazenados por 30 dias, sendo 10 oriundas de fenos secos ao sol e 10 de fenos secados em galpão. Para produzir feno com a forragem seca ao sol foram necessárias 32 horas de desidratação, com taxas de perda de água superior a 6,10 g g-1 de MS h-1 nas primeiras 8 horas após o corte e média de perda de água que se aproximou de 2,0 g g-1 de MS h-1. Para a forragem desidratada em galpão, foram necessárias 123 horas, com taxa de desidratação inferior a 0,5 g g-1 de MS h-1 devido às condições ambientais. Houve predominância de três gêneros de fungos: Fusarium, Penicillium e Aspergillus. A maior população foi de Fusarium, seguido por Penicillium nas etapas de enfardamento e armazenamento. A micotoxina fumonisina foi encontrada em maior concentração e não houve diferença (p>0,05) na concentração de fumonisina no feno desidratado sob o sol (90 μg kg-1) e em galpão (60 μg kg-1). Embora sem riscos para a saúde animal, houve maior produção de aflatoxinas (5,38 μg kg-1) e zearalenona (79,89 μg kg-1) nos fenos desidratados sob o sol, indicando que a variação de temperatura diurna x noturna com umidade ainda elevada do material em fenação, favoreceram a produção de micotoxinas e que é necessário produzir feno em ambiente favorável, com desidratação rápida por revolvimento após o corte, para inibir a produção de micotoxinas acima dos níveis tolerados

O Objetivo deste trabalho foi desenvolver uma estratégia vacinal de utilizando linhagens de salmonellas capazes de expressar uma forma atoxica da principal toxina associada a linhagens de EHEC que causa a síndrome hemolítica urémica. Estas linhagens de salmonellas diferem na expressão de flagelina, a principal unidade estrutural do flagelo. As linhagens foram capazes de expressar uma forma atóxica da proteína \"Shiga-like\" no interior da bactéria e no espaço extracelular, apresentaram alta estabilidade plasmidial in vitro e in vivo e foram capazes de aumentar o grau de colonização intestinal. Além disso, avaliamos o potencial imunogênico de estas linhagens e encontramos que a imunização com três doses de salmonelas foram capazes de gerar anticorpos sistêmicos (IgG) e locais (IgA) com propriedades neutralizantes in vitro e proteção parcial em condições in vivo frente a ensaios de desafios com a toxina nativa. Não fomos capazes de encontrar diferencias significativas em lãs propriedades imunogênicas entre as linhagens que diferem na expressão de flagelina. Nossos resultados indicam que formas atóxicas da proteína Stx2 expressadas em vetores biológicos podem ser uma alternativa de estratégia vacinal para controlar a SHU. / The goal of this study was to develop a vaccine strategy of using Salmonella strains capable of expressing a nontoxic form of the main toxin associated with EHEC strains that cause hemolytic uremic syndrome. These strains of Salmonella differ in flagellin expression, the main structural unit of the flagellum. The strains were capable of expressing a nontoxic form of the protein \"Shiga-like\" within the bacteria and the extracellular space, showed high plasmid stability in vitro and in vivo and were able to increase the degree of intestinal colonization. Furthermore, we evaluated the immunogenic potential of these strains and found that immunization with three doses of salmonella were able to generate (IgA) humoral and (IgG) systemic antibodies with neutralizing properties in vitro and partial protection in vivo conditions facing trials challenges with the native toxin. We were unable to find significant differences in the immunogenic properties between these strains that differ in flagellin expression. Our results indicate that nontoxic forms of Stx2 expressed in biological vectors can be an alternative vaccine strategy to control the SHU.

O gene de RNAr 16S tem sido amplamente utilizado na inferência filogenética de organismos procariotos, entretanto, sequências desse gene de cianobactérias isoladas de manguezais brasileiros são inexistentes. Neste estudo, 42 sequências inéditas do gene de RNAr 16S de cianobactérias isoladas de manguezais brasileiros foram geradas. Na análise BLAST as sequências apresentaram similaridades variando de 91 a 99% com outras sequências conhecidas de cianobactérias depositadas no GenBank. Na análise filogenética do gene de RNAr 16S várias sequências do gênero Chlorogloea ficaram agrupadas com sequências do gênero Synechococcus e algumas sequências de Nostoc ficaram mais próximas de sequências de Nodularia. As sequências de Leptolyngbya agruparam-se separadas das típicas de Leptolyngbya. Esses resultados corroboram com outros estudos, os quais mostraram que o filo Cyanobacteria necessita de revisão taxonômica. Na avaliação do potencial de produção de substâncias bioativas de 44 isolados de manguezais utilizando a técnica de PCR e dois conjuntos de oligonucleotídeos iniciadores degenerados específicos para sequências gênicas codificantes de peptídeo sintetase não ribossômica (NRPS) e policetídeo sintase (PKS) modular, 10 linhagens apresentaram resultado positivo para presença de NRPS e todos os isolados apresentaram resultado positivo para PKS. Na tentativa de atribuir função a esses genes e posteriormente explorar as potencialidades das linhagens, um produto da PCR de NRPS e 19 de PKS foram sequenciados, as sequências obtidas foram traduzidas para aminoácidos e utilizadas na construção de árvores filogenéticas. A análise filogenética da sequência de aminoácido do domínio de adenilação da NRPS indicou uma possível síntese de sideróforo pela linhagem Phormidium CENA135. Extratos extracelulares dessa linhagem analisados por Q-TOF/MS e RMN indicaram a produção de um sideróforo anfifílico com massa molecular e estrutura similar ao sideróforo synechobactina A. As sequências de aminoácidos do domínio da cetossintase de PKS das 19 linhagens mostraram relações filogenéticas com várias PKSs de linhagens conhecidas por produzirem substâncias, tais como sideróforo, algicida, microginina, oscilaginina B, hectoclorina e scytonemina. No teste da atividade antimicrobiana contra micro-organismos patogênicos dos extratos intra e extracelulares das 44 linhagens, 17 delas inibiram o crescimento de vários dos micro-organismos testados. Os extratos ativos foram analisados por Q-TOF/MS e 34 substâncias putativas conhecidas foram identificadas, tais como fungicidas, inibidores de proteases, antimaláricos e outras de funções desconhecidas. O teste imunológico ELISA específico para detecção da hepatotoxina microcistina (MC) apresentou resultado positivo para 16 das 23 linhagens testadas. Fragmentos de sequências do gene mcyA envolvido na síntese de MC foram amplificados por PCR em cinco linhagens (Synechococcus CENA136, Phormidium CENA135, Chlorogloea CENA142, Chlorogloea CENA146 e Nostoc CENA160), inclusive em dois gêneros sem registro de produção dessa toxina (Synechococcus e Chlorogloea). O teste ELISA específico para detecção da neurotoxina saxitoxina (SXT) apresentou resultado positivo para três linhagens. Entretanto, a análise em Q-TOF/MS e FT-ICR/MS de 15 linhagens, inclusive das que apresentaram resultado positivo no ELISA, não confirmaram a produção de saxitoxinas. / The 16S rRNA gene has been widely used in phylogenetic inference of prokaryotic organisms, however, sequences of this gene of cyanobacteria isolated from Brazilian mangroves are absent. In this study, 42 newly sequences of 16S rRNA gene of cyanobacteria isolated from Brazilian mangroves were generated. BLAST analysis of the sequences showed similarities ranging from 91-99% with other known cyanobacterial sequences deposited in GenBank. Phylogenetic analysis of several 16S rRNA sequences from the genus Chlorogloea were clustered with sequences from the genus Synechococcus and some sequences of Nostoc were closer to sequences of Nodularia. The Leptolyngbya sequences clustered separated from those of typical Leptolyngbya. These results corroborate with other studies which showed that the phylum Cyanobacteria need taxonomic revision. In assessing the potential of bioactive compounds production of 44 mangrove isolates using PCR technique and two sets of degenerated primers specific for gene sequences encoding non-ribosomal peptide synthetase (NRPS) and modular polyketide synthase (PKS), 10 strains showed positive results for the presence of NRPS and all isolates were positive for PKS. In an attempt to assign function to these genes and further explore the potential of the strains, a PCR product of NRPS and 19 PKS were sequenced and the sequences obtained were translated into amino acids and used to construct phylogenetic trees. Phylogenetic analysis of amino acid sequence of the NRPS adenylation domain indicated a possible synthesis of siderophore by the Phormidium strain CENA135. Extracellular extracts of this strain analyzed by Q-TOF/MS and NMR indicated the production of an amphiphilic siderophore with molecular mass and structure similar to the siderophore synechobactin A. The amino acid sequences of the PKS ketosynthase domain of 19 strains showed phylogenetic relationships with several PKSs of strains known to produce compounds such as siderophore, algicide, microginin, oscillaginin B, hectochlorin and scytonemin. In the antimicrobial activity test against pathogenic microorganisms of the intra- and extracellular extracts of 44 strains, 17 of them inhibited the growth of various microorganisms tested. The active extracts were analyzed by Q-TOF/MS and 34 putative known substances were identified such as fungicides, protease inhibitors, antimalarials, and others of unknown function. The immunological test ELISA specific for detection of the hepatotoxin microcystin (MC) was positive for 16 of the 23 strains tested. Sequence fragments mcyA gene involved in the synthesis of MC were amplified by PCR in five strains (Synechococcus CENA136, Phormidium CENA135, Chlorogloea CENA142, Chlorogloea CENA146 and Nostoc CENA160), including two genera with no record of production of this toxin (Synechococcus and Chlorogloea). Specific ELISA test for detection of the neurotoxin saxitoxin (SXT) showed positive results for three strains. However, analysis by Q-TOF/MS and FT-ICR/MS of 15 strains, including those that showed positive ELISA results, did not confirm the saxitoxin production.