Orientador : Luiz Sergio Leonardi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:09:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_RenatoFerreirada_M.pdf: 3597665 bytes, checksum: dd51de996eeacd288a0203775e4174b8 (MD5) Previous issue date: 1991 / Resumo: Esle esludo leve como objetivo conlribuir com o lransplanle hepático parcial, utiliizando um fígado para a oblenção dois enxertos e conseqüenl imenle aumentando a ofetla de enxertos para o receplor pediálrico....Observação: O resumo, na integra, podera ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: This research has lhe objeclive lo conlribule lowards lhe lechnique of a liver for lwo grals. increasing lhe offer of grafls to pedialric receplors...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Mestre em Medicina

Orientadores: Luiz Tadeu Moraes Figueiredo, Fernando Ferreira Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-18T14:51:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_SandraCeciliaBotelho_D.pdf: 3737424 bytes, checksum: de5dc95046ff93bc94f402e725decac5 (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo: As complicações devidas à infecção por citomegalovirus representam um dos maiores problemas infecciosos observados em pacientes submetidos a transplantes em geral. Com o objetivo de avaliar a incidência e o impacto clínico da infecção por CMV em uma população de transplantados renais no Brasil foram estudados prospectivamente 37 pacientes submetidos a transplante renal no Hospital das Clínicas da UNICAMP, no período de Outubro de 1990 a Setembro de 1992. A identificação da infecção pelo CMV foi levada a efeito pela detecção direta de partículas virais na urina através da reação em cadeia da polimerase (PCR) e por reações soro lógicas - ELISA e imunofluorescência indireta. A PCR foi realizada com 3 pares de iniciadores ("primers"). O material amplificado foi fixado em filtros de nylon como "dot-blot" e as partículas virais foram identificadas por hibridização com oligonucleotídeos específicos para a região amplificada (sonda), marcados com 32P por meio da T4 polinucleotídeo quinase. O material para análise foi obtido antes e em intervalos mensais após o transplante. Os resultados globais, agrupando sorologia e PCR mostraram 32 pacientes com evidências de infecção ativa pelo CMV entre 37 estudados (86,48%). Em 6 pacientes, só a PCR foi capaz de identificar infecção ativa. O diagnóstico foi mais precoce pela PCR do que pelas técnicas sorológicas. 10 pacientes já apresentavam virúria antes do transplante. A maior incidência de infecção ocorreu nos primeiros 4 meses que se seguiram ao transplante. Dos 32 pacientes com infecção ativa pelo CMV, 16 (50%) apresentaram manifestações clinicas sugestivas de serem secundária à replicação viral (doença por CMV). Os 5 pacientes que não apresentaram, por nenhum dos testes, evidências de infecção ativa pelo CMV, não tiveram problemas clínicos relevantes no seguimento e mantiveram boa função renal. Em seu conjunto, nossos resultados sugerem que a infecção pelo CMV é uma complicação frequente em transplantados renais no Brasil e que poderia estar associada à maior frequência de complicações clínicas nesses pacientes. Adicionalmente, comprovou-se que a PCR é um método eficaz de detecção precoce dessa infecção. / Abstract: Cytomegalovirus (C.M.V.) is the single most important infections agent affecting recipients of organ transplant. To evaluate the incidence and the clinical impact of cytomegalovirus infection on renal transplant in Brazil, 37 patients who underwent renal allograft transplants were periodically screened for the presence of C.M.V. virus DNA in urine by lIsing polymerase chain reaction (P.C.R.) and for the presence of IgM and IgG cytomcgalovirlls antibodies (ELlSA and I.F.I.). The P.C.R. amplificd prodllcts werc detected by gel electrophoresis and by dot blot hybridization with oligonucleotide probes. 32 out 37 patients (86.48%) were found to be positive by at least one of the three methods. In 6 patients, P.C.R. was the only test to detect the C.M.V. infection. 10 patients had a positive result by P.C.R.Qefore the transplantation. The diagnosis was made earlier by P.C.R. than by serologic tests. Active infection occured more frequently in the first 4 months after transplantation. 16 out 32 patients (50.00%) with active infection by C.M.V. presented clinical manifestations of C.M. V. disease. 5 patients without evidences of active infection by the 3 tests have only minor clinical complications during followup. Our results sugest that C.M.V. infection is a frequent problem in renal transplant patients in Brazil, with significant clinical complications. Moreover, we confirmed that P.C.R. is a very sensitive procedure to early detection of C.M.V. infection. / Doutorado / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Jose Francisco Figueiredo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-19T13:03:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cunha_FernandaLopesda_M.pdf: 5508624 bytes, checksum: 51e34e243f6c684e46b5555f4eaea375 (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: Neste trabalho, avaliamos a distribuição das soluções conservadoras utilizando a técnica de coloração de Hanssen modificada em nosso Laboratório, no rim de rato perfundido por uma pressão correspondente a 120 cm de água, aproximadamente 80 mmHg. Esta técnica está baseada em dados que demonstram que o ferrocianeto de sódio pode ser filtrado e se distribui de forma uniforme no parênquima renal pelas vias tubular, venosa e intersticial. A visualização deste ferrocianeto de sódio injetado está baseada na sua propriedade química de que em meio ácido se transforma em ferrocianeto férrico (azul da Prússia) Neste protocolo utilizamos as seguintes soluções para infusão: Krebs-Henseleit modificada (KH - Controle), Collins (Co), Euro-Collins (EC) e Universidade de Wisconsin (UW), analisando a sua distribuição após perfusão a 10° C com estas soluções e conservação do órgão por períodos de 0,1 e 24 horas, em banho de gêlo (aproximadamente 4°C) . Os nossos resultados morfológicos, avaliados pela coloração, indicam que a solução de KH se distribui heterogeneamente quando comparadas às demais soluções, após os três períodos de conservação, enquanto as soluções de Co,EC e UW se distribuíram com maior eficácia pelo parênquima renal. Dentre estas últimas, observamos que a solução de Co se distribuiu com heterogeneidade maior após os três períodos de conservação, ficando este fato mais evidente na conservação por 1 hora. EC e UW se distribuíram homogeneamente em relação a Co e KH após 0 e 1 hora, enquanto após 24 horas, EC apresentou distribuição semelhante à de Co. Dentre as soluções utilizadas, UW, após os três períodos de conservação, foi a solução que melhor se distribuiu pelo parênquima renal. Este achado nos permite inferir que as soluções de EC e UW são capazes de atingir uma maior população de néfrons os quais poderiam ser melhor conservados. Um outro aspecto estudado foi o fluxo de perfusão pelo lado sanguíneo (Artéria-Veia) e a percentagem de rins que apresentaram filtrado passível de coleta durante a perfusão, nos rins de rato perfundidos com as soluções previamente utilizadas na análise morfológica, nas mesmas condições experimentais de temperatura e pressão já citadas acima, bem como nos mesmos grupos experimentais (0,1 e 24 horas de conservação). Os nossos resultados nos permitem concluir que UW parece ser a solução que mais se configura à conservação ideal do rim para o transplante pois nas nossas condições experimentais apresentou fluxo de perfusão-0h diferente e maior que os demais grupos experimentais sendo maior que todos na primeira hora e apenas menor que EC na reperfusão após 24 h, porém com um índice de apenas 8% de filtração na perfusão inicial. Desta forma, nestes períodos de conservação e reperfusão subseqüente, seria uma solução com pouca probabilidade de atingir o epitélio tubular, o que poderia acarretar efeitos deletérios do lado luminal destas células tubulares (Figueiredo et ai, Transplanlation, 1986). Tal técnica original pode se constituir numa forma de avaliação da efetividade da solução conservadora, o que refletiria de certo modo numa melhor função global do rim pós-reimplante. Assim, este tipo de avaliação morfológica e funcional, embora não ideal, poderá abrir perspectivas na experimentação de novas soluções de conservação acopladas com outras técnicas, para análise da distribuição e atuação das mesmas na manutenção da viabilidade do órgão durante o transplante clínico ou experimental / Abstract: This work was designed to check the distribution of several preservation solutions using the Hanssen's technique modified by our Laboratory. After perfusing the rat kidney with a correspondent pressure of 120 cm of water, about 80 mmHg, with several preservation solutions, it was followed by perfusing with sodium ferrocyanide which can be filtered and distributed unifonnly over the kidney parenchima by the tubular, venous and interstitial ways. The sodium ferrocyanide has a chemistry property of been transfonned in ferric ferrocyanide (Prussian blue) when exposed to acid medium (femc chloride) and stained the kidney parenchima. This maneuver pennits to see the distribution of the solution. ln this protocol, the following solutions used were: Mod({ied Krebs-Henseleit (KH), Collins (Coj, EuroCollins (ECj and University of Wisconsin (UW), and the distribution was analysed after their perfusion at 10° C, and conservation periods of O, 1 and 24 hours in ice bath (nearly 4° C). Our morphological results, analysed by the colour pictures, indicates that the KH solution distributes heterogeneously when compared to the other groups, after all conservation periods, while the Co, EC and UW solutions distributes more efficiently by the kidney parenchima. From those solutions, the Co distributes heterogeneously after the conservations periods. EC and UW distributes homogeneously compared to Co and KH after O and 1 hour, while after 24 hours EC presented distribution similar to Co. Considering the used solutions, UW, after alI conservation periods, was the best solution that distributes by the kidney parenchima. This results pointed out that EC and UW were able to gain a high number of nephron's unit that could get best perfonnance. Another aspect that was studied was the perfusion flux by the blood síde (arterial-venous) and the percentage of kidney able to filter during the perfusion. For this purpose, the kidney were perfused with the preservations solutions used for morphological al1alyses, at the same condition of temperature and pressure, and at the same groups (O, 1 and 24 hour of conservation periods). Our results led us to conclude that UW is more effective to preserve the kidney to transplantation because it presented a different and higher perfusion flux-Oh compared to the other experimental groups and it was higher at the 1 hour and lower than EC only after 24 hours of preservation. By the other hand, UW presented the lowest index of filtration at the beginning perfusion (8%). Therefore, UW could be a solution with a little probability of gaining the tubular epithelium layer, fact that would result in deleterious effects at the luminal side of this tubular cells (Figueiredo et ai, 1986). This original technique can be valuable tool to study effectiveness of preservation solutions, which would works to get better kidney function post reimplant. This kind of morphological and physiological approach is not ideal but could open perspectives to check new preservation solutions and could be associated to the other techniques to analyse their distribution and action for the best maintenance of organ viability during the clinical or experimenta transplant / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Ciências Biológicas

As células-tronco mesenquimais (CTMs) tem sido o foco de diversos estudos nos últimos anos, devido ao seu alto potencial terapêutico. Muitos estudos in vitro tem demonstrado que essas células podem ser hipoimunogênicas, indicando a possibilidade de uso dessas células em transplantes alogênicos sem nenhum efeito colateral. No entanto, estudos in vivo demonstram que as CTMs podem gerar uma resposta imune quando transplantadas em hospedeiros imunocompetentes, inclusive com a formação de células T de memória. Isto indica que possívelmente as CTMs não sejam imunoprivilegiadas. O objetivo deste estudo foi avaliar o comportamento de CTMs pré-ativadas e não ativadas, quando transplantadas sob a cápsula renal de camundongos imunocompetentes. Células mesenquimais derivadas do tecido adiposo foram coletadas de camundongos transgênicos C57Bl/6-GFP. As células foram então caracterizadas por ensaios de diferenciação adipogênica e osteogênica, assim como por imunofenotipagem, realizada por citometria de fluxo. Os animais foram divididos em três grupos para o transplante. No grupo singênico, machos C57Bl/6 receberam células C57Bl/6-GFP. Nos grupos alogênicos, camundongos BALB/c foram transplantados com células C57Bl/6-GFP ou células C57Bl/6-GFP pré-ativadas através da incubação com 20 ng/mL IFN-γ e 30 ng/mL TNF-α antes do transplante. A análise histológica e a imunofluorescência demonstraram que nenhum dos animais que receberam o transplante alogênico apresentou células GFP+ 28 dias após o transplante. Aos dias 7 e 14 os animais apresentaram grandes infiltrados de células inflamatórias no local. Aos 28 dias este infiltrado esteve reduzido ou inexistente, indicando completa rejeição das células transplantadas. Os animais que receberam o transplante singênico apresentaram células GFP+ 100 dias após o transplante. A análise histológica e a imunofluorescência demonstraram que nenhum dos animais que receberam o transplante alogênico apresentou células GFP+ 28 dias após o transplante. Aos dias 7 e 14 os animais apresentaram grandes infiltrados de células inflamatórias no local. Aos 28 dias este infiltrado esteve reduzido ou inexistente, indicando completa rejeição das células transplantadas. Os animais que receberam o transplante singênico apresentaram células GFP+ 100 dias após o transplante. A quantificação de citocinas no plasma dos animais não demonstrou diferenças entre os grupos. Foi feito também um teste de proliferação de esplenócitos in vitro, co-cultivado com CTMs. O presente estudo demonstrou que as células alogênicas possuem a capacidade de provocar a proliferação dos esplenócitos, o que poderia explicar a rejeição ocorrida in vivo. / The immunomodulatory properties of mesenchymal stem cells (MSCs) have been the focus of several studies over the past few years due to their therapeutic potential. Many in vitro studies have shown that these cells can be hypoimmunogenic, indicating the possibility of using them in allogenic transplants without any harmful effects. However, recent in vivo studies show that these cells can generate an immune response when transplanted into an immunocompetent host, with the formation of memory T cells. This indicates that MSCs may not actually be immune privileged. The main goal of this study has been to evaluate the role of activated and non-activated MSCs when transplanted to the renal subcapsular space of allogenic mice. Adipose-derived mesenchymal stem cells were isolated from C57Bl/6-GFP transgenic mice. The cells were characterized by adipogenic and osteogenic differentiation assays and immunophenotyping was performed by flow cytometry. The animals were divided in three different groups for the transplant. Male C57Bl/6 mice were transplanted with C57Bl/6-GFP cells. In the allogenic groups, male BALB/c mice were transplanted with C57Bl/6-GFP cells or C57Bl/6-GFP cells pre-activated by incubation with 20 ng/mL IFN-γ and 30 ng/mL TNF-α for 20h before transplantation. Histological and immunofluorescence analysis of graft-bearing kidneys showed that no GFP+ cells were found in any allogenic transplant after 28 days. At 7 and 14 days, the transplant sites showed a massive proliferation of inflammatory cells, which vanished after 28 days, indicating complete rejection of the transplanted cells. The syngeneic transplant was not rejected, showing GFP+ cells through the whole period of study. Cytokine quantification in the blood plasma showed no difference between any of the groups. An in vitro splenocyte proliferation assay was performed, which indicates that MSCs alone can induce the activation of allogenic splenocytes. This could explain their rejection in vivo.

Orientador: Osvaldo Magro Filho / Coorientador: Alessandra Marcondes Aranega / Banca: Michel Saad Neto / Banca: Edevaldo Tadeu Camarini / Resumo: Proposição: O objetivo deste trabalho foi avaliar, qualitativa e quantitativamente, o comportamento da membrana de matriz óssea homógena desmineralizada e conservada em glicerina no processo de reparo ósseo de cavidades cirúrgicas preenchidas com osso autógeno realizadas em tíbias de ratos diabeticos. Material e Métodos: Foram utilizados 40 ratos (Rattus norvegicus albinus, Wistar) machos, com aproximadamente 250 gramas divididos em dois grupos: o grupo I (Controle) recebeu injeção de tampão citrato, pela via endovenosa e o grupo II (Diabético) recebeu pela via intravenosa injeção de estreptozotocina dissolvida no tampão citrato para induzir o diabetes. Após controle glicêmico, anestesia, depilação e antissepsia foi realizada uma incisão longitudinal nas regiões antero-laterais de cada tibia. Após exposição das tíbias, duas cavidades cirúrgicas de 2mm de diâmetro foram preparadas com trefina em baixa-rotação refrigerada, uma no membro posterior direito e outra no membro posterior esquerdo, sendo a primeira preenchida com o osso autógeno particulado coletado durante a realização das duas cavidades e a segunda preenchida com coágulo sanguíneo e ambas recobertas pela membrana. Aos 10 e 30 dias pós-operatórios os animais foram eutanaziados e as peças obtidas foram processadas laboratorialmente para a realização de cortes semi-seriados com seis micrômetros de espessura e corados pela hematoxilina e eosina para análise histomorfométrica. Resultados e Conclusão: Concluiu-se que a reparação óssea foi maior com o emprego dos enxertos ósseos no grupo controle, embora as diferenças não foram estatisticamente significantes em nenhum período estudado e que, aos 30 dias, o processo de reparo das tíbias preenchidas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Purpose: The aim of this study was to evaluate histomorphometric the behavior of membrane of a demineralized homogenous bone matrix and preserved in glycerin in the process of bony repair of surgical cavities filled out with autogenous bone accomplished in tibias of diabetic rats. Materials and Methods: Forty male rats weighing approximately 250 g were selected and assigned to two groups, as follows. Group I (Control) received a citrate buffer injection intravenously while Group II (Diabetic) received an intravenous injection of streptozotocin dissolved in citrate buffer to induce diabetes. After glycemic control, anesthesia, shaving and antisepsis, a longitudinal incision was made in the anterolateral areas of each tibia. After exhibition of the tibias, two surgical cavities of 2mm of diameter were prepared with trefina in refrigerated low-rotation, one in the right posterior member, other in the left subsequent member, being the first filled out with particulate autogenous bone collected during the accomplishment of the two cavities and second filled out with sanguine coagulum and both covered with the membrane. Ten and thirty days postoperatively, the animals were euthanized and the anatomical pieces were submitted to routine laboratorial processing and serially sectioned to obtain 6-μm-thick sections, which were stained by hematoxylin and eosin for histomorphometric analysis. Results and Conclusions: We concluded in the ended of the bony repair was larger with the employment of the bone grafts in the group control, although the differences don't have statistics significance in any studied period and that to the 30 days, the process of repair of the tibias filled out by graft of the group control it was more favorable quality than of the tibias under the same treatment of the diabetic group although such differences have not been statistics significance and the membrane was biocompatible in all the analyzed groups. / Mestre

Resumo não disponível.

No contexto atual dos centros de transplante de célula-tronco hematopoética (TCTH), as complicações precoces e tardias relacionadas ao transplante têm preocupado as equipes médicas, pois aumentam as taxas de morbi-mortalidade, elevando também os custos operacionais dos estabelecimentos de saúde. Neste sentido, a atenção dada as condições de saúde bucal dos pacientes que se submetem ao TCTH tem merecido nos últimos anos uma maior preocupação, embora ainda de uma maneira muito despadronizada, unidirecional e generalizada. Frente a evidência de que as condições intrabucais sofreriam modificações em função do protocolo do TCTH, a questão da influência da presença de infecções bucais nas complicações relacionadas ao TCTH recebeu maior atenção. Por conseguinte, iniciaram-se um número maior de investigações, direcionadas para o tipo e quantidade de infecção presente na cavidade oral. Objetivo: neste contexto o presente estudo foi desenvolvido no sentido de avaliar, mais precisamente, o impacto da presença da atividade inflamatória periodontal, assim como a presença de reconhecidas bactérias associadas à infecção periodontal, nas complicações relacionadas ao TCTH. Métodos: estudo prospectivo, observacional, em 105 pacientes candidatos ao TCTH autólogo e alogênico [condicionamento mieloablativo ou de intensidade reduzida (RIC)] do Serviço de Hematologia do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA), sobre a presença da atividade inflamatória periodontal, definida por profundidade de sondagem e sangramento gengival, diagnosticada na avaliação bucal de rotina prétransplante e sua relação com mucosite oral, neutropenia, dias de febre, pega e Doença do Enxerto versus Hospedeiro (DECH) aguda. A associação foi aferida por ferramentas estatísticas uni e multivariadas, para p<= 0,05. Resultados: dos 91 pacientes com dados avaliáveis, 86,8% tinham atividade inflamatória periodontal (pelo menos um sítio com profundidade de sondagem>= 3 mm associada ao sangramento) e estavam igualmente distribuídos entre todas as modalidades de transplante. Devido ao fato que os desfechos avaliados foram superponíveis entre os grupos que receberam células-tronco de sangue periférico CTSP (autólogo e alogênico com RIC), as análises foram realizadas de acordo com a origem das células-tronco, com exceção da DECH aguda. A presença da atividade inflamatória periodontal aumentou significativamente os dias de mucosite nos pacientes submetidos ao TCTH com célula-tronco da medula óssea (MO) quando comparado ao TCTH de CTSP (p = 0.023), e este efeito permaneceu significativo (p = 0.03) mesmo quando controlado para o regime de condicionamento com Irradiação Corporal Total. Conclusão: a presença da atividade inflamatória periodontal levou a um aumento significativo na duração da mucosite oral nos pacientes que receberam TCTH de MO. Estes achados devem ser confirmados em um grupo maior de pacientes.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2009 / Bibliografia: f.[40-45] / Introdução: No intuito de resolver os problemas gerados pela reperfusão dos órgãos no pós transplante, é que novas soluções de preservação ontinuam a serem testados. Celsior® (CS) é uma solução desenvolvido inicialmente para transplantes cardíacos, mas ut / Introduction: In intention to decide the problems generated for the conservation and reperfusion of the organ after transplant, new liquids of conservation continue to be tested. Celsior® (CS) is a liquid developed initially for cardiac transplant but use

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-01-28 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivo: Avaliar o efeito do precondicionamento isquêmico remoto (PCI-R) no transplante autólogo de ovário fresco e criopreservado em ratas. Métodos: Foram utilizadas 97 ratas Wistar EPM-1, adultas jovens, distribuídas em três Séries de estudo: Série 1: Determinar do melhor tempo de PCI-R; Série 2: Avaliar a repercussão precoce e tardia do PCI-R no transplante ovariano (após 4, 7, 14 e 21 dias); e, Série 3: Comparar o efeito do PCI-R no transplante ovariano a fresco e criopreservado, após 30 dias. Foram avaliados esfregaços vaginais, dosagem sérica de estradiol, morfologia, morfometria, estudo da neoangiogênese pelo VEGF, da atividade proliferativa pelo ki- 67 e apoptose pela caspase-3. O PCI-R foi realizado na artéria ilíaca comum. O tecido ovariano autólogo foi implantado íntegro e sem anastomose vascular em retroperitônio, fixado por meio de um ponto com fio inabsorvível. A eutanásia foi realizada por meio de dose letal dos anestésicos utilizados após coleta dos materiais para análise. Resultados: O melhor tempo estabelecido para o PCI-R foi de 15 minutos, em que houve preservação de maior número de folículos ovarianos viáveis, altas taxas de proliferação celular e neoangiogênese. Os animais transplantados apresentaram maior número de folículos ovarianos e de corpos lúteos do que os grupos ooforectomizados. O PCI-R interferiu na preservação folicular em longo prazo, induzindo maior resistência nos períodos mais tardios de avaliação. Após 30 dias de transplante, o PCI-R promoveu aumento dos folículos ovarianos totais (imaturos e maduros) e de corpos lúteos funcionantes, com tendência a aumento da vascularização, da atividade proliferativa e menor atividade apoptótica em fases tardias de avaliação. Todos os grupos transplantados apresentaram níveis hormonais mais elevados do que o grupo controle. O PCI-R promoveu retorno mais precoce da atividade ovariana e aumentou o número de ciclos no transplante a fresco enquanto que no criopreservado não houve interferência. Conclusões: O PCI-R de 15 minutos apresentou um efeito benéfico sobre o tecido ovariano transplantado, inclusive no restabelecimento funcional, com efeito maior nas fases mais tardias pós-transplante. O 14º dia foi um marco na recuperação do enxerto, a partir do qual o processo de recuperação se estabilizou. O PCI-R apresentou melhor efeito sobre o tecido transplantado a fresco enquanto que no criopreservado a evolução foi boa, independentemente do PCI-R. / Objective: To evaluate remote ischemic preconditioning effect (PCI-R) in autologous fresh ovarian transplant and cryopreserved transplant in female rats. Methods: 97 young female Wistar EPM-1 rats were used in the experiment. They were divided in three study groups: Group 1: To determine the best PCI-R timing; Group 2: To evaluate the precocious and late repercussion of PCI-R in ovarian transplants (after 4, 7, 14, and 21 days); Group 3: To compare PCI-R effect in fresh and cryopreserved ovarian transplant, after 30 days. Vaginal smears, estradiol serum dosage, morphology, morphometry, neoangiogenesis by VEGF, proliferative activity by-ki-67 and apoptosis by caspasis-3 were evaluated. PCI-R was performed in the common iliac artery. Autologous ovarian tissue was implanted integrally without vascular anastomosis in the retro peritoneum, fixed with a non- absorbable stitch. Euthanasia was performed with a lethal dose of anesthetics used after material collection for analysis. Results: The best established PCI-R timing was 15 minutes when there was preservation of a greater number of viable ovarian follicles, high rate of cellular proliferation and neoangiogenesis. The animals that received transplants presented a larger number of viable ovarian follicles and corpora lutea than the ooforectomized groups. PCI-R interfered with follicular preservation at long term, inducing greater resistance in the late evaluation periods. After 30 days of the transplant, PCI-R caused an increase in the total ovarian follicles (mature and immature) and in the functioning of corpora lutea, with a tendency to increase vascularity, proliferative activity and less apoptotic activity in the late periods of evaluation. All transplanted groups presented higher hormonal levels than the control group. PCI-R caused precocious ovarian activity and increased the number of cycles in fresh transplants while in the cryopreserved transplants there was no interference. Conclusions: The 15 minute PCI-R presented a benefic effect on the transplanted ovarian tissue, inclusive in functional recovery, with a greater effect in the late post-transplant phases. The 14th day was a landmark in graft recovery and, from then on, the process of recovery was stabilized. PCI-R presented a better effect on the fresh transplanted tissue while in the cryopreserved transplant the evolution was good, independently of PCI-R. / FAPESP: 2007/00107-9 / FAPESP: 2007/00394-8 / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

As células-tronco mesenquimais (CTMs) tem sido o foco de diversos estudos nos últimos anos, devido ao seu alto potencial terapêutico. Muitos estudos in vitro tem demonstrado que essas células podem ser hipoimunogênicas, indicando a possibilidade de uso dessas células em transplantes alogênicos sem nenhum efeito colateral. No entanto, estudos in vivo demonstram que as CTMs podem gerar uma resposta imune quando transplantadas em hospedeiros imunocompetentes, inclusive com a formação de células T de memória. Isto indica que possívelmente as CTMs não sejam imunoprivilegiadas. O objetivo deste estudo foi avaliar o comportamento de CTMs pré-ativadas e não ativadas, quando transplantadas sob a cápsula renal de camundongos imunocompetentes. Células mesenquimais derivadas do tecido adiposo foram coletadas de camundongos transgênicos C57Bl/6-GFP. As células foram então caracterizadas por ensaios de diferenciação adipogênica e osteogênica, assim como por imunofenotipagem, realizada por citometria de fluxo. Os animais foram divididos em três grupos para o transplante. No grupo singênico, machos C57Bl/6 receberam células C57Bl/6-GFP. Nos grupos alogênicos, camundongos BALB/c foram transplantados com células C57Bl/6-GFP ou células C57Bl/6-GFP pré-ativadas através da incubação com 20 ng/mL IFN-γ e 30 ng/mL TNF-α antes do transplante. A análise histológica e a imunofluorescência demonstraram que nenhum dos animais que receberam o transplante alogênico apresentou células GFP+ 28 dias após o transplante. Aos dias 7 e 14 os animais apresentaram grandes infiltrados de células inflamatórias no local. Aos 28 dias este infiltrado esteve reduzido ou inexistente, indicando completa rejeição das células transplantadas. Os animais que receberam o transplante singênico apresentaram células GFP+ 100 dias após o transplante. A análise histológica e a imunofluorescência demonstraram que nenhum dos animais que receberam o transplante alogênico apresentou células GFP+ 28 dias após o transplante. Aos dias 7 e 14 os animais apresentaram grandes infiltrados de células inflamatórias no local. Aos 28 dias este infiltrado esteve reduzido ou inexistente, indicando completa rejeição das células transplantadas. Os animais que receberam o transplante singênico apresentaram células GFP+ 100 dias após o transplante. A quantificação de citocinas no plasma dos animais não demonstrou diferenças entre os grupos. Foi feito também um teste de proliferação de esplenócitos in vitro, co-cultivado com CTMs. O presente estudo demonstrou que as células alogênicas possuem a capacidade de provocar a proliferação dos esplenócitos, o que poderia explicar a rejeição ocorrida in vivo. / The immunomodulatory properties of mesenchymal stem cells (MSCs) have been the focus of several studies over the past few years due to their therapeutic potential. Many in vitro studies have shown that these cells can be hypoimmunogenic, indicating the possibility of using them in allogenic transplants without any harmful effects. However, recent in vivo studies show that these cells can generate an immune response when transplanted into an immunocompetent host, with the formation of memory T cells. This indicates that MSCs may not actually be immune privileged. The main goal of this study has been to evaluate the role of activated and non-activated MSCs when transplanted to the renal subcapsular space of allogenic mice. Adipose-derived mesenchymal stem cells were isolated from C57Bl/6-GFP transgenic mice. The cells were characterized by adipogenic and osteogenic differentiation assays and immunophenotyping was performed by flow cytometry. The animals were divided in three different groups for the transplant. Male C57Bl/6 mice were transplanted with C57Bl/6-GFP cells. In the allogenic groups, male BALB/c mice were transplanted with C57Bl/6-GFP cells or C57Bl/6-GFP cells pre-activated by incubation with 20 ng/mL IFN-γ and 30 ng/mL TNF-α for 20h before transplantation. Histological and immunofluorescence analysis of graft-bearing kidneys showed that no GFP+ cells were found in any allogenic transplant after 28 days. At 7 and 14 days, the transplant sites showed a massive proliferation of inflammatory cells, which vanished after 28 days, indicating complete rejection of the transplanted cells. The syngeneic transplant was not rejected, showing GFP+ cells through the whole period of study. Cytokine quantification in the blood plasma showed no difference between any of the groups. An in vitro splenocyte proliferation assay was performed, which indicates that MSCs alone can induce the activation of allogenic splenocytes. This could explain their rejection in vivo.