O câncer constitui um problema de saúde pública para o mundo desenvolvido e também para nações em desenvolvimento. Segundo a estimativa realizada pelo Inca para o ano de 2012, a partir dos dados dos Registros de Câncer de Base Populacional (RCBP), o percentual mediano dos tumores pediátricos encontrava-se próximo de 3%. Para o ano de 2012, com exceção dos tumores da pele não melanoma, estavam previstos 384.340 casos novos de câncer. Destes, ocorrerão cerca de 11.530 casos novos de câncer em crianças e adolescentes até os 19 anos. Este estudo teve por objeto as expectativas de vida do adolescente frente ao transplante de células tronco hematopoiéticas (TCTH) e como objetivos: descrever as expectativas dos adolescentes que se submeteram ao TCTH e analisar compreensivamente as expectativas de vida destes jovens que se submeteram ao TCTH. Trata-se de estudo de natureza qualitativa, pautado no referencial teórico-metodológico da fenomenologia sociológica de Alfred Schutz. O cenário para sua realização foi uma unidade de Transplante de Medula Óssea, localizada em um hospital federal de referência nacional, localizado na cidade do Rio de Janeiro. Os participantes do estudo foram oito adolescentes, na faixa etária entre 12 e 18 anos de idade, que se encontravam em fase pós-TCTH, em acompanhamento no hospital diariamente ou já de alta hospitalar da unidade. Para a realização do trabalho de campo, foi utilizada a entrevista fenomenológica como instrumento de captação das falas, as quais foram guiadas pelas seguintes questões orientadoras: fale para mim como foi esse período de adoecimento para você. Quais as suas expectativas em relação ao transplante de células tronco hematopoiéticas? O que você espera da sua vida diária/cotidiana agora após a realização do transplante de células tronco hematopoiéticas? As falas foram transcritas, analisadas para então serem categorizadas. A partir da análise compreensiva, emergiram quatro categorias: Ser curado; Ter uma vida normal; Ter uma profissão; Constituir família; e Apresentando o motivo porque. O estudo possibilitou através dos relatos dos adolescentes mergulhar e adentrar no seu universo de significados sobre o que eles esperam do TCTH para a apreensão do que pensam sobre a sua inserção no mundo da vida após a sua realização, como também remeteu para a ação profissional que vislumbra a atuação multidisciplinar na perspectiva do nós, na qual o adolescente, sua família e a equipe sejam parte integrantes desse processo. / Cancer is a public health problem for the developed world and also to developing nations. According to the estimate done by Inca to 2012, from data of Cancer Registries of Population Based (CRPB), the average percentage of pediatric tumors was around 3%. For 2012, with the exception of non-melanoma skin tumors, 384,340 new cases of cancer were estimated. Of these, around 11,530 new cases of cancer occurred in children and adolescents up to 19 years old. The aim of this study was adolescents life expectations facing the hematopoietic stem-cell transplantation (HSCT) and as objectives: to describe the expectations of adolescents who have undergone the HSCT and analyze comprehensively the life expectancy of these young people who have undergone the HSCT. This is a qualitative study, based on theoretical-methodology reference of the sociological phenomenology of Alfred Schutz. The scenario for its realization was a Bone Marrow Transplant Unit, located in a federal national reference hospital, located in the city of Rio de Janeiro. Study participants were eight adolescents, aged between 12 and 18 years old, who were undergoing HSCT, monitoring in the hospital daily or already discharged from the unit. For the completion of fieldwork, the phenomenological interview was used as an instrument to capture lines, which were guided by the following guiding questions: tell me how this period of illness to you was. What are your expectations for the hematopoietic stem cell transplant? What do you expect from your daily life now, after completion of hematopoietic stem cell transplantation? The lines were transcribed, analyzed to then be categorized. From the comprehensive analysis, four categories emerged: Be cured; Have a normal life; Have a profession; Constitute a family; and Showing the reason why. Through the reports of the adolescents, the study was able to enter in their universe of meanings about what they expect from HSCT to understand what they think about their insertion in the world of life after its realization, but also referred to the professional action that see the multidisciplinary activities in the perspective of the us, in which the adolescent, his family and the team are integral part of this process.

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:22:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-05-21. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:29:11Z : No. of bitstreams: 1 000851315.pdf: 1476331 bytes, checksum: eba120cc7ab9336605a5035f69abf08e (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Células tronco mesenquimais (CTMs) possuem potencial terapêutico regulando a inflamação, prevenindo a formação de feridas e regenerando tecidos. Por sua propriedade imunomoduladora, tem sido estudadas no transplante alogênico. As CTMs derivadas de anexos fetais são destaque por serem de fácil obtenção, de tecidos geralmente descartados e com grande possibilidade de formação de bancos. O presente trabalho objetiva avaliara resposta inflamatória in vivo do músculo glúteo médio à inoculação alogênica de CTMs derivadas de cordão umbilical equino. As CTMs foram cultivadas e caracterizadas por meio de imunofenotipagem e diferenciação em linhagens mesodermais e então, criopreservadas. Após descongelação e expansão as CTMs foram transplantadas no dia 0 no músculo glúteo médio direito e esquerdo, em duas regiões diferentes, em seis éguas hígidas. Como controle foram realizadas injeções de Solução Balanceada de Hank's caudalmente às regiões onde foram transplantadas as CTMs. As biópsias musculares forma realizadas 30 dias antes do transplante de CTMs, bem como dois dias depois do transplante e 7 dias após o transplante. Todos os transplantes e biópsias foram precedidos pelo exame ultrassonográfico além de colheita de sangue para os parâmetros hematológicos. As CTMs foram bem caracterizadas, apresentaram alta clonicidade e não provocaram alteração nos parâmetros hematológicos. O exame ultrassonográfico revelou aspecto sugestivo de reação inflamatória 48 horas após os transplantes em ambos os grupos, controle e tratadoNa avaliação histológica não foram encontradas diferenças entre os grupos tratado e controle em nenhum dos momentos estudados. Uma discreta diferença no parâmetro de infiltrado neutrofílico foi encontrada entre D30 e D2 apenas no grupo tratado (P<0,05), entretanto não houveram diferenças em D7. Desta forma, podemos concluir a terapia celular não incitou resposta... / Mesenchymal stem cells (MSCs) have therapeutic potential regulating inflammation, preventing the formation of wounds and regenerating tissues. MSCs derived from fetal membranes are highlighted because they are easy to obtain, from tissues usually discarded and with great possibility of bank formation. This study evaluated the in vivo inflammatory response of the gluteus medius muscle to the inoculation of allogeneic MSCs derived from equine umbilical cord. MSCs were cultured and characterized by immunophenotyping and differentiation into mesodermal lineages, and next cryopreserved. After thawing and expansion of MSCs transplantation was performed on day 0 in the right and left middle gluteal muscle at two different regions in six healthy mares. Likewise, for the control group, an injection of Hank's-Balanced Solution was performed caudally to the regions where MSCs were transplanted. Muscle biopsies were performed 30 days before the transplantation of MSCs, 2 days and 7 days after transplantation. All biopsies and transplants were preceded by ultrasonographic examination, and blood samples retrieval for hematological parameters. The biopsies were be analyzed by histological techniques. The MSCs were well characterized, and possessed high clonogenicity causing no changes in the hematological parameters evaluated. Ultrasound examination was suggestive of inflammation 48 hours after transplantation in both groups, control (C) and treated (T). Histological evaluation found no differences between C and T groups in any of the time points studied. A discrete temporal inflammation were found between D30 and D2 (P <0.05) only in the T group, however no differences were found in D7. Thus, we conclude that the cellular therapy did not incited systemic inflammatory response to recipients, demonstrating, for the first time, that the allogeneic use of MSCs from equine umbilical cord are safety for use in horse ... / FAPESP: 2013/01383-0

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-28. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:30Z : No. of bitstreams: 1 000829257.pdf: 896180 bytes, checksum: 6b53f81e5fc9d348c920f0f5cbeffc57 (MD5) / O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta tecidual ao implante de tubos de polietileno preenchidos com pasta triantibiótica (PTA) composta de ciprofloxacina, minociclina e metronidazol, veiculada com propilenoglicol e polietilenoglicol (macrogol), em tecido subcutâneo de ratos e, caracterizar, histologicamente, os tecidos neoformados pós-procedimento endodôntico regenerativo, empregando o coágulo ou o coágulo suplementado com plasma rico em plaquetas (PRP), aspirado de medula óssea (AMO), ou a mistura PRP/BMA, pós-desinfecção com PTA. Estudo para avaliar a biocompatibilidade da pasta: Trinta ratos receberam 2 implantes individuais de tubos de polietileno preenchidos com PTA ou pasta de hidróxido de cálcio (PHC) e um outro tubo vazio como controle. Trinta ratos adicionais receberam tubos de polietileno contendo os veículos da pasta propilenoglicol e macrogol e um procedimento somente de incisão, sem implante de tubo (Sham). Após 7, 15, 30, 60, e 90 dias, 12 animais foram sacrificados, e os tubos foram removidos e processados histologicamente pela técnica do glicolmetacrilato e corados com hematoxilina e eosina. Os scores variaram de 0 a 3, dependendo do teor de células inflamatórias, a cápsula fibrosa foi considerada fina ou espessa, e a necrose e a calcificação foram registradas como presentes ou ausentes. Os resultados foram analisados pelo teste de Kruskal-Wallis. Ambos os materiais induziram reações moderadas aos 7 e 15 dias sendo similares ao grupo controle (p>0.05) e reduziram para grau leve a partir de 30 dias (p>0.05). Os veículos não interferiram na resposta da pasta. A pasta triantibiótica assim com seus respectivos veículos foram biocompatíveis em todos os períodos experimentais. Estudo para análise histológica dos tecidos neoformados com diferentes estratégias de engenharia tecidual: 20 dentes... / This study aimed to evaluate the tissue response to the implantation of polyethylene tubes filled with a triantibiotic paste (TAP) composed of ciprofloxacin, metronidazole and minocycline conveyed with propylene glycol and polyethylene glycol (macrogol) in subcutaneous tissue of rats and characterize histologically the newly formed tissues post regenerative endodontic procedure employing the blood clot (BC) or BC supplemented with platelet-rich plasma (PRP), bone marrow aspirate (BMA) or a mixture of PRP/ BMA, post-disinfection with TAP. Study to evaluate TAP biocompatibility: Thirty rats received two individual implants of polyethylene tubes filled with TAP or calcium hydroxide paste (CHP) and another empty tube as a control. Thirty other rats received additional polyethylene tubes implants containing the paste vehicles (propylene glycol and macrogol) and an incision procedure (Sham group). After 7, 15, 30, 60, and 90 days, 12 animals were killed, and the tubes were removed and processed for histological examination. The scores ranged from 0 to 3 depending on content of inflammatory cells, the fibrous capsule was considered thin or thick, and necrosis and calcification were recorded as present or absent. The results were analyzed using the Kruskal-Wallis test. Both materials induced moderate reactions at 7 and 15 days which was similar to the control group (p> 0.05) and reduced to mild after 30 days (p> 0.05). The vehicles did not affect the tissue response to the paste. The TAP and their respective vehicles were biocompatible in all experimental periods. Study to histologically evaluate newly formed tissues after regenerative treatment: 20 teeth (40 roots), from 2 Beagle dogs, had their root canals exposed to the oral environment for 90 days to induce apical periodontitis. The canals were prepared until the apical barrier with Protaper...

Orientadora: Profª. Drª. Maria Ribeiro Lacerda / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Enfermagem. Defesa: Curitiba, 21/11/2016 / Inclui referências : f. 114-123;133-134 / Área de concentração: Prática profissional de enfermagem / Resumo: O transplante de células-tronco hematopoiéticas é um procedimento complexo, de alto custo e em franco desenvolvimento, utilizado para tratamento de doenças hematológicas malignas, hereditárias, imunológicas, metabólicas e oncológicas. Embora envolva um grande arsenal de conhecimentos objetivos, aspectos subjetivos permeiam sua realização e determinam seu sucesso. Este estudo que defendeu a tese de que, estando a ação social do cuidar atrelada aos significados provenientes da vivência do transplante, o cuidado realizado em domicílio pelos cuidadores familiares de crianças no pós-transplante influencia e é influenciado pela interação entre o paciente, o cuidador, a família e a sociedade, incluindo os profissionais envolvidos. Para fomentar este conhecimento, os objetivos foram: compreender o significado da vivência do cuidador familiar em cuidar no domicílio de crianças em pós-transplante de células-tronco hematopoiéticas e elaborar uma teoria substantiva que explicite esta vivência. Foram utilizados o interacionismo simbólico como referencial teórico e a teoria fundamentada nos dados como metodologia. Foram feitas entrevistas com 36 cuidadores de pacientes pediátricos em pós-transplante, divididos em quatro grupos amostrais: o primeiro grupo contou com dez cuidadores que residiam em casas transitórias de apoio durante acompanhamento ambulatorial; o segundo, com sete cuidadores que, durante o acompanhamento ambulatorial, residiram em casas temporárias, mas já estavam em domicílio próprio; o terceiro, com onze cuidadores que regressaram ao seu domicílio de origem após alta hospitalar; e o quarto grupo contou com oito cuidadores de crianças que já haviam passado por mais de um transplante. A análise dos dados se deu por meio de codificações aberta, axial e seletiva e permitiu construir a teoria intitulada "Vivência do cuidado domiciliar familiar no pós-transplante de células-tronco hematopoiéticas pediátrico", que apontou como constructo central que "o cuidado domiciliar no pós-TCTH pediátrico significa para o cuidador familiar uma vivência aprendida, singular, intransferível e modificadora", e foi construída pela elaboração de 19 conceitos, associados a um esquema organizacional que compreende as causas, contexto, condições intervenientes, estratégias e consequências do fenômeno em estudo. A teoria proposta permitiu comprovar a tese defendida e propiciou a construção de conhecimento acerca das subjetividades que permeiam o fenômeno, possibilitando entendimento e preparo àqueles que ainda vivenciarão esta situação e aos profissionais que orientam e orientarão essas pessoas. Acredita-se que esta teoria tenha implicações para a prática, visto que, além do conhecimento construído, viabilizou a indicação de ações de cuidado ao cuidador e a pesquisa na área, por ter o diferencial de buscar o olhar global da vivência sem recortes temporais e conseguir apontar lacunas do conhecimento que ainda precisam de aprofundamento, como o binômio paciente-cuidador, a vivência de crianças, intervenções em cuidado ao cuidador e os diferentes ambientes de cuidado possíveis. Palavras-chave: Transplante de Células-Tronco Hematopoéticas; Cuidadores; Família; Cuidado da Criança; Assistência Domiciliar; Transplante de Medula Óssea. / Abstract: The hematopoietic stem cell transplantation is a complex, expensive and rapidly developing procedure, used for treatment of malignant, hereditary, immunological, metabolic and oncological hematological diseases. Although it involves a large arsenal of objective knowledge, subjective aspects permeate its achievement and determine its success. This study is proposed in order to support the thesis, that when human action is linked to the meanings obtained from the experience of the transplant, the care provided at home by family carers of children in post-transplant influences and is influenced by the interaction between the patient, the caregiver, the family and society, including professionals engaged. In order to foment this knowledge, the objectives were: to understand the meaning of the experience of the family's caregiver in the home of children going through post-transplantation of hematopoietic stem cells; develop a substantive theory that makes this experience explicit. Symbolic Interactionism was used as theoretical reference and the Grounded Theory as methodology. Interviews were conducted with 36 caregivers of post-transplant pediatric patients, who were divided into four sample groups: the first one included 10 caregivers who resided in transitional support houses during ambulatory treatment; the second one with 07 caregivers who resided in temporary houses during ambulatory follow-up, but were already in their own homes; the third one with 11 caregivers who returned to their home of origin after hospital discharge; and the fourth group with eight caregivers of children who had already gone through more than one transplant. The data analysis was carried out through open, axial and selective coding, which allowed to build the theory entitled "experiencing the family home care in pediatric hematopoietic stem cell post-transplantation." which pointed as central construct that "family home care in pediatric hematopoietic stem cell post-transplantation means for the family carer a singular, non-transferable, modifying and learned experience", and it was built from the development of 19 concepts associated with an organizational scheme comprising the causes, context, intervening conditions, strategies and consequences of the phenomenon under study. The proposed theory allowed to prove the defended thesis and also promoted the construction of knowledge about the subjectivities that permeate the phenomenon, enabling understanding and preparation to those who still will experience this and the professionals who advise and guide these people. It is believed that the theory has implications over practice, since in addition to the acquired knowledge, it has enabled the indication of care actions to the caregiver. Also, implications over the research in the area, since it has the differential of seeking the overall perspective of the experience without temporal interruptions and also identifying knowledge gaps that still need further development, such as the patient-caregiver relation, the experience of the children, care interventions to caregiver, and different possible care environments. Key words: Hematopoietic Stem Cell Transplantation; Caregivers; Family; Child Care; Home Nursing; Bone Marrow Transplantation

Resumo: A Anemia de Fanconi (AF) e uma doenca genetica autossomica recessiva rara, caracterizada por instabilidade cromossomica, pancitopenia e anomalias congenitas. A doenca evolui para a insuficiencia progressiva da medula ossea e para o desenvolvimento de neoplasias malignas, como a leucemia mieloide aguda e o carcinoma espinocelular (CEC) na regiao de cabeca e pescoco. O transplante de celulas-tronco hematopoieticas (TCTH) e o unico tratamento curativo para a insuficiencia medular na AF. O risco de desenvolvimento de neoplasias malignas, principalmente o CEC, na cavidade bucal, aumenta consideravelmente apos o TCTH. Os objetivos deste estudo foram avaliar as alteracoes morfologicas e morfometricas e quantificar as regioes organizadoras nucleolares em celulas epiteliais da lingua em pacientes com AF, apos o TCTH. Quarenta esfregacos da lateral da lingua de 20 criancas e adolescentes com AF apos TCTH (grupo caso) e de 20 criancas saudaveis (grupo controle) foram coletados por meio da citologia esfoliativa em base-liquida. Os grupos foram pareados por sexo e idade. Os esfregacos foram preparados e corados pela tecnica de Papanicolaou (para analise morfologica e morfometrica) e impregnacao pela prata (para quantificacao de AgNORs). Apos analise dos esfregacos, as variaveis morfologicas nao apresentaram diferenca estatisticamente significante quanto ao predominio celular e quanto a classificacao de Papanicolaou para os grupos caso e controle. Com auxilio de um sistema analisador de imagens as variaveis area do nucleo (AN), area do citoplasma (AC) e relacao area do nucleo-citoplasma (AN/AC) foram mensuradas. As variaveis AN (71,85 ?m2) e AC (2127,48 ?m2) estavam aumentadas no grupo caso em relacao ao grupo controle (55,21 ?m2 e 1441,61 ?m2, respectivamente). A media da relacao AN/AC apresentou diminuicao significativa no grupo caso (0,03) comparado ao grupo controle (0,04). Nao houve diferenca estatistica significativa entre os grupos para a media de AgNORs por nucleo. Em conclusao, este estudo demostrou alteracoes morfometricas, com aumento da AN e AC e diminuicao da relacao AN/AC, nas celulas epiteliais da lingua de individuos com AF apos o TCTH. Nao foram observadas alteracoes na quantificacao de AgNORs por nucleo em celulas epiteliais da lingua de doentes com Anemia de Fanconi apos o transplante de celulas-tronco hematopoieticas.

Resumo: A Anemia de Fanconi (AF) é uma doença genética rara caracterizada por instabilidades cromossômicas que geram anormalidades somáticas de graus variáveis, falência medular progressiva e susceptibilidade aumentada a neoplasias. O único tratamento curativo é o transplante de células tronco hematopoéticas (TCTH), entretanto a toxicidade e falha de pega ainda são limitantes para sua realização. A falha de pega do enxerto ou rejeição é uma complicação grave e potencialmente fatal que ocorre em até 30% dos pacientes com AF submetidos ao TCTH, dependendo do tipo de doador e regime de condicionamento utilizado. Entre Janeiro de 1985 e Outubro de 2011, 238 pacientes com AF realizaram TCTH nessa instituição. Duzentos e doze pacientes foram avaliáveis quanto à pega medular e divididos em 3 grupos. O grupo 1 foi constituído por 25 pacientes que tiveram falha primária de pega (FPP). O grupo 2 por 9 pacientes com falha secundária de pega (FSP) ou evolução para leucemia e o grupo 3, com 178 casos com pega medular adequada. Os pacientes com falha primária e secundária de pega apresentaram maior duração de doença e maior número de transfusões sanguíneas prévias ao TCTH do que o grupo com pega medular (p=0,001 e p<0,001). Doador não aparentado (NAP) foi utilizado em 84% dos pacientes do G1 e apenas 33% do G3 (p<0,001); houve ainda menor número de transplantes totalmente compatíveis no G1 do que nos outros grupos (p<0,001). A fonte de células foi sangue de cordão umbilical (SCU) em 56% dos pacientes do G1 e 13% no G3. Na análise multivariada os fatores associadas a uma maior FPP foram maior número de transfusões (p=0,003), a utilização de doadores NAP (p=0,001) ou com incompatibilidades HLA (p=0,025) ou a ausência de fludarabina no regime de condicionamento (p=0,005). O fator predisponente para pega medular não sustentada ou evolução para leucemia foi maior número de transfusões (p=0,032). Vinte e quatro pacientes foram submetidos a um novo TCTH, sendo 20 do G1 e 4 do G2 e apenas seis pacientes estão vivos. A incidência cumulativa para a falha de pega foi de 18,9%, sendo maior nos transplantes com doadores NAP (36,2%) e com SCU (40%). A falha de pega ou rejeição é uma complicação extremamente grave e mais frequente nos transplantes não aparentados, com incompatibilidades e em pacientes mais transfundidos. Novos regimes de condicionamento, imunomodulação ou redução do tempo para o encontro de doadores NAP podem ser alternativas na tentativa de reduzir a incidência da rejeição nos pacientes com AF.

Orientador: Prof. Dr. Sérgio Bernardo tenório / Co-orientador: Prof. Dr. Joacir Graciolli Cordeiro / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Clínica Cirúrgica. Defesa: Curitiba, 01/03/2013 / Bibliografia: fls. 93-111 / Resumo: A Doença de Parkinson (PD) é uma doença de grande implicação em saúde pública, pois acomete cerca de 1% da população idosa e gera altos gastos com o tratamento. Atualmente, o tratamento medicamentoso se baseia na combinação de L-3,4- dihidroxifenilalanina (L-DOPA) com agonistas dos receptores dopaminérgicos. A principal desvantagem da terapia medicamentosa é o desenvolvimento de refratariedade e de efeitos colaterais incapacitantes, como discinesia e fenômeno on-off. Modalidades terapêuticas cirúrgicas foram, portanto, desenvolvidas, como técnicas ablativas (talamotomia, palidotomia), estimulação encefálica profunda (EEP) e transplante de células embrionárias dopaminérgicas. Atualmente a EEP é o padrão-ouro no tratamento da PD refratária ao tratamento medicamentoso. É proposto que a modulação do STN (núcleo subtalâmico) restabeleça o equilíbrio na circuitaria dos gânglios da base (GB), diminuido a excitotoxicidade glutamatérgica ao striatum. EEP é uma terapia sintomática, a qual promove uma melhora transitória dos sintomas motores responsivos à dopamina. Por outro lado, o transplante celular oferece uma abordagem tecidual restauradora constituindo uma estratégia promissora no tratamento da PD, por tratar-se de um tratamento possivelmente curativo. Um fator limitante ao uso rotineiro de transplantes neuronais é a baixa taxa de sobrevida das células dopaminérgicas transplantadas. Este estudo investiga o impacto da lesão do STN e/ou da ZI (Zona Incerta), ambas realizadas anteriormente ao transplante de células embrionárias provenientes do mesencéfalo ventral, na taxa de sobrevida das células dopaminérgicas e na resposta funcional motora. Com este objetivo, PD foi induzida pela injeção unilateral de 6-OHDA (6- hidroxidopamina) no feixe prosencefálico medial (FPM) de ratos, os quais foram separados em três grupos. O primeiro grupo foi submetido ao transplante estriatal de células embrionárias. Os outros dois grupos receberam injeção de ácido quinolínico no STN e/ou na ZI onze semanas antes do transplante, causando uma lesão parcial destas estruturas. Um quarto grupo (grupo controle puro), no qual nenhuma intervenção cirúrgica foi realizada, foi utilizado para comparar os efeitos dos procedimentos cirúrgicos com animais intactos. Após cada intervenção cirúrgica, testes comportamentais foram realizados, a fim de isolar o efeito de cada procedimento. Foi observado que no grupo submetido à lesão parcial do STN combinado ao transplante, obteve-se um aumento de 106% na taxa de sobrevida das células transplantadas comparado ao grupo submetido somente ao transplante. O grupo no qual a lesão parcial da ZI foi realizada, a taxa de sobrevida foi aumentada em 147% comparado ao grupo que recebeu o transplante como intervenção única. Adicionalmente, na bateria de testes comportamentais realizada após o transplante, o resultado da rotação induzida por apomorfina e dos testes comportamentais espontâneos foi superior no grupo submetido à lesão parcial do STN quando comparado ao grupo somente transplantado. Estes dados sugerem que a lesão parcial do STN e/ou da ZI possa ter reduzido a excitotoxicidade e logo optimizado o ambiente neuroquímico estriatal, aumentando a taxa de sobrevida das células transplantadas. Apesar de apresentar contagem celular semelhante ao grupo submetido à lesão parcial do STN, os ratos nos quais apenas a ZI foi lesionada não apresentaram melhora significativamente superior ao grupo somente transplantado nos testes comportamentais pós-transplante. Estes dados sugerem a existência de outros mecanismos envolvidos na melhora funcional motora. A combinação da supressão do STN com a terapia celular restauradora se revelou factível e de efeito sinérgico. Hipotetiza-se ser esta uma possível técnica para refinar o manejo da PD. Há necessidade de mais estudos a fim de investigar a aplicabilidade clínica da terapia combinada, incluindo o papel de outros métodos de modulação do STN (e.g. EEP) acoplado ao transplante celular como uma possível abordagem inovadora no tratamento da PD refratária. / Abstract: Parkinson's disease (PD) has a great implication on public health. It affects approximately 1% of the elderly and involves high expenses with its treatment. Currently the drug-based treatment is based in the combination of L-3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) with dopamine receptors agonists. The principal disadvantage of the medical therapy is the development of refractoriness and disabling side-effects, i.e. dyskinesia and on-off phenomenon. Surgical modalities were, therefore, developed, e.g. ablative techniques (thalamotomy, pallidotomy), deep brain stimulation and embryonic dopaminergic cell transplantation. Currently, deep brain stimulation is the gold standard in the treatment of cases refractory to medication. It is proposed that the STN (subthalamic nucleus) modulation restores the equilibrium in the basal ganglia circuitry and reduces the excitotoxic glutamatergic input to the striatum. Deep brain stimulation is a symptomatic therapy, which promotes a transitory improvement of the dopamine-responsive motor symptoms. On the other hand, cell transplantation is a tissue restorative approach and represents a promising strategy in the treatment of PD, since it is a possible curative treatment. A limiting factor to the routine use of neuronal grafts is the poor dopaminergic cell survival. This study investigates the impact of a STN and/or ZI (Zona Incerta) lesion, both performed prior to ventral mesencephalic embryonic cell transplantation in the dopaminergic cell survival and motor functional outcome. For this purpose, unilateral PD was induced by unilateral injection of 6-OHDA (6-hydroxydopamine) into the medial forebrain bundle of rats, which were assigned into three groups. The first group underwent ipsilateral embryonic cell grafting into the striatum. The other two groups received quinolinic acid injection into the STN and/or ZI eleven weeks prior to transplantation, causing a partial lesion of these structures. A forth group (naive control group), in which no surgical intervention was performed, was used to compare the effects of the surgical procedures with intact animals. After each surgical intervention, behavioural tests were performed to isolate the effect of each procedure. It was observed that in the group that received a partial STN lesion combined with the graft, cell survival was boosted in 106% compared to the group that received solely the transplantation. The group in which a partial ZI lesion was performed the cell survival was enhanced in 147% compared to the group with transplantation as single intervention. Moreover, in the behavioural tests after transplantation, the results of apomorphine-induced rotation and spontaneous behavior tests were ameliorated on the STN-lesioned group to a greater extent than on the grafted only group. These data suggest that the STN and/or ZI partial lesion could reduce the excitotoxicity and therefore optimize the striatal neurochemical environment and promote an improvement in cell survival. Despite exhibiting similar cell counting compared to the group that received partial STN lesion, the rats in which only the ZI was lesioned, did not show significant greater improvement in the behavioural tests following transplantation compared to the grafted-only group. This data suggest the existence of other mechanisms involved in motor functional recovery. The combination of STN suppression and cell therapy revealed to be a feasible technique with synergic effect. More studies are required in order to investigate the clinical application of the combined approach including the role of other methods of STN modulation (e.g. deep brain stimulation) coupled to cell transplantation as an innovative approach in the treatment of refractory PD.

Orientador : Prof. Dr. Ricardo Pasquini / Coorientador : Profª. Drª. Noemni Farah Pereira / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Medicina Interna. Defesa : Curitiba, 16/12/2016 / Inclui referências : f. 68-75 / Resumo: Introdução: A compatibilidade HLA entre receptor e doador é insuficiente para evitar complicações como a doença do enxerto-contra-hospedeiro (DECH) após o transplante de células-tronco hematopoiéticas (TCTH), e isto sugere que a variabilidade não HLA pode influenciar desfechos deste procedimento terapêutico. A região de classe III do MHC abriga genes relacionados à resposta imune e aos processos inflamatórios cujas variantes alélicas têm sido associadas a doenças autoimunes e a algumas complicações pós-TCTH como a DECH. Objetivo: Este estudo retrospectivo investigou se incompatibilidades em 23 polimorfismos de único nucleotídeo (SNPs) nos genes C4A e C4B do MHC classe III estariam associados à maior incidência da DECH aguda (DECHa), crônica (DECHc) e mortalidade pós-TCTH não-aparentado. Casuística: 238 receptores(R), com idade entre 4 meses e 74 anos, 59% do sexo masculino, 52% com doenças malignas, transplantados entre 1996 e 2015, com células-tronco de medula óssea (83%) ou de sangue periférico (17%) obtidas de doadores(D) HLA-A, -B, -C, -DRB1, -DQB1 compatíveis, 61% com condicionamento mieloablativo, 90% receberam imunoprofilaxia com ciclosporina e metotrexato. Métodos: A tipagem dos 23 SNPs dos genes C4A e C4B foi realizada por amplificação alelo-específica (PCR-SSP) em 129 pares R-D e por sequenciamento de segunda geração em 109 pares R-D. Também avaliou-se o polimorfismo de HLA-DPB1 por sequenciamento de Sanger, uma vez que poderia haver associação de incompatibilidades não permissíveis deste gene com a DECH e ou mortalidade. Resultados: Dentre os pares R-D, 42,9% apresentaram 1-7 SNPs incompatíveis, cuja presença não foi associada com DECHa (RRS 0,99; p=0,948), DECHc (RRS 1,36; p=0,250) e mortalidade (RR 0,92; p=0,714). Somente 12 SNPs foram incompatíveis em 10 ou mais pares e puderam ter seu efeito isolado investigado, mas nenhum deles mostrou-se associado com DECH ou mortalidade. Na amostra total, 85,3% dos pares R-D apresentaram incompatibilidades DPB1, 41,6% permissíveis e 43,7% não permissíveis, mas sem associação com DECHa, DECHc ou mortalidade. Mesmo assim, estratificou-se os pares R-D conforme a compatibilidade DPB1: o grupo I incluiu pares R-D compatíveis e aqueles com incompatibilidades permissíveis, e o grupo II foi constituído somente de pares com incompatibilidades não permissíveis. Não houve associações entre incompatibilidades C4 e DECHa (RRS 1,03; p=0,922), DECHc (RRS 1,59; p=0,168) ou mortalidade (RR 1,21; p=0,544) no grupo I, e tampouco com respeito à DECHa (RRS 0,94; p=0,860), DECHc (RRS 1,08; p=0,855) ou mortalidade (RR 0,68; p=0,260) no grupo II . Conclusão: Apesar da identificação de incompatibilidades nos SNPs C4A e C4B entre R-D, esta característica não se mostrou fator de risco das formas aguda ou crônica da DECH e nem do aumento da mortalidade nos pacientes desta casuística. A ausência de associação pode ser devido ao pequeno tamanho amostral. Por outro lado, a diversidade nos genes C4A e C4B pode não influir na resposta imunológica da DECH. Palavras-chave: Polimorfismos de único nucleotídeo (SNPs). Genes C4 e C4B. MHC Classe III. Doador não aparentado. Transplante de Células-Tronco Hematopoiéticas. / Abstract: Introduction: Patient and donor HLA matching is not enough to avoid post-hematopoietic stem cell transplant (HSCT) complications such as graft-versus-host disease (GVHD), and this suggests that non-HLA diversity can also impacts transplant outcomes. MHC class III region hosts genes related to immune/inflammatory responses whose allelic variants have been associated to autoimmune diseases and some post-HSCT complications such as GVHD. Objective: This retrospective study investigated whether incompatibilities in one or more of 23 single-nucleotide-polymorphisms (SNPs) in the C4A and C4B genes (MHC class III) would be associated with higher incidence of GVHD and mortality post-unrelated HSCT. Casuistic: 238 recipients(R), age ranging from 4m to 74y, 59% male, 52% with malignant diseases, transplanted between 1996 and 2015 with hematopoietic stem cells from bone marrow (83%) or peripheral blood (17%) collected from HLA-A, -B, -C, -DRB1, -DQB1 matched donors (D), 61% underwent myeloablative conditioning and 90% received cyclosporine plus methotrexate as immunoprophylaxis. Methods: Typing of the 23 SNPs was done by allele-specific amplification (PCR-SSP) in 129 R-D pairs, and by next-generation sequencing in the remaining 109 R-D pairs. HLA-DPB1 polymorphism was also investigated by Sanger sequencing, once there could be associations between non-permissive mismatches on this gene and GVHD or mortality. Results: 42.9% R-D pairs had 1 to 7 C4 SNPs mismatched, but the presence of these mismatches was not associated with aGVHD (SHR 0.99; p = 0.948), cGVHD (SHR 1.36; P = 0.250) or mortality (HR 0.92; p = 0.714). Only 12 SNPs were mismatched in 10 or more R-D pairs and could have their isolated impact investigated, but none of them showed an association with GVHD or mortality. In the total sample, 85.3% R-D pairs showed DPB1 mismatches, 41.6% were permissibile and 43.7% non-permissible, but no association with aGVDH, cGVHD and mortality was found. Despite of the lack of association, R-D pairs were stratified according to DPB1 compatibility status: group I included matched pairs as well as those with permissive mismatches; and group II hosted only non-permissible mismatches. No association between C4A and C4B SNPs mismatches and aGVHD (SHR 1.03; p=0.922), cGVHD (SHR 1.59; p=0.168) or mortality (HR 1.21; p=0.544) was found in group I, and neither with aGVHD (SHR 0.94; p=0.860), cGVHD (SHR 1.08; p=0.855) or mortality (HR 0.68; p=0.260) in group II. Conclusion: Despite of the identification of C4 mismatches between R/D, this characteristic was not shown to be a risk factor for acute or chronic GVHD nor for the increase in mortality in this series of patients. The absence of associations may be due to the small sample size. On the other hand, the C4A and C4B genes diversity may not influence the immune response of the GVHD. Key words: Single nucleotide polymorphisms (SNPs). C4A and C4B genes. MHC Class III. Unrelated donor. Hematopoietic stem cell transplantation.

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