Besides the molecular mechanisms regulating activation of FLS mentioned above, we also investigated anti-inflammatory activities of Chinese herbal medicine sinomenine and Liang Miao San on activated human FLS in RA. Sinomenine, an alkaloid isolated from the root of Sinomenium acutum, has been used to alleviate the symptoms of rheumatic diseases. Liang Miao San (LMS), composed of the herbs Rhizoma Atractylodis (Cangzhu) and Cotex Phellodendri (Huangbai), is another traditional Chinese medicine formula for RA treatment. Since the potential anti-inflammatory activities of sinomenine and LMS have been demonstrated, we investigated the in vitro anti-inflammatory effects of sinomenine and LMS on inflammatory cytokine TNF-alpha activation of human normal and RA-FLS and the underlying intracellular mechanisms. In the present study, sinomenine was found to significantly inhibit TNF-alpha induced cell surface expression of VCAM-1 and release of inflammatory cytokine and chemokine IL-6, CCL2 and CXCL8 from both normal and RA-FLS (all p < 0.05). Our results provide a new insight into the differential anti-inflammatory activities of sinomenine and LMS through the suppression of TNF-alpha activated FLS by modulating distinct intracellular signaling pathways in RA, and help to provide a biochemical basis for the development of a cost-effective human synoviocyte model for the future screening of traditional Chinese medicine (TCM) possessing potential anti-rheumatic activities. (Abstract shortened by UMI.) / IL-27, a novel member of the IL-12 family that is produced early by antigen-presenting cells (APCs), can promote T cell proliferation as well as the production of interferon-gamma by naive T lymphocytes. Recent studies have found that elevated expression of IL-27 has been detected in the synovial membranes and fluid of RA. Herein we investigated the in vitro effects of IL-27, alone or in combination with inflammatory cytokine TNF-alpha or IL-Ibeta on the pro-inflammatory activation of human primary FLS isolated from RA patients and normal control subjects, and the underlying intracellular signaling molecules were also studied. We found that the plasma concentration of IL-27 in RA patients (n=112) was significantly higher than that in control subjects (n=46). Both normal and RA-FLS constitutively express functional IL-27 receptor heterodimer, gp130 and WSX-1, with more potent IL-27-mediated activation of signal transducers and activators of transcription (STAT)1 in RA-FLS. IL-27 was found to induce significantly higher cell surface expression of intercellular adhesion molecule (ICAM)-1 and vascular cell adhesion molecule (VCAM)-1 and release of inflammatory cytokine IL-6, chemokine CCL2, CXCL9, CXCL10 and matrix metalloproteinase (MMP)-1 of RA-FLS than that of normal FLS (all p < 0.05). The above findings therefore provide a new insight into the IL-27-activated immunopathological mechanisms mediated by distinct intracellular signal transductions in joint inflammation of RA and may have important therapeutic implications. / In the present study, we have investigated the mechanisms of the activation of human fibroblast-like synoviocytes (FLS) induced by various stimuli including interleukin (IL)-27, tumor necrosis factor (TNF)-alpha and IL-beta. The activation of human FLS was studied in terms of the release of cytokines and chemokines and the expression of adhesion molecules. / We investigated the in vitro effects of uric acid crystals, alone or in combination with inflammatory cytokine TNF-alpha or IL-beta on the pro-inflammatory activation of human FLS from RA patients and normal control subjects, and the underlying intracellular signaling molecules were also determined. In the present study, uric acid crystals were found to result in a significant increase of inflammatory cytokine IL-6, chemokine CXCL8 and MMP-1 from both normal and RA-FLS (all p < 0.05). Moreover, additive or synergistic effect was observed in the combined treatment of uric acid crystals and TNF-alpha or IL-1beta on the release of IL-6, CXCL8 and MMP-1 from both normal and RA-FLS. Further investigations showed that the release of inflammatory cytokine, chemokine and matrix metalloproteinase stimulated by uric acid crystals was differentially regulated by intracellular activation of extracellular signal-regulated kinase (ERK) and JNK pathways. Our results therefore provide a new insight into the endogenous danger signal uric acid crystals-activated immunopathological mechanisms mediated by distinct intracellular signal transductions in joint inflammation, and also provide biochemical basis for the development of new modality for inflammatory rheumatic diseases. / Chen, Dapeng. / Adviser: Wong Chun Kwok. / Source: Dissertation Abstracts International, Volume: 73-04, Section: B, page: . / Thesis (Ph.D.)--Chinese University of Hong Kong, 2011. / Includes bibliographical references (leaves 203-240). / Electronic reproduction. Hong Kong : Chinese University of Hong Kong, [2012] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Electronic reproduction. [Ann Arbor, MI] : ProQuest Information and Learning, [201-] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Abstract also in Chinese.

A periodontite agressiva (PAg) compreende um grupo de doenças periodontais caracterizadas por rápida destruição dos tecidos periodontais, em indivíduos jovens e que geralmente não apresentam doenças sistêmicas. Estudos em populações e em famílias indicaram que fatores genéticos possuem influência na susceptibilidade à PAg. Os polimorfismos genéticos da interleucina-1 (IL-1) e do fator de necrose tumoral-? (TNF-?) foram associados com o aumento da severidade da periodontite. O objetivo deste estudo foi avaliar a associação entre o polimorfismo dos genes IL-1A (-889), IL-1B (-511), IL-1B (+3954), IL-1RN (íntron 2-VNTR) e TNFA (-308) e a PAg. O DNA genômico foi extraído de 150 indivíduos não fumantes, sendo 50 portadores de PAg e 100 indivíduos com periodonto saudável. O polimorfismo dos genes IL-1A (-889), IL-1B (-511), IL-1B (+3954) e TNFA (-308) foi analisado utilizando-se a técnica da reação em cadeia da polimerase e análise do polimorfismo de comprimento dos fragmentos de restrição (PCR-RFLP). O polimorfismo de número variável de repetições em tandem (VNTR) no íntron 2 do gene IL-1RN foi detectado pela técnica da PCR e análise do tamanho dos fragmentos. A análise estatística revelou que não houve diferença significante na freqüência dos genótipos e alelos, entre o grupo com PAg e os indivíduos com periodonto saudável, para IL-1A (-889), IL-1B (-511), IL-1B (+3954) e TNFA (-308) (p-valor>0.05%). Entretanto, houve diferença estatisticamente significante, entre os dois grupos, na distribuição dos genótipos para IL-1RN (íntron 2-VNTR) (teste Exato de Fisher; p-valor=0,021) e alelos (teste Exato de Fisher; p-valor=0,04). Os achados sugerem que o polimorfismo do gene IL-1RN (íntron 2-VNTR) está associado com a PAg na população estudada. / Aggressive periodontitis (AgP) is a type of periodontal disease characterized by a rapid destruction of the periodontal supporting tissues in young adults who are usually systemically well. Population and family studies indicate that genetic factors seem to have a strong influence on susceptibility to AgP. Genetic polymorphism at the interleukin-1 (IL-1) and tumor necrosis factor alpha (TNFA) were associated with the increase on the severity of periodontitis. This study aimed at finding a possible association between IL-1A (-889), IL-1B (-511), IL-1B (+3954), IL-1RN (intron 2-VNTR) and TNFA (-308) polymorphism in patients with aggressive periodontitis. Genomic DNA was extracted from the saliva of 150 nonsmoking subjects, 50 patients with AgP and 100 periodontal healthy subjects. All individuals were systemically healthy. The polymorphisms of IL-1A (-889), IL-1B (-511), IL-1B (+3954) and TNFA (-308) were analyzed by means of polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). The polymorphism of a variable number tandem repeat (VNTR) in intron 2 of the IL-1RN gene was detected by PCR amplification and fragment size analysis. Statistical analysis revealed no significant difference in the IL-1A (-889), IL-1B (-511), IL-1B (+3954) and TNFA (-308) genotypes and allele frequencies between AgP patients and periodontal healthy subjects (p-value>0.05%). However, there were significant differences among the groups in the distribution of IL-1RN (íntron 2-VNTR) genotypes (Fisher\'s exact test; p-value=0.021) and allele frequencies (Fisher\'s exact test; p-value=0.04). These findings suggest that IL-1RN (intron 2-VNTR) polymorphism is associated with AgP in the population presented here.

A doença de Crohn é uma inflamação crônica do trato gastrointestinal. O tratamento convencional é muitas vezes desapontador. Apesar da variedade de drogas disponíveis para o tratamento da doença inflamatória intestinal, tais como: salicilatos e seus derivados, corticosteróides, antibióticos e imunossupressores, nenhuma destas mostrou ser totalmente eficaz ou definitiva para o tratamento da doença e seus surtos de exacerbação. Pesquisas têm sido desenvolvidas com o objetivo de apresentar drogas mais efetivas. Dentre estas, destacam-se as drogas biológicas. O infliximabe é um anticorpo monoclonal quimérico anti-fator de necrose tumoral alfa e está indicado na doença de Crohn refratária e fistulizante. O objetivo deste estudo visa avaliar prospectivamente os resultados e efeitos colaterais precoces e tardios do uso do anti-TNF alfa no tratamento de 60 doentes com doença de Crohn, no período de julho de 1999 a dezembro de 2005. Os doentes foram tratados com anti-TNF alfa (infliximabe), na dose de 5mg/kg de peso, aplicado por via endovenosa em intervalos de dois meses. A avaliação foi realizada por protocolo clínico que classificava os quesitos: estado geral, sintomas intestinais e doença perianal em melhor, inalterado e pior, e pelo índice de atividade da doença de Cronh. Os doentes tratados com anti-TNF alfa apresentaram mediana de duração da doença de sete anos, variando de um a 28 anos entre a data do início dos sintomas e a data de início da pesquisa. 34 doentes (56,7%) já haviam sido submetidos a uma ou mais operações abdominais e 38 (63,3%) a operações orificiais. O software utilizado para a realização dos cálculos foi o SPSS® 9.0 for Windows, sendo estatisticamente significantes os testes com p<0,05. Foram aplicadas 225 doses de anti-TNF alfa, em média, 3,7 doses por paciente num período de aproximadamente cinco anos, variando de uma a 14 doses. No tratamento inicial 76% dos pacientes responderam a droga. As principais indicações para o emprego do anti-TNF alfa foram a presença de doença perianal em 36 casos (60%) e a intratabilidade clínica em 24 casos (40%). Observou-se que após a primeira dose da medicação, os doentes com mais de dez anos de doença e submetidos à operação abdominal tiveram resultado satisfatório semelhantemente aqueles doentes com menos de cinco anos de doença e não operados com p<0,05. O índice de atividade da doença de Crohn foi em média de 189,7 antes do início do tratamento e na primeira aplicação diminuiu em média para 135,4, e progressivamente ao longo das aplicações (115, 102, 109 e 88,4 até a quinta dose), sendo o resultado estatisticamente significativo. Houve efeito colateral em 40 aplicações (17,8%), sendo os efeitos principais: eritema cutâneo, dispnéia e dor abdominal. O tratamento com anti-fator de necrose tumoral alfa, obedecidas as indicações precisas, associou-se a baixo índice de efeitos colaterais graves tendo apresentado bons resultados na resolução da doença de Crohn perianal, na melhora da sintomatologia intestinal e no estado geral dos pacientes / Crohn´s disease is a chronic inflammatory disorder of the gastrointestinal tract. Conventional treatment is many times disappointing. Besides the great number of available medications to treat inflammatory bowel diseases, such as salicilates and derivatives, corticosteroids, antibiotics and immunosuppressive agents, none of them proved to be totally efficient or the ultimate treatment for inflammatory diseases and their exacerbation. Researches have been carried out to find more effective therapeutic drugs. Among these therapeutics, biologic treatments have been in evidence. Infliximab is a chimeric IgG1 monoclonal antibody against tumor necrosis factor-alpha, and is indicated for refractory luminal and fistulizing Crohns disease. The aim of this study is to prospectively evaluate the outcome, early and late adverse events, in 60 patients diagnosed with Crohn´s disease and treated with infliximab between July 1999 and December 2005. All patients were treated with anti-TNF-alpha (infliximab), 5mg/kg/dose, intravenously, each two months. Patients were clinically evaluated using a protocol that classified the evolution of the health status, intestinal symptoms and perianal disease, as better, worse or unchanged, during the treatment. Crohn´s disease activity index was also evaluated. Patients treated with anti-TNF-alpha presented a median disease duration of seven (range 1-28) years, between the beginning of the disease symptoms and the beginning of the research protocol. Thirty-four patients (56.7%) have been submitted to one or more abdominal surgeries before, and 38 (63.3%) to anal-rectum surgeries. All statistics tests were performed with computer software Statistical Package for the Social Sciences (SPSS® 9.0) for WindowsTM, and p values of less than 0.05 were considered statistically significant. Totals of 225 anti-TNF-alpha doses were administered. The mean doses administered per patient, in a period of approximately five years, were 3.7 (range 1-14) doses. After the initial treatment, 76% of the patients achieved a response. The most frequent indications for anti-TNF-alpha was perianal disease, occurring in 36 patients (60%), and clinical failure to the conventional treatment, happening in 24 patients (40%). After the first dose of anti-TNF-alpha, patients with more than 10 years of treatment and previously submitted to abdominal surgery presented a satisfactory outcome, similar to those with less than 5 years of disease and not submitted to surgery, p<0.05. Crohn´s disease activity index showed a mean index of 189.7 before treatment, that decreased to 135.4 after the first dose, and progressively decreased with the subsequent doses (means: 115, 102, 109 and 88.4, until the fifth dose, p<0.05). Adverse events were reported in 40 administrations (17,8%) from the total. The most prevalent adverse events were: rash, dyspnoea and abdominal pain. The treatment with anti-TNF-alpha, following precise indications, was associated with a low incidence of severe adverse events and presented good outcomes in the resolution of perianal Crohn´s disease, improving intestinal symptomatology and patients´ health status

A periodontite agressiva (PAg) compreende um grupo de doenças periodontais caracterizadas por rápida destruição dos tecidos periodontais, em indivíduos jovens e que geralmente não apresentam doenças sistêmicas. Estudos em populações e em famílias indicaram que fatores genéticos possuem influência na susceptibilidade à PAg. Os polimorfismos genéticos da interleucina-1 (IL-1) e do fator de necrose tumoral-? (TNF-?) foram associados com o aumento da severidade da periodontite. O objetivo deste estudo foi avaliar a associação entre o polimorfismo dos genes IL-1A (-889), IL-1B (-511), IL-1B (+3954), IL-1RN (íntron 2-VNTR) e TNFA (-308) e a PAg. O DNA genômico foi extraído de 150 indivíduos não fumantes, sendo 50 portadores de PAg e 100 indivíduos com periodonto saudável. O polimorfismo dos genes IL-1A (-889), IL-1B (-511), IL-1B (+3954) e TNFA (-308) foi analisado utilizando-se a técnica da reação em cadeia da polimerase e análise do polimorfismo de comprimento dos fragmentos de restrição (PCR-RFLP). O polimorfismo de número variável de repetições em tandem (VNTR) no íntron 2 do gene IL-1RN foi detectado pela técnica da PCR e análise do tamanho dos fragmentos. A análise estatística revelou que não houve diferença significante na freqüência dos genótipos e alelos, entre o grupo com PAg e os indivíduos com periodonto saudável, para IL-1A (-889), IL-1B (-511), IL-1B (+3954) e TNFA (-308) (p-valor>0.05%). Entretanto, houve diferença estatisticamente significante, entre os dois grupos, na distribuição dos genótipos para IL-1RN (íntron 2-VNTR) (teste Exato de Fisher; p-valor=0,021) e alelos (teste Exato de Fisher; p-valor=0,04). Os achados sugerem que o polimorfismo do gene IL-1RN (íntron 2-VNTR) está associado com a PAg na população estudada. / Aggressive periodontitis (AgP) is a type of periodontal disease characterized by a rapid destruction of the periodontal supporting tissues in young adults who are usually systemically well. Population and family studies indicate that genetic factors seem to have a strong influence on susceptibility to AgP. Genetic polymorphism at the interleukin-1 (IL-1) and tumor necrosis factor alpha (TNFA) were associated with the increase on the severity of periodontitis. This study aimed at finding a possible association between IL-1A (-889), IL-1B (-511), IL-1B (+3954), IL-1RN (intron 2-VNTR) and TNFA (-308) polymorphism in patients with aggressive periodontitis. Genomic DNA was extracted from the saliva of 150 nonsmoking subjects, 50 patients with AgP and 100 periodontal healthy subjects. All individuals were systemically healthy. The polymorphisms of IL-1A (-889), IL-1B (-511), IL-1B (+3954) and TNFA (-308) were analyzed by means of polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). The polymorphism of a variable number tandem repeat (VNTR) in intron 2 of the IL-1RN gene was detected by PCR amplification and fragment size analysis. Statistical analysis revealed no significant difference in the IL-1A (-889), IL-1B (-511), IL-1B (+3954) and TNFA (-308) genotypes and allele frequencies between AgP patients and periodontal healthy subjects (p-value>0.05%). However, there were significant differences among the groups in the distribution of IL-1RN (íntron 2-VNTR) genotypes (Fisher\'s exact test; p-value=0.021) and allele frequencies (Fisher\'s exact test; p-value=0.04). These findings suggest that IL-1RN (intron 2-VNTR) polymorphism is associated with AgP in the population presented here.

Li Qing. / "July 2004." / Thesis (Ph.D.)--Chinese University of Hong Kong, 2004. / Includes bibliographical references (p. 161-192). / Electronic reproduction. Hong Kong : Chinese University of Hong Kong, [2012] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Mode of access: World Wide Web. / Abstracts in English and Chinese.

As complicações hepáticas secundárias à infecção crônica pelo vírus da hepatite C (HCV) são uma importante causa de morte em portadores da infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV). Pacientes com coinfecção HIV/HCV apresentam progressão acelerada da fibrose hepática, na qual há participação da resposta inflamatória do sistema imunológico, e requerem maior atenção no tratamento da hepatite C e de suas reações adversas. Assim, os objetivos principais do estudo foram tipificar e comparar os polimorfismos -607 e -137 da interleucina-18 (IL-18), +874 do interferon gama (IFN-?? e -308 e -238 do fator de necrose tumoral alfa (TNF- ?? em quatro grupos (coinfecção HIV/HCV, monoinfecção pelo HIV, monoinfecção pelo HCV e controles saudáveis); investigar a associação dos alelos e genótipos desses polimorfismos com a resposta ao tratamento da hepatite C (respondedor e não respondedor), graus de atividade necroinflamatória (METAVIR A0A1 vs. A2A3) e de fibrose hepática (METAVIR F0-F2 vs. F3F4) em portadores do HCV e identificar os sinais e sintomas relacionados às reações adversas do tratamento da hepatite C. Os dados foram coletados nos prontuários médicos e no sistema informatizado do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto e os polimorfismos tipificados pela técnica de reação em cadeia da polimerase com iniciadores de sequência específica. Participaram do estudo 400 indivíduos, distribuídos em quatro grupos de 100, predominantemente constituídos por homens com idade média entre 33 e 50 anos. Na avaliação geral, os genótipos -238 G/G (TNF-?? e +874 A/A (IFN-?? foram mais frequentes no grupo coinfecção HIV/HCV em relação ao monoinfecção pelo HCV. O genótipo -308 G/A e o alelo -308 A (TNF-?? foram associados com a susceptibilidade à coinfecção HIV/HCV e o genótipo -308 G/G e o alelo -308 G (TNF-?), com proteção. No grupo coinfecção HIV/HCV, a frequência do genótipo - 137 G/C (IL-18) foi maior nos sujeitos com atividade necroinflamatória A0A1 que nos com A2A3. Nos pacientes com fibrose F3F4, o genótipo -238 G/G (TNF-?? foi mais frequente no grupo coinfecção HIV/HCV que no monoinfecção pelo HCV e naqueles com F0-F2, o genótipo +874 A/A (IFN-?? também foi mais frequente no grupo coinfecção HIV/HCV. A frequência do genótipo +874 T/T (IFN-??, dentre os pacientes do grupo coinfecção HIV/HCV, foi maior naqueles com fibrose F3F4 que nos com F0-F2. Não foram encontradas associações estatisticamente significantes entre as frequências alélicas e genotípicas e os tipos de resposta ao tratamento da hepatite C nos pacientes do grupo coinfecção HIV/HCV; nos do monoinfecção pelo HCV, houve diferenças nas frequências alélicas e genotípicas (posição -238 do TNF-?) entre pacientes respondedores e não respondedores. Os principais sinais e sintomas relacionados às reações adversas do tratamento da hepatite C foram mialgia, febre, fraqueza, cefaleia e hiporexia. Anemia, hiporexia e vômito foram mais frequentes no grupo coinfecção HIV/HCV. Conclui-se que há relação dos alelos e genótipos de citocinas com a gravidade da doença hepática e resposta ao tratamento da hepatite C. Adicionalmente, algumas reações adversas ao tratamento foram mais pronunciadas em coinfectados HIV/HCV / Hepatic complications secondary to chronic infection by hepatitis C virus (HCV) are a major cause of death in people infected by the human immunodeficiency virus (HIV). Patients with HIV/HCV coinfection present rapid progression of liver fibrosis, with involvement of the immune system\'s inflammatory response, and require more attention in hepatitis C treatment and its adverse reactions. The main goals of this study were to typify and compare the polymorphisms -607 and -137 of the interleukin-18 (IL-18), +874 of the interferon gamma (IFN-?? and -308 and -238 of the tumor necrosis factor-alpha (TNF-?? in four groups (HIV/HCV coinfection, HIV monoinfection, HCV monoinfection and healthy controls), to investigate the association of the alleles and genotypes of these polymorphisms with response to hepatitis C treatment (responder and non-responder), degrees of necroinflammatory activity (METAVIR A0A1 vs. A2A3) and of liver fibrosis (METAVIR F0-F2 vs. F3F4) in HCV patients and to identify the signs and symptoms related to adverse reactions of hepatitis C treatment. Data were collected on medical records and on the computerized system of the Hospital das Clínicas of the University of São Paulo Ribeirão Preto Medical School and the polymorphisms were typified using the polymerase chain reaction technique with sequence specific primers. The study included 400 individuals, distributed in four groups of 100, predominantly consisting of men with an average age between 33 and 50 years. In the overall evaluation, genotypes -238 G/G (TNF-?? and +874 A/A (IFN-?? were more frequent in the HIV/HCV coinfection group compared to HCV monoinfection. The genotype -308 G/A and allele -308 A (TNF-?? were associated with susceptibility to HIV/HCV coinfection and the genotype -308 G/G and allele -308 G (TNF-?), with protection. In the HIV/HCV coinfection group, the frequency of genotype -137 G/C (IL-18) was greater in subjects with necroinflammatory activity A0A1 than in the ones with A2A3. In patients with fibrosis F3F4, genotype -238 G/G (TNF-?? was more frequent in the HIV/HCV coinfection than in the HCV monoinfection group and in those with fibrosis F0-F2, genotype +874 A/A (IFN-?? was also more frequent in the HIV/HCV coinfection group. The frequency of genotype +874 T/T (IFN-??, among patients of the HIV/HCV coinfection group, was higher in those with fibrosis F3F4 compared to the ones with F0-F2. No statistically significant associations were found between the allele and genotype frequencies and the types of answer to hepatitis C treatment in patients of the HIV/HCV coinfection group. On the ones of the HCV monoinfection group, there were differences on the allele and genotype frequencies (position -238 of TNF-?? among responder and non-responder patients. The main signs and symptoms related to adverse reactions to hepatitis C treatment were myalgia, fever, weakness, headache and loss of appetite. Anemia, loss of appetite and vomiting were more frequent in the HIV/HCV coinfection group. It is concluded that there is relationship of the alleles and genotypes of cytokines with the severity of liver disease and response to hepatitis C treatment. Additionally, some adverse reactions to treatment were more frequent in HIV/HCV coinfected patients

O tratamento de pacientes apresentando doenças inflamatórias imunomediadas com drogas anti-TNF-alfa aumenta o risco da reativação da tuberculose. Isso sugere que tais drogas possam afetar a imunidade celular destes. No entanto, há dados conflitantes sobre se esse tratamento suprime as respostas para o teste tuberculínico (TT) e os ensaios de liberação de interferon-gama (IGRAs) e poucos dados em pacientes com psoríase. O presente estudo avaliou pacientes com psoríase moderada a grave enfocando os efeitos do tratamento com infliximabe em suas respostas imunológicas celulares. Foram avaliadas as respostas imunes celulares de doze pacientes antes e durante o tratamento com infliximabe. As células mononucleares do sangue periférico (PBMC) foram estimuladas com a fito-hemaglutinina (PHA), o superantígeno enterotoxina B (SEB), um lisado de citomegalovírus (CMV), e antígenos de Mycobacterium tuberculosis, e a ativação de linfócitos foi avaliada por ELISPOT para enumerar células secretoras de IFN-y, por ELISA para detecção da secreção de IFN-y, e através da incorporação de[3H] timidina para medir a proliferação. O tratamento com infliximabe não levou à redução de INF-y e da resposta linfoproliferativa nos pacientes. Pelo contrário, aumentou a liberação desta citocina em culturas de PBMC estimulados com PHA e SEB por 12 h. Este efeito foi mais notado no pico do efeito clínico do agente anti-TNF (7 semanas de tratamento) e menos proeminente no seu nadir (logo antes da infusão da próxima dose). Reatividade imunitária ao CMV também não foi significativamente afetada, notando-se leve aumento pelo agente anti-TNF. É de se notar que secreção de IFN-y e resposta proliferativa a Mtb dos dois pacientes TT positivos foram, também, visivelmente aumentadas na semana 7, declinando quando infliximabe atingiu o seu nadir. Os efeitos deletérios do bloqueio do TNF em pacientes com psoríase grave, submetidos ao tratamento com infliximabe parecem ser atenuados, pelo menos parcialmente, por um efeito de aumento na imunidade mediada por células desses pacientes, possivelmente pela diminuição da ação imunossupressora decorrente do excesso de TNF / Treatment of patients with immune-mediated inflammatory diseases with anti-TNF agents increases the risk of tuberculosis reactivation, suggesting that it may affect their cellular immune response. However, there are conflicting data on whether anti-TNF treatment suppresses the responses to tuberculin skin test (TST) and interferon-y release assays and no information regarding psoriasis patients on anti-TNF treatment. The present study evaluated patients with moderate to severe psoriasis focusing on the effects of treatment with infliximab on their cellular immune responses. Cellular immune responses of twelve patients were evaluated before and during infliximab treatment. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were stimulated with phytohemaglutinin (PHA), the superantigen enterotoxin B (SEB), a cytomegalovirus lysate (CMV), and Mycobacterium tuberculosis antigens, and the lymphocyte activation was evaluated by ELISPOT for enumeration of IFN-y-secreting cells, ELISA for detection of secreted IFN-y, and by [3H]thymidine incorporation for proliferation measurement. Treatment with infliximab does not lead to reduction in the INF-y and lymphoproliferative responses of patients. It rather increased the overnight release of this cytokine in PBMC cultures stimulated with PHA and SEB. This effect was most noted at the peak of the clinical effect of the anti-TNF agent (week 7 of treatment) and less prominent at its nadir (just before infusion of the next dose). Immune reactivity to CMV was also either unaffected or slightly increased by the TNF blocking agent. Of note, the IFN-y and proliferative responses to Mtb from the two TST-responder patients were also remarkably increased at week 7, declining when infliximab reached its nadir. The deleterious consequences of TNF blockade in patients with severe psoriasis undergoing infliximab treatment may be in part attenuated by an enhancing effect on the cell mediated immunity of the patients, possibly due to the abbreviation of the immunosuppressive effect of TNF overexpression

O Fator de Necrose Tumoral-alfa (TNF-alfa) possui um importante papel na imunopatogênese da psoríase e agentes biológicos, como os inibidores de TNF-alfa, têm apresentado bons resultados no tratamento desta. No entanto, estes agentes foram associados ao aumento de casos de reativação de tuberculose entre os pacientes que os utilizaram. Este estudo foi realizado com o intuito de avaliar a resposta imune de pacientes com psoríase grave, ativa, sem tratamento, frente a antígenos de Mycobacterium tuberculosis (Mtb), e o efeito dos inibidores de TNF-alfa nesta resposta. Estudamos 24 pacientes com psoríase grave divididos em 2 grupos: não reatores (n = 14) e reatores (n = 10) ao teste intradérmico com PPD. Como controle, utilizamos um total de 26 indivíduos sadios, também separados em 2 grupos segundo a reatividade ao PPD (PPD-, n = 13; PPD+, n = 13). Em uma segunda etapa estudamos 11 pacientes com psoríase leve a moderada, também sem tratamento, PPD (-) para avaliarmos a importância da gravidade da psoríase na resposta aos antígenos micobacterianos. Avaliamos a resposta imunológica in vitro através da linfoproliferação, quantificação da produção de IFN-gama (ELISA) e quantificação de células produtoras de IFN-gama (ELISPOT), na presença e ausência dos inibidores de TNF-alfa (infliximab e etanercepte), utilizando os antígenos purificados ESAT-6, Ag85B e o antígeno bruto sonicado da cepa H37Rv (AgSMtb), e o mitógeno fitohemaglutinina (PHA). Os pacientes com psoríase grave PPD (-) apresentaram reposta linfoproliferativa e níveis de IFN-gama menores que nos controles PPD (-). Os pacientes com psoríase leve a moderada apresentaram resposta imune intermediária entre controles e pacientes graves. Em relação aos inibidores de TNF- alfa, verificou-se que infliximab e etanercepte apresentaram diferença em suas capacidades de inibição, sendo que somente o infliximab ocasionou a inibição total de TNF-alfa. Em contrapartida o etanercept manteve a produção de TNF-alfa, e em alguns casos elevou sua produção. Estes diminuíram apenas parcialmente a reatividade in vitro dos pacientes com psoríase, uma vez que a secreção de IFN-gama e o número de células produtoras de IFN-gama não foram alterados na presença dos inibidores. A secreção de IL-10 foi diminuída tanto na presença do infliximab, quanto na presença do etanercepte. Os dados obtidos permitem concluir que (a) os pacientes com psoríase grave PPD (-) apresentam uma baixa reatividade in vitro, principalmente das respostas que avaliam linfócitos T de memória central, aos antígenos de Mtb, sendo que essa baixa reatividade não está totalmente relacionada com a gravidade da doença, uma vez que os pacientes com psoríase leve a moderada apresentaram resposta intermediária a dos controles e pacientes com psoríase grave; (b) e que apesar dos inibidores de TNF- alfa promoverem uma inibição parcial da resposta imune, a reativação da tuberculose estaria mais relacionada à própria ausência de TNF-alfa, não compensada pela atuação isolada, e provavelmente insuficiente, de IFN-gama na manutenção do granuloma, do que a outras substanciais modificações na resposta imunológica frente aos antígenos micobacterianos. / Tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) has a pivotal role in psoriasis pathogenesis and biologic agents, such as TNF-alpha inhibitors, have provided good results in its treatment. However, the use of these agents has been associated with an increase in the number of cases of tuberculosis reactivation. This study aimed to evaluate the immune response of severe psoriasis patients, with active, untreated disease to relevant Mycobcterium tuberculosis antigens, and the effect of the TNF-alpha inhibitors (infliximab and etanercept) in this response. Twenty four severe psoriasis patients were enrolled and divided in two groups according to their reactivity to the tuberculin skin test: TST (n= 14) and TST + (n=10). As controls, we studied 26 healthy donors, also divided in two groups to the TST reactivity (TST -, n=13; TST+, n=13). Eleven mild to moderate psoriasis patients, untreated, TST (-) were studied to evaluated the role of psoriasis severity in the immune response to the mycobacterial antigens. Immune responses were evaluated in vitro by the lymphocyte proliferative response (LPR) assay, ELISA for IFN-? secretion by peripheral blood mononuclear cells and enumeration of IFN-? secreted cells (ELISPOT) induced in response to the purified antigens ESAT-6, Ag85B and a crude sonicated antigen preparation from H37Rv Mtb strain (AgSMtb), as well as to the mitogen phytohemagglutinin (PHA), in the presence or absenceinflimab/etanercept. The LPR and IFN-g secretion to Mtb antigens were lower in TST- severe psoriasis patients than TST- controls. Mild to moderate psoriasis patients had intermediate responses, between controls and severe psoriasis patients. The TNF-a inhibitors infliximab and etanercept showed differences in their inhibitiory activity, since only infliximab was capable to neutralize all TNF-a. On the other hand, etanercept kept TNF-alpha production, and in some cases even increased its production. The TNF-alpha inhibitors diminished partially the in vitro patients immune responses, since the IFN-? secretion and enumeration of IFN-? secreted cells were not affected. IL-10 secretion was diminished with both TNF-a inhibitors. In conclusion: (a) TST(-) severe psoriasis patients have decreased in vitro reactivity, mainly in those responses that evaluate central memory T-cell responses, to Mtb antigens, and this decrease could not be fully explained by disease severity, since mild psotiasis patients had intermediate responses; (b) and despite the fact that TNF-alpha inhibitors promote a partial immune response inhibition, tuberculosis reactivation could be related more with the lack of TNF-alpha, which was probably not compensated by the IFN-g activity alone, probably insufficient, to the support granuloma formation, than other defects of the immune response to Mtb antigens.

Introdução: Baixas concentrações séricas de esclerostina foram descritas em pacientes com Espondilite Anquilosante (EA). No entanto, não existem dados sobre a importância deste inibidor da via de sinalização Wnt em pacientes com EA durante o tratamento com anti fator de necrose tumoral alfa (TNFa). Objetivos: Avaliar longitudinalmente os níveis séricos de esclerostina e sua associação com inflamação e densidade mineral óssea (DMO) em pacientes com EA em tratamento com anti-TNFa. Métodos: Trinta pacientes com EA em atividade foram avaliados no início, 6 e 12 meses, após terapia anti-TNFa em relação aos parâmetros clínicos (BASDAI, BASFI, BASMI e ASQoL), marcadores inflamatórios e dano radiológico basal (mSASSS). Trinta indivíduos saudáveis pareados por idade e sexo constituíram o grupo controle. As análises laboratoriais de esclerostina e da ligação de esclerostina ao receptor LRP6 e a DMO foram realizadas nos pacientes nos mesmos períodos de avaliação e comparadas aos controles. Resultados: Na avaliação inicial, pacientes com EA apresentavam menores concentrações séricas de esclerostina [60,5 (32,7) vs. 96,7 (52,9) pmol/l,P=0,002] e níveis similares de ligação de esclerostina ao receptor LRP6 (P=0,387) em relação aos controles. Foi observado melhora do BASDAI, BASFI, BASMI, ASQoL comparando tempo basal vs. 6 vs. 12 meses (P<0,01). Concomitantemente, observou-se um aumento gradual da DMO da coluna lombar (P<0,001) e no início do estudo os pacientes apresentavam uma correlação positiva entre avaliação radiológica basal (mSASSS) e a DMO da coluna lombar (r=0,468, P<0,01). Foi observada também uma redução dos marcadores inflamatórios comparando tempo basal vs. 6 vs. 12 meses (P<0,01). Os níveis de esclerostina aumentaram progressivamente após o tratamento com anti-TNFa [60,5 (32,7) vs. 67,1 (31,9) vs. 72,7 (32,3) pmol/l, P<0,001]. Entretanto, após 12 meses de terapia anti-TNFa as concentrações séricas de esclerostina permaneceram significativamente mais baixos em relação os controles [72,7 (32,3) vs. 96,7 (52,9) pmol/l, P=0,038]. Além disso, aos 12 meses, os níveis séricos de esclerostina ficaram mais baixos nos 10 pacientes que ainda apresentavam proteína C reativa elevada (PCR=5mg/l), comparados aos pacientes que apresentaram normalização dos níveis de PCR (P=0,004). Interessantemente, estes 10 pacientes com inflamação persistente já apresentavam concentrações séricas mais baixas de esclerostina quando comparados aos demais pacientes (P=0,023) antes do tratamento com anti- TNFa. A análise de regressão logística demonstrou que os pacientes com EA com níveis baixos de esclerostina apresentam um risco aumentado de apresentar PCR alta após 12 meses de tratamento (odds ratio = 7,43, 95% IC 1,23-45,01, P=0,020) quando comparados aos pacientes com níveis altos de esclerostina no tempo basal. Conclusão: Concentrações persistentemente baixas de esclerostina estão associados a inflamação contínua em pacientes com EA tratados com terapia anti-TNFa. / Introduction: Sclerostin levels have been reported to be low in ankylosing spondylitis (AS), but there is no data regarding the possible role of this Wnt inhibitor during anti tumor necrosis factor alpha (TNFa) therapy. Objectives: The present study longitudinally evaluated sclerostin levels, inflammatory markers and bone mineral density (BMD) in AS patients under anti-TNFa therapy. Methods: Thirty active AS patients were assessed at baseline, 6 and 12 months after anti-TNFa therapy regarding clinical parameters (BASDAI, BASFI, BASMI and ASQoL), inflammatory markers, BMD and baseline radiographic damage (mSASSS). Thirty age- and sex-matched healthy individuals comprised the control group. Patients\' sclerostin levels, sclerostin binding LRP6 and BMD were evaluated at the same time points and compared to controls. Results: At baseline, AS patients had lower sclerostin levels [60.5 (32.7) vs. 96.7 (52.9) pmol/l, P=0.002] and comparable sclerostin binding to LRP6 (P=0.387) than controls. Improvement of BASDAI, BASFI, BASMI, ASQoL was observed at baseline vs. 6 vs. 12 months (P<0.01). Concomitantly, a gradual increase in spine BMD (P<0.001) and a positive correlation between baseline mSASSS and spine BMD was found (r=0.468, P<0.01). Inflammatory parameters reduction was observed comparing baseline vs. 6 vs. 12 months (P<0.01). Sclerostin levels progressively increased [60.5 (32.7) vs. 67.1 (31.9) vs. 72.7 (32.3) pmol/l, P<0.001] after anti-TNFa treatment. At 12 months, the sclerostin levels remained significantly lower in patients compared to controls [72.7 (32.3) vs. 96.70 (52.85) pmol/l, P=0.038]. Moreover, sclerostin serum levels at 12 months were lower in the 10 patients with high CRP (=5mg/l) compared to the other 20 patients with normal CRP (P=0.004). Of note, these 10 patients with persistent inflammation also had lower sclerostin serum levels at baseline compared to the other patients (P=0.023). Univariate logistic regression analysis demonstrated that AS patients with lower sclerostin serum levels had an increased risk to have high CRP at 12 months (odds ratio=7.43, 95% CI 1.23-45.01, P=0.020) than those with higher sclerostin values. Conclusion: Persistent low sclerostin levels may underlie continuous inflammation in AS patients under anti-TNFa therapy.

Recomendações para rastreamento de Tuberculoses Latente (TBL) em pacientes que receberão tratamento com antagonistas do TNF-alfa (anti- TNF) permanecem controversas para regiões endêmicas Objetivo: Esse estudo buscou demonstrar a eficácia em longo prazo do rastreamento e tratamento da TBL em pacientes portadores de Artrite Reumatoide (AR) recebendo anti-TNF. Métodos: 202 pacientes com AR, antes do início do anti-TNF, foram rastreados para TBL por meio do teste tuberculínico (TT), Radiografia de tórax (RX) e história de prévia de exposição à tuberculose (EXP). Todos os pacientes foram seguidos com intervalos de um a três meses. Resultados: 85 pacientes (42%) foram tratados com um único agente anti-TNF e 117 pacientes (58%) mudaram de anti-TNF uma ou duas vezes. O rastreamento para TBL foi positivo em 66 pacientes, 44 apresentaram TT positivo, 23 apresentavam história de exposição (EXP), e 14, alterações radiográficas (RX). EXP isoladamente foi responsável por 14 diagnósticos em pacientes TT negativos. Pacientes portadores de TBL receberam tratamento com Isoniazida (300 mg/dia por seis meses) e nenhum deles desenvolveu TB. Durante os seguimentos, o TT foi repetido em 51 pacientes. A conversão foi observada em cinco: três foram diagnosticados com TBL e dois com TB ativa (14 e 36 meses após receber terapia anti-TNF), sugerindo nova exposição a TB. Conclusão: O rastreamento e tratamento da TBL antes do início da terapia com anti-TNF é efetiva em regiões endêmicas, e reforça a relevância da história de contato com TB para o diagnóstico da TBL em pacientes com AR / Recommendations for screening of latent tuberculosis infection (LTBI) in patients eligible for anti-TNF agents remain unclear in endemic regions. Objective: This study aimed to evaluate the long-term efficacy of LTBI screening/treatment in patients with rheumatoid arthritis (RA) receiving TNF blockers. Design: 202 RA patients were screened for LTBI prior to receiving anti-TNF treatment, by means of tuberculin skin test (TST), chest radiography (X-Ray), and history of tuberculosis exposure (EXP). All subjects were regularly followed at 1- to 3-month intervals. Results: Eighty-five patients (42%) were treated with a single anti-TNF agent, and 117 patients (58%) switched anti-TNF agents once or twice. LTBI screening was positive in 66 patients, 44 presented positive TST, 23 had a history of EXP, and 14, abnormal X-Ray. Exposure alone accounted for LTBI diagnosis in 14 patients with negative TSTs. LTBI patients were treated with Isoniazid (300 mg/day during six months) and none developed TB. During follow up, TST was repeated in 51 patients. Conversion was observed in five: three were diagnosed with LTBI and two with active TB (14 and 36 months after receiving anti-TNF therapy, suggesting new TB exposure). Conclusion: LTBI screening and treatment prior to anti-TNF treatment is effective in endemic areas and reinforces the relevance of contact history for diagnosing LTBI in RA patients