Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-12-03. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:51:10Z : No. of bitstreams: 1 000864610.pdf: 3089089 bytes, checksum: e31156d3741c67e09c6b97faabdaf165 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Photobacterium damselae subsp. piscicida (Phdp) é importante agente causal de septicemia e pseudotuberculose, respectivamente nas fases aguda e crônica em peixes marinhos. O método de imunização e tratamento das infecções bacterianas em peixes é limitado à imunização ativa, com demanda bioenergética celular para gerar a resposta imune humoral. O uso de antibióticos na água, como forma terapêutica, resulta em resíduos na carne do peixe e no consumidor final humano, favorecendo o desenvolvimento da resistência microbiana. Este estudo teve como objetivos a produção e purificação de anticorpos IgY policlonais, extraídos da gema do ovo de galinha e específicos para as proteínas citoplasmáticas e de membrana bacteriana de Phdp e seus efeitos no controle da sepse aguda em Rachycentron canadum infectados experimentalmente. Os resultados demonstram redução do acúmulo de células na inflamação aguda induzida, pela inoculação da bactéria homóloga na cavidade celomática e na atividade respiratória de leucócitos sanguíneos nos grupos que receberam anticorpos IgY 48 horas e 15 dias antes do desafio. Verificou-se ainda redução da disseminação bacteriana em fígado, rim, baço e coração que foi correlacionada com a diminuição das lesões renais e hepáticas e demonstrada no perfil bioquímico e histopatológico. Os resultados são promissores no que tange ao uso da imunoglobulina Y como método profilático e na imunoterapia de infecções bacterianas em organismos aquáticos / The Photobacterium damselae ssp. piscicida is an important causative agent of septicemia and pseudotuberculosis in the acute and chronic phases in marine fish, respectively. The method for immunization and treatment of bacterial infections in fish is limited to the active immunization, which demands cellular bioenergy to generate humoral immune response. The use of antibiotics in the water as a form of therapy results in residues in the meat that will be consumed by humans, favoring the development of microbial resistance. Thus, the aim of the study was to produce and purify polyclonal IgY, specific for membrane proteins of P. damselae ssp. piscicida (PMBphdp), extracted from the yolk of laying hens, and to observe its effects on the control of acute sepsis in experimentally infected Rachycentron canadus. The results showed reduction of cell accumulation in acute inflammation induced by inoculation of the homologous bacteria in the coelomic cavity and decrease in the respiratory activity of blood leukocytes in groups receiving IgY antibodies at 48 hours and 15 days before the challenge. It was also observed the reduction of bacterial dissemination to the liver, kidney and heart which was correlated with the decrease in liver and kidney damage, which was demonstrated by the biochemical and histopathological profile. The results are promising regarding the use of immunoglobulin Y as prophylactic method and for immunotherapy of microbial infections in aquatic organisms

Orientador: Flávio Ruas de Moraes / Coorientador: Julieta Rodini Engrácia de Moraes / Coorientador: Hélio Jose Montassier / Coorientador: João Martins Pizauro Junior / Banca: Fernanda Nogueira Valentin / Banca: Tereza Cristina Ribeiro Dias Koberstein / Banca: Solange de Paula Ramos / Banca: Marcello Pardi de Castro / Resumo: Photobacterium damselae subsp. piscicida (Phdp) é importante agente causal de septicemia e pseudotuberculose, respectivamente nas fases aguda e crônica em peixes marinhos. O método de imunização e tratamento das infecções bacterianas em peixes é limitado à imunização ativa, com demanda bioenergética celular para gerar a resposta imune humoral. O uso de antibióticos na água, como forma terapêutica, resulta em resíduos na carne do peixe e no consumidor final humano, favorecendo o desenvolvimento da resistência microbiana. Este estudo teve como objetivos a produção e purificação de anticorpos IgY policlonais, extraídos da gema do ovo de galinha e específicos para as proteínas citoplasmáticas e de membrana bacteriana de Phdp e seus efeitos no controle da sepse aguda em Rachycentron canadum infectados experimentalmente. Os resultados demonstram redução do acúmulo de células na inflamação aguda induzida, pela inoculação da bactéria homóloga na cavidade celomática e na atividade respiratória de leucócitos sanguíneos nos grupos que receberam anticorpos IgY 48 horas e 15 dias antes do desafio. Verificou-se ainda redução da disseminação bacteriana em fígado, rim, baço e coração que foi correlacionada com a diminuição das lesões renais e hepáticas e demonstrada no perfil bioquímico e histopatológico. Os resultados são promissores no que tange ao uso da imunoglobulina Y como método profilático e na imunoterapia de infecções bacterianas em organismos aquáticos / Abstract: The Photobacterium damselae ssp. piscicida is an important causative agent of septicemia and pseudotuberculosis in the acute and chronic phases in marine fish, respectively. The method for immunization and treatment of bacterial infections in fish is limited to the active immunization, which demands cellular bioenergy to generate humoral immune response. The use of antibiotics in the water as a form of therapy results in residues in the meat that will be consumed by humans, favoring the development of microbial resistance. Thus, the aim of the study was to produce and purify polyclonal IgY, specific for membrane proteins of P. damselae ssp. piscicida (PMBphdp), extracted from the yolk of laying hens, and to observe its effects on the control of acute sepsis in experimentally infected Rachycentron canadus. The results showed reduction of cell accumulation in acute inflammation induced by inoculation of the homologous bacteria in the coelomic cavity and decrease in the respiratory activity of blood leukocytes in groups receiving IgY antibodies at 48 hours and 15 days before the challenge. It was also observed the reduction of bacterial dissemination to the liver, kidney and heart which was correlated with the decrease in liver and kidney damage, which was demonstrated by the biochemical and histopathological profile. The results are promising regarding the use of immunoglobulin Y as prophylactic method and for immunotherapy of microbial infections in aquatic organisms / Doutor

Orientador: Alexandrina Sartori / Banca: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Banca: Denise Morais da Fonseca / Resumo: O diabetes tipo I é uma doença causada pela destruição autoimune das células do pâncreas que resulta em deficiência na produção de insulina. O objetivo deste projeto foi, inicialmente, avaliar o potencial profilático de seis estratégias vacinais no controle do diabetes experimental induzido por estreptozotocina (STZ) em camundongos C57BL/6. As três primeiras são específicas e baseadas na imunização com insulina em condições tolerogênicas que incluem associação com alúmen, dexametasona ou Adjuvante Incompleto de Freund (AIF). As outras três são não-específicas e baseadas em estratégias do tipo prime-boost. Neste caso foram testadas as seguintes combinações: BCG/DNAhsp65, BCG/hsp65 e DNAhsp65/BCG. Nos três protocolos iniciais, camundongos C57BL/6 machos foram imunizados e posteriormente inoculados com múltiplas doses de streptozotocina para desencadeamento do diabetes tipo I. Para avaliação inicial do efeito protetor foram determinados os seguintes parâmetros: peso, glicemia, análise histopatológica do pâncreas e perfil de citocinas produzidas por células esplênicas. Dentre todos os protocolos testados com o modelo STZ, os resultados observados no grupo imunizado por priming com BCG seguido de boost com DNAhsp65 forneceu os resultados mais promissores. Neste caso, a hiperglicemia foi menor, ocorreu proteção parcial contra a insulite e produção significativa de IL-10 por células estimuladas in vitro com hsp65. Por último, avaliamos o efeito da estratégia BCG/DNAhsp65 na evolução do diabetes no modelo NOD. Esta imunização determinou maior ganho de peso, proteção contra a hiperglicemia, aumento na produção de citocinas e diminuição na porcentagem de ilhotas inflamadas quando comparado ao grupo de camundongos NOD não imunizados. Esta proteção se mostra promissora e deverá ser confirmada em estudos futuros / Abstract: Diabetes type I is a disease caused by autoimmune destruction of the beta cells in the pancreas that leads to a deficiency in insulin production. The aim of this project was, initially, to evaluate the prophylactic potential of six different vaccine strategies on diabetes type 1 induced by streptozotocin (STZ) in C57BL/6 mice. The first three strategies were specific for diabetes and based on immunization with insulin in tolerogenic conditions including insulin associated with Incomplete Freund Adjuvant (IFA), alum or dexamethasone. The other three were based on prime-boost strategies involving BCG and the DNAhsp65 vaccine: BCG/DNAhsp65, BCG/hsp65 e DNAhsp65/BCG. In the first three experimental protocols, male C57BL/6 mice were immunized with one of the vaccine strategies and later diabetes was induced with multiple low doses of STZ. The following parameters were analyzed to evaluate the prophylactic potential: body weight, glycemic levels, pancreatic islets histopathological analysis and cytokine production by spleen cells. From all strategies tested in the STZ model, the one with the most promising results was BCG as a primer followed by a booster with DNAhsp65. In this case, we observed protection against weight loss and against hyperglycemia, a decreased islet inflammation and significantly increased production of IL-10 induced by in vitro stimulation with hsp65. As a final point, we evaluated the effect of BCG/DNAhsp65 in the evolution of diabetes in NOD mice. This immunization determined weight gain, protection against hyperglycemia, decreased islet inflammation and higher levels of cytokine production when compared with non-immunized NOD mice. These findings are very interesting and deserve further investigations / Mestre

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-graduação em Ciências Médicas, 2014. / Submitted by Estágio Supervisionado (gid@bce.unb.br) on 2015-01-08T11:40:14Z No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado - Ana Cristina 01.11.14 (FINAL EM PDF).pdf: 17966834 bytes, checksum: 9b92b35f1f17f5ea8199bedc65b46a00 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2015-01-12T12:00:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado - Ana Cristina 01.11.14 (FINAL EM PDF).pdf: 17966834 bytes, checksum: 9b92b35f1f17f5ea8199bedc65b46a00 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-12T12:00:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado - Ana Cristina 01.11.14 (FINAL EM PDF).pdf: 17966834 bytes, checksum: 9b92b35f1f17f5ea8199bedc65b46a00 (MD5) / Introdução: O Brasil possui a maior área endêmica de febre amarela (FA) do mundo. A doença é produzida por vírus de RNA transmitido pela picada de insetos hematófagos culicídeos. Trata-se de doença com significativa morbidade e letalidade e os casos suspeitos devem ser notificados em 24 horas às autoridades sanitárias, tamanha é seu potencial endêmico. O quadro clínico varia de formas assintomáticas até a chamada forma hemorrágica, com letalidade em torno de 50%. Não há tratamento específico e a vacina é forma mais eficaz e segura de prevenção. Esta é constituída a partir de vírus vivo atenuado. No entanto, uma forma rara de febre amarela provocada pelo vírus vacinal tem sido descrita e está provavelmente relacionada a características do hospedeiro, como o seu status imunológico. Por isso, a vacina 17D é contraindicada em pacientes com doenças reumáticas em uso de medicamentos imunomoduladores ou imunossupressores. Não se conhece a resposta imune à vacinação nesse grupo. Não há estudos nessa população que avaliem a resposta humoral pelo padrão ouro, que é a produção de anticorpos neutralizantes. Objetivos: Avaliar a resposta imune protetora, por meio de anticorpos neutralizantes e eventos adversos em pacientes com doenças reumáticas, em uso de imunomoduladores ou imunossupressores, que foram inadvertidamente revacinados contra a FA. Casuística e Métodos: Realizado estudo descritivo, do tipo série de casos de pacientes portadores de doenças reumáticas autoimunes, em uso de medicamentos imunomoduladores ou imunossupressores, inadvertidamente revacinados contra a FA, para avaliação da presença de anticorpos neutralizantes em níveis protetores e ocorrência de eventos adversos. Os pacientes foram selecionados nos ambulatórios de hospital terciário e clínicas particulares de região endêmica. Foram registrados dados como idade, data da vacinação, diagnóstico, medicações e eventos adversos possivelmente relacionados à vacinação. A análise de anticorpos neutralizantes foi ! feita pelo método padrão ouro, o PRNT (Teste de Neutralização por Redução de Placas). Valores acima de 794 mUI/mL (1:50) foram considerados positivos. Resultados: Selecionados 31 pacientes, todas do sexo feminino, com doenças reumáticas, 20 (64,5%) deles no serviço público e 11 (35,5%) em clínicas particulares. Diagnósticos: artrite reumatoide (23), lúpus eritematoso sistêmico (5), esclerose sistêmica (2) e espondilite anquilosante (1). A média de idade na revacinação foi 46,77 (DP =12,72) anos. O intervalo médio entre a imunização e a coleta foi de 39,61 (DP= 8,51) meses. Os títulos de anticorpos neutralizantes variaram de 221 a maior que 15.680 (mediana de 2159 mUI/mL). Quatro apresentaram eventos adversos leves, 24 negaram e 3 não se recordaram. A média geométrica de anticorpos neutralizantes naqueles que apresentaram eventos adversos foi de 2082,25 (Mediana= 2.229) e de 3395,02 (Mediana= 2145,50) mUI/ml nos assintomáticos, não sendo demonstrada correlação entre os resultados e a ocorrência de eventos adversos para a amostra estudada. (Pearson = -0,19) Conclusões: Os eventos adversos e títulos protetores foram semelhantes ao esperado para a população em geral, não sendo demonstrada correlação entre os anticorpos neutralizantes e ocorrência de eventos adversos. Este é o primeiro estudo que avalia a resposta imune protetora à vacina antiamarílica em pacientes com doenças reumáticas autoimunes, em uso de medicamentos imunomoduladores ou imunossupressores. _____________________________________________________________________________ ABSTRACT / Introduction: Brazil has the largest endemic area for yellow fever (YF) in the world. RNA virus transmitted by hematophagous insects of Culicidae family causes the disease. YF has significant morbidity and lethality. Thee suspected cases should be reported in 24 hours to health authorities, such is its gravity. The clinical picture varies from asymptomatic forms until the so-called hemorrhagic form, with lethality in 50 percent. There is no specific treatment and vaccine is the safest and the most effective form of prevention. This is made from live attenuated virus. However, a rare form of yellow fever caused by the vaccine virus has been described and is related to characteristics of the host, such as the immune status. Thus, the 17D vaccine is contraindicated for patients with rheumatic disease who are using immunosuppressants. There are no studies on this population to assess the humoral response by the gold standard. Therefore, no previous studies have assessed the humoral response and adverse reactions in this group. Objectives: To assess the protective immune response, based on neutralizing antibody (NAb) titers and adverse events (AEs), in patients with rheumatic disease who were using immunomodulators or immunosuppressants and inadvertently revaccinated against YF. Methods: We conducted a descriptive study of a number of cases of rheumatic disease to assess the protective levels of NAb and the occurrence of ARs. Epidemiological, medication, and AR data were recorded. The NAb analysis was conducted by using the plaque reduction neutralization test method, with a titer greater than 794 mIU/mL (1:50). Results: Thirty-one patients were selected, 23 with rheumatoid arthritis, 5 with lupus, 2 with systemic sclerosis, and 1 with ankylosing spondylitis. The mean (SD) age at revaccination was 46.77 (12.72) years. The mean (SD) interval between the immunization and sample collection was 39.61 (8.51) months. The NAb titer varied between 221 mIU/mL and 15,680 (median, 2,159 mIU/mL). Four patients presented with mild ARs. The geometric mean (SD) NAb titers were 2,082.25 (Median= 2,229) ! and 3,395.02 (Median= 2,145.50) mIU/mL in the patients with ARs and in asymptomatic patients, respectively. No correlation was found between the results and the occurrence of adverse events in all the study groups (Pearson, −0.19). Findings: The AEs and protective titers were similar to those expected for the overall population, and no correlation was found between the NAb titers and the occurrence of AE. This is the first study to assess the protective immune response to the yellow fever vaccine in patients with rheumatic disease.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Medicina Tropical, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-01-03T14:06:09Z No. of bitstreams: 1 2012_ErnestoIsaacMontenegroRenoiner.pdf: 3336564 bytes, checksum: 400f21576a1df7d861b1fbc16d2be16b (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-01-22T13:34:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_ErnestoIsaacMontenegroRenoiner.pdf: 3336564 bytes, checksum: 400f21576a1df7d861b1fbc16d2be16b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-22T13:34:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_ErnestoIsaacMontenegroRenoiner.pdf: 3336564 bytes, checksum: 400f21576a1df7d861b1fbc16d2be16b (MD5) / Estudos relataram associação temporal de invaginação com a primeira dose da vacina Rotashield nos Estados Unidos e no México com a Rotateq; no Brasil esta associação ocorreu com a segunda dose da Rotarix. Para entender o comportamento da invaginação intestinal foi realizado estudo com o objetivo de descrever clínico-epidemiologicamente os casos de invaginação intestinal em menores de um ano, antes e após a introdução da vacina contra o rotavírus no Brasil. Realizado estudo epidemiológico com dois componentes: Estudo ecológico descritivo do comportamento dos coeficientes de incidência, mortalidade e letalidade da invaginação intestinal e da cobertura vacinal contra rotavírus; e descritivo de coorte clínica, para caracterizar o perfil clínico e epidemiológico da invaginação intestinal por tempo, lugar e pessoa e, descrever a evolução clínica. O estudo ecológico foi conduzido com dados notificados ao Sistema de internações Hospitalares e ao Sistema de Informações sobre Mortalidade nas 27 unidades federadas. A coorte clínica estudou casos internados em sete Unidades Federadas em 53 hospitais sentinelas para invaginação. Nestes, na etapa de análise antes da introdução da vacina foram utilizados registros dos centros cirúrgicos, Unidade de Terapia Intensiva e enfermarias de internação de cirurgia pediátrica. Para o período posterior à introdução da vacina, o estudo foi conduzido no período de 2007 a 2009 e os dados foram coletados por entrevistas com os responsáveis pelas crianças. Para comparar a incidência por doses aplicadas da vacina foram utilizados dados de Sistema de informações do Programa Nacional de Imunizações. A fonte populacional foi o Sistema de Informações Sobre Nascidos Vivos. De 2000 a 2010, no Brasil, os coeficientes médios de incidência, de mortalidade e de letalidade foram, respectivamente de 0,61/10.000NV, de 0,66/100.000NV e de 10,8%. Quanto ao perfil clinico-epidemiológico no período posterior à vacina, predominou o sexo masculino 228/401 (57%), a faixa etária mais acometida foi a de quatro a sete meses, com mediana de seis meses; quanto à instrução das mães, 45,9% tinham menos de oito anos de estudo e 79,6% ganhavam até R$ 588,00; 57,4% das crianças tiveram mais de dois atendimentos médicos e 37% delas foram tratadas após 48 horas do início dos sintomas. Quanto à apresentação clínica, mais de 50% das crianças tiveram vômitos biliosos, 81,3%, eliminação de fezes com sangue e 78,1%, dor abdominal. O tratamento cirúrgico foi realizado em 95% dos casos, sendo 46,4% com ressecção. A média, em dias, desde o inicio dos sintomas ate o tratamento foi de 2,4 dias; para tratamento por enema 1,7 dias; cirurgia sem ressecção foi de 2,1 dias e para cirurgia com ressecção foi de 3,3 dias. Identificados 18 óbitos, nos quais a média, em dias, entre o início dos sintomas e o tratamento foi de 4,4 dias com 100% de tratamento cirúrgico. No período anterior ao uso da vacina, o perfil dos casos foi similar. Em conclusão, este é o primeiro estudo brasileiro que descreve clínico-epidemiologicamente casos de invaginação intestinal com dados nacionais. Observam-se dificuldades para o diagnóstico e tratamento oportunos da invaginação, o que contribui para maior gravidade e risco de óbito. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Brazil introduced the rotavirus vaccine in 2006. Studies have demonstrated a temporal association between intussusception and receipt of the rotavirus vaccine (Rotashield® in the United States, Rotateq® in the Mexico; Rotarix® in Brazil). To better understand intestinal intussusception, a study was carried out with the objective of describing the clinical-epidemiologic characteristics of cases of intussusception in children less than one year of age, before and after introduction of the rotavirus vaccine in Brazil. The epidemiological study had two components: ecological descriptive study of rates of intestinal intussusception incidence, mortality and lethality, and rotavirus vaccine coverage; and descriptive study of a clinical cohort, to characterize the epidemiological and clinical profile of intestinal intussusception with regards to time, place and person and to describe the clinical progression. The ecological study was carried out with data reported to the System of Hospital admissions and to the System of Information about Mortality in the 27 federal units. The clinical cohort included cases hospitalized in seven federal units in 53 hospitals that are sentinel surveillance sites intussusception. From these, records of the surgical centers, intensive care units and pediatric surgery admission wards were used for the phase of analysis before of the introduction of the vaccine were utilized. For the period after the introduction of the vaccine, the study was carried out from 2007 to 2009 and the data were collected by interviews with the parents/guardians of the infants. To compare the incidence rates by number of vaccines doses, data from the Information System of the National Program of Immunizations were utilized. The source of population data was the System of Information about Live Births. From 2000 to 2010, in Brazil, the average rates for incidence, mortality and lethality were, respectively 0,61/10.000 live births, 0,66/100.000 live births and of 10,8%. Regarding in clinical-epidemiological profile following vaccine introduction, male sex predominated 228/401 (57%), the age group most affected was from four to seven months, with a median age of six months; regarding maternal education level, 45.9% had less than eight years of schooling and 79.6% earned R$ 588.00 or less; 57.4% of the infants had medical attention more than twice and 37% of them were treated more than 48 hours after symptom onset. Regarding the clinical presentation, over 50% of the infants had bilious vomiting, 81,3%, had blood in their stool and 78,1% had abdominal pain. Surgical management was carried out in 95% of the cases, with 46.4% having resection. On average, time from symptom onset to treatment was 2.4 days in days; for enema management it was 1.5 days; for surgery without resection it was 2.1 days and for surgery with resection it was 3.1 days. There were 18 deaths with an average time from symptom onset to treatment of 4.4 days and 100% were managed surgically. In pre-vaccine period, the characteristics of cases were similar. In conclusion, this is the first Brazilian study that describes clinical-epidemiologic characteristics of intestinal intussusception using national data. Difficulties with diagnosis and prompt management of intussusception were noted, which contribute to greater severity and great risk of death.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2010. / Submitted by Luanna Maia (luanna@bce.unb.br) on 2011-06-06T15:36:47Z No. of bitstreams: 1 2010_AnaPaulaPaivadeFaria.pdf: 488721 bytes, checksum: 3bda6a7be195d840ac115ddaae3b5983 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2011-06-06T15:37:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_AnaPaulaPaivadeFaria.pdf: 488721 bytes, checksum: 3bda6a7be195d840ac115ddaae3b5983 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-06T15:37:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_AnaPaulaPaivadeFaria.pdf: 488721 bytes, checksum: 3bda6a7be195d840ac115ddaae3b5983 (MD5) / O atual estudo objetivou analisar a variabilidade genetica de linhagens vacinais de Brucella, avaliando ainda os efeitos de repiques sucessivos sobre as mesmas. Trata-se de doenca zoonotica de alcance mundial e que causa prejuizos economicos na producao animal e danos a saude publica. Visando controlar a doenca, foi instituido o Programa Nacional de Controle e Erradicacao da Brucelose e Tuberculose Animal em 2001, que inclui a vacinacao de femeas. Quanto a avaliacao genetica de linhagens vacinais, a tecnica de analise em multilocus das repeticoes em tandem de numero variavel - MLVA permite identificar a variabilidade genetica microbiana de forma acurada, identificando-se genogrupos de isolados. O atual estudo analisou 63 amostras de linhagens vacinais B19 (n=53) e RB51 (n=10), provenientes de sete laboratorios brasileiros. Tambem foi avaliado o efeito de sucessivos repiques sobre a o genoma microbiano. Desta forma, foram identificados quatro genogrupos distintos. No genogrupo I foram agrupadas as 10 amostras de B19 do laboratorio G e seus 10 repiques. Quarenta e tres amostras de B19 dos laboratorios A, B, D, E, F, H, bem como os 10 repiques das amostras E e da cepa de referencia S (USDA) foram agrupadas no genogrupo II. O genogrupo III foi composto pelas amostras vacinais de RB51 do laboratorio Y e pelos 10 repiques da linhagem Y1. Finalmente, o genogrupo IV incluiu oito amostras vacinais de RB51 e os 10 repiques das amostras X1 e da cepa de referencia Schurig. As linhagens vacinais B19 e RB51 derivaram de ramificacoes geneticas distintas que formaram, cada qual, dois genogrupos, com divergencia apenas nos loci Bruce07 e Bruce43. Concluindo, a tecnica de MLVA mostrou adequada capacidade discriminatoria, podendo ser utilizada para analises de qualidade na producao de vacinas comerciais em nosso Pais. Foi observado, ainda, que 10 passagens sucessivas nao afetam os loci avaliados. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The present study was aimed to analyze the genetic variability among Brucella abortus lineages present in commercial vaccines from Brazilian laboratories. The brucellosis is a worldwide distributed zoonotic disease. The disease may affect the livestock production as well as the human health. To control the spread of Brucellosis in Brazil, our country established the National Program for Controlling and Eradication of Animal Brucellosis and Tuberculosis – PNCEBT which included the vaccination of female bovines. The multiple locus variable number of tandem repeat analysis (MLVA) is a rapid and accurate method used to access the genetic variability among microbial isolates and to discriminate groups of genetically-related isolates. We used a previously described 16 loci MLVA method to analyze a sample composed by B19 vaccines (n=53) and RB51 vaccines (n=10) from seven Brazilian laboratories. The genetic variability after 10 successive cultures was also accessed. We identified four distinct genogroups of isolates. The genogroup I contained ten B19 samples from the laboratory G and their respective successive cultures. Forty-three B19 samples of the laboratories A, B, D, E, F, and H as well as the successive cultures of the reference S (USDA) strain and the commercial strain E, were all clustered into the genogroup II. The genogroup III included the RB51 laboratory Y’s samples and the Y1’s successive cultures. Finally, eight RB51 samples, the successive X1’s cultures, and the reference Schurig strain, were clustered into the genogroup IV. Our results revealed that the B19 and RB51 lineages derived from two distinct genetic branches that diverged in the locus Bruce07 and Bruce43. In conclusion, the MLVA showed accurate discriminatory results and would be used in future evaluations of the commercial vaccines of Brucellosis. The results of our study also showed that ten successive cultures were not able to generate genetic variability into the loci studied.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2010. / Submitted by Jadiana Paiva Dantas (jadi@bce.unb.br) on 2011-06-29T23:23:16Z No. of bitstreams: 1 2010_IsaqueMedeirosSiqueira.pdf: 13916045 bytes, checksum: 5b1c32ad0b3de6b2fa7aa60ec0aa90bf (MD5) / Approved for entry into archive by Elna Araújo(elna@bce.unb.br) on 2011-07-15T23:34:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_IsaqueMedeirosSiqueira.pdf: 13916045 bytes, checksum: 5b1c32ad0b3de6b2fa7aa60ec0aa90bf (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-15T23:34:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_IsaqueMedeirosSiqueira.pdf: 13916045 bytes, checksum: 5b1c32ad0b3de6b2fa7aa60ec0aa90bf (MD5) / A cromoblastomicose (CBM) é uma micose subcutânea, crônica, de distribuição cosmopolita, causada por vários fungos demáceos, pigmentados e dimórficos. Pacientes com a doença ainda são tidos como desafio terapêutico, principalmente devido à sua natureza recalcitrante. Várias são as opções envolvendo o tratamento dessa micose comumente negligenciada, contudo, ainda não há terapia de primeira escolha no combate à doença. O itraconazol e a terbinafina foram os que apresentaram os melhores resultados no tratamento da CBM, embora a cura de casos severos ainda seja rara. No entanto, vários trabalhos relatam as vacinas de DNA como promissoras no tratamento de infecções fúngicas, as quais permitem o restabelecimento da imunidade celular geralmente deprimida, minimizando os efeitos tóxicos oriundos das terapias antifúngicas convencionais. Nesse contexto, o presente trabalho foi conduzido, visando estabelecer inicialmente um modelo experimental confiável da CBM, propondo ainda novas terapêuticas para a doença, incluindo a utilização da vacina de DNA-hsp65. Por meio de análise morfomética, histopatológica e quantificação/recuperação das unidades formadoras de colônia, foi possível evidenciar o surgimento de lesões crônicas da CBM, embora transitórias, semelhantes às apresentadas em humanos. O esquema de tratamento empregando o itraconazol e a anfotericina B, intralesionalmente, mostrou-se eficaz no tratamento da CBM experimental, assim como a terapia utilizando a vacina de DNA-hsp65, livre. Foi demonstrado ainda, que a associação: quimioterápico + DNAhsp65 é eficiente no tratamento da CBM experimental, acelerando o processo de cura da doença, mitigando possíveis efeitos tóxicos advindos de quimioterapias prolongadas. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Chromoblastomycosis (CBM) is a chronic worldwide subcutaneous mycosis, caused by several dimorphic, pigmented dematiaceous fungi. Patients with the disease are still considered as therapeutic challenge, mainly due to its recalcitrant nature. There is no treatment of choice for this neglected mycosis, but rather several treatment options. Itraconazole and terbinafine showed the best results in treating the disease, although the healing of severe cases is still uncommon. However, several studies have reported the DNA vaccine as promising in the treatment of fungal infections, which allow the host to restore depressed cellular immunity, minimizing the toxic effects from conventional antifungal therapies. In this matter, this work was conducted aiming the establishment of a suitable model for experimental CBM, suggesting also new therapies, including DNA-hsp65 vaccine. By analyzing the morfometrical and histopathological aspects, also the recovery/quantification of colony forming units, the results showed the establishment of a chronic, although transitory, experimental CBM model with lesions similar to that presented in humans. The treatment regimen using itraconazole and amphotericin B, intralesionally, was effective in treating experimental CBM, as well as therapy using naked DNA-hsp65 vaccine. It also has been shown that chemotherapy associated with DNA-hsp65 vaccine is efficient in the treatment of experimental CBM, accelerating the healing process of the disease, becoming able to tone down the toxic effects from prolonged chemotherapy.

Entre as causas de diarréia em suínos de crescimento e terminação, a infecção por L. intracellularis é uma das mais relevantes e é uma das principais justificativas para o uso excessivo de antimicrobianos na ração. O presente experimento visou a avaliar uma alternativa ao uso de medicamentos para o controle da infecção pela L. intracellularis, a vacinação. O teste foi realizado com uma vacina avirulenta já licenciada para uso em outros países (Enterisol® Ileitis) e que em avaliações realizadas em diversos países mostrou resultados, em sua maior parte, favoráveis. O experimento foi conduzido em uma empresa integradora, localizada no Estado de Santa Catarina entre os meses de Maio a Dezembro de 2004. Para tal foram usados 54.030 animais submetidos a quatro tratamentos, em delineamento fatorial 2 x 2, sendo avaliado o efeito de dois fatores: a administração ou não da vacina e o fornecimento de ração com antimicrobianos de forma contínua ou descontínua, durante os períodos de crescimento e terminação. O número de lotes que fizeram parte do experimento foi 128 (32 em cada tratamento) e o lote foi considerado como unidade experimental. A vacina foi administrada na água de bebida entre as semanas 3 e 4 de alojamento. Houve efeito da vacinação na conversão alimentar (P<0,05), a qual foi melhor nos animais vacinados. Além disso, ocorreu uma tendência (P=0,079) dos animais vacinados em apresentar menor coeficiente de variação no peso da carcaça quente. . Os animais que receberam medicação com antimicrobianos de forma descontínua tenderam a ganhar menos peso (P=0,078) do que os animais que receberam ração com antimicrobianos de forma contínua. O coeficiente de variação de peso da carcaça quente foi menor (P<0,05) nos animais que receberam ração de forma descontínua com antimicrobianos em comparação aos que receberam ração com antimicrobianos de forma contínua. Ocorreram poucos diagnósticos da presença do agente em lotes com e sem diarréia durante o experimento. É possível que o período experimental tenha havido baixa circulação do agente e que os efeitos favoráveis na conversão alimentar reflitam um controle da forma sub-clínica da infecção.

As vacinas de DNA têm sido utilizadas para a indução de imunidade contra antígenos virais e bacterianos. A aplicação de modelos experimentais tem sido explorada visando a indução de tolerância imunológica através da expressão de genes cujos produtos podem modular o sistema imune para um estado de não responsividade. A terapia gênica oferece a possibilidade de manipulação do sistema imune do receptor, através de um sistema de administração de genes específicos sob condições pré-definidas. Sua eficácia depende dos níveis de expressão e da natureza do antígeno, da via de administração assim como de sua distribuição nos tecidos (a qual às vezes depende do promotor utilizado). Porém, sua aplicação clínica é limitada em parte devido aos baixos níveis de expressão obtidos in vivo. A VP22 é uma proteína do tegumento do vírus Herpes simples tipo 1, que tem a propriedade de fazer tráfego intercelular. Estudos recentes têm demonstrado a alta eficiência desta molécula no transporte de proteínas heterólogas como VP22-p53, VP22-β galactosidase e VP22-proteína verde fluorescente. Para a indução de tolerância imunológica, tem sido demonstrado que a persistência do antígeno, pelo menos por algum período, é muito importante. Moléculas do complexo de histocompatibilidade principal (MHC) têm sido utilizadas para induzir tolerância a nível central ou periférico, em diferentes protocolos. Dentre estas, as moléculas da classe I do camundongo, Kb, têm sido utilizadas com sucesso. O objetivo desse trabalho foi de construir duas vacinas recombinantes: pVP22::Kb e pCIneo::Kb. A primeira contém dois genes clonados na mesma pauta de leitura: a cadeia pesada de classe I Kb e VP22. O cDNA que codifica para o Kb foi obtido pela extração de RNA total de baço de um camundongo C57BL/6 (haplótipo H-2b) seguido de transcrição reversa. Este produto foi amplificado pela reação em cadeia da polimerase. Esta molécula também foi obtida pela amplificação direta do gene Kb previamente clonado no sítio EcoR I do plasmídeo pBluescriptIISK (Stratagene®). Ambos os produtos de PCR foram subclonados com extremidades cegas no plasmídeo pCRBluntII (Invitrogen®). Foram obtidos dezenove plasmídeos recombinantes, denominados pCRBluntII::Kb, e um deles foi escolhido e digerido com as enzimas de restrição Spe I e Xba I e defosforilado com a enzima fosfatase alcalina (CIAP). O fragmento digerido foi clonado nos plasmídeos pVP22-myc/His (Invitrogen®) e pCIneo (Promega®) previamente digeridos com a enzima Xba I. Os novos plasmídeos pVP22::Kb e pCIneo::Kb foram utilizados para transfectar a linhagem celular eucariótica CHO. A expressão do mRNA para o Kb foi confirmada pela transcrição reversa e PCR e a expressão da proteína por imunofluorescência e citometria de fluxo.

A doença infecciosa bursal ( DIB ) é uma enfermidade viral, que acomete galinhas provocando imunodepressão sendo, economicamente, importante para a indústria avícola. O controle da DIB é realizado através de diferentes vacinas assim como programas de vacinação. No presente trabalho, a patogenicidade de três vacinas intermediárias ( I1, I2 e I3 ), duas intermediárias mais patogênicas ( IP1, IP2 ) e três vacinas contendo vírus forte ( F1, F2 e F3 ) foi avaliada. Aves vacinadas com IP1, IP2, F1, F2 e F3 apresentaram tamanho da bolsa de Fabrício, significativamente, menor em relação ao grupo controle e aos animais vacinados com I1, I2 e I3. Por outro lado, a vacina I3 produziu título de anticorpos semelhante ao grupo controle diferindo de todas as demais vacinas. Porém I1 e I2 induziram títulos de anticorpos maiores que o grupo controle, sendo que I1 promoveu a formação de título de anticorpos semelhante à IP1, IP2, F1, F2 e F3. Os escores de lesão histopatológica mostraram que I1, I2 e I3 induziram graus similares de lesão da bolsa, sendo que I2 e I3 não diferiram do grupo controle, enquanto I1 apresentou diferença. As vacinas intermediárias mais patogênicas, assim como as vacinas“fortes“ promoveram escores de lesão, significativamente, maiores que as demais vacinas testadas. Esses resultados sugerem que as vacinas intermediárias mais patogênicas e as vacinas “fortes“ são capazes de causar severos danos na bolsa de Fabrício. Também foi possível inferir que a bursometria pode ser inadequada para a avaliação vacinal, porém pode ser utilizada na escolha da vacina para programas de vacinação. Além disso, observou-se que as vacinas “fortes“ induziram a formação de títulos de anticorpos mais altos que as demais vacinas, porém algumas vacinas intermediárias são capazes de promover títulos semelhantes.