El desarrollo neural ocurre mediante el proceso de neurulación originando el sistema nervioso central y la médula espinal. Durante este proceso las células de la cresta neural (CCN) son especificadas en la región más dorsal del tubo neural; posteriormente, las CCN delaminan del epitelio neural, migran a diferentes regiones del embrión y se diferencian en diversos tipos celulares. Defectos en el desarrollo del tubo neural y de las CCN generan desórdenes congénitos como espina bífida, encefalocelia, y neurocristopatías (paladar-labio hendido, albinismo, entre otras). Una vitamina importante durante el desarrollo embrionario temprano es el folato, el cual se encuentra en el sistema circulatorio en forma de 5-metiltetrahidrofolato (5-MTHF) e ingresa a la célula por medio del receptor de membrana FOLR1 y el transportador RFC1. El 5-MTHF participa en la síntesis de nucleótidos y en la generación de Sadenosilmetionina (SAM) para la metilación de ácidos nucleicos y proteínas. La metilación de ácidos nucleicos y proteínas son importantes mecanismos de regulación epigenética durante el normal desarrollo embrionario de los vertebrados. Considerando lo dicho se plantea determinar el efecto epigenético de la deficiencia del folato en el desarrollo del tubo neural y de las CCN. Para esto realizamos la pérdida de función del receptor FOLR1 y transportador RFC1 mediante el uso de los morfolinos FolR1spMO y RFC1spMO en embriones de pollo. Posteriormente se evalúan los niveles de 5mC en el ADN y 6mA en el ARN mediante dot blots, observando una clara disminución en ambas marcas epigenéticas. El análisis de expresión del marcador de CCN Sox10 en embriones inyectados evidenció una disminución en el número de CCN. Adicionalmente, el marcador neural Sox2 presentó una expresión ectópica en el territorio de las CCN. Estos resultados muestran que la deficiencia de folato afecta la metilación global del ADN y ARN generando un cambio en el destino celular de los progenitores de las CCN hacia un destino neural. Los resultados obtenidos pueden sentar las bases para un mejor entendimiento y desarrollo de tratamientos capaces de prevenir o disminuir las anomalías ocasionadas por la deficiencia de folato en mujeres embarazadas. / Tesis

A Amazônia Brasileira possui diversos tipos de padrão de desmatamento, variando do típico padrão \"espinha-de-peixe\", comum em pequenas propriedades, para grandes áreas desmatadas (padrão grandes propriedades), resultando em paisagens com diferentes estruturas, configuração e nível de perturbação. A teoria sugere que uma perda desproporcional de espécies ocorre quando a cobertura total de habitat cai para menos de 30% da paisagem, e a configuração passa então a ter um maior efeito sobre as espécies. Para analisar o efeito da configuração de habitat na persistência e riqueza de vertebrados de médio e grande porte (aves e mamíferos) foram amostradas 21 paisagens (4 x 4 km) do sul da Amazônia com quantidade similar de habitat (~25%), mas configurações de paisagem contrastantes. Entrevistas (n = 150) foram aplicadas de Fevereiro a Julho de 2009 para registrar a ocorrência de vertebrados, e o nível de perturbação das 21 paisagens, compostas de sete áreas controle (áreas não perturbadas de floresta contínua), sete paisagens com padrão de grandes propriedades e sete de espinhas-de-peixe. Métricas de paisagem foram extraídas de uma imagem Landsat-TM de 2009 e de 14 imagens Landsat-TM bianuais, para determinar o melhor preditor para a persistência das espécies. Existiu uma diferença significativa na riqueza de espécies entre os padrões espinha-de-peixe, grandes propriedades e as áreas controle, com uma média de 29.28 (SD=4.6), 38.8 (SD=5.2), e 43.5 (SD=2.2), respectivamente. Nós também encontramos um maior número de espécies especialistas nas áreas controle (média ± SD = 13.7 ± 0.95) e grandes propriedades (média ± SD = 11.71 ± 2.2), quando comparadas ao padrão espinha-de-peixe (média ± SD = 5.14 ± 2.6). Os resultados da NMDS mostram que a comunidade de vertebrados de médio e grande porte das áreas controle é muito similar à comunidade encontrada nas unidades de grande propriedade, além de todas as unidades de área controle e grande propriedade serem homogêneas entre si. Por outro lado, as unidades espinha-de-peixe, além de apresentarem uma maior heterogeneidade entre suas unidades, também se mostrou muito dissimilar em relação às outras paisagens, tanto para a comunidade de vertebrados quando para a comunidade de espécies especialistas. O padrão espinha-de-peixe também apresentou uma alta intensidade de queimadas, retirada de madeira e pressão de caça, enquanto que o padrão grandes propriedades apresentou uma leve intensidade de queimada e uma alta pressão de caça, e as áreas controle não apresentaram nenhum sinal de perturbação. O número de espécies e o número de espécies especialistas foram negativamente afetados pelo número de fragmentos e, secundariamente, pela idade de isolamento. Assim, quanto maior o número de fragmentos na paisagem e maior o tempo de isolamento, menor será a riqueza de espécies e o número de espécies especialistas. Nossos resultados demonstram que o padrão grandes propriedades leva a uma estrutura de paisagem mais favorável para a biodiversidade. Este tipo de paisagem pode manter um alto número de espécies e uma comunidade de vertebrados de médio e grande porte mais diversa, incluindo predadores de topo e grandes cracídeos, considerados fundamentais para a integridade do ecossistema, sendo mais similar às áreas controle. Por outro lado, o padrão espinha-de-peixe leva a uma paisagem mais fragmentada, com uma comunidade de vertebrados mais pobre e dominada por espécies generalistas. / The Brazilian Amazon has several types of deforestation patterns, varying from the typical \"fishbone pattern\" common in small properties, to large deforested areas (large-property pattern), resulting in landscapes with different structure, configuration and disturbance levels. Theory suggests that a disproportionate loss of species occurs when total habitat cover decreases to less than 30% of the landscape, and the landscape configuration starts to have a large effect over species. To analyse the effects of the habitat configuration on the persistence and richness of mid-sized and large-bodied vertebrates (mammals and birds), we have sampled 21 landscapes in the southern Amazonia with similar amounts of habitat (~25%) but contrasting configuration. Interviews (n = 150) were used from February to July 2009 to record the occurrence of vertebrates and the disturbance degree in the 21 landscapes, composed of seven control areas (undisturbed areas of continuous forest), seven large-properties and seven fishbone deforestation patterns. Forest-patch metrics were extracted from a 2009 Landsat-TM image and from 14 bi-annual Landsat-TM images to examine the best predictor to species persistence. There was a significant difference in species richness between fishbone, large-property and control areas with an average of 29.28 (SD=4.6), 38.8 (SD=5.2), and 43.5 (SD=2.2), respectively. We also found a higher number of specialist species in control areas (mean ± SD = 13.7 ± 0.95) and large-properties (mean ± SD = 11.71 ± 2.2), when compared with fish-bone pattern (mean ± SD = 5.14 ± 2.6). NMDS results show vertebrate community in control areas are very similar to the ones found in large-property sites, beyond all landscapes (control areas and large properties) are homogeneous among themselves. On the other hand the fish-bone landscapes are very dissimilar from them and heterogeneous among each other, concerning both the large vertebrate community and the specialist species community. The fish-bone pattern also shows a heavy intensity of fire, selective logging and hunting pressure while the large-property pattern shows a light intensity of fire and a heavy hunting pressure whereas the control areas show no sign of disturbance. The number of species and the number of specialist species were negatively affected by the number of fragments and secondarily by the isolation age. Therefore the greater the number of fragments in the landscape unit and the older is the isolation process, the fewer is the species richness as well as the number of specialist species. Our results demonstrated that large-property pattern leads to a landscape structure that is better for biodiversity. This type of landscape can maintain a higher number of species and a more diverse community of large vertebrates, including top predators and large cracids, considered fundamental for the integrity of the ecosystem, being more similar to the control areas. On the other hand, the fish-bone pattern leads to a more fragmented landscape with a poorest vertebrate community and dominated by generalist species.

A Formação Rio do Rasto pertence à sequencia do Permiano médio/superior da Bacia do Paraná aflora nos estados do Paraná, Santa Catarina e Rio Grande do Sul, Brasil. Essa unidade continental, relacionada a um sistema fluvial, é dividida nos Membros Serrinha, na base, e Membro Morro Pelado, no topo. A presente tese de doutorado está organizada na forma de três artigos científicos relacionados ao Sítio São Jerônimo da Serra, pertencente ao Membro Morro Pelado, localizado no km 277 da rodovia PR-090, no estado do Paraná. Esta localidade tem revelado um rico conteúdo fossilíferos com registros de conchostráceos, bivalves, escamas de peixes paleonisciformes, elementos ósseos de anfíbios temnospôndilos, coprólitos, vertebrados indetermiandos, icnofósseis de vertebrados e plantas. O primeiro artigo traz uma análise do afloramento correlacionando aspectos geológicos (faciológicos e mineralógicos) com os registros fossilíferos. Nesta análise integrada, foram identificadas três tafofácies: tafofácies I,caracterizada por esqueletos preservados em fácies de planície de inundação; tafofácies II, constituída por ossos isolados e/ou pequenos fragmentados depositados em fácies de espraiamento terminal; e tafofácies III contendo grande quantidade de conchas e escamas de peixes, preservadas em fácies de depósitos de crevasse de alta energia. Esse estudo corroborou a interpretação paleoambiental para o Membro Morro Pelado como um ambiente com estabelecido em um clima semi-árido, onde a preservação dos fósseis foi condicionada pela restrição hídrica evidenciada pela presença de hematita. O segundo artigo acrescenta informações sobre o rinessuquídeo Australerpeton cosgriffi, com base em um crânio e uma mandíbula, coletados no Sítio São Jerônimo da Serra. São reconhecidas duas novas sinapomorfias para a espécie: longo processo cultriforme que transcende o nível das bordas posteriores das coanas e um par de elevações longitudinais paralelas à pré-maxila sem dentículos e que não contatam as coanas. São Jerônimo da Serra constitui a terceira localidade com registro de A. cosgriffi, demonstrando ser esta espécie um componente faunístico comum e bem sucedido nos ecossistemas flúvio-lacustres do Permiano médio/superior do sul do Brasil. O terceiro artigo, traz o registro e a descrição de um material pós-craniano de um Temnospondyli, também proveniente do Sítio São Jerônimo da Serra, referente a um novo táxon. A ausência de materiais cranianos não permitiu a identificação taxonômica em um nível menos inclusivo, mas a análise histológica realizada no fêmur permitiu a constatação de tratar-se de um indivíduo adulto, distinto de A. cosgriffi. Esses novos registros reforçam a importância do Sítio São Jerônimo da Serra, o qual serve de modelo paleoambiental para o Membro Pelado da Formação Rio do Rasto. / The Rio do Rasto Formation belongs to a Middle/Late Permian sequence from the Paraná Basin that crops out in Paraná, Santa Catarina and Rio Grande do Sul states, Brazil. This continetal unit is related to fluvial system and subdivided into Serrinha Member (base) and Morro Pelado Member (top). This doctoral thesis is structured on the form of three scientific papers related to the outcrop São Jerônimo da Serra, located on the highway PR- 090, km 277, in the state of Paraná, that corresponds to Morro Pelado Member. On this site, there were records of conchostracans, bivalves, paleonisciforms fish scales, Temnospondily amphibian bone elements, coprolite, vertebrates, ichnofossils and plants. The first paper presents an analysis of the outcrop correlating geological aspects with fossiliferous records. In this work, 3 taphofacies were identified: taphofacies I is characterized by bones in floodplain fácies; taphofacies II is composed by small isolated or fragmented bones and fish scales deposited in terminal splay and, taphofacies III is characterized by sandy layers with bivalve shells and fish scales, preserved in high energy crevasse. This study corroborates with the semi-arid paleoenvironmet interpretation of Morro Pelado Member, where the fossil preservation was conditioned by hidric restriction shown by hematite´s presence. The second paper presents information about the Rhinsesuchidae Australerpeton cosgriffi based on a cranium and a jaw from São Jerônimo da Serra Site. Two new synapomorphies were recognized for the species: a long cultriform process whose anterior edge surpasses the level of the posterior border of the choanae, being interposed between them and a pair of longitudinal ridges lacking denticles that run parallel along the premaxillary surface without making contact with the choanae. São Jerônimo da Serra Site is the third locality with the presence of A. cosgriffi showing that this species was an important and common faunistic component in the fluvial/lacustrine Permian of South Brazil. The third paper presents the record and description of a post-cranium of a new Temnospondyli, also form São Jerônimo da Serra Site. The absence of skull does not allow a specific taxconomic identification, but the femur histological analyses indicates that the specimen is an adult, distintic from A. cosgriffi. These new records reinforce the importance of the outcrop for paleontology and for interpretations of Morro Pelado Member paleoenvironmental.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 416169.pdf: 1529649 bytes, checksum: 8c095797ae251585e66c0abd34901a5c (MD5) Previous issue date: 2009-08-25 / Mem?rias s?o armazenadas como modifica??es estruturais e funcionais das conex?es sin?pticas nas regi?es neurais envolvidas no aprendizado e, por sua relev?ncia biol?gica e rela??o com patologias do sistema nervoso humanas, a busca pela elucida??o dos mecanismos respons?veis por sua manuten??o tem recebido interesse de distintas ?reas do conhecimento ao longo dos anos. Estudos sobre os mecanismos neurais das mem?rias de longa dura??o demonstraram que sua forma??o ? um processo gradual que envolve substratos neuroanat?micos e celulares agora conhecidos em grande extens?o, e cujas bases moleculares s?o alvo de intensa investiga??o. O peixe tele?steo zebrafish ? um excelente modelo animal para estudos gen?ticos e de desenvolvimento e v?m mostrando enorme potencial para estudos de aprendizagem e mem?ria. Este vertebrado de f?cil manipula??o apresenta r?pido desenvolvimento externo e manuten??o pr?tica e econ?mica. Em termos neuroanat?micos, apesar das diferen?as entre aspectos do desenvolvimento e resultante disposi??o de regi?es cerebrais de mam?feros e tele?steos, a organiza??o geral do enc?falo do zebrafish segue padr?es t?picos dos vertebrados. Avan?os recentes no conhecimento demonstram que h? uma extensa similaridade, tanto em complexidade quanto em funcionamento entre o c?rebro de peixes tele?steos e os vertebrados terrestres o que valida o uso deste modelo animal para estudo dos mecanismos conservados do aprendizado e mem?ria. Embora j? existam na literatura cient?fica estudos avaliando par?metros comportamentais do zebrafish, na maior parte das vezes o foco principal dos trabalhos n?o ? a cogni??o. Aspectos como locomo??o e explora??o do ambiente s?o tomadas como medidas e os trabalhos publicados n?o mostram const?ncia em rela??o ?s tarefas utilizadas e protocolos adotados. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um novo paradigma de esquiva inibit?ria para zebrafish a fim de permitir a avalia??o dos mecanismos celulares e moleculares da forma??o de mem?ria em vertebrados. Para tanto, o treino consistiu de apenas uma sess?o onde os animais foram colocados individualmente no aqu?rio de esquiva inibit?ria. Ao cruzar para o lado escuro do aqu?rio um choque el?trico foi administrado por 5s e estes animais retirados imediatamente do aqu?rio. Na sess?o de teste, realizada 24 h depois, seguiu-se o mesmo protocolo, por?m nenhum choque foi utilizado. As lat?ncias de entrada no lado escuro para o treino e o teste foram consideradas como indicadoras de reten??o. Para a valida??o da tarefa um grupo de animais foi tratado durante 15 min p?s-treino com o antagonista de receptor NMDA MK-801 numa concentra??o de 20 μM. Os resultados obtidos demonstram que a tarefa de esquiva inibit?ria desenvolvida para zebrafish ? baseada em mecanismos conservados em que o aprendizado, e resultante mem?ria, s?o dependentes de sinaliza??o glutamat?rgica mediada por NMDA, assim como j? evidenciado para outros vertebrados. A tarefa desenvolvida ? r?pida, simples e resulta em um aprendizado robusto, s?lido e persistente, representando um instrumento valioso para se caracterizar diferentes processos que afetam o comportamento no zebrafish, bem como permitir a disseca??o dos eventos tempos-dependentes da forma??o de mem?rias de vertebrados.

As rodovias podem representar um importante fator na fragmentação de habitat para espécies silvestres adaptadas a habitats de alta complexidade estrutural, como as florestas tropicais. As estradas reduzem a conectividade da paisagem e a capacidade da população regional em habitar todas as áreas adequadas e estes efeitos são mais significativos nas espécies que evitam a estrada, que são, muitas vezes, espécies de interior de florestas. A magnitude dos efeitos de barreira dependerá do comportamento e mobilidade destas espécies. Quando as estradas representam ralos (sink) ou barreiras para as populações, devido, respectivamente, aos atropelamentos ou à repulsa, medidas mitigadoras são indicadas para aumentar a conectividade entre as manchas de habitat separadas por essas estradas. A qualidade do habitat é um fator que deve ser considerado, mesmo com baixas frequências de atropelamentos nesses locais. O objetivo desse estudo foi propor dois métodos de seleção de áreas prioritárias para implantação de medidas mitigadoras dos efeitos das estradas sobre espécies de vertebrados florestais: Seleção Hierárquica Multivariada e Seleção Bivariada. A área de estudo foi o bioma Mata Atlântica, sendo recortado em paisagens hexagonais em três escalas diferentes (10.000, 1.000 e 100 km), usando a extensão Repeating Shapes no programa ArcGIS 9.3. Em cada hexágono foram calculados: área de floresta e de Unidade de Conservação, densidade de estradas e de hidrografia. Apenas os hexágonos cobertos por no mínimo 45% pela Mata Atlântica, com mais de 50% de cobertura florestal e mais de 1% de Unidades de Conservação foram incluídos nas análises. Após esta seleção, no método Seleção Hierárquica Multivariada, foi feita uma análise de componentes principais (PCA) com as quatro variáveis medidas, para cada escala separadamente. Os hexágonos foram então ordenados segundo o posicionamento deles no 1 Eixo da PCA de forma hierárquica e da maior para menor escala de hexágonos. Para área de estudo o método de Seleção Bivariada foi construído um gráfico de pontos, para cada escala de hexágono, com as variáveis cobertura florestal e rios. Foram selecionados os hexágonos que estavam localizados no quadrante do gráfico que representasse maior densidade de rios e maior porcentagem de cobertura florestal. Posteriormente foi feita uma simulação para avaliar se os métodos eram capazes de recuperar escores tão alto quanto a ordenação seguindo apenas o posicionamento dos hexágonos no Eixo 1 da PCA, sem uma análise hierárquica. O método de Seleção Hierárquica Multivariada foi mais eficiente para escolha de áreas prioritárias do que a Seleção Bivariada tanto para a escala intermediária (1.000 km) quanto para a menor escala (100 km). Os cinco hexágonos de 100 km mais prioritários estão localizados em São Paulo e Paraná, abrangendo quatro UCs (PARES de Jacupiranga, APA de Guaraqueçaba, APA Cananéia- Jacuípe e PARES da Ilha do Cardoso). Devido à simplicidade e fácil aplicabilidade do método, acredita-se que este pode ser uma opção interessante para escolha de áreas prioritárias para implantação de medidas mitigadoras dos efeitos de estradas / Roads may represent an important factor in fragmentation of habitat for wild species adapted to habitats of high structural complexity as rainforests. Roads reduce landscape connectivity and the capacity of the regional population live in all suitable areas and these effects are most significant in species that avoid the road, which are often species dependent on forests. The magnitude of the barrier effects depend on the behavior and mobility of these species. When roads represent "sinkers" or barriers for populations due, respectively, trampling or avoidance, mitigation measures are indicated to increase connectivity between habitat patches separated by these roads. The habitat quality is a factor that must be considered, even at low frequencies of road kill there. The goal of this study was to propose two methods of selecting priority areas for implementation of mitigation measures of roads effects on forest vertebrate species: Multivariate Hierarchical Selection and Bivariate Selection. The study area was the Atlantic Forest biome, being cut into hexagonal landscapes at three different scales (10,000, 1,000 and 100 km), using the extension "Repeating Shapes" program in ArcGIS 9.3. In each hexagon was calculated: area of forest, protected areas, density of roads and hydrograph. Only hexagons covered by at least 45% by the Atlantic Forest, with over 50% forest cover and more than 1% of protected areas were included in the analyzes. After this using the Multivariate Hierarchical selection method, we performed a principal component analysis (PCA) with the four variables measured for each scale separately. The hexagons were then ordered according to their position in the first axis of PCA, using a hierarchical manner and the smaller scale of hexagons. For the Bivariate selection method we did a dot plot for each scale hexagon, with the variables forest cover and rivers. We selected hexagons that were located in the quadrant of the graph that represented higher density of rivers and larger percentage of forest cover. After that, we made a simulation to evaluate if the two methods were able to retrieve scores as high as the ordination following only the positioning of the hexagons on Axis 1 of the PCA, without a hierarchical analysis. For the study site, the Multivariate Hierarchical selection was more efficient for choosing priority areas than Bivariate Selection for both the intermediate scale (1000 km) and to a lesser extent (100 km). The five hexagons of 100 km of highest priorities are located in São Paulo and Paraná, covering four protected areas (PARES of Jacupiranga, Guaraqueçaba APA, and APA Cananéia-Jacuípe and PARES Ilha do Cardoso). Due to simplicity and easy applicability of the method, we believe this may be an interesting option for selecting priority areas for implementation of mitigation measures of the effects of roads

As rodovias podem representar um importante fator na fragmentação de habitat para espécies silvestres adaptadas a habitats de alta complexidade estrutural, como as florestas tropicais. As estradas reduzem a conectividade da paisagem e a capacidade da população regional em habitar todas as áreas adequadas e estes efeitos são mais significativos nas espécies que evitam a estrada, que são, muitas vezes, espécies de interior de florestas. A magnitude dos efeitos de barreira dependerá do comportamento e mobilidade destas espécies. Quando as estradas representam ralos (sink) ou barreiras para as populações, devido, respectivamente, aos atropelamentos ou à repulsa, medidas mitigadoras são indicadas para aumentar a conectividade entre as manchas de habitat separadas por essas estradas. A qualidade do habitat é um fator que deve ser considerado, mesmo com baixas frequências de atropelamentos nesses locais. O objetivo desse estudo foi propor dois métodos de seleção de áreas prioritárias para implantação de medidas mitigadoras dos efeitos das estradas sobre espécies de vertebrados florestais: Seleção Hierárquica Multivariada e Seleção Bivariada. A área de estudo foi o bioma Mata Atlântica, sendo recortado em paisagens hexagonais em três escalas diferentes (10.000, 1.000 e 100 km), usando a extensão Repeating Shapes no programa ArcGIS 9.3. Em cada hexágono foram calculados: área de floresta e de Unidade de Conservação, densidade de estradas e de hidrografia. Apenas os hexágonos cobertos por no mínimo 45% pela Mata Atlântica, com mais de 50% de cobertura florestal e mais de 1% de Unidades de Conservação foram incluídos nas análises. Após esta seleção, no método Seleção Hierárquica Multivariada, foi feita uma análise de componentes principais (PCA) com as quatro variáveis medidas, para cada escala separadamente. Os hexágonos foram então ordenados segundo o posicionamento deles no 1 Eixo da PCA de forma hierárquica e da maior para menor escala de hexágonos. Para área de estudo o método de Seleção Bivariada foi construído um gráfico de pontos, para cada escala de hexágono, com as variáveis cobertura florestal e rios. Foram selecionados os hexágonos que estavam localizados no quadrante do gráfico que representasse maior densidade de rios e maior porcentagem de cobertura florestal. Posteriormente foi feita uma simulação para avaliar se os métodos eram capazes de recuperar escores tão alto quanto a ordenação seguindo apenas o posicionamento dos hexágonos no Eixo 1 da PCA, sem uma análise hierárquica. O método de Seleção Hierárquica Multivariada foi mais eficiente para escolha de áreas prioritárias do que a Seleção Bivariada tanto para a escala intermediária (1.000 km) quanto para a menor escala (100 km). Os cinco hexágonos de 100 km mais prioritários estão localizados em São Paulo e Paraná, abrangendo quatro UCs (PARES de Jacupiranga, APA de Guaraqueçaba, APA Cananéia- Jacuípe e PARES da Ilha do Cardoso). Devido à simplicidade e fácil aplicabilidade do método, acredita-se que este pode ser uma opção interessante para escolha de áreas prioritárias para implantação de medidas mitigadoras dos efeitos de estradas / Roads may represent an important factor in fragmentation of habitat for wild species adapted to habitats of high structural complexity as rainforests. Roads reduce landscape connectivity and the capacity of the regional population live in all suitable areas and these effects are most significant in species that avoid the road, which are often species dependent on forests. The magnitude of the barrier effects depend on the behavior and mobility of these species. When roads represent "sinkers" or barriers for populations due, respectively, trampling or avoidance, mitigation measures are indicated to increase connectivity between habitat patches separated by these roads. The habitat quality is a factor that must be considered, even at low frequencies of road kill there. The goal of this study was to propose two methods of selecting priority areas for implementation of mitigation measures of roads effects on forest vertebrate species: Multivariate Hierarchical Selection and Bivariate Selection. The study area was the Atlantic Forest biome, being cut into hexagonal landscapes at three different scales (10,000, 1,000 and 100 km), using the extension "Repeating Shapes" program in ArcGIS 9.3. In each hexagon was calculated: area of forest, protected areas, density of roads and hydrograph. Only hexagons covered by at least 45% by the Atlantic Forest, with over 50% forest cover and more than 1% of protected areas were included in the analyzes. After this using the Multivariate Hierarchical selection method, we performed a principal component analysis (PCA) with the four variables measured for each scale separately. The hexagons were then ordered according to their position in the first axis of PCA, using a hierarchical manner and the smaller scale of hexagons. For the Bivariate selection method we did a dot plot for each scale hexagon, with the variables forest cover and rivers. We selected hexagons that were located in the quadrant of the graph that represented higher density of rivers and larger percentage of forest cover. After that, we made a simulation to evaluate if the two methods were able to retrieve scores as high as the ordination following only the positioning of the hexagons on Axis 1 of the PCA, without a hierarchical analysis. For the study site, the Multivariate Hierarchical selection was more efficient for choosing priority areas than Bivariate Selection for both the intermediate scale (1000 km) and to a lesser extent (100 km). The five hexagons of 100 km of highest priorities are located in São Paulo and Paraná, covering four protected areas (PARES of Jacupiranga, Guaraqueçaba APA, and APA Cananéia-Jacuípe and PARES Ilha do Cardoso). Due to simplicity and easy applicability of the method, we believe this may be an interesting option for selecting priority areas for implementation of mitigation measures of the effects of roads

A Amazônia Brasileira possui diversos tipos de padrão de desmatamento, variando do típico padrão \"espinha-de-peixe\", comum em pequenas propriedades, para grandes áreas desmatadas (padrão grandes propriedades), resultando em paisagens com diferentes estruturas, configuração e nível de perturbação. A teoria sugere que uma perda desproporcional de espécies ocorre quando a cobertura total de habitat cai para menos de 30% da paisagem, e a configuração passa então a ter um maior efeito sobre as espécies. Para analisar o efeito da configuração de habitat na persistência e riqueza de vertebrados de médio e grande porte (aves e mamíferos) foram amostradas 21 paisagens (4 x 4 km) do sul da Amazônia com quantidade similar de habitat (~25%), mas configurações de paisagem contrastantes. Entrevistas (n = 150) foram aplicadas de Fevereiro a Julho de 2009 para registrar a ocorrência de vertebrados, e o nível de perturbação das 21 paisagens, compostas de sete áreas controle (áreas não perturbadas de floresta contínua), sete paisagens com padrão de grandes propriedades e sete de espinhas-de-peixe. Métricas de paisagem foram extraídas de uma imagem Landsat-TM de 2009 e de 14 imagens Landsat-TM bianuais, para determinar o melhor preditor para a persistência das espécies. Existiu uma diferença significativa na riqueza de espécies entre os padrões espinha-de-peixe, grandes propriedades e as áreas controle, com uma média de 29.28 (SD=4.6), 38.8 (SD=5.2), e 43.5 (SD=2.2), respectivamente. Nós também encontramos um maior número de espécies especialistas nas áreas controle (média ± SD = 13.7 ± 0.95) e grandes propriedades (média ± SD = 11.71 ± 2.2), quando comparadas ao padrão espinha-de-peixe (média ± SD = 5.14 ± 2.6). Os resultados da NMDS mostram que a comunidade de vertebrados de médio e grande porte das áreas controle é muito similar à comunidade encontrada nas unidades de grande propriedade, além de todas as unidades de área controle e grande propriedade serem homogêneas entre si. Por outro lado, as unidades espinha-de-peixe, além de apresentarem uma maior heterogeneidade entre suas unidades, também se mostrou muito dissimilar em relação às outras paisagens, tanto para a comunidade de vertebrados quando para a comunidade de espécies especialistas. O padrão espinha-de-peixe também apresentou uma alta intensidade de queimadas, retirada de madeira e pressão de caça, enquanto que o padrão grandes propriedades apresentou uma leve intensidade de queimada e uma alta pressão de caça, e as áreas controle não apresentaram nenhum sinal de perturbação. O número de espécies e o número de espécies especialistas foram negativamente afetados pelo número de fragmentos e, secundariamente, pela idade de isolamento. Assim, quanto maior o número de fragmentos na paisagem e maior o tempo de isolamento, menor será a riqueza de espécies e o número de espécies especialistas. Nossos resultados demonstram que o padrão grandes propriedades leva a uma estrutura de paisagem mais favorável para a biodiversidade. Este tipo de paisagem pode manter um alto número de espécies e uma comunidade de vertebrados de médio e grande porte mais diversa, incluindo predadores de topo e grandes cracídeos, considerados fundamentais para a integridade do ecossistema, sendo mais similar às áreas controle. Por outro lado, o padrão espinha-de-peixe leva a uma paisagem mais fragmentada, com uma comunidade de vertebrados mais pobre e dominada por espécies generalistas. / The Brazilian Amazon has several types of deforestation patterns, varying from the typical \"fishbone pattern\" common in small properties, to large deforested areas (large-property pattern), resulting in landscapes with different structure, configuration and disturbance levels. Theory suggests that a disproportionate loss of species occurs when total habitat cover decreases to less than 30% of the landscape, and the landscape configuration starts to have a large effect over species. To analyse the effects of the habitat configuration on the persistence and richness of mid-sized and large-bodied vertebrates (mammals and birds), we have sampled 21 landscapes in the southern Amazonia with similar amounts of habitat (~25%) but contrasting configuration. Interviews (n = 150) were used from February to July 2009 to record the occurrence of vertebrates and the disturbance degree in the 21 landscapes, composed of seven control areas (undisturbed areas of continuous forest), seven large-properties and seven fishbone deforestation patterns. Forest-patch metrics were extracted from a 2009 Landsat-TM image and from 14 bi-annual Landsat-TM images to examine the best predictor to species persistence. There was a significant difference in species richness between fishbone, large-property and control areas with an average of 29.28 (SD=4.6), 38.8 (SD=5.2), and 43.5 (SD=2.2), respectively. We also found a higher number of specialist species in control areas (mean ± SD = 13.7 ± 0.95) and large-properties (mean ± SD = 11.71 ± 2.2), when compared with fish-bone pattern (mean ± SD = 5.14 ± 2.6). NMDS results show vertebrate community in control areas are very similar to the ones found in large-property sites, beyond all landscapes (control areas and large properties) are homogeneous among themselves. On the other hand the fish-bone landscapes are very dissimilar from them and heterogeneous among each other, concerning both the large vertebrate community and the specialist species community. The fish-bone pattern also shows a heavy intensity of fire, selective logging and hunting pressure while the large-property pattern shows a light intensity of fire and a heavy hunting pressure whereas the control areas show no sign of disturbance. The number of species and the number of specialist species were negatively affected by the number of fragments and secondarily by the isolation age. Therefore the greater the number of fragments in the landscape unit and the older is the isolation process, the fewer is the species richness as well as the number of specialist species. Our results demonstrated that large-property pattern leads to a landscape structure that is better for biodiversity. This type of landscape can maintain a higher number of species and a more diverse community of large vertebrates, including top predators and large cracids, considered fundamental for the integrity of the ecosystem, being more similar to the control areas. On the other hand, the fish-bone pattern leads to a more fragmented landscape with a poorest vertebrate community and dominated by generalist species.

Este estudo objetivou estudar os carrapatos e a infecção por patógenos, e sua correlação com os vertebrados desta região entre 10/2007 e 09/2008 foram realizadas mensalmente doze visitas a uma área de floresta ombrófila densa da Amazônica na Estação Ecológica de Samuel. Foram coletados, 60 aves, 36 mamíferos, 14 répteis e 11 anfíbios. Em vida livre foram realizadas 80 coletas de carrapatos em um total de 39.600m em cerca de 2.640min (44h) e coletados 265 carrapatos adultos de quatro espécies, sendo elas: A. scalpturatum (81), A. latepunctatum (84), A. oblongogutattum (18), A. naponense (69) e 597 ninfas de Amblyomma sp. Dos 104 adultos (11,8% do total de carrapatos) foram testados para Anaplasmataceae, obtive-se 27 (25,9%) positivos e mais 36 adultos (total de 140) e 11 carrapatos foram positivos (1) A. scalpturatum, (4) A. latepunctatum, (3) A. naponense. É notável o impacto da hidrelétrica sobre a fauna de pequenos mamíferos. / This study was aimed to analyze the ticks and the pathogenic infections, and their correlation with the vertebrates of such a region from October 2007 to September 2008, 12 surveys were monthly carried out at the Samuel Ecological Station in an Amazonian dense ombrophilous forest. They were collected from 60 birds, 36 mammals, 14 reptiles, and 11 amphibians. Eighty(80) collections of free-living ticks were carried out within an area of about 39.000 meters, during 2.640 minutes (44 hours), and 265 adult ticks or four species were picked up as following: 81 A.scalpturatum, 84 A. latepunctatum, 18 A. oblongogutattum, 69 A. naponense , and 597 Amblyomma sp. nymphs. 104 the adults, which accounted for 11.8% of total of ticks collected, were tested for Anaplasmataceae, and 27 (25.9%) were positive. In the Rickettsia spp. sample, additionally to the above mentioned 104 ticks tested, 36 adult ticks (out of a total of 140) were positive. It is noteworthy the impact caused by the hydropower plant on the small mammal fauna.

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Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / ABSTRACT - CHAPTER I Actomyosin from rat testis was obtained by freezing the soluble fraction and myosin II was isolated from this actomyosin. Testis was homogenized in a buffer extract, centrifuged, and the 40,000g x 40 supernatant frozen at -20°C for 48 hours. The supernatant was thawed at 4°C, centrifuged at 45.000g x 45 and the precipitate washed twice with imidazole buffer (pH 7.0 and 9.0, respectively). The resulting precipitate was enriched in 3 polypeptides: p205, p43 and one that migrated together with the front of the gel. These polypeptides were solubilized in pH 10.8 buffer at 27°C. When isolated in a Sephacryl S-400 column, p205 cosedimented with F-actin in the absence, but not in the presence, of ATP and was marked with anti-myosin II. Although the testis preparation expressed low K/EDTA-ATPase activity, a similar preparation obtained from skeletal muscle exhibited high K/EDTA-ATPase activity. In this study, myosin II was isolated from an actomyosin preparation obtained by freezing the soluble fraction of testis. ABSTRACT - CHAPTER II Actomyosin from swine, bovine and chicks brain was obtained by freezing the soluble fraction and myosin II and V was precipitate together, and myosin II from swine brain was partially isolated from this actomyosin. Brain was homogenized in a buffer extract, centrifuged, and the 40,000g x 40 supernatant frozen at -20°C for 48 hours. The supernatant was thawed at 4°C, centrifuged at 45.000g x 45 and the precipitate washed twice with imidazole buffer (pH 7.0 and 10.0, respectively). The resulting precipitate was enriched in 3 polypeptides: p205, p53, p43 and own high Mg2+-ATPase activity. These polypeptides were solubilized in pH 10.2 buffer at 27°C, with addition of ATP, Mg and NaCl. The p205 from swine brain was partially isolated in a Sephacryl S-500 column. This polypeptide of 205 kDa was marked with antibody anti-myosin II and V. Although the brain preparation expressed low K/EDTA-ATPase activity, we observed Co2+- ATPase activity and a stimulation of the Mg2+-ATPase activity by Tween 20. In this study, showed a precipitation together of myosin II and V, and partially isolated this myosin from swine brain from actomyosin preparation obtained by freezing the soluble fraction of brain. / RESUMO GERAL - Miosinas são proteínas motoras que translocam sobre filamentos de actina e atualmente constituem uma superfamília com 20 classes. Algumas são conhecidas apenas a estrutura primária através de seqüência gênica, outras já estão bem caracterizadas bioquimicamente, como as miosinas I, II e V. São amplamente distribuídas em todas as células eucarióticas. Apresentam como características bioquímicas: alta atividade ATPase na presença de EDTA e alta concentração de potássio (atividade K/EDTA-ATPase) e uma baixa atividade Mg2+-ATPase, que é estimulada por F-actina. Preparação de actomiosina é obtida a partir da precipitação de fração solúvel de cérebro tanto em baixa quanto em alta força iônica e esse processo de precipitação constitui um passo importante para purificar e caracterizar miosina II e V a partir de fração solúvel de cérebro. Miosina II é precipitada quando a fração solúvel de cérebro é dializada contra tampão de baixa força iônica, enquanto que, miosina V é precipitada seletivamente em relação à miossina II, quando a fração solúvel de cérebro é tratada com alta força iônica, sendo postulado que essa precipitação de miosina (II e V) seja resultado de sua interação com actina e vesículas. Recentemente temos obtido a precipitação de actomiosina a partir do congelamento de fração solúvel de cérebro ou testículo de rato. Neste trabalho mostramos a purificação de miosina II de testículo de rato e a obtenção de actomiosina de cérebro de suino, bovino e pintainho através do congelamento de fração solúvel de cérebro e testículo. RESUMO - CAPÍTULO I Actomiosina de testículo de rato foi obtida através do congelamento de fração solúvel e miosina II foi isolada a partir dessa actomiosina. Testículos foram homogeneizados em tampão de extração, centrifugado e o sobrenadante 40.000g x 40 foi congelado a -20oC por 48 horas. O sobrenadante foi descongelado a 4oC, centrifugado a 45.000g x 45 e o precipitado foi lavado duas vezes com tampão imidazol (pH 7,0 e 9,0, respectivamente). O precipitado resultante é enriquecido em três polipeptídeos: p205, p43 e um que migra junto com a frente do gel. Esses polipeptídeos foram solubilizados em tampão pH 10,8 a 27oC. O p205, isolado em Sephacryl S-400, co-sedimenta com F-actina na ausência, mas não na presença, de ATP e foi marcado com anti-miosina II. Embora a preparação de testículo, praticamente, não expressou atividade K/EDTA-ATPásica, uma preparação similar obtida a partir de músculo esquelético apresentou alta atividade K/EDTA-ATPásica. Nesse trabalho, miosina II foi isolada a partir de uma preparação de actomiosina obtida pelo congelamento de fração solúvel de testículo. RESUMO - CAPÍTULO II Actomiosina de cérebro de suino, bovino e pintainho foi obtida através do congelamento de fração solúvel e miosina II e V foram precipitadas conjuntamente, sendo que miosina de cérebro de suino foi parcialmente isolada a partir dessa actomiosina. Os cérebros foram homogeneizados em tampão de extração, centrifugado e o sobrenadante 40.000g x 40 foi congelado a -20oC por 48 horas. O sobrenadante foi descongelado a 4oC, centrifugado a 45.000g x 45 e o precipitado foi lavado duas vezes com tampão imidazol (pH 7,0 e 10, respectivamente). O precipitado resultante é enriquecido em três polipeptídeos: p205, p53, p43 e possui alta atividade Mg2+-ATPase. Esses polipeptídeos foram solubilizados em tampão pH 10,2 a 27oC, com adição de ATP, Mg e NaCl. O p205 de cérebro de suino foi parcialmente isolado em Sephacryl S-500. Esse polipeptídeo de 205 kDa foi marcado com anticorpos anti-miosina II e V. Embora a preparação de cérebro, praticamente, não expressou atividade K/EDTAATPásica, apresentou atividade Co2+-ATPase e uma estimulação da atividade Mg2+-ATPase por Tween 20. Nesse trabalho mostramos a precipitação conjunta de miosina II e V e o isolamento parcial dessas miosinas de cérebro de suino a partir de uma preparação de actomiosina obtida pelo congelamento de fração solúvel de cérebro. / Mestre em Genética e Bioquímica