Diss. Umeå : Univ., 2004.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Canine distemper is one of the most prevalent viral diseases of dogs. Several cases are diagnosed in a daily basis in private practices and veterinary hospitals around the country. Most cases of neurological manifestation of canine distemper are fatal and the diagnosis confirmation by histopathology is often necessary. Canine distemper encephalitis is the main cause of death or reason for euthanasia in dogs necropsied at the Laboratório de Patologia Veterinária (LPV) of the Universidade Federal de Santa Maria (UFSM). Consequently the large number of canine distemper cases in the LPV-UFSM files prompted the performance of a retrospective study consisting of 620 neurologic cases of canine distemper which served as the basis for a prospective study on the neuro-histopathologic aspects of the disease. The current study was carried out to perform a detailed histopathologic investigation on the changes in the central nervous system (CNS) of dogs affect by canine distemper aiming to help students of veterinary pathology and veterinary pathologists in the correct diagnose of this disease. Seventy dogs necropsied at the LPV-UFSM and with diagnosis of canine distemper confirmed by the finding of characteristic inclusion bodies in the CNS were included in the study. In order to determine the prevalence of the lesions, several anatomical regions were selected from the brain and spinal cord; these sites were consistently microscopically examined in each case. Overall, most affected anatomical regions were, in decreasing order of frequency: cerebellum (91.4%), diencephalon (78.6%), frontal lobe (75.7%), pons (72.9%) and mesencephalon (70.0%). Demyelination was the most prevalent lesion; it was observed in 91.4% of the cases and was located mainly in the cerebellum (88.6%), pons (65.7%) and diencephalon (61.4%). The five structures most affected by demyelination were: roof of the fourth ventricle (68.6%), cerebellar folia (61.4%), cerebellar medulla (61.4%), cervical spinal cord (46.3%) and mesencephalic tegment (40.0%). Other lesions and their prevalence were non-suppurative encephalitis (70.0%), non-suppurative leptomeningitis (44.3%), non-suppurative myelitis (35.2%), encephalomalacia (31.4%), nonsuppurative myelitis (18.5%), laminar cortical necrosis (17.1%), myelomalacia (13.0%), nonsuppurative ependymitis (7.1%) and plexochoroiditis (1.4%). The occurrence of the inclusion bodies in the cells of the CNS was: astrocytes (82.8%), neurons (44.3%), gemistocytes (31.4%), ependymal cells (22.8%), meningothelial cells (4.3%) and cells of the choroids plexus (1.4%). / A cinomose é uma das doenças virais mais prevalentes em cães. Muitos cães são diagnosticados com a doença diariamente em clínicas e hospitais veterinários de todo o país. A forma neurológica da cinomose é fatal na grande maioria das vezes, e a confirmação do diagnóstico clínico através do exame histopatológico se faz necessária em muitos casos. A encefalite por cinomose representa a principal causa de morte ou razão para eutanásia de cães necropsiados no Laboratório de Patologia Veterinária (LPV) da Universidade Federal de Santa Maria (UFSM). Com isso, o grande número de casos de cinomose arquivados no LPVUFSM proporcionou a realização de um estudo retrospectivo de 620 casos da forma neurológica da doença que serviu como base para a realização de um estudo neurohistopatológico prospectivo. O presente estudo tem como objetivo realizar uma investigação histopatológica detalhada das alterações no sistema nervoso central (SNC) de cães com cinomose para auxiliar estudantes de patologia e patologistas no diagnóstico da doença. Para isso, foram selecionados 70 casos da forma neurológica da cinomose confirmada pelo achado dos corpúsculos de inclusão característicos no SNC em cães necropsiados no LPV-UFSM. Para determinar a prevalência das lesões, diversas regiões anatômicas do encéfalo e medula espinhal foram selecionadas e sistematicamente examinadas histologicamente em cada caso. As regiões anatômicas mais afetadas, em ordem decrescente, independentemente do tipo de lesão, foram: cerebelo (91,4%), diencéfalo (78,6%), lobo frontal (75,7%), ponte (72,9%) e mesencéfalo (70,0%). Desmielinização foi a lesão mais prevalente, observada em 91,4% dos casos, localizada principalmente no cerebelo (88,6%), ponte (65,7%) e diencéfalo (61,4%). As cinco estruturas anatômicas mais afetadas pela desmielinização foram: teto do quarto ventrículo (68,6%), folhas cerebelares (61,4%), substância medular do cerebelo (61,4%), medula espinhal cervical (46,3%) e tegmento mesencefálico (40,0%). A prevalência das outras lesões foi: encefalite não-supurativa (70,0%), leptomeningite não-supurativa (44,3%), mielite não-supurativa (35,2%), encefalomalacia (31,4%), meningomielite não-supurativa (18,5%), necrose laminar cortical (17,1%), mielomalacia (13,0%), ependimite não-supurativa (7,1%) e plexocoroidite não-supurativa (1,4%). A ocorrência dos corpúsculos de inclusão nas células do SNC foi: astrócitos (82,8%), neurônios (44,3%), gemistócitos (31,4%), células do epêndima (22,8%), células meningoteliais (4,3%) e células do plexo coróide (1,4%).

Neu auftretende Viruskrankheiten zoonotischen Ursprungs stellen eine zunehmende Gefahr für die globale Gesundheit dar. Wie das unerwartete Auftreten von dem Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) Ende 2019 zeigte, gibt es allerdings trotz jahrelanger intensiver Forschung Verständnislücken, wo und wann mit Tieren assoziierte Krankheitserreger auftauchen, oder durch welche evolutionären Vorgänge diese Übertragungen möglich werden. Diese Arbeit befasst sich mit dem Thema der genetischen Adaptation von Viren bevor und nachdem ein Wirtswechsel stattgefunden hat und leistet damit einen Beitrag zum besseren Verständnis von Wirtswechselprozessen und ihren zugrundeliegenden Mechanismen. / Emerging viral diseases of zoonotic origin pose an increasing threat to global health. Despite intense research, we do not understand where and when animal-associated pathogens emerge, or by what evolutionary processes these transmissions become possible; best illustrated by the unexpected emergence of the Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) at the end of 2019. This thesis is concerned with the topic of viral genetic adaptation before and after cross-species transmissions, contributing to a better understanding of host switching processes and their underlying mechanisms.

O carcinoma do colo uterino é um dos tumores mais freqüentes entre as mulheres e o principal fator de risco para o desenvolvimento desta neoplasia é a infecção persistente por tipos de papilomavírus humano (HPV) de alto risco oncogênico. Dentre estes, o HPV-16 é o mais comumente encontrado em lesões de alto grau e carcinoma. HPV cujas seqüências nucleotídicas diferem em até 2% são classificados como variantes de um mesmo tipo, e algumas destas variações genômicas levam a mudanças de aminoácidos em proteínas virais, em regiões potencialmente antigênicas. Além de variações antigênicas, o polimorfismo das moléculas HLA de classe II, responsáveis pela apresentação de antígenos às células T, também pode influenciar a resposta imune. Alguns estudos já descreveram associações entre alelos HLA e risco de câncer do colo do útero e infecção pelo HPV. Este projeto visa avaliar se existem diferenças na distribuição de alelos HLA entre pacientes com carcinoma do colo uterino portadoras de diferentes variantes de HPV-16 e mulheres sem câncer. Foram utilizados 112 casos de carcinoma do colo do útero positivos para presença de DNA de HPV-16 e 257 controles. Em todas as amostras do estudo foram realizadas as tipagens dos genes HLA-DRB1 e DQB1. A caracterização dos genes E6 e L1 de variantes de HPV-16 foi realizada nos 112 casos através de PCR-SSO e permitiu a identificação de infecções por uma única variante de HPV-16 em 89 amostras. Dentre elas foram encontradas variantes européias, asiático-americanas e africanas. A magnitude da associação entre os grupos HLA e as variantes de HPV-16 foi estimada através do cálculo de Odds Ratio e respectivo intervalo de confiança de 95%. Uma associação negativa entre DQB1*05 e câncer do colo do útero portadores de HPV-16 foi descrita anteriormente nesta amostra. Nosso estudo mostrou que esta associação pode ser atribuída as portadoras de variantes não-européias. A associação positiva de DRB1*15 mostrou ser maior entre portadoras de variantes européias que nãoeuropéias. Apesar do pequeno número de casos portadores de variantes africanas, foram encontradas associações positivas com DRB1*0701 e DQB1*0201. O polimorfismo da posição 350 do gene E6, descrito anteriormente como associado a risco de persistência de HPV, também foi avaliado: entre portadores de 350T, que codifica o aminoácido leucina, encontrou-se um efeito protetor dos alelos DRB1*04 e DQB1*0302. Uma maior freqüência de DRB1*15 foi observada entre portadores de variantes 350T quando comparada à freqüência nos controles. Nossos resultados sugerem que a associação entre alelos HLA de classe II e risco de câncer do colo do útero é influenciada pela distribuição de variantes de HPV-16 numa população determinada. / Cervical cancer is one of the most frequent tumor among women and the major risk factor for the development of this neoplasia is persistent infection with high risk oncogenic types of human papillomavirus (HPV). Among these, HPV-16 is the commonest type found in high grade lesions and carcinoma. HPV with less than 2% of divergence in nucleotide sequence are classified as variants of a given type, and these genomic variations can lead to changes in potentially antigenic regions. Besides these antigenic variations, polymorphism of HLA class li molecules, responsible for antigen presentation to T cells, can also influence the immune response. Several studies showed associations between HLA class II polymorphism and risk of cervical cancer and HPV infection. The aim of this study is to investigate if there are differences in the HLA class II alleles distribution between women with invasive cervical cancer (ICC) that harbor different HPV-16 variant and women without cancer. We analyzed 112 HPV-16 positive cases of cervical carcinoma and 257 controls. AII the samples had their HLA-DRB1 and DQB1 genes previously typed. HPV-16 variants in 112 ICC samples were characterized for E6 and L1 genes by PCR-SSO and allowed the identification of infections by single variants in 89 samples. European, Asian-American and African variants were found. The magnitude of association between HLA markers and HPV-16 variants was measured by Odds Ratios (OR) and respective 95% confidence intervals (CI). A negative association between DQB1*05 and HPV-16 positive ICC was previously described in this sample. Our study showed that it may be attributed to non-European variants carriers. The positive association of DRB1*15 was higher for women harboring European than non-European variants. In spite of the small number of women carrying African variants, positive association was found with DRB1*0701-DQB1*0201. The E6 gene polymorphism at residue 350, previously described as associated with risk of HPV persistence, was also investigated: among ICC carrying 350T, that code for leucine, we found a protective effect of DRB1*04-DQB1 *0302 haplotype. A higher frequency of DRB1*15 was found among carriers of 350T variants as compared to controls. Our results suggest that the association between HLA class II polymorphism and risk of invasive cervical cancer is influenced by the distribution of HPV-16 variants in a given population.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Seven outbreaks and an isolated case of meningoencephalitis caused by bovine herpesvirus-5 (BoHV-5) in cattle from Rio Grande do Sul, Brazil, occurring in 2002-2004 are described. From a total population at risk of 1,359 cattle, 54 1-18-month-old calves from both sexes and several breeds were affected and 50 died spontaneously or were euthanatized while moribund. The highest frequency of cases were in recently weaned calves or calves submitted to other stressing factors. General rates of morbidity, mortality and lethality were respectively 3.97%, 3.67% e 92.59%. Clinical courses varied from 3-10 days and included depression, nasal and ocular discharge, grinding of teeth, circling, blindness, fever, nistagmus, trembling, anorexia, dysphagia, drooling, incoordination, head pressing, rough hair coat, tachycardia, tachypnea, abdominal pain, melena, falls, recumbency, opisthotonus, convulsions and paddling. Nineteen calves were necropsied. Necropsy findings were characterized by hyperemia of leptomeninges, swollen of rostral portions of the telencephalon, and flattening of frontal lobes gyri; frequently in these frontal areas there were segmental brown-yellow discoloration and softening (malacia) of the cortex. In cases with more protracted clinical courses there were extensive swelling, softening and hemorrhaging of the telencephalic frontal lobes. Microscopically, all affected cattle had a necrotizing non-suppurative meningoencephalitis with variable distribution among the 19 cases and among the various telencephalic regions of the same case. The severity of these changes were more marked, in decreasing order of intensity, in the telencephalic frontal cortex, basal ganglia (nuclei), thalamus, brain stem, parietal telencephalic cortex, occipital telencephalic cortex and cerebellum. Perivascular inflammatory infiltrate consisted predominantly of lymphocytes, plasm cells, and, less frequently, neutrophils. Additional microscopic findings included variable degrees of gliosis, edema, neuronal necrosis in the telencephalic cortex characterized by shrinking and eosinophilia of perikaria and nuclear picnosis (red neuron); basophilic intranuclear inclusion bodies in astrocytes and neurons (21.05% of the cases); sattelitosis; and neuronophagia. The areas of softening in the cortical substance consisted of necrosis of the neuroctodermal elements with maintenance of mesenchymal structures (vessels and microglia), infiltrate of gitter cells, and, in more severe cases, extensive hemorrhages. In chronic cases, only vascular structures and a few gitter cells remained in the cortical area leaving a cavity between white matter and leptomeninges (residual lesion). The diagnosis was based on the epidemiological, clinical, necropsy and histopathologial findings. Viral isolation, immunofluorescent antibody technique and polymerase chain reaction were performed in three outbreaks. / São descritos sete surtos e um caso isolado de meningoencefalite por herpesvírus bovino-5 (BoHV-5) em bovinos no Rio Grande do Sul entre 2002-2004. Foram afetados bovinos de 1-18 meses, de diversas raças e ambos os sexos. A maior freqüência foi observada em bovinos recém-desmamados e submetidos a outros fatores de estresse. Nesses surtos, de uma população total sob risco de 1.359 bovinos, 54 foram afetados, quatro se recuperaram e 50 morreram espontaneamente ou foram submetidos à eutanásia quando moribundos. Os índices gerais de morbidade, mortalidade e letalidade foram, respectivamente, de 3,97%, 3,67% e 92,59%. A evolução clínica variou de 3-10 dias e os sinais eram caracterizados por depressão, corrimento nasal ou ocular, ranger de dentes, andar em círculos, cegueira, febre, nistagmo, tremores, anorexia, disfagia, sialorréia, incoordenação, pressão da cabeça contra objetos, pêlos arrepiados, taquicardia, taquipnéia, dor abdominal, melena, quedas, decúbito, opistótono, convulsões e movimentos de pedalagem. Dezenove bezerros foram necropsiados. Achados de necropsia foram caracterizados por hiperemia das leptomeninges, tumefação das porções rostrais do telencéfalo, com achatamento das circunvoluções dos lobos frontais; nessas áreas havia focos marromamarelados e amolecidos (malacia). Nos casos de evolução clínica mais longa era observada acentuada tumefação, amolecimento e extensas áreas de hemorragia nos lobos frontais telencefálicos. Microscopicamente, todos os bovinos afetados apresentaram meningoencefalite não-supurativa e necrosante, que variou quanto à localização e intensidade nos 19 casos examinados e nas seções de encéfalo de um mesmo caso. A intensidade dessas lesões foi mais acentuada, em ordem decrescente, no córtex telencefálico frontal, nos núcleos da base, tálamo, tronco encefálico, córtex parietal, córtex occipital e cerebelo. O infiltrado inflamatório perivascular era constituído predominantemente por linfócitos e plasmócitos e, menos freqüentemente, neutrófilos. Outros achados incluíam variados graus de gliose, edema, necrose neuronal no córtex telencefálico, caracterizada por encarquilhamento e eosinofilia do citoplasma e picnose nuclear (neurônio vermelho), corpúsculos de inclusão basofílicos intranucleares em astrócitos e neurônios (21,05% dos casos), satelitose e neuronofagia. As áreas de amolecimento do parênquima eram caracterizadas por necrose do componente neuroectodérmico e manutenção das estruturas mesenquimais (vasos e micróglia), com infiltrado de células gitter e, em casos mais graves, áreas de hemorragia. Nos casos crônicos apenas estruturas vasculares e poucas células gitter permaneciam, formando uma cavidade entre a substância branca e as leptomeninges (lesão residual). O diagnóstico foi realizado com base nos achados epidemiológicos, clínicos, de necropsia e histopatológicos. Adicionalmente, foi realizado isolamento viral, imunofluorescência e reação em cadeia da polimerase em três surtos.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This dissertation consists of an investigation on infectious canine hepatitis (IHC) and resulted in two scientific papers which are placed in the final part of this dissertation. The necropsy reports of 5,361 dogs necropsied over a 43-year period (1964-2006) were reviewed in search for cases of infectious canine hepatitis (ICH). Sixty two (1.2%) cases of the disease were found. Epidemiological, clinical and anatomopathogical data of these 62 cases are presented in the first paper. The second paper presents an immunoistochemistry (IHC) assay performed in the tissues of 27 dogs from the 62 cases surveyed in the first paper. Evaluated tissues by IHC included liver, kidney, spleen, lymph nodes, tonsils, lungs, small intestine, brain, and spinal cord. For each organ increasing degrees (from mild to marked) of intensity of immune staining were ascribed. The antigen of canine adenovirus type 1 was detected in most of evaluated organs, mainly in endothelial cells. / A presente dissertação consta de uma investigação sobre hepatite infecciosa canina e resultou na produção de dois trabalhos científicos que estão colocados ao final da dissertação. Os protocolos de necropsias realizadas em 5.361 cães durante um período de 43 anos (1964-2006) foram revisados em busca de casos de hepatite infecciosa canina (HIC) e sessenta e dois (1,2%) casos foram encontrados. Dados epidemiológicos, clínicos e anatomopatológicos desses 62 casos são apresentados e discutidos no primeiro trabalho. O segundo trabalho apresenta os resultados de um estudo imunoistoquímico (IHQ) realizado nos tecidos de 27 dos 62 cães pesquisados no primeiro trabalho. Os tecidos examinados incluíram fígado, rim, baço, linfonodos, tonsilas, pulmão, intestino delgado, encéfalo e medula óssea. Para cada órgão foram atribuídos graus crescentes (de leve a acentuada) de intensidade de imunomarcação. O antígeno de adenovírus canino tipo 1 foi marcado na maioria dos órgãos examinados, principalmente em células endoteliais.

Целью выпускной квалификационной работы является комплексное исследование интегральных антиоксидантных параметров препаратов комбинированного действия для терапии вирусных и нейродегенеративных заболеваний. Были изучены пути образования свободных радикалов, рассмотрены антиоксидантные подходы в терапии различных заболеваний. С использованием предложенных потенциометрических методов была исследована антиоксидантная (АОЕ) и антирадикальная (АРЕ) емкость синтезированных триазолов и имидазолов, модифицированных полифенолами. АОЕ определяли потенциометрическим методом с использованием окислителя нерадикальной природы – K3[Fe(CN)6]/K4[Fe(CN)6], АРЕ оценивали потенциометрическим методом с использованием радикал-генерирующей системы 2,2´-азобис(2-метилпропионамидин) дигидрохлорида (ААРН). Стехиометрические коэффициенты ингибирования изученных триазолов принимают значения от 0 до 15, имидазолов от 0 до 5 в зависимости от количества активных групп в молекуле антиоксиданта, их расположением и с механизмом обрыва цепей на антиоксиданте. Были проведены корреляционные исследования с применением независимых спектрофотометрических методов. / Objective of the work: comprehensive study of integral antioxidant parameters of combined action drugs for the treatment of viral and neurodegenerative diseases. We have considered ways to form free radicals and antioxidant approaches in therapy of various diseases. In the process of work we investigated the antioxidant parameters adducts of triazole and imidazoles modified with polyphenols. Particularly, the determination of antioxidant capacity with oxidizing agents of a radical (2,2'-azobis (2-methylpropionamidine) dihydrochloride (AAPH)) and non-radical nature (K3[Fe(CN)6]/K4[Fe(CN)6) was performed by using the potentiometric method. Stoichiometric inhibition coefficients of the studied triazoles take values from 0 to 15, imidazoles – from 0 to 5, depending on the number of active groups in the antioxidant molecule, their location and the mechanism of chain termination on the antioxidant. Spectrophotometric studies were carried out using the reactions of the interaction of antioxidants with a stable radical 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH•) and reagent Folin-Ciocalteu to confirm the correctness of the results.