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Expressão em Escherichia coli de uma proteína recombinante do gene A2 de Leishmania chagasi e utilização desta proteína no diagnóstico da leishmaniose visceral canina /

Jusi, Márcia Mariza Gomes. January 2011 (has links)
Orientador: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Isabel Kinney Ferreira de Miranda Santos / Resumo: A leishmaniose visceral é uma zoonose, considerada como uma entre seis doenças tropicais mais importantes nos países em desenvolvimento. O agente etiológico da enfermidade no Brasil, a Leishmania chagasi, é transmitida pela picada do flebotomíneo Lutzomyia longipalpis, que adquire o parasito ao realizar o hematofagismo em animais infectados. No ambiente doméstico, o cão é considerado o principal reservatório da leishmaniose visceral e, em consequência disso, é também o principal alvo das campanhas de controle da forma humana da doença. Neste trabalho foi avaliado o potencial diagnóstico para a leishmaniose visceral canina de um antígeno recombinante, produzido a partir do gene de uma proteína, isolado em L. chagasi, amostra Jaboticabal. O gene isolado apresenta similaridade com a família A2 de L. chagasi e foi expresso utilizando o vetor pET28a em E. coli. A proteína de 11 KDa expressa, foi avaliada pelo ensaio imunoenzimático (ELISA). O ELISA com o antígeno recombinante His6_A2 detectou anticorpos anti-A2 em 52% dos cães infectados com L. chagasi. Enquanto que, 67% dos soros de animais vacinados e 65% dos animais de áreas-não endêmicas, foram negativos pelo ELISA_A2. Os testes de Western-blotting e Dot-ELISA realizado com soros de camundongos inoculados com essa proteína His_A2 demonstrou resultados positivos de antigenicidade e imunogenicidade. Todos os sequenciamentos de DNA mostraram homologia com genes da família A2. / Abstract: Visceral leishmaniasis is a zoonosis and one of six most important tropical diseases in developing countries. The causative agent of the disease in Brazil, Leishmania chagasi, is transmitted by the bite of the sandfly Lutzomyia longipalpis, who acquired the parasite biting infected animals. In domestic environment, the dog is considered the main reservoir of visceral leishmaniasis, and in consequence it is also the main target of campaigns to control the disease in human beings. This study evaluated the potential of a recombinant antigen produced from the A2 gene Jaboticabal strain L. chagasi for diagnosis of canine visceral leishmaniasis (LVC). The isolated gene showed similarity with L. chagasi family A2 gene, and was expressed using pET28a expression vector in E. coli. The 11-kDa protein expressed was evaluated by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) using known positive and negative sera, previously tested by Indirect Immunofluorescence Assay (IFA). The His-A2 recombinantantigen detected anti-A2 antibodies in 52% of L. chagasi infected dogs. Seventy-seven percent of vaccinated dogs and 65% of dogs from non-endemic areas were both negative by A2-ELISA. The antigenicity and immunogenicity of the expressed protein was confirmed by Western blot and Dot-ELISA assays, performed using sera from mice inoculated with this protein. / Mestre
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Detecção de anticorpos anti-leishmania chagasi em cães do município São José do Rio Preto, São Paulo /

Nardo, Carla Daniela Dan de. January 2010 (has links)
Orientador: Mary Marcondes / Banca: Paulo César Ciarlini / Banca: Raimundo Souza Lopes / Resumo: A leishmaniose visceral é uma zoonose causada por um protozoário do gênero Leishmania, cujo agente etiológico no Brasil é a Leishmania chagasi. O primeiro caso canino autóctone no Estado de São Paulo, Brasil, foi identificado em 1998 no município de Araçatuba. Desde então a doença vem se espalhando por todo o Estado. O objetivo do presente estudo foi determinar a freqüência de ocorrência de anticorpos anti-Leishmania chagasi em amostras de soro de 584 cães de São José do Rio Preto, São Paulo, área não endêmica para a doença e que dista 160 Km de Araçatuba. Asoroprevalência foi de 0,86% por ELISA e 0,17% por imunocromatografia. Areação de imunofluorescência indireta foi utilizada em 138 amostras eidentificou 1,45% de soropositividade. O ELISA identificou cinco cães positivos,a RIFI dois e um cão foi identificado pela imunocromatografia. Um dos cãespositivo pela RIFI havia sido vacinado para leishmaniose visceral. Dois cãesque foram considerados positivos pelo ELISA indireto foram testados por PCRpara detecção da presença de Leishmania chagasi, mas os resultados foram negativos, não confirmando a doença. Somente um cão foi soropositivo em todos os métodos. Ele apresentava sinais clínicos inespecíficos e foi adquirido pelo proprietário em uma área endêmica para a doença. O diagnóstico não pôde ser confirmado por exame parasitológico direto ou PCR porque o cão morreu antes dos resultados dos exames sorológicos. Os resultados obtidos na população do presente estudo permitem concluir que São José do Rio Preto deve ser, ainda, área não endêmica para leishmaniose visceral canina. / Abstract: Visceral leishmaniasis is a zoonosis caused by a protozoa of the genus Leishmania, whose etiological agent in Brazil is Leishmania chagasi. The first canine autochthonous case of the disease in the São Paulo State, Brazil, was identified in 1998 in Araçatuba. Since then, the disease has spread to great part of the State. The aim of the present study was to determine the frequency of occurrence of anti-Leishmania chagasi antibodies in serum samples of 584 dogs from São José do Rio Preto, São Paulo, a non endemic area for the disease, 160km far from Araçatuba. Seroprevalence was 0,86% by ELISA and 0,17% by imunochromatography. IFAT, used to test 138 samples, identified 1,45% of seropositivity. ELISA identified five positive dogs, IFAT two, and immunochromatography one. One of the dogs that were considered positive by IFAT has been vaccinated for visceral leishmaniasis. Two dogs that were considered positive by indirect ELISA were tested by PCR for the presence of leishmania chagasi, but the results were negative, not confirming the disease. Only one dog was seropositive by all methods. He presented inespecific clinical signs and was acquired by his owner in an endemic area for the disease. The diagnoses could not be confirmed by direct parasitological test or PCR, because the dog has died before serologic results. The population results achieved in this study allow us to conclude that São José do Rio Preto city still must be a canine visceral leishmaniasis non-endemic area. / Mestre
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Avaliação das ações de controle da leishmaniose visceral na cidade de Teresina, Estado do Piauí, Brasil - 2006 a 2008. / Evaluation of control actions of visceral leishmaniasis in the city of Teresina, Piauí State, Brazil - 2006 to 2008

Fábio Augusto Costa Ferreira Rebouças 16 May 2011 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Embora as ações de vigilância e controle da leishmaniose visceral (LV) preconizadas pelo Ministério da Saúde venham sendo realizadas nas mais variadas áreas endêmicas do país, seus resultados não tem sido satisfatórios. Para conter a expansão da doença, tendo em vista o seu aumento em centros urbanos, a estratégia de controle da leishmaniose visceral utilizada no Brasil atualmente merece reavaliação. Neste estudo, foram analisados os dados das ações do Programa de Controle da Leishmaniose Visceral (PCL) desenvolvidas no período de 2006 a 2008 em 38 dos 113 bairros que compõe o município de Teresina, no Estado do Piauí. As ações do PCL (borrifação domiciliar com inseticidas e eliminação de cães sororreagentes) foram avaliadas trimestralmente, sendo a variável dependente o número de casos de LV ocorridos um ano após a execução das ações. Foram incluídas nas análises o ano de implementação destas ações e variáveis sócio-econômicas. A regressão de Poisson foi realizada para verificar o grau de associação entre a ocorrência do agravo em relação às diferentes combinações de medidas de controle implementadas pelo PCL sob intensidades de prevalência canina maiores ou menores que 10%. Após a regressão multivariada, constatou-se que, quando não se estratifica pelo nível de prevalência de infecção canina, os resultados apontam para uma não efetividade das ações de controle. Todavia, quando se estratifica pela prevalência canina, observa-se que, em locais onde ela é baixa, o controle do reservatório canino, executado de maneira independente das outras ações de controle, esteve associado com uma redução de 37% nas taxas de ocorrência de LV um ano após a implementação da ação (Razão de taxas de incidência = 0,63, p=0.05). A borrifação com inseticida executada de maneira independente das demais ações de controle, bem como a execução conjunta do controle do vetor alado e do reservatório canino, em ambos os cenários de prevalência canina, não apresentaram associação significativa com a incidência da doença nos anos posteriores a sua implementação. Estes achados constituem material relevante para discussão da efetividade das ações de controle da Leishmaniose Visceral. / Although visceral leishmaniasis (VL) surveillance and control activities as recommended by the Brazilian Ministry of Health have been implemented in different endemic areas of the country, their results have not been satisfactory. To contain the spread of the disease, particularly considering its recent increase in transmission in urban centers, the strategy currently in use in Brazil for controlling VL deserves reassessment. This study analyzed data concerning the control actions of the Program for the Control of Visceral Leishmaniasis (PCL) developed between the years 2006 to 2008 in 38 of the 113 districts that make up the city of Teresina, Piauí State, Brazil. The PCL control actions (household insecticide spraying and culling of infected dogs) were evaluated at each three months and the outcome variable was the number of cases of VL occurring one year after. In te analysis were included also the year in which the PCL actions were performed and socio-economic variables. of their implementation. Poisson regression models were performed to verify the degree of association between the occurrence of VL and different combinations of control measures implemented by PCL in different canine prevalence scenarios (higher or lower than 10%). Results from multivariate analysis suggest non-effectiveness of control measures when not stratifying by canine prevalence. However, when stratifying by canine prevalence it is observed that in places where the prevalence is low (<10%), culling infected dogs was associated with a decrease of 37% in the incidence of VL (Incidence rate ratio = 0.63, p=0.05). Indoor household spraying with insecticides in both canine prevalence scenarios and culling dogs in higher prevalence settings were not significantly associated with the occurrence of VL cases. These findings constitute relevant material to the discussion of the effectiveness of control measures of Visceral Leishmaniasis.
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Descrição morfoquantitativa de lesões cutâneas em cães com Leishmaniose visceral canina

Camargos, Luciana Ribeiro 26 February 2015 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Saúde Animal, 2015. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-04-06T15:45:47Z No. of bitstreams: 1 2015_LucianaRibeiroCamargos.pdf: 1062457 bytes, checksum: 99c86f7162abaa43b4510ea18e316de1 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-04-14T20:34:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_LucianaRibeiroCamargos.pdf: 1062457 bytes, checksum: 99c86f7162abaa43b4510ea18e316de1 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-14T20:34:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_LucianaRibeiroCamargos.pdf: 1062457 bytes, checksum: 99c86f7162abaa43b4510ea18e316de1 (MD5) / A Leishmaniose Visceral Canina é uma doença que acomete, dentre outros órgãos, a pele. Esse estudo teve como objetivo quantificar as alterações morfológicas e histológicas presentes nas várias apresentações cutâneas de cães naturalmente infectados. Para isso foram avaliados 31 fragmentos de pele de 20 animais com dermatite esfoliativa seca, alopecia, hipotricose, crosta, nódulo, úlcera, eritema, despigmentação, hiperpigmentação e/ou hiperqueratose. Foram determinados o padrão microscópico inflamatório e não inflamatório de cada lesão, e realizada a mensuração da intensidade inflamatória, parasitológica e de colagenólise, e a histomorfometria por meio da detecção e diferenciação dos colágenos do tipo I e III. As regiões acometidas foram cabeça (40,35%), membros (21,05%), tórax (15,8%), difusa (8,77%), abdômen (5,26%), pelve (5,26%) e cervical (3,51%), sendo a dermatite crostosa e a hipotricose as macroleões mais encontradas. Houve o predomínio de infiltrado histiocítico e a maioria dos fragmentos apresentaram intensidade inflamatória acentuada, sendo a inflamação visualizada principalmente em região peri/intra-anexo. A forma amastigota foi visualizada em 48,38% dos casos. Colagenólise, crostas e hiperqueratose ortoqueratótica foram as lesões não inflamatórias mais encontradas. Houve predominância do colágeno maduro (60,31% + 2,906) em relação ao imaturo (8,720% + 1,187) em região de derme e esses dados foram estatisticamente significativos. Houve um discreto aumento de colágeno do tipo III e diminuição do colágeno do tipo I, ao se comparar amostras com e sem presença de amastigotas. Concluiu-se que a presença do infiltrado inflamatório em cães com LVC no DF, contribuiu para as mudanças ocorridas na matriz extracelular. / The Canine Visceral Leishmaniasis is a disease that affects, among other organs, the skin. This study aimed to quantify the morphological and histological changes present in various skin samples from naturally infected dogs. To achieve the proposed objective were evaluated 31 skin flakes of 20 animals with dry exfoliative dermatitis, alopecia, hypotrichosis, crust, nodules, ulcers, erythema, depigmentation, hyperpigmentation and/or hyperkeratosis. Inflammatory and non-inflammatory microscopic pattern of each lesion, the measurement of inflammatory intensity, parasitological and collagenolysis, and histomorphometry through the detection and differentiation of type I and III collagens were performed. The regions affected were head (40.35%), members (21.05%), chest (15.8%), diffuse (8.77%), abdomen (5.26%), pelvis (5.26%) and cervical (3.51%), the crusted dermatitis and hypotrichosis large lesions were the most frequent injuries. There was a predominance of histiocytic infiltrate and most of the fragments showed severe inflammatory intensity, with inflammation viewed mainly in peri/intra-annexed region. The amastigotes were seen in 48.38% of cases. Collagenolysis, crusts and orthokeratotic hyperkeratosis were the most frequent non-inflammatory lesions. There was a predominance of mature collagen (60.31% + 2.906) compared to immature (8,720 + 1,187%) in the dermis region and these data were statistically significant. There was a slight increase in collagen type III and decreased collagen type I, when comparing samples with and without the presence of amastigotes. It was concluded that the presence of inflammatory infiltrate in dogs with CVL in DF contributed to the changes in the extracellular matrix.
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Fatores associados à mortalidade na Leishmaniose visceral grave em Araguaína - TO: Caracteristicas epidemiológicas, clínicas e laboratoriais (2002 a 2015) / Factors assessed to mortality in severe visceral Leishmany in Araguaina-TO: epidemiological, clinical and laboratory characteristics (2002 to 2015)

Maria Ana Salviano de Sousa 15 December 2016 (has links)
A Leishmaniose Visceral (LV) é uma doença infecciosa de carater sistêmico. Estima-se que 350 milhões de pessoas no mundo estão expostas ao risco de infecção, com uma prevalência de 12 milhões de infectados e letalidade mundial de 59.000 casos por ano (OMS), sendo que 90%dos casos de LV ocorrem em países onde existe grande parte da população em situação de pobreza.Na América Latina a maioria dos casos ocorre no Brasil (96%) com média de 3.500 casos/ano. As áreas de maior endemia encontram-se nas regiões mais carentes do Norte e Nordeste.A donça afeta animais e o homem, podendo levar ao óbito em 100% dos casos, tendo como seu principal vetor a Lutzomyia longipalpis e como agente etiológico, a Leishmania Infantum. O Estado do Tocantins apresenta elevado número de casos autóctones, e é considerada área endêmica pelo Minisério da Saúde devido a doença estar presente na maioria dos seus municípios. A cidade de Araguaína, com 55,8% dos casos do Tocantins, é classificada pelo Ministério da Saúde como área de transmissão intensa.O objetivo geral deste trabalho foi analisar casos confirmados de Leishmaniose visceral grave CID-B55 internados no Hospital de Doenças Tropicais do Tocantins (HDT), na cidade de Araguaína - TO que evoluíram para óbito no periodo de janeiro de 2002 a dezembro de 2015. Pretendeu-se identificar e descrever dados epidemiológicos, clínicos e laboratoriais, e variáveis relacionadas ao tratamento. Foi feito um estudo epidemiológico, observacional, retrospectivo, descritivo, utilizando dados secundários de prontuários médicos de pacientes internados, no Hospital de Doenças Tropicais do Estado do Tocantins, na cidade de Araguaína - TO. Resultados: sexo masculino, 60,8 e 39,2% sexo feminino. 49,2% idade entre 0 e 10 anos; 20% maiores de 51 anos. Local de procedência em relação ao município 40,9% são de Araguaína; e ao Estado a 89% são do Tocantins. Presença de febre em 70,8%; esplenomegalia e hepatomegalia 76,7%. Hemoglobina < 7g/dl 50%, plaquetopenia 76,7%;leucopenia 50% e hipoalbuminemia 84,9%.Tempo de febre até a internação > que 30 dias 30,8%; Tempo de diagnóstico 5,1 dias; tempo de diagnóstico ao óbito 11,6 dias; RIFI 1/80 em 53,3%; Teste Rápido positivo 88,2% droga de escolha para tratmento foi Glucantime 43% seguida por anfotericina 32% e anfotericina lipossomal 25%. A principal causa do óbito na DO(Declaração de aÓbito) foi kalazar 33,3% e também Infecções respiratorias 31,7%.Conclui-se que a maior incidencia ocorre em individuo do sexo masculino menores de 10 anos, residentes no Estado do Tocantins, apresentando quadro febril prolongado, anemia severa e hipoalbuminemia grave, podendo este quadro ter influenciado na evolução ao óbito. / American Visceral Leishmaniasis (AVL) is an infectious disease of a systemic nature. It is estimated that 350 million people worldwide are at risk of infection, with a prevalence of 12 million infected and worldwide lethality of 59,000 cases per year (WHO), with 90% of cases of VL occurring in countries where there is of the population living in poverty. In Latin America, most cases occur in Brazil (96%) with an average of 3,500 cases / year. The most endemic areas are in the poorest regions of the North and Northeast, affecting animals and man, and can lead to death in 100% of cases, having as its main vector Lutzomyia longipalpis and as an etiological agent, Leishmania Infantum. The State of Tocantins presents a high number of autochthonous cases, considered an area endemic by the Ministry of Health because the disease is present in most of its municipalities. The city of Araguaína, with 55.8% of the Tocantins cases, is classified by the Ministry of Health as an intense transmission area. The general objective was to analyze confirmed cases of severe visceral leishmaniasis ICD-B55 hospitalized at the Tropical Diseases Hospital of Tocantins (HDT), in the city of Araguaína - TO, which evolved to death in the period from January 2002 to December 2015. The aim was to identify and describe epidemiological, clinical and laboratory data, and treatment-related variables. Study was an epidemiological, observational, retrospective, descriptive study, using secondary data from medical records of hospitalized patients, at the Tropical Diseases Hospital of the State of Tocantins, in the city of Araguaína - TO. Results: male, 60.8% and 39.2% female. 49.2% age between 0 and 10 years; 20% greater than 51 years. Place of origin in relation to the municipality 40.9% are from Araguaína; And to the State, 89% are from Tocantins. Presence of fever in 70.8%; Splenomegaly and hepatomegaly 76.7%. Hemoglobin <7g/dl 50%, thrombocytopenia 76.7%, leukopenia 50% and hypoalbuminemia 84.9%. Fever time until hospitalization > 30 days 30.8%; Diagnostic time 5.1 days; Diagnostic time at death 11.6 days; RIFI 1/80 53.3% Positive Fast test 88,2%; drug of choice for Glucantime treatment 43% followed By amphotericin 32% and liposomal amphotericin 25%. The main cause of the OD was kalazar 33,3% followed by respiratory infections 31.7%. It is concluded that the highest incidence occurs in a male under 10 years of age, living in the state of Tocantins, presenting a prolonged febrile condition, severe anemia and severe hypoalbuminemia, which may have influenced the evolution to death.
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Apoptose de linfócitos na imunossupressão da leismaniose visceral em hamsteres infectados com Leishmania (Leishmania) chagasi / Apoptosis of lymphocytes in immunosuppression leishmaniasis in hamsters infected with visceral Leishmania (Leishmania) chagasi

Camila Fazzani 17 December 2010 (has links)
Hamsteres infectados com Leishmania (L.) chagasi são considerados um dos melhores modelos para estudo de fatores relacionados à imunossupressão que ocorre durante a leishmaniose visceral ativa, pois apresenta manifestações clínicas similares ao que ocorre no homem e não conseguem controlar a infecção. Neste estudo, hamsteres infectados intraperitonealmente com 2x107 parasitos foram utilizados para avaliação de possíveis fatores envolvidos na dinâmica da imunossupressão. Os parâmetros avaliados foram a produção de citocinas de padrão Th1 e Th2, produção de óxido nítrico por células esplênicas e detecção de apoptose em linfócitos esplênicos em tempos precoces (6, 20, 48 e 72 horas), intermediários (7 e 15 dias) e tardios (30 e 60 dias) de infecção. Inicialmente avaliamos a carga parasitária no baço e observamos aumento progressivo dependente do tempo de infecção, ratificando que hamster infectado é um bom modelo para desenvolvimento de doença. A resposta celular frente a mitógeno e antígeno de Leishmania foi o parâmetro utilizado para avaliação de imunossupressão. Observamos resposta preservada à concanavalina A em todos os tempos de infecção e resposta preservada ao antígeno de Leishmania nos tempos precoces, porém com ausência de resposta antígeno específica a partir do tempo de 7 dias de infecção. A quantificação de óxido nítrico foi determinada em sobrenadante de células esplênicas de cultura estimuladas com concanavalina A e antígeno de Leishmania, pelo método de Griess. Observamos inicialmente baixo nível de produção de óxido nítrico em todos os tempos de infecção, no entanto quando as células foram estimuladas com antígeno de Leishmania observamos níveis ainda menores nos tempos de 48 e 72 horas de infecção. O perfil de citocinas produzido foi determinado pela reação em cadeia da polimerase por transcrição reversa, sendo detectado RNA mensageiro tanto de citocinas Th1, quanto Th2 em todos os tempos de infecção (precoce, intermediária e tardia), em células ex-vivo e estimuladas; e também em animais controles não infectados; não havendo um padrão de dicotomização de produção de citocinas neste modelo experimental. Detecção de apoptose em células esplênicas não aderentes (prováveis linfócitos T) ex-vivo e em cultura estimuladas com concanavalina A e antígeno de Leishmania foi avaliada pelos seguintes métodos: Anexina V, caspase 3 clivada e TUNEL por citometria de fluxo. Houve marcação da exposição de fosfatidil serina pelo método da anexina V, nos tempos de 6 horas de infecção, quando as células foram estimuladas com mitogeno ou antígeno de Leishmania; e com 48 horas e 60 dias de infecção somente quando estimuladas com antígeno de Leishmania. Em células esplênicas em cultura estimuladas com concanavalina não houve marcação de caspase 3 clivada, porém em células esplênicas ex-vivo nos tempos 20, 48 e 72 horas de infecção houve detecção de apoptose, definida por marcação de caspase 3 clivada. A marcação de células esplênicas não aderentes para quebra de DNA foi baixa em todos os tempos analisados, porém observamos aumento de marcação em células esplênicas não aderentes, estimuladas com antígeno nos tempos de 20 horas e posteriormente de 7 dias até 60 dias de infecção. Nossos resultados sugerem que a imunossupressão na leishmaniose visceral no modelo de hamsteres infectados com Leishmania (L.) chagasi é antígeno dependente e instala-se nos tempos intermediários de infecção, a partir de 7 dias. Esta imunossupressão parece estar relacionada com aumento de apoptose em linfócitos já nos tempos precoces de infecção, que pode favorecer a progressão da infecção, por ocorrer principalmente em células esplênicas antígenos reativas. Nossos dados sugerem ainda, que a imunossupressão não é decorrente da dicotomização da produção de citocinas Th1 e Th2 / Hamsters infected by Leishmania (L.) chagasi are considered one of the most remarkable models to study several characteristics related to immunosuppression, raised during active visceral leishmaniasis especially because hamsters show similar clinical manifestations as it is found in humans without surmounting the infection. In this study, hamsters infected intraperitoneally with 2x107 parasites were used to evaluate the possible factors involved in the dynamic of immunosuppression that occurs during the disease development. The evaluated parameters were the production of Th1 and Th2 cytokines profile, nitric oxide production of splenic cells and detection of apoptosis in splenic lymphocytes at early (6,20, 48 e 72 hours), intermediate (7 e 15 days) and late times (30 e 60 days) of infection. Initially, we evaluate the parasite load in the spleen and observed a progressive increase dependent on the time of infection, ratifying that infected hamsters are good models to set up the disease development. Cellular response upon mitogen or Leishmania antigen was the parameter used to evaluate the immunosuppression showing a preserved response to concanavalin A at all period of infection and a preserved response to the Leishmania antigen at all early phases however with no specific antigen response from 7 day of infection until the late phase of infection. Nitric oxide quantification was determined in the splenic cells supernatant in culture stimulated upon concanavalin A and Leishmania antigen and we observed initially low level of nitric oxide production, measured by the Griess method. Nonetheless, when the cells were stimulated upon Leishmania antigen we observed a lower level nitric oxide production at 48 and 72 hours of infection. mRNA of Th1 e Th2 cytokines profile was determined by RT-PCR at all period of infection studied in infected or non infected hamsters showing no difference at the cytokine profile in this experimental model. Detection of apoptosis in the non adherent splenic cells (probably T lymphocytes) ex-vivo and in the stimulated culture with concanavalin A and Leishmania antigen was evaluated by the following methods: annexin V-FITC, cleaved caspase 3 and TUNEL by flow cytometry analysis. There was phosphatidilserine staining by annexin method, at 6 hour of infection when cells were stimulated by mitogen or Leishmania antigen at 48 hours and 60 days of infection only when stimulated by Leishmania antigen. Splenic cells in culture stimulated by concanavalin A showed no cleaved caspase 3 staining in all period of infection studied. Otherwise, apoptosis was detected in the ex-vivo splenic cells at 20, 48 and 72 hours of infection by cleaved caspase 3 staining. We observed a low DNA break staining of non adherent splenic cells in all period analyzed, although this staining was increased in non adherent cells stimulated upon Leishmania antigen at 20 hours from 7 day of infection until 60 day of infection. Our results suggest that a visceral leishmaniasis immunosuppression in the hamsters model infected by Leishmania (L.) chagasi is antigen dependent and sets up in the intermediate phases of infection from 7 days on. This immunosuppression seems to be related to the apoptosis increase in lymphocytes already in the early period of infection probably favoring its progression especially because of its occurrence in reactive splenic antigen. Our data also suggest that the immunosuppression is not provided by dichotomization in the Th1 and Th2 cytokines profile
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Estudos Qsar de compostos com atividade leishmanicida / Qsar studies of compounds with leishmanicidal activity

Oliveira, Kesley Moraes Godinho de 14 August 2018 (has links)
Orientadores: Yuji Takahata, Rogerio Custodio / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-14T14:03:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_KesleyMoraesGodinhode_D.pdf: 5766531 bytes, checksum: 5d60e17b9a5062a054d9bb7de66054f4 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: O objeto de estudo desta tese é a forma mais severa e letal de Leishmaniose: a Leishmaniose Visceral, LV, cujo principal agente etiológico é a espécie Leishmania donovani. O objetivo deste trabalho é o desenvolvimento de modelos Quantitativos das Relações Estrutura-Atividade para duas séries de compostos com atividade antileishmaniose contra formas amastigotas de Leishmania donovani. A primeira série envolve vinte e um análogos de nucleosídeos pirazolo-pirimidínicos e a segunda série compreende oito antifúngicos. Para garantir a robustez dos modelos, além dos compostos que compõem as respectivas séries, foram selecionadas moléculas com conhecida atividade contra LV para compor um conjunto de teste e avaliar a capacidade de previsão dos respectivos modelos. Para a série dos nucleosídeos foram desenvolvidos modelos de regressão logística e árvore de classificação. Em ambas as abordagens os descritores Mor26v e o GAP(HOMO, HOMO-1) se mostraram relevantes para a explicação da atividade leishmanicida destes compostos. O modelo de regressão logística atingiu 90,5% para acurácia de classificação para o conjunto de trabalho e 58% para o conjunto de teste após a análise do domínio de aplicabilidade do modelo. O modelo para árvore de classificação alcançou 95% para acurácia de classificação para o conjunto de trabalho e 83% para o conjunto de teste. Para a série dos antifúngicos foi utilizado um modelo de regressão linear múltipla onde a energia eletrônica e a área da superfície polar se mostraram importantes para a atividade leishmanicida da série. Os valores previstos exibem 98% de correlação com os valores experimentais. Os valores encontrados para o conjunto de teste também estão de acordo com a literatura. Finalmente, novos compostos foram propostos para síntese e avaliação da atividade leishmanicida. / Abstract: The object of study of this thesis is the most severe and lethal form of leishmaniasis: visceral leishmaniasis, LV, whose main etiological agent is the species Leishmania donovani. The goal of this work is the development of Quantitative Structure-Activity Relationship models for two series of compounds presenting antileishmanial activity against amastigotes of Leishmania donovani. The first series includes twenty-one analogues of pyrazolo-pyrimidine nucleosides and the second series comprises eight antifungals. To ensure the robustness of the models, in addition to the compounds that make up their series, molecules with known activity against LV were selected to compose a testset and evaluate the predictive power of their models. For the series of nucleosides logistic regression models and tree classification were developed. In both approaches, the Mor26v and GAP(HOMO, HOMO-1) descriptors were relevant to explain the leishmanicidal activity of these compounds. The logistic regression model reached 90.5% for classification accuracy to the workingset and 58% for testset after analysis of the domain of applicability of the model. The classification tree model reached 95% for classification accuracy of the workingset and 86% for the testset. A multiple linear regression model was applied to the series of antifungal agents. The electron energy and polar surface area were important for the leishmanicidal activity of this series. The predicted values showed 98% of correlation with the experimental values. The values found for the testset are also in agreement with the literature. Finally, new compounds were proposed for synthesis and evaluation of leishmanicidal activity. / Doutorado / Físico-Química / Doutor em Ciências
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Otimização das condições para superexpressão em Escherichia coli de proteínas quiméricas com potencial para diagnóstico da leishmaniose visceral

SANTOS, Wagner José Tenório dos 06 March 2015 (has links)
Submitted by Haroudo Xavier Filho (haroudo.xavierfo@ufpe.br) on 2016-04-22T16:09:31Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Final Dissertção.pdf: 2617689 bytes, checksum: c147bcfc357fc3a4030f61766ed9bad5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-22T16:09:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Final Dissertção.pdf: 2617689 bytes, checksum: c147bcfc357fc3a4030f61766ed9bad5 (MD5) Previous issue date: 2015-03-06 / CNPq / A abordagem mais promissora para um diagnóstico eficaz da Leishmaniose Visceral (LV) utiliza ensaios sorológicos com proteínas recombinantes, pois apresentam grande sensibilidade e especificidade, associados a baixo custo e fácil execução. Misturas de alguns antígenos geram resultados mais promissores, contudo, a produção destas aumenta os custos e dificulta a padronização. É ideal a produção de uma única proteína quimérica que apresente boa sensibilidade e seja eficiente no diagnóstico das formas humana e canina da LV. Este estudo objetivou avaliar as condições para expressão em Escherichia coli de genes sintéticos codificando proteínas quiméricas compostas por regiões selecionadas de antígenos previamente identificados de Leishmania infantum. Quatro genes, contendo os mesmos antígenos em diferentes combinações, foram otimizados para expressão em procariotos e sintetizados. Sítios internos de restrição foram incluídos nas sequências de forma a permitir a eliminação seletiva de segmentos específicos e se avaliar o efeito na expressão bacteriana da presença de diferentes regiões antigênicas, bem como de um peptídeo estimulador da tradução. A expressão das proteínas geradas foi então avaliada através de ensaios de Western Blot. Os resultados obtidos mostraram uma expressão equivalente, porém limitada, das diferentes proteínas quiméricas, independente da sua composição antigênica. Proteínas menores tiveram resultados mais promissores na expressão e o peptídeo estimulador da tradução foi essencial para otimizar essa expressão, porem ainda faz-se necessário mais estudos avaliando a sensibilidade e especificidade dessas proteínas para o diagnóstico da LV. / The most promising approach for effective diagnosis of Visceral Leishmaniasis (VL) uses serological assays with recombinant proteins, since they have high sensitivity and specificity associated with low cost and easy implementation. Mixtures of some antigens generate the most promising results, however, these increase production costs and impairs its standardization. The best option would be the production of a single chimeric protein showing good sensitivity and being effective for the diagnosis of the human and canine forms of VL. This study aimed to evaluate the conditions for expression in Escherichia coli of synthetic genes encoding chimeric proteins composed of selected regions of previously identified antigens of Leishmania infantum. Four genes, containing the same antigens in different combinations, were optimized for expression in prokaryotes and synthesized. Internal restriction sites were included in the sequences to allow selective removal of specific segments and to evaluate the effect on the bacterial expression of the presence of different antigenic regions, as well as a translational enhancer peptide. The expression of proteins generated was then evaluated by Western blot assays. The results showed equivalent expression, however limited, of the different chimeric proteins, regardless of their antigenic composition. Smaller proteins produced more promising results in the expression and the translation enhancer peptide was important to optimize this expression, however further studies are still necessary to evaluate the sensitivity and specificity of these proteins for the diagnosis of VL.
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Epidemiologia genética em leishmaniose visceral Estudo de associação com a população de Bauru - SP /

Valezi, Keren Bastos. January 2017 (has links)
Orientador: Ana Carla Pereira Latini / Resumo: A leishmaniose é uma doença antropozoonótica causada pelo protozoário do gênero Leishmania. Ele apresenta três formas clínicas, conhecidas como leishmaniose visceral, leishmaniose cutânea e leishmaniose mucocutânea. A leishmaniose visceral afeta dois milhões de indivíduos anualmente no mundo. Os fato res genéticos envolvidos na interação hospedeiro - parasita foram associados ao desfecho clínico da doença. Este estudo investigou pela primeira vez a associação de polimorfismos nos genes candidatos IL10, NOD2 e TLR1 com leishmaniose visceral na população b rasileira. Para isso, escolhemos três marcadores anteriormente associados a infecções causadas por parasitas intracelulares na população brasileira. Nós genotipificamos 135 pacientes e 380 controles saudáveis. A presença do alelo G do rs4833095 no gene TLR 1 foi fortemente associada à susceptibilidade a esta doença: análise do alelo G (OR 2.04; IC 1.22 - 3.39; p - value 0.0061); Análise do genótipo GG (OR 3,87; 95 %IC 1,85 - 8,08, p - valor 0,0003); Análise de portadores de G (OR 2,5; 95 %IC 1,33 - 5,00; valor p 0,0047) . Para o gene NOD2, também encontramos uma associação para o genótipo AA (OR 2.07 95 %IC 1.05 - 4.05, p - value 0.0335) do polimorfismo rs8057341. Finalmente, poderíamos confirmar a associação do marcador rs1800871 na região promotora do gene IL10 com susceptib ilidade à leishmaniose visceral, para o genótipo TT (OR 2,34; CI 95 %IC 1,11 - 4,94 p - value 0,0245). Conclusão. Nossos dados demonstram pela primeira... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Not available / Mestre
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CHARACTER SHAPE AND VISCERAL RESPONSE : Can a figure’s shape alone generate a reaction regarding it’s nature?

Jensen, Veronica January 2015 (has links)
This study examines shape language when used in figures representing humanoid creatures and how a viewer can be manipulated by shape language to feel a certain way about a figure. The study focuses on good versus evil expression and how one can utilise shape to knowingly give cues about a figures alignment or how to mislead the viewer if so desired. Focus is on visceral emotion connected to sharp and soft shapes and asymmetrical or symmetrical features, but it is revealed that its use in character design may be a cultural convention rather than something hard-wired in our brains from years of natural selection and experiences tied to our subconscious visceral response.

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