El metabolito activo de la vitamina D es el calcitriol o 1α,25(OH)2 vitamina D3 (1,25D). El 1,25D ingresa a la célula difundiendo a través de la membrana plasmática y se une a su receptor, el receptor de la vitamina D (VDR). Este complejo desencadena acciones rápidas, no genómicos (como la activación de vías de señalización MAPKs, y la generación de segundos mensajeros, como el aumento del Ca2+ intracelular) o efectos genómicos que requieren generación de nuevas proteínas. Dado que la mayor parte de los efectos del 1,25D reportados involucran al VDR y éste se expresa en la mayoría de los tejidos, esta hormona esteroide se considera pleiotrópica. En el laboratorio donde trabajo, se ha demostrado que el VDR se expresa en el músculo esquelético y que el tratamiento con 1,25D (10-9 M) es capaz de promover a proliferación y la activación de vías de señalización como las MAPKs, Akt, con la participación de Src, muy rápidamente, tanto en mioblastos proliferativos como en miotubos diferenciados. Por otro lado está ampliamente documentado que el 1,25D tiene efectos anti-proliferativos y pro-apoptóticos en varios tipos de cáncer. En este trabajo de Tesis Doctoral, se evidenció que en la línea de músculo esquelético normal C2C12, durante la fase proliferativa, el tratamiento con 1,25D (10-9 M) promueve la expresión del VDR y la activación de p38 MAPK y ERK 1/2, que promueven la expresión de las CDK 4/6. Más tarde, durante el arresto promotor de diferenciación, iniciado por el 1,25D, la expresión del VDR y la activación de la p38 MAPK son esenciales para inducir el aumento en la expresión de la ciclina D3, de los CKIs p21Cip1/WAF1 y p27Kip1, y del marcador de diferenciación muscular miogenina, el cual también requiere que la ciclina D3 se exprese. En las células C2C12 que están en la etapa de diferenciación temprana, en la fase de alineación (previo a la fusión celular para la formación del miotubo), la hormona esteroide 1,25D unida a su receptor tiene la capacidad de activar la tirosina quinasa no receptora Src y las MAPKs ERK 1/2 y p38 MAPK, a tiempos cortos (hasta de una hora), sin embargo no es capaz de modificar la expresión de proteínas (como las ciclinas D1 y D3 o la caveolin-1). El rabdomiosarcoma (RMS) es el cáncer de tejido blando más común entre los niños y tiene características de músculo esquelético, a pesar de tener múltiples orígenes. La línea RD es una línea celular de rabdomiosarcoma humano, originada de biopsias de una paciente caucásica de siete años de edad. A pesar de la evidencia acumulada de los efectos antineoplásicos de la hormona esteroide 1,25D, en diferentes tipos de cáncer, solo existe un reporte de los efectos de este esteroide en RMS, en líneas diferentes a la línea RD. En esta Tesis Doctoral, se evidenció que las células RD expresan basalmente VDR y que el tratamiento con la hormona durante 24 y 48 horas promueve un incremento de este receptor. Además el 1,25D (10-9 M) promueve la activación de p38 MAPK, vía su quinasa upstream inmediata MKK 3/6 y Src a tiempos cortos en las células RD. De relevancia, se observó que la activación de p38 MAPK es necesaria para la activación de Src, pese a ser esta una quinasa upstream de las MAPKs. El tratamiento con 1,25D durante 72 horas provoca una marcada disminución en la expresión del VDR junto con una inhibición en la proliferación (ya que decrece la cantidad de células vivas y aumenta la expresión de p15INK4). Conjuntamente, la hormona no promueve la diferenciación celular (ya que no se observan cambios morfológicos y disminuye la expresión de marcadores de diferenciación tempranos) y estimula la apoptosis (aumentando la expresión de los mediadores ciclina D1 y CDK4 y causando picnosis mitocondrial y pérdida de la red mitocondrial). En conclusión, el metabolito activo de la vitamina D, el calcitriol tiene efectos opuestos en el músculo esquelético normal y el transformado, ya que en el primero promueve la proliferación seguida de un arresto pro-diferenciativo, mientras que en RMS es capaz de inducir la apoptosis. / The vitamin D active metabolite is the calcitriol or 1α,25(OH)2-vitamin D3 (1,25D). The 1,25D diffuse into the cell through the plasmatic membrane and it binds to its receptor, the vitamin D receptor (VDR). This complex triggers non-genomic, rapid actions (like activation of MAPKs pathways, and second messengers, like intracellular Ca2+ increase) or genomic effects that require protein synthesis. Almost all of the 1,25D actions require the VDR, and this receptor is expressed in almost all tissues, this steroid hormone is pleiotropic. In the laboratory where I investigate, it was demonstrated that the VDR is expressed in skeletal muscle and 1,25D treatment promotes proliferation and activation of MAPK, Akt, and the tyrosine kinase Src, quickly, in both proliferating myoblast and differentiated myotubes. By another hand, it was largely reported that 1,25D exerts antiproliferative and proapoptotic effects in many different cancer types. In this Ph.D. Thesis, it was evidenced that in normal skeletal muscle cell line C2C12, in the proliferative state, 1,25D (10-9 M) treatment promotes VDR expression and p38 MAPK and ERK 1/2 pathways activation, and all these together induce CDK 4/6 expression. Then, during pro-differentiative arrest induced by 1,25D, the VDR expression, and p38 MAPK activation are key events to promote an increase in Cyclin D3, CKIs p21cip1/WAF1 and p27kip1 and myogenin expression. In C2C12 cell, in an early differentiation state, during myoblast alignment, 1,25D through its receptor induce Src, ERK 1/2 and p38 MAPK pathways activation, within a few minutes, but this short treatment cannot modify some proteins expression involved in differentiation process (like Cyclin D3 and D1, or caveolin-1). Rhabdomyosarcoma (RMS) is the soft tissue cancer most common in children with skeletal muscle features, although it has different origins. The RD cell line is a human RMS cell line, originated from biopsies from a seven years old Caucasian patient. There is accumulated evidence about antineoplastic effects of 1,25D, in different cancer types; nevertheless, there is only one report relative to the effects of this steroid hormone treatment developed in RMS cell lines different to RD. In this PhD. Thesis, it was shown that RD cells express basally VDR and hormone treatment during 24 and 48 hours promotes an increase of this receptor. Moreover, 1.25D (10-9 M) promotes p38 MAPK activation via its immediate upstream kinase, MKK 3/6, and Src at short times of steroid exposition. Of relevance, it was observed that p38 MAPK activation is necessary for the activity of Src, despite this being an upstream kinase of MAPKs. Treatment with 1.25D for 72 hours causes a decrease in VDR expression and the inhibition in proliferation (since it decreases the amount of living cells and increases the expression of p15INK4). This steroid treatment does not promote differentiation, since no morphological changes were observed and the expression of early differentiation markers falls. Furthermore, 1,25Dstimulates apoptosis increasing the expression of cyclin D1 and CDK4 mediators and causing mitochondria pyknosis and disruption of mitochondrial network). In conclusion, the active metabolite of vitamin D, calcitriol has opposite effects on normal and transformed skeletal muscle cells, since in the normal cells it promotes proliferation followed by a pro-differentiative arrest, whereas in RMS it is capable of inducing apoptosis.

A indústria de alimentos está constantemente desenvolvendo produtos que fornecem, além de nutrientes, benefícios adicionais à saúde, tais como os enriquecidos com vitaminas. A vitamina D3 (colecalciferol) é sintetizada na pele durante a exposição da luz solar, controla a homeostase de cálcio e fósforo, metabolismo ósseo, pressão arterial e reabsorção renal de cálcio. O processo de microencapsulação vem sendo bastante aplicado em alimentos e um dos objetivos principais é o controle da liberação do agente ativo no momento e local desejado. A tecnologia de spray chilling é interessante para a microencapsulação de vitaminas lipossolúveis. O objetivo deste trabalho foi microencapsular vitamina D3, utilizando o método de spray chilling para a produção das micropartículas lipídicas sólidas (MLS). Para produção das MLS utilizou-se gordura vegetal com ponto de fusão em torno de 48 °C como carreador. Três tratamentos foram estabelecidos: sem aditivos (T1), com adição de 1% de cera de abelha (T2) e com 1% de lecitina de soja (T3). As micropartículas foram caracterizadas quanto à morfologia por microscopia eletrônica de varredura, tamanho médio por difração a laser, espectroscopia no infravermelho por transformada de Fourier (FTIR) e foi analisada a estabilidade da vitamina D3 durante o armazenamento a 10 e 25 °C, por meio de quantificações periódicas em cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). As micropartículas obtidas foram esféricas, semelhantes morfologicamente e com distribuição monocaudal de partículas. O tamanho médio das partículas variou em função dos seus ingredientes, sendo que as micropartículas produzidas apenas com vitamina e gordura foram menores em relação às demais (83,0% < 100 &micro;m). A espectroscopia na região do infravermelho (FTIR) demonstrou que não ocorreu interação entre os ingredientes. A estabilidade da vitamina D3 encapsulada foi satisfatória ao longo de 65 dias com valores superiores a 87% para os três tratamentos e a temperatura apresentou influência na estabilidade. As MLS produzidas com cera apresentaram melhores resultados de estabilidade de vitamina D3 com valores de 90,18 ± 2,23 % após 65 dias de estocagem. Esses resultados são promissores e demostram a viabilidade da técnica de spray chilling na produção de MLS carregadas de vitamina D3, possibilitando uma futura aplicação em alimentos. / The food industry is constantly developing products that provide, in addition to nutrients, additional health benefits such as enriched food with vitamins. Vitamin D3 (cholecalciferol), which is synthesized in the skin during exposure of sunlight, controls the homeostasis of calcium and phosphorus, bone metabolism, blood pressure and renal reabsorption of calcium. The microencapsulation process has been widely applied in food and is a key objective to control the release of active agents at specific time and desired location. The spray chilling technology is interesting for microencapsulation of fat-soluble vitamins. The objective of this work was microencapsulating vitamin D3 using the spray chilling method for the production of solid lipid microparticles (SLM). For the production of the SLM it was used vegetable fat with melting point around at 48 °C as a carrier. Three treatments were established: no additives (T1), 1% of beeswax (T2), and 1% soybean lecithin (T3). The morphology of microparticles was characterized by scanning electron microscopy, laser diffraction (average size) and Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR). Additionally, vitamin D3 stability was examined during storage at 10 and 25 °C, through periodic measurements by High-performance liquid chromatography (HLPC). The microparticles obtained were spherical with similar morphology and unimodal size distribution. The average particle size varied according to composition wherein microparticles produced with vitamin and fat were lower than other (83.0% of particles smaller than 100 &micro;m). Spectroscopy in the infrared (FTIR) showed that there was no interaction between the components. The stability of vitamin D3 encapsulated was satisfactory over 65 days with values greater than 87% for the three treatments and temperature have any influence on the stability. The SLM produced with wax showed better stability for vitamin D3 with values of 90.18 ± 2.23% after 65 days of storage. These results are promising and demonstrate the feasibility of spray chilling technique in the production of SLM loaded with vitamin D3, allowing future application in foods.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-04T19:50:45Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 929510 bytes, checksum: c5b3ba9e209ce00879b8d81ead698d62 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-04T19:50:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 929510 bytes, checksum: c5b3ba9e209ce00879b8d81ead698d62 (MD5) Previous issue date: 2000-04-03 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Um experimento foi conduzido com objetivo de estudar os efeitos do ácido L-glutâmico (L-Glu) e da vitamina D 3 (VD) da dieta em pintos de corte, de um dia, machos, Hubbard, criados em baterias aquecidas, recebendo dieta básica purificada, contendo todos os L-aminoácidos essenciais, minerais e vitaminas (exceto vitamina D 3 ), suplementada com 5, 10 e 15% de L-Glu combinados com 0, 5.000, 10.000 e 15.000 UI de VD. O ganho de peso máximo (192,61 g) aumentou até o nível máximo estimado de 8,56% de L-Glu e 15.000 UI de VD. A melhor taxa de conversão alimentar (1,58) foi verificada com nível estimado de 8,40% de L-Glu. O maior consumo estimado (320,24 g) foi obtido com 8,48% de L-Glu e 15.000 UI de VD. Houve redução na incidência de problemas de pernas com 10% de L-Glu e 15.000 UI de VD. Observou-se comprimentos máximos (37,61 mm e 50,36 mm), com 9,51% de L-Glu e 15.000 UI de VD, e 9,99% de L-Glu e 15.000 UI de VD, para o fêmur e tibiotarso, respectivamente. O diâmetro do fêmur (3,62 mm) e tibiotarso (3,17 mm) aumentou até o nível máximo estimado de 10,49% de L-Glu e 15.000 UI de VD, e 11,04% de L-Glu e 15.000 UI de VD, respectivamente. A resistência máxima ixestimada para o fêmur (52,47 kgf/cm 2 ) foi determinada com 7,57% de L-Glu e 8.978 UI, e 6,24% de L-Glu e 12.591UI de VD para o tibiotarso (43,35 kgf/ cm 2 ). A maior porcentagem de cinza óssea do fêmur (44,37%) foi obtida com 15% de L-Glu e 8.503 UI de VD, e 15% de L-Glu e 15.000 UI de VD para o tibiotarso (40,73%). Não houve efeito de tratamento para as concentrações de cálcio no tibiotarso (37,01%). Não houve efeito de tratamento nas concentrações de fósforo (20,55%) nas cinzas do tibiotarso. A relação Ca:P no tibiotarso foi constante e igual a 1,80. No fêmur, a melhor relação Ca:P (1,95) foi obtida com 5% de L-Glu e 15.000 UI de VD. No fêmur, houve decréscimo nas concentrações de magnésio com a suplementação de L-Glu e de VD. No tibiotarso, a maior concentração de magnésio (1,2%) foi obtida com 5% de L- Glu e 5.000 UI de VD. Não foi observado efeito de tratamento (P > 0,05) nas concentrações de proteínas colagenosas no fêmur, que foi constante e igual a 23,44 mg/100g. As menores concentrações de proteínas não colagenosas (2,5 mg/100g e 2,15 mg/100g) foram obtidas com 9,32% e 9,73% de L-Glu, no fêmur e tibiotarso, respectivamente. As maiores concentrações de proteínas totais (30,04 mg/100g e 30,03 mg/100g) foram obtidas com 15% de L-Glu e 10.000 UI de VD, 5% de L-Glu e 5.000 UI de VD, respectivamente no fêmur e tibiotarso. As concentrações máximas de cálcio no soro (9,61 mg/dL) foram obtidas com 15% de L-Glu e 14.181 UI de VD; 7,33 mg/dL de cálcio iônico com 15% de L-Glu e 15.664 UI de VD; 7,20 mg/dL de fósforo com 10% de L-Glu e 10.863 UI de VD. Os maiores valores de atividade de fosfatase alcalina no soro foram obtidos com 10% de L-Glu e na deficiência de VD. Houve aumento significativo nas concentrações de proteínas totais, albumina e globulina no soro, com a suplementação de VD e L-Glu. Com 10% de L-Glu e 15.000 UI de VD melhorou o crescimento e desenvolvimento ósseo; organização e comprimento médio do disco epifisário do tibiotarso; espessura do osso compacto da diáfise e diâmetro do canal medular. Em geral, as aves alimentadas com 10% de L-Glu e 15.000 UI de VD apresentaram melhor desempenho, melhor desenvolvimento dos ossos, baixas concentrações ósseas de proteínas não colagenosas e menor incidência de problemas de pernas. / An experiment was conducted to study the effects of L-glutamic acid (L- Glu) and vitamin D 3 (VD) on performance of one-day-old male Hubbard broiler chicks, reared in heated batteries, fed with a purified basal diet containing all essential L-aminoacids, minerals, and vitamins (except Vitamin D 3 ) and were supplemented with three levels of L-Glu (5, 10 and 15%) and with four levels of vitamin D 3 (0, 5,000, 10,000 and 15,000 IU). The weight gains increased up to 192,61 g an estimated level of 8,56% of L-Glu and 15,000 IU of VD. The highest feed intake (320,24 g) was obtained at an estimated level of 8,48% of L-Glu and 15,000 IU of VD. The better feed:gain was obtained at an estimated level of 8,40% of L-Glu. There was a reduction of leg problems in chicks with 10% of L- Glu and 15,000 IU of VD. The length of bones increased up to an estimated level of 9,51% of L-Glu and 15,000 IU of VD, and 9,99% of L-Glu and 15,000 IU of VD, for femur (37,61 mm) and tibiotarsus (50,36 mm), respectively. The femur (3,62 mm) and tibiotarsus (3,17 mm) diameter increased up an estimated level of 10,49% of L-Glu and 15,000 IU of VD, and 11,04% of L-Glu and 15,000 IU of VD, respectively. The maximum breaking strength for femur (52,47 xikgf/cm 2 ) and tibiotarsus (43,35 kgf/cm 2 ) was obtained with 8,978 IU and 12,591 IU, respectively. The highest content of femur ash (44,37%) and tibiotarsus ash (40,73%) was obtained with, respectively, 15% of L-Glu and 8,503 IU of VD and 15% of L-Glu and 15,000 IU of VD. There was no significant effect on calcium content of tibiotarsus ash (37,01%). There was no significant effect on phosphorus contents of tibiotarsus ash (20,55%). The better Ca:P relationship on tibiotarsus was equal 1,80. On femur, the better Ca:P relationship (1,95) was obtained with 5% of L-Glu and 15,000 IU of VD. On femur, there was a reduction on magnesium contents with L-Glu and VD supplementation. On tibiotarsus, the highest magnesium content (1,2%) was obtained with 5% of L- Glu and 5,000 IU of VD. No significant (P > 0,05) treatment effects were observed on femur contents of collagenous proteins (23,44 mg/100g). The smallest contents of non collagenous proteins (2,5 mg/100g and 2,15 mg/100g) were obtained with 9,32% and 9,73% of L-Glu, on femur and tibiotarsus, respectively. The highest contents of total protein (30,04 mg/100g and 30,03 mg/100g) were obtained with 15% L-Glu and 10,000 IU VD, and 5% of L-Glu and 5,000 IU of VD, on femur and tibiotarsus, respectively. The blood calcium increased up (9,61mg/dL) to an estimated level of 15% of L-Glu and 14,181 IU of VD, 7,33 mg/dL of ionized calcium was obtained with 15% of L-Glu and 15.664 of VD. The highest blood phosphorus (7,20 mg/dL) was obtained at an estimated level of 10% of L-Glu and 10,863 IU of VD. The highest blood alkaline phosphatase was obtained at level of 10% of L-Glu and vitamin D deficiency. There was a significant increase on contents of blood total protein, albumin and globulin with VD and L-Glu supplementation. The lower length of epiphyseal growth plate and better growth plate organization level were observed with chicks fed 10% of L-Glu and 15,000 IU of VD. Birds fed 10% L-Glu and 15,000 IU VD had better performance, good development of bones, longer length of compact bone, longer diameter of medullar channel, lower bone non collagenous contents and a lower incidence of leg problems.

Submitted by Jordan (jordanbiblio@gmail.com) on 2017-02-20T16:55:45Z No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Laura Caroline Almeida Branco Drosghic.pdf: 1024901 bytes, checksum: 769c0ac66d67204071d5db39a72654cd (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-20T16:55:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Laura Caroline Almeida Branco Drosghic.pdf: 1024901 bytes, checksum: 769c0ac66d67204071d5db39a72654cd (MD5) Previous issue date: 2015-03-30 / CAPES / A produção de aves sempre buscou maximizar a eficiência produtiva de frangos de corte, mas associadas a essas melhorias surgiram características indesejadas. Os transtornos ósseos são ocasionados pela rápida deposição de tecido animal, ao mesmo tempo em que o desenvolvimento ósseo continuou com crescimento normal. Isso fez com que houvesse prejuízo à capacidade de deslocamento, ao bem estar e, consequentemente ao desenvolvimento destas. Surgiram inúmeros programas nutricionais como uso da vitamina D e seus metabólitos que participam na regulação da homeostase de cálcio e fósforo por um mecanismo que aumenta a captação intestinal destes, diminuindo as perdas renais e estimulando a reabsorção óssea. O presente estudo teve como objetivo utilizar a Solanum glaucophyllum como fonte suplementar de 1,25-dihidroxicolecalciferol nas características ósseas de frangos de corte. Para tal, foram desenvolvidos dois ensaios. No ensaio 1 utilizando frango de corte fêmea e no 2 frango de corte macho. Avaliou-se a utilização suplementar de Solanum glaucophyllum como fonte de vitamina D3 ativa. Foram utilizados um total de 1.296 frangos de corte da marca comercial Cobb® em delineamento em blocos ao acaso com 6 tratamentos e 6 repetições com 18 aves por unidade experimental. Os tratamentos consistiram na suplementação de 0,0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 e 2,5 μg de vitamina D3 ativa/kg de ração. Aos 21 e 35 dias de idade as aves foram pesadas e um frango por repetição com peso médio do lote foi abatido para se obter os tibiotarsos. As variáveis analisadas foram os pesos in natura, seco e desengordurado, comprimento, diâmetros, resistência óssea, índice Seedor, teores de proteínas colagenosas e não colagenosas, minerais e cinzas. No ensaio 1, aos 35 dias de idade, a composição orgânica e mineral dos ossos (peso in natura, proteínas não colagenosas, cinzas) foi afetada pelo fornecimento suplementar de 2,5 μg de vitamina D3 na forma de 1,25(OH)2D3. Já no ensaio 2 as características ósseas foram afetadas pela suplementação de vitamina D3 ativa nas rações. Recomenda-se até 1,5 μg de vitamina D3 ativa nas rações para frangos de corte machos de 8 a 35 dias de idade. / Poultry farming has always aimed to maximize production efficiency in broilers, but unwanted characteristics came together with these improvements. Bone disorders are caused by rapid deposition of animal tissue, while the bone development continues its normal growth. This meant the movement capacity was damaged, as the welfare and consequently the development of these birds. Several nutritional programs have been emerged, such as the use of vitamin D and its metabolites involved in regulating calcium and phosphorous homeostasis by a mechanism which enhances their intestinal uptake, reducing renal losses and stimulating bone resorption. With the present study, it was aimed to use Solanum glaucophyllum as a supplementary source of 1,25-dihydroxycholecalciferol in bone characteristics of broiler chickens. To this end, two assays were conducted. In the assay 1, they were used female broilers, and in the assay 2, male broilers. It was evaluated the additional use of Solanum glaucophyllum as a source of active vitamin D3. A total of 1,296 broiler chickens of Cobb® trademark were used in a randomized block design, with 6 treatments and 6 repetitions with 18 birds. The treatments consisted of supplementation of 0.0; 0.5; 1.0; 1.5; 2.0 and 2.5 μg of active vitamin D3 / kg of feed. At 21 and 35 days of age, the birds were weighed and one chicken by repetition, representing the average weight of the lot, was slaughtered in order to get the tibia tarsus. The analyzed variables included fresh, dry and degreased weights, length, diameter, bone resistance, Seedor index, collagenous and non-collagenous protein contents, minerals and ashes. In the assay 1, at 35 days of age , the organic and mineral composition of the bones ( fresh weight, non- collagenous proteins and ashes) were affected by the additional provision of 2.5 μg of vitamin D3 in the 1,25 (OH ) 2D3 form. In the assay 2, bone characteristics were affected by active vitamin D3 supplementation in the diet. It is recommended the provision of 1.5 μg of active vitamin D3 in feed for broilers from 8 to 35 days old.

A indústria de alimentos está constantemente desenvolvendo produtos que fornecem, além de nutrientes, benefícios adicionais à saúde, tais como os enriquecidos com vitaminas. A vitamina D3 (colecalciferol) é sintetizada na pele durante a exposição da luz solar, controla a homeostase de cálcio e fósforo, metabolismo ósseo, pressão arterial e reabsorção renal de cálcio. O processo de microencapsulação vem sendo bastante aplicado em alimentos e um dos objetivos principais é o controle da liberação do agente ativo no momento e local desejado. A tecnologia de spray chilling é interessante para a microencapsulação de vitaminas lipossolúveis. O objetivo deste trabalho foi microencapsular vitamina D3, utilizando o método de spray chilling para a produção das micropartículas lipídicas sólidas (MLS). Para produção das MLS utilizou-se gordura vegetal com ponto de fusão em torno de 48 °C como carreador. Três tratamentos foram estabelecidos: sem aditivos (T1), com adição de 1% de cera de abelha (T2) e com 1% de lecitina de soja (T3). As micropartículas foram caracterizadas quanto à morfologia por microscopia eletrônica de varredura, tamanho médio por difração a laser, espectroscopia no infravermelho por transformada de Fourier (FTIR) e foi analisada a estabilidade da vitamina D3 durante o armazenamento a 10 e 25 °C, por meio de quantificações periódicas em cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). As micropartículas obtidas foram esféricas, semelhantes morfologicamente e com distribuição monocaudal de partículas. O tamanho médio das partículas variou em função dos seus ingredientes, sendo que as micropartículas produzidas apenas com vitamina e gordura foram menores em relação às demais (83,0% < 100 &micro;m). A espectroscopia na região do infravermelho (FTIR) demonstrou que não ocorreu interação entre os ingredientes. A estabilidade da vitamina D3 encapsulada foi satisfatória ao longo de 65 dias com valores superiores a 87% para os três tratamentos e a temperatura apresentou influência na estabilidade. As MLS produzidas com cera apresentaram melhores resultados de estabilidade de vitamina D3 com valores de 90,18 ± 2,23 % após 65 dias de estocagem. Esses resultados são promissores e demostram a viabilidade da técnica de spray chilling na produção de MLS carregadas de vitamina D3, possibilitando uma futura aplicação em alimentos. / The food industry is constantly developing products that provide, in addition to nutrients, additional health benefits such as enriched food with vitamins. Vitamin D3 (cholecalciferol), which is synthesized in the skin during exposure of sunlight, controls the homeostasis of calcium and phosphorus, bone metabolism, blood pressure and renal reabsorption of calcium. The microencapsulation process has been widely applied in food and is a key objective to control the release of active agents at specific time and desired location. The spray chilling technology is interesting for microencapsulation of fat-soluble vitamins. The objective of this work was microencapsulating vitamin D3 using the spray chilling method for the production of solid lipid microparticles (SLM). For the production of the SLM it was used vegetable fat with melting point around at 48 °C as a carrier. Three treatments were established: no additives (T1), 1% of beeswax (T2), and 1% soybean lecithin (T3). The morphology of microparticles was characterized by scanning electron microscopy, laser diffraction (average size) and Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR). Additionally, vitamin D3 stability was examined during storage at 10 and 25 °C, through periodic measurements by High-performance liquid chromatography (HLPC). The microparticles obtained were spherical with similar morphology and unimodal size distribution. The average particle size varied according to composition wherein microparticles produced with vitamin and fat were lower than other (83.0% of particles smaller than 100 &micro;m). Spectroscopy in the infrared (FTIR) showed that there was no interaction between the components. The stability of vitamin D3 encapsulated was satisfactory over 65 days with values greater than 87% for the three treatments and temperature have any influence on the stability. The SLM produced with wax showed better stability for vitamin D3 with values of 90.18 ± 2.23% after 65 days of storage. These results are promising and demonstrate the feasibility of spray chilling technique in the production of SLM loaded with vitamin D3, allowing future application in foods.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Alzheimer's disease (AD) is considered the main cause of dementia in elderly people worldwide. This disease affects the central nervous system (CNS), especially the cerebral cortex and hippocampus, areas that are responsible for the processes of learning and memory, for this the search for new therapies to treat this condition is constant. Studies indicate that Vitamin D3 (VD3) may be involved in the functions of neurotransmission, neuroprotection and neuroimmunomodulation in different brain processes, in addition to being involved in the homeostasis of calcium (Ca2+). Thus, the aim of this study was to investigate the effects of VD3 on memory and in the activity of enzymes AChE, NTPDase and 5'-Nucleotidase in the hippocampus of rats submitted to a model of sporadic dementia of the Alzheimer type (DETA) in rats. For this, a total of 40 male Wistar rats were used, weighing between 350-400g were divided into 8 groups: control, Vitamin D3 12.5 μg/kg, Vitamin D3 42 μg/kg, Vitamin D3 125 μg/kg streptozotocin (STZ), streptozotocin + Vitamin D3 12.5 μg/kg streptozotocin + Vitamin D3 42 μg/kg streptozotocin + Vitamin D3 125 μg/kg. The animals were anesthetized with ketamine and xylazine (0.5 mg/kg) and received a bilateral injection of streptozotocin (3mg/kg) intracerebroventicular (icv). After surgery the animals was submitted a recovery period for 72 hours. Then the animals were treated with VD3 orally for 21 days. Behavioral tests of open field and object recognition were realized from 21st to 24th day after surgery. After the 24th day the animals were anesthetized with isoflurane and euthanized. In relation to VD3 levels in serum, a significant increase (P<0.05) was observed in the groups that received the highest doses. A memory deficits in STZ group has been found, however, the treatment with VD3 shown to be effective in the preventing of loss of memory (P<0.05). Regarding the AChE activity was found increased in the hippocampus in STZ group, and this increase was attenuated by administration of VD3 (P<0.05). Animals of group with Dementia also showed a reduction in ATP hydrolysis and VD3 was able to prevent this effect (P<0.05). Furthermore, VD3 was able to reverse the increase in the hydrolysis to ADP and the decrease in AMP hydrolysis by STZ-icv. Thus, this study showed that administration of VD3 is capable of maintaining cholinergic neurotransmission, the homeostasis of the purinergic system as well as improve memory in animals with SDAT. / A Doença de Alzheimer (DA) é considerada a principal causa de demência em idosos no mundo. Essa doença afeta o Sistema Nervoso Central (SNC), principalmente o córtex cerebral e o hipocampo, que são áreas responsáveis pelos processos de aprendizagem e memória, por isso a busca por novas terapias para o tratamento dessa patologia é constante. Estudos indicam que a Vitamina D3 (VD3) pode estar envolvida nas funções de neurotransmissão, neuroproteção, neuroimunomodulação e diversos processos cerebrais, além de estar envolvida na homeostase do cálcio (Ca2+). Sendo assim, o objetivo deste estudo foi investigar os efeitos da VD3 sobre a memória e na atividade das enzimas AChE, NTPDase e 5 Nucleotidase em hipocampo de ratos submetidos a um modelo de Demência Esporádica do Tipo Alzheimer (DETA) em ratos. Para isso, foram utilizados um total de 40 ratos machos Wistar, pesando entre 350- 400g, divididos em 8 grupos: controle, Vitamina D3 12,5 μg/kg, Vitamina D3 42 μg/kg, Vitamina D3 125 μg/kg, estreptozotocina (STZ), estreptozotocina + Vitamina D3 12,5 μg/kg, estreptozotocina + Vitamina D3 42 μg/kg, estreptozotocina + Vitamina D3 125 μg/kg. Os animais foram anestesiados com Ketamina e Xilazina (0.5 mg/kg) e receberam uma injeção bilateral de estreptozotocina (3mg/kg) intracerebroventicular (icv). Após o procedimento cirúrgico os animais passaram por um período de recuperação de 72 horas. Em seguida os animais foram tratados com VD3, via oral, durante 21 dias. Os testes comportamentais de campo aberto e reconhecimento de objetos foram realizados do 21º ao 24º dia após a cirurgia. Logo após o 24º dia os animais foram anestesiados com isoflurano e eutanasiados. Em relação os níveis de VD3 em soro, foi observado um aumento significativo (P<0.05) nos grupos que receberam as maiores doses. Um déficit de memória foi encontrado no grupo STZ, no entanto, o tratamento com VD3 mostrou-se eficiente em prevenir esta perda de memória (P<0,05). Quanto à atividade da AChE, foi encontrado um aumento em hipocampo no grupo STZ, sendo que esse aumento foi atenuado pela administração de VD3 (P<0,05). Os animais do grupo com Demência também apresentaram uma redução na hidrólise de ATP e a VD3 foi capaz de prevenir este efeito (P<0,05). Além disso, a VD3 foi capaz de reverter o aumento na hidrólise de ADP e a diminuição da hidrólise de AMP causada pela injeção icv-STZ. Desta forma, este estudo mostrou que a administração de VD3 é capaz de manter a neurotransmissão colinérgica, a homeostase do sistema purinérgico, bem como melhorar a memória em animais com DETA.

Submitted by Simone Souza (simonecgsouza@hotmail.com) on 2017-08-23T14:00:22Z No. of bitstreams: 1 DISS_2014_Emanuele Brusamarelo.pdf: 1193853 bytes, checksum: ed950682d57e5c216154b030d0087cae (MD5) / Approved for entry into archive by Jordan (jordanbiblio@gmail.com) on 2017-08-24T15:13:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISS_2014_Emanuele Brusamarelo.pdf: 1193853 bytes, checksum: ed950682d57e5c216154b030d0087cae (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-24T15:13:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISS_2014_Emanuele Brusamarelo.pdf: 1193853 bytes, checksum: ed950682d57e5c216154b030d0087cae (MD5) Previous issue date: 2014-03-11 / A nutrição vitamínica e mineral interfere no desempenho e nas características ósseas das aves. O suplemento de vitamina D utilizado sem restrição nas rações para frangos de corte é o colecalciferol inativo e o 25-hidroxicolecalciferol. O objetivo foi avaliar o desempenho, o rendimento de cortes comerciais e de carcaça e os parâmetros ósseos de frangos de corte machos suplementados com 1,25-dihidroxicolecalciferol e redução de cálcio e fósforo disponível nas rações. Um total de 648 machos foi distribuído, em delineamento em blocos ao acaso, com seis tratamentos: dieta controle - atendendo a exigência nutricional; dieta controle negativo - com redução em 15% dos níveis de cálcio e de fósforo disponível; dieta controle negativo suplementada com: 0,5; 1,0; 1,5 e 2,0 μg de vitamina D3 ativa/kg ração respectivamente, com seis repetições (boxes). O desempenho foi avaliado pelo ganho de peso (kg), consumo de ração (kg/ave) e conversão alimentar. As aves foram pesadas com um dia e aos 42 dias de idade, para obtenção do ganho de peso. O consumo de ração foi obtido pela diferença entre a quantidade de ração fornecida, descontando-se as sobras em cada fase da criação. A razão entre o consumo de ração corrigido e o ganho de peso originou a conversão alimentar. Quatro aves/unidade experimental foram amostradas, pesadas e sacrificadas por deslocamento cervical para avaliação dos rendimentos de carcaça e de cortes comerciais no 42º dia de idade. Uma ave/unidade experimental foi amostrada, pesada e sacrificada para a remoção dos tibiotarsos utilizados na avaliação dos parâmetros ósseos no 21º e 33º dias de idade. As características ósseas avaliadas foram: o peso (mg) e comprimento (mg) do osso, índice de Seedor (mg/mm), cinzas ósseas (%) e resistência à quebra (kgf). O suplemento de vitamina D3 ativa com redução de cálcio e de fósforo disponível nas rações não influenciou o desempenho e os rendimentos de carcaça e cortes comerciais (peito, coxa + sobrecoxa e asa) das aves. A redução em 15% dos níveis de cálcio e de fósforo disponível e o suplemento de vitamina D3 ativa nas rações não afetou o peso e o comprimento do osso, o índice de Seedor e a resistência à quebra. O percentual de deposição de cinzas em ossos de frangos de corte aos 21 e 33 dias de idade foi diferente entre tratamentos. Os menores valores para cinzas, sem interferência na resistência à quebra dos tibiotarsos, demonstra a possibilidade de reduzir em 15% os níveis de cálcio e de fósforo disponível nas dietas sem compromoter a estrutura óssea das aves. / The vitamin and mineral nutrition interferes with the production performance and bone characteristics of birds. The vitamin D supplement used without restriction in the feed for broilers is inactive cholecalciferol and 25-hydroxycholecalciferol. The objective of this study was to evaluate the performance, and yields of carcass and commercial cuts and bone parameters of male broilers supplemented with 1,25-dihydroxycholecalciferol and reduction of calcium and available phosphorus in feed. A total of six hundred and forty-eight males, was used in a randomized-block design, with six treatments: control diet - meeting nutritional requirement; negative control diet - with 15% reduction in the levels of calcium and available phosphorus; negative control diet supplemented with: 0.5; 1.0; 1.5 and 2.0 μg of vitamin D3 active/kg diet respectively, with six replicates (boxes). The performance was evaluated by weight gain (kg), feed intake (kg/bird) and feed conversion. The broilers were weighed one day and at 42 days of age, for obtaining the weight gain. Feed intake was calculated as the difference between the amount of feed, discounting the leftovers at each stage of creation. The ratio between feed intake and weight gain corrected feed conversion originated. Later, four broilers of each experimental unit were sampled, weighed and slaughtered by cervical dislocation to evaluate carcass yield and commercial cuts yield at 42 days of age. Later, a one bird of each experimental unit was sampled, weighed and sacrificed for removal of tibiotarsos for the assessment of bone parameters at 21 and 33 days of age. The bones were identified and cleaned of all adhering tissue and frozen (-20°C) until analysis begins. The bone parameters were evaluated weight (mg) and length (mg) of the bone Seedor index (mg/mm) bone ash (%) and breaking strength (kgf). The active vitamin D3 supplement with reduced calcium and available phosphorus in the diets did not influence performance and carcass and commercial cuts (breast, thigh + drumsticks and wing) of poultry. A 15% reduction in the levels of calcium and available phosphorus and vitamin D3 supplement active in the diets did not affect the weight and length of the bone, the index Seedor and resistance to breakage. The percentage of bone ash deposition in bones of broilers at 21 and 33 days of age was different between treatments. The lowest values for ash, without interference in breaking resistance force of tibiotarsos, demonstrates the possibility of reducing in the 15% levels of calcium and available phosphorus in diets without compromising the bone structure of birds.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-01-20Bitstream added on 2014-06-13T19:36:59Z : No. of bitstreams: 1 sanfelice_c_me_botfmvz.pdf: 528622 bytes, checksum: c9f0911ab04c1ca00ef2a724dcc79192 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Foram realizados dois experimentos. No experimento 1, foi determinado qual das dosagens de vitamina 25-OHD3 promoveria a maior concentração de cálcio plasmático. Foram utilizados 90 frangos de corte e aos 35 dias, as aves foram suplementadas diariamente por sete dias com três dosagens de vitamina D3 na dieta. Todas as dietas continham 2.500UI de vitamina D3. O Tratamento 1, dieta controle, continha somente 2.500UI de vitamina D3/kg ração; o Tratamento 2 foi suplementado com 1.000UI de vitamina 25-OHD3, totalizando 3.500UI; o Tratamento 3, suplementado com 2.500UI de vitamina 25-OHD3, totalizando 5.000UI. A partir dos 42 dias todas as aves receberam a ração controle até os 48 dias de idade. Foram realizadas coletas de sangue, antes, durante e após a administração de vitamina D3 com coletas diárias dos 35-42 dias. O efeito dos níveis de cálcio foi testado de forma contínua por análise de regressão. Foram observadas diferenças ao longo dos dias de coleta de sangue, quanto maior os níveis de vitamina D3 suplementados na ração, maior foram as concentrações de cálcio plasmático. Conclui-se que a dose de 5.000UI de vitamina D, provocou maior concentração de cálcio sanguíneo. No experimento 2, foi avaliado qual o melhor tempo de administração de vitamina D3 antes do abate para se obter níveis elevados de cálcio plasmático por pelo menos dois dias após a última administração. Foram utilizados 60 frangos de corte e aos 35 dias as aves foram suplementadas com vitamina D3 na dieta com a melhor dosagem obtida no experimento 1... / Two trials were conducted. In trial 1, there was determine which dosage of vitamin 25-OHD3 would promoted the highest plasma calcium concentration. There were housed 90 broiler chickens and at 35 days of age, the birds were supplemented daily for seven days with three doses of vitamin D in the diet. All diets contained 2.500UI of vitamin D3. The treatment 1, control diet, contained only 2.500UI D3/kg vitamin in diet; the treatment 2 was supplemented with 1,000UI of 25-OHD3 vitamin, totaling 3.500UI; Treatment 3, was supplemented with 2,500UI of 25-OHD3, totaling 5.000UI. From 42 days all birds received the control diet until 48 days old. Blood samples were collected, before, during and after the administration of vitamin D3 with daily collects in the 35-42 days. The calcium levels effect was continuously tested by regression analysis. There were differences day of blood collection, and the higher levels of 25-OHD3 vitamin supplementation in the diet were higher concentrations of plasma calcium. It is concluded that the dosage of 5,000UI vitamin D3, caused the highest calcium concentration. In experiment 2 there was evaluated the best administration time of vitamin D3 before slaughter to obtain high levels of plasma calcium by at least two days after the last administration. There were housed 60 broilers chickens and at 35 days of age, the birds were supplemented with vitamin 25-OHD3 in the diet with the best dosage obtained in experiment 1, was evaluated in three periods of administration, T1: 3 days, T2: 5 days, T3: 7 consecutive days of administration of the final diet supplemented. After each period of feed, the birds received control diet for four consecutive days. Daily, blood samples were collected, before, during and after the last administration. The plasma calcium in birds fed for five consecutive days... (Complete abstract click electronic access below)

Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic, multisystem inflammatory disease characterized by symmetric and erosive synovitis. The purinergic signaling system plays an important role in the modulation of inflammatory and immune responses through extracellular biomolecules as nucleotides adenine and its adenosine nucleoside derivative, whose extracellular concentrations are controlled by ectoenzymes action as ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolase (E-NTPDase) and ecto-adenosine deaminase (E-ADA) present on the surface of various cells. The deficiency of vitamin D, a hormone known to play an important role in calcium homeostasis, has been related the several autoimmune diseases, including RA. This fact is due to its immunomodulatory role, where it inhibits the proliferation of T lymphocytes, especially Th1 lymphocytes as well as in the production and action of cytokines. Due to high doses of vitamin D can lead to hypercalcemia and intoxication it was tested the use of a nanoencapsulation system able to release in a controlled and sustainable manner, a reduced dose on site of action. Based on these principles, the effect of vitamin D3 free and nanoencapsulated was evaluated in the score for arthritis, thermal hyperalgesia and paw edema as well as histological analyzes and in the activity of the E-NTPDase and E-ADA enzyme lymphocytes from animals with arthritis induced by complete Freud‟s adjuvant (CFA). Hematological and biochemical parameters, including serum concentrations of vitamin D, were determined. Adult Wistar rats were divided into ten groups: I: control (CN); II: adjuvant-induced arthritis (AR); III: control vehicle (CV); IV: AR+V; V: vitamin D3 free at a dose of 120 IU/day (VD3); VI: AR+VD3 (120 IU/day); VII: control of white formulation (CF); VIII: AR+F; IX: vitamin D3 lipid-core nanocapsules formulation at a dose of 15.84 IU/day (LNC-D3) and X: AR+LNC-D3 (15.84 IU/day). The initiation of treatment was 15 days after the induction of arthritis in a period of 15 days. The results of this study demonstrated that VD3 was able to reduce arthritis score, thermal hyperalgesia and paw edema in rats with AR. At the same time, treatment with LNC-D3 only reduced thermal hyperalgesia and paw edema. The histological analyzes showed that both formulations were able to reduce inflammatory changes induced by CFA. The levels AST showed an increased in the CN group compared to the others. In the group treated with VD3 it was observed an increase in the levels of 25 (OH)D. The activity of the E-NTPDase in lymphocytes from rats that developed AR was higher in comparison with the control group, whereas the activity of E-ADA was lower. This effect was reversed after 15 days of treatment with VD3 and LNC-D3. In addition, both vitamin D3 formulations did not alter the activity of E-NTPDase and E-ADA enzymes in healthy animals. Data from this study indicate that vitamin D3, either in free or nanoencapsulated forms, seems to contribute mitigating the inflammatory process induced by CFA, possibly by modulating the activities of ectonucleotidases, can be used, after further studies, as a complementary therapeutic agent for the treatment of rheumatoid arthritis. / A artrite reumatoide (AR) é uma doença inflamatória crônica, multissistêmica, caracterizada por sinovite simétrica e erosiva. O sistema de sinalização purinérgica desempenha um papel importante na modulação das respostas inflamatórias e imunes, através de biomoléculas extracelulares, como os nucleotídeos de adenina e seu derivado nucleosídeo adenosina, cujas concentrações extracelulares são controladas por ação de ectoenzimas, como ecto-nucleosídeo trifosfato difosfoidrolase (E-NTPDase) e ecto-adenosina desaminase (E-ADA) presentes na superfície de diversas células. A deficiência da vitamina D, um hormônio conhecido por desempenhar importante papel na homeostase do cálcio, vem sendo relacionada a diversas doenças autoimunes, entre elas a AR. Este fato deve-se a seu papel imunomodulador, onde atua na inibição da proliferação de linfócitos T, especialmente linfócitos Th1, bem como na produção e na ação de citocinas. Como altas doses podem levar à hipercalcemia e à intoxicação, foi testada a utilização de um sistema de nanoencapsulação capaz de liberar, de forma controlada e sustentada, uma dose reduzida no local de ação. Com base nestes princípios, foi avaliado o efeito da vitamina D3 livre e nanoencapsulada no escore de artrite, na hiperalgesia termal e no edema de pata, bem como em análises histológicas e na atividade das enzimas E-NTPDases e E-ADA de linfócitos de animais com artrite induzida por adjuvante Completo de Freund (CFA). Parâmetros hematológicos e bioquímicos, entre eles a concentração sérica de vitamina D, foram determinados. Ratas adultas Wistar foram divididas em dez grupos: I: controle (CN); II: artrite (AR); III: controle veículo (CV); IV: AR+V; V: vitamina D3 livre na dose de 120 UI/dia (VD3); VI: AR+VD3 (120 UI/dia); VII: controle da formulação branca (CF); VIII: AR+F; IX: vitamina D3 nanoencapsulada na dose de 15,84 UI/dia (LNC-D3) e X: AR+LNC-D3 (15,84 UI/dia). O início do tratamento foi após 15 dias da indução da artrite, em um período de 15 dias. Os resultados do presente estudo demonstraram que VD3 foi capaz de reduzir escore de artrite, hiperalgesia térmica e edema da pata em ratos com AR. Ao mesmo tempo, o tratamento com LNC-D3 reduziu apenas a hiperalgesia térmica e o edema da pata. As análises histológicas mostraram que ambas as formulações foram capazes de reduzir as alterações inflamatórias induzidas por CFA. Os níveis de AST apresentaram um aumento no grupo AR em comparação com os demais. No grupo tratado com a VD3 observou-se um aumento nos níveis de 25(OH)D. A atividade da E-NTPDase em linfócitos de ratos que desenvolveram AR foi maior em comparação ao grupo controle, ao passo que a atividade da E-ADA foi menor. Este efeito foi revertido após 15 dias de tratamento com VD3 e LNC-D3. Além disso, ambas as formulações de vitamina D3 não alteraram a atividade das enzimas E-NTPDase e E-ADA em animais saudáveis. Os dados do presente estudo apontam que a vitamina D3, tanto na forma livre quanto nanoencapsulada, parece contribuir amenizando o processo inflamatório induzido pelo CFA, possivelmente por modular as atividades das ectonucleotidases, podendo após estudos adicionais ser utilizada como um agente terapêutico complementar para o tratamento da artrite reumatoide.

A hipovitaminose de vitamina D é um problema global de saúde e a sua deficiência compromete funções importantes ao corpo humano. A suplementação oral, políticas de fortificação em alimentos e mudanças dos hábitos de vida são medidas efetivas para solucionar este problema. Porém, pessoas com doença de Crohn, celíaca, fibrose cística, bypass gástrico e que fazem uso de medicamentos sequestradores de ácido biliares possuem a absorção intestinal de vitamina D comprometida. A via transdérmica pode ser uma alternativa de administração de vitamina D3, porém poucas referências bibliográficas abordam sobre o assunto. A proposta do presente estudo é o desenvolvimento de sistemas transdérmicos com a combinação de promotores de permeação químicos: lecitina de soja, palmitato de isopropila, etoxidiglicol (Transcutol® CG), propilenoglicol e etanol, acrescidos do ingrediente ativo vitamina D3, a validação analítica para quantificação do ativo em Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE), a avaliação da estabilidade, segurança, retenção e permeação cutânea. A validação do método analítico de quantificação da vitamina D3 em CLAE foi considerada específica, linear, precisa e exata. O limite de detecção foi 20 ng/mL e de quantificação 40 ng/mL. Os testes de estabilidade foram realizados (preliminar, acelerado e normal) e a melhor condição de armazenamento foi a geladeira (5,0 ± 2,0 ºC) durante 90 dias. A condição de radiação luminosa foi a menos adequada, o que indica que o armazenamento deve ser realizado em frascos protegidos da luz (âmbar). No teste de segurança de irritação (HET-CAM) as formulações testadas foram consideradas não irritantes. No teste de retenção e permeação cutânea a solubilidade da vitamina D3 foi avaliada para garantir a sink condition do líquido receptor escolhido: Phosfate Buffer Saline (PBS) com etanol a 50% e a integridade da pele foi garantida com o teste de perda de água transepidérmica (TEWL). A formulação desenvolvida com a presença de todos os promotores de permeação avaliados (F1) e o controle, apenas com a presença do etanol e o propilenoglicol, foram avaliados. A F1 permaneceu na superfície da pele, por possuir maior afinidade com a fase oleosa da formulação e houve tendência de hidratação desta formulação. O controle demonstrou uma retenção cutânea em 4 h no estrato córneo e em 24 h na epiderme e derme. Concluiu-se que a formulação desenvolvida é estável, segura e a vitamina D3 ficou retida na pele, o que indica o uso tópico da mesma. A alta lipofilicidade foi a justificativa dos resultados apresentados e futuros estudos podem ser realizados com derivados menos lipofílicos da vitamina D para avaliar a via transdérmica. / Hypovitaminosis D is a global health issue and vitamin D deficiency compromises important functions to the human body. Oral supplementation, fortification food and changes in live style are effective measures to solve this problem. However, people with Crohn\'s disease, celiac disease, cystic fibrosis, gastric bypass and who use bile acid-binding medications have compromised intestinal vitamin D absorption. The transdermal route may be an alternative for vitamin D3 administration, but few references refer to the subject. The purpose of the present study is the development of transdermal systems with the combination of penetrations enhancers (soybean lecithin, isopropyl palmitate, ethoxydiglycol (Transcutol® CG), propylene glycol and ethanol) with vitamin D3, the analytical validation for quantification of the active in High Performance Liquid Chromatography (HPLC), stability assessment, safety, skin retention and permeation. The validation of the analytical method for quantification of vitamin D3 in HPLC was considered specific, linear, precise and accurate. The limit of detection was 20 ng/mL and 40 ng/mL. Stability assessment was performed and the appropriate storage condition was the refrigerator (5.0 ± 2.0 ° C) for 90 days. The indirect solar radiation condition was not adequate, which indicates that the storage should be performed in light-protected bottles (amber). In the irritation safety test (HET-CAM) the formulations tested were considered non-irritant. In the skin permeation and retention test the solubility of vitamin D3 was evaluated to guarantee the sink condition of the receptor fluid: Phosfate Buffer Saline (PBS) with 50% ethanol and skin integrity was guaranteed with Transepidermal Water Loss (TEWL). The developed formulation with the presence of all penetrations enhancers evaluated (F1) and the control formulation with the presence of ethanol and propylene glycol were assessed. F1 remained on the surface of the skin, because it had greater affinity with the oily phase of the formulation and there was tendency of hydration to this formulation. The control formulation demonstrated skin retention in 4 hours in the stratum corneum and in 24 hours in the epidermis and dermis. The study concluded that the formulation developed is stable, safe and vitamin D3 was retained in the skin, which indicates the topical use. High lipophilicity was the explanation of the presented results and future studies can be carried out with less lipophilic derivatives of vitamin D to evaluate the transdermal route.