Orientador: Carlos Roberto Teixeira / Resumo: Os psitacídeos são animais populares e adorados por sua característica sociável, inteligência, capacidade de repetir sons e pelo exuberante colorido de suas penas, tornando um dos principais grupos de aves “pets”. O objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrência de circovirus, enterobactérias e endoparasitos em uma coleção de psitacídeos exóticos. Foram coletados swabb de 70 psitacídeos exóticos de nove espécies, mantidos em um criadouro comercial. O diagnóstico viral foi realizado com auxilio da técnica de PCR. Para o diagnóstico de enterobacterias foram utilizadas técnicas laboratoriais de cultura bacteriana, por meio de características morfológicas e provas bioquímicas. A pesquisa de endoparasitos foi realizada por meio de três métodos: Técnica de Willis (Flutuação em solução salina), Técnica de Hoffman (Sedimentação Simples) e Exame Direto de Fezes. Um terço das aves 24/70 (32,38%) foram positivas para circovirus. Um total de 23/70 (32,85%) das aves foi positiva para enterobacterias de 12 espécies. Foram realizados 210 exames coproparasitológicos das quais 40/70 (57.14%) foram positivos para enteroparasitos, sendo o método Willis o mais preciso. Foi possível concluir que psitacídeos exóticos mantidos sob cuidados humanos apresentam ocorrência significativa de circovirus, enterobacterias e endoparasitos que requerem manejo e profilaxia visando aumentar os índices reprodutivos do plantel, assim como, evitar óbitos de aves. Outro ponto importante é coibir a contaminaçã... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Psittacids are popular birds and adored for their sociable character, intelligence, ability to repeat sounds, and the coloring of their feathers, making them one of the main groups of pets. The objective of the present study was to evaluate the occurrence of circovirus, enterobacteria and endoparasites in a collection of exotic parrots. Swabb of 70 exotic psittacines from nine species were collected from a exotic birds private collection. The viral diagnosis was performed using the PCR technique. For the diagnosis of enterobacteria, bacterial culture and laboratory techniques were used. Endoparasite research was performed using three methods: Willis Technique (Saline Fluctuation), Hoffman Technique (Simple Sedimentation) and Direct Faecal Examination. One third of birds 24/70 (32.38%) were positive for circovirus. A total of 23/70 (32.85%) of the birds were positive for enterobacteria of 12 species. There were 210 coproparasitological exams of which 40/70 (57.14%) were positive for enteroparasites, and the Willis method was the most accurate. It was possible to conclude that exotic parrots kept under human care have a significant occurrence of circovirus, enterobacteria and endoparasites that require management and prophylaxis in order to increase the reproductive indexes of the establishment, as well as to avoid bird deaths. Another important point is avoid the contamination of native species of wild animals. / Doutor

O vírus da hepatite E (HEV) é um patógeno emergente de distribuição global, causador de hepatite aguda e crônica em humanos e infecções assintomáticas em animais. No Brasil a prevalência de infecção por HEV em humanos e animais ainda é pouco compreendida, assim como as características de virulência, patogenicidade e de infecção inter-espécies de isolados do genótipo 3, zoonótico, circulantes no país também são desconhecidas. O estudo foi dividido em duas etapas, com os objetivos de 1) contribuir no diagnóstico laboratorial molecular do HEV a partir do desenvolvimento de um protocolo de RT-PCR em tempo real (RT-qPCR) para pesquisa do HEV em amostras biológicas, e 2) contribuir com a compreensão das características moleculares, sorológicas, clínico-laboratoriais, ultrassonográficas e histopatológicas associadas à infecção experimental em macacos-da-noite (Aotus azarai infulatus) por um isolado do genótipo 3 suíno do HEV previamente detectado na Amazônia oriental brasileira. O protocolo de RT-qPCR foi desenvolvido com a caracterização da curva de detecção e aplicado em concomitância com testes sorológicos para avaliação diagnóstica restrospectiva de 318 (n = 318) amostras de soros humanos suspeitos de hepatite E. O HEV-RNA não foi detectado em nenhuma das amostras humanas testadas, mas foi determinada soroprevalência de 3,4% e 5,9% de anti-HEV IgM e IgG, respectivamente, o que indicou baixa prevalência de infecção por HEV, mesmo entre pacientes com suspeita clínica e/ou laboratorial de hepatite E na Amazônia brasileira. O estudo experimental em macacos-da-noite foi desenvolvido durante 12 semanas e os animais infectados, por via intravenosa (n=3) e oral (n=3) (e dois controles), foram avaliados semanalmente para determinação dos parâmetros clínicos, bioquímicos, hematológicos, sorológicos (pesquisa de anti-HEV IgM e IgG por enzimaimunoensaio) e moleculares (HEV-RNA soro e fezes por RT-qPCR). Adicionalmente, os animais também foram submetidos a avaliação hepática mensal por ultrassonografia, histopatologia e pesquisa hepática de antígenos do HEV por imunohistoquímica. Os seis macacos-da-noite infectados apresentaram o HEV-RNA em amostras de soro e/ou fezes, e alguns apresentaram evidências de soroconversão, detecção hepática do antígeno viral por imunohistoquímica associada a alterações clínicas e laboratoriais de hepatite aguda oligossintomática. Assim, o protocolo RT-qPCR demonstrou ser aplicável na pesquisa molecular do HEV em amostras de humanos e animais, representando uma importante ferramenta de diagnóstico laboratorial. O estudo experimental permitiu a primeira validação de um primata neotropical como modelo experimental para estudos de infecção com o genótipo 3 do HEV. / Hepatitis E virus (HEV) is an emerging pathogen with global distribution that causes acute and chronic hepatitis in humans and asymptomatic infections in animals. In Brazil, the prevalence of HEV infection in humans and animals is still poorly understood, and the characteristics of virulence, pathogenicity and inter-species infection of the genotype 3 isolates circulating in the country are unknown. The study was divided in two stages that aimed to 1) contribute to the molecular diagnosis of HEV infection by the development of a real-time RT-PCR protocol (RT-qPCR) for HEV-RNA research in biological samples, and 2) to contribute to understanding of molecular, serological, clinical-laboratory, ultrasonographic and histopathological features of HEV genotype 3 in owl monkeys (Aotus azari infulatus) experimental infected with isolate of swine HEV genotype 3 previously detected in the Eastern Brazilian Amazon. The RT-qPCR protocol was developed with characterization of a quantification standard curve and later applied concurrently with serological tests in the retrospective evaluation of 318 (n = 318) human serum samples of hepatitis E suspected cases. HEV-RNA was not detected in any of human tested samples, but seroprevalence of 3.4% and 5.9% was determined for anti-HEV IgM and IgG, respectively, that indicated a low prevalence of HEV infection, even among patients with clinical and/or laboratory suspicion of hepatitis E in the Brazilian Amazon. The experimental study in owl monkeys was developed during12 weeks and the animals were infected by intravenous (n = 3) and oral (n = 3) routes (and two negative controls) were evaluated for determination of clinical, biochemical, hematological, serological (anti-HEV IgM and IgG by enzyme immunoassay) and molecular (HEV-RNA serum and stool by RT-qPCR) parameters weekly. Additionally, the animals were also evaluated by hepatic ultrasonography, histopathology and immunohistochemistry research of HEV antigens in liver monthly. The six infected owl monkeys presentend HEV-RNA in serum and/or stool, and some monkeys presented with evidence of seroconversion, liver detection of HEV antigens by immunohistochemistry associated with clinical and/or laboratory findings of oligosymptomatic acute hepatitis. Thus, the RT-qPCR protocol demonstrated to be applicable in the molecular investigation of HEV infection in human and animal samples, and it also represented an important laboratory diagnostic tool. The experimental study allowed the validation of the first neotropical primate model for HEV genotype 3 infection studies.

Os parasitas pertencentes ao gênero Leishmania têm distribuição ubíqua. Este táxon inclui Leishmania infantum chagasi, agente etiológico da leishmaniose visceral nas Américas, uma zoonose negligenciada cujas metodologias diagnósticas acumulam uma série de limitações, requerendo a validação e padronização de metodologias diagnósticas satisfatórias. Vários fatores estão relacionados à patogênese causada por este protozoário, entre eles a catepsina L-like, uma cisteíno protease envolvida em processos regulatórios metabólicos e infecciosos. Portanto, este trabalho teve como objetivo avaliar a eficácia do gene de catepsina L-like isoforma CPA como alvo de diagnóstico molecular e como marcador filogenético que permita a compreensão das variações intraespecíficas e elucidem a história evolutiva de L. infantum chagasi no Brasil. Foram utilizados 44 isolados de L. infantum chagasi de diferentes estados brasileiros. Os fragmentos do gene de catepsina L-like foram amplificados, purificados, sequenciados, alinhados manualmente e analisados por métodos filogenéticos de máxima parcimônia e inferência bayesiana. As sequências geradas foram usadas para pesquisar e sintetizar iniciadores a serem usados em reações específicas para o parasita alvo. O gene de catepsina L-like não mostrou variabilidade intraespecífica entre os isolados analisados, sugerindo um evento recente de introdução do mesmo nas Américas. O par de iniciadores propostos amplificou o DNA alvo de isolados de L. infantum chagasi, sendo efetivo na amplificação de DNA em concentrações de até 10-11g / µl. O marcador proposto não apresentou reações cruzadas com outros hemoparasitas de importância clínica. Quando utilizado para o diagnóstico em um painel de amostras clínicas de cães, obteve-se uma frequência de positividade de 49,03% (102/208), contrastando com o valor de 14,42% (30/208) obtido com o marcador para o gene do espaçador ribossomal interno ITS. Quando testado em amostras de flebotomíneos se obteve um valor de 6,25% e em amostras de pacientes humanos o valor foi de 14,28%. Os marcadores também foram eficazes em amplificar DNA extraído de amostras de urina, de sangue fixado em papel filtro e mesmo em amostras de swab de lesões conjuntivas. Este conjunto de parâmetros permite inferir que o CatLeish- PCR é sensível e específico para o diagnóstico de L. infantum chagasi podendo ser aplicado tanto em pesquisas clínicas quanto em inquéritos epidemiológicos de vigilância. / The parasites belonging to the Leishmania genus have a wide distribution. This taxon includes Leishmania infantum chagasi, the etiologic agent of Visceral Leishmaniasis in the Americas, a neglected zoonosis that requires the validation and standardization of satisfactory diagnostic methodologies. Several factors are related to the pathogenesis caused by this protozoan, as Catepsin L-like, a cysteine protease involved in regulatory and infectious processes. Given this information this work aimed to evaluate the effectiveness of Cathepsin L-like isoform CPA as a target for molecular diagnosis and as a phylogenetic marker that allows understanding the intraspecific variations and the evolutionary history of L. infantum chagasi in Brazil. We used 44 isolates of L. infantum chagasi from different Brazilian states. The cathepsin L-like gene fragments were amplified, purified, sequenced, manually aligned and analyzed by maximum parsimony and Bayesian inference methods. The sequences generated were researched to construction of oligonucleotide primers to be used in reactions specific to the target parasite. The Cathepsin L-like gene did not show intraspecific variability among the isolates analyzed, suggesting a recent event of introduction of the same in the Americas. The pair of proposed primers amplified the target DNA of L. infantum chagasi isolates, being effective in DNA amplification at concentrations of up to 10-11g/µl. The proposed marker did not present cross-reactions with other hemoparasites of clinical importance. When used for the diagnosis in a panel of clinical samples of dogs obtained a positive frequency of 49.03% (102/208), against the 14.42% (30/208) to ribosomal ITS marker. Samples of sandflies obtained a value of 6.25% and in humans the value was 14.28%. The markers were also effective in blood samples fixed on filter paper and even in samples from conjunctival lesion swabs. This set of parameters allows to infer that CatLeish-PCR is a sensitive and specific marker for the diagnosis of L. infantum chagasi in clinical and epidemiological surveys.

A esporotricose é uma micose zoonótica que no Brasil afeta centros urbanos. O gato tem papel chave na transmissão fúngica desta doença. Nos últimos 3 anos, a cidade de Guarulhos já registrou mais de 1500 casos em gatos e assumiu o status de notificação compulsória. O objetivo do presente trabalho foi analisar a epidemiologia das cepas do clado clínico patogênico Sporothrix schenckii em relação aos aspectos fenotípicos, moleculares e de suscetibilidade aos fármacos das amostras isoladas de gatos no município de Guarulhos (São Paulo). O estudo foi dividido em dois experimentos, sendo o primeiro composto por 119 gatos divididos em três grupos: Caso, Contactante e Não-Contactante. As amostras foram obtidas por meio de suabe nas lesões dos animais do grupo Caso e dos demais grupos de suabe oral e submetidas à cultura micológica; em paralelo, amostras foram obtidas para processamento de citologia em meio líquido por emblocado celular (CB). As amostras isoladas foram submetidas a PCR para identificação da espécie, bem como aos testes de sensibilidade aos fármacos microdiluição e E-Test. Durante as colheitas 25 gatos foram submetidos à eutánasia e as amostras de pele e órgãos submetidos à análise histopatológica e imunohistoquímica. O segundo estudo foi composto por 135 gatos divididos em dois grupos: Sintomático e Assintomático. As amostras obtidas foram processadas para cultura micológica e PCR, só que desta vez, a PCR foi realizada diretamente da lesão e não após o isolamento fúngico. Neste estudo, foi obtido 92,31% de positividade dentre os gatos suspeitos com esporotricose em cultivo micológico. No projeto, 100% das amostras foram identificadas como S. brasiliensis. A técnica proposta de citologia em meio líquido por emblocado celular (CB) apresentou 93% de positividade para Sporothrix spp, com sensibilidade de 97,50% entre o isolamento fúngico e 94,87% para a imunocitoquímica. Concluindo deste modo, que o CB pode ser uma boa opção para diagnóstico em saúde pública. A investigação da susceptibilidade dos isolados aos fármacos: terbinafina, a anfotericina B, o itraconazol, fluconazol e o voriconazol foram de 0,06 0,5 µg/ml, 0,002 2 µg/mL e 0,023 - > 32 µg/ml, > 256 µg/mL e 1 - 8 µg/mL, respectivamente. As amostras submetidas à histopatologia e imunhistoquímica demonstraram presença do Sporothrix spp em pele, linfonodo mesentérico, baço, fígado, pulmão e coração. Não foi observado elemento fúngico no rim. Não foi estabelecida relação entre intensidade de infiltrado inflamatório e intensidade de Sporothrix na pele. Conclui-se que a PCR realizada de amostra diretamente de lesão pode ser utilizada em áreas cuja frequência da doença é alta, visto que a sensibilidade diagnóstica foi de 90,20%, contudo a especificidade foi de 42,11%. Sendo assim, em áreas de baixa frequência da esporotricose, recomenda-se o emprego do padrão ouro que é a cultura micológica para pesquisa de Sporothrix spp e com a realização da PCR para as amostras cuja isolamento for obtido. As variáveis de tipo de lesão e início do tratamento interferem no resultado diagnóstico de PCR direto da lesão. / Sporotrichosis is a zoonotic mycosis that affects urban centers in Brazil. The cat plays key role in the fungal transmission of this disease. In the last 3 years, the city of Guarulhos has registered more than 1500 cases in cats and this situation received a status of compulsory notification. The objective of the present work was to analyze the epidemiology from the strains of Sporothrix schenckii complex in relation to the phenotypic, molecular and drug susceptibility aspects of isolated samples collected in cats from Guarulhos city (São Paulo). The study was divided in two experiments: the first one consisting of 119 cats divided into three groups: Case, Contacting and Non-Contacting. Samples were obtained by swab lesions from the cats of Case group and from the other oral swab groups and submitted to mycological culture; at the same time, samples were obtained for cytology processing in liquid medium by cell block (CB). The isolated samples were submitted to PCR for species identification, as well the drug sensibility tests - microdilution and E-Test. During the process, 25 cats were euthanized and skin and organ samples were submitted to histopathological and immunohistochemical analysis. The second study was made with 135 cats divided into two groups: Symptomatic and Asymptomatic. The obtained samples were processed for mycological culture and PCR, but this time PCR was performed directly from the lesion and not after fungal isolation. This study obtained 92.31% of positivity among the cats with suspected of sporotrichosis in mycological culture. In this project, 100% of the samples were identified as S. brasiliensis. The proposed technique of cytology in liquid medium by cell block (CB) presented 93% of positivity for Sporothrix spp, with sensitivity of 97.50% between fungal isolation and 94.87% for immunocytochemistry. In conclusion, CB may be a good option for public health diagnosis. Investigations about the susceptibility of the isolates to the drugs: terbinafine, amphotericin B, itraconazole, fluconazole and voriconazole were 0.06 - 0.5 µg/ml, 0.002 - 2 µg/mL and 0.023 -> 32 µg/mL, > 256 µg/mL and 1-8 µg/mL, respectively. Samples submitted to histopathology and immunhistochemistry pointed the presence of Sporothrix spp on the skin, mesenteric lymph node, spleen, liver, lung and heart. No fungal element was observed in the kidney. There was no relationship between inflammatory infiltrate intensity and Sporothrix intensity in the skin. It is concluded that the PCR performed directly from the lesion can be used in areas with a high disease frequency, since the diagnostic sensitivity was 90.20%, but the specificity was 42.11%. Thus, in areas of low frequency of sporotrichosis, it is recommended to use the gold standard, which is the mycological culture for Sporothrix spp research, and to perform the PCR for samples whose isolation is obtained. The variables of lesions type and beginning of the treatment interfere in the diagnostic result of direct PCR of the lesion.

Zoonosis represent the majority of emerging infectious diseases, which have variable occurrence according to biological, environmental, socio-economic and cultural factors. With respect to socio-cultural factors, a growing practice in Brazil is keeping exotic animals as pets. These can have significant role in the spread of pathogens with zoonotic potencial, such as Chlamydia psittaci, etiologic agent of chlamydiosis in birds and psittacosis in humans. The Psittaciformes are the main order of birds affected by C. psittaci and is the most commonly kept as a pet. Avian chlamydiosis is endemic in Brazil; however, few studies have been conducted regarding its zoonotic potential. In human, psittacosis can lead to atypical pneumonia, however, due to difficulties related to laboratory diagnosis and the relative lack of knowledge by health professionals about this disease, its prevalence in the country is still unknown. In this context, this study aimed to determine the occurrence of C. psittaci in patients with psittacosis symptoms attended at the Ambulatory of Tropical Diseases and Zoonosis of the Infectology Institute Emilio Ribas (IIER). In addition, establishing the epidemiological link with birds and evaluate risk factors related to this zoonosis. Therefore, serum samples from eligible patients were collected in order to be tested for C. psittaci IgA, IgM and IgG antibodies. At the same time, biological samples from any species of birds related to suspected cases of psittacosis were collected for molecular analysis of C. psittaci. Among the eligible patients in this study, 27% (10/37) were classified as confirmed cases of psittacosis; 13.5% (5/37) as probable and 59.5% (22/37) as discarded. Pneumonia (p = 0.004), cough (p = 0.002) and chills (p = 0.011) were statistically significant when comparing with those patients in which psittacosis was discarded. With reference to the epidemiological link with birds, 73% (11/15) of the confirmed/probable cases had domiciliary contact with birds and 27% (4/15) had occupational contact. In addition, 47% (7/15) patients had contact with infected birds in which C. psittaci was laboratorial confirmed; from another 47% (7/15) of the cases, biological samples of the birds related to the patient could not be obtained, and in 6% (1/15) of the cases C. psittaci was not detected in the bird hosts evaluated. In addition, several confirmed/probable cases reported having close contact with the birds as handling (100%, 15/15), keeping the bird in the shoulder (67%, 10/15), kissing the bird (40%, 6/15) and sharing the food with the bird (13%, 2/15), practices that facilitate diseases transmission. Human and animal health care providers have an important role to play in identifying specific factors affecting the health of their patients and should work together. Conjointly efforts would increase the understanding on zoonotic disease and would, ultimately, improve prevention and control strategies / As zoonoses representam a maior parte das doenças infecciosas emergentes, as quais tem ocorrência variável de acordo com fatores biológicos, ambientais e sócio-econômico-culturais. No que tange aos fatores sócio-culturais, uma prática crescente no Brasil é a manutenção de espécies silvestres como animais de estimação. Estes podem ter significante papel na disseminação de agentes patogênicos com potencial zoonótico, tal como Chlamydia psittaci, agente etiológico da clamidiose em aves e da psitacose em seres humanos. Os Psittaciformes representam a principal Ordem de aves acometida pela C. psittaci, sendo também a mais comumente mantida como pet. A clamidiose aviária é endêmica no Brasil, contudo, são raros os estudos direcionados a avaliação do seu potencial zoonótico. Em humanos a psitacose pode desencadear um quadro severo de pneumonia atípica, no entanto, devido à dificuldade relacionada ao diagnóstico laboratorial e pelo relativo desconhecimento da doença pelos profissionais de saúde, sua prevalência no país é ainda desconhecida. Dentro desse contexto, o presente trabalho teve como objetivo determinar a ocorrência da C. psittaci em pacientes suspeitos de psitacose atendidos no Ambulatório de doenças tropicais e zoonoses do Instituto de Infectologia Emílio Ribas (IIER); estabelecer o vínculo epidemiológico com aves realizando o diagnóstico nestas, assim como avaliar os fatores de risco relacionados com essa zoonose. Para tanto, amostras de sangue de pacientes com quadros suspeitos de psitacose foram coletadas para a investigação de anticorpos anti-C. psittaci IgA, IgM e IgG. Paralelamente, amostras biológicas de quaisquer espécies de aves relacionadas com os casos suspeitos de psitacose foram coletadas para a pesquisa molecular de C. psittaci. Entre os pacientes elegíveis deste estudo, 27% (10/37) foram classificados como casos confirmados de psitacose; 13,5% (5/37) como prováveis e 59,5% (22/37) como descartados. Pneumonia (p = 0.004), tosse (p = 0.002) e calafrio (p = 0.011) foram estatisticamente significantes quando comparado com os pacientes nos quais a psitacose foi descartada. Quanto ao vínculo epidemiológico com aves, 73% (11/15) dos casos prováveis e confirmados de psitacose relataram exposição domiciliar com aves e em 27% (4/15) a exposição foi ocupacional. Adicionalmente, 47% (7/15) dos pacientes tiveram contato com aves nas quais a infecção por C. psittaci foi comprovada laboratorialmente. Em 47% (7/15) dos casos não foi possível obter material biológico das aves relacionadas com os casos e em 6% (1/15) dos casos C. psittaci não foi detectada nas aves avaliadas. Ainda, os casos prováveis e confirmados de psitacose relataram manter contato próximo com suas aves, como pega-lás na mão (100%, 15/15), mantê-las no ombro (67%, 10/15), beijá-las (40%, 6/15) e dividir alimento com elas (13%, 2/15). Ressalta-se que essas práticas facilitam a transmissão do patógeno. Profissionais da saúde tanto humana quanto animal têm um papel importante a desempenhar na identificação de fatores que afetam a saúde de seus pacientes e devem, portanto, trabalhar juntos. Esforços mútuos contribuiriam no conhecimento de doenças com potencial zoonótico e certamente contribuiriam para medidas mais eficazes de prevenção e controle

Até recentemente acreditava-se que a tuberculose em caprinos fosse uma enfermidade rara, o que levou ao errôneo conceito de que esses animais fossem resistentes ao Mycobacterium bovis. Este trabalho tem por objetivo verificar se houve processo inflamatório da glândula mamária devido a agentes de mastite ou à presença de Mycobacterium, comparar a frequência de isolamento pelo teste de Zielh-Neelsen nas amostras de leite e dos fragmentos de glândula mamária de caprinos tuberculina positivo e verificar lesões encontradas na glândula mamária com frequência semelhante aos isolados pelo teste de Zielh-Neelsen em caprinos tuberculina positivo. Os animais deste experimento foram provenientes de um surto de tuberculose em caprinos ocorrido numa propriedade localizada em Bueno Brandão (Minas Gerais), totalizando 68 animais. Os resultados encontrados foram obtidos através da análise dos testes de Tamis e California Mastitis Test em relação ao exame microbiológico tanto da glândula mamária quanto do leite. Através do isolamento bacteriológico obteve-se 64 (98,46%) amostras para Staphylococcus ssp e apenas 1 (1,54%) para Corynebacterium ssp. Na glândula mamária, dos seis isolamentos obtidos todos eram Staphylococcus ssp. Com os resultados apresentados pelo isolamento microbiológico da glândula mamária concluiu-se que independente da espécie, o Staphylococcus ssp é o agente de maior frequência entre os isolados sendo o maior responsável pela mastite intramamária em caprinos. Das 116 amostras de leite semeadas nos tubos de Stonebrink e Löwenstein-Jensem, foram isolados 5 (4,31%) de amostras de leite positivas ao teste de Zielh-Neelsen. Dos 60 fragmentos de glândula mamária semeados nos meios de Stonebrink e Löwenstein-Jensem, isolou-se apenas um tubo no meio de Stonebrink, perfazendo um frequência de 1 (1,66%) amostra de glândula mamária, o que é um indicativo que seja M. bovis, pois o meio de Stonebrink é um meio de eleição para o seu crescimento, utilizado para isolar o M. bovis. Estes fragmentos de glândula mamária que foram submetidos à análise histopatológica pelas colorações de hematoxilina-eusina e Zielh-Neelsen, apresentaram lesões na glândula mamária de cabras tuberculina positivo, 7 (11, 66%) de achados de lesões causadas por M. bovis na glândula mamária, e 18 (30,00%) processos de reparo. Pela análise histológica dos fragmentos de glândula mamária todos apresentaram processo inflamatório na região intersticial da glândula, sendo um indício de mastite crônica. Concluiu-se que: o processo inflamatório da glândula mamária não estava associado à presença de Staphylococcus ssp, mas ao estágio de secagem dos animais, pelo resultados do teste de Zielh-Neelsen no leite e nos fragmentos de glândula mamária positivos, pode-se utilizar qualquer um dos métodos para verificar a frequência de isolamento de microrganismos em animais tuberculina positivo, a frequência de processo granulomatoso nas glândulas mamárias dos animais estudados foi semelhante estatisticamente, tanto a frequência do testes de Zielh-Neelsen no leite, quanto nos fragmentos de glândula, porém quando se considerou a frequência do processo de reparo comparada com a frequência do teste de Zielh-Neelsen no leite e no fragmento da glândula houve diferença significante, portanto a frequência de processo na glândula mamária de animais tuberculina positivo é superior a frequência do teste de Zielh-Neelsen no leite e na glândula mamária. / Until recently it was believed that caprine tuberculosis was a rare infirmity leading to the wrong agreement that these animals were resistant to Mycobacterium bovis. This study aims to: verify if there was inflammatory process of the mammary gland caused by mastitis agents or the presence of Mycobacterium; compare the frequency of isolation by the Zielh-Neelsen\'s test in the milk samples and fragments of caprine mammary gland tuberculin positive, verify if the lesions found in the mammary gland present similar frequency to the ones isolated by the Zielh-Neelsen´s test in tuberculin positive caprine. The animals used in this experiment came from an outbreak of tuberculosis in caprine that occurred in a property located at the city of Bueno Brandão (Minas Gerais), totalizing 68 animals affected. The results were obtained through the analysis of the Tamis and California Mastitis Tests in relation to the microbiologic exam of, both, mammary gland and milk. By the bacteriological isolation it was obtained 64 (98,46%) samples for Staphylococcus ssp and only 1 (1,54%) for Corynebacterium sp. Of the 64 (98,46%) identified milk samples, from the genus Staphylococcus ssp.. In the mammary gland, of the 6 isolations obtained all were Staphylococcus ssp.. With the results shown by the microbiological isolation of the mammary gland, it is possible to conclude that, independently of the species, the Staphylococcus ssp is the agent of greater frequency among those which were isolated, being the major responsible for the caprine intramammary mastitis. Of the 116 milk samples cultured in the Stonebrink and Löwenstein-Jensem tubes, were isolated 5 (4,31%) milk Zielh-Neelsen positive samples. Of 60 mammary gland fragmentes cultured, in total, in the Stonebrink and Löwenstein-Jensem media, it was isolated only 1 tube in the Stonebrink medium, accomplishing a frequency of 1 (1,66%) samples of mammary gland, which indicates that it was M. bovis. This conclusion was possible because the Stonebrink medium is a way of selection to its growth, used to isolate the M. bovis. Of the 60 mammary gland fragments which were submitted to the histopathological analysis by the coloration of hematoyilin-eosin and Zielh-Neelsen and that showed mammary gland lesions of caprine tuberculin positive, 7 (11,66%) of the lesions were caused by M. bovis in the mammary gland, and 18 (30,00%) underwent repair process. By the histological analysis of the 60 mammary gland fragments, all presented inflammatory process in the interstitial region of the gland, which indicates cronic mastitis. Of 30 lung fragments, in total, sent to the histopathological diagnostic, it were submitted to hematoxylin-eosin (HE) and Zielh-Neelsen (ZN) colorations, 4 (13,33%) lesions typical tuberculosis lesions. From the results shown above, it is possible to conclude that: the inflammatory process of the mammary gland was not associated to the presence of Staphylococcus ssp (predominant microorganism of the positive culture) but in fact to the drying stage of the animals; from the results of the ZN test in the milk and positive mammary gland fragments, it is possible to use any of the methods to verify the isolation frequency of microorganism turberculin positive animals; the frequency of granulomatosus process in the mammary gland of the studied animals were statistically similar, in ZN tests frenquency in milk as much as the ZN tests\' in the gland fragments, however when considering the frequency of repair with the frequency of the ZN tests in the milk and in the gland fragments there was significant differences, and so, the process frequency in the mammary gland of tuberculin positive animals is greater than the frequency of the ZN tests in the milk and in the mammary gland.

Made available in DSpace on 2016-01-26T12:51:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 eleniralvesmachadogodoy_tese.pdf: 3122950 bytes, checksum: 6689a740cf3688e175794a873791beb4 (MD5) Previous issue date: 2012-05-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Introduction: Giardia duodenalis is the protozoan frequently found in the intestinal infection causing gastroenteritis worldwide. The G. duodenalis is complex specie with at least seven different assemblages. The A and B assemblages have been associated with infections in human as well as in other mammals, while the other assemblages have demonstrated to prefer different animal species. Genotypes C and D was include isolated of dogs; E is related to production animals, such as, goats, pigs, sheeps and bovines and genotypes F and G are exclusive of domestic felines and rats, respectively. Molecular studies had also disclosed that the genotype presents two sub-groups; A-I and A-II and B; BIII and BIV. Objective: The present study objectified to study domestic, the epidemiology of the G. intestinalis genotypes in human beings, canines, domestic felines, ovines, bovines and caprines, specifically in relation to the standards of transmission in the Northwestern region of the São Paulo State, Brazil, and to evaluate the hypothesis of zoonotic infection. Methods: During the period of July 2009 to October 2010 they had been studied fecal samples of 61 animals and 154 human beings proceeding from the city of Araçatuba, State of São Paulo. The feaces samples of the animals had been gotten in the Control center of Zoonoses of the city and in the Veterinarian Hospital of Universidade Estadual Paulista Julio de Mesquita Filho . The human fecals specimens had been collected in day-care centers in the periphery of the city and laboratories of Clinical Analysis of the private net of the city. The parasitologic diagnosis was made by optic microscopy, by the techniques of Faust and Hoffmann, Pons & Janer. The genotypes of G. intestinalis had been characterized by PCR-RFLP and confirmed by sequencing analysis of the ß-giardin gene. Results: The human beings samples had shown a positivity of 25.3% (39/154), of these, the percentage in children was of 26.8% (36/134), and in adults got 15% of positive samples (3/20). The frequency of G. intestinalis between the studied animals was of 23% (14/61). A total of 32 isolated of G. intestinalis obtained from human beings feces and 6 of the dogs and cats had been characteristic only of the genotype A (AI and AII/AIII). Conclusions: Regarding the Giardíase frequency, our results are similar to the majority of described percentages in children and adults from São Paulo State and other States of Brazil. The prevalence observed in the animal population is in accordance with the described worldwide. The present study was made possible the detention of the considered genotypes zoonotics of G. intestinalis, circulating between the domestic and human animals of the city of Araçatuba, inferring the possibility of zoonotic transmission of the parasite in the northwest region of the State of São Paulo. The absence of these genotypes in production animals offers the perspective that those are not involved in the chain of transmission to the man in the same locality. / Introdução: Giardia intestinalis tem sido associada a episódios diarréicos em inquéritos epidemiológicos. Pesquisas moleculares evidenciaram que G. intestinalis apresenta sete genótipos: A, B, C, D, E, F e G. Somente os genótipos A e B foram detectados em humanos, mas também em outros hospedeiros mamíferos, sendo considerados, portanto zoonóticos. Genótipos C e D incluem isolados de cães; E é relacionado a animais de produção; porcos, ovelhas, bovinos e caprinos e os genótipos F e G são exclusivos de felinos domésticos e ratos, respectivamente. Estudos moleculares também revelaram que o genótipo A apresenta dois subgrupos; A-I e A-II e B; BIII e BIV. Objetivo: O presente trabalho objetivou estudar a distribuição dos genótipos de G. intestinalis em humanos, caninos, felinos domésticos, ovinos, bovinos e caprinos, especificamente em relação aos padrões de transmissão no noroeste do Estado de São Paulo, Brasil, e avaliar a hipótese de infecção zoonótica. Métodos: No período de julho de 2009 a outubro de 2010 foram estudadas amostras fecais de 61 animais e 154 humanos provenientes do município de Araçatuba, Estado de São Paulo. As amostras de fezes dos animais foram obtidas no Centro de Controle de Zoonoses do município e no Hospital Veterinárío da Universidade Estadual Paulista Julio de Mesquita Filho . Os espécimes fecais humanos foram coletados em creches na periferia da cidade e em laboratórios de Análises Clínicas da rede privada do município. O diagnóstico parasitológico foi feito por microscopia óptica, pelas técnicas de Faust e Hoffmann, Pons & Janer. Os genótipos de G. intestinalis foram caracterizados por PCR-RFLP e confirmado por seqüenciamento do gene ß-giardina. Resultados: As amostras humanas mostraram uma positividade de 25.3% (39/154), destas, a percentagem em crianças foi de 26.8% (36/134), já em adultos obteve-se 15% de amostras positivas (3/20). A frequência de G. intestinalis entre os animais estudados foi de 23% (14/61). Um total de 32 isolados de G. intestinalis obtidos a partir de fezes humanas e seis de cães e gatos foram característicos apenas do genótipo A (AI e AII/AIII). Conclusão: Com relação à frequencia da Giardíase, nossos resultados são semelhantes à maioria das porcentagens descritas em crianças e adultos do Estado de São Paulo e de outros Estados do Brasil. A prevalência observada na população animal está de acordo com as taxas de infecção mundiais descritas. Foram detectados genótipos considerados zoonóticos de G. intestinalis, circulando entre os animais domésticos e humanos da cidade de Araçatuba, inferindo a possibilidade de transmissão zoonótica do parasito na região noroeste do Estado de São Paulo. A ausência destes genótipos em animais de produção oferece a perspectiva de que os mesmos não estão envolvidos na cadeia de transmissão ao homem na mesma localidade.

O vírus da hepatite E (HEV) é um patógeno emergente de distribuição global, causador de hepatite aguda e crônica em humanos e infecções assintomáticas em animais. No Brasil a prevalência de infecção por HEV em humanos e animais ainda é pouco compreendida, assim como as características de virulência, patogenicidade e de infecção inter-espécies de isolados do genótipo 3, zoonótico, circulantes no país também são desconhecidas. O estudo foi dividido em duas etapas, com os objetivos de 1) contribuir no diagnóstico laboratorial molecular do HEV a partir do desenvolvimento de um protocolo de RT-PCR em tempo real (RT-qPCR) para pesquisa do HEV em amostras biológicas, e 2) contribuir com a compreensão das características moleculares, sorológicas, clínico-laboratoriais, ultrassonográficas e histopatológicas associadas à infecção experimental em macacos-da-noite (Aotus azarai infulatus) por um isolado do genótipo 3 suíno do HEV previamente detectado na Amazônia oriental brasileira. O protocolo de RT-qPCR foi desenvolvido com a caracterização da curva de detecção e aplicado em concomitância com testes sorológicos para avaliação diagnóstica restrospectiva de 318 (n = 318) amostras de soros humanos suspeitos de hepatite E. O HEV-RNA não foi detectado em nenhuma das amostras humanas testadas, mas foi determinada soroprevalência de 3,4% e 5,9% de anti-HEV IgM e IgG, respectivamente, o que indicou baixa prevalência de infecção por HEV, mesmo entre pacientes com suspeita clínica e/ou laboratorial de hepatite E na Amazônia brasileira. O estudo experimental em macacos-da-noite foi desenvolvido durante 12 semanas e os animais infectados, por via intravenosa (n=3) e oral (n=3) (e dois controles), foram avaliados semanalmente para determinação dos parâmetros clínicos, bioquímicos, hematológicos, sorológicos (pesquisa de anti-HEV IgM e IgG por enzimaimunoensaio) e moleculares (HEV-RNA soro e fezes por RT-qPCR). Adicionalmente, os animais também foram submetidos a avaliação hepática mensal por ultrassonografia, histopatologia e pesquisa hepática de antígenos do HEV por imunohistoquímica. Os seis macacos-da-noite infectados apresentaram o HEV-RNA em amostras de soro e/ou fezes, e alguns apresentaram evidências de soroconversão, detecção hepática do antígeno viral por imunohistoquímica associada a alterações clínicas e laboratoriais de hepatite aguda oligossintomática. Assim, o protocolo RT-qPCR demonstrou ser aplicável na pesquisa molecular do HEV em amostras de humanos e animais, representando uma importante ferramenta de diagnóstico laboratorial. O estudo experimental permitiu a primeira validação de um primata neotropical como modelo experimental para estudos de infecção com o genótipo 3 do HEV. / Hepatitis E virus (HEV) is an emerging pathogen with global distribution that causes acute and chronic hepatitis in humans and asymptomatic infections in animals. In Brazil, the prevalence of HEV infection in humans and animals is still poorly understood, and the characteristics of virulence, pathogenicity and inter-species infection of the genotype 3 isolates circulating in the country are unknown. The study was divided in two stages that aimed to 1) contribute to the molecular diagnosis of HEV infection by the development of a real-time RT-PCR protocol (RT-qPCR) for HEV-RNA research in biological samples, and 2) to contribute to understanding of molecular, serological, clinical-laboratory, ultrasonographic and histopathological features of HEV genotype 3 in owl monkeys (Aotus azari infulatus) experimental infected with isolate of swine HEV genotype 3 previously detected in the Eastern Brazilian Amazon. The RT-qPCR protocol was developed with characterization of a quantification standard curve and later applied concurrently with serological tests in the retrospective evaluation of 318 (n = 318) human serum samples of hepatitis E suspected cases. HEV-RNA was not detected in any of human tested samples, but seroprevalence of 3.4% and 5.9% was determined for anti-HEV IgM and IgG, respectively, that indicated a low prevalence of HEV infection, even among patients with clinical and/or laboratory suspicion of hepatitis E in the Brazilian Amazon. The experimental study in owl monkeys was developed during12 weeks and the animals were infected by intravenous (n = 3) and oral (n = 3) routes (and two negative controls) were evaluated for determination of clinical, biochemical, hematological, serological (anti-HEV IgM and IgG by enzyme immunoassay) and molecular (HEV-RNA serum and stool by RT-qPCR) parameters weekly. Additionally, the animals were also evaluated by hepatic ultrasonography, histopathology and immunohistochemistry research of HEV antigens in liver monthly. The six infected owl monkeys presentend HEV-RNA in serum and/or stool, and some monkeys presented with evidence of seroconversion, liver detection of HEV antigens by immunohistochemistry associated with clinical and/or laboratory findings of oligosymptomatic acute hepatitis. Thus, the RT-qPCR protocol demonstrated to be applicable in the molecular investigation of HEV infection in human and animal samples, and it also represented an important laboratory diagnostic tool. The experimental study allowed the validation of the first neotropical primate model for HEV genotype 3 infection studies.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:18:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008 - Renata Vitoria Campos Costa.pdf: 1895440 bytes, checksum: a7d7c26a7f184a241826971db909015b (MD5) Previous issue date: 2008-10-29 / In the South of Rio de Janeiro State, Brazil, numerous outbreaks of poxvirus infection in cattle and humans are described. Clinical, epidemiological and pathological aspects are presented and discussed. Serum neutralization, ultramicroscopy, viral isolation and PCR showed poxvirus strains very close to those employed in preparation of the human variola vaccines made in Rio de Janeiro State at 60/70 s. The disease is a zoonosis and causes important economic losses due to decrease of milk production and temporary incapacitation of milkmen. / Neste estudo descrevem-se surtos de infec??o por um v?rus do grupo pox em bovinos e humanos ocorridos entre maio de 2006 a outubro de 2007, nos munic?pios de Pira?, Barra do Pira?, Rio das Flores, Resende, Rio Claro e Valen?a, no Estado do Rio de Janeiro. S?o apresentadas, detalhadamente, as caracter?sticas cl?nicas, epidemiol?gicas e patol?gicas dessa enfermidade. Exames de soroneutraliza??o, visualiza??o pelo microsc?pio eletr?nico, isolamento viral e identifica??o molecular atrav?s da PCR (Rea??o em cadeia de polimerase), demonstraram tratar-se de uma cepa molecularmente muito pr?xima ?s amostras do Vaccinia v?rus (Orthopoxvirus) que foram utilizadas no preparo de vacinas durante as campanhas de erradica??o da var?ola humana, nas d?cadas de 60 e 70. Trata-se de uma importante zoonose adquirida por ordenhadores que t?m contato direto com tetas e ?beres de vacas infectadas durante a ordenha, e que cursa com consider?veis perdas econ?micas, principalmente devidas ? redu??o na produ??o de leite no animal e incapacita??o tempor?ria dos ordenhadores.

Submitted by Sandro Camargo (sandro.camargo@unipampa.edu.br) on 2015-03-08T18:38:21Z No. of bitstreams: 1 117110031.pdf: 1697065 bytes, checksum: 988fb2b0e3a730eaccfd605f9a8beb51 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-08T18:38:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 117110031.pdf: 1697065 bytes, checksum: 988fb2b0e3a730eaccfd605f9a8beb51 (MD5) Previous issue date: 2013-07-19 / A leishmaniose visceral (LV) é uma zoonose parasitária com distribuição cosmopolita, causada pelo protozoário Leishmania spp. Diversos sistemas orgânicos podem ser afetados diretamente ou indiretamente pelo parasitismo, resultando em aspectos clínicos variáveis e inespecíficos em cães. Relatos isolados com indícios histológicos de acometimento miocárdico em cães com LV sugerem comprometimento deste sistema. Desta forma, objetivou-se com o presente estudo, avaliar os aspectos clínicos e histopatológicos do miocárdio de cães naturalmente infectados com leishmaniose visceral. Para tanto, as características físicas gerais, hematimétricas, bioquímicas (creatinina quinase-CK, fração MB da creatina quinase-CK-MB- e troponina I), radiográficas do tórax, eletrocardiográficas e histopatológicas do miocárdio foram avaliadas em 36 cães portadores de LV (grupo LV - GLV) e comparadas às variáveis médias de 15 cães hígidos (grupo controle- GC), com exceção da avaliação histopatológica, realizada apenas no GLV. Ao exame físico geral observou-se maior prevalência de cães assintomáticos no GC (100%) e polissintomáticos no GLV (66%). Dois cães do GLV apresentaram sopro sistólico de intensidade II/VI e III/VI, em região de foco mitral. Os valores médios de hemácia, hemoglobina e hematócrito foram inferiores nos cães do GLV (p<0,0001), associados a maiores valores de proteína total (p<0,0001), leucócitos totais (p=0,0151), neutrófilos (p=0,0027), CK (p=0,0153) e CK-MB (p=0,0038) quando comparado ao GC. Não foram observadas alterações radiográficas qualitativas ou diferenças quantitativas entre os grupos avaliados (p=0,1228). À eletrocardiografia foi detectada maior incidência de arritmia sinusal respiratória nos cães do GLV (75%) e ritmo sinusal nos cães do GC (60%), atestado pelo teste das proporções (p=0,016). A amplitude média da onda P foi inferior no GLV (p=0,008). Não foram observadas arritmias cardíacas em ambos os grupos, porém foi verificada no GLV a presença de episódios isolados de marcapasso migratório e sinus arrest associados à arritmia sinusal respiratória. A luz da histopatologia do miocárdio foi possível observar a presença de infiltrado inflamatório mononuclear em 77,8% (n=28) dos cães do GLV, sendo a maior prevalência de infiltrado linfoistioplasmocitário de intensidade leve. Conclui-se que os cães com LV do presente estudo apresentaram maior prevalência de aspectos clínicos polissintomáticos, associados à anemia normocítica normocrômica, acompanhada de leucocitose por neutrofilia e hiperproteinemia, elevação da atividade sérica de CK e CK-MB, sem alterações significativas da silhueta cardíaca à radiografia, maior prevalência de arritmia sinusal respiratória com episódios de marcapasso migratório e sinus arrest, relacionados à presença de infiltrado inflamatório mononuclear multifocal leve à histopatologia do miocárdio, com baixa incidência de vasculite necrosante e rara detecção de formas amastigotas da Leishmania sp. / Visceral leishmaniasis (VL) is a worldwide parasite zoonotic, caused by a protozoa Leishmania spp. Several organic systems may be affected directly or indirectly by the parasitism, resulting in variable and unspecific clinical signs in dogs. Myocardial damage in affected dogs is suggested by isolated reports with histological evidences of myocarditis. Therefore, the aim of this study was evaluate the clinical and myocardial histopathologic features of naturally infected dogs with VL. Therefore, general physical characteristics, hematological, biochemical (creatine kinase- CK, MB fraction of creatine kinase and troponin-I) radiographic of the thorax, electrocardiographic and histopathological myocardial were evaluated in 36 dogs with VL (VL group- VLG) and average variables compared to 15 healthy dogs (control group-CG), except for the histopathological evaluation. In the general physical examination was observed higher prevalence of asymptomatic dogs in the control group (100%) and polisymptomatic in GLV (66%). Two dogs of the GLV presented systolic murmur of intensity II / VI and III / VI, in the region of the mitral valve. The mean values of erythrocyte count, haemoglobin and haematocrit were lower in dogs GLV (p <0.0001), associated with higher total protein (p <0.0001), total leukocyte count (p = 0.0151), neutrophils (p = 0.0027), CK (p = 0.0153) and CK-MB (p = 0.0038) when compared to CG. Radiographic evaluation reveal no alterations or differences between groups (p = 0.1228). In the electrocardiography analysis, higher incidence of respiratory sinus arrhythmia with wandering pacemaker and sinus arrest in dogs of GLV (75%) and sinus rhythm in the CG (60%) was attested by the proportions test (p = 0.016). The mean P wave amplitude was lower in GLV (p = 0.008). Cardiac arrhythmias were not present in both groups, but sinus arrest was present in GLV. The histopathology of the myocardium displayed mononuclear cellinfiltration in 77.8% (n = 28) of the GLV dogs, with higher prevalence of mild lymphohistioplasmocytic inflammatory infiltrate. We conclude that enrolled dogs with LV presented aspect of polisymptomatic clinical features, associated with normochromic normocytic anemia, followed by leukocytosis, neutrophilia, hyperproteinemia, elevation of serum activity of CK and CK-MB, without significant changes of the cardiac silhouette in the radiography or heart rhythm by electrocardiogram, related to the presence of multifocal mild intensity mononuclear cell infiltration in the myocardial, with low incidence of necrotizing vasculitis and rare detection of amastigotes forms of Leishmania sp. on myocardium histopatology.