Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-04-24T13:33:47Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-04-24T13:34:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-04-24T13:34:23Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T13:34:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Previous issue date: 2016-05-31 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Studies on biodiversity has great importance to the rational use of natural resources, especially in mega-diverse regions such as the Amazonia. The study of fungal diversity Agaricomycetes is important to contribute with the knowledge of the diversity of them in the state of Amazon and introduce new records to the region. The relevance of this research is to contribute to the knowledge about biodiversity and the prospect of bioactive products, identifying fungi Agaricomycetes wood-degrading potential insecticide against larvae of mosquito of dengue virus, chikungunya and zika the Aedes aegypti. The methodology used for classical taxonomic identification was performed through analysis of macro-and microscopically, basidiomatas from the collections held in 12 municipalities of the state of Amazon (Autazes; Anamã; Careiro da várzea; Coari; Babu; Borba; Novo Aripuanã; Nova Olinda do Norte; Manaus; Manicoré; Parintins and Presidente Figueiredo) in the period from January to March 2013 and from January to May 2014. In that sense, it was possible to expand knowledge about the diversity of the Agaricomycetes. 323 specimens were collected, 263 of them were identified, represented by 40 genera, 76 species, classified into 15 families and 4 orders of Agaricomycetes. The healthy basidiocarps were recovered, of which 43 were pure cultures. These were used for the production of extracts, molecular identification and identification by MALDI-TOF. Molecular identification was through the sequencing of the Its regions 1 and 2 of the rDNA, and by MALDI TOF mass spectrometry. Molecular identification analyses were performed by comparison of the sequences deposited in GenBank. The result of the molecular sequencing allowed an alignment with the nucleotide sequences that matches the identification of fungi as being of the group, the Agaricomycetes similarity above 96 %. In MALDI TOF only 26 specimens were possible be submitted to IC/MALDI TOF MS analysis. Spectral data were obtained with peak patterns (ions) exclusive to fungi with similarity of protein mixtures, which refers to the percentage of identity for the amount of identical values. Larvicidal activity performed effectively, six fungi showed bioactive compounds with lethal capability against larvae of third stage of A. aegypti. The extract of P. sanguineus, presented mortality of probit to 5.3 larvae of A. aegypti, which gives this fungus, a potential entomopatogênico quite expressive. The other extracts were not possible being necessary for analysis, evaluation and increased sample number. / Os estudos sobre a biodiversidade são de suma importância para a utilização racional dos recursos naturais, principalmente em regiões mega-diversas, como a Amazônia. O estudo da diversidade de fungos Agaricomycetes é importante para contribuir com o conhecimento sobre a diversidade destes no Estado do Amazonas e apresentar novos registros para a região. A relevância dessa pesquisa está em contribuir para o conhecimento da biodiversidade e da prospecção de produtos bioativos, identificando fungos Agaricomycetes degradadores de madeira com potencial inseticida contra larvas do mosquito transmissor do vírus da dengue, chikungunya e zika o Aedes aegypti. A metodologia utilizada para identificação taxonômica clássica foi realizada através de análises dos basidiomas macro e microscopicamente, A partir das coletas realizadas em 12 municípios do Estado do Amazonas (Autazes; Anamã; Careiro da várzea; Coari; Barcelos; Borba; Novo Aripuanã; Nova Olinda do Norte; Manaus; Manicoré; Parintins e Presidente Figueiredo) no período de janeiro a março de 2013 e de janeiro a maio de 2014. Nesse sentido, foi possível expandir o conhecimento sobre a diversidade de Agaricomycetes na região. Foram coletados 323 espécimes, destes foram identificados 263, representados por 40 gêneros, 76 espécies, classificadas em 15 famílias e 4 ordens de Agaricomycetes. Os basidiocarpos saudáveis foram isolados, dos quais foram obtidas 43 culturas puras. Estes foram utilizados na produção de extratos, identificação molecular e identificação por MALDI- TOF. A identificação molecular foi através do sequenciamento das regiões Its 1 e 2 do rDNA, e pela técnica de MALDI TOF Espectrometria de Massa. As análises da identificação molecular foram realizadas por comparação das sequências depositadas no GenBank. O resultado do sequenciamento molecular permitiu um alinhamento com as sequências nucleotídicas que corresponde a identificação dos fungos como sendo do grupo Agaricomycetes, com taxa de similaridade acima de 96 %. Na técnica de MALDI TOF apenas 26 espécimes foram possíveis ser submetidas à análise IC /MALDI TOF MS. Foram obtidos dados espectrais com padrões de pico (íons) exclusivo para os fungos com similaridade das misturas de proteínas, o que refere-se a porcentagem de identidade para a quantidade de valores idênticos em massa. A atividade larvicida apresentou-se eficaz, seis fungos apresentaram substâncias bioativas com potencialidade letal contra larvas de 3º estádio de A. aegypti. O extrato de P. sanguineus, apresentou mortalidade de 5,3 probit para larvas de A. aegypti, o que confere a este fungo, um potencial entomopatogênico bastante expressivo. Os demais extratos não foram possíveis de análise sendo necessário para avaliação, e aumento do número amostral.

Orientador : Yuri Dimitrov Bozhkov / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Matematica Estatistica e Computação Cientifica / Made available in DSpace on 2018-08-03T22:37:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maidana_NorbertoAnibal_D.pdf: 2126127 bytes, checksum: 48ca33a840223ab2f9cb278dcf6afbd2 (MD5) Previous issue date: 2004 / Doutorado / Doutor em Matemática

Made available in DSpace on 2014-06-12T22:57:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4113_1.pdf: 3760040 bytes, checksum: 9adabc8d39b2956ad15f24da4b954ccb (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Neste trabalho é descrita a síntese do 6-heptin-2-ol, um precursor importante na síntese de diversos produtos naturais com atividade biológica como as macrolactinas, os leucotrienos, a diplodialida A e a mutolida. Duas estratégias sintéticas foram utilizadas; a primeira foi baseada no rearranjo de Eschenmosher e levou à cetona correspondente do fragmento desejado em duas etapas, mas em baixo rendimento global. A segunda estratégia foi baseada na síntese de um alquino análogo seguido da reação de migração prototrópica para levar ao composto desejado também em duas etapas reacionais, com 52% de rendimento global. O composto obtido foi então submetido a um estudo da reação de resolução enzimática utilizando para isso duas enzimas, sendo a CAL-B a que mostrou melhores resultados, levando ao composto desejado em 99% de excesso enantiomérico. O fragmento obtido foi então aplicado na síntese do Nostrenol, um feromônio de comunicação isolado de Euroleon nostras e Grocus bore. Esta estratégia foi baseada na reação de hidroteluração. Entretanto, o telureto desejado foi obtido com baixa regiosseletividade e rendimento mesmo quando diferentes condições foram utilizadas. Em uma segunda etapa deste trabalho, foram sintetizadas cinco - lactonas -insaturadas, unidades presentes em diversos produtos naturais com atividade antitumoral e citotóxica, a partir de reações que envolveram um telureto vinílico como precursor. As lactonas foram obtidas em bons rendimentos globais e então submetidas ao estudo da atividade contra larvas do Aedes aegypti, principal vetor do vírus da febre amarela urbana e da dengue no Brasil e no mundo, sendo uma das lactonas bastante ativa uma vez que apresentou valores de CI50 = 36,30 μg/mL

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:00:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6563_1.pdf: 3242142 bytes, checksum: 58bdafad5cb2835b4c74e6e3cf35b19a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Nesta dissertação, duas séries de compostos, uma contendo um anel 1,2,4- oxadiazol e outra contendo um anel isoxazol, foram sintetizadas. Em ambos os casos, foram feitas modificações na cadeia lateral em C-5, com o objetivo de avaliar a sua atividade larvicida. Em um primeiro momento, foram preparados ácidos 3-[3-(aril) - 1,2,4-oxadiazol-5-il] propiônicos que, mais tarde, foram transformados em seus ésteres metílicos. Posteriormente foram sintetizados os compostos contendo o anel isoxazol através de cicloadição 1,3-dipolar entre óxidos de arilnitrilas e alcinos terminais, o que forneceu os produtos desejados com rendimentos que variaram de 19% a 79%. Um estudo comparativo da atividade larvicida entre os ácidos 3-[3-(aril)-1,2,4- oxadiazol-5-il] propiônicos e seus respectivos ésteres metílicos também foram feitas no presente trabalho. Os testes revelaram que os ésteres possuem atividade muito melhor do que seus ácidos antecessores. Entre os ésteres, o 3-[3-(3,4-diclorofenil)-1,2,4- oxadiazol-5-il] propanoato de metila exibiu a melhor atividade. Uma comparação similar entre os ácidos 3-[3-(fenil)] e [4-(clorofenil)-isoxazol-5-il] propiônicos e seus ésteres metílicos demonstrou claramente que estes últimos possuem atividade larvicida muito melhor do que seus ácidos. Fortes indícios mostram que os compostos sintetizados podem atuar de fato na via das quinureninas. Além dos estudos de docking molecular realizados em trabalhos anteriores, a quantificação dos metabólitos via CLAE mostrou que as substâncias geram um acúmulo da 3-HK no organismo dos insetos

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:13:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4273_1.pdf: 5014039 bytes, checksum: 54de8005c25439f9b137906d5b8478ca (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Sabe-se que algumas árvores, como a aroeira-do-sertão, Myracrodruon urundeuva, apresentam madeira que não é atacada por agentes biodeterioradores. O conhecimento da resistência natural da madeira é importante na recomendação de sua utilização, para evitar gastos com a reposição de peças deterioradas e reduzir os impactos sobre as florestas remanescentes. Os extrativos de madeiras são conhecidos por aumentar a durabilidade e sugere-se que compostos com atividades antioxidante, antimicrobiana e inseticida também protegem o cerne. Dentre os componentes do metabolismo primário das plantas, algumas proteínas têm sido relacionadas a mecanismos de defesa, como as lectinas, proteínas que se ligam a carboidratos. Os objetivos desse trabalho foram (A) analisar fitoquimicamente e avaliar a propriedade antioxidante de preparações do cerne de M. urundeuva e (B) isolar, caracterizar parcialmente e avaliar potencial biotecnológico e atividades biológicas de uma lectina isolada do cerne. Pó do cerne de M. urundeuva foi utilizado na preparação dos extratos metanólico (EM) e salino NaCl 0,15 M (ES; 10%, p/v). Os extratos foram avaliados quanto à presença de extrativos e metabólitos secundários e quanto à capacidade de capturar radicais livres (atividade antioxidante). A presença de lectinas em ES foi detectada através do ensaio de atividade hemaglutinante (AH). As proteínas presentes em ES foram precipitadas com sulfato de amônio. A fração 40-60% (F1), de maior AH específica (AHE), foi avaliada quanto à presença de metabólitos secundários e atividade antioxidante. AH de F1 foi avaliada em presença de carboidratos e glicoproteínas. F1 foi aplicada em coluna de quitina (polímero de N-acetil-glicosamina, GlcNAc) equilibrada com NaCl 0,15M. O pico protéico ativo eluído com ácido acético 1,0 M foi definido como a lectina de cerne de M. urundeuva (MuHL). A afinidade da lectina por GlcNAc foi também avaliada através da eluição da coluna de quitina com solução de GlcNAc 0,1 M e por cromatografia de F1 em coluna desse monossacarídeo imobilizado em agarose. A massa molecular nativa de MuHL foi obtida através de cromatografia de exclusão molecular em coluna Hiprep 16/60 Sephacryl S-300/Äkta-FPLC. MuHL foi analisada em eletroforese em gel de poliacrilamida para proteínas nativas básicas ou ácidas e em condições desnaturantes e redutoras (SDS-PAGE). MuHL também foi avaliada quanto à natureza glicoprotéica. A AH de MuHL em presença de íons, a estabilidade térmica da lectina e o efeito do pH sobre a AH foram avaliados. MuHL foi imobilizada em Sepharose CL-4B, para ser utilizada no isolamento de glicoproteínas, e conjugada à peroxidase para utilização como marcador histoquímico de tecidos de próstata (normal, hiperplasia benigna e carcinoma) e do hipocampo de pacientes com Mal de Alzheimer. Atividade antibacteriana de MuHL foi avaliada frente a bactérias Gram-positivas (Bacillus subtilis, Corynebacterium callunae, Staphylococcus aureus e Streptococcus faecalis) e Gram-negativas (Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae e Pseudomonas aeruginosa). As concentrações mínimas inibitória (CMI), bactericida (CMB) e aglutinante (CMA) foram determinadas. Atividade antifúngica contra Fusarium (F. solani, F. oxysporum, F. moniliforme, F. decemcellulare, F. lateritium, F. fusarioides e F. verticiloides) e atividades inseticida e repelente contra cupins Nasutitermes corniger de MuHL foram avaliadas. A concentração que mata 50% dos insetos (CL50) foi determinada. MuHL também foi avaliada quanto à atividade larvicida contra larvas no quarto estágio (L4) de Aedes aegypti e as CL16, CL50 e CL84 foram calculadas. ES e EM apresentaram flavonóides, proantocianidinas condensadas e leucoantocianidinas. Ação antioxidante de EM e ES foi evidenciada pela capacidade dos extratos de captar 8 radicais livres DPPH. A quantidade de radicais que reagiu com EM e ES foi bastante elevada (91,1% e 84,5,%, respectivamente), enquanto que com F1 foi muito baixa (11,2%). ES, F1 e MuHL aglutinaram eritrócitos de todos os tipos sangüíneos do sistema ABO, assim como eritrócitos de coelho. A AH de F1 foi inibida parcialmente por GlcNAc (estimulando a purificação da lectina por cromatografia de afinidade em coluna de quitina) e pelas glicoproteínas fetuína, ovoalbumina, tiroglobulina e azocazeína. A avaliação fitoquímica de F1 demonstrou somente resquícios de leucoantocianidinas. MuHL, recuperada da cromatografia em coluna de quitina com AHE de 2.560, foi inibida por N-acetil-glicosamina. Eluição com solução de GlcNAc também resultou em recuperação da AH e a lectina também adsorveu à matriz Agarose-GlcNAc. MuHL se apresentou como uma glicoproteína básica constituída de um único polipeptídeo de aproximadamente 14,4 kDa (em SDS-PAGE). O perfil cromatográfico de MuHL na cromatografia de exclusão molecular revelou um pico principal de 21 kDa. Ensaios indicaram que a lectina é termoresistente (30-100 ºC) e sensível à variação de pH, apresentando maior AH em pH 5,5. A AH de MuHL, após diálise contra o agente quelante EDTA, foi estimulada por Ca+2, Mg+2 e Mn+2. A matriz MuHL-Sepharose foi capaz de reter as glicoproteínas comerciais fetuína, tireoglobulina e ovoalbumina, assim como glicoproteínas presentes no homogenato da tireóide de porco, soro fetal bovino e extrato da clara de ovo. MuHL marcou de forma intensa e homogênea a membrana das células de tecidos de hiperplasia benigna prostática e hipocampo de pacientes com o Mal de Alzheimer. A inibição por GlcNAc e a capacidade de se ligar à quitina estimularam a avaliação das propriedades antimicrobiana e inseticida da lectina. MuHL apresentou atividade antifúngica após 72 horas contra todas as espécies de Fusarium. ES, F1 e MuHL apresentaram efeito antibacteriano sobre todas as bactérias testadas. A maior ação inibitória de MuHL foi para S. aureus (CMI: 0,58 μg/mL; CMB: 8,1 μg/mL). MuHL também aglutinou todas as bactérias, sendo S. aureus a espécie mais sensível (CMA: 2.34 μg/mL). O contato com MuHL em todas as concentrações testadas induziu 100% de mortalidade dos operários e soldados. Os valores de CL50 após 4 dias foram de 0,248 mg/mL para os operários e 0,199 mg/mL para os soldados. MuHL não apresentou efeito repelente. A lectina também apresentou atividade larvicida sobre A. aegypti. Os valores de CL16, CL50 e CL84 foram de 0,03, 0,04 e 0,05 mg/ml. O estudo revelou a presença de compostos com potente atividade antioxidante e contribuiu para a construção de um painel sobre lectinas de plantas ao caracterizar a lectina isolada. A lectina de M. urundeuva é o primeiro peptídio bioativo encontrado em um cerne e em um tecido de uma madeira-de-lei. Por suas propriedades antimicrobiana e inseticida, MuHL é, provavelmente, um dos componentes da barreira química que confere a elevada resistência da madeira da aroeira-do-sertão à biodegradação. MuHL também é a primeira lectina com atividade inseticida descrita para cupins e A. aegypti. Em resumo, o trabalho ressalta a importância do estudo das propriedades dessa planta, ameaçada de extinção, tanto para o entendimento da fisiologia das plantas resistentes quanto como uma potencial fonte de lectina que pode ser explorada do ponto de vista biotecnológico

Compreender a fisiologia reprodutiva de Aedes aegypti, vetor primário do vírus dengue, é uma etapa básica para o desenvolvimento de novos métodos de controle. Baseado nesta premissa, estudos de expressão gênica durante o ciclo gonotrófico de Aedes aegypti foram realizados neste trabalho e foram identificados 3 genes com expressão elevada nos ovários na fase de término do período vitelogênico, 48 horas após o repasto. Interessantemente, foi mostrado que o gene AAEL01714, anotado in silico como codificante para uma proteína ligadora de odor atípica OBP45 (ZHOU et al., 2008), é transcrito nas células foliculares que envolvem os oócitos. A caracterização da sequência completa do cDNA de AAEL010714 levou a identificação de uma fase aberta de leitura (ORF) codificante para uma proteína putativa, que foi nomeada como OBP45B atípica. Experimentos de Western blot evidenciaram que esta proteína é sintetizada nos ovários. Este estudo descreve a primeira caracterização molecular de um gene de Aedes aegypti que codifica para uma OBP atípica, expressa em ovários. / Understanding the reproductive physiology of Aedes aegypti, the primary vector of dengue virus, is a basic step to develop new control methods. Based on this premise, studies on gene expression during Aedes aegypti gonotrophic cycle were performed and we found 3 genes with high expression in ovaries at the end phase of the vitellogenic period, 48 hours after blood meal. Interestingly, it was shown that the gene AAEL01714, in silico annotated as encoding for atypical odorant binding protein OBP45 (ZHOU et al., 2008), is transcribed in the follicle cells surrounding the oocyte. Characterization of AAEL010714 full length cDNA led us to identify an open reading frame (ORF) which encodes for a protein named as atypical OBP45B. Western blot experiments showed that this protein is synthesized in the ovaries. This study describes the first molecular characterization of an Aedes aegypti gene encoding for an atypical OBP that is expressed in ovaries.

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Hematophagy, or blood-feeding behavior, has independently evolved multiple times in the class Insecta and results in the transmission of vector-borne parasites, bacteria and viruses causing 17% of all infectious diseases and over 700,000 human deaths annually. One of the major challenges in studying the discrete mechanisms involved in host-response to hematophagy or the host seeking behavior of hematophagous insects, is the vast amount of signaling processes and genes that are inextricably tied to these interactions. These experiments used the clustered regularly interspersed short palindromic repeat (CRISPR)/CRISPR-associated (Cas) and dsRNA knock-down technologies to examine mechanisms of immunological reactivity and host-seeking behavior. Using Illumina next-generation sequencing, 19,269 unique genes were found to be expressed in the salivary glands of C. lectularius. Of those genes, a total of 10,587 were differentially expressed. There were 6 genes definitively characterized as nitrophorin or nitrophorin-like, which were targeted for RNAi experiments. Silencing two nitrophorin genes, LOC106662976 and LOC106662977, which were the most highly expressed, did not result in any significant changes in feeding behavior or dermal reaction in the host. While RNAi-based knock-down experiments can gauge a proteins function, CRISPR/Cas-based knock-out experiments more definitively assess functionality. The second part of the study is thus focused on performing the first homology directed repair knock-in in Ae. albopictus using a plasmid, Cas9 protein and sgRNA targeting the key olfactory receptor gene, AealbOR4. An injection plasmid was constructed targeting AealbOR4 using standard molecular methods. Preliminary injections of the plasmid yielded no viable embryos. To determine if it is the plasmid or injection components that are lethal to developing Ae. albopictus embryos, further studies are required. Despite this, the development of this technique is a first step to be able to effectively interrogate gene function of an olfactory receptor and its role in host-seeking behavior. Taken together, these studies indicate that both RNAi and CRISPR/Cas-based gene editing technologies can effectively be utilized to answer some of the intricate questions related to insect-host interactions in the future.

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