Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-04-12T12:06:06Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2872306 bytes, checksum: 4524f2b2277b755bcb654e67c07705cb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-12T12:06:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2872306 bytes, checksum: 4524f2b2277b755bcb654e67c07705cb (MD5) Previous issue date: 2014-02-27 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Quorum sensing (QS) é um mecanismo de comunicação entre células microbianas mediado por moléculas sinalizadoras, denominadas autoindutores (AIs). Embora não produza o AI-1, que são moléculas de acil homoserina lactonas (AHLs), Salmonella responde às AHLs produzidas por outros micro-organismos por sintetizar a proteína de resposta ao AI-1, denominada de SdiA. Contudo, o gene sdiA ainda não tem sua função estabelecida em Salmonella. Neste trabalho foi avaliada a influência de n-dodecanoil homoserina lactona (C12-AHL) e de furanonas, análogas de AHLs, sobre o crescimento, motilidade, adesão, formação de biofilme em poliestireno e síntese de proteínas por Salmonella Enteritidis PT4 em anaerobiose. Na presença ou na ausência de 50 nM de C12-AHL e, ou de furanonas, o crescimento, a motilidade em massa ou por espalhamento (swarming) e a motilidade por contração ou por espasmos (twitching) deste patógeno não foram alterados. Conforme verificado pela determinação do potencial de adesão e formação de biofilme em microplacas, enumeração de células aderidas e microscopia confocal de epifluorescência, foi constatada que a presença de C12-AHL induziu a formação de biofilme em superfície de poliestireno após 36 h de cultivo. Além disso, constatou-se o efeito antagonista das furanonas sobre a formação de biofilme nas mesmas condições. As proteínas sintetizadas por Salmonella Enteritidis PT4 na presença e na ausência de 50 nM de C12-AHL após 7 h de cultivo em anaerobiose foram extraídas, separadas por eletroforese bidimensional e preditas por comparação do ponto isoelétrico e massa molecular disponíveis em bancos de dados. Foi verificado que, na presença de C12-AHL houve síntese de maior número de proteínas, sendo que muitas delas estão relacionadas com o sistema QS e com a formação de biofilme. Os resultados obtidos evidenciam que a presença de C12-AHL exógena influencia o metabolismo de Salmonella Enteritidis PT4, cultivada em condições de anaerobiose e indicam uma nova linha de investigação que pode contribuir para o esclarecimento dos mecanismos relacionados com a patogenicidade de Salmonella. / Quorum sensing (QS) is a communication mechanism employed by microbial cells by means of signaling molecules, called autoinducers (AIs). Even though Salmonella does not produce AI-1, also known as acyl homoserine lactones (AHLs), it responds to AHLs produced by other microorganisms through an AI-1 response protein called SdiA. However, the sdiA gene has not established function in Salmonella. In this work the influence of n-dodecanoyl homoserine lactone (C12-AHL) and furanones, AHLs analogs, was assessed on the growth, motility, adhesion, biofilm formation on polystyrene and protein synthesis by Salmonella Enteritidis PT4 under anaerobic environment. In the presence or absence of 50 nM C12-AHL and/or furanones, growth, swarming and twitching motilities of this pathogen were not altered. We found that the presence of C12-AHL induced biofilm formation after 36 h of cultivation as determined by the adhesion potential and biofilm formation on microplates, the enumeration of adhered cells and by confocal epifluorescence microscopy. The results were evaluated by determining the adhesion potential and biofilm formation on microplates, the enumeration of adhered cells and by confocal epifluorescence microscopy. The antagonistic effect of furanones was also determined by using the same conditions. The proteins synthesized by Salmonella Enteritidis PT4 in the presence or absence of 50 nM C12-AHL, after 7 h of incubation in anaerobic conditions, were extracted, separated by bidimensional electrophoresis and predicted on the basis of their isoelectric point and molecular masses available on databases. In the presence of C12-AHL, there was an increased synthesis of proteins, with the majority related to the QS system and biofilm formation. The results demonstrate that the presence of exogenous C12-AHL affects the metabolism of Salmonella Enteritidis PT4, cultivated under anaerobic conditions and point towards a new line of investigation which could contribute to the understanding of the pathogenicity mechanisms in Salmonella.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-12T17:02:04Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2714432 bytes, checksum: b2433146284f70c56705fc1be093c259 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-12T17:02:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2714432 bytes, checksum: b2433146284f70c56705fc1be093c259 (MD5) Previous issue date: 2016-02-22 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Actinobacillus pleuropneumoniae é o agente etiológico da pleuropneumonia suína, uma doença respiratória severa que resulta em significantes perdas econômicas no setor da suinocultura. Atualmente, A. pleuropneumoniae é classificado em 16 sorotipos diferentes que podem causar a doença com virulência distinta entre eles. Em Minas Gerais, Brasil, A. pleuropneumoniae é encontrado nas granjas e a maior distribuição é do sorotipo 8, sendo este até pouco tempo negligenciado em estudos de epidemiologia devido a problemas de identificação. Da mesma forma, atualmente é aceito que este sorotipo é também o de maior distribuição nos Estados Unidos, Canadá, Reino Unido além do Brasil. Até recentemente, não havia disponibilidade de genomas de A. pleuropneumoniae sorotipo 8 em banco de dados, por isso não existem informações genômicas específicas para este sorotipo, especialmente provenientes de isolados clínicos recentemente circulantes nas granjas. Neste contexto, somente a partir de 2015 os primeiros genomas foram disponibilizados para serem analisados, sendo assim sete genomas de isolados clínicos de A. pleuropneumoniae sorotipo 8 estão hoje disponíveis e estes foram analisados neste estudo. A partir das sequências genômicas dos isolados clínicos de A. pleuropneumoniae sorotipo 8 foi proposto um modelo de proteoma referência desse sorotipo com um total de 2.396 proteínas categorizadas nas diferentes classes de grupos de ortólogos. Na análise comparativa realizada entre genomas de A. pleuropneumoniae sorotipo 8 e demais sorotipos foi observado um padrão de conservação na organização do genoma entre esses. No entanto, foram identificadas algumas diferenças pontuais e dois segmentos genômicos diferenciais entre os genomas analisados com rearranjos e /ou inversões de 42,2 Kb e 59,6 Kb. O primeiro segmento foi encontrado nos genomas dos sorotipos 5 (L20), 7 (AP76) e em quatro dos isolados clínicos do sorotipo 8 investigados, sendo eles MV518, MV780, MV1022 e MV5651 contendo sequências de profago. O segundo segmento diferencial foi identificado apenas no genoma de A. pleuropneumoniae sorotipo 7 (AP76) e contém sequências como transposases caracterizando a presença de uma sequência de inserção no segmento. De acordo com a análise dos códons preferenciais de todos os sorotipos investigados, não foram observadas diferenças marcantes entre eles. Na análise comparativa dos proteomas, a maioria das sequências do proteoma referência de A. pleuropneumoniae sorotipo 8 que apresentaram baixa similaridade com os demais sorotipos foram caracterizadas como hipotéticas, não tendo sua função conhecida. Nessa porção diferencial específica foram relatadas sequências codificadoras relacionadas à plasmídeos o que caracteriza possíveis eventos de transferência horizontal de genes (THG) ao longo da história evolutiva do genoma e fatores de resistência a antibióticos como cloranfenicol, sulfonamida e tetraciclina. Na análise de similaridade entre os proteomas houve maior similaridade das proteínas do proteoma referência do sorotipo 8 com as proteínas do sorotipo 6, o que pode estar associado à dificuldade em separar esses sorotipos nas técnicas de sorotipagem. Com as análises comparativas e a caracterização das diferenças entre os sorotipos e isolados será possível compreender os mecanismos de virulência dos isolados de A. pleuropneumoniae e identificar potenciais candidatos vacinais mais eficientes. / Actinobacillus pleurapneumoniae is the causative agent of porcine pleuropneumonia, a severe respiratory illness that it results in significant economic losses in the swine industry. Currently, A. pleuropneumoniae is classified into 16 different serotypes that it can cause disease with distinct virulence between them. In Minas Gerais, Brazil, A. pleuropneumoniae is found on the farms and the largest distribution is of serotype 8, which, until shortly time, it was neglected in epidemiological studies because of the identification problems. Similarly, it is currently accepted that this serotype is also the most widely distributed in the United States of America, Canada, the United Kingdom as well as Brazil. Until recently, there was no availability of genomes of A. pleuropneumoniae serotype 8 in the database, because of this, there are no specific genomic information for this serotype, especially from of the clinical isolates that, recently, it are circulating on the farms. In this context, only from 2015, the first genomes were available to be analysed, so, today there are seven genomes of clinical isolates of A. pleuropneumoniae serotype 8 available and these were analyzed in this study. From the genomic sequences of clinical isolates of A. pleuropneumoniae serotype 8 was proposed a model of proteome which it is reference for this serotype with a total of 2.396 proteins categorized into different classes of orthologous groups. In a comparative analysis of genomes of A. pleuropneumoniae serotype 8 and other serotypes, it was observed a pattern of conservation in the organization of the genome between these. However, it were identified some specific differences and two genomic segments differentials between the genomes analyzed with rearrangements and/or reversals of 42.2 Kb and 59.6 Kb. The first segment was found in the genome of the serotype 5 (L20), 7 (AP76) and in four of the clinical isolates of serotype 8 that it were investigated: MV518, MV780, MV1022 and MV5651, which it containing prophage sequences. The second differential segment was identified only in the genome of A. pleuropneumoniae serotype 7 (AP76) and it contains sequences as transposases that it characterizes the presence of an insertion sequence in the segment. Regarding the use and the preference of codons between the serotypes investigated, there were no significant differences among them. In the comparative analysis of proteomes, the sequences of the reference proteome of A. pleuropneumoniae serotype 8, which it showed low similarity with the remaining serotypes, it were identified as hypothetical, it does not having its known function. In this specific differential portion, coding sequences associated to plasmids were described, that it characterize possible events by horizontal transfers of genes (HTG) throughout the evolutionary history of the genome and antibiotic resistance factors, such as chloramphenicol, tetracycline and sulfonamide. In the similarity analysis between the proteomes, there was greater similarity of the proteome reference of serotype 8 with the proteins of the serotype 6, which it may be associated on difficulty to separate these serotypes in the serotyping techniques. With the comparative analysis and the characterization of the differences between the serotypes and the isolates, it will be possible to understand the virulence mechanisms of the isolates of A. pleuropneumoniae and to identify vaccine candidate potential more effective.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-12T17:27:26Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 435818 bytes, checksum: 11ac8d55485121ae9e428811aa3efe1c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-12T17:27:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 435818 bytes, checksum: 11ac8d55485121ae9e428811aa3efe1c (MD5) Previous issue date: 2015-07-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A microbiota do rúmen bovino é complexa, incluindo organismos dos três domínios da vida, potencial hospedeiros de vários vírus. A população viral do rúmen desempenha um papel importante na manutenção do equilíbrio da população bacteriana e na transferência horizontal de genes. Além disso, bacteriófagos pode ser usada como uma possível estratégia para a mitigação de metano. Isso requer a identificação de espécies de bacteriófagos que infectam a principal Archaea produtora de metano no rúmen. O objetivo deste estudo foi caracterizar o viroma do rúmen de bovinos leiteiros da Universidade Federal de Viçosa usando uma abordagem metagenômica. Para acessa a diversidade viral,nós sequenciamos (Illumina HiSeq2000) partículas vírus-like do líquido de rúmen de dois bovinos leiteiros (amostras 08 e 11). Cada bibliotaca continha cerca de 49 milhões de sequências em pares. De novo assembly gerou 294.757 contigs para a amostra 08 e 193.262 para a amostra 11. Apenas 2% das sequências a partir de cada uma das duas amostras pode ser identificado através da comparação dos contigs com o banco de dados viral RefSeq, do NCBI. As famílias virais mais abundantes foram Siphoviridae, Myoviridae e Podoviridae. Para determinar se o alto número de contigs sem identificação eram possíveis sequências virais, alguns contigs das duas amostras que não mostraram nenhuma identidade com sequências depositadas no banco de dados foram escolhidos aleatoriamente e as ORF’s presentes nesses contigs foram identificadas usando a ferramenta ORFinder. Similaridade com proteínas virais conhecidas, foram detectadas em todas os contigs, sugerindo que a diversidade viral no rúmen é em grande parte desconhecida. Mesmo com o recente avanço nas tecnologias modernas de sequenciamento pouco se avançou no sentido de elucidar a verdadeira importância dos bacteriófagos no funcionamento do ecossistema ruminal, com muitas sequências permanecendo desconhecidas. Palavras-chaves: Metagenômica, rúmen, bacteriófagos / The microbiota of bovine rumen is complex, including organisms of the three domains of life, potential hosts of numerous viruses. The viral population of the rumen plays an important role in maintaining the balance of the bacterial population and in horizontal gene transfer. In addition, bacteriophages can be used as a possible strategy for methane mitigation. This requires the identification of bacteriophage species that infect the dominant methane-producing Archaea in the rumen. The purpose of this study was to characterize the rumen virome in dairy cattle from the University Federal of Viçosa using a metagenomic approach. To access the viral diversity we sequenced (Illumina HiSeq2000) virus-like particles from the rumen fluid of two dairy cattle (samples 08 and 11). Each library contained about 49 million pair-ended sequences. De novo assembly generated 294.757 contigs for sample 08 and 193.262 for sample 11. Only 2% of the sequences from each of the two samples could be identified by comparing the contigs with the viral RefSeq database of the NCBI. The most abundant viral families were Siphoviridae, Myoviridae and Podoviridae. To determine if the high number of contigs without a positive identification were possible viral sequences, some contigs that showed no identity from each of the two samples were randomly selected and the ORFs present in these contigs were identified using the ORFinder tool. Similarity to known viral proteins were detected in all contigs, suggesting that viral diversity in the rumen is largely unknown. Even with the recent advances in modern sequencing technology, little progress has been achived towards elucidating the true importance of bacteriophages in the functioning of the rumen ecosystem, with many sequences remaining unknown. Key words: Metagenomics, rumen, dairy cattle, phage.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-04-12T18:54:58Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 742082 bytes, checksum: 0ba77f18030aaf57a0e2379d7dc5b818 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-12T18:54:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 742082 bytes, checksum: 0ba77f18030aaf57a0e2379d7dc5b818 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O selênio (Se) é um micronutriente essencial que é requerido para a atividade biológica de diversas proteínas, as quais são conhecidas como selenoproteínas. Elas encontram-se envolvidas em diversas funções como a redução de peróxidos, a regulação da atividade dos hormônios tireoidianos, participação na atividade antioxidante, dentre outras. Cogumelos comestíveis, além de apresentarem um alto valor nutricional, possuem grande capacidade de absorver e acumular minerais presentes no substrato onde crescem. Ganha destaque o gênero Pleurotus, que pode ser cultivado com facilidade em diferentes substratos lignocelulolíticos. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a absorção de Se por fungos do gênero Pleurotus e também conhecer em que partes do cogumelo e em que formas ele se encontra. Foram enriquecidas com Se três espécies de fungos: Pleurotus ostreatus, Pleurotus cornucopiae e Pleurotus djamor. As três espécies avaliadas mostraram ser eficientes na absorção desse elemento, sendo capazes de acumular entre 69,91 e 142,90 μg g-1 de Se na massa seca. Pleurotus djamor, quando cultivado em substrato enriquecido com 25 mg kg-1 de Se é o cogumelo que apresentou maior concentração deste micronutriente (142,9 μg g-1) e maior eficiência de absorção (7,31%), sendo a espécie mais indicada para produção de cogumelos enriquecido com Se. A distribuição e especiação de Se em cogumelos de Pleurotus enriquecidos com este micronutriente foram avaliadas utilizando as técnicas de μ-XRF e XANES, as quais permitiram observar que houve um maior acúmulo de Se nas lâminas que em outras estruturas do cogumelo e que o Se se encontra principalmente em formas provavelmente orgânicas. Conclui-se que as três espécies são eficientes em acumular Se e que a técnica de μ-XRF mostrou-se eficiente e prática na detecção de Se nas diferentes partes do cogumelo. Entretanto, a especiação de Se pela técnica de XANES deve ser aprimorada para permitir a diferenciação das formas de Se incorporadas no cogumelo. / Selenium (Se) is an essential nutrient for biological activity of several proteins, they are known as selenoproteins. They are involved in various functions such as the reduction of peroxides, regulating the activity of the thyroid hormone, participation in the regeneration of antioxidant activity, among others. The goal of improving the consumption of selenium in the population is that mushroom have been fortified with Selenium. Edible mushrooms have a high nutritional value and great ability to absorb and accumulate minerals present in the substrate where they grow, especially the Pleurotus genus, which is cultivated easily in different lignocellulolytic substrates. The goal of this work was to evaluate the ability of the fungi of Pleurotus genus to absorb selenium, and know in which part of the mushroom, and in the forms of Se is present in it. Three species of fungi were enriched: Pleurotus ostreatus, Pleurotus cornucopiae and Pleurotus djamor. All the three species proved to be efficient in absorb this element, being able to accumulate between 69.91 and 142.90 μg g-1 de Se dw. The distribution and speciation of selenium in Pleurotus Se-enriched mushrooms, using the techniques of μ-XRF and XANES, allowed to observe that there was a greater accumulation of selenium in the gills than in other part of mushroom, and this selenium is probably in organic forms. We conclude that the three species are efficient in accumulating selenium and the μ-XRF technique proved to be efficient and practical for the detection of selenium in different parts of the mushroom. However, the speciation of selenium by the XANES technique should be improved to allow the differentiation of different forms of selenium. / Na ficha catalográfica não apareceu o nome completo do autor.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-19T16:08:03Z No. of bitstreams: 1 TEXTO COMPLETO.pdf: 471113 bytes, checksum: d8b75674f0d6200e43ac4e183c41a2ca (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-19T16:08:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TEXTO COMPLETO.pdf: 471113 bytes, checksum: d8b75674f0d6200e43ac4e183c41a2ca (MD5) Previous issue date: 2001-12-20 / A propagação vegetativa de eucalipto por meio da técnica de miniestaquia vem sendo amplamente empregada nas principais empresas florestais do país. No entanto, ainda se verifica heterogeneidade quanto ao enraizamento entre os genótipos, principalmente na fase inicial de adaptação dos clones. Deste modo, técnicas alternativas que otimizem o enraizamento de estacas e miniestacas de eucalipto são fundamentais para melhorar a qualidade das mudas e reduzir o custo de produção. Além de potencialmente poderem atuar como promotoras de enraizamento, a utilização de rizobactérias na multiplicação clonal de eucalipto, pode propiciar a obtenção de mudas com maior resistência às doenças associadas a viveiros de propagação. Testaram- se 107 isolados de bactérias, obtidos da rizosfera de mudas de diferentes clones de eucalipto, quanto ao seu potencial como promotores de enraizamento de estacas e miniestacas de Eucalyptus spp. Para tanto, amostras de substrato à base de composto de casca de arroz carbonizada:vermiculita (1:1) foram tratados com 10 ml de uma suspensão de cada isolado (OD 540 = 0,2A)/tubete, correspondendo à cerca de 10 8 ufc/ml. Utilizou-se o delineamento inteiramente casualizado (DIC) com cinco repetições por tratamento, cada uma delas constituídas por 10 estacas. Aos 30 dias, avaliou-se o enraizamento médio (porcentagem média de estacas enraizadas) e o peso médio do sistema radicular seco. Dez isolados destacaram-se como excelentes indutores de enraizamento, propiciando ganhos de até 110% no enraizamento médio e de até 250% no peso de raiz. Esses isolados também foram eficientes no enraizamento de miniestacas, cujos ganhos variaram de acordo com o clone e isolado testados. Também se avaliou o efeito dos 10 isolados como promotores de enraizamento em três diferentes substratos: vermiculita pura; moinha de carvão:composto de casca de eucalipto:vermiculita (5:3:2) e composto de casca de arroz carbonizada:vermiculita (1:1). Não se observou interação isolado-substrato, sendo que o substrato à base de composto de casca de arroz carbonizada foi muito superior, quanto à porcentagem de miniestacas enraizadas e ao peso médio de raiz seca. Mudas com cerca de 80 dias de idade, previamente enraizadas em substrato tratado com as rizobactérias, foram testadas quanto à resistência à ferrugem do eucalipto e à mancha de Cylindrocladium candelabrum, em câmaras de crescimento (22 o C/ fotoperíodo = 12 h). Utilizou- se um DIC com quatro repetições, cada uma com três plantas, para ferrugem, e quatro tratamentos com cinco repetições para Cylindrocladium. Aos 13 dias da inoculação, avaliaram-se o número médio de pústulas/ folha, número de soros/ amostra e o número médio de esporos/ soro. Na avaliação da mancha de Cylindrocladium candelabrum, mediu-se apenas o tamanho da lesão ao oitavo dia após a inoculação, visto a mesma ter sido feita utilizando-se discos de micélio. Dois isolados foram bastante eficientes na redução da severidade da ferrugem, no entanto, o mesmo efeito não foi observado para Cylindrocladium. Com o tratamento das mudas com rizobactérias apenas uma semana antes da inoculação com Puccinia psidii, obteve-se redução na severidade da doença muito menor do que a observada nas mudas enraizadas em substrato tratado com bactérias. Os maiores ganhos obtidos no enraizamento de miniestacas (20-40%) são bem expressivos, visto que a técnica de miniestaquia propiciou um ganho de no máximo 40% de enraizamento em relação à estaquia convencional e, no caso do tratamento com rizobactérias, não seria necessário nenhum ajuste no manejo ou na infra-estrutura dos viveiros. Somando-se a esse ganho direto, pode-se ter um melhor aproveitamento da estrutura física desses viveiros, ao se diminuir o tempo que as miniestacas necessitem permanecer em casa-de-vegetação para um bom enraizamento. Os isolados selecionados foram eficientes em várias condições e em diferentes genótipos o que viabiliza a sua utilização em larga escala. Estudos de formulação ainda são necessários, de preferência empregando-se a própria fração orgânica utilizada no preparo dos substratos de enraizamento como veículo. Além disso, o conhecimento dos mecanismos de atuação podem ajudar a potencializar a promoção de crescimento, otimizando a aplicação prática dos isolados em condições de campo. Abre-se aqui um vasto campo de estudo visando aproveitar ao máximo o potencial de rizobactérias na eucaliptocultura. / The major afforestation companies of this country are increasingly using mini-cutting technique for vegetative propagation of eucalyptus. However, there is high heterogeneity in rooting among the genotypes, especially at the initial clone adaptation phase. Thus, alternative techniques, which can optimize the rooting of the cuttings and the mini-cuttings of eucalyptus, are essential for improving the seedling quality and reducing the production cost. Rhizobacteria potentially can act as rooting promoters for clonal multiplication of eucalyptus, and can also help obtain seedlings with greater resistance to nursery diseases. One hundred and seven bacteria obtained from the rhizosphere of seedlings of different eucalyptus eucalyptus clones, were tested for their potential as rooting- promoters of cuttings and mini-cuttings. Substrate based on the compost of carbonized rice hull: vermiculite (1:1) was treated with 10 ml of the bacterial suspension (OD 540 = 0.2 A=10 8 cfu/ml) / tube of either isolate. Completely randomized block design was used with five replications of 10 cuttings each, and mean rooting percentage dry root weight was determined 30 days after planting. Ten isolates were found to be excellent root inducers, increasing rooting percentage by about 110% and root dry weight by 250% relative to controls. These isolates were also efficient in promoting the rooting of mini- cuttings and the beneficial effect varied among the clones and the isolates. The root inducing effect of these isolates was further tested in three different substrates: pure vermiculite; ground charcoal; eucalyptus bark compost: vermiculite (5:3:2) and compost of carbonized rice hull: vermiculite (1:1). There was no isolate-substrate interaction, but the carbonized rice hull: vermiculite substrate was much superior for improving percentage rooting of mini-cuttings and dry root weight. Eighty days old seedlings previously rooted in the rhizobacteria treated substrate were tested for resistance to rust and leaf spot caused by Cylindrocladium candelabrum, in a growth room (22 o C/ 12 h photoperiod). Completely randomized block design with four replications of three plants each was used for rust, and four treatments with five replications were used for evaluating Cylindrocladium. Mean pustules number /leaf, number of sori/sample and the mean spore number /sorus was determined 13 days after inoculation. C. candelabrum leaf spot was evaluated by measuring mean lesion size eight days after inoculation with a mycelial disc. Two isolates were very efficient in reducing the rust severity, but not Cylindrocladium leaf spot. The disease severity reduction was much less in seedlings treated with the rhizobacteria only week before the inoculation with Puccinia psidii, compared to seedlings rooted in the treated substrate. The maximum benefit in the rooting of mini-cuttings (20 to 40%), is expressive, considering that the mini-cutting technique gave only 40% increase in rooting over traditional cuttings. Use of treatment with rhizobacteria, does not require management adjustment or the infrastructure changes of the nurseries. Adding to this direct advantage, there is better use of the physical space of the nursery, because the time required for mini-cuttings to stay in the greenhouse is drastically reduced. The selected isolates were efficient under different conditions and on different genotypes, which makes its large-scale use possible. Studies on the formulation are necessary, preferentially using the same organic fraction used for preparing the rooting substrate as vehicle. Besides this the knowledge of the mode of mechanism can help optimize growth promotion, by optimizing the application practice of the isolates in field conditions. A wide field of study is opened for using maximally the potential of rhizobacteria in eucalyptus cultivation. / Tese importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-19T18:16:28Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 618763 bytes, checksum: 37ef3ce8cdc380b8c22164c1cbb50787 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-19T18:16:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 618763 bytes, checksum: 37ef3ce8cdc380b8c22164c1cbb50787 (MD5) Previous issue date: 2002-02-07 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Clones de Eucalyptus grandis com resposta de resistência completa do tipo HR, imunidade, resistência parcial e suscetibilidade à ferrugem foram inoculados com o isolado I UFV -01 de P. psidii e avaliados sob microscopia de luz e microscopia eletrônica de transmissão. Observou-se maior desenvolvimento de hifas, haustórios e células-mãe do haustório (HMC) no clone suscetível (D UFV -1) que nos resistentes (D UFV -5, D UFV -3 e D UFV -4), havendo tendência de redução do número dos eventos citados com o nível de resistência. Em todos os clones, observou-se resposta celular de agregação de citoplasma e parede com intensidade de brilho, sendo mais pronunciada nos clones resistentes. Sob microscopia eletrônica de transmissão, esse desarranjo citoplasmático foi observado nos clones resistentes D UFV -5, D UFV -3. No clone com resposta de HR, encontraram-se haustórios totalmente encapsulados 144 horas após a inoculação (h.a.i.). No material imune D UFV -4 não foram observados haustórios, e nos clones suscetível e com resistência parcial os haustórios desenvolvidos foram lobados. A patogenicidade de 32 isolados de Puccinia psidii, obtidos de diferentes hospedeiras e regiões, foi avaliada em plantas da família Myrtaceae (goiabeira var. Paloma, jambeiro, jabuticabeira, eucalipto e pitangueira). A freqüência de isolados patogênicos a eucalipto, jambeiro, jabuticabeira, goiabeira e pitangueira foi de 100, 87, 81, 31 e 4%, respectivamente. A virulência de 21 desses isolados de P. psidii foi avaliada em oito clones de eucalipto e reconheceram-se três respostas diferenciais dentro da interação, as quais foram caracterizadas como raça 1, raça 2 e raça 3, com freqüência de 90,5, 4,8 e 4,8%, respectivamente. As raças 2 e 3 foram inoculadas nos clones diferenciadores e em um clone suscetível a ambos (D UFV -1) e quantificaram-se os componentes de agressividade. Determinou-se diariamente o número de lesões/folha (NLF) e o número de lesões esporulando (NLE); aos 12 dias da inoculação, foram quantificados o número de soros/pústula (NSP), o tamanho de uredínia (TU) e a produção de esporos/pústula (PEP). A área foliar total e doente foi determinada por meio do software QD - Quantificação de doenças de plantas. Estimaram-se a severidade da doença, a freqüência de infecção, a eficiência de infecção e a produção de esporos/lesão. Pela análise estatística, a interação clone x raça foi significativa para todas as variáveis citadas, exceto para FI. Detectou-se diferença estatística entre as raças 2 e 3 nos clones D UFV -3 e D UFV -1, para a produção de soros/pústulas e severidade da doença. Maior tendência foi observada para a raça 3 em todas as variáveis. O período infeccioso em todos os clones foi de 16 dias. Na raça 3 observou-se um pico de produção de esporos aos 12 dias com aproximadamente 5 x 10 3 urediniosporos/lesão/mL, que continuou constante até o final do período infeccioso, com uma média de seis a oito pústulas ainda produzindo esporos. A raça 2 apresentou maior variação na produção de esporos e, em média, 3 x 10 3 urediniosporos/lesão/mL foram produzidos, com mesma tendência nos dois clones avaliados. A variabilidade de P. psidii ficou evidenciada nas inoculações tanto da gama de hospedeiros dentro da família Myrtaceae quanto nos diferentes clones de eucalipto utilizados, nos quais foi possível diferenciar três raças de P. psidii. A comparação das duas raças de menor ocorrência (raças 2 e 3) demonstrou maior agressividade da raça 3 que a raça 2 no clone suscetível às duas raças. / Eucalyptus grandis clones with HR type complete resistance, immunity, partial resistance or susceptible response to rust were inoculated with IUFV-01 isolate of P. psidii and then evaluated by the use of light and transmission electron microscope. Development of hyphae, haustoria, haustoria mother cell (HMC) was greater in the susceptible clone (DUFV-1) compared to in the resistant clones (DUFV-5, DUFV-3 and DUFV-4). The number of event occurrence showed a decreasing tendency with increasing level of resistance. There was cytoplasm aggregation in all the clones, and the cell wall brilliance was greater in the resistant clones. Under electron microscope this cytoplasm disorder was observed in resistant clone (DUFV-5, DUFV 3). In clones with HR response, totally encapsulated haustorias were found 144h after inoculation (h.a.i.). While no haustoria were observed in the immune clone DUFV-4, lobed haustoria developed in the susceptible and partially resistant clones. The pathogenicity of 32 isolates of P. psidii, obtained from different hosts and regions was evaluated on plants of Myrtaceae family (guava var. paloma, jambo, jabuticaba, eucalyptus and pitanga). The frequency of isolates pathogenic on eucalyptus, jambo, jabuticaba and pitanga was 100, 87, 81, 31 and 4%, respectively. Virulence testing of 21 of these isolates on eight eucalyptus clones, showed three different interaction responses, which were characterized as race 1, race 2, and race 3, with the frequency of 90.5, 4.8 and 4.8% respectively. The components of aggressiveness of race 2 and 3 were quantified by inoculating the set differential clones and one clone (DUFV-1) susceptible to both the races. Number of lesions per leaf (NLF) and number of sporulating lesions (NSL) was quantified daily and the number of sori/pustule (NSP), the uredinia size (US) and the number of spores/pustule (NSP) was quantified 12 days after inoculation. The total and the diseased leaf area were estimated by the use of QD software - Quantification of Plant diseases. Disease severity, infection frequency, infection efficiency and the spore production/lesion were estimated. The interaction between clone x race was significant for all the variables except FI. The race 2 and 3 differed on clones DUFV-3 and DUFV-1, for the number of sori/pustule and disease severity, with greater tendency for race 3 in all the evaluated variable. The infectious period in all the clones was of 16 days. In the race 3 there was a peak in the spore production at 12 days with approximately 5 x 10 3 uredinospores/lesions/mL and remained constant till the end of the infectious period, while about 6 to 8 pustules still producing the spores. The race 2 showed a greater variation in the spore production with an average of 3 x 10 3 uredinospores/lesion/mL, on both the clones. The variability of P. psidii was evident in the inoculation of a range of the hosts in Myrtaceae family as well as on different clones of eucalyptus, which allowed for differentiation of three races of P. psidii. The comparison of the two less frequent races (race 2 and 3) showed greater aggressiveness of the race 3 on the two clones susceptible to both races. / Tese importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-20T11:18:53Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2303986 bytes, checksum: fc9dbfa3fef6c5b7d8146198d7d6f451 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-20T11:18:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2303986 bytes, checksum: fc9dbfa3fef6c5b7d8146198d7d6f451 (MD5) Previous issue date: 2002-12-03 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Estudou-se a infecção de S. solani em folíolos de tomateiros resistente, cv. Motelle, e suscetível, cv. Moneymaker, usando-se técnicas histológicas e de microscopia eletrônica de varredura e de transmissão. Inicialmente quantificaram-se os eventos de pré-penetração nas duas cultivares, os quais não diferiram significativamente (teste F a 5%) entre si, indicando que a resistência é exercida em pós-penetração. Após a penetração, que ocorre principalmente via estômatos, a hifa diferenciou-se na cavidade subestomática, nas duas cultivares, formando uma vesícula globosa ou irregular; a vesícula ramificou-se em hifas secundárias, que 24 e 36 h.a.i. (horas após a inoculação) colonizaram o hospedeiro de forma intra e intercelular. Na cultivar 'Motelle', as células do mesofilo continuaram preservadas, com os cloroplastos aparentemente intactos, quando a colonização se limitava aos espaços intercelulares. Raramente a hifa conseguia penetrar e, quando o conseguiu, causou colapso celular. A freqüência da colonização intracelular na cultivar resistente foi menor que na suscetível e, quando verificada, foi pequeno o número de células afetadas, originando lesão pequena. Aposições foram observadas na parede das células do mesofilo resistente e, na maioria das células examinadas, aparentemente restringiram a colonização intracelular. No tomateiro suscetível, os tecidos apresentavam-se intensamente colonizados e as células do mesofilo, com cloroplastos destruídos no citoplasma degradado. Peróxido de hidrogênio foi localizado citoquimicamente em virtude de sua reação com cloreto de cério, evidenciando H 2 O 2 produzido em ambos tipos de tomateiros. Precipitados de peridróxido de cério foram constatados nas células do mesofilo, na parede em contato com as hifas do patógeno. Portanto, não tendo sido observada reação diferencial entre as cultivares quanto ao acúmulo de H 2 O 2 , e sua presença detectada num dos controles negativos, este composto não participa diretamente da resistência manifestada pela c.v. 'Motelle' contra S. solani no tocante ao fortalecimento da parede celular. A resistência de 'Motelle' explica-se em parte pelas alterações da parede celular e aposições encontradas nas células do mesofilo em contato com as hifas. Porém, somente a presença dessas barreiras estruturais não explicam a resistência observada, pois a colonização intracelular dos tecidos da c.v. resistente também foi observada em alguns casos, porém o desenvolvimento das lesões foi restringido nestas áreas colonizadas. Desta forma, é provável que outros mecanismos bioquímicos de resistência ocorram em conjunto com os mecanismos reportados neste estudo. / The infection process of S. solani on resistant (cv. Motelle) and susceptible (cv. Moneymaker) tomato leaflets was studied using histochemical and scanning and transmission electron microscopy techniques. No quantitative differences were found in the pre-penetration conidial events on resistant and susceptible tomatoes, an indication that resistance results from post-penetration responses. The histological studies showed that the initial infection events were similar on the resistant and susceptible plants. The pathogen invaded the tomato leaf primarily through stomates and a vesicle developed inside the substomatal cavity. Secondary hyphae originated from the vesicle and within 24 and 36 hours after inoculation had branched inter and intracellularly. On resistant tomato, chloroplasts of the mesophyll cells remained intact, as hyphae grew intercellularly, while the entire cell collapsed when the colonization went intracellular. However, intracellular hyphae were an uncommon event in the resistant tomato, and small the number of infected cells. Cell wall appositions in the mesophyll of resistant tomato prevented the intracellular colonization. Mesophyll cells of the susceptible tomato were strongly colonized inter and intracellularly, their protoplast became disorganized, and the cell colapsed. No different physiological reactions were found for the two studied tomato types concerning H 2 O 2 accumulation in the wall of mesophyll cells because deposits of cerium perhydroxide were found equally in both cultivars. It is thus assumed that H 2 O 2 has no effect on building up the wall resistance of 'Motelle'to S. solani. Resistance of the mesophyll cells was caused by appositions and other changes on the cell wall. However, these do not completely account for the resistance in 'Motelle', as it seems likely that biochemical mechanisms are also involved. / Tese importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-24T11:15:46Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 389658 bytes, checksum: d01e4f8e75c1bc6e7531f77722009e37 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T11:15:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 389658 bytes, checksum: d01e4f8e75c1bc6e7531f77722009e37 (MD5) Previous issue date: 2003-05-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O Tomato rugose mosaic virus (ToRMV) é um begomovírus descrito como parte de um complexo viral causando mosaico dourado e deformação (rugosidade) foliar em tomateiro na região do Triângulo Mineiro, Minas Gerais. Os dois componentes genômicos encontram-se completamente sequenciados, e a análise das seqüências de nucleotídeos do DNA-A indicou a presença de uma ORF adicional denominada AC5, presente apenas em algumas espécies de begomovírus. Esta ORF está quase totalmente inserida na sequência do gene cp, porém em orientação inversa e em outra fase de leitura. A ORF AC5 do ToRMV tem o potencial de codificar uma proteína com aproximadamente 27 kDa. A função do produto potencial da ORF AC5 foi estudada apenas para o Watermelon chlorotic stunt virus (WmCSV), não sendo encontrado nenhum indício da expressão da ORF. Entretanto, a seqüência de aminoácidos da proteína potencialmente codificada pela ORF AC5 do ToRMV possui apenas 41% de identidade com a AC5 do WmCSV. É possível que a ORF AC5 do ToRMV seja expressa, e que a proteína desempenhe alguma função no ciclo de infecção viral. Este trabalho teve por objetivo a clonagem e a expressão in vitro da ORF AC5 do ToRMV e a producão de anti-soro específico. Oligonucleotídeos específicos foram utilizados para a amplificação da região codificadora da ORF AC5 via PCR. O fragmento amplificado foi clonado no vetor de expressão pRSET-C. Plasmídeos recombinantes foram utilizados para a expressão da proteína AC5 em E. coli BL21::DE3. A proteína foi purificada a partir das células de E. coli e utilizada para a produção de anti-soro policlonal em coelhos. A especificidade do anti-soro policlonal obtido foi confirmada por Western blot. Esse anti-soro poderá ser utilizado em ensaios de imunolocalização da proteína AC5 em tecidos infectados pelo ToRMV. / Tomato rugose mosaic virus (ToRMV) is a typical bipartite begomovirus described as part of a viral complex inducing golden mosaic and leaf distortion (rugosity) in tomatoes at Triângulo Mineiro, Minas Gerais. Both genomic components have been completely sequenced, and the DNA-A sequence analysis indicated the presence of an additional open ready frame (ORF), named AC5, present in only a number of begomovirus species. This ORF is almost fully inserted into the cp gene, but in opposite orientation and in a different reading frame. The AC5 ORF of ToRMV has the potential to encode for a 27 kDa protein. The function of a putative AC5 protein has only been studied for Watermelon chlorotic stunt virus (WmCSV), but no evidence of its expression was found. However, the amino acid sequence of the putative AC5 protein from ToRMV is only 41% identical to the WmCSV AC5. It is thus conceivable that the ToRMV AC5 is expressed and plays a role in the viral infection cycle. The objective of this work was to clone and express the ToRMV AC5 ORF in vitro, and to raise an AC5-specific antiserum. Specific primers were used to direct the PCR-based amplification of the ToRMV AC5 ORF. The amplified fragment was cloned into the expression vector pRSET-C. Recombinant plasmids were used for protein expression in E. coli BL21::DE3. The AC5 protein was purified from E. coli cells by affinity chromatography and used for the immunization of rabbits. The specificity of the polyclonal antiserum obtained was assayed by Western blot. This antiserum can now be used in immunolocalization studies attempting to detect the AC5 protein in ToRMV-infected tissues. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-24T13:57:00Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 102984 bytes, checksum: 0ee73cb07cb87b016987c2f087282ed1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T13:57:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 102984 bytes, checksum: 0ee73cb07cb87b016987c2f087282ed1 (MD5) Previous issue date: 2003-07-31 / Dois isolados, xcc1 e xcc2, de Xanthomonas campestris pv. campestris foram utilizados para obtenção de duas frações celulares, o exopolissacarídeo capsular (EPS) e o lipopolissacarídeo da parede celular (LPS), objetivando avaliar a imunogenicidade (produção de anticorpos) e especificidade sorológica das mesmas. Após a obtenção do EPS e do LPS, respectivamente, pelo método de precipitação em etanol 95% e pelo método que consistiu na fervura seguida de extração com fenol 90%, foram imunizados coelhos da raça Nova Zelândia, com três meses de idade. Os anti-soros produzidos foram avaliados pelos testes de aglutinação, precipitação em gota e imunodifusão dupla de Ouchterlony (IDD). Verificou-se pelos testes de aglutinação e precipitação em gota baixos títulos, 1:16 e 1:32. O teste de IDD, além de mostrar-se mais sensível que o teste de aglutinação e precipitação em gota, constatou diferença antigênica entre os isolados xcc1 e xcc2, e entre as frações EPS e LPS da célula bacteriana. Diante dos baixos títulos obtidos, 1:16 a 1:64, concluiu-se que o EPS e o LPS de X. campestris pv. campestris, utilizados na produção de anti-soro levaram à produção de pequena quantidade de anticorpos, nas condições em que os ensaios foram realizados. / Two Xanthomonas campestris pv. campestris isolates, xcc1 e xcc2, were used to obtain two cell fractions, exopolysaccharide (EPS) and cell wall lipopolysaccharide (LPS). Both of them were used to evaluate immunogenicity (antibody production) in New Zealand rabbits and serological specificity. The methods used were agglutination, precipitation and Ouchterlony Double Diffusion (ODD). Low titles were observed through agglutination and precipitation tests. ODD test was more sensitive than both agglutination and precipitation tests and antigenic differences between xcc1 e xcc2 isolates and between bacterial cell fractions EPS and LPS was found. The low titles showed that both X. campestris pv. campestris EPS and LPS were not good for antiserum production in the worked conditions. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-24T14:33:02Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3887893 bytes, checksum: 1c7789d1af719425cbe711fa65367199 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T14:33:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3887893 bytes, checksum: 1c7789d1af719425cbe711fa65367199 (MD5) Previous issue date: 2003-12-05 / Foi desenvolvido o software QUANT para processamento, segmentação e mensuração em imagens digitais. Realizaram-se três estudos para avaliar a acurácia e precisão do QUANT. No primeiro estudo, três experimentos foram conduzidos com imagens obtidas por meio de um digitalizador de imagens tipo mesa (scanner). No primeiro, imagens de um disco de metal de 50 cm 2 foram obtidas em diferentes posições no scanner e em seis resoluções (75 a 300 dpi). No segundo experimento foram utilizadas imagens com resolução de 75 a 300 dpi, de oito botões redondos com área conhecida (0,5 a 5,1 cm 2 ), e no terceiro, imagens digitalizadas a 100 e 300 dpi, de 40 diagramas de papel com tamanho aproximado de 50 cm 2 . Cada diagrama apresentava de um a 40 orifícios circulares e de mesmo tamanho. Em todos os três experimentos, as imagens foram processadas pelo software QUANT e as áreas do disco de metal, dos botões, dos diagramas de papel e de seus orifícios foram segmentadas e mensuradas. No primeiro experimento, as áreas foram segmentadas pelo procedimento de intervalo de coordenadas de cores. No segundo e terceiro experimentos, utilizou-se o procedimento de seleção de áreas do QUANT. As áreas também foram mensuradas com o uso do medidor de área da Li-cor® , modelo LI – 3100. No primeiro experimento, o QUANT apresentou acurácia de 98,7% para imagens com 200 dpi e acurácia superior a 99,7% para as imagens nas demais resoluções. No segundo experimento, O QUANT apresentou acurácia superior a 98% e precisão de 99,99%. No terceiro experimento, na estimativa das áreas dos orifícios, o QUANT apresentou acurácia de 98,4% e o medidor de área, 87%. Esses resultados evidenciam que o QUANT possui alto potencial de uso na segmentação e mensuração de áreas em imagens digitais. No segundo estudo, foram avaliadas a acurácia e a precisão do software QUANT na mensuração da área foliar total, da área desfolhada (consumida) e da severidade da desfolha (percentagem da área foliar desfolhada) por besouros crisomelídeos, em 99 folhas de pimentão (Capsicum annuum), usando imagens digitais, com resolução de 100 e 300 dpi. Também foram feitas mensurações com o medidor de área Li-cor® modelo LI-3100, por meio de estimativa visual por seis avaliadores. A área desfolhada também foi estimada por dois avaliadores observando- se as imagens digitais obtidas com papel milimetrado como fundo, por meio de contagem direta de cada quadrado de 1mm 2 de área. A resolução da imagem não afetou as estimativas de área pelo QUANT. As estimativas de área com o uso do QUANT e com o LI-3100 apresentaram concordância de 97,8%, 77,0% e 80,8%, para área foliar, área desfolhada e severidade, respectivamente. Compararam-se as mensurações de área desfolhada do QUANT e do LI-3100 com mensurações realizadas por dois avaliadores, por meio de contagem de quadrículas em papel milimetrado. O QUANT apresentou maior acurácia (89,0 a 93,1%) e precisão (97,0%) que o medidor de área foliar, o qual apresentou acurácia de 86 a 88% e precisão de 77%. Todos os seis avaliadores visuais superestimaram a severidade. Apenas um avaliador apresentou alta acurácia (92%). A precisão dos avaliadores variou de 22,3 a 92,1%. No terceiro estudo, utilizaram-se diferentes procedimentos do software QUANT na mensuração da área foliar total, da área lesionada e da severidade da mancha parda (Cercospora coffeicola) em 58 folhas de cafeeiro (Coffea arabica), usando imagens digitais, com resolução de 150 dpi. A severidade foi estimada visualmente por cinco avaliadores. A área lesionada foi mensurada com o medidor de área Li-cor® modelo LI-3100 e por meio de contagem direta observando-se as imagens digitais obtidas com papel milimetrado como fundo. Para tanto, as lesões foram previamente retiradas da folha com o auxilio de um bisturi. As estimativas de áreas com o procedimento de seleção de áreas com a varinha mágica foi arbitrariamente considerado o padrão do QUANT. Essas estimativas de área foliar apresentaram 99,3% de concordância com as do LI-3100. Nas estimativas das áreas lesionadas, quando comparados com o método do papel milimetrado, o QUANT apresentou acurácia de 97,9% e o LI 3100, de 83,7%. Imagens com contraste previamente alterado, segundo três protocolos, tiveram as áreas foliares estimadas por meio de três procedimentos do QUANT, que quando comparados com o procedimento padrão, apresentaram acurácia de 98,6 a 100% e precisão de 99,99%. Com relação à área lesionada, os procedimentos de limiar preto e branco, função discriminante e redução para 32 cores, apresentaram alta acurácia (96,6 a 99,6%) e precisão (≥ 99,3%). Nas estimativas de severidade o procedimento de redução para 32 cores apresentou acurácia superior a 99%, enquanto as função discriminantes e o intervalo de coordenadas de cores apresentaram acurácia inferior. As estimativas de severidade do QUANT (padrão) não apresentaram boa concordância com as do medidor de área foliar LI-3100. Dos cinco avaliadores que estimaram visualmente a severidade de doença, somente um apresentou acurácia (97%) e precisão (94%) elevadas. Quatro usuários do QUANT estimaram área foliar em 16 folhas, usando o procedimento de seleção de área com a varinha mágica, obtendo acurácia superior a 99%. Três usuários estimaram área lesionada usando este procedimento, e também o procedimento de limiarização, obtendo acurácia entre 96 e 98%. O QUANT disponibiliza vários algoritmos para melhorar o contraste da imagem, Com isso, mesmo os sintomas de doenças onde o sistema visual humano tem dificuldade de distinguir entre área foliar sadia e doente, podem ser quantificados com o uso do QUANT. Propõe-se que o QUANT seja adotado como padrão na mensuração de severidade de doenças de plantas e área foliar injuriada (consumida) por insetos. Palavras-chaves: imagens digitais, fitopatometria, herbivoria. / The software QUANT was developed for processing, segmentation and mensuration in digital images. It was accomplished three set of trials to evaluate the accuracy and precision of the QUANT. In the first trial set, images were obtained through a scanner. In the first trial, images of a steel disk of 50 cm 2 were obtained in different positions on the scanner and with six resolutions (75 to 300 dpi). In the second trial, images of eight round buttons with known area (0.5 to 5.1 cm 2 ) had resolutions from 75 to 300 dpi, and in the third trial, images at 100 and 300 dpi, of 40 diagrams of paper, each having from one to 40 rounded holes. In all trials, the images were processed by the software QUANT and the areas of the metal disk, buttons, diagrams, and of the holes were segmented and measured. In the first trial, the areas were segmented by the procedure of interval of coordinates of colour. In the second and third trials, the procedure for selection of areas was used. The areas were also measured with the area meter Li-cor, model LI-3100. In the first trail, QUANT showed accuracy of 98.7% for images with 200 dpi and 99.7% for others. In the second trial, QUANT showed accuracy of 98%. In the third experiment, in the estimate of the areas of the holes, QUANT showed accuracy of 98.4% and the area meter, 87%. The results have evidenced that the QUANT has high potential for segmentation and mensuration of areas in digital images. In the second trial set, It was evaluated the accuracy and precision of the software QUANT in the mensuration of the foliar area, defoliated area for beetles and of the severity (percentage of the eaten foliar area), in 99 leaves of green pepper (Capsicum annuum), using digital images, at 100 and 300 dpi. Mensuration with the area meter Li-cor, model LI-3100, and through visual estimate of six evaluators were accomplished too. The defoliated area was also measured by two evaluators counting on graph paper squared 1 mm. The image resolution didn't affect the mensuration by QUANT. The mensuration by QUANT and by LI-3100 showed agreement of 97.8%, 77.0% and 80.8%, for foliar area, defoliated area and severity, respectively. The mensuration of defoliated area by Quant and by LI-3100 were compared with mensuration accomplished by two evaluators, through counting on graph paper squared 1 mm. QUANT presented accuracy > 89 % and precision 97%. The LI-3100 showed accuracy > 86% and precision of 77%. All the six visual evaluators overestimated the severity. Just an evaluator showed high accuracy (92%). The evaluators’ precision varied from 22 to 92%. In the third trial set, it was evaluated the accuracy and precision of the different procedures of the software QUANT in the mensuration of the foliar area, diseased area and severity of Cercospora leaf spot (Cercospora coffeicola) in 58 leaves of coffee (Coffea arabica), using digital images at dpi. The severity was visually estimated by five evaluators. The diseased area was estimated with the meter of area Li-cor model LI- 3100 and through direct counting being observed the digital images obtained with graph paper squared 1 mm as bottom. The lesions were previously removed of the leaf. The estimates of areas with the procedure selection of areas with the magic rod were arbitrarily considered the standard of QUANT. These estimates of foliar area showed 99,3% of agreement with the ones of the LI-3100. In the estimates of the diseased areas, when compared with the method of the graph paper squared 1 mm, QUANT and the LI-3100 showed accuracy of 97.9% and 83.7%, respectively. Images with contrast previously challenged, according to three protocols, had the foliar areas estimated by three procedures of QUANT, that when compared with the standard procedure, they presented accuracy from 98.6 to 100% and precision of 99.99%. The procedures of threshold, discriminant functions and reduction for 32 colours showed high accuracy (96.6 to 99.6%) and precision (99.3%) on the estimations of diseased area. Estimating severity, the procedure reduction for 32 colours showed higher accuracy (99%) than discriminant functions and the interval of colour coordinates. The standard estimates of severity by QUANT didn't show good agreement with the ones of the LI-3100. Among five visual evaluators, only one showed high accuracy (97%) and precision (94%). Four users of QUANT estimated foliar area in 16 leaves, using the procedure of area selection with the magic rod, obtaining accuracy > 99%. Three users estimated diseased area using this procedure, and also the threshold, obtaining accuracy between 96 and 98%. QUANT makes available several algorithms to improve the contrast of the image, which allow that, even the symptoms where the eye human system has difficulty of distinguishing among healthy and diseased foliar area, they can be quantified by QUANT. It is proposed that QUANT should be adopted as standard method (golden method) in the mensuration of severity of plant diseases and defoliated (eaten) foliar area. Key words: herbivory, digital image, phytopathometry. / Tese importada do Alexandria