Orientador: Vanderlan da Silva Bolzani / Coorientador : Marilia Valli / Banca: Nivaldo Boralle / Banca: Amanda Danuello Pivatto / Resumo: Na presente pesquisa foram sintetizados vários derivados piridínicos objetivando a descoberta de constituintes com atividade antiparasitária potencial. Estes compostos foram planejados a partir do alcaloide (-)-espectalina isolado de Senna spectabilis (Fabaceae), empregando alguns processos usuais da química medicinal como a simplificação molecular, isosterismo clássico e funcional. Deste procedimento experimental, foram sintetizados 18 substâncias, sendo todas obtidas por meio de reações simples, a partir de compostos comerciais. Das substâncias sintéticas produzidas, 14 foram submetidas à avaliação para atividade em Trypanosoma cruzi, visando potenciais antichagásicos, e em Leishmania infantum para identificar potenciais leishmanicidas. Os compostos testados mostraram-se inativos na inibição destes protozoários. Contudo, dois análogos (48 e 52) apresentaram atividade inibitória das cepas de Plasmodium falciparum, com CI50 = 5,0 µM e índice de seletividade bastante interessante (IS >50). / Abstract: In the present research, several pyridine derivatives were synthesized aiming at the discovery of new constituents with potential antiparasitic activity. All compounds were planned from the (-)-spectaline alkaloid isolated from Senna spectabilis (Fabaceae), employing some usual medicinal chemistry procedures, such as molecular simplification, classical and functional isosterism. From this experimental procedure, 18 compounds were synthesized, and all of these were obtained by means of simple reactions, from commercial compounds. Of the synthetic substances produced, 14 were evaluated for activity in Trypanosoma cruzi, aimed at the search for potential antichagasics, and against Leishmania infantum to identify potential leishmanicidal derivatives. All compounds tested were inactive to the inhibition of these protozoa. However, two analogues (48 and 52) showed inhibitory activity against Plasmodium falciparum strains, with IC50 = 5.0 μM and an interesting selectivity index (IS> 50). / Mestre

Orientador: Vanderlan da Silva Bolzani / Banca: Jairo Kenupp Bastos / Banca: Patrícia Sartorelli / Resumo: O presente trabalho teve como objetivo o estudo químico da fração diclorometânica das folhas de Senna multijuga, visando o isolamento, purificação e elucidação estrutural de alcalóides piridínicos com potencial farmacológico. Inicialmente foi preparado o extrato hidroalcóolico das folhas, o qual foi submetido à partição líquido/líquido com hexano, diclorometano e acetato de etila. As quatro frações obtidas foram avaliadas por CCD, sendo a fração diclorometânica a de maior concentração alcaloídica. Essa fração foi submetida à extração ácido/base e a fração alcaloídica submetida à CCD preparativa de sílica, que foi desenvolvida com uma mistura dos solventes hexano:CHCl3:AcOEt (1,5:2:6,5), de onde foram isolados cinco alcalóides que apresentaram absorção na região do ultravioleta a 254 e 286 nm. Desta separação obteve-se dois alcalóides puros, 7'-multijuguinona (5), 12'-hidroxi-7'-multijuguinona (2), e os demais foram purificados por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE): 4'-multijuguinato de metila (3), 7'- multijuguinol (4a e 4b) e 12'-hidroxi-7'-multijuguinol (1a e 1b). Estas substâncias tiveram suas estruturas elucidadas pelo uso dos experimentos de Ressonância Magnética Nuclear (RMN) e Espectrometria de Massas com ionização por eletrospray (EM). A partir destas análises foi possível determinar a estrutura de sete substâncias, sendo todas inéditas na literatura. As substâncias apresentaram atividade anticolinesterásica moderada, o que justifica a importância de estudos com metabólitos secundários. Os pares 1a e 1b e 4a e 4b isolados apresentam isomeria que ainda não determinada. Pelas análises do perfil alcaloídico determinado no estudo sobre a espécie, pode-se constatar que os demais órgãos também acumulam alcalóides, porém, em concentrações diferentes, prevalencendo um ou dois deles. / Abstract: This present work deals with the chemical study of the dichloromethane fraction of the Senna multijuga leaves, aiming the isolation, purification and structural elucidation of the new bioactive pyridine alkaloids, which can be useful for further pharmacological evaluation. The leaves ethanol extract was subjected a liquid/liquid partitions with hexane, dichloromethane and ethyl acetate, resulting in four fractions, which were evaluated for TLC, being the dichloromethane the fraction with the highest concentration of alkaloids. This fraction was subjected to acid/basic extraction, and the alkaloidal fraction (1.42 g) was subjected to silica preparative TLC, and eluted with a solvent system: n-hexane:CHCl3:AcOEt (1.5:6.5:2), which were isolated five alkaloids. From this procedures were obtained alkaloids, 7'-multijuguinone (5), 12'-hydroxyl-7'- multijuguinone (2) and the resulting mixture was further purified by HPLC yielding methyl 4'-multijuguinate (3), 7'-multijuguinol (4a e 4b) and 12'-hydroxyl-7'- multijuguinol (1a e 1b). The structure of all alkaloids were determined by RMN and mass spectral data analysis resulting in seven new moderate acetylcholinesterase inhibitor derivatives. The alkaloids pairs, 1a;1b and 4a;4b, are isomeric mixtures, not identified yet. Through the alkaloid profile has been established after several data accumulated from this plant, it was observed that others organs also accumulate the same alkaloids, but in different concentration prevailing one or two alkaloids. / Mestre

The thesis explored the use of different sorbent materials in solid phase extraction method development. The methods included the use of the polymeric Agilent Bond Elut Plexa solid phase extraction and electrospun polymer-silica composite sorbents for clean-up and preconcentration. Sample clean-up for alkaloids (hydrastine and berberine) in goldenseal, Hydrastis canadensis and flavonoids (quercetin, kaempferol and isorhamnetin) in Ginkgo biloba was achieved using Bond Elut Plexa SPE sorbent. Clean-up of flavonoids in Ginkgo biloba was also achieved using electrospun polymer-silica composite (polystyrene-silica, polyacrylonitrile-silica and nylon 6-silica) sorbents. All analysis of flavonoids and alkaloids was carried out using an Agilent 1200 Series HPLC coupled with a diode array detector. Good peak separation was achieved in less than 6 min employing an Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 column (4.6 x 75 mm, 3.5 μm) at 35⁰C. The mobile phases employed were 0.1% phosphoric acid/methanol gradient and 0.5% phosphoric acid/methanol (40:60) for alkaloids and flavonoids respectively. The calibration curves exhibited linearity up to 120 μg mL⁻¹ with correlation coefficients of more than 0.9980. The recoveries ranged from 73-109% with relative standard deviation of less than 5% for all analytes. Agilent Chem Elut supported liquid extraction was employed for the development of a sample preparation method for the determination of 24 banned aromatic amines from azo dyes in textile following the EU standard method EN 14362-1:2003 (E) and the Chinese standard method GB/T 17592-2006. The supported liquid extraction was effective in the extraction of the aromatic amines from textile (cotton, wool and polyester/cotton [80%:20%]). Most of the recoveries obtained were conforming to the minimum requirements set in the EN 14362-1:2003 (E) standard method and the relative standard deviations were less than 15%. Good peak separation was obtained within 70 min run time using the Agilent Zorbax SB-Phenyl column (4.6 mm x 250 mm, 5-micron) or the Agilent DB-35 MS (J & W) (30 m x 0.25 mm, 0.25 μm film thickness. It was demonstrated that the polymeric Agilent Bond Elut Plexa, electrospun nanofibers and diatomaceous earth were effective in extraction of alkaloids, flavonoids and aromatic amines in different matrices. The developed methods were simple, rapid and reproducible.

As doenças neurodegenerativas tais como as doenças de Alzheimer, Parkinson e desordens cerebrovasculares constituem-se em uma das principais causas de morbidade e de mortalidade na vida adulta. Além disso, o desequilíbrio entre os sistemas de geração e de proteção antioxidante celulares, chamado de estresse oxidativo, desempenha um papel importante nos danos neuronais causados pelos processos isquêmicos, provocando alterações funcionais em macromoléculas e promovendo a lipoperoxidação de membranas. Substâncias com dupla atividade anticolinesterásica e antioxidante vêm sendo consideradas como uma nova abordagem terapêutica para o tratamento farmacológico da doença de Alzheimer, incentivando a investigação e o estudo de produtos naturais para o desenvolvimento de fármacos novos e eficientes. Nesse estudo empregamos um modelo in vitro de fatias hipocampais de ratos, submetidas à privação de oxigênio e glicose (POG) e os métodos de avaliação da toxicidade dos alcalóides empregados foram a liberação da enzima lactato desidrogenase (LDH) citosólica e redução do MTT (viabilidade mitocondrial). Os alcalóides boldina e vincamina promoveram um aumento de 40 % na liberação de LDH nas fatias que sofreram POG na concentração de 100 μM, além de aumentos significativos na liberação desta enzima também nas fatias controles. Psicolatina e reserpina também tiveram efeitos neurotóxicos. Foi verificado que a POG em fatias hipocampais promove uma diminuição nas medidas do potencial antioxidante total (TRAP) e reatividade antioxidante total (TAR), de 63 % e 16,5 %, respectivamente, além de causar um aumento nos níveis de malonodialdeído liberado pelas fatias, detectado pelo ensaio de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBA-RS). Entretanto, este efeito foi revertido pela presença de boldina nas concentrações de 10 μM e de 50 μM. Este mesmo alcalóide, com reconhecida atividade antioxidante, também demonstrou ser um seqüestrador de radicais peroxila mais potente que o padrão Trolox. Além disso, os alcalóides indólicos monoterpênicos coronaridina, venalstonina, andrangina, vincadiformina e voacristina, além da boldina, exibiram potentes atividades antioxidante e anticolinesterásica em ensaios autobiográficos in vitro. / Neurodegenerative disorders, such as Alzheimer, Parkinson and cerebrovascular diseases are one of the major causes of morbidity and mortality in the middle aged and the elderly. Also, the imbalance between the activity of free radicals generation and scavenging systems, called oxidative stress, plays a important role in the neuronal damages caused by ischemia, leading to functional alterations in macromolecules and promoting lipoperoxidation in membranes. Acetylcholinesterase inhibitors and antioxidant compounds have been extensively investigated as new pharmacological strategies for the symptomatic treatment of Alzheimer disease. In this way, natural products are potentially important in an attempt to develope newer and safer drugs. In the present study, we selected the in vitro model of oxygen and glucose deprivation (OGD) in hippocampal slices and the methods used to assess the neurotoxicity of the alkaloids were cellular lactate dehydrogenase (LDH) release and reduction of MTT salt (mitochondrial activity). Both alkaloids boldine and vincamine 100 μM promoted a 40 % increase in LDH release in POG slices, as well as significant increases in the activity of this enzyme in control slices. Psychollatine and reserpine had also neurotoxic effects. It was also verified that OGD decreased the measurements of total antioxidant potential (TRAP) in 63 % and the total antioxidant reactivity (TAR) levels in 16.5 %, as well as an increase in the malondialdehyde levels by slices, which was detected by thiobarbituric acid-reactive substances (TBA-RS). However, this effect was prevented by the presence of boldine 10 μM and 50 μM. This alkaloid is a known antioxidant and it displayed a potent scavenger activity for peroxyl radicals, when compared with Trolox. Another finding is that the monoterpene indole alkaloids coronaridine, venalstonine, andrangine, vincadifformine, voacristine and also boldine exhibited both potent antioxidant and acetylcholinesterase inhibitor activities in in vitro autobiographic assays.

A família Amaryllidaceae é reconhecida como fonte de compostos bioativos, sendo o isolamento e elucidação estrutural de seus alcaloides, aliado às avaliações farmacológicas, um tema importante. Estudos mostram que o mecanismo de ação da citotoxicidade desses alcaloides é seletivo e depende da linhagem celular. Trichomonas vaginalis é um protozoário parasita que causa a tricomonose, a doença sexualmente transmissível de origem não viral mais comum no mundo. Além de ser considerado um importante organismo patogênico, suas características bioquímicas peculiares, como a ausência de mitocôndrias, torna o tricomonas um adequado modelo para estudos de vias metabólicas de morte celular. A atividade anti-T. vaginalis dos alcaloides de Amaryllidaceae licorina e candimina, assim como o potencial citotóxico de diaminas sintéticas, foram investigados. Estudos de semi-síntese com a licorina também foram desenvolvidos. Nossos resultados mostraram que a licorina e candimina induzem importantes alterações na ultraestrutura dos parasitos e nenhum marcador morfológico clássico de apoptose, como corpos apoptóticos, foi observado. Além disso, nem a fragmentação do DNA genômico nem a exposição de resíduos de fosfatidilserina foram detectadas. Por outro lado, ambos os alcaloides atrasaram o ciclo celular do parasito e inibiram a atividade das enzimas NTPDase e ecto-5`- nucleotidase, importantes na manutenção da relação parasito/hospedeiro. O alcaloide pró-apoptótico licorina e a candimina induziram morte celular no parasito amitocondriado T. vaginalis por um mecanismo de ação que não cumpre as características morfológicas de apoptose. Entretanto, similaridades com a morte celular denominada paraptose foram observadas: intensa vacuolização citoplasmática periférica aliada à integridade nuclear. Considerando que a citotoxicidade dos alcaloides pode ser considerada moderada (250 μM), derivados de poliaminas foram escolhidos para desenvolver estudos de semi-síntese com a licorina e aperfeiçoar a atividade do alcalóide. Poliaminas são moléculas catiônicas de estruturas simples, essenciais para a diferenciação celular e regulação do ciclo celular. Neste trabalho demonstrou-se a síntese e avaliação da atividade anti-T. vaginalis de uma série de derivados de diaminas, dos quais N-hexadecil-1,4-butanodiamina apresentou CIM igual a 2,5 μg/ml, duas vezes mais ativo em comparação ao metronidazol, utilizado como composto de referência. A hibridização molecular da licorina com as diaminas foi prejudicada pela instabilidade da licorina mesilada, intermediário chave para prosseguir a rota sintética. No entanto, seis derivados inéditos da licorina, todos ésteres, aromáticos ou alifáticos, foram sintetizados. / Amaryllidaceae family has proven to be plentiful sources for therapeutic agents. Hence, the isolation, biology and chemistry of the Amaryllidaceae alkaloids make an important subject. Investigations on cytotoxic mechanisms of these alkaloids indicate a promising selective cell-type-dependent cytotoxicity. Trichomonas vaginalis is a parasite that causes trichomonosis, the number one non-viral sexually-transmitted disease in the world. However, whilst T. vaginalis is a prime pathogenic target, its lack of mitochondria makes it a suitable biochemical model to study cell death-related mechanisms. Anti-T. vaginalis activity of lycorine and candimine alkaloids were investigated, as well as the cytotoxic potential of diamine analogs. Finally, studies on lycorine semi-synthesis were developed. Our results showed that, after lycorine and candimine treatment, no hallmark suggestive of apoptosis were observed, such as apoptotic bodies, but instead several important ultrastructural alterations, assessed by electronic microscopy. Additionally, DNA fragmentation and membrane phosphatidylserine exposure were not detected. Analysis showed that lycorine and candimine arrested T. vaginalis cell cycle and inhibited the NTPDase and ecto-5`- nucleotidase activities, important enzymes on parasite/host relationship. The proapoptotic alkaloid, lycorine, and the lactone alkaloid, candimine, caused cell death in the amitochondriate T. vaginalis by a mechanism of action that fails to completely fulfill the criteria for apoptosis. However, some similarities were observed to paraptotic cell death, like intense cytoplasmic periferic vacuolization and nuclear integrity. Since the cytotoxic potential of the alkaloids was moderated (250 μM), the polyamines analogs were chosen to investigate the anti-T. vaginalis activity and to develop semi-synthesis studies with lycorine in order to improve the alkaloid cytotoxicity. Polyamines are simple structured aliphatic amines essential for cell proliferation and differentiation and it has been shown that interfering with their function or biosynthesis the cellular growth can be blocked. Our results showed the synthesis of a series of diamine derivatives, and N-hexadecil-1,4-butanediamine was found to be the most active compound in vitro against T. vaginalis with MIC of 2.5 μg/mL, twice more active in comparison to the reference drug metronidazole. The molecular hybridization of lycorine with diamines was impaired by the unsuccessful synthesis of the lycorine mesilate, a key intermediary on the synthetic route. However, six new lycorine ester derivatives were synthesized.

Os produtos naturais têm se destacado ao longo dos anos como princípios ativos eficazes e muitos deles são utilizados até hoje no tratamento de certas doenças. Considerando as informações advindas da medicina popular, o vasto potencial terapêutico de alcalóides e a quimiotaxonomia dos vegetais, a família Amaryllidaceae se candidata a celeiro de novas moléculas bioativas. Verifica-se que os compostos alcaloídicos isolados a partir desta família apresentam atividades biológicas bem reportadas, tais como, antitumoral, antiviral, antimalárica, antiinflamatória e anticolinesterásica. Assim, o objetivo deste trabalho foi o isolamento de alcalóides a partir de Hippeastrum morelianum Lem. e Hippeastrum santacatarina (Traub) Dutilh, além da investigação das atividades antioxidante, anticolinesterásica e antimicrobiana dos produtos isolados, bem como dos extratos obtidos. O material de ambos vegetais foi separado em bulbos, raízes e folhas e submetido à extração ácido-base, clássica para alcalóides.Com auxílio de métodos cromatográficos a partir de H. morelianum foram isolados doze produtos, com destaque para o alcalóide candimina (110 mg) sendo este trabalho a fonte pioneira dos dados espectroscópicos completos deste alcalóide, bem como das primeiras avaliações farmacológicas do mesmo. A partir de H. santacatarina foram isolados três produtos, com destaque para a licorina (100 mg). Todos os extratos avaliados, de ambos vegetais, mostraram potenciais efeitos antioxidante (10 mg/ml) e anticolinesterásico (0,1 mg/ml), porém não antimicrobiano. Quanto aos produtos isolados destaca-se a atividade antioxidante da licorina, verificada pelo método da inativação do radical 2,2-difenil-1-picrilidrazila (DPPH), com IC50: 112,4 μg/ml. Entretanto, no screening de atividade anticolinesterásica todos os isolados de H. morelianum, exceto o produto A12, apresentaram resultado positivo com 5 μg de amostra. Para H. santacatarina, a licorina, assim como os isolados B2 e B3, demonstraram atividade anticolinesterásica, também com 5 μg de amostra. Finalmente, não foi detectada atividade antimicrobiana para licorina e candimina, alcalóides majoritários em suas plantas de origem, até 0,5 mg/ml. / Natural products have been employed over the years as active compounds, and many of them are currently used in the treatment of certain diseases. Considering the information stemming from the popular medicine, the vast therapeutic potential of alkaloids and quimiotaxonomy of plants, the family Amaryllidaceae is known as the source of new bioactive molecules. The alkaloids isolated from this family have many biological activities, such as antitumor, antiviral, antiplasmodial, antiinflammatory and analgesic. Considering the potential pharmacological activity, the aim of this work was to isolate alkaloids from Hippeastrum morelianum Lem. and Hippeastrum santacatarina (Traub) Dutilh. In addition, we investigated the antioxidant, antimicrobial and anticolinesterasic activities of the isolated products and of the extracts. The material of both plants was separated into bulbs, roots and leaves (the last one only from H. morelianum), and it was extracted through the acid-basic method, classical to alkaloids. By chromatographic methods, twelve products were isolated from H. morelianum, with emphasis for the candimine alkaloid (110 mg). Importantly, this is the first report on the complete spectroscopic data and the former evaluations of this alkaloid. Sequentially, tree products were obtained from H. santacatarina, with emphasis on the licorine alkaloid (100 mg). All extracts evaluated, in both plants, demonstrated antioxidant (10 mg/ml) and anticolinesterasic (0,1 mg/ml) potentials, although not antimicrobial. Taking in account the isolated products, it is of interest the antioxidant activity of licorine, revealed by the DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) method, with IC50: 112,4 μg/ml. On the other hand, all isolates of H. morelianum showed anticolinesterasic activity, except the product A12, at 5 μg. For H. santacatarina, licorine, as well as isolates B2 and B2 showed anticolinesterasic activity, too at 5 μg. Finally, it was not detected antimicrobial activity for the alkaloids licorine and candimine at 0,5 mg/ml or less.

Submitted by Edileide Reis (leyde-landy@hotmail.com) on 2013-04-23T11:18:48Z No. of bitstreams: 1 Cinara.pdf: 2829393 bytes, checksum: e898f024443403b7fb6e23d27af5b91e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-23T11:18:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cinara.pdf: 2829393 bytes, checksum: e898f024443403b7fb6e23d27af5b91e (MD5) Previous issue date: 2006 / Este estudo teve por objetivo contribuir para caracterização da composição química do caule e frutos de Zanthoxylum tingoassuiba St. Hil., espécie popularmente conhecida como casca preciosa, tinguaciba e limão-bravo; e utilizada na medicina popular, como antiespasmódico, relaxante muscular, analgésico, diurético e antiinflamatório. Um espécime de Z. tingoassuiba foi coletado no distrito de Jaíba, município de Feira de Santana ? BA e submetido às técnicas de extração convencionais como partição líquido-líquido e cromatografia em colunas de sílica-gel, obtendo-se 14 substâncias dos extratos orgânicos. A partir dos extratos hexânico e metanólico do caule foram identificados: 2 alcalóides - norqueleritrina e arnotianamida, 1 lignana - sesamina e 4 terpenóides - lupeol, a-bisabolol, acetato de citronelila e espatulenol. A extração diclorometânica e metanólica dos frutos possibilitou a caracterização de 5 cumarinas -xanthotoxina, isopimpinelina, prenilumbeliferona, imperatorina e aurapteno, 1 protoalcalóide - n-metil-antranilato de metila e 2 esteróides - estigmasterol e b-sitosterol. As estruturas dos compostos isolados ou obtidos em mistura foram determinadas por ultravioleta, espectrometria de massas e RMN de 1H e 13C, comparados com dados da literatura. As cumarinas lineares e os alcalóides benzofenatridínicos são freqüentemente associados com as Rutaceae mais primitivas, as proto-Rutaceae (os gêneros Zanthoxylum, Phellodedron e Tetradium) e podem ser considerados marcadores quimiotaxônomicos deste grupo. O perfil químico da Zanthoxylum tingoassuiba estudada, portanto, se assemelha com outras espécies do gênero, bem como da família Rutaceae. / Salvador

A doença de Alzheimer é uma doença neurodegenerativa que causa perdas de memória, danos cognitivos e no comportamento, sendo considerada uma das causas principais de demência entre a população. Esta doença é caracterizada por uma intensa perda neuronal colinérgica, de forma que tanto os inibidores da enzima acetilcolinesterase (AChE) quanto compostos antioxidantes possam ser empregados como neuroprotetores. Nesse sentido, plantas da família Lycopodiaceae vêm sendo estudadas como fonte de novos alcalóides anticolinesterásicos desde a descoberta da huperzina A, isolada a partir da planta chinesa Huperzia serrata. Este trabalho foi realizado com o objetivo de caracterizar e isolar os alcalóides majoritários de Huperzia acerosa, H. heterocarpon, H. quadrifariata, H. reflexa, Lycopodiella cernua, Lycopodium clavatum e L. thyoides, de ocorrência no estado do Rio Grande do Sul, bem como avaliar as atividades anticolinesterásicas e antioxidantes in vitro e in vivo para os extratos. Extratos de alcalóides totais de espécies de L. clavatum e L. thyoides ocorrentes no Brasil e Argentina foram comparados quanto ao seu conteúdo químico, aliado à atividade anticolinesterásica. A atividade inibitória para AChE e butirilcolinesterase (BuChE) dos alcalóides isolados também foi ensaiada, juntamente com a determinação das propriedades citotóxicas exercidas pelos extratos sobre uma linhagem de gliomas C6. Todos os extratos de alcalóides foram analisados através de CG-EM, sendo os perfis de fragmentação dos compostos comparados através de dados da literatura. L. clavatum e L. thyoides possuem perfil químico similar, com licopodina e acetildiidrolicopodina como alcalóides principais, enquanto que L. cernua possui apenas dois alcalóides, cernuína e licocernuína. Os extratos de alcalóides de H. acerosa, H. quadrifariata e H. reflexa também foram analisados, sendo detectados tanto compostos do grupo licopodano quanto do grupo flabelidano, juntamente com outros alcalóides cujas estruturas ainda são desconhecidas. Os alcalóides encontrados em H. heterocarpon não puderam ser elucidados a partir de dados de fragmentação, uma vez que eles não coincidiram com nenhum perfil da literatura. Nesse estudo verificamos que dentre os extratos analisados, H. quadrifariata e H. reflexa promoveram a maior inibição para a enzima AChE obtida de eritrócitos humanos, com IC50 de 2,0 e 0,11 μg/mL, respectivamente, enquanto que H. heterocarpon foi o único extrato com maior seletividade para a BuChE (IC50 = 8,3 μg/mL). Além disso, dentre os alcalóides isolados licopodina, acetildiidrolicopodina, cernuína, licocernuína e clavolonina, apenas acetildiidrolicopodina e cernuína possuem inibição importante, sendo que nenhum deles possui efeito butirilcolinesterásico significativo. Também foi estimada a atividade anticolinesterásica para os extratos de alcalóides totais de L. clavatum e L. thyoides empregando-se homogenatos de córtex, hipocampo e estriato de ratos como fonte enzimática, sendo determinadas suas curvas de inibição com distintos tempos de incubação em uma faixa de concentrações. Também foi verificada para os dois extratos uma inibição do tipo competitiva/não-competitiva, bem como seu perfil antioxidante in vitro pelos métodos de descoloração do radical DPPH, degradação da 2-deoxirribose, TRAP e óxido nítrico. Após um tratamento agudo em camundongos de 14 meses com os extratos, foram verificados os efeitos antioxidantes através do método de TBA-RS, e para as enzimas catalase e superóxido dismutase. Do mesmo modo, verificamos que os mesmos extratos promoveram uma diminuição na atividade da acetilcolinesterase, quando administrados por via intraperitoneal. Nessa metodologia, os extratos mais potentes foram H. quadrifariata e H. reflexa, corroborando o efeito in vitro encontrado para os mesmos. Os extratos purificados de alcalóides de L. clavatum e L. thyoides com habitat no Brasil e Argentina foram comparados quanto ao seu perfil químico e biológico. Nesse estudo, foi verificado que os alcalóides licopodina e acetildiidrolicopodina são os compostos majoritários para todas as espécies, tendo L. clavatum maior atividade anticolinesterásica em relação a L. thyoides, tanto a espécie brasileira quanto a espécie argentina. / Alzheimer’s disease is a neurodegenerative disease which causes memory loss, cognitive and behavioral damages, considered to be the leading cause of dementia among the elderly. This disease is characterized for an intense cholinergic loss, and the use of acetylcholinesterase (AChE) inhibitors together with antioxidant compounds as neurprotectors is a strategy for the treatment. In this sense, Lycopodiaceae plants are well studied as a source of new anticholinesterasic alkaloids since the discovery of huperzine A, isolated from Chinese Huperzia serrata. This work was conducted with the objective of characterize and isolate the main alkaloids from Huperzia acerosa, H. heterocarpon, H. quadrifariata, H. reflexa, Lycopodiella cernua, Lycopodium clavatum and L. thyoides, with occurrence in Rio Grande do Sul state, and also evaluate the anticholinesterasic and antioxidant activities in vitro and in vivo for the extracts. Alkaloidal extracts from L. clavatum and L. thyoides species with habitat in Brazil and Argentina were compared to their chemical content, together with their anticholinesterasic activity. The inhibitory effect for AChE and butyrylcholinesterase (BuChE) for the isolated alkaloids was also evaluated, together with the determination of the cytotoxic properties exherced by the extracts in a gliome C6 cell line. Every alkaloidal extract was analyzed by means of GC-MS, and the fragmentation patterns for the compounds were compared with those from literature. L. clavatum and L. thyoides have similar chemical profile, with lycopodine and acetyldihydrolycopodine as main alkaloids, while L. cernua has only two alkaloids, cernuine and lycocernuine. The alkaloidal extracts of H. acerosa, H. quadrifariata e H. reflexa were also analyzed, and compounds from lycopodane and flabellidane groups were detected, along with other alkaloids whose structures are still unknown. The alkaloids found in H. heterocarpon could not be elucidated with fragmentation dates so far, since they did not coincide with those found in literature. We also verified that among the extracts, H. quadrifariata and H. reflexa promoted a higher inhibition for AChE obtained from human erythrocytes, with a IC50 value of 2,0 e 0,11 μg/mL, respectively, while H. heterocarpon extract was the only more selective for BuChE (IC50 = 8,3 μg/mL). Moreover, among the isolated alkaloid lycopodine, acetyldihydrolycopodine, cernuine, lycocernuine and clavolonine, only acetyldihydrolycopodine and cernuine possess an important inhibition, and none significantly inhibited butyrylcholinesterase. It was also assessed the anticholinesterase effect for the alkaloidal extracts of L. clavatum and L. thyoides employing cortex, hippocampus and striatum rat brain homogenates as enzymatic sources, being determined the incubation time-inhibition curves over a concentrations range. It was also verified for both extracts an inhibitory effect of the competitive/non competitive mixed type, as well as their in vitro antioxidant profile using the methods of DPPH radical decoloration, 2-deoxyrribose degradation, TRAP and nitric oxide. After an acute treatment in 14 months-aged mice, we verified the antioxidant effects though TBA-RS and also the enzymes catalase and superoxide dismutase. In the same way, we found out that the same extracts reduced the acetylcholinesterase activity when administered by intraperitoneal injection. Using this methodology, the most potent extracts were H. quadrifariata and H. reflexa, corroborating the in vitro effect found for them. The purified alkaloidal extracts of L. clavatum and L. thyoides with habitat in Brazil and Argentine were compared to their chemical and biological profile. In this study, we found out that lycopodine and acetyldihydrolycopodine are the main alkaloids found for all species, and L. clavatum possesses a better inhibition against AChE when compared to L. thyoides for both Brazilian and Argentinean collected species.

Kohelová E: Alkaloids of Amaryllidaceae family: isolation, structural identification, biological activity. II Diploma thesis, Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové, Department of Pharmaceutical Botany and Ecology, Hradec Králové, 2017, 77p. The aim of the diploma thesis was a preparation of alkaloidal extract from fresh bulbs of Narcissus cv. PROFESSOR EINSTEIN to izolate two Amaryllidaceae alkaloids by column and thin layer chromatography. Subsequently these alkaloids were subjected to structural MS and NMR analysis and tested for biological activity against human cholinesterases (HuAChE and HuBuChE) and for cytotoxic activity. In cooperation with the Faculty of Agrobiology, Food and Natural Resources, Czech University of Life Sciences Prague, antifungal and antimicrobial activities of alkaloids were tested, and in cooperation with Faculdade de Medicina da Universidade de Lisboa Portugal antimalarial activity of alkaloids was studied. Isolated substances were identified as galanthamine, caranine and pluviine. Pluviine was isolated in an amount allowing only structural analysis. In the test for determining cholinesterase inhibitory activity of caranine the following values were obtained: IC50, HuAChE = 320 ± 42 μM a IC50, HuBuChE = 486 ± 56 μM. Galanthamine (IC50,...

Marečková, L .: Biological activity of secondary plant metabolites VII. Alkaloids of Vinca minor L. Diploma thesis, Charles University, Faculty of Pharmacy in Hradec Kralove, Hradec Králové, Department of pharmaceutical botany and ecology, Hradec Králové 2018 There was prepared an extract from aerial parts of the plant Vinca minor L. This prepared extract was separated by the column chromatography into individual fractions. One chosen fraction was separated by TLC on silicagel. Two substances were isolated and they we identified by GC/MS and NMR as (-)-minovin and (+)-minovincin. These two substances were tested for their inhibition activity against human acetylcholinesterase (hemolysate of human erythrocytes) and butyrylcholinesterase (human plasma). Their inhibition activity was compared to standards which were Galanthamin, Huperzin A and Eserin. (+)-Minovincin did not show significant inhibitory activity against either enzyme (IC50 = AchE > 1000 µM, BuChE 655,05 ± 35,37 µM) and it is not suitable for further investigation. (-)-Minovin showed no significant activity against AChE (IC50 = 234,27 ± 63,40 µM), activity against BuChE (IC50 = 26,32 ± 2,52 µM) was higher than inhibitory akctivity of Galanthamin, but still relatively low for further investigation. The aim of this work was mainly the...