Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:40:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 341907.pdf: 2941980 bytes, checksum: 8c52d8ea4e77e367bfc2b8274c8299dd (MD5) Previous issue date: 2016 / O sistema renina-angiotensina é descrito classicamente como um sistema responsável pelo controle do balanço hidroeletrolítico e da pressão arterial, sendo o principal efetor a angiotensina II que ativa os receptores para angiotensina II do tipo 1 (AT1). Recentemente, foi descrita a presença de todos os componentes do RAS no sistema nervoso central (SNC), ampliando a busca por possíveis funções fisiológicas e farmacológicas do sistema no SNC. No presente estudo foi investigado o envolvimento do receptor AT1, através do uso de seu antagonista seletivo losartana, sobre as alterações comportamentais associadas ao envelhecimento e à doença de Parkinson (DP). Além disso, foi investigada uma possível interação proteína-proteína entre os receptores AT1 e os receptores A2A para adenosina no SNC. Inicialmente observamos que o tratamento crônico durante 22 dias com a losartana (50 mg/kg, i.p.) foi capaz de reverter os prejuízos relacionados ao envelhecimento observados em camundongos C57Bl/6 com 13 meses de idade nos testes do escore neurológico de severidade (ENS), labirinto em Y e localização de objetos. Não foram observadas diferenças significativas nos níveis dos receptores AT1 e AT2 no córtex pré-frontal dos camundongos com 3 ou 13 meses de idade. Considerando o envelhecimento como um fator de risco para o desenvolvimento de doenças neurodegenerativas, investigamos os possíveis efeitos neuroprotetores do tratamento com losartana (50 mg/kg, i.p.) durante 22 dias em camundongos C57Bl/6 de 6 meses de idade administrados com MPTP (1 mg por narina) pela via intranasal, um modelo animal da DP. O pré-tratamento com losartana foi capaz de prevenir a morte de neurônios dopaminérgicos na via nigroestriatal bem como as alterações comportamentais induzidas pela administração do MPTP nos testes do ENS, labirinto em Y e localização de objetos. Não foram observadas alterações nos níveis dos receptores AT1 e AT2 no estriado dos animais tratados com MPTP ou losartana. Em adição, através de uma série de experimentos de biologia molecular com a técnica de transferência de energia por ressonância bioluminescente e ensaio de ligação por proximidade, demonstramos pela primeira vez a ocorrência de heterodímeros dos receptores metabotrópicos AT1 e A2A em células HEK-293-T e no estriado de camundongos. Por fim, demonstramos que a administração de doses sub-efetivas de losartana e KW-6002 (antagonista seletivo dos receptores A2A para adenosina) apresentam efeitos sinérgicos, reduzindo a frequência de movimentos involuntários mandibulares induzidos pela reserpina (1 mg/kg, s.c.) em camundongos Swiss adultos. Em conjunto, os resultados do presente estudo fornecem novas evidências do envolvimento dos receptores AT1 sobre os prejuízos comportamentais observados no envelhecimento e na DP. Além disso, o heterodímero dos receptores AT1/A2A caracterizado no presente estudo pode representar um novo alvo farmacológico para o tratamento de diversas doenças do SNC.<br> / Abstract : The classic renin-angiotensin system (RAS) is mainly associated with cardiovascular functions and body water regulation, with angiotensin II as its major effector acting through angiotensin II type AT1 receptor (AT1). It was recently disclosed the presence of all RAS components in the central nervous system (CNS), highlighting the putative physiological and pharmacological functions of RAS in the CNS. In this study, we investigated the involvement of the AT1 receptor using the selective antagonist losartan on the behavioral changes associated with aging and Parkinson's disease (PD) in mice. Moreover, a possible protein-protein interaction between the AT1 receptor and adenosine A2A receptors in the CNS was investigated. Initially we found that chronic treatment during 22 days with losartan (50 mg / kg, i.p.) was able to reverse the age-related behavioral deficits observed in C57BL/6 mice with 13 months-old of age in the neurological severity score (NSS), Ymaze and object location tests. No significant differences were observed in AT1 and AT2 receptors levels in the prefrontal cortex of mice with 3 or 13 months of age. Since aging is a major risk factor to the development of neurodegenerative diseases, we investigated possible neuroprotective effects of losartan (50 mg / kg, i.p.) treatment during 22 days in C57BL/6 mice with 6 months of age. The neurotoxin MPTP was administered by the intranasal route in a dose of 1 mg per nostril, used as an animal model of PD. The pre-treatment with losartan was able to prevent the dopaminergic neuronal death in the nigrostriatal pathway as well as the behavioral impairments induced by MPTP administration evaluated in NSS, Y-maze and object location tests. No changes in the striatal levels of AT1 and AT2 receptors was observed following the treatments with MPTP and losartan. In addition, through a series of molecular biology studies using bioluminescence resonance energy transfer and proximity ligation assays, we demonstrated for the first time the occurrence of heterodimers of metabotropic AT1 and A2A receptors in HEK-293-T cells and in the striatum of mice. Finally, we demonstrated that the coadministration of sub-effective doses of losartan and KW-6002 (a selective A2A receptor antagonist) induced synergistic effects by reducing the vacuous chewing movements induced by reserpine (1 mg / kg, s.c.) in Swiss adult mice. Altogether, these results provide new evidence of the role of AT1 receptors on the behavioral impairments associated with aging and PD. Furthermore, the AT1/A2A receptor heterodimer characterized in this study may represent a novel target for pharmacological treatment of various CNS disorders.

Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. / Made available in DSpace on 2012-10-18T17:22:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-09T01:31:09Z : No. of bitstreams: 1 147002.pdf: 1425789 bytes, checksum: 53f60dfeb07e444a00cc449cd88f68b7 (MD5)

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / This study was designed to investigate the role played by AngII receptors (AT1 and AT2) in follicle development and maturation of bovine oocytes. Receptor expression was assessed by the RT-PCR technique using preantral (secondary), 3-8, 6-7, and 12mm follicles. Secondary preantral follicles did not express AngII receptors. Antral follicles expressed AngII receptors distinctly. AT1 receptors were expressed in teca (TC) and granulose cells (GC) from follicles greater than 6mm. AT2 receptors were expressed in TC and GC from follicles >6mm. AT2 receptors were expressed in TC in follicles >3mm. Only follicles >12mm expressed AT2 receptors in GC. The investigation of oocyte maturation was evaluated in cumulus-oocyte complexes (COCs) from 2-8mm follicles obtained in slaughterhouses. The treatments were carried out using the co-culture of 20 COCs with 8 follicle hemi-sections for 12h in 20μL TCM199 plus 1mg/mL polyvinyl alcohol (negative control group: CON(-)), supplemented with AngII (AngII group), with AngII plus Losartan (LOS group), and with AngII plus PD123319 (PD123319 group). For the positive control group (CON(+)), COCs were cultured without follicle hemi-sections. Oocytes were analyzed for maturation stage in germinal vesicle (GV), germinal vesicle breakdown (GVB), and metaphase I (MI). The oocyte rate kept in GV observed in the groups cultured with receptor inhibitors AT1 (LOS: 65.5%, 78/119) and AT2 (PD123319: 54.6%, 53/97) was greater (p<0.05) than that of CON(+) (10.8%, 12/111) and AngII (22.7%, 25/110) groups, but no difference was seen as compared with CON(-) (50%, 53/106). In the MI analysis, the oocyte percentage that reached this stage in groups CON(+) and AngII (62.1%, 69/111 and 52.2%, 58/111, respectively) was greater (p<0.05) than that seen for CON(-), LOS and PD123319 (13.2%, 14/106; 0.8%, 1/119; 1.03%, 1/97, respectively). TC and GC expressed AngII receptors (AT1 and/or AT2) before antrum formation, according to follicle size. Both AT1 and AT2 receptors take part in the resumption and progression of meiosis in bovine oocytes. / O objetivo do presente trabalho foi investigar a participação de receptores de AngII (AT1 e AT2) no desenvolvimento folicular e maturação de oócitos bovinos. A expressão dos receptores foi avaliada, por meio de RT-PCR em folículos pré-antrais (secundários) e folículos antrais de 3-4mm, 6-7mm e >12mm de diâmetro. Para verificação da maturação de oócitos foram utilizados CCOs de folículos com diâmetro entre 2-8mm obtidos em matadouro. Os tratamentos foram conduzidos com o co-cultivo, por 12h, de 20 CCOs com oito metades foliculares em 200μl de TCM-199 acrescido de 1mg/ml de álcool polivinílico (grupo controle negativo (CON(-)), suplementados com AngII (grupo AngII), AngII mais Losartan (grupo LOS) e AngII mais PD123319 (grupo PD123319). No controle positivo (CON(+)), os CCOs foram cultivados sem metades foliculares. Os oócitos foram analisados quanto a fase de maturação em VG, RVG e MI. Folículos pré-antrais secundários não expressaram receptores para AngII. Folículos antrais expressaram receptores para AngII de forma diferenciada. Receptores AT1 foram expressos em CT e CG em folículos a partir de 6 mm. Receptores AT2 foram expressos em CT a partir de folículos de 3mm, e somente folículos maiores que 12mm expressaram receptores AT2 nas CG. O percentual de oócitos mantidos em VG, observados nos grupos submetidos ao cultivo com inibidores dos receptores AT1 (LOS, 65,5%; 78/119) e AT2 (PD123319, 54,6%; 53/97) foi superior (p<0,05) ao observado nos grupos CON(+) (10,8%; 12/111) e AngII (22,7%; 25/110), porém não houve diferença com relação ao grupo CON(-) (50%; 53/106). Na avaliação da MI, o percentual de oócitos que atingiram esse estádio nos grupos CON(+) e AngII (62,1%; 69/111 e 52,2%; 58/111, respectivamente) foi superior (p<0,05) aos grupos CON(-), LOS e PD123319 (13,2%; 14/106, 0,8%; 1/119 e 1,03%; 1/97, respectivamente). CT e CG expressam receptores para AngII (AT1 e/ou AT2) a partir da formação do antro, de acordo com o tamanho folicular. Ambos os receptores AT1 e AT2 participam do reinício e progressão da meiose de oócitos bovinos.

A estimulação neonatal tem sido utilizada há algumas décadas como modelo experimental para analisar os mecanismos pelos quais variações precoces do ambiente do animal afetam o desenvolvimento de sistemas neurais, dando origem a alterações comportamentais e neuroendócrinas estáveis. Uma das alterações mais características é a diminuição do medo a ambientes novos e uma resposta menos acentuada da secreção de glicocorticóides pela supra-renal a estímulos estressantes. O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos da manipulação neonatal sobre o sistema angiotensinérgico, sobre a regulação hídrica e o desenvolvimento renal, visto que os ratos apresentam os rins e o trato urinário imaturos ao nascimento e seu desenvolvimento depende de angiotensina II. Investigamos aspectos do desenvolvimento e também da função renal em ratos machos de diferentes idades (11, 45 e 90 dias). Para isso, ratos Wistar foram divididos em dois grupos, dos quais um deles foi submetido a 1 minuto diário de manipulação durante os primeiros 10 dias de vida (grupo manipulado), enquanto o outro grupo não sofreu nenhum tipo de intervenção (grupo não manipulado). Aos 11 dias, os animais foram pesados e em seguida decapitados para coleta de sangue, seguido de extração e pesagem dos rins e das glândulas supra-renais. Os animais de 45 e de 90 dias permaneceram por um período de 24h em gaiolas metabólicas para análise da ingestão hídrica basal, do volume urinário e para posterior cálculo da taxa de filtração glomerular (TFG). Em seguida, estes mesmos animais foram pesados e logo decapitados para coleta de sangue e extração de rins e glândulas supra-renais para serem pesados. Nos animais de 11 dias, não observamos diferenças no peso corporal, peso renal, peso das supra-renais e na espessura de córtex renal entre os grupos manipulado e não manipulado. Os animais manipulados de 11 dias exibiram um aumento nas concentrações plasmáticas de angiotensina II, associada a uma redução de corticosterona plasmática, quando comparados aos animais não manipulados de mesma idade. Nos animais de 90 dias manipulados, quando comparados aos não manipulados, observamos uma redução de peso renal, embora não tenhamos observado redução da espessura do córtex renal. Esses animais apresentaram também uma redução de ingestão hídrica basal e de volume urinário, bem como redução de TFG. Ainda, apresentaram concentrações reduzidas de angiotensina II plasmática, acompanhadas de redução na concentração de corticosterona. Não foram encontradas diferenças significativas em nenhum dos parâmetros analisados nos animais de 45 dias de idade. Este conjunto de resultados sugere que a manipulação neonatal produz efeitos sobre osistema angiotensinérgico, manifestados através das diferentes concentrações plasmáticas de angiotensina II observadas entre os animais manipulados e não manipulados. Ainda, que estes efeitos podem estar envolvidos nas alterações dos mecanismos que permeiam a regulação do equilíbrio hidroeletrolítico, observadas na idade adulta desses animais.

Este trabalho testa a hipótese de que a inibição da enzima conversora da angiotensina (ECA), mesmo em doses baixas que não causam alteração de pressão, é capaz de influenciar nos processos de hipertrofia cardíaca, estresse oxidativo e controle autonômico em animais espontaneamente hipertensos (SHR). Os animais foram tratados com um inibidor da enzima conversora da angiotensina (iECA) e foram quantificados a hipertrofia e o estresse oxidativo cardíacos. Também foi avaliado o controle autonômico através da análise espectral de séries temporais de pressão arterial sistólica e freqüência cardíaca. Além disso, foram investigadas as características não-lineares das series de freqüência cardíaca envolvidas na hipertensão arterial sistemica e o efeito do tratamento sobre estes parâmetros através de um teste de irreversibilidade desenvolvido para detectar dinâmicas não-lineares independentemente da escala temporal de ação. Neste contexto, o primeiro estudo (artigo 1) objetivou o desenvolvimento do novo método para análise de irreversibilidade estatística (IE) capaz de detectar inclusive a presença de dinâmicas não-lineares mais lentas das observadas pelos métodos tradicionais. A nova técnica, denominada irreversibilidade bidimensional múltipla (IBM), foi validada e mostrouse útil quando aplicada a séries fisiológicas exibindo um padrão de não-linearidade aumentado em situações de predominância simpática. No segundo momento (artigo 2) o novo método foi aplicado a séries temporais de freqüência cardíaca em situações em que a ativação simpática foi provocada. Após demonstrar a associação entre a irreversibilidade e a modulação simpática em situação fisiológica, usando um protocolo de estimulação simpática gradual, o método também foi aplicado a uma situação patológica, caracterizada pela hipertensão espontânea em ratos. Nesta situação, houve um aumento da IE e o mecanismo não-linear envolvido na referida patologia possui ação mais lenta, sendo possível de ser detectado apenas com o uso de técnicas de alta dimensionalidade, como a irreversibilidade bidimensional múltipla. Além disso, foi verificado o efeito do tratamento com iECA, que reduziu a modulação simpática e restaurou o padrão de irreversibilidade a percentuais semelhantes aos do grupo controle. O terceiro estudo (artigo 3) teve como objetivo avaliar o efeito da inibição da ECA sobre a hipertrofia cardíaca, estresse oxidativo e controle autonômico em doses não anti-hipertensivas. Os resultados demonstraram uma redução da hipertrofia cardíaca, do estresse oxidativo cardíaco, mesmo sem alterar a pressão arterial. Apesar de não alterar a modulação simpática vascular ou atuar na sensibilidade baroreflexa, o tratamento em baixa dose melhorou o balanço autonômico, em favor da modulação vagal. Tais resultados podem indicar uma ação central que busca restabelecer o equilíbrio cardiovascular, precedente à alteração de pressão. Assim sendo, o presente estudo poderá contribuir no desenvolvimento de novas estratégias que, num futuro próximo, permitirão não só avaliar os efeitos do tratamento, mas principalmente, prevenir o estabelecimento de novos quadros hipertensivos e de insuficiência cardíaca. / This work presents the hypothesis that inhibition of the angiotensin converting enzyme (ACE), even in low doses that do not cause decrease of pressure, is able to alter the cardiac hypertrophy, the oxidative stress and the autonomic control in spontaneously hypertensive rats (SHR). To evaluate cardiac oxidative stress and its hypertrophy, animals were treated with an angiotensin converting enzyme inhibitor (ACEi). Also the autonomic control was analyzed by the spectral analysis of systolic arterial pressure and heart rate series. Besides, non-linear characteristics present in hypertension and the ACEi treatment effect were also evaluated by an irreversibility test developed to detect non-linear dynamics independently of their temporal scale. The first study (article 1) aimed at developing a new method for analysis of statistical irreversibility (SI) which was able to detect the presence of non linear dynamic including those that were slower than the ones observed by traditional methods. The new technique, called multiple bi-dimensional irreversibility (MBI), was validated and showed to be useful when applied to physiological series, presenting an increased non linear pattern increased in situations with sympathetic predominance. This new method was also applied to time series of heart rate in situations of sympathetic activation (article 2). After the demonstration of an association between irreversibility and sympathetic modulation in a physiological condition, the method was applied to a pathological situation, in SHR. SHR data showed that there was an increase of SI. Furthermore, the non-linear mechanism wrapped in this pathology has slower action, which can be detected only with the use of multidimensional techniques, as MBI. Besides, the ACEi treatment resulted in a reduction of the sympathetic modulation and restored the irreversibility pattern to those similar to control. Finally, the third study (article 3) evaluates the effect of ACEi on the cardiac hypertrophy, oxidative stress and autonomic control in no anti-hypertensive doses. The results demonstrated a cardiac hypertrophy and cardiac oxidative stress reduction, with no alteration of blood pressure. In spite of producing no alteration in the sympathetic vascular modulation or no action in the baroreflex sensibility, the low dose of ACEi treatment improved the autonomic balance, in favour of vagal modulation. Such results can indicate a central action to re-establishing the cardiovascular balance, preceding to the pressure alterations. Thus, the present study may help to the new strategies development to treat and, mainly, to prevent the establishment of hypertension and of heart failure.

A prolactina (PRL) é um hormônio polipeptídico com múltiplas ações. Estudos têm revelado que além das funções mais conhecidas relacionadas ao desenvolvimento da glândula mamária e à síntese e manutenção da liberação de leite, esse hormônio parece ser decisivo no comportamento maternal. Nesse caso a PRL poderia atuar em sinergismo com outros hormônios, como a ocitocina (OCT) e a angiotensina II (ANG II), promovendo um ajuste fino da circuitaria neural do encéfalo que leva a rata de um estado de aversão e negligência à receptividade e cuidado maternal de filhotes. Junto da corticosterona (CORT), a ANG II é um hormônio marcador do estresse em ratos. Considerando a hiporresponsividade ao estresse e uma maior liberação de PRL basal, que se correlacionam na rata em fase de lactação, esta dissertação teve o objetivo de verificar a possível participação da ANG II na resposta da PRL e no comportamento maternal de ratas lactantes submetidas ao estresse crônico e agudo. O papel do sistema angiotensinérgico foi investigado por meio da administração crônica do antagonista losartan na água de beber. A aplicação de estresse crônico e agudo foi realizada segundo o modelo da contenção nos sete primeiros dias, e numa aplicação única no sétimo dia, respectivamente. O comportamento maternal nos diferentes grupos de ratas foi analisado mediante um protocolo padrão de registro comportamental. Esses estudos demonstraram que a ANG II basal possivelmente participa do comportamento maternal pró-ativo, como a presença da mãe no ninho e a construção do ninho, além da lactação, que é um comportamento parcialmente reflexo e pró-ativo. Por outro lado, a sobreposição entre a administração de losartan e estresse agudo ou crônico parece levar as ratas a um comportamento maternal similar ao grupo controle. O comportamento das lactantes junto aos filhotes não é influenciado pelo estresse crônico, ao contrário do estresse agudo, que estimula a mãe a permanecer mais tempo fora do ninho em relação ao controle, sem qualquer envolvimento com o cuidado maternal. A administração individual de losartan e de estresse crônico não interfere nos níveis de CORT; no entanto, quando esses fatores são somados há uma marcante elevação dos níveis plasmáticos do corticosteróide. Houve apenas uma tendência de redução da PRL nas ratas submetidas ao estresse crônico; porém, quando o estresse crônico é aplicado em ratas previamente tratadas com losartan, há uma significativa elevação da PRL em relação ao grupo que recebeu apenas o estresse. Isoladamente, o fármaco leva a uma tendência de redução dos altos níveis basais de PRL, típicos de lactantes. Assim, podemos concluir que a ANG II possivelmente modula, mediante os receptores AT1, o comportamento maternal de forma direta e indireta, interferindo nas concentrações basais de PRL e de outros hormônios, como provavelmente a OCT. Esses hormônios podem configurar as ligações sinápticas entre os neurônios hipotalâmicos responsáveis pela transdução de estímulos endógenos na mãe e nociceptivos externos dos filhotes em sinais que levam à responsividade motora e cognitiva do cuidado maternal.

Existe uma associação entre hipertensão arterial e prejuízo da função reprodutiva. No modelo experimental dois-rins, um-clipe (2R1C), a hipertensão de origem renovascular é estabelecida pelo aumento na produção de angiotensina II (Ang II). O presente estudo analisou a evolução temporal dos efeitos da hipertensão promovida pelo modelo 2R1C sobre a função reprodutiva de ratos, bem como a participação dos receptores de Ang II do tipo 1 (AT1) nesse processo. Para tanto, avaliamos as manifestações do comportamento sexual, da gametogênese e das concentrações plasmáticas de Ang ll, hormônio luteinizante (LH), testosterona, prolactina e corticosterona de ratos submetidos ao modelo 2R1C (clipados) ou à cirurgia fictícia (controle) pertencentes aos grupos 7, 14, 21 e 28 dias de procedimento cirúrgico. Essas mesmas análises dos parâmetros endócrinos e do comportamento sexual foram realizadas em outros dois grupos, após 28 dias de clipamento ou cirurgia fictícia, que receberam o tratamento com losartan, um antagonista dos receptores AT1. Os ratos dos quatro grupos analisados, aos 7, 14, 21 e 28 dias de clipamento, sem o tratamento com losartan, apresentaram um aumento nas concentrações plasmáticas de Ang ll e uma resposta hipertensora, quando comparados aos seus respectivos controles. As demais análises das dosagens hormonais mostram que o emprego do modelo 2R1C promoveu redução nas concentrações plasmáticas de LH somente no grupo 7 dias de clipamento e elevação do LH circulante nos grupos 21 e 28 dias de clipamento. As concentrações plasmáticas de prolactina aumentaram nos grupos 14, 21 e 28 dias de clipamento. Além disso, ocorreu diminuição nas concentrações plasmáticas de testosterona no grupo 28 dias de clipamento. Por outro lado, não houve alterações nas concentrações plasmáticas de corticosterona em nenhum grupo. Todos os animais clipados manifestaram inibição de um ou mais parâmetros do comportamento sexual, ocorrendo maior comprometimento desta função com o avanço temporal da hipertensão. Os grupos 21 e 28 dias de clipamento também apresentaram um dano da espermatogênese. O tratamento com losartan normalizou a pressão arterial e preveniu as alterações da prolactina, do LH, do comportamento sexual e da espermatogênese de ratos clipados por 28 dias. Somado a isso, o losartan ocasionou uma elevação nas concetrações plasmáticas de testosterona no grupo clipado e produziu um aumento na Ang ll circulante nos grupos controle e clipado por 28 dias. Os resultados deste estudo evidenciam que a Ang ll exerce influência modulatória sobre parâmetros endócrinos e comportamentais da função reprodutiva, representando um dos principais elementos determinantes do comprometimento do comportamento sexual e da espermatogênese de ratos com hipertensão renovascular. / There is an association between hypertension and reproductive function impairment. In the two-kidney, one-clip model (2K1C), the renovascular hypertension is established by plasma angiotensin II (Ang II) increases. The present study aimed to analyze the temporal evolution of hypertension effects on rat reproductive function submitted to a 2K1C model. It was also analyzed the AT1 receptors participation in this process. Sexual behavior manifestations, gametogenesis and plasmatic concentrations of Ang II, luteinizing hormone (LH), testosterone, prolactin and corticosterone in rats submited to 2K1C model (clipping) or to sham surgery (control) from groups at 7, 14 , 21 and 28 days after surgery were evaluated. These endocrine parameters and sexual behavior analysis were conducted in two other groups after 28 days of 2K1C or sham surgery, which received losartan treatment - an AT1 receptor antagonist. The rats from the four groups on days 7, 14, 21, and 28 after clipping procedure, without losartan treatment, showed an increase in plasma Ang ll levels and a hypertensive response, compared to their respective control groups. The other hormonal measurements showed that the 2K1C model caused a reduction in plasma LH only in the 7 days after clipping procedure group and a plasma LH elevation in the 21 and 28 days after clipping groups. Plasma prolactin increased in 14, 21, and 28 days after clipping procedure groups. Moreover, there was a decrease in plasma testosterone in the 28 days after clipping group. On the other hand, there were no changes in plasma corticosterone in any group. All clipping animals showed inhibition of one or more sexual behavior parameters and the temporal advancement of hypertension promoted a greater impairment in this function. The 21 and 28 days after clipping procedure groups presented spermatogenesis dysfunction. Losartan treatment normalized the blood pressure and prevented the changes on plasma prolactin and LH levels, sexual behavior and spermatogenesis after 28 days clipping procedure. In addition, losartan treatment caused a rise in plasma testosterone clipping group levels and an increase in circulating Ang ll control and clipping group levels after 28 days of surgery procedure. Together, these results suggest that Ang ll acts modulating behavioral and endocrine parameters of reproductive function in a 2K1C rat model. Therefore, Ang II seems to represent one of the major elements inducing sexual behavior and spermatogenesis impairment in rats with renovascular hypertension.

Submitted by DAYANE PRISCILLA DE SOUZA QUEIROZ BARBOSA (dqueiroz227@gmail.com) on 2018-07-24T13:22:58Z No. of bitstreams: 1 TESE DOUTORADO CORRIGIDA_DAYANE QUEIROZ_FINAL.pdf: 1529893 bytes, checksum: 30b2c37b998d53fa979be1010debfbb3 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Rimoli de Oliveira null (anapaula@foa.unesp.br) on 2018-07-24T19:46:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 barbosa_dpsq_dr_araca_int.pdf: 1529893 bytes, checksum: 30b2c37b998d53fa979be1010debfbb3 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-24T19:46:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 barbosa_dpsq_dr_araca_int.pdf: 1529893 bytes, checksum: 30b2c37b998d53fa979be1010debfbb3 (MD5) Previous issue date: 2018-06-22 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: A associação do Diabetes Mellitus (DM) e a doença periodontal (DP) compromete a resposta inflamatória e o metabolismo ósseo, tornando-se uma das principais complicações geradas por estas patologias. O sistema renina-angiotensina local (SRA) tem sido encontrado em tecidos periodontais, sugerindo que este sistema pode contribuir com a resposta inflamatória e com a destruição periodontal. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel da renina sobre a resposta inflamatória de camundongos normoglicêmicos e diabéticos submetidos à periodontite induzida. Métodos: O diabetes foi induzido em dose única por estreptozotocina (200mg/kg) em camundongos Balb/c. Para indução da DP, camundongos normoglicêmicos e diabéticos, tratados ou não com Alisquireno (50mg/kg) (Alisk), receberam uma ligadura por meio de fio de seda ao redor do primeiro molar inferior que foi mantido durante 14 dias. Mandíbulas foram removidas para análises histomorfométricas e o tecido gengival foi coletado para avaliar a expressão gênica de componentes do SRA (angiotensinogênio (Agt), renina (Ren), enzima conversora de angiotensina 1 e 2 (Eca e Eca2), receptores de angiotensina 1 e 2 (ATR1 e ATR2), e receptor de angiotensina 1-7 (MasR), além de marcadores do reparo tecidual (Col1a1, Col2a1, Col3a1, fibronectina (Fn), fator de transformação beta (TGF-β) por RT-qPCR em tempo real. A análise imuno-histoquímica (IHC) teve como objetivo detectar e localizar os componentes do SRA no tecido gengival. Ensaios imunoenzimáticos (ELISA) foram utilizados para avaliar a produção de proteína C-reativa (CRP), CXCL2 e CCL8 no tecido gengival.Resultados: Observamos a indução da doença periodontal pela perda óssea e processo inflamatório induzido 14 dias após. O tratamento com Alisk diminui a resposta inflamatória e previniu a perda óssea induzida pela DP em camundongos normoglicêmicos e diabéticos. O mRNA para Ren foi indectetável no tecido gengival, sugerindo que os efeitos observados foram de renina sistêmica. DP aumentou a expressão de Agt, Eca em camundongos normoglicêmicos e diabéticos. A expressão de AT2R foi pronunciadamente maior apenas em camundongos normoglicêmicos com DP. O tratamento com Alisk reduziu a expressão gênica desses componentes de SRA, principalmente em camundongos diabéticos. Componentes SRA foram expressos em todas as camadas do epitélio, com marcação moderada dos componentes do tecido conjuntivo adjacentes, incluindo fibroblastos, células endoteliais e células de infiltrado inflamatório. Possivelmente a renina sistêmica exacerba a resposta inflamatória tanto em animais normoglicêmicos quanto em diabéticos, apresentando produção elevada de CRP, CXCL2 e CCL8 na presença de DP.O tratamento com Alisk reduziu a produção desses marcadores inflamatórios principalmente em camundongos diabéticos.Col1a1, Col1a2, Col3a1 e Fn foram aumentados em ambos os animais com DP, enquanto que a expressão de TGF-β foi reduzida. O tratamento com Alisk reduziu a expressão de Col1a1, Col1a2, e Fn, no entanto, aumentou a expressão de TGF-β. Conclusão: Os resultados aqui apresentados sugerem que a renina sistêmica exacerba a resposta inflamatória, contribuindo com a severidade da DP induzida, além de modular os principais componentes da matriz extracelular no tecido gengival. Finalmente, antagonizar a renina pode ser uma ferramenta importante, no futuro, para prevenir a perda óssea e principalmente a inflamação induzida pela periodontite . / Background: The association of Diabetes Mellitus (DM) and Periodontal disease ( PD ) compromises inflammatory response and bone metabolism, becoming one of the main complications generated by these pathologies. The local renin - angiotensin system (RAS) has bee n found in periodontal tissues, suggesting that this system may contribute to the inflammatory response and to the periodontal destruction. The objective of this study was to evaluate the role of renin on the inflammatory response and bone metabolism of no rmoglycemic and diabetic mice submitted to induced periodontitis. Methods: Diabetes was induced using a single dose of streptozotocin (200mg / kg) in Balb/c mice. For PD induction, normoglycemic and diabetic mice were treated or not with Aliskiren (50mg/kg) (Alisk) , and received a silk ligature around the lower first mandibular molar which was maintained for 14 days. Mandibles were harvested for histomorphometric analysis and gingival tissue was collected to evaluate the gene expression of RAS components (an giotensinogen (Agt), renin (Ren), angiotensin converting enzyme 1 and 2 (Eca and Eca2), angiotensin 1 and 2 receptor (ATR1 and ATR2) , and angiotensin 1 - 7 receptor (MasR) , besides tissue repair markers (Col1a1, Col2a1, Col3a1, fibronectin (Fn), and t ransf orming growth factor beta (TGF - β) by real - time RT - qPCR. Immunohistochemical analysis (IHC) aimed to detect and localize the components of RAS on gingival tissue. Immunoenzymatic assays (ELISA) were used to evaluate the production of CXCL2, CCL8 and CRP on gingival tissue. Results: We observed the induction of periodontal disease by bone loss and inflammatory process 14 days later. Alisk treatment decrease d the inflammatory response and prevents PD - induced bone loss in normoglycemic and diabetic mice. The mRNA for Ren was indectable o n gingival tissue, suggesting that the effects were due to systemic renin. PD increased of Agt, Eca e xpression in normoglycemic and diabetic mice. AT2R expression was markedly increased only in normoglycemic mice with PD. Alisk tre atment reduced the gene expression of these RAS components, especially in diabetic mice. SRA components were expressed in all layers of the epithelium, with moderate labeling on adjacent connective tissue components, including fibroblasts, endothelial cell s and inflammatory infiltrate cells. Systemic renin exacerbate d the inflammatory response in both normoglycemic and diabetic models, presenting high production of CRP, CXCL2 , and CCL8 in the presence of PD. Alisk treatment reduced th ese inflammatory respon se mainly in diabetic mice. Col1a1, Col1a2, Col3a1 , and Fn were increased in both PD models, whereas TGF - β expression was reduced. Treatment with Alisk reduced the expression of Col1a1, Col1a2, and Fn, however, increased expression of TGF - β . Conclusion: Th e results suggest that systemic renin can exacerbate the inflammatory response, contributing to the severity of induced - PD, and can modulate the main components of the extracellular matrix on gingival tissue. Finally , antagonizing renin may be an important tool in the future to prevent bone loss and mainly inflammation in induced - periodontitis. / 15/03965-2

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-27Bitstream added on 2014-06-13T18:51:03Z : No. of bitstreams: 1 gealh_wc_me_araca.pdf: 769445 bytes, checksum: 471ed1e28e30d4bd94713ea173fc064a (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A hipertensão arterial é o maior fator de risco para doenças cardiovasculares, caracterizada por uma disfunção endotelial, alteração no controle do crescimento das células vasculares e morte celular. Alterações como gradual perda óssea e diminuição no índice de massa óssea corpórea têm sido fortemente relacionadas com hipertensão, sendo que os mecanismos celulares e moleculares que envolvem a hipertensão e osteoporose não são compreendidos completamente como um todo. Objetivos: O presente projeto teve por objetivo estudar a interferência da hipertensão essencial no metabolismo ósseo durante o processo de reparo de enxerto ósseo autógeno, bem como analisar a influência do losartan, um medicamento anti-hipertensivo antagonista dos receptores de angiotensina, analisando a expressão das proteínas OC, OPG, RANK, RANKL, TRAP, VEGF e PECAM através da técnica de imunoistoquímica. Além disso, este projeto pretendeu realizar a análise histomorfométrica do tecido ósseo formado durante o processo de reparo. Material e métodos: Os grupos estudados compreenderam 24 ratos normotensos Wistar e 24 ratos espontaneamente hipertensos, divididos em grupos não tratados e tratados com Losartan, submetidos a procedimentos cirúrgicos para realização de enxertos ósseos em bloco na mandíbula, nos períodos de 7, 14 e 28 dias. Conclusão: Conclui-se que os animais SHR apresentam atraso no processo de reparo de enxertos ósseos autógeno em bloco quando comparados aos animais Wistar, e que o uso do losartan para redução da pressão arterial nestes animais demonstrou melhorar o processo cicatricial, apesar de não haverem diferenças estatísticas significantes / Hypertension is the major risk factor to coronary diseases characterized by endothelial disfunction, alterations on the growing of vascular cell and death cell. Alterations like continuous bone loss and lower body mass index have been strongly connected with hypertension, althought the mollecular and cellular mechanisms wich involve the hypertension and osteoporosis are not completely understood. Objectives: This study has the objective to observe the high blood pressure interference in the osseous metabolism during the bone healing of autogenous bone graft and carry out analysis about the administration of losartan, a receptor angiotensin antagonist by OC, OPG, RANK, RANKL, TRAP, VEGF and PECAM expressions by immunohistochemical technique and hystological analysis of the bone tissue. Material and methods: The groups studied were 24 normotensive rats Wistar and 24 spontaneous hypertensive rats dealed out non treated and treated groups by losartan. Surgical procedures were carried out and an onlay bone grat were fixed on the mandible and the animmals were sacrified on the 7, 14 and 28 days. Conclusion: we conclued that the SHR has a late bone healing process when comparing with Wistar group and the losartan administration to reduce the blood pressure has the potential to become better the bone graft healing, althought significant estatistical differences not exist

Submitted by MURILO EDUARDO GRATON null (murilo.graton@yahoo.com.br) on 2017-05-30T04:15:45Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado - Murilo Eduardo Graton - Oficial.pdf: 2455052 bytes, checksum: 9fdb49043c056012a6f5db47564916b4 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-05-31T17:10:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 graton_me_me_araca.pdf: 2455052 bytes, checksum: 9fdb49043c056012a6f5db47564916b4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-31T17:10:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 graton_me_me_araca.pdf: 2455052 bytes, checksum: 9fdb49043c056012a6f5db47564916b4 (MD5) Previous issue date: 2017-05-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A enzima NAD(P)H oxidase (NOX) é a principal fonte de espécies reativas de oxigênio (ERO) no sistema cardiovascular e sua atividade e expressão podem ser regulada pela angiotensina (Ang) II. Demonstramos previamente que o tratamento crônico com apocinina, um inibidor de NOX, reduziu a pressão arterial e preveniu o desenvolvimento da disfunção endotelial em SHR. Estes efeitos da apocinina foram associados a redução de geração de ERO e ao aumento da biodisponibilidade de óxido nítrico em células endoteliais de SHR. Dados de nosso laboratório mostraram que o tratamento com apocinina, também reduziu o efeito pressor da Ang II em SHR. A associação entre Ang II, via receptores AT1, e o estresse oxidativo tem sido implicada na patogênese da hipertensão. Levantamos a hipótese que a apocinina, ao alterar a sinalização redox, reduz a expressão de receptores AT1 e a resposta vasoconstritora da Ang II em SHR. Neste estudo, avaliamos o efeito do tratamento crônico com apocinina sobre as respostas contráteis à Ang II em vasos sanguíneos de SHR e os mecanismos envolvidos nestes efeitos, utilizando ensaios bioquímicos, biomoleculares e funcionais. SHR foram tratados com apocinina (30 mg/Kg, v.o.) da 4ª a 10ª semana de vida e ratos Wistar foram utilizados como controle normotenso. Analisamos os efeitos da apocinina na capacidade antioxidante plasmática, expressão de NOX, geração de ERO, níveis de nitrato/ nitrito, expressão de receptores AT1 e AT2, e respostas vasoconstritoras à Ang II em artéria mesentérica e aorta. O tratamento de SHR com apocinina aumentou a capacidade antioxidante plasmática, os níveis de nitrato/nitrito, não alterou a expressão de receptores AT1 ou AT2 em artérias mesentéricas, mas aumentou a expressão de AT2, mas não de AT1, em aorta de SHR. Além disto, o tratamento com apocinina diminuiu a expressão de NOX2 e p47phox e a produção de ERO. O tratamento com apocinina aumentou a modulação do endotélio e/ou da atividade da NOS sobre as respostas vasoconstritoras à Ang II em artérias mesentéricas de SHR, mas não alterou a reatividade de aortas de SHR à Ang II. A menor reatividade de artérias de resistência à Ang II levaria a menor resistência vascular periférica e consequentemente a redução da pressão arterial média e do efeito pressor da Ang II em SHR tratados com apocinina, como observado previamente. O mecanismo de ação da apocinina envolvido neste efeito está associado a importantes alterações redox que determinam uma maior modulação endotelial dependente de NOS das respostas vasoconstritoras da Ang II, mas não envolve alterações na expressão de receptores AT1 em vasos de SHR. / NAD(P)H oxidase (NOX) is the major source of reactive oxygen species (ROS) in the cardiovascular system and its activity and expression could be regulated by angiotensin (Ang) II. We previously demonstrated that chronic treatment with apocynin, a NOX inhibitor, reduced blood pressure and prevented the development of endothelial dysfunction in SHR. These effects of apocynin have been associated with reduced generation of ROS and increased bioavailability of nitric oxide in endothelial cells of SHR. Data from our laboratory showed that treatment with apocynin also reduced the pressor effect of Ang II on SHR. The association between Ang II, via AT1 receptors, and oxidative stress has been implicated in the pathogenesis of hypertension. We hypothesized that apocynin, altering redox signaling, could reduce expression of AT1 receptors and Ang II vasoconstrictor response in SHR. In this study, we evaluated the effect of chronic treatment with apocynin on the contractile responses to Ang II in blood vessels of SHR and the mechanisms involved in the effects of these on biochemical, biomolecular and functional assays. SHR were treated with apocynin (30 mg/kg, p.o.) from the 4 th to the 10th week of life and Wistar rats were used as normotensive control. Analysis of the effects of apocynin on plasma antioxidant capacity, NOX expression, ROS generation, nitrate/ nitrite levels, expression of AT1 and AT2 receptors, and vasoconstrictor responses to Ang II on mesenteric and aortic arteries. Treatment of SHR with apocynin increased plasma antioxidant capacity, nitrate/ nitrite levels, did not alter AT1 or AT2 receptor expression in mesenteric arteries, but increased expression of AT2, but not AT1, in SHR aorta. In addition, treatment with apocynin decreased expression of NOX2 and p47phox and ROS generation. Treatment with apocynin increased endothelium modulation and/or NOS activity on Ang II vasoconstrictor responses in mesenteric arteries of SHR, but did not alter the reactivity to Ang II in aortas of SHR. The lower reactivity of Ang II in resistance arteries would lead to lower peripheral vascular resistance and consequently the reduction of mean arterial pressure and Ang II pressor effect in SHR treated with apocynin, as previously observed. The mechanism of action of the apostate involved in this effect is associated with important redox changes that determine a greater NOS-dependent endothelial modulation of the vasoconstrictor responses of Ang II, but does not involve expression in the expression of AT1 receptors in SHR vessels.