As infecções por bactérias representam um grave problema hoje e para o futuro, devido ao fato de que estes microrganismos desenvolvem mecanismos de resistência aos antibióticos ao longo do tempo de uso. A formação de biofilmes também é um fator a ser discutido no cenário atual por estar associado a muitas infecções bacterianas humanas, principalmente àquelas envolvendo dispositivos médicos aumentando assim os riscos de infecções hospitalares. O ácido ursólico (AU) é um triterpeno conhecido por suas atividades biológicas relatadas. Apresenta moderada atividade antibacteriana, porém tem demonstrado importante citotoxicidade frente a algumas linhagens celulares. Em vista disso, neste trabalho se desenvolveu uma série de novas moléculas derivadas do AU com alterações nas posições C-3 e C-28. Quatro moléculas com substituição em C-3 (derivados 2, 3, 4e 5) e uma com substituição em C-3 e C-28 (derivado 6) foram comparadas ao AU (1) quanto a atividade antibacteriana. As cepas utilizadas foram Salmonela Typhimurium, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Proteus mirabilis, Staphylococcus epidermidis e Staphylococcus aureus. Os compostos 3 e 6 apresentaram melhor perfil inibitório de forma geral, onde 3 apresentouse bactericida para S. aureus e S. epidermidis (Gram positivas) e paraP. mirabilis (Gram negativa) apresentou-se bacteriostático. / The ursolic acid (UA) is a triterpene known for their biological activities reported. Thus, become useful techniques semi-synthesis starting from natural products extracted, for example residue industries in order to improve the pharmacological properties decreasing toxicity. The bacterial infections are a serious problem today and in the future due to the fact that these organisms develop resistance mechanisms to antibiotics over time of use. The formation of biofilms is also a factor to be discussed in the current scenario because of being responsible for a very high number of rejections and other prosthetic devices by increasing the risk of nosocomial infections. The AU has a moderate antibacterial activity reported in the literature, but showed significant cytotoxicity against some cell lines. In view of this it developed a series of new molecules derived from AU residues extracted from apples (Mallus domestica) from the juice industry by promoting the so-called green chemistry. The molecules undergo changes in C-3 and C-28. Four molecules with substitution at C-3 (derived from 2, 3, 4 and 5) and one with substitution at C-3 and C-28 (derived 6) were compared with au (1). The strains used in the tests of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration were Salmonella Typhimurium, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Proteus mirabilis, Staphylococcus epidermidis and Staphylococcus aureus. Compounds 3 and 6 had better inhibitory profile in general, where three presented bactericidal to S. aureus and S. epidermidis (Gram positive) and P. mirabilis (Gram negative) appeared bacteriostatic.

COSTA, Helen Paula Silva da. Purificação e caracterização de um inibidor de tripsina com atividade antimicrobiana da torta de pinhão-manso (Jatropha curcas L.). 118 f. : Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências, Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica. Fortaleza-CE, 2012. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-05-20T13:42:27Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_hpscosta.pdf: 3018720 bytes, checksum: eb4b6b465befb3e7211b53415f21b787 (MD5) / Approved for entry into archive by demia Maia (demiamlm@gmail.com) on 2016-05-23T12:00:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_hpscosta.pdf: 3018720 bytes, checksum: eb4b6b465befb3e7211b53415f21b787 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-23T12:00:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_hpscosta.pdf: 3018720 bytes, checksum: eb4b6b465befb3e7211b53415f21b787 (MD5) Previous issue date: 2012 / The residue (cake) obtained after the extraction of oil from jatropha (Jatropha curcas) seeds for biodiesel production is toxic. Despite of the obstacles related to its use in the animal feed, there are evidences that this residue has great potential for biotechnology applications due to its arsenal of molecules. Thus, the present study aimed to purify and characterize a trypsin inhibitor from jatropha cake, in order to make a better use of this residue. The centesimal composition analysis showed to be the jatropha cake mainly composed of proteins (37.21%), fiber (34.26%) and lipids (19.16%). The crude extract obtained from the jatropha cake under alkaline condition (100 mM sodium borate buffer, pH 10.0) showed the presence of lectin (319.76 HU/gF), papain inhibitor (1,287.38 IU/gF), protease (2.69 AU/gF) and, especially, trypsin inhibitor (1,649.7 IU/gF). The trypsin inhibitor, named JcTI, was purified by fractionation of the crude extract with trichloroacetic acid (2.5%) followed by affinity chromatography (trypsin-sepharose-4B) and molecular exclusion (sephacryl S-200). JcTI is a glycoprotein (6.4% carbohydrates) with molecular mass in the range of 20-21 kDa, pI of 6.6, NH2-terminal sequence (VRDICKKEAERQDLSSCENYITQRRGY) showing identity around 60% with plant albumins and highly stable to heat, pH and salinity. JcTI (500 µg/mL) slowed the growth of important phytopthogenic fungi, including Colletotrichum gloeosporioides, Colletotrichum lindemuthianum, Fusarium oxysporum and Fusarium solani. This inhibitor also presented antibacterial activity against human pathogenic bacteria such as Bacillus subtilis, Salmonella choleraesuis and Staphylococcus aureus, with minimum inhibitory concentration less than 5 µg/mL. The results demonstrate the potential of JcTI for biotechnological application as a new defense protein against phytopthogenic fungi and human pathogenic bacteria. / O resíduo (torta) obtido após a extração de óleo das sementes de pinhão-manso (Jatropha curcas) para a produção de biodiesel é tóxico. Apesar dos entraves relacionados à sua utilização na alimentação animal, existem evidências de que esse resíduo tem grande potencial de utilização biotecnológica graças ao arsenal de moléculas que o constitui. Assim, o presente trabalho teve como foco a purificação e caracterização de um inibidor de tripsina da torta de pinhão-manso, vislumbrando um maior aproveitamento desse resíduo. A análise da composição centesimal revelou ser a torta de pinhão-manso composta principalmente por proteínas (37,21%), fibras (34,26%) e lipídios (19,16%). O extrato bruto obtido a partir da torta sob condição alcalina (tampão borato de sódio 100 mM, pH 10,0) mostrou a presença de lectina (319,76 UH/gF), inibidor de papaína (1.287,38 UI/gF), protease (2,69 UA/gF) e, principalmente, de inibidor de tripsina (1.649,7 UI/gF). O inibidor de tripsina, denominado JcTI, foi purificado do extrato bruto por fracionamento com ácido tricloroacético (2,5%) seguido de cromatografias de afinidade (tripsina-sepharose-4B) e de exclusão molecular (sephacryl S-200). JcTI é uma glicoproteína (6,4% de carboidratos) com massa molecular na faixa de 20-21 kDa, pI de 6,6, sequência NH2-terminal (VRDICKKEAERQDLSSCENYITQRRGY) exibindo similaridade em torno de 60% com albuminas vegetais e altamente estável ao calor, salinidade e pH. JcTI (500 µg/mL) retardou o crescimento de vários fungos fitopatogênicos de importância agrícola, incluindo Colletotrichum gloeosporioides, Colletotrichum lindemuthianum, Fusarium oxysporum e Fusarium solani. Esse inibidor também mostrou atividade antibacteriana frente a bactérias patogênicas ao homem, tais como Bacillus subtilis, Salmonella choleraesuis e Staphylococcus aureus, com concentração inibitória mínima inferior a 5 µg/mL. Os resultados obtidos demonstram o potencial do JcTI para aplicação biotecnológica como uma nova proteína de defesa contra fungos fitopatogênicos e bactérias patogênicas ao homem.

As infecções por bactérias representam um grave problema hoje e para o futuro, devido ao fato de que estes microrganismos desenvolvem mecanismos de resistência aos antibióticos ao longo do tempo de uso. A formação de biofilmes também é um fator a ser discutido no cenário atual por estar associado a muitas infecções bacterianas humanas, principalmente àquelas envolvendo dispositivos médicos aumentando assim os riscos de infecções hospitalares. O ácido ursólico (AU) é um triterpeno conhecido por suas atividades biológicas relatadas. Apresenta moderada atividade antibacteriana, porém tem demonstrado importante citotoxicidade frente a algumas linhagens celulares. Em vista disso, neste trabalho se desenvolveu uma série de novas moléculas derivadas do AU com alterações nas posições C-3 e C-28. Quatro moléculas com substituição em C-3 (derivados 2, 3, 4e 5) e uma com substituição em C-3 e C-28 (derivado 6) foram comparadas ao AU (1) quanto a atividade antibacteriana. As cepas utilizadas foram Salmonela Typhimurium, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Proteus mirabilis, Staphylococcus epidermidis e Staphylococcus aureus. Os compostos 3 e 6 apresentaram melhor perfil inibitório de forma geral, onde 3 apresentouse bactericida para S. aureus e S. epidermidis (Gram positivas) e paraP. mirabilis (Gram negativa) apresentou-se bacteriostático. / The ursolic acid (UA) is a triterpene known for their biological activities reported. Thus, become useful techniques semi-synthesis starting from natural products extracted, for example residue industries in order to improve the pharmacological properties decreasing toxicity. The bacterial infections are a serious problem today and in the future due to the fact that these organisms develop resistance mechanisms to antibiotics over time of use. The formation of biofilms is also a factor to be discussed in the current scenario because of being responsible for a very high number of rejections and other prosthetic devices by increasing the risk of nosocomial infections. The AU has a moderate antibacterial activity reported in the literature, but showed significant cytotoxicity against some cell lines. In view of this it developed a series of new molecules derived from AU residues extracted from apples (Mallus domestica) from the juice industry by promoting the so-called green chemistry. The molecules undergo changes in C-3 and C-28. Four molecules with substitution at C-3 (derived from 2, 3, 4 and 5) and one with substitution at C-3 and C-28 (derived 6) were compared with au (1). The strains used in the tests of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration were Salmonella Typhimurium, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Proteus mirabilis, Staphylococcus epidermidis and Staphylococcus aureus. Compounds 3 and 6 had better inhibitory profile in general, where three presented bactericidal to S. aureus and S. epidermidis (Gram positive) and P. mirabilis (Gram negative) appeared bacteriostatic.

Através de Testes de Diluição em Sistema de Tubos Múltiplos determinou-se a Intensidade de Atividade de Inibição Bacteriana (IINIB/bacteriostasia) e a Intensidade de Atividade de Inativação Bacteriana (IINAB/bactericidia) de soluções conservantes contendo extrações etanólicas (alcoolatura/planta verde, hidroalcoolatura/planta seca) e hídricas (decoctos/planta verde ou seca) de Ocimum gratissimum L. (“alfavacão”, “alfavaca”, “alfavaca-cravo”) – Labiatae - (Lamiaceae), sobre inóculos padronizados de Salmonella Enteritidis (ATCC 11076), Escherichia coli (ATCC 11229) e Staphylococcus aureus (ATCC 25923). Testou-se também, a partir da formulação de quatro bebidas, duas alcoólicas e duas não alcoólicas, com e sem açúcar respectivamente, a partir de extrato reconstituido (alcoolatura/planta verde) desta planta, em diferentes concentrações (5%, 15% e 30%), através de Testes de Suspensão em Sistema de Tubos Múltiplos, a Intensidade de Atividade de Inativação Bacteriana (IINAB/bactericidia), sobre Salmonella Enteritidis (ATCC 11076), bem como a aceitabilidade/preferência sensorial por Escala Hedônica destes quatro produtos. Todas as diferentes formas de extração apresentaram capacidade de inibição e/ou inativação seletivas sobre os três inóculos bacterianos, tendo a forma de extração alcoólica apresentado a atividade antibacteriana mais intensa (inibição/inativação) frente aos três agentes. A bactéria mais sensível à atividade antibacteriana em todas as soluções conservantes foi Salmonella Enteritidis. Staphylococcus aureus apresentou a menor sensibilidade às formas de decocção, enquanto Escherichia coli apresentou a menor sensibilidade frente a forma de extração hidroalcoólica. Todas as formulações apresentaram atividade bactericida para Salmonella Enteritidis, diretamente proporcional às concentrações do extrato e ao tempo de exposição da bactéria às bebidas, destacando-se neste sentido a formulação não alcoólica com açúcar. Na análise sensorial a preferência aumentou com o decréscimo da concentração de extrato de Ocimum gratissimum na formulação. A bebida não alcoólica com açúcar, na concentração de 5% de extrato, destacou-se na preferência sensorial/aceitabilidade. / Through Dilution Tests in Multiple Tubes System, the intensity of bacterial inhibition activity (IINIB/bacteriostasys) and the intensity of bacterial inactivation activity (IINAB/bactericidie) from preservatives solutions containing etanolic extractions (alcoholature/green plant, hidroalcoholature/dry plant) and hydric extractions (decoctions/green or dry plant) of Ocimum gratissimum L. (African basil) - Labiatae - (Lamiaceae), on standardized inocula of Salmonella Enteritidis (ATCC 11076), Escherichia coli (ATCC 11229) and Staphylococcus aureus (ATCC 25923) was determined. In the same way, the Activity Intensity of Bacterial Inactivation (IINAB/bactericidie), in four drinks formulations, two alcoholic and two no-alcoholic, with and without sugar respectively, from reconstituted extract (alcoholature/green plant) of the same plant, at different concentrations (5%, 15% and 30%), on Salmonella Enteritidis (ATCC 11076) was determined by Suspension Tests in Multiple Tubes System, and the acceptability/sensory preference by Hedonic Scale of these four products. All differents extractions forms had showed selective capacity of inhibition or inactivation on the three bacterial inocula. The alcoholic extraction form presented the antibacterial activity more intense (inhibition/inactivation) against the three agents. The sensitivest bacteria by all preservatives solutions was Salmonella Enteritidis. Staphylococcus aureus showed a lower sensibility to the decoction types, while Escherichia coli showed a lower sensibility to the hydroalcoholic extraction. All food formulations showed bactericidal activity on Salmonella Enteritidis, directly proportional to the extract concentrations and the exposure time of the bacterium in beverages, pointing the not alcohol with sugar formulation. In the sensorial analysis the preference increased with the decrease of the extract concentration of Ocimum gratissimum. The non-alcoholic beverage with sugar, in the extract concentration of 5%, pointed in the sensorial preference// acceptability.

Através de Testes de Diluição em Sistema de Tubos Múltiplos determinou-se a Intensidade de Atividade de Inibição Bacteriana (IINIB/bacteriostasia) e a Intensidade de Atividade de Inativação Bacteriana (IINAB/bactericidia) de soluções conservantes contendo extrações etanólicas (alcoolatura/planta verde, hidroalcoolatura/planta seca) e hídricas (decoctos/planta verde ou seca) de Ocimum gratissimum L. (“alfavacão”, “alfavaca”, “alfavaca-cravo”) – Labiatae - (Lamiaceae), sobre inóculos padronizados de Salmonella Enteritidis (ATCC 11076), Escherichia coli (ATCC 11229) e Staphylococcus aureus (ATCC 25923). Testou-se também, a partir da formulação de quatro bebidas, duas alcoólicas e duas não alcoólicas, com e sem açúcar respectivamente, a partir de extrato reconstituido (alcoolatura/planta verde) desta planta, em diferentes concentrações (5%, 15% e 30%), através de Testes de Suspensão em Sistema de Tubos Múltiplos, a Intensidade de Atividade de Inativação Bacteriana (IINAB/bactericidia), sobre Salmonella Enteritidis (ATCC 11076), bem como a aceitabilidade/preferência sensorial por Escala Hedônica destes quatro produtos. Todas as diferentes formas de extração apresentaram capacidade de inibição e/ou inativação seletivas sobre os três inóculos bacterianos, tendo a forma de extração alcoólica apresentado a atividade antibacteriana mais intensa (inibição/inativação) frente aos três agentes. A bactéria mais sensível à atividade antibacteriana em todas as soluções conservantes foi Salmonella Enteritidis. Staphylococcus aureus apresentou a menor sensibilidade às formas de decocção, enquanto Escherichia coli apresentou a menor sensibilidade frente a forma de extração hidroalcoólica. Todas as formulações apresentaram atividade bactericida para Salmonella Enteritidis, diretamente proporcional às concentrações do extrato e ao tempo de exposição da bactéria às bebidas, destacando-se neste sentido a formulação não alcoólica com açúcar. Na análise sensorial a preferência aumentou com o decréscimo da concentração de extrato de Ocimum gratissimum na formulação. A bebida não alcoólica com açúcar, na concentração de 5% de extrato, destacou-se na preferência sensorial/aceitabilidade. / Through Dilution Tests in Multiple Tubes System, the intensity of bacterial inhibition activity (IINIB/bacteriostasys) and the intensity of bacterial inactivation activity (IINAB/bactericidie) from preservatives solutions containing etanolic extractions (alcoholature/green plant, hidroalcoholature/dry plant) and hydric extractions (decoctions/green or dry plant) of Ocimum gratissimum L. (African basil) - Labiatae - (Lamiaceae), on standardized inocula of Salmonella Enteritidis (ATCC 11076), Escherichia coli (ATCC 11229) and Staphylococcus aureus (ATCC 25923) was determined. In the same way, the Activity Intensity of Bacterial Inactivation (IINAB/bactericidie), in four drinks formulations, two alcoholic and two no-alcoholic, with and without sugar respectively, from reconstituted extract (alcoholature/green plant) of the same plant, at different concentrations (5%, 15% and 30%), on Salmonella Enteritidis (ATCC 11076) was determined by Suspension Tests in Multiple Tubes System, and the acceptability/sensory preference by Hedonic Scale of these four products. All differents extractions forms had showed selective capacity of inhibition or inactivation on the three bacterial inocula. The alcoholic extraction form presented the antibacterial activity more intense (inhibition/inactivation) against the three agents. The sensitivest bacteria by all preservatives solutions was Salmonella Enteritidis. Staphylococcus aureus showed a lower sensibility to the decoction types, while Escherichia coli showed a lower sensibility to the hydroalcoholic extraction. All food formulations showed bactericidal activity on Salmonella Enteritidis, directly proportional to the extract concentrations and the exposure time of the bacterium in beverages, pointing the not alcohol with sugar formulation. In the sensorial analysis the preference increased with the decrease of the extract concentration of Ocimum gratissimum. The non-alcoholic beverage with sugar, in the extract concentration of 5%, pointed in the sensorial preference// acceptability.

Submitted by Márcio Maia (marciokjmaia@gmail.com) on 2016-09-08T20:43:23Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1314156 bytes, checksum: 53176e3b5e1286467ff179df2731a8da (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-08T20:43:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1314156 bytes, checksum: 53176e3b5e1286467ff179df2731a8da (MD5) Previous issue date: 2015-08-26 / The use of natural products by man goes back to the origins of the human species, which over the evolutionary process, was learning how to select plants for their food and for the relief of their ailments and diseases. Essential oils are complex organic constituents produced by aromatic plants as secondary metabolites, known for its medicinal properties. Croton tricolor Klotzsch ex Baill is a species belonging to Euphorbiaceae family, with antimicrobial and antioxidant properties. This study aimed to evaluate the antibacterial activity against Gram positive bacterial strains (Staphylococcus aureus) and Gram-negative (Escherichia coli), as well as antioxidant activity, cytotoxic and genotoxic of the essential oil of C. tricolor stem (Ct-OEc). The antibacterial activity was evaluated by determining the minimum inhibitory concentration (MIC) by the broth microdilution technique and characterization of the bactericidal effect by plating and spectrophotometry. The oxidant and antioxidant activities were determined in human blood type O erythrocytes in the absence and presence of phenylhydrazine. The in vitro cytotoxicity was determined by quantification of the hemolysis against human red cells of blood types A, B and O. The investigation of genotoxicity in vivo was performed using the micronucleus test in Swiss mice. The results indicate the presence of antimicrobial activity Ct-OEC front strains of S. aureus ATCC 25925 and E. coli ATCC 2536, E. coli ATCC 8539, E. coli 101 and E. coli 105 at a concentration of 1 mg. ml-1 (MIC). The Ct-OEc has no oxidizing effect at the concentrations tested and displays antioxidant effect at the concentration of 1000μg/mL. In evaluating the genotoxic potential by micronucleus test in mice, it was found that Ct-OEC not led to increased frequency of micronuclei in the peripheral blood of mice. Thus it was concluded that the essential oil of Croton tricolor has antibacterial activity, no effects on cell membrane, in low concentrations, without inducing oxidative, has antioxidant activity, without aneugenic and clastogenic effects. / A utilização de produtos naturais pelo homem remonta às origens da espécie humana, que ao longo do processo evolutivo, foi aprendendo a selecionar plantas para a sua alimentação e para o alívio de seus males e doenças. Óleos essenciais são constituintes orgânicos complexos, produzidos por plantas aromáticas como metabólitos secundários, conhecidos por suas propriedades medicinais. Croton tricolor Klotzsch ex Baill pertencente a família Euphorbiaceae com propriedades antimicrobiana e antioxidante. Este estudo objetivou avaliar a atividade antibacteriana frente a linhagens bacterianas Gram positivas (Staphylococcus aureus) e Gram negativas (Escherichia coli), bem como as atividades antioxidante, citotóxica e genotóxica do óleo essencial do caule de C. tricolor (Ct-OEc). A atividade antibacteriana foi avaliada através da determinação da concentração inibitória mínima (CIM) pela técnica de microdiluição e a caracterização do efeito bactericida por plaqueamento e espectrofotometria. A citotoxicidade in vitro, foi determinada pela quantificação da hemólise frente a eritrócitos humanos dos tipos sanguíneos A, B e O. A investigação da genotoxicidade in vivo foi realizada através do teste de micronúcleo em camundongos Swiss. Os resultados obtidos indicam a presença de atividade antibacteriana do Ct-OEc frente as cepas de S. aureus ATCC 25925 e E. coli ATCC 2536, E. coli ATCC 8539, E. coli 101 e E. coli 105 na concentração de 1 mg.mL-1 (CIM). O Ct-OEc não apresenta efeito oxidante nas concentrações testadas e apresenta efeito antioxidante na concentração de 1000μg/mL. A avaliação da atividade hemolítica do Ct-OEc frente aos eritrócitos humanos dos grupos sanguíneos A, B e O promoveu hemólise de baixa a moderada até a concentração de 100 μg/mL. Na avaliação do potencial genotóxico, através do teste do micronúcleo em camundongos, verificou-se que o Ct-OEc não provocou o aumento da frequência de micronúcleos no sangue periférico dos camundongos. Sendo assim foi concluído que o óleo essencial de Croton tricolor apresenta atividade antibacteriana, sem efeitos sobre a membrana celular, quando em baixas concentrações, sem induzir atividade oxidante, apresenta atividade antioxidante, sem efeitos aneugênicos e clastogênicos.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The main objective of this work was to evaluate the antioxidant and antibacterial activities of extracts of Brassica oleracea var. capitata, obtained by supercritical CO2 and ultrasound-assisted extractions, as well as to carry out the characterization of these extracts using gas chromatography coupled with mass detector. For supercritical CO2, five extractions were performed to investigate the influence of pressure (10-25 MPa) and temperature (20-60°C) on the extraction yield, chemical composition and antioxidant activity towards peroxyl, superoxide and hydroxyl radicals. The highest extraction yield was 0.47% at 60 °C and 25 MPa. In the characterization of the extracts was possible to identify compounds like sulforaphane and iberin nitrile. All extracts showed antioxidant activity for the three radicals, although the highest activity for all radicals was obtained using the extract obtained at 60 °C and 25 MPa (run 2). For the ultrasound-assisted extraction were evaluated the effects of solvent concentration and temperature. The extracts obtained in the optimized extraction condition, were subjected to different hydrolysis conditions before use in biological assays. It was evaluated the antioxidant activity against DPPH, superoxide and peroxyl radicals, besides the antibacterial activity against S. aureus and E. coli. Both crude and hydrolyzed extracts were characterized by gas chromatography coupled with mass detector. The best condition for extraction was 30 ° C and 60% (w /v) of ethanol. All extracts showed antioxidant activity towards DPPH, superoxide and peroxyl radicals, but the use of hydrolyzed extracts improved considerably the antioxidant activities. Antibacterial activity was detected only in extracts hydrolysates Brassica oleracea var. capitata. The main contributions of this work were that the use of supercritical CO2 extraction to obtain bioactive compounds from Brassica oleracea var. capitata showed a promising alternative to conventional methods of extraction, since it allowed the extraction of compounds of interest in science and industry. Besides, in this work was demonstrated that the hydrolysis of extracts can increase the antioxidant activity of plant extracts. / O objetivo principal deste trabalho foi avaliar a atividade antioxidante e antibacteriana de extratos de Brassica oleracea var. capitata, obtidos a partir de extração supercrítica e extração por ultrassom, além de caracterizá-los por cromatografia gasosa acoplada à detector de massas. Para os compostos bioativos apolares de Brassica oleracea var. capitata, utilizou-se extração com CO2 supercrítico e avaliou-se o potencial antioxidante dos extratos. Foram realizadas cinco extrações para investigar a influência da pressão (10 - 25 MPa) e temperatura (20 - 60°C) no rendimento da extração, na composição química e na atividade antioxidante frente os radicais peroxila, superóxido e hidroxila. Obteve-se o maior rendimento de extração 0,47% a 60 °C e 25 MPa. Na caracterização dos extratos foi possível a identificação de compostos como sulforafano e iberin nitrila. Todos os extratos apresentaram atividade antioxidante para os três radicais, porém a maior atividade para todos os radicais foi o extrato obtido a 60°C e 25 MPa. Para os compostos bioativos polares, otimizou-se a extração assistida por ultrassom. Os extratos obtidos nas melhores condições de extração foram submetidos a diferentes condições de hidrólise, antes da sua utilização nos ensaios biológicos. Avaliou-se a atividade antioxidante, frente ao radical DPPH, superóxido e peroxila, além da atividade antibacteriana, frente a S.aureus e E.coli. Tanto os extratos brutos quanto os hidrolisados, foram caracterizados por cromatografia gasosa acoplada à detector de massas. A melhor condição de extração foi a 30ºC e 60% (m/v) de etanol. Todos os extratos apresentaram atividade antioxidante frente aos radicais DPPH, superóxido e peroxila, mas o uso de extratos hidrolisados melhorou consideravelmente a atividade antioxidante. Em relação à atividade antibacteriana, apenas uma amostra, que foi submetida à condição de hidrólise alcalina apresentou ação frente a E.coli. Uma das principais contribuições deste trabalho foi que a utilização de extração com CO2 supercrítico, para obtenção de compostos bioativos de Brassica oleracea var. capitata, mostrou ser uma alternativa promissora em relação aos métodos convencionais de extração, pois permitiu a extração de compostos com interesse científico e industrial. Além disso, foi demonstrado que a hidrólise dos extratos pode aumentar consideravelmente a atividade antioxidante de extratos vegetais em relação aos extratos brutos.

Made available in DSpace on 2015-04-01T14:16:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1537357 bytes, checksum: 3061485d82261d42ece97a0bfe13405e (MD5) Previous issue date: 2013-02-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The mechanism of antimicrobial resistance is a genetic phenomenon related to the existence of genes contained in the microorganism that encode proteins responsible for biochemical mechanisms that prevent the action of drugs. The increasing incidence of resistant bacteria has undermined the therapeutic value of available antibacterials, creating the necessity, increasingly, the search for alternatives that can reverse or decrease the resistance, as the search for inhibitors of resistance mechanisms. Efflux pumps, which are transmembrane proteins involved in transport of substrates toxic, has been responsible for many cases of bacterial resistance to antibiotics and being associated with multidrug resistance. "Modifiers of drug resistance", "Modifiers of antibiotic activity" and "Adjuvant antibiotic" are terms used for drugs that modulate bacterial resistance to antibiotics, which may act by inhibiting the efflux system. In the present study, we evaluated extracts of Dictyota pulchella and Sargassum polyceratium and their isolated compounds, diterpene and pheophytin as possible efflux pump inhibitors; extracts: Gracilaria cervicornis, Sargassum polyceratiu,; Mexican Caulerpa, Caulerpa kempfii, hondrophycus papillosus, Dictyota pulchella and Sargassum polyceratium with antibacterial activity mediated by UV- A Light. We used bacterial strains expressing the gene norA, msrA or tetK encoding efflux proteins for some compounds, such as norfloxacin (Nora), erythromycin (MSRA) and tetracycline (TetK), respectively. Through the microdilution technique using nutrient broth, were determined values of minimum inhibitory concentrations (MIC) of antibiotics, algae extracts and constituents, and to evaluate the activity modulator, MICs of the antibiotics were determined in the absence and presence of concentrations subinibitory natural products. None of the extracts or constituents tested showed significant antibacterial activity (MIC ≥ 256μg/mL), however, two of the extracts, Dictyota and Sargassum and their constituents phaeophytin and diterpene showed modulatory activity in the strains tested. They reduced values between 2 and 16 times. The extracts of Dictyota and Sargassum also showed antibacterial activity median for light. The results presented here describe for the first time tested these extracts and constituents acting as a putative inhibitor of the efflux system in bacteria, and also phototoxic activity. Therefore, natural products seaweed may serve as source products which modulate the bacterial resistance, ie as antibiotics adjuvants potential. / O mecanismo de resistência aos antimicrobianos é um fenômeno genético relacionado à existência de genes contidos no microrganismo que codificam diferentes proteínas, responsáveis por mecanismos bioquímicos que impedem a ação das drogas. A crescente incidência de bactérias resistentes tem minado o valor terapêutico dos antibacterianos existentes, criando a necessidade, cada vez maior, da busca por alternativas capazes de reverter ou diminuir a resistência. Bombas de efluxo, que são proteínas transmembrana envolvidas no transporte de substratos tóxicos, tem sido responsabilizada por diversos casos de resistência bacteriana a antibióticos, sendo associada à resistência a múltiplas drogas. Modificadores da resistência à drogas , Modificadores da atividade antibiótica e Adjuvantes de antibióticos são termos utilizados para drogas que modulam a resistência bacteriana a certos antibióticos, os quais podem agir inibindo o sistema de efluxo. No presente trabalho, foram avaliados: extratos de Dictyota pulchella e Sargassum polyceratium, bem como os respectivos compostos isolados, diterpeno e feofitina, como possíveis inibidores da bomba de efluxo; extratos de: Gracilaria cervicornis, Sargassum polyceratiu,; Caulerpa mexicana, Caulerpa kempfii, Chondrophycus papillosus, Dictyota pulchella e Sargassum polyceratium com atividade antibacteriana mediada por Luz UV-A. As linhagens bacterianas utilizadas expressam o gene norA, msrA ou tetK codificadores das proteínas de efluxo para alguns compostos, como: norfloxacina (NorA), eritromicina (MsrA) e tetraciclina (TetK), respectivamente. Foram determinados por meio da técnica de microdiluição em caldo nutriente os valores das concentrações inibitória mínima (CIM) dos antibióticos, extratos e constituintes de algas, e para avaliar a atividade moduladora, as CIM dos antibióticos foram determinadas na ausência e na presença de concentrações subinibitórias dos produtos naturais. Nenhum dos extratos ou constituintes ensaiados mostrou atividade antibacteriana relevante (CIM ≥ 256μg/mL), no entanto, dois dos extratos, Dictyota e Sargassum e seus respectivos constituintes diterpeno e feofitina, apresentaram atividade moduladora nas linhagens ensaiadas. Eles reduziram os valores entre 2 e 16 vezes. Os extratos de Dictyota e Sargassum também apresentaram atividade antibacteriana mediana por luz. Os resultados aqui apresentados relatam pela primeira vez a esses extratos e constituintes testados agindo como um putativo inibidor do sistema de efluxo em bactérias, e também com atividade fototóxica. Logo, produtos naturais da flora algológica podem servir como fonte de produtos que modulam a resistência bacteriana, ou seja, como potenciais adjuvantes de antibióticos.

Os extratos totais, assim como os compostos fenólicos isolados de diferentes partes de Anacardium occidentale conhecido popularmente no Brasil como cajueiro mostraram atividades antiúlcera e antibacteriana. O objetivo deste trabalho foi a verificação destas atividades nas folhas, estudo farmacobotânico, químico e toxicológico. Para a analise anatômica foram utilizados cortes do terço mediano inferior da lâmina fotiar. Nesta, as epidermes em vista frontal apresentam cutícula estriada, na face abaxial, a epiderme é constituída de células de formato poligonal, com paredes bem justapostas. Na face adaxial, as células são de paredes espessas, ligeiramente onduladas. A mesma é constituída de estômatos de tipo anomocítico e de tricomas glandulares de forma ovóide. O mesófilo é constituído de duas camadas de parênquima paliçádico, espessas, de forma quase regular e de parênquima lacunoso com células de forma irregular, envolvendo os feixes vasculares de nervuras secundarias. Extensões de fibras são observadas no mesófilo. A nervura mediana possui um colênquima desenvolvido e ductos são encontrados no floema assim como no parênquima medular. Drusas são encontradas no parênquima lacunoso assim como no parênquima fundamental e no colênquima. A partir da triagem fitoquímica, da cromatografia em camada delgada, cromatografia liquida de alta eficiência e cromatografia liquida acoplada a espectrometria de massa, verificou-se a presença nas folhas de cajueiro de compostos polifenólicos, particularmente de heterosídeos flavonóidicos. As estruturas de flavonóide que parecem ser mais evidentes, de acordo com a cromatografia liquida acoplada a massa, são principalmente os heterosídeos da quercetina. O extrato etanol 70% liofilizado das folhas do cajueiro foi submetido ao modelo agudo da úlcera gástrica em ratos e a ensaio antibacteriano, ensaiando as linhagens de Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escheríchía coli ATCC 35218 e ATCC 25922, Pseudomonas aerugínosa ATCC 27853 e de Campylobacter coli. Na úlcera aguda, a área relativa de lesão ulcerativa foi diminuída de 98% na dose 400mg/kg, em relação ao controle. A partir de um estudo de doses crescentes sobre a inibição de úlcera, a DE50 foi calculada como 150 mg/kg e as doses de extrato maiores ou iguais a 100 mg/kg exibiram uma inibição de lesão ulcerativa melhor que o lansoprazol 30mg. A fração metanólica, que inibiu as ulcerações de 88,20%, deve conter alguns dos princípios ativos da atividade antiúlcera. Quanto ao teste antimicrobiano, foram obtidas concentrações inibitória mínima e bactericida mínima, iguais a 320 &#181;g/mL, particularmente com a linhagem Staphylococcus aureus, a partir do extrato bruto e da sua fração rica em flavonóides. A partir de ensaio de toxicidade aguda em camundongos e ratos, a DL50 do extrato bruto foi considerada superior a 2000 mg/kg. Foi feito um estudo de toxicidade de administração reiterada em 30 e 90 dias. Baseados em analises bioquímicas para avaliação da função renal e da função hepato-biliar, os parâmetros uréia, creatinina, transaminases, proteína total, albumina, colesterol e cálcio tendem a comprovar que o produto é bem tolerado pelo organismo dos ratos. Este fato é também confirmado pelo estudo hematológico e pela histopatologia, não ocorrendo alterações, após administração subaguda do extrato em ratos. O potencial mutagênico foi avaliado através do teste de Ames e do teste do micronúcleo de medula óssea em camundongo. Foi obtido indício de indução de \"frameshift\" e substituição de pares de bases. Na dose de 2000mg/kg, o extrato de cajueiro parece induzir danos nos cromossomos porém, o fenômeno parece ser extremamente inferior (p<0,001) ao efeito clastogênico induzido pela ciclofosfamida, utilizada como agente mutagênico de referência. / Crude extracts as well as phenolics isolated from the bark or the fruit of Anacardium occidentale popularly known as cajueiro in Brazil, showed antiulcer and antibacterial effects. The aim of this work was to verify those effects in the leaf, botanical, chemical and toxicological studies. Ultrastructure of the leaf was carried on. Cross-sections from the third inferior part of the leaf blade were used. Cashew leaf contains uniseriate epidermis with a sub-eperdimic layer, anomocytic stomata and glandular ovoid trichomes on the inferior surface. The mesophyll exhibits two cell layers of palisadic parenchyma and a lacunose parenchyma containing vascular bundles of the secondary nervures. The median nervure contains a developed collenchyma. Several druses of calcium oxalate are present in the fundamental parenchyma, lacunose parenchyma and in the collenchyma. Resin ducts are also observed in the phloem as well as in the medullar parenchyma. Extensions of sclerenchymatous fibres are observed in the mesophyll. By phytochemical analyses using TLC, HPLC-DAD and positive ions LC-ESIMS, we verified the presence of polyphenols in cashew leaves particularly heterosids of flavonoids. From LC-ESI-MS, evident structures of flavonoids seemed to be heterosids of quercetin. Ethanol 70% extract of cashew leaves was used for antiulcer and antibacterial essays. With extract dose 400mg/kg, ulcer lesions induced by HCL/ethanol 60% in rats, decreased about 98%. By a dose-response effect study, ED50 was evaluated about 150 mg/kg. Extract doses higher than 100mg/kg showed potential of lesion inhibition superior to lansoprazol 30mg. Extract methanolic fraction that gave 88,20% of ulcer inhibition likely contains the principie active of the antiulcer effect. Using bacterial strains, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 35218 and ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 and a clinical isolate Campylobacter coli, for antibacterial essay, the ethanolic extract and one fraction rich in flavonoids were only active in S. aureus with MIC and MBC equal to 320 &#181;g/mL. Acute, 30-day and 90-day subacute toxicity studies were carried out. Crude extract DL50 was superior to 2000mg/kg. Based on biochemical analyses for the evaluation of renal and hepato-biliary functions, level of urea, creatinine, transaminases, total protein, albumin, bilirubin, cholesterol and calcium proved that the extract is biologically tolerated by rat organismo This result was also confirmed by studies in hematology and histopathology. Genotoxity was accessed by Ames test in Salmonella typhimurium strains TA97, TA98, TA100, TA102 and bone marrow micronucleus test in mice. The extract exhibited sign of frameshift and base pairs substitution. Extract dose 2000mglkg seemed to induce damage in the chromosomes however; the activity was extremely inferior to the c1astogenic effect induced by ciclophosphamide.

As infecções por bactérias representam um grave problema hoje e para o futuro, devido ao fato de que estes microrganismos desenvolvem mecanismos de resistência aos antibióticos ao longo do tempo de uso. A formação de biofilmes também é um fator a ser discutido no cenário atual por estar associado a muitas infecções bacterianas humanas, principalmente àquelas envolvendo dispositivos médicos aumentando assim os riscos de infecções hospitalares. O ácido ursólico (AU) é um triterpeno conhecido por suas atividades biológicas relatadas. Apresenta moderada atividade antibacteriana, porém tem demonstrado importante citotoxicidade frente a algumas linhagens celulares. Em vista disso, neste trabalho se desenvolveu uma série de novas moléculas derivadas do AU com alterações nas posições C-3 e C-28. Quatro moléculas com substituição em C-3 (derivados 2, 3, 4e 5) e uma com substituição em C-3 e C-28 (derivado 6) foram comparadas ao AU (1) quanto a atividade antibacteriana. As cepas utilizadas foram Salmonela Typhimurium, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Proteus mirabilis, Staphylococcus epidermidis e Staphylococcus aureus. Os compostos 3 e 6 apresentaram melhor perfil inibitório de forma geral, onde 3 apresentouse bactericida para S. aureus e S. epidermidis (Gram positivas) e paraP. mirabilis (Gram negativa) apresentou-se bacteriostático. / The ursolic acid (UA) is a triterpene known for their biological activities reported. Thus, become useful techniques semi-synthesis starting from natural products extracted, for example residue industries in order to improve the pharmacological properties decreasing toxicity. The bacterial infections are a serious problem today and in the future due to the fact that these organisms develop resistance mechanisms to antibiotics over time of use. The formation of biofilms is also a factor to be discussed in the current scenario because of being responsible for a very high number of rejections and other prosthetic devices by increasing the risk of nosocomial infections. The AU has a moderate antibacterial activity reported in the literature, but showed significant cytotoxicity against some cell lines. In view of this it developed a series of new molecules derived from AU residues extracted from apples (Mallus domestica) from the juice industry by promoting the so-called green chemistry. The molecules undergo changes in C-3 and C-28. Four molecules with substitution at C-3 (derived from 2, 3, 4 and 5) and one with substitution at C-3 and C-28 (derived 6) were compared with au (1). The strains used in the tests of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration were Salmonella Typhimurium, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Proteus mirabilis, Staphylococcus epidermidis and Staphylococcus aureus. Compounds 3 and 6 had better inhibitory profile in general, where three presented bactericidal to S. aureus and S. epidermidis (Gram positive) and P. mirabilis (Gram negative) appeared bacteriostatic.