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Leveduras patogênicas em fezes de aves de cativeiro: relação fenotípica e genotípica entre os isolados

Reis, Eduardo José de Carvalho [UNESP] 19 June 2015 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2016-04-01T17:54:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-19. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:00:27Z : No. of bitstreams: 1 000859873.pdf: 2638623 bytes, checksum: 90fbdca81a4a3fccc9087d1e9cec6b1c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os homens e animais possuem uma relação milenar, em que o grupo das aves, em especial, é utilizado amplamente para diversas finalidades, tais como alimentação e companhia. As aves são retratadas como disseminadoras de patógenos ao ambiente, entretanto, o conhecimento a respeito deste papel a determinadas espécies aviárias, intimamente correlacionadas ao ser humano, são um tanto escassos. O presente trabalho teve como objetivos isolar, identificar e caracterizar o fenótipo e o genótipo de leveduras obtidas de fezes de cinco aves de cativeiro: galinha (Gallus gallus domesticus), Pássaro-do-amor (Agapornis spp), Periquito-australiano (Melopsittacus undulatus) calopsita (Nymphicus hollandicus) e canário (Serinus canaria domesticus). Para tanto, foram avaliadas 247 amostras de fezes destas cinco espécies aviárias, provenientes de sete cidades localizadas na região noroeste do estado de São Paulo, Sul de Minas Gerais e sudoeste do Mato Grosso do Sul. A coleta foi realizada com auxílio de espátulas estéreis. O material foi semeado em ágar Sabouraud dextrose e ágar semente de Níger, como titulações. A identificação das espécies baseou-se nas características macro e micromorfólogicas, e bioquímicas. Ademais, todos os isolados identificados, foram submetidos ao teste de antifungigrama por disco-difusão (CLSI, documento M44-A), frente a anfotericina B, cetoconazol, fluconazol e itraconazol. Aqueles que apresentavam padrões de suscetibilidade dose-dependente ou resistente, foram submetidos ao teste de microdiluição em caldo (CLSI, documento M27-A3). A ocorrência de leveduras se deu em 89% das amostras, variando de 77,5% a 94,0% independente da ave estudada. Foram obtidos 318 isolados, pertencentes a 29 espécies diferentes. O gênero prevalente foi Candida com 183 isolados (57,5%), seguido de Cryptococcus com 45 (14,2%), Rhodotorula com 38 (11,9%) e Trichosporon com 36 (11,3%); os demais gêneros totalizaram 16 isolados... / Men and animals have an age-old relationship, where the group of birds, in particular, is widely used for various purposes, such as food and company.Men and animals have an age-old relationship, where the group of birds in particular is widely used for various purposes, such as food and company. The birds are portrayed as disseminators of pathogens to the environment, however, knowledge about this role certain avian species, closely correlated to humans, are somewhat scarce. This study aimed to isolate, identify and characterize the phenotype and the genotype obtained yeast stool five captive birds: chicken (Gallus gallus domesticus), Love bird (Agapornis spp), Budgerigar (Melopsittacus undulatus) cockatiel (Nymphicus hollandicus) and canary (Serinus canaria domesticus). Therefore, we evaluated 247 stool samples of these five avian species from seven cities located in the northwest from State of São Paulo, southern of Minas Gerais and southwestern Mato Grosso do Sul. The collection was performed using sterile spatulas. The material was seeded in Sabouraud dextrose agar and seed Niger agar, with titrations. The identification of species was based on biochemical and macro and micromorphological characteristics. In addition, all isolates identified were submitted to antifungal susceptibility testing by disk diffusion (CLSI, M44-A), compared to amphotericin B, ketoconazole, fluaconazole and itraconazole. The occurrence of yeasts occurred in 89% of samples, ranging from 77.5% to 94.0% of the studied independently bird. There were obtained 318 isolates belonging to 29 different species. There were obtained 318 isolates belonging to 29 different species. The prevalent genus isolated was Candida with 183 (57.5%), followed by Cryptococcus with 45 (14.2%), Rhodotorula with 38 (11.9%) and Trichosporon with 36 (11.3%); other genres totaled 16 isolates (5.0%). Note that, in the number of fungal species isolated, C. albicans, C. guilliermondii, C. ...
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Geoprópolis de Melipona fasciculata SMITH: ações citotóxica, imunomoduladora, antibacteriana e antifúngica

Araújo, Maria José Abigail Mendes [UNESP] 25 February 2013 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-25Bitstream added on 2014-06-13T18:45:04Z : No. of bitstreams: 1 araujo_mjam_dr_botfm.pdf: 543081 bytes, checksum: 9a4eb9b648c8708962a81d32a5de52a3 (MD5) / Própolis é composta por substâncias resinosas, coletadas de várias plantas por abelhas africanizadas, adicionando pólen, cera e secreções glandulares, enquanto para a produção de geoprópolis (Geo) as abelhas sem ferrão utilizam materiais resinosos de plantas, cera, e ainda acrescentam terra ou barro. As atividades biológicas da própolis produzida por Apis mellifera têm sido extensivamente estudadas, mas ainda são escassos os trabalhos sobre as propriedades da geoprópolis. Assim, o presente trabalho se propôs a investigar as atividades citotóxica, imunomoduladora, antibacteriana e antifúngica do extrato hidroalcoólico de geoprópolis de Melipona fasciculata Smith. Foi realizada a caracterização química da Geo, verificando que o principal grupo de compostos encontrados foram triterpenos. No tocante às células do carcinoma da laringe humana (HEp-2), Geo apresentou ação inibitória em concentrações mais elevadas; entretanto, esta ação foi somente citostática. Geo apresentou ação imunomoduladora sobre monócitos humanos, estimulando a produção das citocinas estudadas (TNF-α e IL-10). Não foi observada ação antibacteriana contra S. aureus e E. coli, havendo inibição destas linhagens somente com altas concentrações do extrato. Contudo, a associação de Geo com antibióticos favoreceu a ação do cloranfenicol sobre S. aureus. A Geo exerceu ação inibitória sobre Pythium insidiosum, tanto para o isolado obtido de caso humano como de eqüinos. Os resultados sugerem que a Geo apresentou inúmeras propriedades biológicas; contudo, sua ação é menor em comparação à própolis produzida por abelhas africanizadas, talvez devido ao baixo rendimento do extrato e sua difícil solubilidade / Propolis is composed of resinous substances collected from various plants by Africanized honeybees, adding polen, wax and bee secretions, while for geopropolis (Geo) production stingless bees use resinous materials from plants, wax, but also adding mud or clay. The biological activities of propolis produced by Apis mellifera have been extensively studied, but there are few studies on Geo properties. Thus, the present study investigated the cytotoxic, immunomodulatory, antibacterial and antifungal activities of hydroalcoholic extract of Geo produced by Melipona fasciculata Smith. The chemical characterization of Geo was performed, revealing that the main group of compounds was triterpenes. Geo exerted an inhibitory action on human larynx carcinoma cells (HEp-2) using high concentrations, however, it was only a cytostatic action. Geo exhibited immunomodulatory effects on human monocytes, stimulating cytokines production (TNF-α and IL-10). No antibacterial activity was seen against S. aureus and E. coli. However, the combination of Geo with chloramphenicol favored its effect against S. aureus. Geo exerted an inhibitory action against Pythium insidiosum, both for human or equine isolates. Data suggested that Geo presented several properties; however, its activity is lower compared to propolis produced by honeybees, perhaps due to the low yield of the extract and its difficult solubility
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Diterpenos tetranorlabdanos e isocumarinas produzidos por Botryosphaeria parva, um fungo endofítico em Eugenia jambolana Lam. (Myrtaceae) / Tetranorlabdanes diterpenoids and isocoumarins produced by Botryosphaeria parva, an endophytic fungus from Eugenia jambolana Lam. (Myrtaceae)

Monfardini, Júlia Dietsche [UNESP] 10 March 2016 (has links)
Submitted by JULIA DIETSCHE MONFARDINI null (juliadm@iq.unesp.br) on 2016-04-01T16:52:10Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Julia Dietsche Monfardini.pdf: 10246419 bytes, checksum: dff6716d7f1e0f36c408ba7afeff1e25 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-04-05T18:12:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 monfardini_jd_me_araiq_par.pdf: 807325 bytes, checksum: 9a9635608b6709f23a60f0fd6f5e676e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-05T18:12:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 monfardini_jd_me_araiq_par.pdf: 807325 bytes, checksum: 9a9635608b6709f23a60f0fd6f5e676e (MD5) Previous issue date: 2016-03-10 / Os micro-organismos têm demonstrado serem valiosas fontes de princípios ativos de uso clínico, no qual a penicilina é o exemplo mais conhecido de metabólito secundário, de importância medicinal, produzido por fungos. A espécie vegetal Eugenia jambolana Lam., popularmente conhecida como Jambolão, é utilizada na medicina popular brasileira, principalmente no tratamento de diabetes. O fungo Botryosphaeria parva, isolado das folhas da E. jambolana (L.) e codificado como Ej_F01, foi cultivado em escala ampliada em três meios de cultivo: Czapek®, PDB e Milho. Após o período de fermentação do endófito no meio de milho, foi feita uma extração direta com MeOH, seguida de filtração e evaporação do solvente. O extrato obtido foi solubilizado em AcOEt e fez-se três partições líquido-líquido com H2O, após a evaporação do solvente orgânico, o extrato foi dissolvido em CH3CN e foi feita uma nova partição líquido-líquido com Hexano, após a evaporação da CH3CN, foi obtido o extrato de interesse. Após o período de fermentação do endófito nos meios líquidos (PDB e Czapek®), a suspensão micelar foi filtrada a pressão reduzida, separando os micélios dos meios fermentados. Em seguida, os filtrados aquosos foram submetidos a três partições líquido-líquido com AcOEt, e após a evaporação do solvente orgânico, foram obtidos os extratos brutos de interesse. Todos os extratos foram fracionados utilizando técnicas cromatográficas, como Cromatografia em Coluna e/ou Cromatografia Líquida de Alta Eficiência preparativa. Após o fracionamento dos extratos brutos, foi possível obter sete substâncias oriundas do extrato do milho, seis substâncias do extrato do Czapek®, e uma do extrato de PDB, que foram submetidas a análises espectrométricas (EM, RMN de 1H, 13C, 1D e 2D) para a determinação/identificação estrutural. As substâncias 05, 08, 09 e 11 foram identificadas como 5-hidroximeleina, rel. (3S, 4S)-4-hidroximeleina, meleina e rel. (3S, 4R)-4-hidroximeleina, respectivamente, pertencentes à classe das isocumarinas; as substâncias 01, 03, 06 e 07 foram identificadas como botryosphaerin A, 13,14,15,16-tetranorlabd-7-eno-19,6β:12,17-diolídeo, CJ-14445 e oidiolactona E, respectivamente, pertencentes à classe dos diterpenos tetranorlabdanos; a substância 12 foi identificada como botryosphaerona D, pertencente à classe das naftalenonas. A substância 02, inédita, foi nomeada como rel. (4S, 5R, 6R, 10S)-18-hidroxi-13,14,15,16-tetranorlabd-7,9-dieno-19,6β:12,17-diolídeo, codificada como botryosphaerin I. Os estudos relacionados ao B. parva têm como finalidade verificar sua produção metabólica em diferentes meios de cultivo, bem como a avaliação do potencial biológico dos extratos brutos, frente aos ensaios antioxidante, antifúngico e anticolinesterásico. / Microorganisms have proven to be valuable sources of active principles for clinical use, wherein the penicillin is the best known example of a secondary metabolite of medicinal importance, produced by fungi. The plant species Eugenia jambolana Lam., commonly called Black Plum, is used in traditional Brazilian medicine, especially in the treatment of diabetes. The Botryosphaeria parva fungus, isolated from leaves of E. jambolana (L.) encoded as Ej_F01, was grown on an enlarged scale in three different culture media: Czapek®, PDB and corn. After the fermentation period in the corn media, a direct extraction was done with MeOH followed by filtration and evaporation of the solvent. The extract was disolved in AcOEt and made three liquid-liquid partition with H2O, after evaporation of the organic solvent, the extract was dissolved in CH3CN and was made a new liquid-liquid partition with Hexane, after evaporation of the CH3CN, it was obtained extract of interest. After the fermentation period in liquid media (PDB and Czapek®), the micellar suspension was filtered under reduced pressure, separating the mycelium from the fermented broth. Then, the aqueous filtrates were subjected to three liquid-liquid partition with AcOEt, and after evaporation of the organic solvent, there were obtained the crude extracts of interest. All extracts were fractionated using chromatographic techniques such as column chromatography and/or preparative High Performance Liquid Chromatography efficiency. After the fractioning of crude extracts, it was possible to obtain seven substances derived from corn extract, six substances obtained from Czapek extract, and a substance obtained from the PDB extract, which were submitted to spectrometric analysis (MS-ESI, NMR 1H, 13C, 1D and 2D) for determining and structural identification. The substances 05, 08, 09 and 11 were identified as 5-hydroxymelein, rel. (3S, 4S)-4-hydroxymelein, Melein and rel. (3S, 4R)-4-hydroxymelein, respectively, belonging to the class of isocoumarins; the substances 01, 03, 06 and 07 were identified as botryosphaerin A, 13,14,15,16-tetranorlabd-7-ene-19,6β:12,17-diolide, CJ-14445 and oidiolactone E, respectively, belonging to the class of tetranorlabdanes diterpenoids, and substance 12 was identified as botryosphaerone D, belonging to the class of naftalenones. A new tetranorlabdane diterpenoid was obtained, substance 02, named rel. (4S, 5R, 6R,10S)-18-hydroxy-13,14,15,16-tetranorlabd-7,9-dien-19,6β:12,17-diolide and encoded botryosphaerin I. These studies related to the B. parva are intended to verify your metabolic production in different culture media as well as the evaluation of the biological potential of extracts compared to antioxidant, antifungal and anticholinesterase trials.
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Investigação micológica do fluido vaginal de mulheres adultas da região de São José do Rio Preto

Corrêa, Paula dos Reis [UNESP] 10 February 2009 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-10Bitstream added on 2014-06-13T18:56:01Z : No. of bitstreams: 1 correa_pr_me_sjrp.pdf: 763319 bytes, checksum: 1d1304fe60a8bc1f5f7c29d67c166679 (MD5) / A candidíase vulvovaginal (CVV) é uma inflamação da mucosa genital decorrente de infecção por leveduras. Os principais sintomas são disúria, hiperemia, ardência, corrimento, prurido, dispareunia, fissuras. Aproximadamente 75% das mulheres sofrem ao menos um episódio de candidíase vulvovaginal, 40% apresentam mais de um episódio e menos de 5% tornam-se recorrentes (CVVR). A CVV tem como principal etiologia, Candida albicans, no entanto, episódios devido às espécies “não albicans” estão aumentando. O manejo das vaginites vem sendo realizado de modo empírico, levando a problemas quanto à terapêutica. Assim, este projeto teve como objetivos caracterizar fenotipicamente leveduras isoladas do conteúdo vaginal de 223 mulheres adultas, sintomáticas (S) e assintomáticas (A), atendidas pelo Serviço de Ginecologia do Hospital de Base de São José do Rio Preto e determinar os indicadores clínicos. Para tal, foi realizada análise micológica dos 223 isolados clínicos, sendo que, 87 amostras apresentaram cultura positiva. C. albicans foi a espécie mais prevalente nos dois grupos (A/S), seguida de Candida glabrata. A maior parte das mulheres era casada com média de idade de 30 a 40 anos, referiu uso de anticoncepcionais e ciclo menstrual regular. Em relação a práticas sexuais houve, para parte das pacientes, concomitância entre os hábitos, anal, oral e vaginal. Quando avaliado o tratamento prévio, não houve evidência de associação com sintomas particulares. A suscetibilidade a antifúngicos, realizada pelos dois métodos de referência disco-difusão e microdiluição, mostrou concordância, estatisticamente comprovada, apenas para o itraconazol. Em relação à produção de fator de virulência, apenas C. albicans produziu fosfolipase. Diferentemente, proteinase foi detectada em C. albicans, C. glabrata e Candida parapsilosis. Esse último fator de virulência... / Vulvovaginal candidiasis (CVV) is an inflammation of genital mucosa caused by infection by yeasts. The main symptoms are dysuria, hyperemia, burning, corrimento, pruritus, dyspareunia, cracks. Approximately 75% of women suffer at least one episode of vulvovaginal candidiasis, 40% have more than one episode and less than 5% become recurrent (CVVR). The main cause is to candidiasis is Candida albicans, however, episodes due to the species non albicans are increasing. The management of vaginitis has been done so empirically, leading to problems with therapy. Thus, this project aimed to phenotypically characterize yeasts isolated from vaginal content of 223 adult women, symptomatic (S) and asymptomatic (A), attended by the Service of Gynecology, Hospital de Base de São José do Rio Preto and determine the clinical indicators. This has mycological analysis of 223 clinical isolates, of which 87 samples showed positive culture. C. albicans was the species most prevalent in both groups (A / S), followed by Candida glabrata. Most women were married with an average age of 30 to 40 years, said use of contraceptives and menstrual cycle regularly. In relation to sexual practices was for the part of patients, concomitance between habits, anal, oral and vaginal. When assessing the previous treatment, there was no evidence of association with particular symptoms. The susceptibility to antifungal held by the two methods of reference disc-diffusion and microdilution, showed agreement, statistically proven, only to itraconazole. For the production of virulence factor, only C. albicans produced phospholipase. Conversely, proteinase was detected in C. albicans, C. glabrata and Candida parapsilosis. The latter factor was associated with virulence, mainly in isolates from symptomatic patients. Data from this study helped reveal association between virulence factors with clinical signs... (Complete abstract click electronic access below)
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Atividade antifúngica do geraniol sobre leveduras multirresistentes do gênero candida e perfil farmacológico e toxicológico em estudos in silico

Pereira, Julio Abrantes 18 January 2017 (has links)
Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-09-12T12:28:26Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1665261 bytes, checksum: dbe5fa1dfafb0bc226838e2bdf4e396e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-12T12:28:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1665261 bytes, checksum: dbe5fa1dfafb0bc226838e2bdf4e396e (MD5) Previous issue date: 2017-01-18 / Currently, throughout the globe, there has been an increase in the frequency of cases of candidiasis, an opportunistic infection commonly treated with fluconazole. With the indiscriminate use of this and other antifungals cases of candidiasis by multiresistant strains have emerged, making it necessary to search for new drugs. Several natural products such as monoterpene geraniol have demonstrated antimicrobial activity to various microorganisms. The present study aimed to evaluate the antifungal activity of geraniol against strains of Candida albicans, C. glabrata and C. krusei resistant to fluconazole by means of microdilution techniques, evaluating the minimum inhibitory concentration - CIM, minimum fungicidal concentration - CFM, cell wall effect (sorbitol assay), binding to membrane ergosterol, effect of association of this monoterpene with fluconazole and amphotericin B antifungal agents by the checkeboard technique and modulation assay. Pharmacological, toxicological and possible spectra of geraniol activity were also verified by in silico assays using the Osiris, Molinspiration and Pass online software. The analysis showed that geraniol showed excellent antifungal activity against all multiresistant strains with a 512μg/mL CIM90, and a fungicidal effect dependent concentration after 8 hours of exposure with the CFM90 of 512μg/mL. Fungal wall and did not interact with the ergosterol of the cell membrane, nor did it show a synergistic, antagonistic or modulating effect of this phytoconstituent on fluconazole and amphotericin B. The in silico tests showed that geraniol has a good theoretical oral bioavailability, as well as numerous Although it presents the risk of an irritant effect, it does not present mutagenic, tumorigenic or reproductive effects, which leads to the conclusion that geraniol is a good candidate in the fight against multidrug resistant strains of Candida. / Atualmente, em todo globo terrestre tem ocorrido o aumento da frequência dos casos de candidíase, infecção oportunista comumente tratada com fluconazol. Com o uso indiscriminado deste e outros antifúngicos tem se emergido casos de candidíase por cepas multirresistentes tornando-se necessário a busca por novos fármacos. Vários produtos naturais a exemplo do monoterpeno geraniol têm demonstrado atividade antimicrobiana frente a diversos micro-organismos. Buscando alternativas para o tratamento da candidíase o presente estudo objetivou-se avaliar a atividade antifúngica do geraniol frente a cepas de Candida albicans, C. glabrata e C. krusei resistentes ao fluconazol por meio de técnicas de microdiluição, avaliando-se a concentração inibitória mínima – CIM, concentração fungicida mínima – CFM, efeito na parede celular (ensaio de sorbitol), ligação ao ergosterol da membrana, efeito de associação deste monoterpeno com antifúngicos fluconazol e anfotericina B pelo técnica de checkeboard e ensaio de modulação. Verificou-se também a os parâmetros farmacológicos, toxicológicos e possíveis espectros de atividade do geraniol por meio de ensaios in silico utilizando-se os softwares Osiris, Molinspiration e Pass online. As análises realizadas revelaram que o geraniol apresentou uma excelente atividade antifúngica frente a todas as cepas multirresistentes com uma CIM90 512μg/mL, além de um efeito fungicida concentração dependente após 8 horas de exposição com a CFM90 de 512μg/mL, este não apresentou atividade na parede fúngica e nem interagiu com o ergosterol da membrana celular, também não se evidenciou efeito sinérgico, antagônico ou modulador deste fitoconstituinte sobre o fluconazol e a anfotericina B. Os ensaios in silico mostraram que o geraniol tem uma boa biodisponibilidade oral teórica, além de inúmeras atividades farmacológicas e que embora apresente o risco de efeito irritante, não apresenta efeitos mutagênicos, tumorigênicos e nem danos ao aparelho reprodutor, o que permite sugerir que o geraniol é um bom candidato no combate a cepas de Candida multirresistentes.
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Investigação da atividade antifúngica, mecanismo de ação e análise do perfil proteico de Trichophyton rubrum E Microsporum canis frente a derivados de Piper umbellatum

Freitas, Jolindo Alencar [UNESP] 02 July 2015 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2016-07-01T13:10:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-02. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-01T13:14:08Z : No. of bitstreams: 1 000858759_20171201.pdf: 302844 bytes, checksum: fc41d8545291484b9429470ec145989a (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Piper umbellatum L. Miq. é uma planta pertencente à família Piperaceae encontrada em todas as regiões do Brasil e tradicionalmente usada para diversas enfermidades e afecções. O trabalho visou estudar a atividade antifúngica de P. umbellatum frente a isolados clínicos de Microsporum canis e Trichophyton rubrum, por meio da determinação da concentração inibitória mínima (CIM). O estudo fitoquímico dos extratos hexânico e etanólico de partes aéreas de Piper umbellatum levou ao isolamento de 2 substâncias, a sesamina e o 4-nerolidicatecol (4NC). Frente a M. canis, o extrato etanólico apresentou CIM de 39,1 μg/mL, o hexânico apresentou CIM de 1250 μg/mL, enquanto os extratos clorofórmico e acetato de etila apresentaram CIMs de 78,13 μg/mL, sendo 16 μg/mL para o fluconazol como controle positivo para ambos os fungos. O fracionamento do extrato etanólico levou à obtenção da fração 11 que apresentou o melhor valor de CIM entre as frações, de 9,77 μg/mL para o M. canis. O 4NC foi obtido desta fração 11 e apresentou os melhores CIMs observado deste estudo, de 2,4 μg/mL para M. canis e 4,88 μg/mL, para T. rubrum. Após tratamento com 4NC, Microsporum canis demonstrou uma alteração no perfil proteico avaliado por SDS-PAGE, com o aparecimento de bandas de aproximadamente 139 e 30 kDa entre as proteínas intracelulares e de 35 e 15 kDa entre as extracelulares, bandas que foram analisadas por LC-MS/MS (MALDI-TOF/TOF). O extrato etanólico não demonstrou citotoxicidade a 500 μg/mL, enquanto o 4NC apresentou valores de IC50 de 18,3 e 31,5 μg/mL frente às linhagens de Hep G2 e MRC-5. / Piper umbellatum L. Miq. is a plant belonging to the Piperaceae family found in all regions of Brazil and traditionally used for various diseases and disorders. This work evaluates the antifungal activity of P. umbellatum against clinical isolates of Microsporum canis and Trichophyton rubrum by the determination of minimal inhibitory concentration (MIC).The phytochemical study of hexane and ethanol extracts of the aerial parts of Piper umbellatum led to the isolation of two substances, sesamin and 4-nerolidylcatechol (4NC). When tested against M. canis, the ethanol extracts showed MIC value of 39.06 μg/mL meanwhile the chloroform and ethyl acetate extracts showed MICs value of 78.13 μg/mL and the hexane extract showed MIC of 1250 μg/mL, the MIC value of fluconazole used as control was 16 μg/mL. The fractionation of the ethanol extract led to obtain of fraction 11 that presented the best MIC between the fractions, of 9.77 μg/mL to M. canis. 4NC was obtained from fraction 11 and presented the best MIC in this study, 2.44 μg/mL for M. canis and 4.88 μg/mL, for T. rubrum. M. canis showed a change in the protein profile in SDS-PAGE after treatment with 4NC, with the appearance of bands of approximately 139 and 30 kD intracellular protein and 35 and 15 kDa in extracellular protein, each of those bands was analyzed through LC-MS/MS (MALDI-TOF/TOF). The ethanolic extract wasn‟t citotoxic until 500 μg/mL, while 4NC presented IC50 values of 18.3 and 31.5 μg/ml to Hep G2 and MRC-5 cell lines. / FAPESP: 13/10578-0
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Efeito do tratamento de sementes de pimentão com óleos essenciais sobre o controle de Colletotrichum gloeosporioides e o potencial fisiológico das sementes / Effect of essential oil treatment on the control of Colletotrichum gloeosporioides and the physiological potential of seeds

Nascimento, Daniele Maria do [UNESP] 21 February 2017 (has links)
Submitted by DANIELE MARIA DO NASCIMENTO null (daniele_ocz@hotmail.com) on 2017-04-26T11:54:13Z No. of bitstreams: 1 EFEITO DO TRATAMENTO DE SEMENTES DE PIMENTÃO COM ÓLEOS ESSENCIAIS SOBRE O CONTROLE DE Colletotrichum gloeosporioides E O POTENCIAL FISIOLÓGICO DAS SEMENTES.pdf: 2926518 bytes, checksum: 1f40c899f1c1f8efb087a71cea314ca6 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-26T16:45:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 nascimento_dm_me_bot.pdf: 2926518 bytes, checksum: 1f40c899f1c1f8efb087a71cea314ca6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-26T16:45:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 nascimento_dm_me_bot.pdf: 2926518 bytes, checksum: 1f40c899f1c1f8efb087a71cea314ca6 (MD5) Previous issue date: 2017-02-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O pimentão (Capsicum annum L.) é uma das hortaliças mais consumidas no mercado brasileiro, contudo, uma importante doença fúngica, a antracnose, pode dizimar todos os seus frutos em campo, caso ocorram condições favoráveis ao seu estabelecimento. A antracnose é causada por um complexo de espécies do gênero Colletotrichum, podendo o fungo ser transmitido via semente, constituindo-se essa em um importante meio de introdução e disseminação do patógeno em novas áreas. O tratamento das sementes torna-se, então, uma medida importante no manejo e controle desta doença. Visando diminuir a aplicação de produtos químicos, a pesquisa por substâncias naturais com ação antifúngica vem sendo estimulada. Neste trabalho, foi investigada a ação de oito óleos essenciais (alecrim, citronela, cravo, copaíba, eucalipto, hortelã, manjericão e tea tree) sobre Colletotrichum gloeosporioides, isolado do pimentão. Inicialmente, foi avaliada a atividade in vitro dos óleos essenciais sobre o fungo, adicionando-os ao meio de cultura batata-dextrose-ágar (BDA) contido em placas de Petri, nas concentrações 0,25%, 0,50% e 0,75%. Em seguida, o fungo foi transferido para o centro de cada placa de Petri contendo os tratamentos. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado, segundo o esquema fatorial 8x3 (oito óleos essenciais x três concentrações), e um tratamento testemunha (composto por BDA puro), e três repetições. O experimento foi conduzido em duplicata. As placas foram mantidas a 22°C e fotoperíodo de 12 horas. Para verificar o efeito dos óleos essenciais, o crescimento micelial (diâmetro das colônias), a porcentagem de inibição do crescimento (PIC) e a esporulação (número de esporos/mL) foram avaliados. Nos dois ensaios, os óleos essenciais de cravo, citronela, eucalipto, hortelã e manjericão, independente da concentração empregada, inibiram totalmente o patógeno, não permitindo a esporulação deste. A segunda etapa do trabalho objetivou estudar a ação dos cinco óleos essenciais anteriormente selecionados sobre a qualidade sanitária e fisiológica de sementes de pimentão infectadas por Colletotrichum gloeosporioides. Para o tratamento das sementes, cada óleo essencial foi emulsionado na concentração de 0,25% em solução de água destilada autoclavada + Tween 80. Foram avaliadas a qualidade sanitária das sementes (blotter test) e a qualidade fisiológica (germinação, comprimento de plântulas, emergência de plântulas, índice de velocidade de emergência e massa seca). O óleo essencial de cravo foi o mais eficiente em reduzir a incidência do fungo nas sementes, sem prejudicar a qualidade fisiológica destas. A ocorrência de C. gloeosporioides nas sementes tratadas com os demais óleos essenciais foi alta, tendo o de citronela também interferido negativamente na germinação. / Sweet pepper (Capsicum annum) is one of the most consumed vegetables in the Brazilian market, however, an important fungal disease, anthracnose, can decimate all its fruits in the field. The anthracnose is caused by a complex of species of the genus Colletotrichum, and the fungus can be transmitted by infected seeds, constituting an important means of introducing and disseminating the pathogen in new areas. Then, seed treatment becomes an important measure for anthracnose management and control. Aiming to reduce the application of chemical products in the culture, the research for natural substances with antifungal action has been stimulated. In this work, the action of eight essential oils (rosemary, citronella, clove, copaíba, eucalyptus, mint, basil and tea tree) on Colletotrichum gloeosporioides, isolated from the sweet pepper fruits, was investigated. Initially, the in vitro activity of the essential oils on the fungus was evaluated by adding these oils to the potato-dextrose-agar (PDA) culture medium, in petri dishes, at following concentrations: 0.25%, 0.50% e 0.75%. The fungus was then transferred to the center of each petri dish containing the treatments. The experiment was conducted in a completely randomized design according to the 8x3 factorial scheme (eight essential oils x three concentrations), and one control treatment (composed of pure BDA), and three replicates. The experiment was conducted in duplicate. Plates were maintained at 22°C and 12 hour-photoperiod. To verify the effect of the essential oils, mycelial growth (diameter of colony), percentage of growth inhibition (PIC) and sporulation (number of spores / mL) were evaluated. In both trials, the essential oils of clove, citronella, eucalyptus, mint and basil, regardless of the concentration, totally inhibited the pathogen, not allowing the its sporulation. The second stage of this research aimed to study the action of the five pre-selected essential oils (clove, citronella, eucalyptus, mint and basil) on the sanitary and physiological quality of sweet pepper seeds infected by Colletotrichum gloeosporioides. For the seeds treatment, each essential oil was emulsified at 0.25% concentration in autoclaved water solution + Tween 80. The sanitary (blotter test) and the physiological quality (germination, seedling length, emergence, rate of emergency speed and dry mass). The essential oil of clove showed the best performance in the treatment of seeds, reducing efficiently the incidence of C. gloeosporioides, without harming the physiological quality of the sweet pepper seeds.
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Síntese, caracterização e investigação da atividade biológica de complexos de cobre e paládio contendo ligantes N,S doadores

Arantes, Francisco Carlos Caliari [UNESP] 17 February 2009 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-17Bitstream added on 2014-06-13T20:59:08Z : No. of bitstreams: 1 arantes_fcc_me_araiq.pdf: 1216127 bytes, checksum: 3965b43021ae3aaf6af565984dff1085 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho envolve a síntese e caracterização espectroscópica de compostos mononucleares de Pd(II) obtidos a partir da interação entre o precursor [PdCl2(MeCN)2], tiouréias N-substituídas (metu = N-metiltiouréia; ftu = N-feniltiouréia) e trifenilfosfina (PPh3), na presença dos íons SCN- e Br - . A reação entre [PdCl2(MeCN)2], tiouréias N-substituídas e a trifenilfosfina, na razão molar de 1:1:1, respectivamente, forma os complexos [PdCl2(Rtu)(PPh3)] (Rtu = metu, ftu). Os complexos [PdX2(PPh3)(Rtu)] (Rtu = metu, ftu; X- = SCN, Br) foram preparados a partir da interação entre o respectivo cloro-complexo e sais KX, razão molar de 1:2, respectivamente. A coordenação das tiouréias N-substituídas pelo átomo de enxofre na série [PdX2(PPh3)(Rtu)] (X- = Cl, SCN, Br) foi evidenciada pela espectroscopia no IV pelo deslocamento da banda C-NHR para freqüências mais altas em relação a do ligante livre, indicando o fortalecimento da ligação CN. Os espectros de RMN também mostram a coordenação via átomo de S pelo deslocamento do sinal de 13 C do grupo tionila para regiões de campo alto quando comparado ao do ligante Rtu, evidenciando o enfraquecimento da ligação CS após a coordenação. Já a presença da trifenilfosfina foi sugerida pelo aparecimento das suas bandas no IV típicas em 1098 cm-1 (CH), 693 cm-1 (anel) e 520 cm-1 (modo y). As curvas TG-DTA obtidas mostram que os complexos se decompõem em Pd0 sem formar uma fase estável de sulfeto metálico. A reação entre a N,N´-difeniltiouréia e íons Cu(II) também foi investigada neste trabalho. O composto obtido de fórmula [CuCl(dftu)2]n foi caracterizado pelas espectroscopias no IV e de RMN de 1 H e 13 C{1 H}. A atividade inibitória dos compostos dftu e [CuCl(dftu)2]n frente ao crescimento dos fungos Candida albicans, Candida krusei, Candida parapsilosis e Candida neoformans também foi avaliada. / This work deals with the syntheses, spectroscopic characterization of Pd(II) mononuclear compounds obtained from the interaction among [PdCl2(MeCN)2] precursor, N-substituted thioureas (metu = N-methylthiourea; ftu = N-phenylthiourea) and triphenylphosphine (PPh3), in the presence of SCN- e Br - ions. The reaction among [PdCl2(MeCN)2], N-substituted thioureas and triphenylphosphine, in the molar ratio 1:1:1, respectively, yield the complexes [PdCl2(PPh3)(Rtu)] (Rtu = metu, ftu). The compounds [PdX2(Rtu)(PPh3)] (Rtu = metu, ftu; X- = SCN, Br) were prepared from the interaction between the appropriate chloro-complex and KX salts, in molar ratio 1:2, respectively. The coordination of N-substituted thioureas through sulfur atom in the serie [PdX2(PPh3) (Rtu)] (X- = Cl, SCN, Br) was inferred by IR spectroscopy by the shift of C-NHR band to higher frequencies than those of the free ligand, indicating an increasing in the CS bond strenght. NMR spectra also showed the S-coordination by the upfield shift of the 13 C signal of thionil group when compared to those of the free ligand, suggesting the weakening of the CS bond after coordination. The presence of triphenylphosphine was confirmed by the appearance of its typical bands at 1098 cm-1 (CH), 693 cm-1 (ring) e 520 cm-1 (y). TG-DTA curves showed that Pd(II) compounds decompose into Pd0 without the formation of a stable intermediate of metal sulphide. The reaction between N,N´-diphenylthiourea and Cu(II) íons was also investigated in this work. The compound [CuCl(dftu)2]n was characterized by IR and 1 H and 13 C{1 H} NMR spectroscopies. The inhibitory activity of the compounds dftu e [CuCl(dftu)2]n towards the growth of Candida albicans, Candida krusei, Candida parapsilosis e Candida neoformans was also evaluated.
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Estudo químico e biológico do fungo endofítico Phomopsis sp. isolado da Senna spectabilis

Chapla, Vanessa Mara [UNESP] 04 March 2010 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-04Bitstream added on 2014-06-13T19:17:26Z : No. of bitstreams: 1 chapla_vm_me_araiq.pdf: 10108428 bytes, checksum: 973c5f6fd78cf8a4c8aa3bfaf65f6843 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Micro-organismos endofíticos habitam os espaços intra e intercelular de um hospedeiro, durante todo ou parte de seu ciclo de vida, sem causar danos aparentes. Esses micro- organismos são considerados uma fonte importante para a produção de metabólitos secundários com ação antimicrobiana, antitumoral, entre outras. Este trabalho descreve o estudo químico e biológico do fungo endofítico Phomopsis sp. associado à espécie vegetal do cerrado Senna spectabilis. Phomopsis sp. foi cultivado em diferentes meios de cultura para avaliar a variação metabólica em relação a composição dos nutrientes. Foram usados 5 meios líquidos comerciais (MBD, YM, Extrato de Malte, Nutrient e Czapek) e 2 meios sólidos (Milho e Arroz). Os extratos brutos Acetato e Acetonitrila obtidos foram avaliados por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com detector de arranjo de diodos e por Ressonância Magnética Nuclear de 1 H, e submetidos aos ensaios para a avaliação da potencialidade antifúngica, antioxidante e anticolinesterásica. Os resultados evidenciaram extratos com uma variação metabólica intensa e potencialmente bioativos. Destes, os meios MDB e Milho foram selecionados para obtenção dos extratos brutos em escala ampliada. O extrato bruto acetato obtido em MDB foi submetido a fracionamento cromatográfico e levou à identificação da uracila (1), ácido nitropropanóico (2), citocalasina H (3), tirosol (4), ciclo(L- Pro-L-Leu), (5), ciclo(L-Pro-L-Ile) (6), ciclo(L-Pro-L-Val) (7), ciclo(L-Pro-L-Tyr) (8) e ciclo(L-Pro-L-Phe) (9). Este é o primeiro relato de dicetopiperazinas obtidos de fungos do gênero Phomopsis. Esta classe de substâncias apresenta inúmeras bioatividades, principalmente antimicrobiana. O extrato bruto acetonitrila obtido de milho conduziu ao isolamento da citocalasina H (3), citocalasina J (10), alternariol monometil éter (11).... não descritos / Endophytic microorganisms inhabit the intra and intercellular spaces of a host, during all or part of their life cycle, without causing any apparent damage. Microorganisms are regarded as an important source for the production of secondary metabolites with antimicrobial, antitumoral actions, among others. This work describes the chemical and biological study of endophytic fungus Phomopsis sp. associated with plant species of Cerrado Senna spectabilis. Phomopsis sp. was cultived in different culture media to assess the metabolic variation in relation to nutrient composition. Were used 5 commercial liquid media (PDB, YM, Malt extract, nutrient and Czapek) and 2 solid mediums (Corn and Rice). The acetate and acetonitrile crude extracts were evaluated by High Performance Liquid Chromatography with Diode Array Detector and 1 H Nuclear Magnetic Resonance and subjected to assays for the evaluation of potential antifungal, antioxidant and anticholinesterase. The results showed extracts with an intense metabolic variation and potentially bioactive. From these, the mediums PDB and Corn were selected to obtain the crude extracts on a large scale. The crude acetate extract obtained in PDB was submitted to chromatographic separation and led to the identification of uracil (1), 3-nitropropionic acid (2), cytochalasin H (3), tyrosol (4), cyclo (L- Pro-L-Leu) (5), cyclo (L-Pro-L-Ile) (6), cyclo (L-Pro-L-Val) (7), cyclo (L-Pro-L-Tyr) (8) and cyclo (L-Pro-L-Phe) (9). This is the first report of diketopiperazines obtained from fungi of the Phomopsis genus. This class of substances shows many bioactivities, especially antimicrobial. The crude acetonitrile extract obtained from Corn led to the isolation of cytochalasin H (3), cytochalasin J (10), alternariol monomethyl ether (11), alternariol (12) and 2-hydroxy-alternariol (13), being the last one reported for the first time as a natural product and with NMR data not reported
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Geoprópolis de Melipona fasciculata SMITH : ações citotóxica, imunomoduladora, antibacteriana e antifúngica /

Araújo, Maria José Abigail Mendes. January 2013 (has links)
Orientador: José Maurício Sforcin / Banca: Rodrigo Tavanelli Hernandes / Banca: Rosane Nassar Meireles Guerra / Banca: Flávia Raquel Fernandes do Nascimento / Banca: Maria Teresa Teixeira Cruz Rosete / Resumo: Própolis é composta por substâncias resinosas, coletadas de várias plantas por abelhas africanizadas, adicionando pólen, cera e secreções glandulares, enquanto para a produção de geoprópolis (Geo) as abelhas sem ferrão utilizam materiais resinosos de plantas, cera, e ainda acrescentam terra ou barro. As atividades biológicas da própolis produzida por Apis mellifera têm sido extensivamente estudadas, mas ainda são escassos os trabalhos sobre as propriedades da geoprópolis. Assim, o presente trabalho se propôs a investigar as atividades citotóxica, imunomoduladora, antibacteriana e antifúngica do extrato hidroalcoólico de geoprópolis de Melipona fasciculata Smith. Foi realizada a caracterização química da Geo, verificando que o principal grupo de compostos encontrados foram triterpenos. No tocante às células do carcinoma da laringe humana (HEp-2), Geo apresentou ação inibitória em concentrações mais elevadas; entretanto, esta ação foi somente citostática. Geo apresentou ação imunomoduladora sobre monócitos humanos, estimulando a produção das citocinas estudadas (TNF-α e IL-10). Não foi observada ação antibacteriana contra S. aureus e E. coli, havendo inibição destas linhagens somente com altas concentrações do extrato. Contudo, a associação de Geo com antibióticos favoreceu a ação do cloranfenicol sobre S. aureus. A Geo exerceu ação inibitória sobre Pythium insidiosum, tanto para o isolado obtido de caso humano como de eqüinos. Os resultados sugerem que a Geo apresentou inúmeras propriedades biológicas; contudo, sua ação é menor em comparação à própolis produzida por abelhas africanizadas, talvez devido ao baixo rendimento do extrato e sua difícil solubilidade / Abstract: Propolis is composed of resinous substances collected from various plants by Africanized honeybees, adding polen, wax and bee secretions, while for geopropolis (Geo) production stingless bees use resinous materials from plants, wax, but also adding mud or clay. The biological activities of propolis produced by Apis mellifera have been extensively studied, but there are few studies on Geo properties. Thus, the present study investigated the cytotoxic, immunomodulatory, antibacterial and antifungal activities of hydroalcoholic extract of Geo produced by Melipona fasciculata Smith. The chemical characterization of Geo was performed, revealing that the main group of compounds was triterpenes. Geo exerted an inhibitory action on human larynx carcinoma cells (HEp-2) using high concentrations, however, it was only a cytostatic action. Geo exhibited immunomodulatory effects on human monocytes, stimulating cytokines production (TNF-α and IL-10). No antibacterial activity was seen against S. aureus and E. coli. However, the combination of Geo with chloramphenicol favored its effect against S. aureus. Geo exerted an inhibitory action against Pythium insidiosum, both for human or equine isolates. Data suggested that Geo presented several properties; however, its activity is lower compared to propolis produced by honeybees, perhaps due to the low yield of the extract and its difficult solubility / Doutor

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