Made available in DSpace on 2016-06-02T20:34:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6244.pdf: 2978934 bytes, checksum: b349f4fd9a75d293d769129783cef18d (MD5) Previous issue date: 2014-08-25 / Financiadora de Estudos e Projetos / One alternative for new packagings is the use of renewable materials as raw materialin the development of films, with the challenge of maintaining the quality of the product. Polysaccharides are abundant and renewable origin, and its derivatives, such as carboxymethylcellulose, widely used in the food industry, have potential use as new materials in the form of films. However, there are challenges adequacies of mechanical properties and incorporation of new features (as antimicrobial) in carboxymethylcellulose films to make her suitable for packaging use. A promising system to modify the characteristics of these films is the incorporation of nanostructures. However, in Brazil there is no legislation to nanomaterials and the increased use of this technology, it is important to value the impact of these new materials from development to the final consumer, to better direct the search. In this context, the objective of this study was to develop carboxymethylcellulose films with PVA-silver nanoparticlesand evaluate their antimicrobial activity and toxicity. Silver nanoparticles were synthesized and incorporated in carboxymethylcellulose, via solution, obtaining films by casting. The following techniques to characterize films/solutions were used: spectrophotometry UV-Vis, Analysis of Particle Size, Zeta Potential, Water Vapor Permeability, Infrared Spectrophotometry, Thermal Analysis (Thermogravimetry and Differential Scanning Calorimetry), Mechanical Testing Tensile, Film Solubility in Water, Scanning Electron Microscopy (SEM / FEG) and Colorimetry. Generally, the addition of nanoparticles modified the characteristics of films, increasing mechanical properties at 66.7%. Evaluated the antimicrobial activity of the nanostructured system by Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and inhibition zone, using Gram-positive bacteria (Enterococcus faecalis) and Gram-negative (Escherichia coli).MIC values showed the high effectiveness of the incorporation of the nanoparticles of CMC films (0,12^g mL-1), demonstrating the potential of this material for use in antimicrobial packages. In valuation of the toxicity of this nanostructured system, in vivo tests were performed in cultured cells (cyto and genotoxicity in Allium cepa), ingestion in Wistar rats and ecotoxicity in microcrustacean Daphnia similis. In meristematic cells of A. cepa, no result of cytotoxicity was verified in A. cepa. The analysis of chromosomal aberrations indicated predominance of abnormalities such as bridges chromosome in anaphase, verifying a clastogenic action of PVA-silver nanoparticles. Tests with rats have suggested the toxicity of nanostructured system, causing vacuolation in the liver and intestine crypt dilation, with accumulation of PVA-silver nanoparticles in ileum. Results of ecotoxicity have suggested a toxic potential of silver nanoparticles to aquatic invertebrates (CE5024 and 48 h equal to 0,0015 e 0,0012^g mL-1, respectively). The results of this study indicate that, even at low concentrations, PVA-silver nanoparticles can induce cellular damage in exposed organisms. Due to its increasing use, these data reinforce the importance of performing studies with silver nanoparticles as part of nanostructured systems. / Uma alternativa para embalagens é o uso de materiais renováveis como matéria-prima no desenvolvimento de filmes, com o desafio de manter a qualidade do produto. Polissacarídeos são abundantes e de origem renovável, e seus derivados, como a carboximetilcelulose, muito utilizada na indústria alimentícia, tem potencial de uso como novos materiais na forma de filmes. Porém, há desafios de adequação de propriedades mecânicas e incorporação de novas funcionalidades (como antimicrobiano) a filmes de carboximetilcelulose para tornar seu uso adequado a embalagens. Um sistema promissor para a modificação das características desses filmes é a incorporação de nanoestruturas aos mesmos. Contudo, no Brasil ainda não há uma legislação para nanomateriais e com o maior uso dessa tecnologia, torna-se importante avaliar o impacto destes novos materiais desde o seu desenvolvimento até o consumidor final, visando direcionar melhor as pesquisas. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi desenvolver filmes de carboximetilcelulose com PVA-nanopartículas de prata e avaliar a sua atividade antimicrobiana e a toxicidade. Nanopartículas de prata foram sintetizadas e incorporadas em carboximetilcelulose, via solução, obtendo-se filmes por casting. As seguintes técnicas de caracterização dos filmes/soluções filmogênicas foram utilizadas: Espectofotometria na região do UV-Vis, Análise do Tamanho das Partículas, Potencial Zeta, Permeabilidade ao Vapor de Água, Espectrofotometria de Infravermelho, Termogravimetria, Calorimetria Exploratória Diferencial, Ensaios Mecânicos de Tração, Solubilidade dos filmes em Água, Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV/FEG) e Colorimetria. Em geral, a adição das nanopartículas modificou as características dos filmes de CMC, aumentando as propriedades mecânicas em 66,7%. Avaliou-se a atividade antimicrobiana do sistema nanoestruturado por meio da Concentração Mínima Inibitória (MIC) e halo de inibição, utilizando-se bactérias Gram-positivas (Enterococcus faecalis) e Gram-negativas (Escherichia coli). Valores de MIC mostraram a alta efetividade da incorporação de nanopartículas de prata em filmes de CMC (0,12^g mL-1), mostrando seu potencial para o uso em embalagens antimicrobianas. Na avaliação da toxicidade desse sistema nanoestruturado, foram realizados testes in vivo em cultura de células (cito e genotoxicidade em Allium cepa), ingestão em ratos Wistar e ecotoxicidade em microcrustáceo Daphnia Similis. Em células meristemáticas de A. Cepa, nenhum resultado decitotoxicidade foi verificado. A análise das alterações cromossômicas indicou uma predominância de alterações como pontes cromossômicas em anáfase, verificando-se uma ação clastogênica do PVA-nanopartículas de prata. Testes com ratos Wistar sugeriram toxicidade do sistema nanoestruturado, causando uma vacuolização no fígado e dilatação difusa das criptas no intestino, com acúmulo de nanopartículas de prata no íleo. Resultados de ecotoxicidade sugeriram um potencial tóxico das nanopartículas de prata para invertebrados aquáticos (CE5024 e 48 horas iguais a 0,0015 e 0,0012^g mL-1, respectivamente). Os resultados deste trabalho indicam que, mesmo em baixas concentrações, nanopartículas de prata podem induzir a danos celulares em organismos expostos. Devido ao seu crescente uso, estes dados reforçam a importância da realização de estudos adicionais para nanopartículas de prata como parte de sistemas nanoestruturados.

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-01-30Bitstream added on 2015-04-09T12:47:21Z : No. of bitstreams: 1 000816593.pdf: 1150923 bytes, checksum: e263fe3b4e579d29849e69845e839801 (MD5) / O presente estudo teve como objetivo avaliar in vitro o potencial de atividade antimicrobiana de extratos vegetais e substâncias isoladas de Croton antisyphiliticus e C. urucurana, espécies nativas do Cerrado, sobre estirpes de Staphylococcus aureus, isoladas de leite de vacas com mastite. Os microrganismos foram cultivados na forma livre e em biofilme. Os extratos foram avaliados quanto à capacidade de inibição da formação do biofilme e erradicação do mesmo. Foram utilizados os antibióticos sulfato de gentamicina como comparativo e sulfato de vancomicina como controle negativo. As plantas foram coletadas na época seca e chuvosa. A quantificação da atividade antimicrobiana foi realizada por meio do cristal violeta e da contagem de unidades formadoras de colônia. Os resultados obtidos demonstram que ambas espécies vegetais inibiram a formação do biofilme de S. aureus. O extrato bruto e frações de C. antisyphiliticus apresentaram atividade antimicrobiana semelhante à gentamicina, enquanto os compostos vegetais com características apolares, oriundos de C. urucurana foram significativamente mais ativos contra S. aureus em biofilme que o antibiótico vancomicina, reduzindo cerca de 5 logs da população bacteriana. Nas condições ensaiadas, não houve influencia sazonal na atividade antimicrobiana dos extratos. Entre as duas espécies de Croton avaliadas, conclui-se que C. urucurana foi a espécie mais promissora quanto a atividade antimicrobiana frente estirpes de S. aureus, causadoras de mastite bovina / The present study aimed to evaluate the potential antimicrobial activity of plant extracts and substances isolated from Croton antisyphiliticus and C. urucurana, species in the Cerrado, against strains of Staphylococcus aureus isolated from milk of cows with mastitis. The microorganisms were grown in free form and in biofilm. The extracts were evaluated for their ability to inhibit biofilm formation and eradication. We used the antibiotic gentamicin as a comparison and vancomycin as negative control. The plants were collected in the dry and rainy season. Quantification of antimicrobial activity was performed using the crystal violet and count of colony forming units. The results show that both species inhibited the biofilm formation of S. aureus. The crude extract and fractions of C. antisyphiliticus presented antimicrobial activity similar to gentamicin, while the plant compounds with non polar characteristics, arising from C. urucurana were significantly more active in cells in biofilms of S. aureus that the antibiotic vancomycin, reducing around 5 logs of the bacterial population. In the conditions tested, there was no seasonal influence on antimicrobial activity of the extracts. Between the two species of Croton evaluated, between the two Croton species evaluated, it is concluded that C. urucurana was the most promising antimicrobial activity against strains of S. aureus causing bovine mastitis

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-21Bitstream added on 2015-05-14T16:59:11Z : No. of bitstreams: 1 000828504.pdf: 1684055 bytes, checksum: 36e23ab0b69fedf2a9acc2423647c27d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A carne de frango e seus subprodutos têm aumentado a sua popularidade nos últimos anos devido ao desenvolvimento do setor e a mudanças significativas no padrão de consumo de alimentos. A linguiça fresca é provavelmente uma das formas mais antigas de processamento de carnes, no entanto, é um produto altamente perecível que necessita de agentes que contribuam para a extensão da sua vida de prateleira. As pesquisas com os produtos naturais de origem vegetal, sobretudo as especiarias, tem revelado que além da contribuição para o sabor, estes produtos possuem atividades antimicrobianas e antioxidantes que poderiam ser exploradas pela indústria de alimentos. O objetivo do trabalho foi avaliar o uso de derivados vegetais como possível aditivo em linguiça de frango. Para tanto, o estudo foi dividido em três etapas. Na primeira foi caracterizada a ação antibacteriana in vitro (metodologia da microdiluição em meio de Mueller Hinton Caldo-MHC e determinação da concentração inibitória mínima-CIM) de doze derivados vegetais na forma de óleos essenciais (OEs) e extratos etanólicos (Eet) obtidos de seis plantas condimentares (louro-Laurus nobilis, manjericão- Ocimum basilicum, manjerona-Origanum majorana, orégano-Origanum vulgare, alecrim -Rosmarinus officinalis e tomilho-Tymus vulgaris) frente a 9 cepas bacterianas (Salmonella Enteritidis-ATCC 13076, Escherichia coli O157:H7-ATCC 43895, Pseudomonas aeruginosa –ATCC 27853, Listeria monocytogenes-ATCC 15313, Enterococcus faecalis-ATCC 10100, Aeromonas hydrphila-ATCC 7966, Lactobacillus rhamnosus-ATCC 9595 e Staphylococcus xylosus-ATCC 29979). Todos os derivados vegetais apresentaram ação antibacteriana, entretanto, a atividade dos Eet foi inferior a dos OEs, mesmo quando da mesma planta. T. vulgaris e O. vulgare apresentaram as melhores atividades verificadas pelos valores de CIM de 1,5 e 1,6 mg/mL para OEs e de 2,9 e 4,2 mg/mL para Eet, respectivamente. Os óleos dessas ... / The chicken meat and their subproducts have increased its popularity in recent years due to the development of the sector and the significant changes in the pattern of food consumption. Fresh sausage is probably one of the oldest forms of meat processing, however, is a highly perishable product that requires agents to contribute to the extension of shelf life. Research with natural products of plant origin, especially the spices, has revealed that beyond of the contribution to flavor; these products have antimicrobial and antioxidant activities which could be explored by the food industry. The aim of this study was to evaluate the use of plant derivatives as a possible additive in chicken sausage. Thus, the study was divided into three phases. The first was characterized in vitro antibacterial action (microdilution methodology in Mueller Hinton Broth medium-MHC and determination of minimum inhibitory concentration-MIC) twelve plant derived in the form of essential oils (EOs) and ethanol extracts (Eet) obtained from six plants condiments (laurel-Laurus nobilis, basil- Ocimum basilicum, marjoram-Origanum majorana, oregano-Origanum vulgare, rosemary -Rosmarinus officinalis e thyme-Tymus vulgaris) against nine bacterial strains (Salmonella Enteritidis-ATCC 13076, Escherichia coli O157:H7-ATCC 43895, Pseudomonas aeruginosa –ATCC 27853, Listeria monocytogenes-ATCC 15313, Enterococcus faecalis-ATCC 10100, Aeromonas hydrphila-ATCC 7966, Lactobacillus rhamnosus-ATCC 9595 e Staphylococcus xylosus-ATCC 29979). All plant derivatives showed antibacterial action, however, the activity of Eet was less than the EOs, even when the same plant. T. vulgaris and O. vulgare showed the best activities verified by the MIC values of 1.5 and 1.6 mg/ml for EOs and 2.9 and 4.2 mg/ml for Eet, respectively. The oils of these plants showed thymol as major compound and the extracts were positive for the presence of flavonoids, phenols, triterpenes and steroids. In a ...

A colibacilose é uma enfermidade causada pela bactéria Escherichia coli. Algumas cepas podem ser potencialmente patogênicas, favorecendo doenças localizadas e/ou sistêmicas, acarretando consideráveis prejuízos econômicos para avicultura brasileira. Com o objetivo de determinar a resistência frente a antimicrobianos por (E. coli) foram analisadas 115 amostras isoladas de aves de produção, provenientes de três diferentes origens: cama de aviários (34 amostras), lesões de celulite (48 amostras) e lesões de aves com sintomatologia respiratória (33 amostras). Os padrões dos antibiogramas realizados seguiram as normativas disponíveis no National Commitee of Laboratory Standards (NCCLS, 2003). Entre os isolados de aves com sintomatologia respiratória, não foi observado resistência aos antimicrobianos: amoxicilina/ácido clavulâmico; cefuroxima, ceftiofur e amicacina, ou seja, três β- lactâmicos e ao aminoglicosídeo testado. Na análise estatística constatou-se diferença significativa entre as amostras de E.coli. de cama, celulite e aves com sintomatologia respiratórias, para as drogas norfloxacina e ciprofloxacina. As análises não apresentaram diferenças significativas para as demais drogas testadas. Os testes não apresentaram diferenças significativas entre as resistências e cada origem, nos seguintes casos: ampicilina, enrofloxacina, ciprofloxacina, ofloxacina, sulfametoxazole/trimetoprim e tetraciclina. Contudo, houve significância para os antimicrobianos: norfloxacina e ciprofloxacina. Os percentuais de resistência para os antimicrobianos avaliados foram: ampicilina (35,7%); amoxicilina/ácido clavulânico (0,9%); cefalexina (8,7%); cefuroxime (2,6%); ceftiofur (4,3%); clindamicina (98,3%); enrofloxacina (18,3%); ciprofloxacina (22,6%); norfloxacina (20%); ofloxacina (18,3%); sulfametoxazol/trimetoprim (47,8%); amicacina (3,5%); gentamicina (25,2%); tetraciclina (59,1%). A múltipla resistência para dois, ou mais agentes antimicrobianos, em cama, celulite e para amostras de sintomatologia respiratória, foi de (35,2%), (31,2%) e (66,6%), respectivamente. Não houve diferença significativa nas proporções de resistência entre as origens e as estações do ano. / Colibacilosis is a disease caused by the bacterium Escherichia coli. Some strains can be potentially pathogenic, favoring illnesses located and/or systemic, causing considerable economic damages for Brazilian poultry production. With the objective to determine the resistance front the antimicrobials for (E. coli) had been analyzed 115 isolated samples of poultry production, proceeding from three different origins: litter of poultry houses (34 samples), injuries of celulitis (48 samples) and injuries of poultry with respiratory signals (33 samples). The standards of the carried through antibiograms had followed normative available in the National Commitee of Laboratory Standards (NCCLS, 2003). It enters the isolated ones of birds with respiratory signals, was not observed resistance to antimicrobials: amoxicillin/ clavuanic acid; cefuroxime, ceftiofur and amikacyn, that is, three β- lactams and to the tested aminoglycosides. In the analysis statistics significant difference was evidenced enters the respiratory samples of E.coli of litter, celulitis and poultry with signals, for the drugs norfloxacin and ciprofloxacin. The analyses had not represented significant differences for the too much tested drugs. The tests had not presented significant differences between the resistances and each origin, in the following cases: ampicilin, enrofloxacin, ciprofloxacin, ofloxacin, sulfamethoxazole/trimethoprim and tetracyclin. However, it had significance for antimicrobials: norfloxacin and ciprofloxacin. The percentages of resistance for evaluated antimicrobials had been: ampicilin (35.7%); amoxicillin/ clavulanic acid (0.9%); cefalexin (8.7%); cefuroxime (2.6%); ceftiofur (4.3%); clindamycin (98.3%); enrofloxacin (18.3%); ciprofloxacin (22.6%); norfloxacin (20%); ofloxacin (18.3%); sulfamethoxazole/trimethoprim (47.8%); amikacyna (3.5%); gentamycin (25.2%); tetracyclin (59.1%). The multiple resistance for two or more agents antimicrobials, in litter, celulitis and for samples of respiratory signals, was of (35,2%), (31,2%) e (66,6%), respectively. It did not have significant difference in the ratios of resistance between the origins and the stations of the year.

Enterococcus spp são microrganismos que colonizam o trato gastrintestinal de humanos. Estes microrganismos podem ser também encontrados em alimentos, onde possuem um papel benéfico durante a maturação de determinados produtos fermentados. Enterococos eram consideradas bactérias de baixa virulência; no entanto, estes microrganismos, recentemente, assumiram uma importância clínica, sendo considerados patógenos oportunistas para humanos. Esta característica dualista do microrganismo se tornou um motivo de discussão constante entre a classe científica no mundo todo. O objetivo desse estudo foi determinar a distribuição e o perfil de resistência antimicrobiana de Enterococcus spp. isolados de diferentes fontes de alimentos da cidade de Porto Alegre, RS, Brasil.Linhagens isoladas de vegetais, carne e produtos lácteos foram submetidas a análises morfológicas, bioquímicas e de identificação molecular utilizando a técnica de PCR e as linhagens positivas foram analisadas quanto à susceptibilidade a 12 antimicrobianos utilizados na clínica ou na pecuária. Ainda, estas amostras foram analisadas quanto à diversidade genotípica pela utilização da técnica de RAPD-PCR. A análise estatística dos perfis de RAPD-PCR obtidos para as amostras verificou uma presença de 42 padrões de banda diferenciados e 6 perfis diferentes de RAPD-PCR. Relacionando os testes fenotípicos clássicos previamente realizados, somente um perfil agrupou todas as linhagens de mesma espécie. Os dados aqui descritos sugerem atenção especial aos microrganismos provenientes de todos os três grupos de alimentos utilizados como fonte de isolamento, principalmente devido à presença de linhagens com altos níveis de resistência a antimicrobianos, incluindo aqueles de maior relevância clínica como agentamicina, estreptomicina, ampicilina e vancomicina. Além disso, análises dos dados de RAPD-PCR demonstraram uma variabilidade genética entre as linhagens de enterococos provenientes de diferentes fontes de alimentos. / Enterococcus spp. are commensal microorganisms, which colonize the gastrointestinal tract in humans. These microorganisms are natural microbiotic compounds in foods, playing a beneficial role during the maturation of some fermented products. Enterococci presents, generally, relative low virulence. However, these organisms have recently assumed major importance in clinical microbiology as well. They are considered emerging pathogens for humans, with Enterococcus faecalis causing human enterococcal infections at high rates, and these dualistic characteristics have turned a subject of constant debate worldwide.The aim of the present study was to determine the species distribution and the antimicrobial resistance profiles of enterococci isolated from several food in Porto Alegre, RS, Brazil. Strains isolated from vegetables, meat and dairy products were submitted to morphological, biochemical and molecular identification using PCR technique, and positive strains were submitted to antimicrobial susceptibility tests using twelve clinical and agricultural antimicrobians. Furthermore, we investigated the genotypic diversity of enterococci strains. Randomly amplified polymorphic DNA (RAPD)-PCR was used to study the genetic variability, which distinguished closely related isolates. After numerical analyses of the RAPD-PCR profiles obtained with M13 primer, 42 different patterns were obtained. Six different RAPD profiles were recorded for the enterococcal isolates. According to previous species determination by phenotypical tests, only one cluster associated all strains from the same species. Our data suggest a special attention to strains isolated from all the three groups of food in analysis, especially due to the presence of enterococci resistant to high level and a wide range of clinical antimicrobians thatinclude gentamycin, streptomycin, ampicillin and vancomycin. Results of the present study suggest that there is some genotypic variability within strains of enterococci deriving from several food sources in Southern Brazil.

A diferenciação entre processos infecciosos e inflamatórios representa um grande desafio na área de diagnóstico. A complexação do antimicrobiano ciprofloxacino (CIP) com o tecnécio (99mTc-CIP) vem sendo estudada com objetivo de desenvolver um radiofármaco com alta especificidade no diagnóstico de infecções, baseado em seu amplo espectro de atividade antibacteriana. O mecanismo de ação do fármaco consiste na ligação deste com a enzima ADN-girase da bactéria, permitindo sua ligação à bactéria ativa e a obtenção de imagens devido a fótons emitidos pelo 99mTc. Tendo em vista que o local de formação do complexo envolve os mesmos grupos funcionais responsáveis pela ligação do fármaco à enzima, sua eficácia pode ser prejudicada. A diferenciação entre processos infecciosos e inflamatórios representa um grande desafio na área de diagnóstico. A complexação do antimicrobiano ciprofloxacino (CIP) com o tecnécio (99mTc-CIP) vem sendo estudada com objetivo de desenvolver um radiofármaco com alta especificidade no diagnóstico de infecções, baseado em seu amplo espectro de atividade antibacteriana. O mecanismo de ação do fármaco consiste na ligação deste com a enzima ADN-girase da bactéria, permitindo sua ligação à bactéria ativa e a obtenção de imagens devido a fótons emitidos pelo 99mTc. Tendo em vista que o local de formação do complexo envolve os mesmos grupos funcionais responsáveis pela ligação do fármaco à enzima, sua eficácia pode ser prejudicada. O objetivo deste trabalho foi avaliar as condições ideais para ligação do 99mTc a duas quinolonas (CIP e pefloxacino), utilizando diferentes agentes redutores (SnCl2 e FSA), pH da solução e temperatura de incubação. A complexação dos fármacos ao radioisótopo 99mTc foi avaliada através do controle radioquímico, utilizando cromatografia em camada delgada. Posteriormente, testou-se sua atividade antimicrobiana in vitro utilizando diferentes microorganismos. O agente redutor FSA não foi eficiente na formação do complexo, resultando em uma concentração alta de Tc livre (37%). A formulação com Sn aumentou a formação de colóide com aquecimento (100 ºC). A complexação dos antimicrobianos ao Tc impediu sua ligação à ADN-girase. A taxa de ligação variou de 10% (filtração) a 16% (centrigugação). Além disso, verificou-se boa correlação entre a formação de colóide e quantidade de radiação ligada à bactéria em ambos os testes. Esta perda de atividade vem de encontro a alguns estudos clínicos relatados na literatura, que revelam a não diferenciação entre processos infecciosos e processos inflamatórios pelas quinolonas marcadas com 99mTc. / Differentiation between inflammation and infection represents a major challenge in clinical diagnostics. Several studies using ciprofloxacin (CIP), a broad spectrum antimicrobial agent, complexed with technetium (99mTc) have been reported in order to evaluate its capacity to diagnose infections. CIP mechanism of action involves its binding with bacterial DNA-gyrase during the growth phase and the acquisition of images due to 99mTc radioactivity. The fact that the sites of complexation are the same as those involved in bacterial binding it may affect its antimicrobial activity. The objective of the present work was to evaluate the ideal conditions for the complexation of CIP and pefloxacin with 99mTc using stannous chloride and formamidinesulfinic acid (FSA) as reducing agents, different pH and temperatures. The efficiency of complexation was monitored using radiochemical control as well as thin layer chromatography. Furthermore the antimicrobial activity of both complexes was evaluated in vitro. FSA was not adequate as a reducing agent and SnCl2 was better at room temperature than using heat (100 oC). The complexes did not bound well to the bacterias with binding efficiencies ranging from 10 (filtration method) to 16% (centrifugation method). Besides that, a good correlation between colloid formation (impurity) and radioactivity bound to bacterias was found. This decrease in bacterial activity was previously reported in some articles suggesting that quinolones complexed with 99mTc are not suitable to diagnose infections in the presence of inflammation.

A Salmonella sp permanece com um dos mais importantes patógenos transmissores de enfermidades veiculadas através dos alimentos em todo mundo. A carne de aves está entre as principais causadoras das toxinfecções alimentares quando contaminadas pelo gênero Salmonella. Neste estudo foram isolados 280 sorovares de Salmonella das carcaças de frango e peru através do Programa de Redução de Patógenos (PRP-MAPA) na região sul do país. A maior prevalência ocorreu para a Salmonella Enteritidis (55,7%). Nas carcaças de frango, a S. Enteritidis alcançou 63,3% dos isolados, porém nas carcaças de peru este sorovar não passou dos 14,0%. Entre os estados do sul (PR, SC e RS), não houve diferenças nos isolados de S.Enteritidis. Foram 25 os sorovares de Salmonella sp isolados das carcaças de aves. Destes apenas 14 em perus e 23 nos frangos. A S. Tennessee e Salmonella enterica subespecie enterica (O: 4,5), foram isoladas somente em carcaças de perus e a S. Hadar foi a mais prevalente, 18,6%. Nos testes de difusão em placas, foram desafiadas 178 cepas frente a 24 antimicrobianos. Todas as cepas de Salmonella sp foram resistentes a bacitracina e a penicilina e 78,2% apresentaram resistência a pelo menos um antimicrobiano quando excluídas as drogas anteriormente citadas, sendo que todas as amostras foram sensíveis a amoxicilina + ácido clavulânico, polimixina B, ciprofloxacina e norfloxacina. A maior taxa de resistência das amostras foi observada frente ao ácido nalidíxico de 52,2%, seguido da nitrofurantoína (28,8%), neomicina (14,6), tetraciclina (12,4%) e canamicina (10,1%). Nas amostras isoladas de perus estes índices foram maiores para o ácido nalidíxico (62,8%), tetraciclina (34,9%) e neomicina (30,2%), havendo diferenças significativas para os dois últimos quando comparados aos isolados de frango. Embora o índice de resistência a enrofloxacina de 2,2% no segmento aves seja baixo, chama atenção que, por tratar-se de um antimicrobiano quimicamente modificado a taxa de resistência nas amostras de perus tenha sido de 9,3%.O sorovar S. Enteritidis apresentou a maior taxa de resistência ao ácido nalidíxico (72,0%) e menor para tetraciclina (1,1%). Por outro lado, foi comprovada a presença de cepas multiresistentes em 46,1% dos isolados das carcaças de aves, principalmente nas amostras de perus nos sorovares S. Hadar e S. Saintpaul, que foram resistentes no mínimo a quatro e no máximo onze antimicrobianos. Este estudo demonstrou qual a prevalência e o perfil de resistência aos antimicrobianos dos sorovares de Salmonella sp isoladas das carcaças de aves na região Sul do Brasil e devido a sua importância em saúde animal e saúde pública, pode sugerir a criação de um Programa Nacional de Monitoramento da Resistência Bacteriana aos Antimicrobianos. / Salmonella sp remains as one of the most important foodborne pathogens worldwide. Poultry meat is among the most frequently involved foods regarding human food poisoning cases. In this study, two hundred and eighty Salmonella isolates were detected from broiler and turkey carcasses submitted to the Brazilian Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (MAPA)´s Pathogens Reduction Program (PRPMAPA) in Southern Brazil. Twenty five Salmonella serovars were isolated in the poultry carcasses, being 14 in turkey and 23 in broilers. The most prevalent serovar was Salmonella Enteritidis (57,7%). In broiler carcasses, S. Enteritidis reached a 63,3% prevalence, while in turkeys carcasses this serovar presented a comparatively lower index (14,0%). Among the Brazilian Southern States (PR, SC and RS) there were no significative differences in the percentage of isolated S. Enteritidis. S. Tennessee and Salmonella enterica subspecies enterica (O: 4,5) were isolated in turkeys, but not in broiler carcasses. S. Hadar was most prevailing in turkeys (18,6%). Regarding the diffusion test applied to 178 isolates, they were challenged against 24 antimicrobials. As expected, all isolates were resistant to bacitracin and penicillin, while 78,2% presented resistance to at least one antimicrobial drug when the ones above were excluded. All samples were sensitive to amoxicillin + clavulanic acid, polymixin B, cyprofloxacin and norfloxacin. The highest resistance rate was observed against nalidixic acid (52,2%), followed by nitrofurantoin (28,8%), neomycin (14,6%), tetracycline (12,4%) and canamycin (10,1%). In turkeys the rates were higher to nalidixic acid (62,8%), tetracycline (34,9%) and neomycin (30,2%) showing significant differences for the latter two when compared to the ones isolated in broilers. S. Enteriditis isolates showed a higher resistance to nalidixic acid (72,0%) and lower to tetracycline (1,1%). Presence of multiresistant isolates was proven in 46,1% of the isolated poultry carcasses, mainly in the turkey samples related to the presence of S. Hadar and S. Saintpaul serovars, which were resistant to at least four to a maximum of eleven antimicrobials. This study was able to demonstrate the prevalence and the antimicrobial resistance profile of Salmonella serovars isolated from poultry carcasses in Southern Brazil. These findings reinforce the need for the creation of a National Antimicrobial Resistance Monitoring Programme in Brazil, which will be able to contribute to an overdue controlled use of these drugs in food producing animals.

Resumo: Helicobacter pylori é, atualmente, reconhecido como o principal fator de risco para desenvolvimento da gastrite crônica e úlcera péptica. A resposta inflamatória decorrente da infecção por essa bactéria induz alterações patológicas no microambiente gástrico, com a liberação de citocinas e de grande quantidade de espécies reativas de oxigênio (EROs) por células inflamatórias, especialmente neutrófilos, que contribuem para a injúria da mucosa e desenvolvimento de câncer gástrico. Neste trabalho, a citotoxicidade basal, atividade anti-H. pylori e antioxidante de extratos (apolares e polares), frações, mistura de triterpenos (- amirina e -amirina) e compostos fenólicos (amentoflavona, (+)-catequina, galato de metila, quercetina-3-O--L-arabinopiranosídeo e quercetina-3-O--D-galactopiranosídeo) obtidos de plantas do Cerrado brasileiro, empregadas popularmente no tratamento de distúrbios gastrintestinais, foram determinadas pela técnica do vermelho neutro, microdiluição em caldo, redução do radical 1,1-difenil-2-picril-hidrazila (DPPH) e quimiluminescência dependente de luminol, respectivamente. As preparações vegetais (extratos, frações e mistura de triterpenos) apresentaram baixo potencial citotóxico para a linhagem celular empregada (McCoy). Dentre os compostos fenólicos, quercetina (padrão comercial) e (+)-catequina apresentaram maior citotoxicidade quando comparadas aos extratos, frações e mistura de triterpenos. As espécies Byrsonima crassa (Malpighiaceae) e Davilla elliptica (Dilleniaceae) demonstraram maior potencial para o tratamento de doenças induzidas pelo H. pylori por proporcionarem maior atividade antibacteriana (concentração mínima inibitória = 1024 g/mL), entretanto frações enriquecidas e substâncias isoladas não foram conclusivas para o reconhecimento de grupos ou compostos que pudessem inferir a mesma capacidade... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Helicobacter pylori is a bacterium recognized as the major cause of chronic gastritis and peptic ulcer. The H. pylori infection induces an inflammatory response and pathological changes in the gastric microenvironment. The host immune cells (especially neutrophils) release inflammatory mediators and large amounts of reactive oxygen species (ROS), which are related to an increased risk of developing gastric cancer. In this study, we evaluated the basal cytotoxicity, anti-H. pylori and antioxidant activities of extracts (apolar and polar), fractions, mixture of triterpenes (-amirin and -amirin) and phenolic compounds (amentoflavone, (+)-catechin, methyl gallate, quercetin 3-O--L-arabinopyranoside and quercetin-3-O--D-galactopyranoside) obtained from Brazilian Cerrado plants used to treat gastrointestinal disorders, by neutral red uptake assay, broth microdilution method, 1,1- diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical and luminol-dependent chemiluminescence assays, respectively. A low basal cytotoxicity was showed by the vegetal preparations (extracts, fractions and mixture of triterpenes). Among the phenolic compounds tested, quercetin (commercial standard) and (+)-catechin demonstrated higher cytotoxicity as compared to extracts, fractions and mixture of triterpenes. The Byrsonima crassa (Malpighiaceae) and Davilla elliptica (Dilleniaceae) specie presented greater potential for the treatment of H. pylori-induced gastric pathologies, since they have better antibacterial activity (minimum inhibitory concentration = 1024 g/mL). However, fractions and isolated compounds were not conclusive to identify substances that could be accountable for the antimicrobial activity of the extracts. The antioxidant activity in vitro (DPPH assay) was not necessarily the same as those observed in the ex vivo assay (luminol-dependent chemiluminescence). Although the poor anti-H. pylori activity... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Maria Stella Gonçalves Raddi / Coorientador: Luiz Marcos da Fonseca / Banca: Luiz Marcos da Fonseca / Banca: Celso Vataru Nakamura / Banca: Clélia Akiko Hiruma Lima / Banca: Wagner Vilegas / Banca: Iracilda Zeppone Carlos / Doutor

No presente trabalho nanopartículas de prata (NPsAg) foram preparadas via fotoquímica na presença de citrato de sódio ou argila (SWy-1, SYn-1 e Laponita B) como estabilizantes e, Irgacure 2959 ou Lucirin TPO como fotorredutores. As NPsAg foram caracterizadas por Espectroscopia de UV-Vis, Espalhamento de Luz Dinâmico (DLS), Difração de raios X (DRX) e Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET). Durante a síntese fotoquímica, foi observado o aparecimento de uma banda de absorção plasmônica por volta de 400 nm, seguida pela alteração da coloração da solução, passando de incolor para amarela, indicando a formação das nanopartículas. As imagens de MET revelaram que durante a formação ocorre a rápida redução da prata, originando pequenas partículas esféricas, como também grandes aglomerações de prata. Durante a irradiação os aglomerados maiores desaparecem por fotofragmentação, as partículas menores coalescem até atingirem certa estabilidade e, no final da irradiação, apenas partículas de morfologia esférica estão em solução. O tipo de estrutura (intercalada ou esfoliada) obtida após a fotorredução da prata mostrou ser um fator determinante no tamanho e estabilidade das NPsAg. Os resultados de DRX mostraram que as amostras de NPsIrg/Lap B, NPsLuc/Lap B e NPsLuc/SWy-1 apresentaram alguma esfoliação da argila após a redução da prata. Nesse caso, as NPsAg obtidas foram mais uniformes e com menores diâmetros (~3 nm). A esfoliação da argila promove uma maior área de adsorção e estabilidade para as NPsAg. Por outro lado as amostras com estrutura intercalada (NPsIrg/SWy-1) e não intercalada (NPsIrg/SYn-1 e NPsLuc/SYn-1) revelaram partículas com diâmetros maiores (5-12 nm), não uniformes e agregação de algumas partículas. A atividade antimicrobiana das argilas puras, NPsLuc/Citrato e NPsLuc/Argila, foi investigada contra as bactérias Escherichia coli (E. coli) e Staphylococcus aureus (S. aureus). A amostra de NPsLuc/SWy-1 apresentou uma ótima atividade antimicrobiana contra ambas as bactérias testadas (~ 4% de índice de sobrevivência). Por outro lado, a argila Laponita B e NPsLuc/Lap B não demonstraram nenhuma atividade antimicrobiana. A presença de sítios ácidos na região interlamelar da argila SWy-1 contribui na liberação de íons Ag+ da superfície das NPsAg e, consequentemente, melhora a atividade antimicrobiana das NPsAg. Os resultados de fotocalorimetria (PCA) mostraram que os valores da porcentagem de conversão e da velocidade de polimerização (Rp) diminuem com a adição de NPsAg (5 e 10% v/v). A porcentagem de conversão mudou de 61%, na ausência de NPsAg/Citrato e NPsAg/Argila, para aproximadamente 53% na presença de de NPsAg/Citrato e NPsAg/Argila. A presença das nanopartículas pode ser responsável por uma menor penetração de luz ao sistema. Portanto, a fotólise do fotoiniciador pode ser menos eficiente. / In the present work was obtained by photochemical method silver nanoparticles (AgNPs) in the presence of citrate or clay (SWy-1, SYn-1, and Laponite B) as stabilizers and Irgacure 2959 or Lucirin TPO as photoreductors. AgNPs were characterized using UV-Vis pectroscopy, Dynamic Light Scattering (DLS), X ray Diffraction (XRD) and Transmission Electron Microscopy (TEM). During the photochemical synthesis was observed a plasmon absorption band around 400 nm, followed by a change of colour in the solution, from colorless to yellow, indicating the formation of nanoparticles. TEM images revealed that during the formation occurs a fast silver reduction, resulting in spherical particles and large silver clusters. During the irradiation, large aggregates desappeared for photofragmentation, smaller particles coalesce to achieve some stability and in the end of irradiation only spherical morphology particles were in solution. The typical structure (intercalated or exfoliated) obtained after silver photoreduction proved to be a determining factor in the size and stability of AgNPs. XRD results showed that NPsIrg/Lap B, NPsLuc/Lap B and NPsLuc/SWy-1 samples presented some clay exfoliation after the silver reduction. The XRD results of AgNPs samples stabilized with Laponite B (NPsIrg/Lap B e NPsLuc/Lap B) and NPsLuc/SWy-1 presented exfoliated and partially exfoliated structures, respectively. In this case, AgNPs obtained were more uniform and presented smaller diameters (~ 3 nm). The clay exfoliation promoted greater absorption area and stability for AgNPs. On the other hand, samples with intercalated (NPsIrg/SWy-1) and non intercalated (NPsIrg/SYn-1 e NPsLuc/SYn-1) structure, presented particles with larger diameters (5-12 nm), non uniform and some aggregation of these particles. The antimicrobial activities of pure clays, NPsLuc/Citrate and NPsLuc/Clay were investigated against Escherichia coli (E. coli) and Staphylococcus aureus (S. aureus). The NPsLuc/SWy-1 sample showed good antimicrobial activity against both tested species (~ 4% survival index). On the other hand, Laponite B and NPsLuc/Lap B samples did not demonstrate any antimicrobial activity. The presence of the acid sities in the interlayer region of the SWy-1 clay contributed to the Ag+ ions release from the AgNPs surface, and consequently improving the AgNPs antimicrobial activity. The results showed that the conversion degree and the polymerization rate (Rp) values decreased with the addition of AgNPs (5 and 10% v/v). The conversion degree changed from 61%, in the absence of AgNPs/Clay, to 53% in the presence of the AgNPs/Clay. The presence of silver nanoparticles can be responsible for less light penetration into system. Therefore, the photolysis of the photoinitiator can be less efficient.

O objetivo do presente estudo foi avaliar a pasta à base de hidróxido de cálcio (Calen®), associada ou não ao digluconato de clorexidina a 0,4%, em cultura de macrófagos da linhagem RAW 264.7, cultura primária de células da linhagem osteoblástica e em tecido subcutâneo de camundongos. Além disso, foi avaliada a atividade antimicrobiana desses materiais. Em cultura de macrófagos RAW 264.7 foram avaliados os seguintes aspectos: a viabilidade celular (Ensaio de MTT), propriedades imunoestimuladoras (dosagem de óxido nítrico) e propriedades antiinflamatórias (dosagem de óxido nítrico, TNF-α e IL-1α). Em cultura primária de células da linhagem osteoblástica foram avaliados viabilidade celular (períodos de 3, 7 e 10 dias), conteúdo de proteína total (Método de Lowry modificado nos períodos de 7 e 10 dias), atividade da fosfatase alcalina (liberação de timolftaleína nos períodos de 7 e 10 dias e in situ pelo método do Fast red), proteínas da matriz não-colágena (marcação por Imunofluorescência Indireta e Fluorescência Direta por meio da utilização da faloidina e DAPI, nos períodos de 3, 7 e 14 dias) e formações nodulares de matriz mineralizada (marcação pelo vermelho de Alizarina nos períodos de 3, 7 e 14 dias). A atividade antimicrobiana foi avaliada por meio do teste de difusão em ágar, sobre 2 microrganismos indicadores (Enterococcus faecalis e Kocuria rhizophila). A biocompatibilidade após implantanção de tubos de polietileno contendo as pastas no tecido subcutâneo de camundongos isogênicos Balb/c. Os dados numéricos foram submetidos à análise estatística por meio do teste de Kruskal-Wallis e pós-teste de Dunn, com nível de significância de 5%. Os resultados referentes à exposição das células da linhagem RAW 264.7 de macrófagos evidenciou baixa atividade imunoestimuladora da pasta à base de hidróxido de cálcio (Calen®), associada ou não ao digluconato de clorexidina 0,4%, nas diferentes concentrações avaliadas. Por outro lado, pôde-se observar atividade antiinflamatória, com inibição na liberação de óxido nítrico e das citocinas (TNF-α e IL1-α), quando da utilização da associação hidróxido de cálcio e clorexidina na concentração de 25µg/ml. Resultados semelhantes ao controle foram observados após a avaliação da pasta à base de hidróxido de cálcio (Calen®), associada ou não ao digluconato de clorexidina a 0,4% em cultura primária de células da linhagem osteoblástica uma vez que os dados numéricos do conteúdo de proteína total, da quantidade de fosfatase alcalina e das formações nodulares de matriz mineralizada não foram estatisticamente diferentes (p>0,05). Em relação à caracterização morfológica das culturas primárias os resultados obtidos foram semelhantes quando comparou-se a pasta Calen®, associada ou não à clorexidina a 0,4%. Em relação à atividade antimicrobiana, a associação hidróxido de cálcio e clorexidina promoveu a formação de maiores halos de inibição (em mm), em relação ao Enterococcus faecalis, embora sem diferença estatística significante com os demais grupos avaliados (p>0,05). No tecido conjuntivo subcutâneo de camundongos, a análise microscópica demonstrou ser esta associação biocompatível, com tecido circunjacente e reacional, apresentando fibrosamento discreto e semelhante ao tecido conjuntivo fibroso normal, aos 63 dias de avaliação, sem diferença estatística com grupo controle (p>0,05). Com base nas metodologias empregadas e nos resultados obtidos pode-se concluir que a adição da clorexidina não apresentou benefícios adicionais à pasta à base de hidróxido de cálcio. / The aim of this study was to evaluate the calcium hydroxide-based paste (Calen®), associated or not to 0.4% chlorexidine digluconate, in culture of RAW 264.7 macrophages lineage, primary culture of osteoblastic lineage, and mice subcutaneous tissue. Besides we evaluated the antimicrobial activity of those materials. In RAW 264.7 macrophages culture the followed aspects were evaluated: cellular viability (MTT assay), immunestimulatory (nitric oxide detection) and anti-inflammatory (nitric oxide, TNF-α and IL-1-α detection) properties. In primary cell culture of osteoblastic lineage we evaluated the cellular viability for 3, 7 and 10 days, total protein content (Lowry modified method for 7 and 10 days), alkalinic phosphatase activity (thymolphthalein liberation for 7 and 10 days, and in situ by Fast red method), extracellular matrix noncollagen protein (stained by indirect immunofluorescence and direct fluorescence by phalloidin and DAPI for 3, 7 and 14 days), and mineralized matrix nodular formation (stained by Alizarin red for 3, 7 and 14 days). Antimicrobial activity was evaluated by agar diffusion test with Enterococcus faecalis and Kocuria rhizophila as indicators, and the biocompatibility after polyethylene tubes with the paste implanted into Balb/c mice subcutaneous tissue. The data were statistically analyzed by Kruskal-Wallis test, followed by Dunn\'s post test, considering a level of significance of 5%. The results of macrophage RAW 264.7 cells lineage exposition showed low stimullatory activity for the different concentrations evaluated of calcium hydroxide-based paste (Calen®), associated or not to 0.4% chlorexidine digluconate. On the other hand, we could observe anti-inflammatory activity with inhibition of nitric oxide and cytokines quantification (TNF--α e IL1--α), after the use of 25-µg/ml calcium hydroxide associated to chlorhexidine (25-µg/ml). Same results to the control were observed after evaluation of Calen® paste associated or not to 0.4% chlorexidine digluconate, in culture of RAW 264.7 macrophages lineage, primary culture of osteoblastic lineage because the data of total protein content, alkaline phosphatase, and mineralized matrix nodular formation were not statistically different (p>0.05). In relation to the morphological characterization of primary culture, the results obtained were the same after comparison of Calen® paste, associated or not to 0.4% chlorexidine digluconate. About antimicrobial activity, the association Calcium hydroxide and chlorhexidine promoted formation of largest inhibition halo (in mm) for Enterococcus faecalis, but with no statistically significant with others evaluated groups (p>0.05). The microscopic analysis in mice conjunctive subcutaneous tissue demonstrated biocompatibility of that association with the around and reactional tissue, sowing a discret fibrosis, as well as the normal conjunctive fibrous tissue after 63 days of evaluation with no statistically difference with the control group (p>0.05). Based on the methodology used, and the results obtained in this work, we could conclude that the addition of chlorexidine showed no additional benefits to the calcium hydroxide-based paste.