A diferenciação entre processos infecciosos e inflamatórios representa um grande desafio na área de diagnóstico. A complexação do antimicrobiano ciprofloxacino (CIP) com o tecnécio (99mTc-CIP) vem sendo estudada com objetivo de desenvolver um radiofármaco com alta especificidade no diagnóstico de infecções, baseado em seu amplo espectro de atividade antibacteriana. O mecanismo de ação do fármaco consiste na ligação deste com a enzima ADN-girase da bactéria, permitindo sua ligação à bactéria ativa e a obtenção de imagens devido a fótons emitidos pelo 99mTc. Tendo em vista que o local de formação do complexo envolve os mesmos grupos funcionais responsáveis pela ligação do fármaco à enzima, sua eficácia pode ser prejudicada. A diferenciação entre processos infecciosos e inflamatórios representa um grande desafio na área de diagnóstico. A complexação do antimicrobiano ciprofloxacino (CIP) com o tecnécio (99mTc-CIP) vem sendo estudada com objetivo de desenvolver um radiofármaco com alta especificidade no diagnóstico de infecções, baseado em seu amplo espectro de atividade antibacteriana. O mecanismo de ação do fármaco consiste na ligação deste com a enzima ADN-girase da bactéria, permitindo sua ligação à bactéria ativa e a obtenção de imagens devido a fótons emitidos pelo 99mTc. Tendo em vista que o local de formação do complexo envolve os mesmos grupos funcionais responsáveis pela ligação do fármaco à enzima, sua eficácia pode ser prejudicada. O objetivo deste trabalho foi avaliar as condições ideais para ligação do 99mTc a duas quinolonas (CIP e pefloxacino), utilizando diferentes agentes redutores (SnCl2 e FSA), pH da solução e temperatura de incubação. A complexação dos fármacos ao radioisótopo 99mTc foi avaliada através do controle radioquímico, utilizando cromatografia em camada delgada. Posteriormente, testou-se sua atividade antimicrobiana in vitro utilizando diferentes microorganismos. O agente redutor FSA não foi eficiente na formação do complexo, resultando em uma concentração alta de Tc livre (37%). A formulação com Sn aumentou a formação de colóide com aquecimento (100 ºC). A complexação dos antimicrobianos ao Tc impediu sua ligação à ADN-girase. A taxa de ligação variou de 10% (filtração) a 16% (centrigugação). Além disso, verificou-se boa correlação entre a formação de colóide e quantidade de radiação ligada à bactéria em ambos os testes. Esta perda de atividade vem de encontro a alguns estudos clínicos relatados na literatura, que revelam a não diferenciação entre processos infecciosos e processos inflamatórios pelas quinolonas marcadas com 99mTc. / Differentiation between inflammation and infection represents a major challenge in clinical diagnostics. Several studies using ciprofloxacin (CIP), a broad spectrum antimicrobial agent, complexed with technetium (99mTc) have been reported in order to evaluate its capacity to diagnose infections. CIP mechanism of action involves its binding with bacterial DNA-gyrase during the growth phase and the acquisition of images due to 99mTc radioactivity. The fact that the sites of complexation are the same as those involved in bacterial binding it may affect its antimicrobial activity. The objective of the present work was to evaluate the ideal conditions for the complexation of CIP and pefloxacin with 99mTc using stannous chloride and formamidinesulfinic acid (FSA) as reducing agents, different pH and temperatures. The efficiency of complexation was monitored using radiochemical control as well as thin layer chromatography. Furthermore the antimicrobial activity of both complexes was evaluated in vitro. FSA was not adequate as a reducing agent and SnCl2 was better at room temperature than using heat (100 oC). The complexes did not bound well to the bacterias with binding efficiencies ranging from 10 (filtration method) to 16% (centrifugation method). Besides that, a good correlation between colloid formation (impurity) and radioactivity bound to bacterias was found. This decrease in bacterial activity was previously reported in some articles suggesting that quinolones complexed with 99mTc are not suitable to diagnose infections in the presence of inflammation.

Submitted by Emanoel Martins Filho (emanoelfilho@ufba.br) on 2016-12-09T13:31:58Z No. of bitstreams: 1 Nayone Lantyer.pdf: 1923180 bytes, checksum: d9ebeeafc08bf0b1f2b936cd4c76821e (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barroso (pbarroso@ufba.br) on 2017-02-03T18:39:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Nayone Lantyer.pdf: 1923180 bytes, checksum: d9ebeeafc08bf0b1f2b936cd4c76821e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-03T18:39:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nayone Lantyer.pdf: 1923180 bytes, checksum: d9ebeeafc08bf0b1f2b936cd4c76821e (MD5) / CONS NAC DE DESENVOLVIMENTO CIENTIFICO E TECNOLOGICO - CAPES / A iguana-verde (Iguana iguana) tornou-se popular como animal de estimação exótico devido às suas características corporais distintas e a conveniência de sua manutenção, o que aumentou a ocorrência de problemas relacionados ao manejo, com frequência associados à diferentes alterações oftálmicas. Assim, objetivou-se com o presente trabalho estabelecer parâmetros oftálmicos para diferentes testes diagnósticos em iguanas-verdes (Iguana iguana). Foram utilizados 27 animais, de ambos os sexos, com idade estimada entre 1 e 8 anos, conduzidos ao Centro de Triagem de Animais Silvestres (CETAS – Salvador), submetidos a contenção física para execução dos seguintes testes: avaliação da produção lacrimal através do teste lacrimal do vermelho de fenol (TLVF), da tira endodôntica de papel absorvente (TEPA) e do teste lacrimal de Schirmer (TLS); determinação da microbiota conjuntival e teste de susceptibilidade antimicrobiana; mensuração da pressão intraocular (PIO) por tonometria de rebote; avaliação ultrassonográfica do bulbo do olho, através de diferentes planos de avaliação; e citologia conjuntival. A mediana ± intervalo semi-interquartil (S-IQR) para TLVF, TEPA, TLS, CHFP e PIO foram 3,89 ± 1,67 mm/15s, 8,50 ± 2,40 mm/min, 1,00 ± 0,50 mm/min, 12,45 ± 1,67 mm e 18,00 ± 1,75 mmHg, respectivamente. Houve crescimento em 18 das 20 amostras coletadas, com predominância de bactérias Gram-positivas (75,76%) e o Staphylococcus spp. foi o micro-organismo mais isolado (39,40%). O teste de susceptibilidade antimicrobiana mostrou maior resistência do Staphylococcus spp. a polimixina B. A mediana ± S-IQR para profundidade da câmara anterior foi de 1,20 ± 0,16 mm e 1,40 ± 0,20 mm; profundidade da câmara posterior foi de 6,85 ± 0,58 mm e 6,85 ± 0,53 mm; espessura da lente foi de 4,45 ± 0,26 mm e 4,30 ± 0,31 mm; e comprimento axial do olho foi de 12,60 ± 0,77 mm e 12,55 ± 0,73 mm, para os planos sagital e dorsal. O comprimento do Conus papilaris (Cp) foi de 6,05 ± 0,35 mm e 5,90 ± 0,50 mm; e a espessura do Cp foi de 1,15 ± 0,25 mm e 1,20 ± 0,21 mm, sem diferenças nas posições 4,5 e 7,5 horas. Na citologia conjuntival foi possível observar amostras hipercelulares, com densos aglomerados de células basalóides e escamosas não ceratinizadas. Os resultados obtidos no presente trabalho servirão de auxílio ao diagnóstico e terapêutica de alterações oculares em Iguana iguana. / Green iguanas (Iguana iguana) have become popular pets in several countries because of their distinct body characteristics and convenience in the maintenance, increasing the occurrence of problems related to management, frequently associated to different ocular diseases. The purpose of this study was to establish reference parameters for different ophthalmic diagnostic tests in green iguanas (Iguana iguana). Twenty-seven healthy animals, both sexes, age estimated between one and eight years, conducted to the Triage Center of Wild Animals (CETAS), manually restrained were assessed. Tear production was evaluated by phenol red thread tear test (PRTT), endodontic absorbent paper point tear test (EAPPTT) and schirmer tear test (STT), as well as culture of the conjunctival bacterial flora and antimicrobial susceptibility test, palpebral fissure length (PFL), rebound tonometry, ocular ultrasonography using different evaluation plans, and conjunctival cytology. Median ± semi-interquartile range (S-IQR) PRTT, EAPPTT, STT, PFL and intraocular pressure (IOP) was 3.89 ± 1.67 mm/15s, 8.50 ± 2.40 mm/min, 1.00 ± 0.50 mm/min, 12.45 ± 1.67 mm e 18.00 ± 1.75 mmHg, respectively. Bacterial growth was observed in 18 of 20 samples, with predominance of Gram-positive bacteria (75.76%) and Staphylococcus spp. as the most isolated microorganism (39.40%), with resistance pattern to polymyxin B demonstrated by the antimicrobial susceptibility test. Median ± S-IQR anterior chamber depth was 1.20 ± 0.16 mm and 1.40 ± 0.20 mm; posterior chamber depth was 6.85 ± 0.58 mm and 6.85 ± 0.53 mm; lens length was 4.45 ± 0.26 mm and 4.30 ± 0.31 mm; and axial globe length was 12.60 ± 0.77 mm and 12.55 ± 0.73 mm, for the sagittal and dorsal planes. Conus papilaris (Cp) length was 6.05 ± 0.35 mm and 5.90 ± 0.50 mm; and Cp width was 1.15 ± 0.25 mm and 1.20 ± 0.21 mm, without differences between 4.5 and 7.5 hours. Hypercellular samples, with dense clusters of basaloid and squamous epithelial cells were observed in the conjunctival cytology. The results in the present study may be helpful for diagnosis and therapeutic of ocular disorders in green iguanas.

274f. / Submitted by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2013-04-03T15:45:11Z No. of bitstreams: 1 Tese Vanessa R Guedes.pdf: 23534749 bytes, checksum: df0c04b0207f9bf62a0952e36a12f3f8 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Hilda Fonseca(anahilda@ufba.br) on 2013-04-23T16:58:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese Vanessa R Guedes.pdf: 23534749 bytes, checksum: df0c04b0207f9bf62a0952e36a12f3f8 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-23T16:58:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Vanessa R Guedes.pdf: 23534749 bytes, checksum: df0c04b0207f9bf62a0952e36a12f3f8 (MD5) Previous issue date: 2011 / FAPESB e CNPQ / Este trabalho descreve o estudo da atividade antimicrobiana dos extratos e frações obtidos de duas espécies patogênicas ao cacaueiro (Theobroma cacao L.): Moniliophthora perniciosa (vassoura-de-bruxa) e Phytophthora palmivora (podridão parda), além de três espécies antagonistas ao fungo M. perniciosa, sendo elas: Trichoderma stromaticum e dois isolados não identificados pertencentes ao gênero Xylaria que foram nomeadas como Xylaria sp1 e Xylaria sp2. Os extratos e frações estudados foram obtidos a partir do cultivo destas espécies em diferentes meios: líquidos (batata-dextrose, cenoura-dextrose, malte a 2% e Czapek) e sólido (arroz). Neste trabalho, também foi traçado o perfil dos extratos e frações dos fungos na produção de metabólitos secundários, através dos deslocamentos químicos apresentados nos espectros de RMN de 1H e, ainda, foi verificado qual deles se mostrou mais promissor na produção de diferentes metabólitos quando cultivado em diversos meios. Dos extratos em acetato de etila (batata-dextrose) e em metanol (arroz) do fungo Xylaria sp1 foram feitos isolamento, identificação e/ou determinação estrutural de sete metabólitos, através de fracionamentos cromatográficos, utilizando sílica gel e sephadex LH-20 como fase estacionária, e misturas de solventes orgânicos como fase móvel. Desta forma, foram isolados os esteróides: peróxido de ergosterol e ergosterol; dois derivados piridínicos: 3-piridina metanol, o qual seus dados de RMN de 1H e 13C estão sendo relatados pela primeira vez, e o 3-piridina etanol, inédito como produto de origem natural, além de três novos metabólitos secundários, sendo duas lactonas e um ácido carboxílico. As substâncias foram identificadas através das análises de seus espectros de ressonância magnética nuclear de 1H e 13C uni e bidimensionais, por espectrometria de massas e por espectrometria no infravermelho. / Salvador

Submitted by Edileide Reis (leyde-landy@hotmail.com) on 2013-04-23T11:56:20Z No. of bitstreams: 1 Ivoneide Sobral.pdf: 1569756 bytes, checksum: 2870febcee63d8bb96ebdcc3b1095167 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-23T11:56:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ivoneide Sobral.pdf: 1569756 bytes, checksum: 2870febcee63d8bb96ebdcc3b1095167 (MD5) Previous issue date: 2006 / O presente trabalho relata a investigação fitoquímica da espécie Kielmeyera cuspidata, pertencente à família Clusiaceae. Este é o primeiro estudo fitoquímico desta espécie. A coleta do material ? caule e folhas ? foi feita na região da Chapada Diamantina no município de Andaraí, estado da Bahia. Do extrato hexânico e da fase diclorometano do extrato metanólico do caule da K. cuspidata foram obtidas dez substâncias. Sendo que no extrato hexânico foi identificado uma mistura de esteróides (acetato de sitosterol e acetato de estigmasterol). Já na fase diclorometano foi identificada uma mistura de triterpenos (a-amirina e b-amirina) e seis xantonas. Na determinação estrutural das substâncias isoladas, foram utilizados métodos espectrométricos usuais; UV, RMN e espectro de massas, juntamente com comparação dos dados descritos na literatura. Foram realizados também testes de atividade antimicrobiana nos extratos trabalhados. / Salvador

SOUZA, Germana Conrado de. Detecção de betalactamases de espectro expandido (ESBL) em cepas de coliformes isoladas de carne de frango comercializada na cidade de Fortaleza, Ceará. 2007. 118 f. : Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Departamento de Tecnologia de Alimentos, Curso de Mestrado em Tecnologia de Alimentos, Fortaleza-CE, 2007 / Submitted by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-06-08T12:16:01Z No. of bitstreams: 1 2007_dis_gcsouza.pdf: 591918 bytes, checksum: d21477fb14b177c756c5c364cea58315 (MD5) / Approved for entry into archive by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-06-08T12:16:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_dis_gcsouza.pdf: 591918 bytes, checksum: d21477fb14b177c756c5c364cea58315 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-08T12:16:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_dis_gcsouza.pdf: 591918 bytes, checksum: d21477fb14b177c756c5c364cea58315 (MD5) Previous issue date: 2007 / The poultry processing industry depends on the biosafety and quality of the products offered to the population, and is the cheapest and more affordable source of proteins. The intensive production process of poultry products requires constant microbiological controls. This study was aimed to assess the microbiological conditions of this product and to perform an antimicrobial susceptibility test and the screening of ESBL-producing bacteria on the strains isolated from the collected samples. Between April and November 2006, 80 samples of fresh and freezed poultry meat marketed in the city of Fortaleza were collected. The microbiological protocol included an aerobic mesophile bacterial count, and the determination of the coliform MPN at 35oC and 45oC, according to the ANVISA (National Sanitary Surveillance Agency) resolution RDC 12 of January 02, 2001. The susceptibility test was carried out according to the disk diffusion technique (KIRBY-BAUER), and the screening for ESBL-producing strains was performed by CLSI. The used antibiotics were amikacine (30µg), ampicillin (10µg), ciprofloxacin (5µg), ceftazidime (30µg), streptomycin (10µg), doxycycline (30µg), gentamicin (10µg), imipenem (10µg), sulphonamide (300µg) and sulfamethoxazol/trimetroprim (25µg). The mesophile bacterial count in the 80 tested strains ranged from <1.0 x 10 CFU/g to 6.3 x 10 CFU/g. 34 (43%) of the samples were positive for coliforms at 35oC and 17 (21%) for coliforms at 45oC. In the 11 E. coli strains, the highest resistance was found against doxycycline (91%), while 27% of the strains were 100% sensitive to amikacin, gentamicin and imipenem. Within the 22 Klebsiella pneumonia isolated strains, the highest resistance was against ampicillin (94.5%), with the highest sensitivity to gentamicin, sulfamethoxazol/trimetroprim and amikacin (94.5%, 94.5%, and 90%, respectively). Of the 19 Enterobacter aerogenes strains, 90.1% were resistant to ampicillin and 95.4% showed to be sensitive to ciprofloxacin. Of the 11 strains of Escherichia coli, 22 of Klebsiella pneumoniae and 19 of Enterobacter aerogenes, only 4, 9 and 5 strains, respectively, showed to have an ESBL-producing phenotype, and only 3 (33%) of the K. pneumoniae strains and 3 (60%) of the E. aerogenes strains were confirmed as being ESBL producers. We verified the poultry meat to be microbiologically flawed, as shown by the high number of mesophile aerobic bacteria and coliforms grown at 35oC and at 45oC, being a warning sign for the occurrence of DTA, even by microorganisms resistant to multipleantibiotics and ESBL producers. The implementation of a Hazard Analysis and Critical Control Points (HACCP) system involving all the processing stages can be an effective measure in order to improve the quality and safety of this product. / A cadeia produtiva do frango de corte depende da biossegurança e da qualidade dos produtos que são ofertados à população, visto ser essa a fonte de proteína mais acessível e barata. O intenso processamento de produtos avícolas necessita de constantes averiguações a respeito da sua qualidade microbiológica. Diante do exposto, este trabalho teve como objetivo avaliar as condições microbiológicas e de realizar o teste de susceptibilidade antimicrobiana e detecção de bactérias produtoras de ESBL das cepas de microrganismos isoladas das amostras coletadas. No período de abril a novembro de 2006 foram coletadas 80 amostras de carne de frango resfriada e congelada comercializada na cidade de Fortaleza, Ceará. O protocolo microbiológico incluiu a contagem de bactérias aeróbias mesófilas, determinação do NMP de coliformes a 35°C e a 45°C, de acordo com a RDC n° 12 de 02 de janeiro de 2001 da ANVISA. Para o teste de susceptibilidade a antimicrobianos foi utilizada a técnica de difusão em placas segundo KIRBY-BAUER e CLSI, para detecção de cepas produtoras de ESBL. Os antibióticos usados foram: amicacina (30µg), ampicilina (10µg), ciprofloxacina (05µg), ceftazidima (30µg), estreptomicina (10µg), doxiciclina (30µg), gentamicina (10µg), imipenem (10µg), sulfonamida (300µg) e sulfametoxazol/trimetroprim (25µg). Das 80 amostras analisadas, a contagem de mesófilos variou de <1,0 x 10 UFC/g a 6,3 x 105 UFC/g, 34 (43%) das amostras foram positivas para coliformes a 35°C e 17 (21%) para coliformes a 45°C. Quanto ao teste de susceptibilidade antimicrobiana, o maior percentual de resistência encontrado nas 11 cepas de Escherichia coli foi à doxiciclina (91%); 27% das cepas foram 100% sensíveis a amicacina, gentamicina e imipenem. Das 22 cepas de Klebsiella pneumoniae isoladas, a maior resistência foi à ampicilina (94,5%); maior sensibilidade a gentamicina, sulfametoxazol/trimetroprim e amicacina, 94,5%, 94,5% e 90%, respectivamente. Das 19 cepas de Enterobacter aerogenes, 90,1% foram resistentes a ampicilina e 95,4% apresentaram sensibilidade a ciprofloxacina. Das 11 cepas de Escherichia coli, 22 de Klebsiella pneumoniae e 19 de Enterobacter aerogenes, apenas 4, 9 e 5 cepas apresentaram o fenótipo produtor de ESBL, respectivamente, e destas somente 3 (33%) das cepas de Klebsiella pneumoniae e 3 (60%) das cepas de Enterobacter aerogenes foram confirmadas como produtoras de ESBL. Foi possível constatar que a carne de frango apresentaram falhas em relação a qualidade microbiológica, como demonstrado pela presença de elevado número de bactérias aeróbias mesófilas, coliformes a 35°C e coliformes a 45°C, sinalizando para o risco potencial de ocorrência de DTA, inclusive por microrganismos multi-resistentes à antimicrobianos e produtores de ESBL. A implementação de um sistema de Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle (APPCC), envolvendo todas as etapas do processamento, pode constituir uma medida eficaz para a melhoria da qualidade e segurança do produto

DIAS, Lucas Pinheiro. Purificação e caracterização de um inibidor de tripsina das flores de Cassia fistula Linn. com atividade antimicrobiana. 2012. 83 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2012. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-07-19T13:34:23Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_lpdias.pdf: 2004862 bytes, checksum: cd42d65281498494806d7ca987015da7 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T20:29:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_lpdias.pdf: 2004862 bytes, checksum: cd42d65281498494806d7ca987015da7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T20:29:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_lpdias.pdf: 2004862 bytes, checksum: cd42d65281498494806d7ca987015da7 (MD5) Previous issue date: 2012 / Plants synthesize proteins that have antimicrobial properties, which can be used to substitute chemical pesticides in agriculture and as new drugs for the control of bacterial infections in humans. Among the various plant structures, the flowers seem to be a promising source of active molecules against pathogens, particularly if considered its important physiological role, which should be preserved. Therefore, this experimental research aimed at the prospection of novel proteins with antimicrobial activity in wild flowers and to subsequent purification, biochemical characterization and evaluation of antimicrobial activity of a trypsin inhibitor present in flowers of Cassia fistula Linn (the golden shower tree). The total extract of C. fistula flowers was prepared in 50 mM sodium phosphate buffer, pH 7.5. This extract presented trypsin inhibitory activity (42.41 ± 0.35 IU/mgP) and papain (27.10 ± 0.23 IU/mgP), besides to the presence of peroxidase (20.0 ± 0.18 UAP/mgP) and chitinase (1.70 ± 0.21 ηkatal/mgP). On the other hand, the hemagglutinating, β-1,3-glucanase, protease and urease activities were not detected. The trypsin inhibitor of C. fistula, named CfTI, was purified by fractionating the crude extract with trichloroacetic acid (2.5%) followed by affinity (anidrotripsina-Sepharose-4B) and reverse phase (Vydac C-18TP 522) chromatographies. CfTI is a glycoprotein with an apparent molecular mass of 22.2 kDa, pI 5.0 and NH2-terminal sequence showing high similarity with Kunitz soybean trypsin inhibitor (SBTI). The inhibitor was not stable to heat, and loss 23.4% when incubated at 60 °C for 15 minutes. However, it proved to be stable to changes of pH. CfTI (100 µg/mL) slowed the growth of pathogenic fungi of agricultural importance, Colletotrichum lindemuthianum and Fusarium solani, and also presented antibacterial activity against the human pathogenic bacteria, Staphylococcus aureus and Enterobacter aerogenes. The results demonstrate the potential of the flowers as a source of diverse bioactive proteins, as the trypsin inhibitor present in C. fistula flowers, promoting its biotechnological potential application against fungi and bacteria of relevance to Agriculture and human health. / As plantas sintetizam proteínas que possuem propriedades antimicrobianas, podendo ser utilizadas em substituição aos defensivos químicos no campo e como fonte de novas drogas para o controle de infecções bacterianas em humanos. Dentre as diversas estruturas vegetais, órgãos reprodutivos como as flores parecem ser uma fonte promissora de tais moléculas ativas contra patógenos, particularmente se considerado o seu relevante papel fisiológico, o qual deve ser preservado. Nesse contexto, a presente pesquisa experimental teve como objetivos a prospecção de proteínas com ação antimicrobiana em flores silvestres e posterior purificação, caracterização bioquímica e avaliação da atividade antimicrobiana de um inibidor de tripsina presente em flores de Cassia fistula Linn. (Chuva-de-ouro). O extrato total das flores de C. fistula foi preparado em tampão fosfato de sódio 50 mM, pH 7,5. Esse extrato apresentou atividade inibitória de tripsina (42,41 ± 0,35 UI/mgP) e de papaína (27,10 ± 0,23 UI/mgP), além de mostrar a presença de peroxidase (20,0 ± 0,18 UAP/mgP) e quitinase (1,70 ± 0,21 ηkatal/mgP), estando ausentes as atividades hemaglutinante, β-1,3-glucanásica, ureásica e proteásica. O inibidor de tripsina de C. fistula, denominado CfTI, foi purificado do extrato total por fracionamento com ácido tricloroacético (2,5%), seguido de cromatografias de afinidade (anidrotripsina-Sepharose-4B) e fase reversa (Vydac C-18TP 522). CfTI é uma glicoproteína com massa molecular aparente de 22,2 kDa, pI 5,0 e sequência NH2-terminal exibindo alta similaridade com o inibidor de tripsina da soja do tipo Kunitz (SBTI). O inibidor mostrou-se pouco estável ao calor, reduzindo sua atividade inibitória para 23,4% quando incubado a 60 °C, durante 15 minutos. No entanto, ele se mostrou bastante estável a variações no pH. CfTI (100 µg/mL) retardou o crescimento dos fungos fitopatogênicos de importância agrícola, Colletotrichum lindemuthianum e Fusarium solani, além de apresentar atividade antibacteriana frente às bactérias patogênicas ao homem, Staphylococcus aureus e Enterobacter aerogenes. Os resultados obtidos demonstram o potencial das flores como fonte diversificada de proteínas bioativas, evidenciando o inibidor de tripsina presente em flores de C. fistula, fomentando sua aplicação biotecnológica frente a fungos e bactérias de relevância para a Agricultura e Saúde.

Bactérias resistentes aos antimicrobianos representam um risco, não apenas para a saúde animal, como também para a saúde pública. As bactérias comensais, como Escherichia coli, são consideradas um bom indicador do padrão de resistência de uma população microbiana, uma vez que, por residirem no intestino, estão submetidas à constante pressão de seleção resultante da administração de antimicrobianos, podendo sobreviver ao processo de abate de suínos e chegar aos consumidores. Neste sentido, os objetivos deste estudo foram: i. avaliar a frequência de resistência antimicrobiana fenotípica e a presença de grupos clonais em E. coli isoladas de fezes e carcaças suínas; ii. determinar o perfil fenotípico e genotípico de resistência aos antimicrobianos em isolados multirresistentes de E. coli provenientes de carcaças de suínos e identificar grupos clonais presentes em carcaças suínas; iii. comparar o perfil fenotípico de resistência antimicrobiana em isolados de E. coli de fezes de suínos submetidos a diferentes protocolos de administração de antimicrobianos via ração; iv. descrever o perfil da microbiota intestinal de suínos submetidos a diferentes protocolos de uso de antimicrobianos via ração. Para isto, três etapas distintas foram realizadas. Na etapa 1, dois ciclos de amostragem foram conduzidos em três matadouros-frigoríficos (A, B, C) de suínos, sendo coletado fezes depositadas no piso da pocilga de espera e suabes de superfície de carcaças na etapa de pré-resfriamento. Escherichia coli foi isolada dessas duas origens e avaliada quanto à resistência aos antimicrobianos. Além disso, 92 isolados de ambas as origens apresentando perfil de multirresistência foram submetidos à análise por Pulsed-field gel eletrophoresis (PFGE). Para a etapa 2, os isolados multirresistentes provenientes de carcaças foram submetidos a novos testes de sensibilidade antimicrobiana e de acordo com o perfil fenotípico foram pesquisados quanto aos genes de resistências e submetidos à técnica de PFGE. Em relação a etapa 3, quatro grupos de suínos que utilizavam protocolos distintos de uso de antimicrobianos via ração foram acompanhados em todas as fases zootécnicas e avaliados quanto a frequência de resistência antimicrobiana de E. coli e perfil bacteriano da microbiota intestinal através do sequenciamento de duas regiões do gene 16S rRNA. Entre os 674 isolados de E. coli da etapa 1 apenas 7,4% foram susceptíveis a todos os antimicrobianos testados. As maiores frequências de resistência foram identificadas frente à tetraciclina (85,9%), ampicilina (73,0%), sulfonamida (70,0%), florfenicol (65,0%) e ácido nalidíxico (58,9%). Do total de isolados de E. coli, 79,5% (536/674) foram classificados como multirresistentes. A análise de macro restrição (PFGE), conduzida em isolados apresentando perfis de multirresistência mais prevalentes, demonstrou que isolados de fezes e carcaças eram na maioria dos casos relacionados (similaridade ≥70%) nos três matadouros-frigoríficos. Dos isolados multirresistentes provenientes das carcaças, dez novos antimicrobianos foram testados; em relação a esses, as maiores frequências de resistências foram à cloranfenicol (86,4%), estreptomicina (65,8%) e trimetoprima (57%). Cada matadouro-frigorífico apresentou um perfil distinto de multirresistência predominante. Nos isolados submetidos à pesquisa de genes de resistência, foram detectados por ordem de frequência: strA (83,3%); aac(3)IVa (70%); tetB (70%); sul2 (60%); floR (56,6%); tetA (50%); aph(3)Ia (43,3%); sul3 (26,6%) e blaTEM (10%); três grupos de isolados relacionados (similaridade ≥ 70%) foram encontrados na análise por PFGE. Em relação à etapa 3, os grupos com diferentes protocolos de uso antimicrobianos via ração não apresentaram alteração significativa no perfil de microbiota intestinal e contagem de E. coli; entretanto, os perfis fenotípicos de resistência antimicrobiana foram distintos entre os grupos. O grupo que recebia protocolo com uso alternado de antimicrobianos de seis classes distintas apresentou maior frequência de resistência e multirresistência. De acordo com os resultados encontrados protocolos de uso continuado de antimicrobianos na criação de suínos gera uma pressão seletiva, resultando em cepas multirresistentes que podem sofrer propagação no ambiente e na cadeia de produção de alimentos. Considerando os perfis de resistência encontrados em E. coli originada de carcaças suínas e fezes, em todas as etapas deste trabalho, observou-se que essas cepas são selecionadas na granja pelo uso de antimicrobianos, chegaram ao pré-abate, disseminaram-se na linha de abate e contaminar a carcaça. O uso prudente de antimicrobianos é amplamente citado em toda a literatura científica veterinária e, conforme nossos resultados demonstraram, deve ser incluído entre as metas da suinocultura brasileira. / Bacteria resistant to antimicrobials present a hazard not only for animal health but public health too. Commensal bacteria, such as Escherichia coli, are considered a good indicator of microbial population resistance, because they live in gut and are subjected to constant pressure resulting selection of the administration of antibiotics, may survive in slaughtering process and get consumers. In this sense, the aims of this study were: i. to evaluate the frequency of antimicrobial phenotype resistance and presence of clonal groups for E. coli isolated from feces and pig carcasses; ii. to determine phenotypic profile and antimicrobial genotypic resistance in multiresistant E. coli isolated from pig carcasses and identify clonal groups present in pig carcasses; iii. to compare phenotypic profile of antimicrobial resistance in E. coli from swine feces submitted to different antimicrobial in-feed protocols; iv. to describe gut microbiota profile in pigs submitted to different antimicrobial in-feed protocols. For this, three steps were performed. In step 1, two sampling cycles were conducted in three slaughterhouses (A, B, C) of pigs being collected feces deposited in pen floor and pre-chill carcasses. Escherichia coli was isolated from these two sources and evaluated for antimicrobial resistance. In addition, 92 isolates with multidrug resistance profile were analyzed by pulsed-field gel eletrophoresis (PFGE). In step 2, isolated from carcasses and multiresistant underwent new antimicrobial susceptibility testing and in accordance with the phenotypic profile were screened for the resistance gene and PFGE. In step 3, four groups of pigs used different antimicrobial in-feed protocols were followed in all phases and evaluated frequency of antimicrobial resistance and gut bacterial profile by sequencing two regions of 16S rRNA. Among the 674 E. coli isolates from step 1 just 7.4% were susceptible to all antibiotics. The highest frequencies of resistance were: tetracycline (85.9%), ampicillin (73.0%), sulfonamide (70.0%), florfenicol (65.0%) and nalidixic acid (58.9%). Of total E. coli isolates, 79.5% (536/674) were multidrug. Macrorestriction analysis (PFGE), conducted in isolates with profiles more prevalent multidrug resistance showed that isolated from feces and carcasses were in most cases related (≥70% similarity) in the three slaughterhouses. The multiresistant isolates from carcasses, ten new antibiotics were tested, with greatest frequency in add antimicrobial resistance were: chloramphenicol (86.4%), streptomycin (65.8%) and trimethoprim (57%). Each slaughterhouse showed a distinct profile of resistance and number of resistance markers. Isolates submitted to research genes were detected in order of frequency: strA (83.3%); aac(3)IV (70%); tetB (70%); sul2 (60%); floR (56.6%); tetA (50%); aph(3)Ia (43.3%); sul3 (26.6%) and blaTEM (10%); and three related groups (similarity ≥ 70%) were formed in PFGE. For step 3, groups with different antimicrobial in-feed had no significant change in gut microbiota profile and E. coli counts; however the phenotypic profiles of antimicrobial resistance were different between the groups. The group receiving protocol with alternate use of antimicrobials six different classes showed higher frequency of resistance and multidrug resistance. According to the results, different protocols of antimicrobial in pig farming creates a selective pressure, resulting in multi-drug resistant strains that may contribute to spread environment and in food production chain. Considering the resistance profiles found in E. coli originated from swine carcasses and feces, in all stages of this work, it was observed that these strains were selected for in farm by use of antimicrobials, reached the pre-slaughter, spread in the slaughterhouse and carcasses. The concept of prudent use of antimicrobials is widely quoted in all the veterinary scientific literature and, as our results showed, it should be included among the goals of the Brazilian pig farming.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-26. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:51Z : No. of bitstreams: 1 Publico-10930.pdf: 1566372 bytes, checksum: afc016849743bcd441d396462f730fec (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivo: A expressao de sistemas de efluxo tem sido reconhecida com um importante mecanismo de resistencia antimicrobiana entre isolados clinicos de P. aeruginosa. Este estudo investigou a expressao de sistemas de efluxo entre amostras clinicas de P. aeruginosa. Metodos: Sessenta amostras clinicas de P. aeruginosa isoladas de infeccao da corrente sanguinea de pacientes hospitalizados no Hospital Sao Paulo/UNIFESP entre julho e dezembro de 2005 foram avaliadas. O perfil de sensibilidade bacteriana foi determinado utilizando-se da tecnica de agar diluicao de acordo com as recomendacoes do CLSI 2006. A quantificacao da expressao genica foi determinada pela tecnica de qRT-PCR para os genes dos quatro sistemas de efluxo avaliadas bombas de efluxo (mexB, mexD, mexF, mexY), oprD and ampC e comparada a expressao desses genes nas cepas de P. aeruginosa ATCC 27853 e PAO1. A presenca de genes codificadores de metalo-ƒÀ-lactamases (MƒÀL) foi investigada atraves do teste de hidrolise enzimatica dos carbapenens e confirmada por PCR. A relacao genetica entre os isolados foi avaliada pela tecnica de PFGE. Resultados: O aztreonam (MIC50, 8 ƒÊg/mL; 65% de sensibilidade) demonstrou possuir a melhor atividade in vitro contra os isolados de P. aeruginosa testadas. Somente 48,4% dos isolados de P. aeruginosa eram sensiveis ao imipenem e meropenem (MIC50, 8 ƒÊg/mL). A presenca dos genes blaSPM e blaIMP, que codificam MƒÀL, foi detectada em 23,3% e 1,7% dos isolados de P. aeruginosa, respectivamente. A hiperexpressao do sistema de efluxo MexXY-OprM (60%) foi a mais frequente entre os isolados, seguida pela hiperexpressao dos sistema MexAB-OprM (31,7%) e MexCD-OprJ (18,3%). A hiperexpressao simultanea dos sistemas MexAB-OprM e MexXY-OprM foi observado em 16,7% dos isolados de P. aeruginosa. Nenhum dos isolados avaliados apresentaram hiperexpressao do sistema MexEF-OprN. A ƒÀ-lactamase AmpC estava hiperexpressa em 90% dos isolados clinicos avaliados, enquanto, a reducao da expressao de OprD foi observada em 35% das P. aeruginosa testadas e em 50% daquelas que apresentaram resistencia aos carbapenens. Conclusao: Esse estudo sugere que a hiperexpressao dos sistemas de efluxo em P. aeruginosa, esta associada a outros mecanismos de resistencia, como a hiperexpressao de AmpC e producao de MƒÀL, e contribui efetivamente para o fenotipo de resistencia a multiplos antimicrobianos em amostras clinicas de P. aeruginosa. / Multidrug efflux pumps have become increasingly recognized as a major component of resistance among P. aeruginosa. This study investigated the expression level of efflux systems among clinical isolates of P. aeruginosa. Sixty P. aeruginosa isolates were collected from patients with bloodstream infections hospitalized at a Brazilian teaching hospital between July and December 2005. Antimicrobial susceptibility profile was determined by CLSI agar dilution. Genetic relatedness among P. aeruginosa isolates was accessed by PFGE. Transcription levels of four efflux pumps (mexB, mexD, mexF, mexY), oprD and ampC were measured by real time PCR and compared to those of P. aeruginosa ATCC 27853. Detection of acquired metallo-â-lactamases (MâL) was carried out by PCR. Aztreonan (MIC50, 8 ìg/mL; 65% susceptible) exhibited the highest in vitro activity against P. aeruginosa. Only 48.4% of the P. aeruginosa strains were susceptible to imipenem (MIC50, 8 ìg/mL) and meropenem (MIC50, 8 ìg/mL). The MâL genes blaSPM and blaIMP were detected in 23.3% and 1.7% P. aeruginosa isolates, respectively. The overexpression of MexXY-OprM (60%) system was the most frequently detected followed by those of MexAB-OprM (31.7%) and MexCD-OprJ (18.3%) systems. Overexpression of both MexAB-OprM and MexXY-OprM efflux systems was observed in 16.7% of P. aeruginosa isolates. None of the strains overexpressed MexEF-OprN. Hyperexpression of AmpC beta-lactamase was observed in 90% of P. aeruginosa. In contrast, a decrease in the OprD expression was observed in 35% of P. aeruginosa tested and in 50% of the carbapenem-resistant P. aeruginosa isolates. This study shows that the overexpression of efflux systems coupled with AmpC and MâL production effectively contributes to the multi-drug resistant phenotype exhibited by P. aeruginosa clinical strains. / FAPESP: 2006/06171-8 / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

NASCIMENTO, Patrícia Georgina Garcia do. Obtenção de derivados do ácido litocólico e suas atividades antimicrobianas. 2012. 117 f. Dissertação (Mestrado em química)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2012. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-06-03T18:17:55Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_pggnascimento.pdf: 5445392 bytes, checksum: 57f80974741d6dccc7b7577bd1931146 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-07-20T20:41:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_pggnascimento.pdf: 5445392 bytes, checksum: 57f80974741d6dccc7b7577bd1931146 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-20T20:41:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_pggnascimento.pdf: 5445392 bytes, checksum: 57f80974741d6dccc7b7577bd1931146 (MD5) Previous issue date: 2012 / This paper describes obtaining eight lithocholic acid derivatives, as well as inhibitory activity. Interest in the use of lithocholic acid as starting material for the preparation of derivatives arose because of it being widely studied in order to discover new biological activities and such studies have shown good results. In this work it was used for the synthesis of a series of derivatives with modifications at the C-3 and/or C-24 of the steroid skeleton. The series was prepared using simple chemical and showed good yields. Aiming to investigate the antibacterial activity of the same and its derivatives, aiming to structure-activity relationships, tests were performed with bacteria Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus and Pseudomonas aeruginosa, try some of them presented significant results. And lithocholic acid derivatives were characterized by spectroscopic IR, 1H NMR, 13C-BB NMR and 13C-DEPT NMR and mass spectrometry as well as comparison with data in the literature and described constitute the body of the dissertation. / Esse trabalho descreve a obtenção de oito derivados do ácido litocólico, bem como, suas atividades antimicrobianas. O interesse pela utilização do ácido litocólico como material de partida na preparação de derivados surgiu pelo fato do mesmo sendo bastante estudado com o objetivo de descobrir novas atividades biológicas e tais estudos terem apresentado bons resultados. Nesse trabalho, o ácido litocólico foi submetido a modificações moleculares nas posições C-3 e/ou C-24 do esqueleto esteroidal. A série foi preparada utilizando química convencional e apresentando bons rendimentos. Com o objetivo de investigar a atividade antimicrobiana dos compostos, foram realizados testes com as bactérias Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus e Pseudomonas aeruginosa, tento alguns deles apresentado resultados bastante significativos. O ácido litocólico e seus derivados foram caracterizados por métodos espectroscópicos de IV, RMN 1H, RMN 13C-BB e RMN 13C-DEPT e por espectrometria de massa, bem como comparação com dados descritos na literatura.

A presença de bactérias resistentes a antimicrobianos vem sendo monitorada de forma cada vez mais frequente em produtos de origem animal, com o intuito de evitar a disseminação dessas cepas para humanos via cadeia alimentar. O gênero Enterococcus encontra-se entre os patógenos mais relevantes nas infecções hospitalares em humanos e tem capacidade de adquirir resistência a diversos antimicrobianos. No presente estudo foi avaliada a frequência de isolamento e a resistência antimicrobiana de Enterococcus sp. de carcaças suínas na etapa de pré-resfriamento, em três matadouros-frigoríficos localizados no estado de Santa Catariana. Dois ciclos de amostragem foram conduzidos em cada estabelecimento resultando em 252 suabes de carcaças. A partir dessas amostras, foram obtidos 240 isolados de Enterococcus sp. identificados por testes fenotípicos e pela detecção do gene tuf e ddlE.faecalis pela técnica de reação em cadeia da polimerase. Todos os isolados de Enterococcus sp. foram testados quanto à resistência a antimicrobianos pela técnica de difusão em ágar. A espécie mais prevalente foi Enterococcus faecalis (E. faecalis), presente em 90,83% das amostras de carcaça. Foi observada resistência à tetraciclina (42,5%), eritromicina (26,7%), estreptomicina (20,4%), ciprofloxacina (13,8%), cloranfenicol (12,1%) e a gentamicina (10,4%). Não foram encontrados isolados resistentes à vancomicina, teicoplanina e ampicilina. Os isolados que apresentaram perfil intermediário e resistente aos antimicrobianos ciprofloxacina e eritromicina, no teste de disco-difusão, foram submetidos à determinação da concentração inibitória mínima (CIM). Em relação à ciprofloxacina, das 25 cepas com resistência intermediária no teste de disco-difusão, todas apresentaram CIM na concentração limítrofe (1,56 μg/mL), entre a sensibilidade e resistência, enquanto nas 74 cepas intermediárias frente à eritromicina, apenas duas apresentaram valor limítrofe máximo (4 μg/mL). Conclui-se que o gênero Enterococcus está presente em carcaças suínas na etapa de pré-resfriamento, sendo a espécie E. faecalis a mais encontrada. Apesar de existirem isolados resistentes a antimicrobianos usados na terapêutica humana, os resultados indicam que isolados resistentes a vancomicina, teicoplanina e ampicilina não estão presentes em carcaças suínas nos abatedouros estudados. / The presence of antimicrobial-resistant bacteria has been increasingly monitored in animal products in order to prevent the spread of these strains to humans through the food chain. The genus Enterococcus is among the most important pathogens in hospital infections in humans and is able to acquire resistance to several antibiotics. In the current study, the frequency of isolation and antimicrobial resistance of Enterococcus sp. from swine carcasses at the pre-chill stage in three slaughterhouses located in the state of Santa Catarina were evaluated. Two sampling cycles were performed at each establishment and 252 carcass swabs were taken. A total of 240 strains of Enterococcus sp. were identified by phenotypic testing and by PCR detection of tuf and ddI genes. All Enterococcus isolates were tested for resistance against antimicrobials by the agar diffusion technique. The most prevalent species was Enterococcus faecalis (E. faecalis), present in 90.83% of the carcass samples. Tetracycline (42.5%), erythromycin (26.7%), streptomycin (20.4%), ciprofloxacin (13.8%), chloramphenicol (12.1%) and gentamicin (10.4%) resistance was observed. No isolates were found resistant to vancomycin, teicoplanin and ampicillin. The isolates with intermediate and resistant profile to antimicrobials ciprofloxacin and erythromycin were further subjected to minimum inhibitory concentration (MIC) determination. Regarding ciprofloxacin, all the 25 strains with intermediary resistance profile in the disk diffusion test presented MIC at the limit concentration (1.56μg/mL) between sensitivity and resistance, while from 74 intermediary resistant strains against erythromycin only two presented MIC at the limit concentration (4 μg/mL). It is concluded that the genus Enterococcus is present in swine carcasses during the pre-chill stage and the species E. faecalis is the most prevalent. Although resistance against antimicrobials used for the human treatment has been found, the results indicate that isolates resistant to vancomycin, teicoplanin and ampicillin are not present on pig carcasses from those abattoirs.