Foram estudadas 162 amostras de P. aeruginosa isoladas de pacientes atendidos em quatro hospitais localizados na cidade de Niterói, Rio de Janeiro; dois públicos: o Hospital Azevedo Lima e o Hospital Universitário Antônio Pedro, e dois privados, o Hospital Santa Cruz e a Casa de Saúde e Maternidade Santa Marta, no período de julho de 2002 até dezembro de 2003. As amostras foram isoladas a partir de diferentes espécimens clínicos: secreções (52,5%), urina (22,8%), sangue (8,6), ponta de cateter (6,2%), líquidos de punção (1,9%) e outras fontes (8%). Todas as amostras foram sensíveis a polimixina e mais da metade resistentes a cefotaxima (69,1%), ceftriaxona (65,5%), ciprofloxacina (54,9%), gentamicina (51,9%) e ticarcilina-ácido clavulânico (50,6%) e em menor proporção a imipenem (35,8 %), cefepima (33%), amicacina (32,1%), ceftazidima (30,9%), aztreonam (27,8%) e piperacilina-tazobactam (27,8%). A produção de metalo â-lactamase (M-bla) foi detectada em 9 (5,6%) amostras isoladas em três dos quatro hospitais avaliados. O estudo da diversidade genética foi efetuado analisando os perfis de fragmentação do DNA cromossômico, após tratamento com a enzima SpeI e eletroforese em campo pulsado (PFGE). De 19 amostras selecionadas, as 10 não produtoras de M-bla que apresentaram diferentes graus de multirresistência aos antimicrobianos, revelaram grande diversidade genética. Entretanto, as 9 amostras produtoras de M-bla, mostraram pertencer a um único clone, o mesmo detectado em amostras de P. aeruginosa com a mesma característica de resistência, isoladas nas cidades de Rio de Janeiro e São Paulo, sugerindo a disseminação interhospitalar do microorganismo, tanto no âmbito local como regional. / A total of 162 P. aeruginosa strains was studied. They were isolated from patients attended in four hospitals located in Niterói city, Rio de Janeiro state, two of them supported by public health system: Hospital Azevedo Lima and Hospital Universitário Antônio Pedro, and the others from privative service: Hospital Santa Cruz and Casa de Saúde Santa Marta, between July 2002 and December 2003. The isolates were recovered from different clinical sources, including: urine (22.8%); secretions (52.5%); catheter tips (6.2%); blood specimens (8.6%); fluids (1.9%) and others (8%). All strains were susceptible to polimixin B. More than half of them showed resistance to cefotaxime (69.1%); ceftriaxone (65.5%); ciprofloxacin (54.9%); gentamicin (51.9%) and ticarcillin-clavulanic acid (50.6%), and in lower percentages to imipenem (35.8%); cefepime (33%); amikacin (32.1%); ceftazidime (30.9%); aztreonam (27.8%)and piperacillin-tazobactam (27.8%). Metallo-â-lactamase (M-âla) production was detected in 9 (5.6%) strains recovered from three of the four hospitals evaluated. The genetic diversity study was performed by chromosomal DNA fragmentation, after SpeI enzymatic treatment using Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE). Among 19 strains selected from the study, 10 non M-âla producer multidrug-resistant strains showed a large variety of genetics profiles. However, the 9 M-âla producers were allocated in a single clonal group, the same genetic profile detected among P. aeruginosa M-âla producing strains, recovered in São Paulo city and Rio de Janeiro city, suggesting interhospital spread of strains at a local and regional level

Orientador: Ary Fernandes Junior / Banca: Vera Lucia Mores Rall / Banca: Carlos Henrique Camargo / Banca: Ernani Porto / Banca: José Paes de Almeida Nogueira Pinto / Resumo: A carne de frango e seus subprodutos têm aumentado a sua popularidade nos últimos anos devido ao desenvolvimento do setor e a mudanças significativas no padrão de consumo de alimentos. A linguiça fresca é provavelmente uma das formas mais antigas de processamento de carnes, no entanto, é um produto altamente perecível que necessita de agentes que contribuam para a extensão da sua vida de prateleira. As pesquisas com os produtos naturais de origem vegetal, sobretudo as especiarias, tem revelado que além da contribuição para o sabor, estes produtos possuem atividades antimicrobianas e antioxidantes que poderiam ser exploradas pela indústria de alimentos. O objetivo do trabalho foi avaliar o uso de derivados vegetais como possível aditivo em linguiça de frango. Para tanto, o estudo foi dividido em três etapas. Na primeira foi caracterizada a ação antibacteriana in vitro (metodologia da microdiluição em meio de Mueller Hinton Caldo-MHC e determinação da concentração inibitória mínima-CIM) de doze derivados vegetais na forma de óleos essenciais (OEs) e extratos etanólicos (Eet) obtidos de seis plantas condimentares (louro-Laurus nobilis, manjericão- Ocimum basilicum, manjerona-Origanum majorana, orégano-Origanum vulgare, alecrim -Rosmarinus officinalis e tomilho-Tymus vulgaris) frente a 9 cepas bacterianas (Salmonella Enteritidis-ATCC 13076, Escherichia coli O157:H7-ATCC 43895, Pseudomonas aeruginosa -ATCC 27853, Listeria monocytogenes-ATCC 15313, Enterococcus faecalis-ATCC 10100, Aeromonas hydrphila-ATCC 7966, Lactobacillus rhamnosus-ATCC 9595 e Staphylococcus xylosus-ATCC 29979). Todos os derivados vegetais apresentaram ação antibacteriana, entretanto, a atividade dos Eet foi inferior a dos OEs, mesmo quando da mesma planta. T. vulgaris e O. vulgare apresentaram as melhores atividades verificadas pelos valores de CIM de 1,5 e 1,6 mg/mL para OEs e de 2,9 e 4,2 mg/mL para Eet, respectivamente. Os óleos dessas ... / Abstract: The chicken meat and their subproducts have increased its popularity in recent years due to the development of the sector and the significant changes in the pattern of food consumption. Fresh sausage is probably one of the oldest forms of meat processing, however, is a highly perishable product that requires agents to contribute to the extension of shelf life. Research with natural products of plant origin, especially the spices, has revealed that beyond of the contribution to flavor; these products have antimicrobial and antioxidant activities which could be explored by the food industry. The aim of this study was to evaluate the use of plant derivatives as a possible additive in chicken sausage. Thus, the study was divided into three phases. The first was characterized in vitro antibacterial action (microdilution methodology in Mueller Hinton Broth medium-MHC and determination of minimum inhibitory concentration-MIC) twelve plant derived in the form of essential oils (EOs) and ethanol extracts (Eet) obtained from six plants condiments (laurel-Laurus nobilis, basil- Ocimum basilicum, marjoram-Origanum majorana, oregano-Origanum vulgare, rosemary -Rosmarinus officinalis e thyme-Tymus vulgaris) against nine bacterial strains (Salmonella Enteritidis-ATCC 13076, Escherichia coli O157:H7-ATCC 43895, Pseudomonas aeruginosa -ATCC 27853, Listeria monocytogenes-ATCC 15313, Enterococcus faecalis-ATCC 10100, Aeromonas hydrphila-ATCC 7966, Lactobacillus rhamnosus-ATCC 9595 e Staphylococcus xylosus-ATCC 29979). All plant derivatives showed antibacterial action, however, the activity of Eet was less than the EOs, even when the same plant. T. vulgaris and O. vulgare showed the best activities verified by the MIC values of 1.5 and 1.6 mg/ml for EOs and 2.9 and 4.2 mg/ml for Eet, respectively. The oils of these plants showed thymol as major compound and the extracts were positive for the presence of flavonoids, phenols, triterpenes and steroids. In a ... / Doutor

Orientador: Juliane Maria Guerreiro-Tanomaru / Resumo: Nanopartículas de prata (NPsAg) apresentam ação bactericida e biocompatibilidade, mostrando potencial para aplicações na Odontologia. Farnesol (FAR) é um álcool encontrado em óleos essencias de frutas cítricas e apresenta atividade antibacteriana/antibiofilme. O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana, antibiofilme e a citotoxicidade de soluções de NPsAg e FAR, para serem utilizadas na desinfecção de canais radiculares. O estudo foi dividido em duas publicações. Na Publicação 1, a atividade antimicrobiana foi avaliada sobre Enterococcus faecalis, Candida albicans ou Pseudomonas aeruginosa, por meio da determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e microbicida mínima (CMM) pelo método de microdiluição e coloração com resazurina. A avaliação da atividade sobre a biomassa dos biofilmes foi realizada por meio do ensaio de cristal violeta. A capacidade anti-adesão de biofilme foi avaliada em blocos de dentina radicular bovina após tratamento da dentina com as soluções por 3 min. Foram realizadas análises em microscopia eletrônica de varredura (MEV) e contagem de UFC mL-1 log 10. Os dados foram submetidos à análise estatística (α=0,05). No teste antibacteriano sobre células planctônicas de E. faecalis, os valores de CIM/CMM das soluções de NPsAg e FAR foram de 42,5/50μM e 0,85/1,0%, respectivamente. Para C. albicans, os valores de CIM/CMM de NPsAg e FAR foram de 27,5/37,5μM e 1,75/2,5%, respectivamente. Para P. aeruginosa, os valores de CIM/CMM de NPsAg... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Silver nanoparticles (AgNPs) have potential for applications in dentistry due to bactericidal action and biocompatibility. Farnesol (FAR) is an alcohol found in essential oils of citrus fruits and it has antibacterial/antibiofilm activity. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial, antibiofilm activities and the cytotoxicity of AgNPs and FAR solutions used as root canal disinfectant. The study was divided into two publications. In Publication 1, antimicrobial activity was evaluated against Enterococcus faecalis, Candida albicans or Pseudomonas aeruginosa, by determining the minimum inhibitory concentration (MIC) and the minimum microbicidal concentration (MMC) by microdilution method and rezasurin staining. The anti-biofilm activity was performed by crystal violet assay. The anti-biofilm adhesion ability was evaluated using bovine root dentine blocks after treating them with tested solutions for 3 min. Scanning electron microscopy (SEM) analysis and CFU mL-1 log 10 counting were performed. Data were statistically analyzed (α=0.05). The antibacterial test against planktonic cells of E. faecalis showed MIC/MMC values of 42.5/50μM and 0.85/1.0% for AgNPs and FAR, respectively. The values of MIC/MMC of AgNPs and FAR for C. albicans were 27.5/37.5μM and 1.75/2.5% and for P. aeruginosa were 32.5/32.5μM and 2.5/2.75%, respectively. The anti-adhesion biofilm capacity assay showed smaller amount of biofilm adhered to the substrate treated with AgNPs and FAR when compared... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Luiz Augusto do Amaral / Coorientador: Ana Maria Soares Pereira / Banca: Karina Paes Bürger / Banca: Fernando Antônio de Ávila / Banca: Iucif Abrão Nascif Junior / Banca: Elisabeth Loshchagin Pizzolitto / Resumo: O presente estudo teve como objetivo avaliar in vitro o potencial de atividade antimicrobiana de extratos vegetais e substâncias isoladas de Croton antisyphiliticus e C. urucurana, espécies nativas do Cerrado, sobre estirpes de Staphylococcus aureus, isoladas de leite de vacas com mastite. Os microrganismos foram cultivados na forma livre e em biofilme. Os extratos foram avaliados quanto à capacidade de inibição da formação do biofilme e erradicação do mesmo. Foram utilizados os antibióticos sulfato de gentamicina como comparativo e sulfato de vancomicina como controle negativo. As plantas foram coletadas na época seca e chuvosa. A quantificação da atividade antimicrobiana foi realizada por meio do cristal violeta e da contagem de unidades formadoras de colônia. Os resultados obtidos demonstram que ambas espécies vegetais inibiram a formação do biofilme de S. aureus. O extrato bruto e frações de C. antisyphiliticus apresentaram atividade antimicrobiana semelhante à gentamicina, enquanto os compostos vegetais com características apolares, oriundos de C. urucurana foram significativamente mais ativos contra S. aureus em biofilme que o antibiótico vancomicina, reduzindo cerca de 5 logs da população bacteriana. Nas condições ensaiadas, não houve influencia sazonal na atividade antimicrobiana dos extratos. Entre as duas espécies de Croton avaliadas, conclui-se que C. urucurana foi a espécie mais promissora quanto a atividade antimicrobiana frente estirpes de S. aureus, causadoras de mastite bovina / Abstract: The present study aimed to evaluate the potential antimicrobial activity of plant extracts and substances isolated from Croton antisyphiliticus and C. urucurana, species in the Cerrado, against strains of Staphylococcus aureus isolated from milk of cows with mastitis. The microorganisms were grown in free form and in biofilm. The extracts were evaluated for their ability to inhibit biofilm formation and eradication. We used the antibiotic gentamicin as a comparison and vancomycin as negative control. The plants were collected in the dry and rainy season. Quantification of antimicrobial activity was performed using the crystal violet and count of colony forming units. The results show that both species inhibited the biofilm formation of S. aureus. The crude extract and fractions of C. antisyphiliticus presented antimicrobial activity similar to gentamicin, while the plant compounds with non polar characteristics, arising from C. urucurana were significantly more active in cells in biofilms of S. aureus that the antibiotic vancomycin, reducing around 5 logs of the bacterial population. In the conditions tested, there was no seasonal influence on antimicrobial activity of the extracts. Between the two species of Croton evaluated, between the two Croton species evaluated, it is concluded that C. urucurana was the most promising antimicrobial activity against strains of S. aureus causing bovine mastitis / Doutor

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2015-11-06T14:33:38Z No. of bitstreams: 1 GabrielaMedeirosAraujo_DISSERT.pdf: 6196726 bytes, checksum: bb286b387ac4454fac5063e624581413 (MD5) / Approved for entry into archive by Elisangela Moura (lilaalves@gmail.com) on 2015-11-06T14:49:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 GabrielaMedeirosAraujo_DISSERT.pdf: 6196726 bytes, checksum: bb286b387ac4454fac5063e624581413 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-06T14:49:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GabrielaMedeirosAraujo_DISSERT.pdf: 6196726 bytes, checksum: bb286b387ac4454fac5063e624581413 (MD5) Previous issue date: 2014-03-26 / A Helicobacter pylori ? uma bact?ria espiralada, Gram negativa, m?vel emicroaer?bia reconhecida como uma das principais causas de gastrite, ?lcera, c?ncerg?strico e do linfoma de c?lulas B de baixo grau de tecido linfoide associado ? mucosa(MALT), se constituindo um microrganismo em destaque na ?rea da microbiologiam?dica. Sua import?ncia se deve ? dificuldade de tratamento, devido ? necessidade douso concomitante de v?rios medicamentos al?m do crescente surgimento de cepasresistentes e multirresistentes aos antibi?ticos empregados na cl?nica. Com o intuito deampliar a gama de op??es terap?uticas eficazes e seguras, ultimamente, vem sendointensificados estudos qu?micos sobre plantas medicinais, seja atrav?s da obten??o deextratos, fra??es, compostos isolados ou ?leos essenciais que apresentem algum tipode atividade biol?gica. Diante do exposto, objetivouseavaliar a atividade inibit?ria deextratos vegetais oriundos do Syzygium cumini e Encholirium spectabile, plantas comhist?rico de a??o anti?lceras, e do ?leo essencial obtido do S. cumini frente a H. pylori(ATCC 43504) utilizando a t?cnica de difus?o em disco, para avalia??o qualitativa, e adetermina??o da concentra??o inibit?ria m?nima (CIM), atrav?s da t?cnica demicrodilui??o em caldo, para an?lise quantitativa. Tamb?m foi avaliada a toxicidade invitro dos extratos a partir de ensaio hemol?tico, utilizando eritr?citos de carneiro, e emcultura de c?lulas HeLa e VERO, pelo ensaio colorim?trico de viabilidade celularutilizando o MTT. Os extratos de ambos vegetais empregados nos ensaiosantimicrobianos n?o inibiram o crescimento bacteriano, em contrapartida o ?leoessencial do S. cumini (SCFO) mostrouseeficaz, exibindo CIM de 205 ?g/mL (dilui??oequivalente a 0,024% do ?leo bruto). Quanto ao ensaio hemol?tico, o mesmo ?leo aindaexibiu toxicidade intermedi?ria ao promover 25% de hem?lise a 1000 ?g/mL. Em rela??o? citotoxicidade em cultura de c?lulas, o SCFO, a 260 ?g/mL, comprometeu a viabilidadecelular de cerca de 80% das c?lulas HeLa e 50% das c?lulas VERO. Portanto o ?leoobtido das folhas do S. cumini apresenta potencial antibacteriano frente a H. pylori epotencial citot?xico, sugerindoseuma fonte de novas mol?culas candidatas a f?rmacos,desde que novas etapas de toxicidade in vitro e in vivo assim como caracteriza??oqu?mica sejam avaliadas. Al?m disso, o desenvolvimento de um sistema de libera??o def?rmacos pode resultar em um prot?tipo a ser utilizado em testes pr?cl?nicos. / Helicobacter pylori is a spiral, Gram negative, mobile, and microaerophilic bacteria recognized as a major cause of gastritis, ulcer, gastric cancer, and gastric low grade, B cell, mucosa ? associated lymphoid tissue (MALT) lymphoma, constituting an important microorganism in medical microbiology. Its importance comes from the difficulty of treatment because the requirement of multiple drugs use, besides the increasing emergence of resistant and multiresistant strains to antibiotics used in th e clinic. In order to expand safe and effective therapeutic options , chemical studies on medicinal plants by obtaining extracts, fractions, isolated compounds or essential oils with some biological activity has been intensified . Given the above, the objective was to evaluate the inhi bitory activity of organic extracts derived from Syzygium cumini and Encholirium spectabile, with antiulcer history, and the essential oil, obtained from S. cumini, against H. pylori (ATCC 43504) by the disk diffusion method, for qualitative evaluation, an d determination of minimum inhibitory concentration (MIC) using the broth microdilution method, for quantitative analysis. Also was evaluated the extracts in vitro toxicity by a hemolytic assay using sheep red blood cells, and VERO and HeLa cells using the MTT assay to analyze cell viability. The extracts of both plant used in antimicrobial assays did not inhibit bacterial growth, however the essential oil of S. cumini (SCFO) proved effective, showing MIC value of 205 ?g/mL (0.024 % dilution of the original oil). In the hemolytic assay, the same oil shows moderate toxicity, by promote 25% hemolysis at 1000 ?g/mL. Regarding the cytotoxicity in cell culture, the SCFO, at 260 ?g/mL, affected the cell viability around 80% of HeLa and 50% of VERO cells. So the oi l obtained from S. cumini leaves has antimicrobial activity against H. pylori and cytotoxicity potential, suggesting a source of new molecule drug candidates, since new stages of toxicity in vitro and in vivo, as well, chemical characterization be evaluate d. Moreover, the development of a prospective drug delivery system can result in a prototype to be used in preclinical tests.

O presente trabalho teve como objetivo avaliar a atividade antimicrobiana dos materiais reparadores de uso endodôntico MTA/Bio Angelus, cimento Portland branco, MTA Angelus branco e MTA ProRoot branco sobre os microorganismos Enterococcus faecalis, Escherichia coli e Staphylococcus aureus pelos os testes de difusão em ágar e de contato direto. Os dados experimentais foram obtidos através da mensuração do halo de inibição formado e pela contagem de unidades formadoras de colônia, respectivamente. Para análise dos dados empregaram-se os testes estatísticos de Análise de Variância (ANOVA) e de Comparações Múltiplas de Tukey. De posse dos resultados, foi possível verificar que o MTA/Bio Angelus apresentou atividade antimicrobiana sobre todas as espécies bacterianas testadas no teste de difusão em ágar e no teste por contato direto, o material reparador demonstrou atividade antimicrobiana superior aos demais materiais testados e que este último teste demonstrou ser uma metodologia segura, reproduzível e confiável. / The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of repair materials of endodontic use MTA/Bio Angelus, white Portland cement, white MTA Angelus and white MTA ProRooton Enterococcus faecalis, Escherichia coli and Staphylococcus aureus by the agar diffusion test and the direct contact test. Data was retrieved by measuring the zones of inhibiton and by counting colony-forming units, respectively. Statistical analysis was performed using the ANOVA test followed by Tukey Multiple Comparisons test. The results showed that MTA/Bio Angelus presented antimicrobial activity against all bacteria in the agar diffusion test and in the direct contact test, MTA/Bio Angelus presented superior antimicrobial activity. In addition, our results suggest that the use of the direct contact test is a safe, reproducible and trustable method.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-07-04T11:53:11Z No. of bitstreams: 1 MayaraMariaBastosFranco_DISSERT.pdf: 2345421 bytes, checksum: cac97047a722e5ab5047a164b245b028 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-07-11T12:49:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MayaraMariaBastosFranco_DISSERT.pdf: 2345421 bytes, checksum: cac97047a722e5ab5047a164b245b028 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-11T12:49:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MayaraMariaBastosFranco_DISSERT.pdf: 2345421 bytes, checksum: cac97047a722e5ab5047a164b245b028 (MD5) Previous issue date: 2017-03-29 / A exist?ncia de pat?genos com alto perfil de resist?ncia, colonizando a pele e mucosas de pacientes internados, elevam o risco da ocorr?ncia de infec??es graves. Deste modo as culturas de vigil?ncia s?o importantes a fim de se identificar estes microrganismos e minimizar a sua propaga??o para outros indiv?duos. Este estudo utilizou culturas de vigil?ncia para determinar o perfil de resist?ncia presente em bact?rias isoladas de 114 pacientes internados em Unidades de Terapia Intensiva (UTIs). Utilizou-se m?todos de identifica??o fenot?pica, de sensibilidade aos antibi?ticos e testes fenot?picos de indica??o de produ??o de ?-lactamases. Das amostras de Staphylococcus spp. isoladas, 89% (98/110) apresentaram resist?ncia ? Oxacilina, 39% (52/133) das enterobact?rias eram produtoras de ?-lactamase de Espectro Estendido, 57,5% (23/40) das Pseudomanoas aeruginosa eram produtoras de ?-lactamase AmpC e 80% (30/37) dos Acinetobacter spp. eram resistentes aos carbapen?micos. Dentre as vari?veis cl?nicas estudadas, encontrou-se uma associa??o estatisticamente significativa entre o uso de carbapen?micos e a coloniza??o por bact?rias resistentes aos antibacterianos mais frequentes utilizados na rotina. Estes ?ndices elevados refletem a tend?ncia epidemiol?gica atual do crescimento das bact?rias com alto padr?o de resist?ncia, tornando-se essencial a implementa??o de medidas de vigil?ncia, isolamento e racionaliza??o do uso de antibi?ticos a fim de se minimizar a dissemina??o destes pat?genos. / The existence of pathogens with high antimicrobial resistance, colonizing the skin and mucous membranes of hospitalized patients, increases the risk of serious infections. Thus surveillance cultures are important to identify these microorganisms and minimize their propagation to other individuals. This research used surveillance cultures to determine the resistance profile existent in bacteria colonizing 114 patients admitted in Intensive Care Units (ICUs) for 7 or more days. For this purpose, manual methods of phenotypic identification, antimicrobial susceptibility and phenotypic tests for the indication of ?-lactamase? production were used. From the Staphylococcus spp. isolated, 89% (98/110) were resistant to oxacillin, 39% (52/133) of Enterobacteriaceae were producers of Extended Spectrum ?-Lactamases, 57.5% (23/40) of Pseudomonas aeruginosa were producers of AmpC ?-Lactamase and 81% (30/37) of Acinetobacter spp. were resistant to carbapenems. Among the studied clinical variables, it was found a significant statistical association between the use of carbapenems and colonization by bacteria resistant to these antibiotics. These high indexes reflect the current epidemiological tendency of high resistant bacteria growth, making essential the implementation of surveillance measures, isolation and rationalization of antibiotic use to minimize the dissemination of these pathogens.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Enterococcus faecalis (E. faecalis), conhecidamente patógeno oportunista, tem sido frequentemente associado a infecções sistêmicas graves. É também encontrado na cavidade oral, com destaque em infecção endodôntica refratária. O objetivo deste estudo foi avaliar características moleculares de E. faecalis isolados de infecção endodôntica primária no Brasil e comparar com isolados orais e não orais de pacientes do Reino Unido e do Japão, assim como E. faecalis resistentes à vancomicina. O presente estudo também investigou o relacionamento entre E. faecalis de diferentes origens (oral e não oral) e de diferentes áreas geográficas para obter uma melhor compreensão do envolvimento dos diferentes reservatórios no surgimento e propagação de clones virulentos, aqueles que possuem genes que conferem infectividade e virulência, assim como resistência aos antibióticos. Para tal, foram estudados E. faecalis isolados em infecções endodônticas no Brasil (n = 20) e orais no Reino Unido (n = 10), e em infecções não orais no Japão (n = 9). Além disso, 20 E. faecalis isolados ambientais do Hospital Universitário de Gales (Cardiff, Reino Unido), classificados como Enterococcus resistentes à vancomicina (VRE) também foram examinados. A Concentração Inibitória Mínima (CIM) dos isolados do Brasil foi obtida pelo método de diluição em agar de acordo com as recomendações do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Reação em cadeia da polimerase (inglês - PCR) foi a técnica empregada para detectar os genes de virulência e aqueles associados à resistência aos antibióticos, enquanto Reação de Amplificação Aleatória de DNA Polimórfico (inglês - RAPD-PCR) foi escolhida para a tipagem molecular. Dentre os genes de virulência examinados, o gene que codifica a gelatinase gelE foi o mais prevalente entre os isolados (77-100%). Entre isolados orais, foram detectados os genes agg de substâncias de agregação, esp de proteína de evasão imune, cylB de citolisina, genes de resistência à tetraciclina tetM e tetL e à eritromicina ermB com diferentes prevalências. Os isolados clínicos hospitalares do Japão apresentaram perfil genético similar aos isolados orais, mas com maior prevalência de ermB e cylB. Todas as amostras de VRE foram positivas para os genes gelE, esp, agg, vanA, ermB e tetM, 95% foram positivos para cylB e 17% positivo para tetL. Todas as amostras foram negativas para ermA, asa373, vanB, vanC1 e vanC2/3. RAPD-PCR revelou agrupamento de VRE em comparação com outros isolados. Neste estudo, os isolados de E. faecalis de infecções orais apresentaram genes de resistência à tetraciclina, um antimicrobiano frequentemente usado no tratamento local de infecções dentárias, abrindo um debate muito importante sobre o papel e a eficácia desta droga para infecções orais. Claramente, são necessários mais estudos nesta área principalmente em relação à expressão de fatores de virulência entre isolados endodônticos para melhor nortear as estratégias de tratamento. As pressões externas no microambiente dos canais radiculares podem ser responsáveis pela seleção de espécies mais resistentes e virulentas. Por fim, embora isolados orais apresentem genes de virulência fundamentais para a patogenicidade, estes foram detectados em menor incidência em comparação com os isolados não-orais e VRE. / Enterococcus faecalis is an opportunistic pathogen known to cause serious systemic infection. It is also encountered in the oral cavity and has been implicated in persistent root canal infection. The aim of this study was to evaluate a range of molecular characteristics of E. faecalis isolated from primary endondontic infections in Brazil and compare to isolates from oral and non-oral infections in patients from UK and Japan, as well as isolates of vancomycin resistant E. faecalis, VRE, from a hospital environment. The present study was undertaken to explore the relatedness of E. faecalis from different origins, oral and non oral, and from different geographic areas to gain a better understanding of the involvement of the different reservoirs in the emergence and spread of virulent clones, those that acquired a number of genes conferring infectivity and virulence and in addition antibiotic resistance. To do this, E. faecalis from oral infections in Brazilian (n=20) and UK patients (n=10), and non-oral infection in japanese patients (n=9) were studied. In addition, 20 environmental VRE isolates from the University Hospital of Wales (Cardiff, UK) were also examined. For braziliam isolates, antimicrobial susceptibility was ascertained by agar dilution, using the recommendations of the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). For all isolates, PCR with validated primers was used to detect genes associated with antibiotic resistance and virulence, whilst RAPD-PCR was used to fingerprint isolates. Of the virulence genes examined, gelatinase gene gelE was most prevalent amongst isolates (77-100%). In the case of oral isolates, the genes of aggregation substances agg, immune evasion protein esp, cytolysin cylB, tetracycline resistance tetM and tetL and erythromycin resistance ermB were detected with varying prevalence. Japanese hospital isolates had a similar genetic profile to oral isolates but with higher prevalence of ermB and cylB. All VRE strains were positive for gelE, esp, agg, vanA, ermB and tetM, 95% were positive for cylB and 17% positive for tetL. All isolates were negative for ermA, asa373 vanB, vanC1 and vanC2/3. RAPD-PCR revealed clustering of VRE compared with other isolates. In this study, isolates of E. faecalis from oral infections showed antibiotic resistance genes for tetracycline, an agent used in the local treatment of dental infection. This opens up a much-needed debate on the role and efficacy of this antibiotic for oral infections. Clearly, more research in this area is required particularly in relation to the possession and expression of virulence factors in the root canal environment, to better inform our management strategies. Environmental pressures in root canals may be responsible for the selection of more resistant species and the possession of virulence determinants. This knowledge is important in guiding procedures for controlling the increasing problem of antibiotic resistance amongst clinically relevant bacteria. Furthermore, whilst oral isolates had genes that could contribute to pathogenicity, these were detected at lower incidence compared with non-oral and VRE isolates.

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2989767 bytes, checksum: e5a6e33dba538e841daa3ab381de7b1e (MD5) Previous issue date: 2013-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The natural products represent a rich source of bioactive compounds and are an example of molecular diversity, with a well-known potential on the discovery and development of new drugs. Erythroxylum pulchrum, (Erythroxylaceae) is an exclusive species from the brazilian flora, distributed on the northeast and southeast regions of the country; which can be found in Paraíba in a particular area of Pico do Jabre PB . A voucher specimen is deposited at the Professor Lauro Pires Xavier (JPB) herbarium with the code 4947. On this phytochemical study the dried powder of the aerial parts was submitted to an extraction with methanol, followed by partition. The ethyl acetate fraction was submitted to a Medium Pressure Liquid Chromatography. Therefore, it was possible to identify four flavonoids: epicatechin, quercetin-3-O-α-Lrhamnoside, ombuin-3-rutinosideand ombuin-3-rutinoside-5-glucoside. The hexanic fraction was also submitted to a Medium Pressure Liquid Chromatography which led to the identification of one terpenoid - lupeol and one steroid - β- sitosterol. These substances were identified by analysis of data obtained from spectroscopic methods such as infrared, mass spectrometry and NMR of 1H and 13C, with the aid of two dimensional techniques, besides comparison with literature data. It was also evaluated the antimicrobial activity from its crude extract against bacterial strains of clinical matter by measuring the minimum inhibitory concentration for each bacterial strain tested by the microdilution assay. So, the crude extract inhibited the growth of the following bacterial strains: Bacillus subtilis CCT 0516, Escherichia coli ATCC 2536, Pseudomonas aeruginosaA TCC 8027, Pseudomonas aeruginosa ATCC 25619, Staphylococcus aureusATCC 6538, Staphylococcus aureusATCC 25925, Streptococcus sanguíneos, Streptococcus salivares, Streptococcus mutansand Streptococcus ATCC. However, the genus Staphylococcus aureus ATCC 25925 was the most sensible, but on the other hand, the species Streptococcus sanguíneos e Streptococcus salivares was the most resistant against the antimicrobial effect of the crude extract. The results obtained on this research contributed to the phytochemical and pharmacology study of Erythroxylum pulchrum and to the chemotaxonomic knowledge of the genus Erythroxylum, as well as the Erythroxylaceae family. / Os produtos naturais representam uma rica fonte de compostos biologicamente ativos e são um exemplo de diversidade molecular, com reconhecido potencial na descoberta e desenvolvimento de novos medicamentos. Erythroxylum pulchrum, (Erythroxylaceae) é exclusiva da flora brasileira, com distribuição no Nordeste e Sudeste do país, só foi encontrada na Paraíba em uma área do Pico do Jabre PB. Uma exsicata encontra-se depositada no Herbário Prof. Lauro Pires Xavier (JPB), sob o n° 4947. Neste estudo fitoquímico, as partes aéreas secas e pulverizadas foram submetidas a uma extração com metanol e em seguida, particionados. A fase acetato de etila foi submetida à cromatografia líquida de media pressão. Desta maneira, foi possível isolar quatro flavonoides: epicatequina, quercetina-3-O-α-L-raminosídeo, ombuin-3- rutinosídeo e ombuin-3-rutinosideo-5-glicosídeo. A fase hexânica também foi submetida à cromatografia líquida de media pressão, em que foi possível isolar um terpenoide lupeol e um esteróide β-sitosterol. Essas substâncias tiveram sua identificação estrutural baseada na análise de dados espectrais de IV, EM, RMN 1H e 13C, incluindo técnicas bidimensionais homonucleares e heteronucleares, além de comparação com dados da literatura. Foi avaliado também, o efeito antibacteriano do extrato metanólico bruto de Erythroxylum pulchrum frente a cepas de bactérias de importância clínica, determinando a concentração inibitória mínima do extrato metanólico para cada linhagem de bactéria testada pela técnica de microdiluição. Assim, o extrato inibiu o crescimento das linhagens bacterianas de Bacillus subtilis CCT 0516, Escherichia coli ATCC 2536, Pseudomonas aeruginosa ATCC 8027, Pseudomonas aeruginosa ATCC 25619, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus aureus ATCC 25925, Streptococcus sanguíneos, Streptococcus salivares, Streptococcus mutans e Streptococcus ATCC. No entanto, a espécie Staphylococcus aureus ATCC 25925 foi a mais sensível, e espécies as Streptococcus sanguíneos e Streptococcus salivares foram as mais resistentes á ação antibacteriana do extrato metanólico bruto. Os resultados obtidos neste trabalho contribuíram para o conhecimento fitoquímico e farmacológico de Erythroxylum pulchrum e para a o conhecimento quimiotaxonômico do gênero Erythroxylum e da família Erythroxylaceae.

O uso de antimicrobianos de forma terapêutica, preventiva e promotora de crescimento trouxe inúmeras vantagens para a avicultura mundial, entretanto a utilização excessiva dos antimicrobianos e de maneira indevida tem estimulado um aumento no número de micro-organismos resistentes. Entre eles, destaca-se o Campylobacter jejuni, bactéria frequentemente associada a enterites em humanos, sendo o frango a principal reservatório e fonte de transmissão deste patógeno para o homem. A transmissão de bactérias resistentes entre animais e seres humanos pode resultar em infecções multirresistentes e insucesso no tratamento terapêutico, sendo a exposição continua destes micro-organismos a esses medicamentos o fator mais importante na origem da resistência. Diante desse cenário, objetivou-se nesse trabalho investigar e caracterizar, através de métodos fenotípico e genotípico, a susceptibilidade antimicrobiana de 54 isolados de C. jejuni coletados em diferentes etapas do processamento da carne de frango de matadouro-frigoríficos da região do Rio Grande do Sul. Para a determinação do MIC, os isolados foram testados frente aos seguintes antimicrobianos: ácido nalidíxico, ciprofloxacina, cloranfenicol, eritromicina, gentamicina e tetraciclina. Dos 54 isolados de C. jejuni, 94,4% foram resistentes a ciprofloxacina, 83,3% ao ácido nalidíxico, 51,8% a tetraciclina e 48% a eritromicina. Todos os isolados foram sensíveis a gentamicina e ao cloranfenicol. Doze isolados foram resistentes a três classes diferentes de antibióticos, sendo assim considerados multi-resistentes. Para verificar a presença da mutação gênica da Região Determinante de Resistência à Quinolona (RDRQ) no gene gyrA, foi realizado sequenciamento gênico de 31 isolados considerados resistentes por métodos fenotípicos. Todos os isolados possuíam a mutação Tre-86-Ile na RDRQ do gene gyrA, que confere resistência às fluoroquinolonas, confirmando a predominância dessa mutação em Campylobacter spp. resistentes a esses antimicrobianos. A ocorrência do gene de resistência à tetraciclina foi verificada por PCR. Dos 28 isolados considerados resistentes por métodos fenotípicos, 42,8% possuíam o gene tet(O), que confere resistência as tetraciclinas. Os resultados mostram um alto nível de resistência antimicrobiana em C. jejuni evidenciando a necessidade da implementação de políticas de uso prudente de antimicrobianos na medicina veterinária. / The use of antimicrobials in a therapeutic, preventive and growth promoting way has brought numerous advantages to the world poultry industry; however, the excessive and undue use of antimicrobials has stimulated an increase in the number of resistant microorganisms. Among them, we highlight Campylobacter jejuni, a bacterium frequently associated with enteritis in humans, with chicken being the main reservoir and source of transmission of this pathogen to man. The transmission of resistant bacteria between animals and humans can result in multi resistant infections and failure in therapeutic treatment, and the continued exposure of these microorganisms to these drugs is the most important factor in the source of resistance. Therefore, the aim of this study was to investigate and characterize, through phenotypic and genotypic methods, the antimicrobial susceptibility of 54 C. jejuni isolates collected at different stages of the processing of chicken meat from slaughterhouse in Rio Grande do Sul. For MIC determination, strains were tested against the following antimicrobials: nalidixic acid, ciprofloxacin, chloramphenicol, erythromycin, gentamicin and tetracycline. Of the 54 isolates of C. jejuni, 94.4% were resistant to ciprofloxacin, 83.3% to nalidixic acid, 51.8% to tetracycline and 48% to erythromycin. All isolates were sensitive to gentamicin and chloramphenicol. Twelve strains were resistant to three different classes of antibiotics, thus being considered multi resistant. To verify the presence of the gene mutation of the Quinolone Resistance Determinant Region (QRDR) in the gene gyrA, gene sequencing of 31 strains considered resistant by phenotypic methods was performed. All strains had the Tre-86-Ile mutation in the QRDR of the gyrA gene, which confers resistance to fluoroquinolones, confirming the predominance of this mutation in Campylobacter spp. resistant to these antimicrobials. The occurrence of tetracycline resistance gene was verified by PCR. Of the 28 strains considered resistant by phenotypic methods, 42.8% had the tet(O) gene. The results show a high level of antimicrobial resistance in C. jejuni that evidences the need for implementation of policies in the prudent use of antimicrobials in veterinary medicine.