Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-11Bitstream added on 2014-06-13T20:16:24Z : No. of bitstreams: 1 roncatti_ftlb_me_araca.pdf: 389281 bytes, checksum: a97475a27c32aac594bae9073a20134e (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Morte celular programada (MCP) ou apoptose é um fenômeno correspondente a resposta do hospedeiro a uma infecção viral, envolvida na morte e/ou sobrevivência da célula infectada. O vírus da cinomose, canine distemper virus (CDV) é capaz de induzir a apoptose em células linfoides circulantes, tecidos linfóides e cerebelo de cães naturalmente infectados. O CDV também afeta as células Vero e linhagens de células de tumor cervical modulando várias etapas da MCP. Além disso, a fase de imunossupressão, estabelecida a partir da infecção pelo CDV, nem sempre está associada à detecção de partículas virais nas células infectadas. No presente estudo, células mononucleares de sangue periférico de cães (CMSP) foram coletadas, cultivadas e infectadas com a estirpe vacinal de CDV (Onderstepoort) e após 24 h da infecção os eventos iniciais da apoptose foram evidenciados pela marcação e quantificação das proteínas anexina v™ e ApoTrace™. A expressão do RNA mensageiro relacionado ao gene Bax, BCl-2, caspase-3, 8 e 9 e survivin foi realizada em culturas de CMPC infectadas e não infectadas após 24h pela reação de cadeia de polimerase em tempo real. A infecção viral foi responsável pela perda da viabilidade CMPC com expressão da anexina™ V FITC e Apo-Trace ™ FITC em mais de 80% das células infectadas em comparação ao grupo controle (p < 0,001) após 24 h. Os valores elevados da anexina™ V FITC e Apo-Trace ™ FITC encontrados estão em contraste com a maior expressão do mRNA do survivin e da BCl-2, considerados marcadores anti-apoptotic (p < 0,0002). Além disso, Bax, caspase 3, 8 e 9 foram expressos na mesma proporção nas CMPC infectado e não infectado, sem diferenças entre elas (p < 0,005). Em síntese, as células infectadas pelo CDV aumentaram a expressão de survivin e transcrição de gene BCL-2, um mediador de... / Programmed cell death or apoptosis is a central axis of the host response to virus infection involved in cell survival and death. In this respect, several responses are developed by host cells that may control virus replication and infection. On the other hand, viruses have developed strategies to counteract host responses. Canine distemper virus (CDV) has been described to induce apoptosis in lymphoid tissues, lymphoid cells and cerebellum of naturally infected dogs. It has been also described affecting Vero cells and cervical tumor derived cells line by modulating programmed cell death pathways. In addition, the immunosuppression stage established from CDV infection is not always associated to virus detection in damaged cells. Examining the host response at early stages of immunosuppression, especially the expression of activators and/or inhibitors of apoptosis processes can provide important understanding of how the immune responses to CDV are orchestrated. For this purpose, canine peripheral blood mononuclear cells (PBMC) collected from healthy dogs were cultured and infected by CDV vaccine strain (Onderstepoort) and after 24 h post-infection (p.i.) early events of apoptosis were detected by search for annexin V™ and ApoTrace™ markers. The expression of mRNA of Bax, BCl-2, caspase-3, 8 and 9 and also survivin genes was performed in infected and uninfected canine PBMC at 24 h post- infection by real time polymerase chain reaction. The vaccine strain induced loss of PBMC viability with expression of annexin™ V FITC and Apo-Trace™ FITC in more than 80% of infected cells in comparison to control group (p<0.001) at 24h post-infection. The initial of early apoptosis after 24h post- infection is in contrast with higher expression of mRNA of surviving and BCl-2, two major anti-apoptotic proteins (p < 0.0002...(Complete abstract click eletronic acces below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-01Bitstream added on 2014-06-13T19:36:19Z : No. of bitstreams: 1 moreira_prr_me_jabo.pdf: 1336720 bytes, checksum: 2ab7c9d2c42381d067096d3b12f3a6fc (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A linfadenomegalia generalizada é um aspecto da Leishmaniose Visceral Canina (LVC), mas existem poucos estudos enfocando alterações no linfonodo. O objetivo deste estudo foi analisar os linfonodos de cães com LVC, considerando a densidade de células apoptóticas. Utilizou-se 32 cães naturalmente infectados, de área endêmica para LVC, classificados nos grupos sintomático (S), assintomático (A) e oligossintomático (O). Os linfonodos foram colhidos para análise histopatológica. A avaliação da carga parasitária e porcentagem de apoptose foi feita pelo método de imunoistoquímica. Na avaliação histopatológica, no infiltrado dos linfonodos dos grupos O e S predominaram macrófagos e plasmócitos, envolvendo todas as regiões do linfonodo e causando distorção deste órgão pela presença de granulomas atípicos associados à atrofia linfóide nos casos crônicos. A carga parasitária e a densidade de células apoptóticas foram maiores nos cães sintomáticos, podendo estar associado à causa de atrofia linfóide, deixando-os mais susceptíveis a LVC. Os linfonodos subescapular e poplíteo foram os que apresentaram maior reatividade, porém a atrofia linfóide foi mais evidente neste último. Conclui-se que independente do quadro clínico, a resposta predominante foi granulomatosa e de plasmócitos. A associação entre a apoptose e a carga parasitária não foi significativa (P<0,05), mas parece ter importância biológica, já que cães (grupo S) com a maior carga parasitária, também tiveram o maior número de células apoptóticas, sugerindo um mecanismo de evasão imune do parasito, favorecendo sua sobrevivência e multiplicação no hospedeiro. / The generalized lymphadenopathy is an aspect of Canine Visceral Leishmaniasis (CVL), but there are few studies focusing on changes in the lymph node. The aim of this study was to examine the lymph nodes of dogs with CVL, considering the density of apoptotic cells. We used 32 dogs naturally infected in an endemic area for CVL, classified in groups symptomatic (S), asymptomatic (A) and oligosymptomatic (O). The lymph nodes were collected for histopathological analysis. The evaluation of parasite load and percentage of apoptosis was performed by immunohistochemistry. Histopathology, macrophages and plasma cells predominated in the infiltrate of the lymph nodes of groups O and S, involving all regions of the lymph node and forming granulomas associated with lymphoid atrophy in chronic cases. The parasite load and the density of apoptotic cells were higher in symptomatic dogs, which may be linked to causing lymphoid atrophy, leaving the dog more susceptible to LVC. The subscapular and popliteal lymph nodes were those with higher reactivity, but the lymphoid atrophy was most evident in the popliteal lymph node. It follows that regardless of the clinical picture, the predominant response was granulomatous and plasma cells. The association between apoptosis and the parasite load was not significant (P <0.05), but seems to have biological importance, since it was observed that dogs (group S) with the highest parasite load, also had the highest number of apoptotic cells, suggesting a mechanism for immune evasion of the parasite, promoting their survival and multiplication in the host.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-28Bitstream added on 2014-06-13T20:29:32Z : No. of bitstreams: 1 brandt_jz_me_botib.pdf: 1613115 bytes, checksum: 288debdd54eae1f42b00457d3bf95f1e (MD5) / Sabe-se que fatores ambientais e de estilo de vida, tais como a dieta, são capazes de induzir significativas mudanças na concentração e no metabolismo dos hormônios esteroides, o que pode contribuir para o desenvolvimento de doenças prostáticas. O Bisfenol A (BPA) é um componente dos produtos a base de resinas epóxi e plásticos policarbonato e tem sido investigado por sua provável atividade carcinogênica para a mama e próstata. O objetivo geral desse trabalho foi investigar se a exposição gestacional ao BPA suplementado ou não com Indol-3-Carbinol (I3C), um composto natural com propriedades quimioprotetoras, interfere no padrão de desenvolvimento da próstata, bem como na suscetibilidade ao desenvolvimento de lesões prostáticas. Fêmeas prenhes da linhagem Sprague-Dawley foram divididas em 5 grupos experimentais: G1: Controle (ração basal); G2: BPA25 (25μg/Kg); G3: BPA25 (25μg/Kg) + I3C; G4: BPA250 (250μg/Kg); G5: BPA250 (250μg/Kg) + I3C. Machos selecionados de diferentes ninhadas (2/ninhada) foram eutanasiados no DPN21 para avaliação imediata sobre a morfogênese prostática e no DPN180 para avaliação dos efeitos tardios.No DPN21 e DPN180 os animais foram eutanasiados por decapitação, o sangue foi coletado para análises hormonais e os hemilobos ventrais direitos separados para rotina histológica, análise estereológica e imuno-histoquímica, e os esquerdos congelados em nitrogênio líquido para o Western Blot. O lobo dorsolateral foi coletado no DPN180 para avaliação histopatológica. O peso do lobo ventral da próstata reduziu no grupo G5 em relação a G4, enquanto no DPN180 não houve diferença nesse parâmetro. Com relação à estereologia no DPN21 evidenciou-se aumento do compartimento epitelial e diminuição do compartimento luminal nos grupos G3 e G5. Quanto ao índice de proliferação celular no DPN21 observou-se aumento nos grupos... / Environmental factors and life style, such as diet, are able to induce significant changes in the concentration and metabolism of steroid hormones and can contribute with prostatic diseases development. Bisphenol A (BPA) is an organic compound used to make epoxy resins and polycarbonate plastics and has been investigated for its probable carcinogenic activity for breast and prostate. The aim of this study was to investigate if gestational exposure to BPA, supplemented or not with Indole-3-Carbinol (I3C), a natural compound with chemoprotective properties, can modify the prostate development pattern as well as the susceptibility to develop lesions in prostate. Sprague-Dawley pregnant females were divided into five experimental groups: G1: Control (basal chow); G2: BPA25 (25μg/Kg) G3: BPA25 (25μg/Kg) + I3C; G4: BPA250 (250μg/Kg); G5: BPA250 (250μg/Kg) + I3C. Selected males from different litters (2/litter) were euthanized in PND21, to study the early effects on prostate morphogenesis and in PND180 to evaluate the late effects. At PND21 and PND180 the animals were euthanized by decapitation, blood was collected to hormone assays and right ventral lobule was used for histopathological evaluation, stereological analysis, immunohistochemistry and TUNEL assay, and the left ventral lobule was frozen and stored in the -80oC freezer for Western Blot analysis. Dorsolateral lobe was collected for histopathologic evaluation at PND180 animals. Prostatic ventral lobe weight at PND21 decreased in the G5 group compared to G4, while at PND180 there was no significant difference in this parameter. At PND21 there was increase in epithelial compartment and decrease in the luminal compartment in G3 and G5 compared to G1. Epithelial cells proliferation index at PND21 was significant higher in G2 and G3 than G1, and apoptosis index in I3C groups (G3 e G5) was higher in relation... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3826.pdf: 1893652 bytes, checksum: cca227d41858b50ad19ca341e725b6d3 (MD5) Previous issue date: 2011-08-31 / Financiadora de Estudos e Projetos / The expression system of recombinant proteins in insect cells/baculovirus (BEVS) was described and introduced in 1983 and since then has become a powerful tool for the production of recombinant proteins of biotechnological interest. This work studied the kinetics of Bac-to-BacR Baculovirus Expression System (Invitrogen ) used for the production of recombinant proteins, evaluating growth patterns and consumption of nutrients from Sf-9 insect cells infected with this commercial bacmid and determining the effect of viral inoculum. For this, Sf-9 cells grew at 29oC in T flasks containing 5 mL of SF-900 II medium or Schott bottles with working volume of 15 mL and orbital shaking at 90 rpm. UFLAG-286 cells were also tested at 29°C in TC-100 medium supplemented with 10% bovine fetal serum. The baculovirus used were the Autographa californica nuclear polyhedrosis virus (AcMNPV) as a wild baculovirus infection model, the bacmid extracted from DH10Bac bacteria and transposed with the transfer vector empty (pFastBac 1), called Bac sprec and the bacmid recombinant AcNPV with the GUS coding sequence of the gene &#946;- glucuronidase, used as a standard for transposition experiments and transfection. Cells were infected at different times (TOI), on the initial phase, the exponential phase or stationary phase of cell growth, and with different multiplicities of infection (MOI) (0.01, 0.1, 1 and 10). It was observed that the MOI does not influence the viral replication, because even with the low MOI the cell growth was completely inhibited. TOI had already affected the production of total cell proteins, and infection in the early exponential phase was that obtained the highest number of total proteins. The supplementation of the cultivation with Bac sprec with serine and glutamine did not lead to increased viral production. The supernatant of cultures infected with Bac sprec was able to inhibit cell death where there was induction of apoptosis by terbutyl, indicating contain some protein with anti-apoptotic activity. This effect was not observed on wild baculovirus. / O sistema de expressao de proteinas recombinantes em celulas de inseto/baculovirus (BEVS) foi descrito e introduzido em 1983, e desde entao tornou-se uma ferramenta poderosa para a producao de proteinas recombinantes de interesse biotecnologico. O objetivo deste trabalho foi estudar os parametros cineticos do sistema Bac-to-BacR Baculovirus Expression (Invitrogen ) utilizado para a producao de proteinas recombinantes, avaliando os padroes de crescimento e consumo de nutrientes de celulas de inseto Sf-9 infectadas com este bacmideo comercial e determinando o efeito do inoculo viral. Para isso celulas Sf-9 foram cultivadas a 29oC em frascos T contendo 5 mL de meio SF-900 II, ou em frascos Schott com volume de trabalho de 15 mL e agitacao orbital a 90 rpm. Celulas UFLAG-286 tambem foram testadas a 29oC em meio TC-100 suplementado com 10% de soro fetal bovino. Os baculovirus utilizados foram o Autographa californica nuclear polyhedrosis virus (AcMNPV), como modelo de infeccao de baculovirus selvagem, o bacmideo extraido da bacteria DH10BacTM e transposto com o vetor de transferencia vazio (pFastBac 1), chamado de Bac sprec e o bacmideo recombinante AcMNPV-GUS com a sequencia codificante do gene &#946; glucuronidase, utilizado como um padrao para experimentos de transposicao e transfeccao. As celulas foram infectadas em diferentes momentos (TOI), seja na fase inicial, na fase exponencial ou fase estacionaria do crescimento celular e com diferentes multiplicidades de infeccao (MOI) (0,01; 0,1; 1 e 10). Observou-se que o MOI nao influencia a replicacao viral, pois mesmo com baixo MOI o crescimento celular foi inibido. Ja o TOI teve influencia na producao de proteinas totais da celula, sendo que a infeccao no inicio da fase exponencial foi que obteve maior numero de proteinas totais. A suplementacao do cultivo de Bac sprec com serina e glutamina nao levou a uma maior producao viral. O sobrenadante de cultivos infectados com o Bac sprec foi capaz de inibir a morte celular onde houve inducao de apoptose por terbutil, indicando conter alguma proteina com atividade antiapoptotica. Este efeito nao foi observado com o baculovirus selvagem.

Made available in DSpace on 2016-06-07T17:12:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-31. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-07T17:17:03Z : No. of bitstreams: 1 000862987_20190102.pdf: 1386058 bytes, checksum: b953d14066d94c186b2c4bb15757c87f (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivo: Investigar o papel do treinamento físico (TF) em regular os processos inflamatório, de estresse de retículo endoplasmático e principalmente de apoptose em neurônios hipotalâmicos responsáveis pelo controle da fome em camundongos obesos induzidos por dieta rica em gordura. Metodologia: Quarenta e cinco camundongos Swiss foram distribuídos em 3 grupos com 15 animais em cada (n=15): Controle - animais sedentários, alimentados com dieta padrão por 16 semanas; Obeso - animais sedentários, que receberam dieta hiperlipídica (DHL) por 8 semanas (OB); Obeso Treinado (OBT) - animais alimentados com DHL por 8 semanas e, concomitantemente, foram submetidos a um protocolo de TF. No início e ao final do experimento foram realizadas avaliações morfofisiológicas, moleculares e de ingestão alimentar nos animais. O protocolo de TF consistiu em corrida em esteira por 1h, 5 dias/semana, durante 8 semanas, a 60% da Pmáx dos animais. Vinte e quatro horas após a última sessão do TF extraiu-se os hipotálamos dos animais para as análises do conteúdo, fosforilação e/ou associação das proteínas JAK2, STAT3, TNF-α, IL-6, IL-1β, JNK, IKK, TLR4 e MyDD88, Bcl-2, Bax, Casp9, Casp8, FADD, APAF1, PERK, eIF2α, NPY e POMC por imunoblot, imunoprecipitação e/ou PCR-RT. Para avaliar apoptose, aplicou-se a técnica de TUNEL. A ativação de macrófagos foi analisada pela marcação com F4/80. Resultados: A DHL foi capaz de aumentar a massa corporal total, o índice de Lee, a glicemia e os níveis de colesterol total e LDL nos animais obesos se comparado aos animais controles. Ao contrário, o TF foi capaz de atenuar estes parâmetros. O TF aumentou a fosforilação das proteínas da via de sinalização da leptina (p-JAK2/p-STAT3) em neurônios hipotalâmicos dos camundongos obesos quando comparados a seus pares não exercitados. Tais resultados foram acompanhados por menor conteúdo de TNF-α, IL-6, IL-1β e TLR4 e redução da fosforilação... / Objective: To investigate the role of physical training (PT) in regulating the inflammatory processes, endoplasmic reticulum stress and especially apoptosis in hypothalamic neurons responsible for controlling hunger in diet induce obese mice. Methods: Forty-five Swiss mice were distributed into 3 groups of 15 animals each (n = 15): Control - sedentary animals fed a standard diet for 16 weeks; Obese - sedentary animals that received high fat diet (HFD) for 8 weeks (OB); Obese trained (OBT) - animals that received HFD for 8 weeks, and concomitantly, were subjected to a PT protocol. At the beginning and end of the experiment, morphophysiological variables, food intake and molecular biology were evaluated. The TF protocol consisted of treadmill running for 1 h, 5 days / week for 8 weeks, at 60% of Pmax of the animals. Twenty-four hours after the last session of the PT, the extraction of hypothalamus was done for analysis of the level, phosphorylation and / or association of, JAK2, STAT3, TNF-α, IL- 6, IL-1β, JNK, IKK, TLR4 and MyDD88, Bcl-2, Bax, Casp9, Casp8, FADD, APAF1, PERK, eIF2α, NPY and POMC by immunoblot, immunoprecipitation and/or RT-PCR. The TUNEL technique was performed to evaluated apoptosis. In addition, the activation of macrophages was analyzed by labeling with F4/80. Results: DHL was able to increase total body weight, Lee's index, blood glucose and total cholesterol levels and LDL in obese animals compared to the control animals. Rather, PT was able to attenuate these aspects. PT increased phosphorylation of the proteins of leptin signaling pathway (p- JAK2/p-STAT3) in hypothalamic neurons of obese mice compared to not exercised mice. These findings were accompanied by lower content of TNF-α, IL-6, IL-1β and TLR4 and reduced phosphorylation of JNK and IKK trained in the obese animals compared to the obese animals which have remained inactive during the same period. In the same way, it can be observed more macrophage... / FAPESP: 2012/01750-0

Os cogumelos têm vastas perspectivas como fontes de propriedades medicinais, pois são usados desde os tempos remotos para tratar doenças e promover a saúde em geral. Possuem uma quantidade de compostos bioativos interessantes o que despertou o interesse da área científica. O presente estudo tem como objetivo a avaliação das propriedades bioativas e da composição química e nutricional dos cogumelos Pleurotus sajor-caju e Lentinula edodes. A atividade antioxidante do extrato foi avaliada através de ensaios de DPPH, poder redutor, TBARS e betacaroteno. Foram realizadas atividade antitumoral nas células NCI-H460, HepG2, HeLa, MCF-7 PLP2 HCT-116 e MRC-5, e anti-inflamatória para o extrato etanólico de P. sajor-caju em Raw 264.7. A composição da amostra do P. sajor caju em tocoferóis foi determinada por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) acoplada a um detector de arranjo de diodos (DAD). Os perfis em ácidos graxos e açúcares foram obtidos por cromatografia a gas acoplada a um detector de ionização de chama (CG-FID) e por CLAE acoplado a um detector de índice de refração (DIR). O P. sajor-caju mostrou ser fonte importante de antioxidantes principalmente fenóis (147,54 μg/g) e tocoferóis (615.9g/100g). β-tocoferol foi a forma encontrada em maiores quantidades. Este extrato apresentou atividade antioxidante, sendo esta mais significativa para os ensaios de inibição da peroxidação lipídica (valores de EC50 inferiores a 2,6 mg/mL). A determinação do perfil em macronutrientes demonstrou altos teores em proteínas (17,29 g/100 g) e carboidratos (76,18 g/100 g), apresentando baixos valores de lipídios (1,16 g/100 g). A análise da composição do ácidos graxos conduziu à quantificação de 22 moléculas, com predomínio dos ácidos graxos poli-insaturados, particularmente os ácidos oleico e linoleico, 17-61% e 20-54%, respectivamente. O ensaio de citometria de fluxo foi utilizado para a verificação do tipo de morte induzida, para ambos os cogumelos, que apresentaram resultados semelhantes, indicando morte por apoptose. Os estudos efetuados descrevem o potencial nutracêutico das espécies analisadas, bem como o docking molecular nos faz pensar em uma possível atividade pró-apoptótica e anti-inflamatória. O consumo de cogumelos in natura como em extratos podem exercer um efeito benéfico para a saúde e auxiliar no tratamento de determinadas doenças. / Submitted by cmquadros@ucs.br (cmquadros@ucs.br) on 2018-04-03T14:30:36Z No. of bitstreams: 1 Tese Tiane C Finimundy.pdf: 5212206 bytes, checksum: ca4d07dbacc3899085628cc06e5f33d3 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-03T14:30:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Tiane C Finimundy.pdf: 5212206 bytes, checksum: ca4d07dbacc3899085628cc06e5f33d3 (MD5) Previous issue date: 2018-04-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES / Mushrooms have vast prospects as sources of medicinal properties, since they have been used since ancient times to treat diseases and promote health in general. They have a number of interesting bioactive compounds which aroused the interest of the scientific area. The present study aims to evaluate the bioactive properties and the chemical and nutritional composition of the Pleurotus sajor-caju and Lentinula edodes mushrooms. The antioxidant activity of the extract was evaluated through DPPH, reducing power, TBARS and beta carotene assays. Antitumor activity was performed on NCI-H460, HepG2, HeLa, MCF-7, PLP2, HCT-116 and MRC-5 cells, and anti-inflammatory for the ethanolic extract of P. sajor-caju on Raw 264.7. The composition of the P. sajor caju sample in tocopherols was determined by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) coupled to a fluorescence detector (DAD). The fatty acid and sugar profiles were obtained by gas chromatography coupled to a flame ionization detector (GC-FID) and by HPLC coupled to a refractive index detector (RID). P. sajor-caju showed to be an important source of antioxidants mainly phenols (147.54 μg / g) and tocopherols (615.9g / 100g). β-tocopherol was the form found in higher amounts. This extract showed antioxidant activity, which is more significant for lipid peroxidation inhibition assays (EC 50 values below 2.6 mg / mL). Macronutrient profile determination showed high levels of protein (17.29 g / 100 g) and carbohydrates (76.18 g / 100 g), presenting low lipid values (1.16 g / 100 g). Analysis of the composition of fatty acids led to the quantification of 22 molecules, with predominance of polyunsaturated fatty acids, particularly oleic and linoleic acids, 17-61% and 20-54%, respectively. The flow cytometry assay was used to verify the type of induced death for both mushrooms, which showed similar results, indicating death by apoptosis. The studies carried out describe the nutraceutical potential of the analyzed species, as well as the molecular docking makes us think of a possible pro-apoptotic and anti-inflammatory activity. The consumption of mushrooms in nature as in extracts can have a beneficial effect on health and help in the treatment of certain diseases.

Submitted by IVAN RODRIGUES DE CARVALHO FILHO null (ircf71@uol.com.br) on 2017-05-30T18:49:07Z No. of bitstreams: 1 TESE FINALIZADA EM PDF.pdf: 3632299 bytes, checksum: 7a61adaae038965031f187518ca0c4de (MD5) / Rejected by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: No campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” foi informado que seria disponibilizado o texto completo porém no campo “Data para a disponibilização do texto completo” foi informado que o texto completo deverá ser disponibilizado apenas 6 meses após a defesa. Caso opte pela disponibilização do texto completo apenas 6 meses após a defesa selecione no campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” a opção “Texto parcial”. Esta opção é utilizada caso você tenha planos de publicar seu trabalho em periódicos científicos ou em formato de livro, por exemplo e fará com que apenas as páginas pré-textuais, introdução, considerações e referências sejam disponibilizadas. Se optar por disponibilizar o texto completo de seu trabalho imediatamente selecione no campo “Data para a disponibilização do texto completo” a opção “Não se aplica (texto completo)”. Isso fará com que seu trabalho seja disponibilizado na íntegra no Repositório Institucional UNESP. Por favor, corrija esta informação realizando uma nova submissão. Agradecemos a compreensão. on 2017-05-30T20:42:08Z (GMT) / Submitted by IVAN RODRIGUES DE CARVALHO FILHO null (ircf71@uol.com.br) on 2017-05-31T02:30:55Z No. of bitstreams: 1 TESE FINALIZADA EM PDF.pdf: 3632299 bytes, checksum: 7a61adaae038965031f187518ca0c4de (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-05-31T14:32:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 carvalhofilho_ir_dr_bot.pdf: 3632299 bytes, checksum: 7a61adaae038965031f187518ca0c4de (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-31T14:32:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 carvalhofilho_ir_dr_bot.pdf: 3632299 bytes, checksum: 7a61adaae038965031f187518ca0c4de (MD5) Previous issue date: 2016-12-20 / A maioria dos tumores malignos da mama apresenta aspecto morfológico de carcinoma ductal invasivo que pode apresentar diferentes prognósticos. Diante disso, conclui-se que a identificação do padrão morfológico não é suficiente para o estabelecimento do prognóstico, e que existe a necessidade da identificação de novos biomarcadores imunoistoquímicos que indiquem moléculas sinalizadoras importantes para proliferação e sobrevivência das células neoplásicas, e que possam ser alvos de modalidades terapêuticas oncológicas. A ocorrência de alterações dos mecanismos regulatórios genéticos da apoptose pode resultar em uma hiperativação das proteínas antiapoptóticas, com a perda da sensibilidade aos sinais de morte fisiológica, evitando-se a ocorrência da apoptose e resultando, desse modo, na preservação de células geneticamente alteradas com consequente aumento no seu número. Esse é um evento crítico para o início do crescimento tumoral, com repercussões no prognóstico e na resistência ao tratamento oncológico. Dessa forma, o entendimento da maquinaria das vias do processo apoptótico é de crucial importância na avaliação prognóstica do processo neoplásico, pois suas moléculas são importantes biomarcadores da proliferação e sobrevivência celular. Objetivos: Avaliar a relação entre as proteínas inibidoras do processo apoptótico (IAPs) e seu inibidor Smac/DIABLO no carcinoma mamário ductal invasivo, sem outra especificação (SOE). Analisar, também, sua correlação com os marcadores imunoistoquímicos usuais, aplicados para a avaliação prognóstica, índice apoptótico e taxa de sobrevida dos pacientes. Material e Métodos: Foram confeccionados blocos de parafina de TMA com tecido de câncer mamário ductal invasivo sem outra especificação (SOE), extraído de pacientes operadas no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, entre 1980 e 2000. Estes foram submetidos à reação imunoistoquímica para Survivina, XIAP, Smac, Caspase 3 clivada (índice apoptótico) e Ki67 (índice de proliferação celular), RE, RP, HER2, P53. Dois patologistas realizaram a leitura das lâminas e obteve-se escores de intensidade de imunoexpressão e/ou percentuais de positividade celular. Esses escores foram correlacionados entre as proteínas apoptóticas, com outros marcadores imunoistoquímicos prognósticos usuais, com os dados de sobrevida dos pacientes, com o grau histológico e com o perfil molecular especifico do carcinoma ductal invasivo. Resultados: Ocorreu uma correlação positiva entre Smac, Survivina e XIAP, houve maior intensidade de imunoexpressão dos marcadores de apoptose nos tumores de maior grau e uma correlação de imunoexpressão inversa entre Smac e um status hormonal positivo. Um estímulo pró-apoptótico pareceu ser dominante no carcinoma mamário de subtipo molecular HER2, quando comparado a outros subtipos. XIAP foi a única proteína apoptótica estudada que guardou correlação com a taxa de mortalidade. Conclusão: A detecção de uma correlação estatística significante entre as proteínas apoptóticas, corrobora a integração múltipla que ocorre entre essas durante o processo apoptótico no carcinoma mamário invasivo, sem outra especificação (SOE). Estudos adicionais das proteínas apoptóticas com uma maior amostragem de pacientes serão necessários para o estabelecimento de valores prognósticos mais acurados de sobrevida. / Most of malignant breast tumors exhibit morphological aspect of invasive ductal carcinoma, not otherwise specified (NOS) carcinoma, that can present different prognosis. It concludes that the identification of the morphological type of the breast cancer is not enough to establish tumor prognosis. So there is the need to recognize new immunohistochemistry biomarkers that can identify important molecular signaling proteins of neoplastic cell proliferation and survival that can be used as target of oncological therapeutic. Changes in these regulatory mechanisms that favors the hiperactivation of antiapoptotic proteins can set the loss of the physiological signs of cell death avoiding the occurrence of apoptosis and preserving genetic modified cells. This is a critical event to the beginning of tumor growth which may further lead to repercussions in prognosis and cancer resistance to therapy. The knowledge about the different pathways to apoptosis is crucial to evaluate the prognosis of the neoplastic process. Objectives: To study the relation between the inhibitors of apoptosis proteins (IAPs) and their antagonist, the protein SMAC/DIABLO, in invasive ductal breast carcinoma and also evaluate their correlation with the usual prognostic immunohistochemical markers, Apoptotic Index and clinical prognostics factors. Design: TMA paraffin blocks were made with invasive ductal breast carcinoma tissue samples of patients operated at the Botucatu School of Medicine Hospital from 1980 to 2000. Those samples were submitted to immunohistochemical reactions to Survivin, XIAP, cleaved Caspase 3 (apoptotic index) and Ki67 (cell proliferation index), RE, RP, HER2, P53. Two experienced pathologists analyzed the microscope slides and retrieved intensity scores and/or the percentage of positive cells of immune-expression. Those scores were interrelated and with IA, anti-cleaved caspase 3, the other usual immunohistochemical biomarkers and survival patients records, as well as the specific type and grade of the invasive ductal carcinoma. Results: There was a positive correlation between SMAC, Survivina and XIAP, as well as a higher immunoexpression intensity of apoptosi’s markers with high grade tumor, and a inverse immunoexpression correlation between SMAC and positive progesterone hormonal status. The pro-apoptotic stimulus seemed be dominant in breast carcinoma HER2 molecular subtype when compared to other subtypes.A pro-apoptotic stimulus seemed be dominant in breast carcinoma HER2 molecular subtype when compared to other subtypes.XIAP was the only one apoptotic protein studied that played correlation with mortality rate. Conclusion: The detection of a statistically significant correlation between the apoptotic proteins corroborates the multiple integration that occurs between these during the apoptotic process in invasive mammary carcinoma with no other specification. Further studies of apoptotic proteins in a large survey will be necessary to establish more accurate values of prognostic survival.

Made available in DSpace on 2015-06-03T02:07:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000469599-Texto+Completo-0.pdf: 1271665 bytes, checksum: c7c7cda085b0d3d13b2f9dc865eca750 (MD5) Previous issue date: 2015 / Hepatocellular carcinoma is the most prevalent type of tumor among primary tumors affecting the liver. Its development is usually related to a chronic liver disease, which can be caused by a viral infection (hepatitis B and C), alcoholism, cryptogenic cirrhosis, biliary disease and primary hemochromatosis. Rapamycin, an immunosuppressant agent, is currently used as the basis of chemotherapy in the treatment of various cancers, including the liver. By presenting several serious adverse effects in patients undergoing treatment, including nephrotoxicity, it is clear the importance of minimizing these effects without compromising efficacy. In this sense, other drugs may be used concomitantly. One of these drugs is fructose-1,6-bisphosphate (FBP), which has shown therapeutic effect in various pathological situations. Beneficial effects of FBP in organic, liver and kidney deficiencies were also documented. The objective of this study was to evaluate the activity of rapamycin in combination with the FBP in cell proliferation, oxidative stress and inflammation of hepatocellular carcinoma HepG2 cells, analyzing the cytotoxic effects in an attempt to minimize adverse effects and increase the efficacy and safety for patients undergoing treatment. The results demonstrated that the combination of rapamycin and FBP is more efficient than the single use of them, because subtherapeutic doses of rapamycin, when associated to FBP become effective, and this inibition in cell proliferation is not caused by necrosis. In 72 hours of treatment, there was no change in the inflammatory route or in autophagy of cells, but the combination of rapamycin and FBP significantly increased the production of Thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) and the cellular apoptosis, a process that can inhibit tumor proliferation. These results demonstrate that this association may be a promising choice for hepatocarcinoma treatment. / O carcinoma hepatocelular é o tipo de tumor mais prevalente entre os tumores primários que atingem o fígado. Seu desenvolvimento está geralmente relacionado a uma doença hepática crônica, a qual pode ser originada por uma infecção viral (hepatite B e C), alcoolismo, cirrose criptogênica, doenças biliares e hemocromatose primária. A rapamicina, um agente imunossupressor, é atualmente utilizada como base na quimioterapia no tratamento de diversos tipos de câncer, inclusive nos hepáticos. Por apresentar diversos efeitos adversos graves nos pacientes em tratamento, inclusive nefrotoxicidade, é evidente a importância de minimizar estes efeitos sem comprometimento da eficácia, neste sentido outras drogas podem ser utilizadas concomitantemente. Uma destas drogas é a frutose-1,6-bisfosfato (FBP) que tem demonstrado efeito terapêutico em várias situações patológicas. Também foram documentados efeitos benéficos da FBP em deficiências orgânicas, renais e hepáticas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade da rapamicina em conjunto com a FBP na proliferação celular, estresse oxidativo e processo inflamatório de células HepG2, analisando os efeitos citotóxicos, na tentativa de minimizar os efeitos adversos e aumentar a eficácia e segurança para os pacientes em tratamento.O carcinoma hepatocelular é o tipo de tumor mais prevalente entre os tumores primários que atingem o fígado. Seu desenvolvimento está geralmente relacionado a uma doença hepática crônica, a qual pode ser originada por uma infecção viral (hepatite B e C), alcoolismo, cirrose criptogênica, doenças biliares e hemocromatose primária. A rapamicina, um agente imunossupressor, é atualmente utilizada como base na quimioterapia no tratamento de diversos tipos de câncer, inclusive nos hepáticos. Por apresentar diversos efeitos adversos graves nos pacientes em tratamento, inclusive nefrotoxicidade, é evidente a importância de minimizar estes efeitos sem comprometimento da eficácia, neste sentido outras drogas podem ser utilizadas concomitantemente. Uma destas drogas é a frutose-1,6-bisfosfato (FBP) que tem demonstrado efeito terapêutico em várias situações patológicas. Também foram documentados efeitos benéficos da FBP em deficiências orgânicas, renais e hepáticas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade da rapamicina em conjunto com a FBP na proliferação celular, estresse oxidativo e processo inflamatório de células HepG2, analisando os efeitos citotóxicos, na tentativa de minimizar os efeitos adversos e aumentar a eficácia e segurança para os pacientes em tratamento.

Made available in DSpace on 2016-06-02T12:30:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000478687-Texto+Completo-0.pdf: 1432001 bytes, checksum: 2d6dc8303449f3f554bf97804d426795 (MD5) Previous issue date: 2016 / The liraglutide is a glucagon-like peptide 1 (GLP-1) based therapy and an alternative treatment to type 2 diabetes mellitus (T2DM). Apart from its hypogliycemic effect, the drug has been also associated with the prevention of cardiovascular diseases, regulation of blood lipid and anti-inflammatory action. Reports indicate, however, that liraglutide can increase the risk of thyroid cancer and cause pancreatitis. Besides, studies demonstrated that some analogues of GLP-1 have a deleterious bone effect, while others demonstrated to be benefic to the bone. The aim of this study was to evaluate the effect in vitro of liraglutide in mouse pre-osteoblastic cells, MC3T3-E1. The results demonstrated that liraglutide significantly decreased the number of viable cells without inducing apoptosis. The mechanism of this effect is associated to the reactive oxygen species production (ROS), which resulted in an increase of cell autophagy. The decreased number of viable cells indicates therefore that liraglutide may affect the bone formation. / A liraglutida é uma terapia baseada no hormônio GLP-1 utilizada como tratamento alternativo para a diabetes mellitus tipo 2 (DM2). O medicamento, além do efeito hipoglicemiante, tem sido associado à prevenção de doenças cardiovasculares, diminuição dos lipídeos no sangue e à ação anti-inflamatória. Relatos indicam, porém, que a liraglutida pode aumentar o risco de câncer de tireoide e provocar pancreatite. Além disso, estudos demonstram que alguns análogos do GLP-1 têm efeito ósseo deletério, enquanto outros têm efeito benéfico. O objetivo deste estudo é avaliar o efeito da liraglutida sobre o crescimento de células pré-osteoblásticas (MC3T3-E1). Os resultados têm demonstrado que a liraglutida diminuiu significativamente o número de células sem induzir a apoptose. O mecanismo deste efeito está associado à produção de espécies reativas de oxigênio, que resulta em um aumento da autofagia das células, indicando, desta forma, que pode afetar a formação óssea.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A radiação ultravioleta natural tem sido identificada como o maior agente etiológico de lesões em pele e lábio. A ceratose actínica em lábio ou queilite actínica considerada, segundo a Organização Mundial de Saúde, como uma lesão prémaligna do câncer labial, apresenta-se, clinicamente, como o primeiro sinal de que danos foram causados ao lábio, muitas vezes irreparáveis, podendo evoluir, em sua grande maioria, para um carcinoma de células escamosas. A atuação da radiação ultravioleta no desenvolvimento de lesões malignas ocorre através da sua ação direta nas células levando ao dano em seu DNA permitindo que prossigam o ciclo mitótico com genes defeituosos. A relação desordenada entre proliferação e morte celular pode, muitas vezes, predizer a evolução e comportamento destas lesões, além de fornecer informações importantes da progressão tumoral. O objetivo deste trabalho foi avaliar através da técnica de imuno-histoquímica, a expressão de proteínas inibidoras e promotoras da apoptose e da proliferação celular como, p53, p53 mutado, Bcl-2, Ki-67 e caspase-3 em 20 casos de hiperplasias fibrosas inflamatórias, 20 de queilites actínicas, sendo quatro com displasia epitelial e 20 de carcinomas de células escamosas, todos localizados em lábio inferior. Os resultados mostraram que a identificação das proteínas p53 (DO-7) e p53 mutada (PAb-240) revelaram-se crescente com a progressão das lesões na região suprabasal com distribuição difusa, bem como a proteína Bcl-2. Observou-se diferença descritiva e quantitativa significante entre as proteínas p53 (DO-7) e p53 mutada (PAb-240) nos três grupos analisados, sendo que o anticorpo DO-7 revelou uma expressão mais elevada do que o PAb-240. A expressão da proteína Ki-67 mostrou-se elevada na região suprabasal de todos os grupos embora não tenha apresentado diferença significativa entre eles. Os casos de queilite com e sem displasia epitelial revelaram diferença significativa apenas para os marcadores p53 mutado (PAb-240) e para Bcl- 2. A expressão desses marcadores e do p53 (DO-7) revelaram-se mais elevada nos casos sem displasia epitelial. A expressão detectada neste estudo para esses marcadores em todas as lesões sugere que o desequilíbrio na regulação da apoptose e da proliferação celular ocorre numa fase inicial do desenvolvimento das lesões pré-malignas, inclusive nas lesões onde morfologicamente não é possível detectar nenhuma alteração ainda. Estes dados reforçam a importância do estudo de imunomarcadores envolvidos na carcinogênese bucal para avaliação do prognóstico de lesões pré-malignas e malignas e consequentemente a indicação de procedimentos terapêuticos e preventivos mais eficazes. / The natural ultraviolet radiation has been identified as the main aetiology of skin and lip injuries. Actinic keratosis in lip or actinic cheilitis, according to World Health Organization, as a premalignant lesion of the labial cancer, is presented, clinically, as the first signal that damages had been caused to the lip, most of the times, irreparable, being able to develop, in its great majority, in a squamous cell carcinoma. The action of the ultraviolet radiation in the development of malignant injuries occurs through its direct action in the cells leading to the damage in its DNA allowing that they continue the mitotic cycle with defective genes. The disordered relation between proliferation and cellular death can, mostly, predict the evolution and behavior of these injuries, besides supplying important information of the tumoral progression. The aim of this work was to evaluate, immunohistochemically, the inhibiting and proliferate expression of apoptosis and cellular proliferation proteins as, p53, mutate p53, Bcl-2, Ki-67 and caspase-3 in 20 cases of inflammatory fibrous hyperplasia, 20 of actinic cheilitis, being four with epithelium dysplasia and 20 of squamous cells carcinoma, all located in lower lip. The results had presented that the identification of proteins p53 (DO-7) and mutate p53 (PAb-240) had shown increasing with the progression of the injuries in the suprabasal region with diffuse distribution, as the Bcl-2 protein. Significant descriptive and quantitative difference were observed between proteins p53 (DO-7) and mutate p53 (PAb-240) in the three analyzed groups, showing that antibody DO-7 revealed a higher expression than the PAb-240. The antibody Ki-67 revealed high expression of the protein in the suprabasal region of all the groups although had not presented significant difference between them. The cases of cheilitis with and without epithelium dysplasia had disclosed a significant difference only for the markers mutate p53 (PAb-240) and Bcl-2. The xpression of these markers and p53 (DO-7) had shown higher in the cases without epithelium dysplasia. The expression detected in this study for these markers in all the lesions suggests that the loss of the regulation of apoptosis and the cellular proliferation also occurs in an initial phase of the development of the premalignant lesions included those where morphologically it is not possible to detect any alteration. These data show the importance of the immunomarkers study involved in bucal carcinogenesis for evaluation of the prognostic of premalignant and malignant lesions and the indication of more efficient therapeutical and preventive procedures.