Durante muito tempo, o uso de plantas medicinais foi o principal recurso terapêutico utilizado para tratar enfermidades. Há vários relatos a respeito das propriedades farmacológicas de Campomanesia xanthocarpa, popularmente conhecida como gabiroba. Com base nessas informações, a espécie vegetal em questão, já usada (popularmente) como planta medicinal para o tratamento de doenças inflamatórias, de úlceras, antidiarreico, dentre outros usos, é uma candidata promissora para tais estudos. Inicialmente, realizou-se uma triagem fitoquímica preliminar, por meio de testes qualitativos da droga vegetal oriunda das folhas de Campomanesia xanthocarpa O. Berg, que detectaram compostos como flavonoides, taninos, catequinas, triterpenóides, esteróides e saponinas. Na análise por CCD foi utilizado diferentes reveladores, analisando os extratos hidroetanólico seco das folhas, raiz e caule de Campomanesia xanthocarpa O. Berg. Foi detectado saponinas, ácido fenólicos, flavonoides, taninos condensados, catequinas, triterpenóides e antocianidinas. As análises químicas quantitativas demonstraram que o extrato seco do caule foi o que apresentou o maior teor de compostos fenólicos (39,3 ± 18c mg EAG), enquanto o extrato da folha foi o que demonstrou conter a maior quantidade de flavonoides (23,3 ± 2,1b mg EQ). Nas análises de atividade antifúngica, o extrato do caule foi o que se mostrou mais ativo contra as leveduras testadas, sendo efetivo a quase todas, destacando C. glabrata (MIC50 de 3,9) e C. Krusei (MIC50 de 15,625) que apresentaram MIC inferior ao controle fluconazol. Nos ensaios antiinflamatórios e anticonceptivos evidenciou, através dos testes de formalina, peritonite induzida por LPS e Von Frey filamento, uma possível ação anti-inflamatória e antinoceptiva do extrato seco das folhas. No teste de Formalina, não ocorreu diminuição significativa do tempo de lambida apenas no extrato de 1000 mg/kg quando comparada ao grupo veículo (p < 0,05) e na fase II houve uma diminuição no tempo de lambida em todas concentrações quando comparada ao grupo controle Veículo. No teste de Peritonite induzida por LPS houve uma diminuição na contagem de leucócitos os extratos de 10 e 100 mg/Kg quando comparada ao grupo controle Veículo + LPS, com p < 0,05. No teste de Von Frey filamento, após a administração da carragenina houve aumento do limiar mecânico em todos as concentrações de extrato já na primeira hora. / For a long time, the use of medicinal plants was the main therapeutic resource used to treat diseases. There are several reports on the pharmacological properties of Campomanesia xanthocarpa, popularly known as gabiroba. Based on this information, the plant species in question, already used (popularly) as a medicinal plant for the treatment of inflammatory diseases, ulcers, antidiarrheal, among other uses, is a promising candidate for such studies. Initially, a preliminary phytochemical screening was carried out by means of qualitative tests of the vegetal drug from the leaves of Campomanesia xanthocarpa O. Berg, which detected compounds such as flavonoids, tannins, catechins, triterpenoids, steroids and saponins. In the analysis by CCD was used different developers, analyzing the dry hydroethanolic extracts of the leaves, root and stem of Campomanesia xanthocarpa O. Berg. Saponins, phenolic acids, flavonoids, condensed tannins, catechins, triterpenoids and anthocyanidins were detected. The quantitative chemical analysis showed that the dry extract of the stem had the highest content of phenolic compounds (39.3 ± 18c mg EAG), while the leaf extract was the one that showed the highest amount of flavonoids (23.3 ± 2.1 mg EQ). In the analysis of antifungal activity, the stem extract was the most active against the tested yeasts, being effective to almost all of them, highlighting C. glabrata (MIC50 of 3.9) and C. Krusei (MIC50 of 15,625) that presented MIC lower than the fluconazole control. In the antiinflammatory and contraceptive tests, through formalin tests, peritonitis induced by LPS and von Frey filament, showed a possible anti-inflammatory and antinoceptive action of the dry leaf extract. In the Formalin test, there was no significant decrease in lick time only in the extract of 1000 mg / kg when compared to the vehicle group (p <0.05) and in phase II there was a decrease in lick time in all concentrations when compared to the Control group Vehicle. In the LPS-induced peritonitis test, there was a decrease in the leukocyte count of the extracts of 10 and 100 mg / kg when compared to the vehicle + LPS control group, with p <0.05. In the Von Frey filament test, after carrageenan administration there was an increase in the mechanical threshold at all concentrations of extract already in the first hour. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

Orientador: Margarete Teresa Gottardo de Almeida / Coorientador: / Banca: Ana Marisa Fusco Almeida / Banca: Debora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Resumo: Os homens e animais possuem uma relação milenar, em que o grupo das aves, em especial, é utilizado amplamente para diversas finalidades, tais como alimentação e companhia. As aves são retratadas como disseminadoras de patógenos ao ambiente, entretanto, o conhecimento a respeito deste papel a determinadas espécies aviárias, intimamente correlacionadas ao ser humano, são um tanto escassos. O presente trabalho teve como objetivos isolar, identificar e caracterizar o fenótipo e o genótipo de leveduras obtidas de fezes de cinco aves de cativeiro: galinha (Gallus gallus domesticus), Pássaro-do-amor (Agapornis spp), Periquito-australiano (Melopsittacus undulatus) calopsita (Nymphicus hollandicus) e canário (Serinus canaria domesticus). Para tanto, foram avaliadas 247 amostras de fezes destas cinco espécies aviárias, provenientes de sete cidades localizadas na região noroeste do estado de São Paulo, Sul de Minas Gerais e sudoeste do Mato Grosso do Sul. A coleta foi realizada com auxílio de espátulas estéreis. O material foi semeado em ágar Sabouraud dextrose e ágar semente de Níger, como titulações. A identificação das espécies baseou-se nas características macro e micromorfólogicas, e bioquímicas. Ademais, todos os isolados identificados, foram submetidos ao teste de antifungigrama por disco-difusão (CLSI, documento M44-A), frente a anfotericina B, cetoconazol, fluconazol e itraconazol. Aqueles que apresentavam padrões de suscetibilidade dose-dependente ou resistente, foram submetidos ao teste de microdiluição em caldo (CLSI, documento M27-A3). A ocorrência de leveduras se deu em 89% das amostras, variando de 77,5% a 94,0% independente da ave estudada. Foram obtidos 318 isolados, pertencentes a 29 espécies diferentes. O gênero prevalente foi Candida com 183 isolados (57,5%), seguido de Cryptococcus com 45 (14,2%), Rhodotorula com 38 (11,9%) e Trichosporon com 36 (11,3%); os demais gêneros totalizaram 16 isolados... / Abstract: Men and animals have an age-old relationship, where the group of birds, in particular, is widely used for various purposes, such as food and company.Men and animals have an age-old relationship, where the group of birds in particular is widely used for various purposes, such as food and company. The birds are portrayed as disseminators of pathogens to the environment, however, knowledge about this role certain avian species, closely correlated to humans, are somewhat scarce. This study aimed to isolate, identify and characterize the phenotype and the genotype obtained yeast stool five captive birds: chicken (Gallus gallus domesticus), Love bird (Agapornis spp), Budgerigar (Melopsittacus undulatus) cockatiel (Nymphicus hollandicus) and canary (Serinus canaria domesticus). Therefore, we evaluated 247 stool samples of these five avian species from seven cities located in the northwest from State of São Paulo, southern of Minas Gerais and southwestern Mato Grosso do Sul. The collection was performed using sterile spatulas. The material was seeded in Sabouraud dextrose agar and seed Niger agar, with titrations. The identification of species was based on biochemical and macro and micromorphological characteristics. In addition, all isolates identified were submitted to antifungal susceptibility testing by disk diffusion (CLSI, M44-A), compared to amphotericin B, ketoconazole, fluaconazole and itraconazole. The occurrence of yeasts occurred in 89% of samples, ranging from 77.5% to 94.0% of the studied independently bird. There were obtained 318 isolates belonging to 29 different species. There were obtained 318 isolates belonging to 29 different species. The prevalent genus isolated was Candida with 183 (57.5%), followed by Cryptococcus with 45 (14.2%), Rhodotorula with 38 (11.9%) and Trichosporon with 36 (11.3%); other genres totaled 16 isolates (5.0%). Note that, in the number of fungal species isolated, C. albicans, C. guilliermondii, C. ... / Mestre

Submitted by Priscila dos Santos Oliveira (priscilaspitty@hotmail.com) on 2018-08-29T22:43:22Z No. of bitstreams: 1 Merged_Priscila Oliveira.pdf: 1205779 bytes, checksum: 2ed8db0dfdefdc0a97d7a31fad8acaa9 (MD5) / Approved for entry into archive by Silvana Alvarez null (silvana@ict.unesp.br) on 2018-09-03T14:47:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Oliveira_mp_me_sjc.pdf: 1205779 bytes, checksum: 2ed8db0dfdefdc0a97d7a31fad8acaa9 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-03T14:47:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_mp_me_sjc.pdf: 1205779 bytes, checksum: 2ed8db0dfdefdc0a97d7a31fad8acaa9 (MD5) Previous issue date: 2018-08-06 / Resumo: A epidemiologia das infecções causadas por Candida sofreu mudanças nos últimos anos. Embora Candida albicans ainda seja o principal patógeno causador de candidíase, relatos recentes reportam o aumento da incidência de infecções causadas por espécies de Candida não-albicans. A toxicidade dos fármacos antifúngicos utilizados juntamente com o desenvolvimento da resistência tem se tornado um sério problema clínico. Com isso, atualmente existe a urgência na descoberta de novos compostos com atividades antifúngicas. Objetivos: avaliar a atividade antifúngica do fármaco Cloridrato de Verapamil, determinar a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a Concentração Fungicida Mínima (CFM), frente à Candida albicans ATCC 18804, Candida krusei ATCC 6258, Candida parapsilosis ATCC 90018 e Candida glabrata ATCC 9030. Além de avaliar a citotoxicidade do fármaco em queratinócitos humanos (HaCaT). Metodologia: a determinação da CIM foi realizada pela técnica de microdiluição de acordo com The European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST). A CFM foi determinada por plaqueamento em ágar Sabouraud de alíquotas provenientes das diluições do ensaio de microdiluição. A avaliação da citotoxicidade foi realizada pela técnica de redução da resazurina, sendo possível avaliar a atividade mitocondrial das células HaCaT. Resultados: o fármaco Cloridrato de Verapamil demonstrou atividade antifúngica contra as quatro espécies patogênicas de Candida, com o valor de CIM de 1250 µM; valor de CFM maior que 1250 µM, sendo assim este fármaco foi considerado fungistático. Além disso, o Cloridrato de Verapamil não apresentou citotoxicidade nas concentrações avaliadas no estudo, pois, a redução de células viáveis nas concentrações mais elevadas não ultrapassa 30%. Com relação à redução de biomassa em biofilme de Candida, após tratamento com Cloridrato de Verapamil, houve redução (de 10 a 20%) para as quatro espécies de Candida em estudo, quando utilizadas concentrações de fármaco correspondentes a CIM; quando utilizadas concentrações de fármaco correspondentes a cinco vezes o valor de CIM, houve um aumento significativo na redução de biomassa (de 25% a 60%) em biofilme formado pelas quatro espécies de Candida. Conclusão: o fármaco Cloridrato de Verapamil apresentou atividade antifúngica para Candida albicans e Candida não-albicans, sendo considerado um fármaco fungistático, além de não apresentar citotoxicidade em queratinócitos humanos, e demonstrar atividade na redução de biomassa em biofilme formado pelas quatro espécies de Candida. Demais estudos são necessários para verificar a ação desse fármaco em diferentes mecanismos de virulência frente a células de Candida spp. / Abstract: The epidemiology of Candida infections has changed in recent years. Although Candida albicans is still the main pathogen causing candidiasis, recent reports have reported an increase in the incidence of infections caused by nonalbicans Candida species. The toxicity of the antifungal drugs used together with the development of resistance has become a serious clinical problem. With this, there is now an urgency in the discovery of new compounds with antifungal activities. Objectives: To evaluate the antifungal activity of the drug Verapamil Hydrochloride, to determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and the Minimum Fungicidal Concentration (CFM) against Candida albicans ATCC 18804, Candida krusei ATCC 6258, Candida parapsilosis ATCC 90018 and Candida glabrata ATCC 9030 In addition to evaluating the cytotoxicity of the drug in human keratinocytes (HaCaT). Methodology: MIC determination was performed by the microdilution technique according to The European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST). The CFM was determined by plating on Sabouraud agar from aliquots from the dilutions of the microdilution assay. The evaluation of cytotoxicity was performed using the resazurin reduction technique, and it was possible to evaluate the mitochondrial activity of HaCaT cells. Results: The drug Verapamil Hydrochloride demonstrated antifungal activity against the four pathogenic species of Candida, with MIC value of 1250 μM; CFM value greater than 1250 μM, so this drug was considered fungistatic. In addition, Verapamil Hydrochloride did not present cytotoxicity in the units evaluated in the study, because the reduction of viable cells in the most cells is not exceeded by 30%. Regarding the biomass reduction in Candida biofilm, after treatment with Verapamil Hydrochloride, there was a reduction (from 10 to 20%) for the four Candida species in study, when the use of drug corresponding to MIC; when the use of drug corresponding to 5 times of MIC, there was a significant increase in the biomass reduction (from 25% to 60%) in the biofilm molded by the four Candida species. Conclusion: Thus, the drug Verapamil Hydrochloride led to the antifungal activity of Candida albicans and non-albicans Candida species, being considered a fungicidal drug, besides not presenting cytotoxicity in human serotonizers, and were submitted to biomass reduction in biofilm molded by four Candida species. More studies are needed to verify the action of the drug on different mechanisms of virulence against Candida spp cells.

GIFONI, Juliana Menezes. Propriedades Bioquímicas e Funcionais de uma Proteína Ligante à Quitina Purificada de Sementes de Moringa oleifera Lamarck. 2009. 140 f. Tese (Doutorado em bioquímica)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2009. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-07-20T16:03:34Z No. of bitstreams: 1 2009_tese_jmgifoni.pdf: 8760660 bytes, checksum: 354beec73eaacf40d4940af6fcbd173a (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T18:20:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_tese_jmgifoni.pdf: 8760660 bytes, checksum: 354beec73eaacf40d4940af6fcbd173a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T18:20:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_tese_jmgifoni.pdf: 8760660 bytes, checksum: 354beec73eaacf40d4940af6fcbd173a (MD5) Previous issue date: 2009 / Moringa oleifera Lam. is native from Northwest India, well adapted to tropical regions. From its seeds it was isolated a new chitin binding protein, Mo-CBP3, which has coagulant properties and antifungal activity against the phytopathogen Fusarium solani. Proteins were extracted from defatted seeds flour by 0.05 M Tris-HCl buffer, pH 8.0, containing 0.15 M NaCl. The average protein content of the flour was 216.44 mgP/gF. The crude extract was fractionated in albumins and globulins by dialysis and centrifugation. Albumins were concentrated by 90% ammonium sulfate saturation. This fraction was applied into a chitin column, previously equilibrated with the same buffer. An unadsorbed and two adsorbed peaks were obtained. The first adsorbed peak was eluted with 0.1 M N-acetyl-D-glucosamine (PNAG), and the second one, with 0.05 M acetic acid, pH 3.0 (PAC). PNAG was applied into a cation exchange column, Resource S, equilibrated with 0.05 M sodium acetate buffer, pH 5.2. The third peak corresponded to Mo-CBP3 – eluted with 0.5 M NaCl in equilibrium buffer. The protein content of Mo- CBP3 was 1.17 mgP/gF. It represents a final yield of 0.54% of crude extract proteins. Apparent molecular mass by SDS-PAGE was 18.0 kDa in the absence of β-ME, and 9.0 kDa, in its presence. Results suggest that Mo-CBP3 is a dimeric protein, made of identical subunits, linked by disulfide bonds. By molecular exclusion chromatography, calculated molecular mass was 14.34 kDa, pI 10.8. Mo-CBP3 is a glycoprotein with 2.5% of carbohydrates, which has not hemagglutinating or chitinase activities. Its NH2- terminal sequence was CPAIQRCCQQLRNIQPPCRCCQ, with 22 amino acids, conffirming its basic character. Mo-CBP3 was as efficient as AlK(SO4)2 in the capacity of coagulating suspended material in water. Mo-CBP3 (0.1 mg/mL) was fungicide to Fusarium solani spores. Heat treatment of the protein at 98 °C, du ring 1 h, and pre incubation with N-acetyl-D-glucosamine, did not reverse its action. Mo-CBP3 was able to retard the mycelial growth of the fungus even at the lowest tested dose of 0.05 mg/mL. Mo-CBP3 was inactive against the oomycete Pythium oligandrum, which has cellulose in spite of chitin in cell wall. Protein was also able to inhibit about 80% of medium acidification, induced by glucose, by F. solani spores, that suggests the influence of Mo-CBP3 over the proton pumps (H+ATPases) present in cellular membranes of F. solani spores. / Moringa oleifera Lam. é uma planta originária do Noroeste da Índia, bem adaptada às regiões tropicais. De suas sementes foi isolada uma nova proteína ligante à quitina, a Mo-CBP3, com propriedades coagulantes e atividade antifúngica contra o fitopatógeno Fusarium solani. As proteínas foram extraídas da farinha delipidada de sementes com o tampão Tris-HCl 0,05 M, pH 8,0, contendo NaCl 0,15 M. O teor médio de proteína da farinha correspondeu a 216,44 mgP/gF. O extrato total foi fracionado em albuminas e globulinas por diálise contra água seguida de centrifugação. As albuminas foram concentradas com sulfato de amônio a 90% de saturação. A F0-90% foi submetida à cromatografia de afinidade em coluna de quitina, previamente equilibrada com o tampão de extração. Foram obtidos um pico não retido e dois picos retidos, correspondentes às proteínas ligantes à quitina (CBP). O primeiro destes foi eluído com solução de N-acetil-D-glucosamina 0,1 M (PNAG), e o segundo, com ácido acético 0,05 M, pH 3,0 (PAC). PNAG foi aplicado em coluna de troca catiônica, Resource S, acoplada a um sistema de FPLC, equilibrada com tampão acetato de sódio 0,05 M, pH 5,2. Dos picos obtidos, o terceiro correspondeu à proteína Mo-CBP3 - eluída com 0,5 M de NaCl no tampão de equilíbrio. O teor protéico médio calculado para a proteína purificada Mo-CBP3 foi de 1,17 mgP/gF, representando um rendimento final de 0,54% das proteínas do extrato total. A massa molecular aparente por SDS-PAGE foi de 18,0 kDa sem o agente redutor e, de 9,0 kDa, na presença deste. O resultado sugere que Mo-CBP3 seja uma proteína dimérica formada de subunidades idênticas, unidas por pontes dissulfeto. A massa molecular de Mo-CBP3, por cromatografia de exclusão molecular, foi de 14,34 kDa, e o pI de 10,8. Trata-se de uma glicoproteína com 2,5% de carboidratos, que não apresenta atividade hemaglutinante ou quitinásica. Sua seqüência NH2-Terminal obtida foi CPAIQRCCQQLRNIQPPCRCCQ, com 22 aminoácidos, confirmando sua característica básica. Mo-CBP3 mostrou-se tão eficiente quanto o AlK(SO4)2 na capacidade de coagular matéria em suspensão na água. Mo-CBP3 foi fungicida para esporos de Fusarium solani a 0,1 mg/mL. O aquecimento da proteína a 98 °C, por 1 h, e a pré-incubação com o açúcar N-acetil-D-glucosamina, não reverteram sua ação. Mo-CBP3 mostrou-se capaz de retardar o crescimento micelial do fungo ainda na menor dose testada, 0,05 mg/mL. Mo-CBP3 é inativa contra o oomiceto Pythium oligandrum, que apresenta celulose no lugar da quitina na parede celular. A proteína foi, ainda, capaz de inibir cerca de 80% da acidificação do meio, por esporos de F. solani, induzida por glicose, o que sugere a influência de Mo-CBP3 sobre as bombas de prótons (H+ATPases) presentes na membrana celular dos esporos deste fungo.

BATISTA, A. B. Caracterização estrutural da Mo-CBP3, uma albumina 2S de sementes de Moringa oleifera lamarck e seu modo de ação contra fungos fitopatogênicos. 2013. 154 f. Tese (Doutorado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-10-01T19:25:40Z No. of bitstreams: 1 2013_tese_abbatista.pdf: 2920619 bytes, checksum: 53b139142aa57c4f39cd5e7163871406 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2014-10-06T23:10:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_tese_abbatista.pdf: 2920619 bytes, checksum: 53b139142aa57c4f39cd5e7163871406 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-06T23:10:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_tese_abbatista.pdf: 2920619 bytes, checksum: 53b139142aa57c4f39cd5e7163871406 (MD5) Previous issue date: 2013 / Mo-CBP3 is a chitin-binding protein purified from Moringa oleifera seeds that displays broad inhibitory activity against phytopathogenic fungi. In this work, we report new structural features of Mo-CBP3 that reveal a correlation between its structural stability and antifungal activity. In addition, to gain better insights into the mechanisms by which this protein acts as an antifungal agent, its ability to induce the endogenous production of reactive oxygen species and to trigger morphologic and ultrastructural alterations were analysed using Fusarium solani as a model. F. solani is an easy-to-handle and fast-developing species, making it ideal for in vitro assays, and it holds relevance as a phytopathogenic fungus that attacks economically important crop plants. To fully explore the biosafety of Mo-CBP3 as a chemical agent against fungi, its cytotoxic effects on eukaryotic cells were also investigated. Mo-CBP3 is a chitin-binding protein of 18.0 kDa, according to SDS-PAGE. However, by mass spectrometry analysis, it was observed that this protein consists of multiple isoforms with molecular masses ranging between 12.2 and 12.3 kDa. Mo-CBP3 is composed by two polypeptide chains of 5.0 and 9.0 kDa, named A and B chain, respectively. The B chain contains the following NH2-terminal sequence CPAIQRCCQQLRNIQPPCRCCQ while the A chain has a blocked NH2-terminal residue. cDNA encoding the B chain was obtained with primers of its NH2-terminal sequence. In silico analyses of nucleotide and deduced amino acid sequences confirmed the presence of isoforms and molecular mass of Mo-CBP3 and identified potential sites of O-glicosylation and phosphorilation. Moreover, similarities between Mo-CBP3 and other M. oleifera proteins as well as 2S albumins were detected. The secondary structure of Mo-CBP3 showed 30.3% α-helices, 16.3% β-sheets, 22.3% turns and 30.4% unordered forms. In the fluorescence spectroscopy, excitation of Mo-CBP3 solution at 280 nm and 295 nm gave emission maxima at 303 and 309 nm, respectively. The Mo-CBP3 structure is highly stable and retains its antifungal activity regardless of temperature and pH. Mo-CBP3 (0.05-0.1 mg/mL) was able to inhibit the conidia germination of several phytopathogenic fungi, including F. solani, F. oxysporum, Colletotrichum musae and C. gloeosporioides. Similarly, Mo-CBP3 was inhibitory to the mycelial mass development of F. solani at 0.05 mg/mL and has both fungistatic and fungicidal effects, depending on the concentration used. Binding of Mo-CBP3 to the fungal cell surface is achieved, at least in part, via electrostatic interactions, as 150 mM NaCl abolished its inhibitory effect. Mo-CBP3 induced the production of reactive oxygen species and caused in F. solani cells a marked loss of asymmetry, deformations and deep wrinkles in comparison to control cells. Disorganisation of the endomembrane system and condensation and shrinkage of cytosol with increased vacuolation and the loss of normal structure and content were also observed. Mo-CBP3 did not show haemolytic activity and it was not capable to alter de viability of both MCF-7 and Caco-2 cells, suggesting that this protein is not toxic for human cells. Based on its high stability and broad-spectrum efficacy against important phytopathogenic fungi at low inhibitory concentrations and absence of cytotoxicity to human cells, Mo-CBP3 has great potential in the development of new antifungal drugs or in transgenic crops with enhanced resistance to fungi. / Mo-CBP3 é uma proteína ligante à quitina, purificada de sementes de Moringa oleifera, com amplo espectro de ação contra fungos fitopatogênicos. No presente trabalho, novas propriedades estruturais da Mo-CBP3 são descritas, revelando correlação entre sua estabilidade estrutural e atividade antifúngica. Em adição, para melhor compreensão dos mecanismos pelos quais essa proteína exerce ação antifúngica, sua habilidade de induzir a produção endógena de espécies reativas de oxigênio e de causar alterações morfológicas e ultraestruturais foi analisada, usando Fusarium solani como modelo. F. solani é uma espécie de fácil manuseio e desenvolvimento rápido, ideal para ensaios in vitro, e de relevância, por se tratar de um fungo que ataca culturas economicamente importantes. Com foco na utilização segura da Mo-CBP3 como agente químico contra fungos, seus efeitos citotóxicos sobre células eucarióticas também foram investigados. Mo-CBP3 é uma proteína ligante à quitina de 18,0 kDa, de acordo com PAGE-SDS. Todavia, análise por espectrometria de massas revelou que essa proteína consiste de múltiplas isoformas com massas moleculares variando entre 12,2 e 12,3 kDa. Mo-CBP3 é composta por duas cadeias polipeptídicas de 5,0 e 9,0 kDa, denominadas de cadeia A e cadeia B, respectivamente. A cadeia B contém a sequência NH2-terminal representada por CPAIQRCCQQLRNIQPPCRCCQ, enquanto que a cadeia A tem o resíduo NH2-terminal bloqueado. cDNA codificador da cadeia B foi obtido com iniciadores sintetizados a partir de sua sequência NH2-terminal. Análises in silico das sequências de nucleotídeos e de aminoácidos deduzida confirmaram a presença de isoformas e massa molecular da Mo-CBP3 e identificaram sítios potenciais de O-glicosilação e fosforilação. Além disso, similaridades entre Mo-CBP3 e outras proteínas de M. oleifera, bem como com albuminas 2S, foram detectadas. A estrutura secundaria da Mo-CBP3 é composta por 30,3% α-hélices, 16,3% folhas β, 22,3% voltas e 30,4% estruturas ao acaso. Na espectroscopia de fluorescência, excitações de uma solução da Mo-CBP3 a 280 nm e 295 nm produziram emissão máxima a 303 e 309 nm, respectivamente. A estrutura da Mo-CBP3 é altamente estável, se apresentando indiferente às mudanças de temperatura e pH. Mo-CBP3 (0,05-0,1 mg/mL) se mostrou capaz de inibir a germinação de conídios de vários fungos fitopatogênicos, incluindo F. solani, F. oxysporum, Colletotrichum musae e C. gloeosporioides. Similarmente, Mo-CBP3 (0,05 mg/mL) foi capaz de inibir o crescimento micelial de F. solani e apresentou tanto efeito fungistático como fungicida, dependendo da concentração usada. Ligação da Mo-CBP3 à superfície de células fúngicas ocorre, pelo menos em parte, via interação eletrostática, já que NaCl 0,15 M aboliu seu efeito inibitório. Mo-CBP3 induziu a produção de espécies reativas de oxigênio e causou perda de assimetria e deformações em células de F. solani. Desorganização do sistema de endomembranas, condensação do citosol e aumento de vacuolização também foram observados. Mo-CBP3 não mostrou atividade hemolítica e nem foi capaz de alterar a viabilidade das células MCF-7 e Caco-2, sugerindo que essa proteína não é tóxica para células humanas. Com base na alta estabilidade e no amplo espectro de ação contra fungos fitopatogênicos em baixas concentrações e, também, na ausência de citotoxicidade para células humanas testadas, Mo-CBP3 tem grande potencial para desenvolvimento de novas drogas antifúngicas ou na produção de plantas transgênicas mais resistentes a fungos.

A própolis é um material resinoso coletado pelas abelhas de diversas partes das plantas como brotos, folhas jovens e exsudatos. É utilizado para embalsamar animais que tenham morrido dentro da colmeia, vedar as paredes e conferir proteção frente a doenças. O emprego desse produto natural com finalidade medicinal remonta a antiguidade, tendo iniciado junto com antigas civilizações como a Egípcia, Grega e Romana e perduram até os dias atuais com ampla utilização em múltiplas finalidades terapêuticas médicas e veterinárias. O objetivo desse trabalho foi avaliar o potencial antifúngico, a capacidade de remover e inibir biofilmes de espécies de Candida não-albicans de diferentes tipos de própolis e analisar a composição química da própolis obtida do Rio Grande do Sul (RS). Foram realizadas macerações e extrações sequenciais com solventes em ordem crescente de polaridade a fim de purificar os extratos. Em seguida foi feita a determinação da atividade antifúngica pelo método da microdiluição em caldo e o ensaio de remoção e inibição de biofilmes através de teste em corpo de prova (utilizando cateter como material teste). Após, foi realizada a análise química da fração diclorometano de própolis obtida do RS. De modo geral, os extratos e frações de própolis vermelha e própolis nativa do RS demonstraram forte atividade anti-Candida frente às leveduras testadas e significativa capacidade de remoção de seu biofilme aderido em cateteres, como corpo de prova. A própolis verde apresentou baixo espectro de ação antifúngica. A análise química da fração diclorometano de própolis obtida do RS levou ao isolamento dos flavonoides pinocembrina, pinostrobina e pinostrobina chalcona. Os resultados evidenciam o potencial da própolis nativa do RS e da própolis vermelha para o desenvolvimento de novos agentes antifúngicos e desinfetantes contra Candida não-albicans. / Propolis is a resinous material collected by bees from various plant parts such as buds, young leaves and exudates. It is used to embalm animals that have died inside the hive, seal the walls and confer protection against the disease. The use of this natural product with medicinal purposes dates back to antiquity, having started with ancient civilizations as the Egyptian, Greek and Roman, and lasted to the present day with extensive use in multiple medical and veterinary therapeutic purposes. The aim of this study was to evaluate the antifungal potential, the ability to remove and inhibit biofilms of Candida non-albicans of different types of propolis and analyze the chemical composition of propolis obtained from Rio Grande do Sul (RS). Maceration and sequential extractions with solvents in order of increasing polarity were performed to purify the extracts. Then the antifungal activity was determined by the method of broth microdilution testing and removal and inhibition of biofilms through test of body of proof (catheter using as test material). After, the chemical analysis of the dichloromethane fraction of propolis obtained in RS was performed. In general, the extracts and fractions of propolis of RS demonstrated strong anti-Candida activity across the tested yeasts and significant capacity removal of biofilm attached in catheter, as test body. The green propolis had low action spectrum antifungal. Chemical analysis of the dichloromethane fraction of propolis native to RS led to the isolation of the flavonoids pinocembrin, chalcone pinostrobin and pinostrobin. The results show the potential of the RS native propolis and red propolis for the development of new antifungal agents and disinfectants against non-albicans Candida.

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:24:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-11-28. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:30:40Z : No. of bitstreams: 1 000851921.pdf: 11886045 bytes, checksum: 1cf15c01de888d44bc38aeeab19c7d88 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O aumento de micoses invasivas e o desenvolvimento de mecanismos de resistência de algumas espécies de fungos, frente aos fármacos utilizados na terapia, têm sido preocupante. O tratamento antifúngico, geralmente é agressivo e o surgimento da resistência antifúngica acrescenta dificuldades adicionais no tratamento dessas infecções. Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii são os principais agentes etiológicos da criptococose, e afetam principalmente pacientes imunodeprimidos. Nesse trabalho foi realizada a caracterização morfológica e da virulência de três isolados clínicos de C. neoformans e dois isolados ambientais de C. gattii em Galleria mellonella, além da análise do nível de expressão dos genes MDR1 e AFR1 envolvidos no funcionamento de bomba de efluxo, através da quantificação relativa por PCR (polimerase chain reaction) em tempo real. Uma vez esses genes quantificados, esses isolados foram usados na prospecção de moléculas sintéticas para verificação da atividade inibitória dos genes selecionados, após o contato com as mesmas. Os isolados foram classificados como sensível (26S), sensibilidade intermediária (27I) e resistente (30R) da espécie neoformans e da espécie C. gattii, um foi resistente (118R) e outro sensível (CL), in vitro, a fluconazol. As moléculas selecionadas para os testes foram o ácido gálico e seus derivados sintéticos, e os melhores resultados observados foram obtidos a partir dos galatos de alquila G11, G12, G14, G15, G16 e G17, apresentando ótima atividade antifúngica contra os isolados testados, em especial os galatos G14, G16 e G17, obtendo ótima atividade antifúngica. O galato de n-dodecila (G16), foi selecionado para os demais testes apresentando atividade aditiva no teste de sinergismo, quando utilizado em associação com fluconazol, reduzindo os valores de CIM para o mesmo, o que mostra a possível... / The increase of invasive mycoses and the development of antifungal resistance by some fungi species have been worrying. The antifungal treatment is usually aggressive and inefficient, and the emergence of antifungal resistance increases the difficulties in treating these fungi infections.Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii are the main etiologic agents of cryptococcosis andespecially affect immunocompromised patients. In this work the Galleria mellonella, was used to perform the morphologic characterization as well as determine the virulence of three sequential clinical isolates of C. neoformansand twoisolates environmental of C. gattii. In addition, was held the analysis of genes expressions (MDR1, ERG11 and AFR1), that are involved in efflux pumps and ergosterol synthesis, by real time PCR (polimerase chain reaction) assay. After these characterizations the isolates were used in the prospecting of synthetic molecules to verify the inhibitory activity of selected genes. After incubation in vitro with fluconazole the C.neoformans isolates were classified as sensitive (26S), intermediate sensitivity (27I) and resistant (30R), and the C. gattiiisolates were resistant (118R) and the other sensitive (LC). The galic acid molecules and their synthetic derivatives were tests against C.neoformans and C. gattii isolates.The best results were obtained from alkyl gallates G11, G12, G14, G15, G16 and G17 which shows a great antifungal activity, especially G14, G16 e G17. The gallate n-dodecyl (G16), was select to others tests once presented additive activity in synergism test with fluconazole, decreasing the MIC values. The gene expression assay shows that both isolates expressed MDR1 and AFR1 (encoding efflux pumps), and the G16 was capable to inhibit these genes which makes this molecule promising for inhibiting efflux. With virulence assays using the G. mellonella was possible ...

Made available in DSpace on 2016-04-01T17:54:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-19. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:00:27Z : No. of bitstreams: 1 000859873.pdf: 2638623 bytes, checksum: 90fbdca81a4a3fccc9087d1e9cec6b1c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os homens e animais possuem uma relação milenar, em que o grupo das aves, em especial, é utilizado amplamente para diversas finalidades, tais como alimentação e companhia. As aves são retratadas como disseminadoras de patógenos ao ambiente, entretanto, o conhecimento a respeito deste papel a determinadas espécies aviárias, intimamente correlacionadas ao ser humano, são um tanto escassos. O presente trabalho teve como objetivos isolar, identificar e caracterizar o fenótipo e o genótipo de leveduras obtidas de fezes de cinco aves de cativeiro: galinha (Gallus gallus domesticus), Pássaro-do-amor (Agapornis spp), Periquito-australiano (Melopsittacus undulatus) calopsita (Nymphicus hollandicus) e canário (Serinus canaria domesticus). Para tanto, foram avaliadas 247 amostras de fezes destas cinco espécies aviárias, provenientes de sete cidades localizadas na região noroeste do estado de São Paulo, Sul de Minas Gerais e sudoeste do Mato Grosso do Sul. A coleta foi realizada com auxílio de espátulas estéreis. O material foi semeado em ágar Sabouraud dextrose e ágar semente de Níger, como titulações. A identificação das espécies baseou-se nas características macro e micromorfólogicas, e bioquímicas. Ademais, todos os isolados identificados, foram submetidos ao teste de antifungigrama por disco-difusão (CLSI, documento M44-A), frente a anfotericina B, cetoconazol, fluconazol e itraconazol. Aqueles que apresentavam padrões de suscetibilidade dose-dependente ou resistente, foram submetidos ao teste de microdiluição em caldo (CLSI, documento M27-A3). A ocorrência de leveduras se deu em 89% das amostras, variando de 77,5% a 94,0% independente da ave estudada. Foram obtidos 318 isolados, pertencentes a 29 espécies diferentes. O gênero prevalente foi Candida com 183 isolados (57,5%), seguido de Cryptococcus com 45 (14,2%), Rhodotorula com 38 (11,9%) e Trichosporon com 36 (11,3%); os demais gêneros totalizaram 16 isolados... / Men and animals have an age-old relationship, where the group of birds, in particular, is widely used for various purposes, such as food and company.Men and animals have an age-old relationship, where the group of birds in particular is widely used for various purposes, such as food and company. The birds are portrayed as disseminators of pathogens to the environment, however, knowledge about this role certain avian species, closely correlated to humans, are somewhat scarce. This study aimed to isolate, identify and characterize the phenotype and the genotype obtained yeast stool five captive birds: chicken (Gallus gallus domesticus), Love bird (Agapornis spp), Budgerigar (Melopsittacus undulatus) cockatiel (Nymphicus hollandicus) and canary (Serinus canaria domesticus). Therefore, we evaluated 247 stool samples of these five avian species from seven cities located in the northwest from State of São Paulo, southern of Minas Gerais and southwestern Mato Grosso do Sul. The collection was performed using sterile spatulas. The material was seeded in Sabouraud dextrose agar and seed Niger agar, with titrations. The identification of species was based on biochemical and macro and micromorphological characteristics. In addition, all isolates identified were submitted to antifungal susceptibility testing by disk diffusion (CLSI, M44-A), compared to amphotericin B, ketoconazole, fluaconazole and itraconazole. The occurrence of yeasts occurred in 89% of samples, ranging from 77.5% to 94.0% of the studied independently bird. There were obtained 318 isolates belonging to 29 different species. There were obtained 318 isolates belonging to 29 different species. The prevalent genus isolated was Candida with 183 (57.5%), followed by Cryptococcus with 45 (14.2%), Rhodotorula with 38 (11.9%) and Trichosporon with 36 (11.3%); other genres totaled 16 isolates (5.0%). Note that, in the number of fungal species isolated, C. albicans, C. guilliermondii, C. ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-25Bitstream added on 2014-06-13T18:45:04Z : No. of bitstreams: 1 araujo_mjam_dr_botfm.pdf: 543081 bytes, checksum: 9a4eb9b648c8708962a81d32a5de52a3 (MD5) / Própolis é composta por substâncias resinosas, coletadas de várias plantas por abelhas africanizadas, adicionando pólen, cera e secreções glandulares, enquanto para a produção de geoprópolis (Geo) as abelhas sem ferrão utilizam materiais resinosos de plantas, cera, e ainda acrescentam terra ou barro. As atividades biológicas da própolis produzida por Apis mellifera têm sido extensivamente estudadas, mas ainda são escassos os trabalhos sobre as propriedades da geoprópolis. Assim, o presente trabalho se propôs a investigar as atividades citotóxica, imunomoduladora, antibacteriana e antifúngica do extrato hidroalcoólico de geoprópolis de Melipona fasciculata Smith. Foi realizada a caracterização química da Geo, verificando que o principal grupo de compostos encontrados foram triterpenos. No tocante às células do carcinoma da laringe humana (HEp-2), Geo apresentou ação inibitória em concentrações mais elevadas; entretanto, esta ação foi somente citostática. Geo apresentou ação imunomoduladora sobre monócitos humanos, estimulando a produção das citocinas estudadas (TNF-α e IL-10). Não foi observada ação antibacteriana contra S. aureus e E. coli, havendo inibição destas linhagens somente com altas concentrações do extrato. Contudo, a associação de Geo com antibióticos favoreceu a ação do cloranfenicol sobre S. aureus. A Geo exerceu ação inibitória sobre Pythium insidiosum, tanto para o isolado obtido de caso humano como de eqüinos. Os resultados sugerem que a Geo apresentou inúmeras propriedades biológicas; contudo, sua ação é menor em comparação à própolis produzida por abelhas africanizadas, talvez devido ao baixo rendimento do extrato e sua difícil solubilidade / Propolis is composed of resinous substances collected from various plants by Africanized honeybees, adding polen, wax and bee secretions, while for geopropolis (Geo) production stingless bees use resinous materials from plants, wax, but also adding mud or clay. The biological activities of propolis produced by Apis mellifera have been extensively studied, but there are few studies on Geo properties. Thus, the present study investigated the cytotoxic, immunomodulatory, antibacterial and antifungal activities of hydroalcoholic extract of Geo produced by Melipona fasciculata Smith. The chemical characterization of Geo was performed, revealing that the main group of compounds was triterpenes. Geo exerted an inhibitory action on human larynx carcinoma cells (HEp-2) using high concentrations, however, it was only a cytostatic action. Geo exhibited immunomodulatory effects on human monocytes, stimulating cytokines production (TNF-α and IL-10). No antibacterial activity was seen against S. aureus and E. coli. However, the combination of Geo with chloramphenicol favored its effect against S. aureus. Geo exerted an inhibitory action against Pythium insidiosum, both for human or equine isolates. Data suggested that Geo presented several properties; however, its activity is lower compared to propolis produced by honeybees, perhaps due to the low yield of the extract and its difficult solubility

Submitted by JULIA DIETSCHE MONFARDINI null (juliadm@iq.unesp.br) on 2016-04-01T16:52:10Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Julia Dietsche Monfardini.pdf: 10246419 bytes, checksum: dff6716d7f1e0f36c408ba7afeff1e25 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-04-05T18:12:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 monfardini_jd_me_araiq_par.pdf: 807325 bytes, checksum: 9a9635608b6709f23a60f0fd6f5e676e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-05T18:12:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 monfardini_jd_me_araiq_par.pdf: 807325 bytes, checksum: 9a9635608b6709f23a60f0fd6f5e676e (MD5) Previous issue date: 2016-03-10 / Os micro-organismos têm demonstrado serem valiosas fontes de princípios ativos de uso clínico, no qual a penicilina é o exemplo mais conhecido de metabólito secundário, de importância medicinal, produzido por fungos. A espécie vegetal Eugenia jambolana Lam., popularmente conhecida como Jambolão, é utilizada na medicina popular brasileira, principalmente no tratamento de diabetes. O fungo Botryosphaeria parva, isolado das folhas da E. jambolana (L.) e codificado como Ej_F01, foi cultivado em escala ampliada em três meios de cultivo: Czapek®, PDB e Milho. Após o período de fermentação do endófito no meio de milho, foi feita uma extração direta com MeOH, seguida de filtração e evaporação do solvente. O extrato obtido foi solubilizado em AcOEt e fez-se três partições líquido-líquido com H2O, após a evaporação do solvente orgânico, o extrato foi dissolvido em CH3CN e foi feita uma nova partição líquido-líquido com Hexano, após a evaporação da CH3CN, foi obtido o extrato de interesse. Após o período de fermentação do endófito nos meios líquidos (PDB e Czapek®), a suspensão micelar foi filtrada a pressão reduzida, separando os micélios dos meios fermentados. Em seguida, os filtrados aquosos foram submetidos a três partições líquido-líquido com AcOEt, e após a evaporação do solvente orgânico, foram obtidos os extratos brutos de interesse. Todos os extratos foram fracionados utilizando técnicas cromatográficas, como Cromatografia em Coluna e/ou Cromatografia Líquida de Alta Eficiência preparativa. Após o fracionamento dos extratos brutos, foi possível obter sete substâncias oriundas do extrato do milho, seis substâncias do extrato do Czapek®, e uma do extrato de PDB, que foram submetidas a análises espectrométricas (EM, RMN de 1H, 13C, 1D e 2D) para a determinação/identificação estrutural. As substâncias 05, 08, 09 e 11 foram identificadas como 5-hidroximeleina, rel. (3S, 4S)-4-hidroximeleina, meleina e rel. (3S, 4R)-4-hidroximeleina, respectivamente, pertencentes à classe das isocumarinas; as substâncias 01, 03, 06 e 07 foram identificadas como botryosphaerin A, 13,14,15,16-tetranorlabd-7-eno-19,6β:12,17-diolídeo, CJ-14445 e oidiolactona E, respectivamente, pertencentes à classe dos diterpenos tetranorlabdanos; a substância 12 foi identificada como botryosphaerona D, pertencente à classe das naftalenonas. A substância 02, inédita, foi nomeada como rel. (4S, 5R, 6R, 10S)-18-hidroxi-13,14,15,16-tetranorlabd-7,9-dieno-19,6β:12,17-diolídeo, codificada como botryosphaerin I. Os estudos relacionados ao B. parva têm como finalidade verificar sua produção metabólica em diferentes meios de cultivo, bem como a avaliação do potencial biológico dos extratos brutos, frente aos ensaios antioxidante, antifúngico e anticolinesterásico. / Microorganisms have proven to be valuable sources of active principles for clinical use, wherein the penicillin is the best known example of a secondary metabolite of medicinal importance, produced by fungi. The plant species Eugenia jambolana Lam., commonly called Black Plum, is used in traditional Brazilian medicine, especially in the treatment of diabetes. The Botryosphaeria parva fungus, isolated from leaves of E. jambolana (L.) encoded as Ej_F01, was grown on an enlarged scale in three different culture media: Czapek®, PDB and corn. After the fermentation period in the corn media, a direct extraction was done with MeOH followed by filtration and evaporation of the solvent. The extract was disolved in AcOEt and made three liquid-liquid partition with H2O, after evaporation of the organic solvent, the extract was dissolved in CH3CN and was made a new liquid-liquid partition with Hexane, after evaporation of the CH3CN, it was obtained extract of interest. After the fermentation period in liquid media (PDB and Czapek®), the micellar suspension was filtered under reduced pressure, separating the mycelium from the fermented broth. Then, the aqueous filtrates were subjected to three liquid-liquid partition with AcOEt, and after evaporation of the organic solvent, there were obtained the crude extracts of interest. All extracts were fractionated using chromatographic techniques such as column chromatography and/or preparative High Performance Liquid Chromatography efficiency. After the fractioning of crude extracts, it was possible to obtain seven substances derived from corn extract, six substances obtained from Czapek extract, and a substance obtained from the PDB extract, which were submitted to spectrometric analysis (MS-ESI, NMR 1H, 13C, 1D and 2D) for determining and structural identification. The substances 05, 08, 09 and 11 were identified as 5-hydroxymelein, rel. (3S, 4S)-4-hydroxymelein, Melein and rel. (3S, 4R)-4-hydroxymelein, respectively, belonging to the class of isocoumarins; the substances 01, 03, 06 and 07 were identified as botryosphaerin A, 13,14,15,16-tetranorlabd-7-ene-19,6β:12,17-diolide, CJ-14445 and oidiolactone E, respectively, belonging to the class of tetranorlabdanes diterpenoids, and substance 12 was identified as botryosphaerone D, belonging to the class of naftalenones. A new tetranorlabdane diterpenoid was obtained, substance 02, named rel. (4S, 5R, 6R,10S)-18-hydroxy-13,14,15,16-tetranorlabd-7,9-dien-19,6β:12,17-diolide and encoded botryosphaerin I. These studies related to the B. parva are intended to verify your metabolic production in different culture media as well as the evaluation of the biological potential of extracts compared to antioxidant, antifungal and anticholinesterase trials.