OLIVEIRA, Lis Christina de. Otite média e externa bilateral em cães : estudo comparativo do perfil microbiológico e susceptibilidade a antimicrobianos das espécies prevalentes. 2004. 114 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina. Fortaleza, 2004. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-01-05T12:34:31Z No. of bitstreams: 1 2004_dis_lcoliveira.pdf: 1016812 bytes, checksum: baea13a4b2d9667cf7571570c0078119 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-02T16:25:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2004_dis_lcoliveira.pdf: 1016812 bytes, checksum: baea13a4b2d9667cf7571570c0078119 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-02T16:25:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2004_dis_lcoliveira.pdf: 1016812 bytes, checksum: baea13a4b2d9667cf7571570c0078119 (MD5) Previous issue date: 2004 / Otitis results from auricular inflammation and represents 8-15% of all cases received in the veterinarian practices. This study was done to outline and compare the isolation profile in external and middle ears from dogs with otitis. Between August/2003 and March/2004, 64 dogs with both otitis externa and media and 50 dogs with bilateral otitis externa were studied. Fifty dogs with healthy ears were used as control group. The collection was done ate the Zoonosis Control Center in Fortaleza-CE and the microbiological analysis at the Microbiological Center - Department of Pathology and Legal Medicine-UFC. Samples from the external ears were collected with sterile swabs and the ones from the middle ears by osteotomy of the tympanic bulla. The microrganisms were cultured and identified according to methods previously described and susceptibility tested by agar diffusion method (NCCLS). In otitic dogs the most frequent alterations were: lesions of the pinna (72%), local pain (12%) and alteration of the pinna position (12%). Sixty-two per cent of the dogs showed entire tympanic membrane with some structural alteration. Microbiogical growth was seen in 48% of the samples fromdogss with otitis media, and the most frequent isolates were: Estafilococos positive-coagulase (62.5%), non-fermentative Gram-negative (10%), Enterobacteriaceae (5%) and Candida albicans (5%). It was observed that there was an increased number and variety of species isolated in external ears comparaed to middle ears. In samples from external ears, the following predominated: Bacillus sp. (27.1%), M. pachydermatis (23.4%) e S. intermedius (21.8%). The most frequent species isolated in dogs with bilateral otitis externa were: Bacillus sp. (27.9% e 31%), M. pachydermatis (25.9% e 24%), S. intermedius (23.8% e 24.6%) e Enterobactérias (6% e 6.1%). There was a significative difference (p<0.0001) in the way the isolates were associated, which showed the individuality from each ear in bilateral otitis externa. In this study, no anaerobic microrganisms were isolated. S. intermedius strains (n=83) showed intermediate resistance to most of the cntimicrobials tested and high resistance to penicillin (36.1%), ampicillin (27.7%), tetracyclin (27.7%), erythromycin (14.5%) and clindamycin (12.0%). These results describe tha variety of bacterial and fungal isolates associated with canine otitis and reveal the need to adopt systematic procedures for the diagnosis and treatment of dogs with otitis. / A otite resulta da inflamação do conduto auditivo e representa 8-15% dos casos na prática veterinária. Com o objetivo de delinear e comparar o perfil de isolamento de microrganismos a partir dos ouvidos médio e externo de cães com otite foi realizado este estudo. No período de agosto/2003 a março/2004 foram analisados 64 cães com otite externa e média associados e 50 cães com conduto auditivo hígido. A coleta de amostras foi realizada no Centro de Controle de Zoonoses de Fortaleza-CE e a análise microbiológica no Setor de Microbiologia do Depto. de Patologia e Medicina Legal/UFC. As amostras do ouvido externo foram coletadas com auxílio de swab estéril eas de ouvido médio através da técnica de osteotomia da bula timpânica. A cultura e identificação de microrganismos foram realizadas segundo metodologia estabelecida e os testes de susceptibilidade através do método de difusão em ágar gel (NCCLS). Em cães otopatas as alterações mais frequentes foram: escoriações no pavilhão auricular (72%), otalgia (12%) e alteração no posicionamento do pavilhão (12%). Em 62% dos animais a membrana timpânica se encontrava íntegra, embora mostrasse alguma alteração estrutural. A cultura foi positiva em 48% das amostras de ouvido médio e os agentes isolados com maior frequência foram: Estafilococos coagulase-positiva (62,5%), bacilos Gram-negativos não fermentadores (10%), enterobactérias (5%) e Candida albicans (5%). Foi verificada diferença no número e variedade de espécies isoladas do ouvido externo quando comparado ao ouvido médio, onde predominaram: Bacillus sp. (27,1%), M. pachydermatis (23,4%) e S. intermedius (21,8%). Os agentes mais isolados nos ouvidos externos de cães com otite bilateral foram: Bacillus sp. (27,9% e 31%), M. pachydermatis (25,9% e 24%), S. intermedius (23,8% e 24,6%) e Enterobactérias (6% e 6,1%). Observou-se diferença significativa (p<0,0001) na forma como os agentes se associam, revelando a individualidade de cada conduto auditivo nesses quadros. A presença de bactérias anaeróbias estritas não foi observada. Cepas de S. intermedius (n=83) mostraram resistência intermediária à maioria dos antimicrobianos testados e altos níveis de resistência a: penicilina (36,1%), ampicilina (27,7%), tetraciclina (27,7%), eritromicina (14,5%) e clindamicina (12%). Os resultados obtidos descrevem a variedade de agentes bacterianos e fúngicos associados aos quadros de otite canina e sugerem a necessidade de se adotar procedimentos sistemáticos e direcionados para o diagnóstico e tratamento de otopatias em cães.

As principais causas de morbidade e mortalidade em cirurgia biliar relacionam-se a complicações sépticas. Estas associam-se à presença de bife colonizada por bactérias. Pacientes portadores de patologias biliares apresentam colonização bacteriana da bile em uma prevalência que varia de 11 a 1 00°/o. A maior parte dos estudos identifica uma prevalência de colonização da bile em torno de 1/3 dos casos. As espécies bacterianas mais freqüentemente isoladas são as da flora entérica, destacando-se a Escherichia co/i, Klebsiella sp e Streptococcus faeca/is. As bactérias anaeróbicas são encontradas em zero a 40°/o dos pacientes, sendo as mais prevalentes dos gêneros Bacteroides e Clostridium. No presente estudo, foram coletadas biópsias hepáticas intra-operatórlas com agulha de Vinn Silvermann e material denominado de aspirado hepático, constituído do sangue aspirado pela agulha após a retirada do fragmento da biópsia. O estudo visa identificar a acurácia da cultura bacteriana destes materiais no diagnóstico da colonização bacteriana da bile. A cultura da bile do colédoco, coletada por cateterização transcística da via biliar, foi escolhida como padrão-ouro. Alem destas, foram realizadas culturas de bile da vesícula biliar e sangue periférico. Foram, também, coletados dados de idade, sexo, diagnóstico pré-operatório, fatores de risco para colonização biliar e uso de antibióticos profiláticos. A população amestrada foi de pacientes submetidos a cirurgia biliar no Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Foram excluídos pacientes em uso de antibióticos em regime terapêutico, uso de corticóides ou imunossupressores, presença de patologias parenquimatosas hepáticas e patologias infecciosas abdominais fora das vias biliares. As culturas aeróbicas foram feitas usando meio de agar-tripnase .. soja enriquecido com sangue humano desfibrinado e agar-MacConkey, incubados por 24 horas. As cultura anaeróbicas foram semeadas em caldo de tioglicolato enriquecido com vitamina K-hemina 1 o/o, agar-Brucella e agar-fenil-etanol enriquecidos com sangue de carneiro desfibrinado e vitamina K-hemina. o tempo de incubação foi de 48 horas. Entraram no estudo 57 pacientes, sete foram excluídos, permanecendo 50. A média de idade foi de 45,1 anos (:!:_15,3). Quarenta e oito pacientes tinham o diagnóstico pré-operatório de colecistite crônica, sendo 13 deles associada à coledocolitíase. Havia um caso de colecistite aguda e um de estenose pós-cirúrgica de via biliar. O fator de risco para colonização da bile de maior prevalência foi a coledocolitíase, com 13 pacientes. Vinte e nove pacientes não apresentavam nenhum fator de risco. Foram isoladas bactérias na bile do colédoco de nove pacientes. As espécies encontradas foram: Klebsiella pneumoniae, Escherichia co/i, Streptococcus faecalis, Enterobacter c/oacae, Klebsiella oxytoca, Streptococcus a-haemolitico. Na bile da vesícula biliar, foram isoladas bactérias em 7 pacientes: Klebsiella pneumoniae, Escherichia co/i, Streptococcus faeca/is, Enterobacter cloacae. Houve concordância entre os resultados da bile do colédoco e da vesícula biliar em 97,7% dos casos. A cultura da biópsia hepática foi positiva em dois casos. Em um, foi isolado Staphilococcus epidermidis, onde provavelmente houve contaminação externa. No outro, foi isolada Klebsiella pneumoniae que também havia sido encontrada na bile do colédoco do mesmo paciente. Neste paciente foi isolada Klebsiella no aspirado hepático. Foi o único caso de cultura positiva no aspirado hepático. Foi o único caso de cultura positiva no aspirado hepático. A cultura da biópsia hepática teve uma sensibilidade de 0,11, especificidade de 0,98, valor preditivo positivo de 0,50 e valor preditivo negativo de 0,83. A cultura do aspirado hepático apresentou uma sensibilidade de O, 11, especificidade de 1 ,O , valor preditivo positivo de 1 ,O e valor preditivo negativo de 0,84. Conclui-se que a cultura da biópsia e aspirado hepáticos com a técnica bacteriólogica empregada no estudo demonstrou uma acurácia diagnóstica baixa. A sua utilidade clínica na identificação de pacientes portadores de bactérias na bile é limitada. / The main causes of morbidity and mortality in biliary tract surgery are related to septic complications. Those relate to the presence of bile colonized by bacteria. Patients with biliary pathology show bacteria colonization of bile in a prevalence which varies from 11 to 100°/o. The majority of the studies identify a prevalence of colonization of bile about 1/3 of the cases. lhe bacterial species most frequently isolated are those of enteric flora, distinguishing the Escherichia co/i, Klebsiella sp and Streptococcus faecallis. The anaerobic bacteria are found in zero to 40o/o of the cases, being the most prevailing of the species Bactoides and Clostridium. In the present study there were collected hepatic intra-surgical biopsies with a needle of Vinn Silvermann and material named hepatical aspirated, made of aspirated blood through the needle after the removal of the pieces of the biopsy. lhe study aims to identify the accuracy of the bacterial culture from those substances in the diagnostic of the bacterial colonization of the bile. The culture of the bife from the common duct, collected by cystic duct probing, was chosen as the gold-standard. Besides those, there were made cultures o f bile o f the gallbladder and peripheral blood. lt was also collected data of age, sex, prcoperativo diagnosis, risk factors to biliary tract colonization and the use of prophylactic antibiotics. The sampled population was of patients undergoing on biliary tact surgery at the "Hospital de Clínicas de Porto Alegre". Patients in therapeutical use of antibiotics, using corticoesteroids or immunossupressive drugs, with hepato-cellular pathologies and abdominal infectious pathologies out · of the biliary tract were excluded. The aerobic cultures were made by the use of agar-tripnase-soy improved by desfibrinated human blood and agar-McConkey, incubated for 24 hours. The anaerobic cultures were sowed in a broth of tioglicolatus improved by vitamins K-hemine 1o/o, agar-Brucella and agar-fenil-ethanol improved with desfibrinated sheep blood and vitamin K-hemine. The time of incubation was of 48 hours. From 57 patients that begun the study, 7 were excluded, remaining 50. The age average was of 45,7 years old (± 15,3). Forty-eight patients had the preoperative diagnosis of chronic cholecystitis, 13 of them being related to choledocholithiasis. There was a case of acute cholecystitis and one of postoperative biliary tract stenosis. The risk factor to bile colonization of major prevalence was the choledocholithiasis (13 patients). Twenty-nine patients did not show any risk factor. They were isolated bacteria in the common duct bile of nine patients. The species found were Klebsiella penumoniae, Eschericha coli, Streptococcus faecalis, Enterobacter cloacae, Klebsiella oxytoca, Streptococcus a-haemolitico. In the gallbladder bile bacteria were isolated in 7 patients: Klebsie/la pneumoniae, Escherichia co/i, Streptococcus faecalis, Enterobacter cloacae. There was agreement between the results of the common duct and gallbladder bile in 97,7% o f the cases. The culture o f the hepatic biopsy was positiva in two cases. In one, it was isolated Staphi/ococcus epidermidis , were probably there was externai contamination. In the other one, it was isolated Klebsiella penumoniae, which had also been found in the common duct bile of the same patient. In that patient it was isolated Klebsiella in the hepatic aspirated. lt was the only case of positive culture in the hepatic aspirated. The hepatic biopsy culture had a sensibility of O, 11, a specificity of 0,98, a predictive positiva value of 0,50 and a predictive negative value of 0,83. The hepatic aspirated culture showed a sensibility of O, 11, a specificity of 1 ,O, a predictive positive value of 1 ,O and a predictive negative value of 0,84. We concluded that the culture of the biopsy and hepatic aspirated, with the bacteriological technique used in the study, showed a low diagnostic accuracy. lt has a low clinicai use in the identification of patients with biliary tract colonization.

Made available in DSpace on 2015-07-13T12:10:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-04. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-13T12:25:38Z : No. of bitstreams: 1 000820042_20170105.pdf: 432472 bytes, checksum: 08e4755bdb655578ffb7bb04d02a9c1b (MD5) Bitstreams deleted on 2017-01-06T13:21:19Z: 000820042_20170105.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-01-06T13:22:02Z : No. of bitstreams: 1 000820042.pdf: 1098934 bytes, checksum: 899c7c3dd733d16d32b9ed613fb157f1 (MD5) / O uso de novas tecnologias como, por exemplo, peptídeos sintéticos para o desenvolvimento de novas drogas é uma estratégia promissora no campo da biotecnologia. Peptídeos com efeito antimicrobiano derivados de toxinas bacterianas intracelulares, produzidas por sistemas de morte pós-segregacional (PKS) tais como CcdB são exemplos dessa estratégia. Resultados promissores têm sido obtidos em relação à inibição da atividade das enzimas bacterianas topoisomerase IV e DNA girase por derivados peptídicos de toxinas antimicrobianas, isto pode ser visto através de ensaios in vitro, como eletroforese em gel de agarose. Porém, drogas com estrutura peptídica derivadas de toxinas bacterianas apresentam sérios problemas na aplicação terapêutica, pois, têm baixa solubilidade e difícil permeabilidade em membranas bacterianas. Portanto, o objetivo desse estudo consiste no desenvolvimento e aprimoramento de sistemas nanoestruturados (lipossomas) que permita a encapsulação de análogos peptídicos da toxina CcdB e sua consequente translocação no citosol bacteriano, permitindo que os mesmos atinjam seus alvos celulares, que são as enzimas bacterianas DNA girase e Topoisomerase IV. Lipossomas do tipo SUV (Small unilamellar vesicles) de 100 nm de diâmetro, foram preparados pela técnica de extrusão e evaporação variando-se a composição química de suas formulações. Desta forma, foi avaliada a eficiência de encapsulação dos peptídeos através de técnicas de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e espectroscopia de UV-Vis e fluorescência. Após testes de eficiência de encapsulação, os lipossomas contendo os análogos peptídicos da toxina CcdB encapsulados, foram submetidos a ensaio de inibição de crescimento em meio líquido para diferentes espécies bacterianas. Os resultados mostraram que os valores de eficiência para o análogo CdBSG-2 ficaram entre 62 e 75% e... / The new technologies, like synthetic peptides, for the development new drugs is a promising in biotechnology. Peptides with antibiotic properties, from Intracellular toxins produced by systems of post-segregational killer (PSK) in bacteria such as CcdB are recent examples of this strategy. Promising results have been obtained with respect to inhibition of the activity of the bacterial enzyme DNA gyrase and topoisomerase IV by toxins antimicrobial peptide derivatives that can be seen through in vitro assays such as electrophoresis in agarose gel. However, drugs formed by peptide structures, based on bacterial toxins, have been shown serious problems in therapeutic application due to their poor solubility and low biological membrane permeabilization. The aim of this study is the development and enhancement of nanostructured systems (liposomes) that allows the encapsulation of analogues peptides based on CcdB toxin and its consequent bacterial translocation in the cytosol, allowing them to reach their cellular targets, which are bacterial enzymes DNA gyrase and topoisomerase IV. Liposomes of the SUV type (Small unilamellar vesicles) of 100 nm diameter were prepared by extrusion and evaporation technique by varying the chemical composition of their formulations.Thus, we evaluated the encapsulation efficiency of the peptides through techniques of high performance liquid chromatography (HPLC) and UV-Vis spectroscopy and fluorescence. After efficiency of encapsulation tests the liposomes containing the peptides have been tested for growth inhibition in a liquid medium to different bacterial species. The results showed that the efficiency values for the analog CdBSG-2 were between 62 and 75% and the CcdBET-2 analogue values were between 52 and 71% Furthermore, the results of bacterial growth inhibition tests showed liposomal system that is effective, to inhibit 82% of gram positive Staphylococcus aureus...

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-18Bitstream added on 2015-03-03T12:07:12Z : No. of bitstreams: 1 000811933_20151218.pdf: 96939 bytes, checksum: 04a99a8168a4d1d45d4874efe4f2b497 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-12-18T13:57:58Z: 000811933_20151218.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-18T13:58:36Z : No. of bitstreams: 1 000811933.pdf: 896821 bytes, checksum: d95843628c2f7f0cc36797c46e5efaf7 (MD5) / Bacillus thuringiensis é uma bactéria que pode conferir patogenicidade a uma ampla variedade de insetos, e que possui fatores associados à mortalidade de insetos por B. thuringiensis, que foram identificados e são utilizados no controle de insetos-praga como, por exemplo, as toxinas Cry, Vip e Cyt. Novos genes de B. thuringiensis que possam estar envolvidos no processo de patogenicidade a insetos têm sido identificados, entre estes, as quitinases. Enzimas capazes de hidrolisar as ligações glicosídicas entre as unidades de N-acetil-glicosamina da quitina, e aparecem como uma interessante opção por também mostrarem potencial para serem utilizadas no controle de pragas. No presente trabalho, realizou-se o isolamento e a caracterização de um gene de quitinase do isolado de B. thuringiensis I_555 (chi_I555) e a produção e caracterização parcial da quitinase (Chi_I555). A análise de chi_I555 indicou uma fase de leitura aberta de 2025 pares de bases que codificam uma proteína com 674 aminoácidos e peso molecular de 74,24 kDa. Análises bioinformáticas indicaram a presença de um sítio ativo de quitinase, de um domínio de fribronectina e de um domínio ligante de quitina na proteína Chi_I555. A expressão heteróloga de Chi_I555 resultou na produção de uma quitinase ativa sobre o substrato “Chitin Azure” em uma faixa ótima de pH próxima do neutro. A proteína Chi_I555 utilizada neste estudo é altamente promissora para o uso em construções de plantas geneticamente modificadas / Bacillus thuringiensis is a bacterium that can confer pathogenicity to a wide variety of insects, and has associated with mortality of insects by B. thuringiensis factors that have been identified and are used to control insect pests such as the Cry toxins, Vip and Cyt. New genes of B. thuringiensis that may be involved in the pathogenic process of insects have been identified among these chitinases. Enzymes capable of hydrolyzing glycosidic linkages between the units of N-acetyl-glucosamine from chitin, and appear as an interesting option to also show potential for use in pest control. In this study, we carried out the isolation and characterization of a chitinase gene from B. thuringiensis isolate I_555 (chi_I555) and the production and partial characterization of a chitinase (Chi_I555). Chi_I555 analysis indicated an open reading frame of 2025 base pairs encoding a protein of 674 amino acids and a molecular weight of 74.24 kDa. Bioinformatics analysis indicated the presence of an active site of chitinase, a fribronectin domain and a chitin binding domain of the protein Chi_I555. Heterologous expression of Chi_I555 resulted in the production of an active chitinase on the substrate Chitin Azure in a great range of pH close to neutral. The Chi_I555 protein used in this study is highly promising for use in construction of genetically modified plants

Ornithobacterium rhinotracheale é uma bactéria associada com doença respiratória, decréscimo no crescimento, condenação de carcaças e mortalidade em galinhas e perus. Esta bactéria tem sido isolada em vários países e, recentemente, foi isolada no Brasil pelo nosso grupo que também estabeleceu um protocolo de reação em cadeia da polimerase (PCR) para a sua detecção e identificação e determinou a prevalência de anticorpos contra esta bactéria em plantéis comerciais de frangos e de matrizes da Região Sul do Brasil. O presente trabalho teve o objetivo de caracterizar isolados de O. rhinotracheale através de sorotipificação, resistência a antimicrobianos e single-enzyme amplified fragment length polymorphism (SAFLP). Vinte e sete isolados foram compatíveis com esta espécie através de isolamento em ágar sangue com gentamicina, coloração de Gram, teste de aglutinação em lâmina e reação em cadeia da polimerase. Dezenove isolados foram classificados como sorotipo A, seis não puderam ser sorotipificados com o painel de soros existentes e dois pertenceram ao sorotipo C. Vinte e cinco isolados foram sensíveis à norfloxacina, amoxicilina, doxiciclina, lincomicina e cefalotina, dois isolados foram resistentes à neomicina e 18 foram resistentes à sulfametoxazol/trimetoprima. Na análise de SAFLP, 22 isolados apresentaram padrão idêntico e os cinco isolados restantes foram classificados em cinco padrões distintos. Os resultados da sorotipificação indicaram que o sorotipo A de O. rhinotracheale é predominante em criações comerciais no Brasil. Os isolados brasileiros foram sensíveis à maioria dos antimicrobianos testados. O poder discriminatório do teste de suscetibilidade a antimicrobianos foi maior do que a sorotipificação e SAFLP, porém o método de SAFLP gerou um maior número de padrões, sugerindo que possa ser utilizado como ferramenta em estudos epidemiológicos.

Orientador: Saulo Santesso Garrido / Banca: Marlus Chorilli / Banca: Wilton Rogério Lustri / Resumo: O uso de novas tecnologias como, por exemplo, peptídeos sintéticos para o desenvolvimento de novas drogas é uma estratégia promissora no campo da biotecnologia. Peptídeos com efeito antimicrobiano derivados de toxinas bacterianas intracelulares, produzidas por sistemas de morte pós-segregacional (PKS) tais como CcdB são exemplos dessa estratégia. Resultados promissores têm sido obtidos em relação à inibição da atividade das enzimas bacterianas topoisomerase IV e DNA girase por derivados peptídicos de toxinas antimicrobianas, isto pode ser visto através de ensaios in vitro, como eletroforese em gel de agarose. Porém, drogas com estrutura peptídica derivadas de toxinas bacterianas apresentam sérios problemas na aplicação terapêutica, pois, têm baixa solubilidade e difícil permeabilidade em membranas bacterianas. Portanto, o objetivo desse estudo consiste no desenvolvimento e aprimoramento de sistemas nanoestruturados (lipossomas) que permita a encapsulação de análogos peptídicos da toxina CcdB e sua consequente translocação no citosol bacteriano, permitindo que os mesmos atinjam seus alvos celulares, que são as enzimas bacterianas DNA girase e Topoisomerase IV. Lipossomas do tipo SUV ("Small unilamellar vesicles") de 100 nm de diâmetro, foram preparados pela técnica de extrusão e evaporação variando-se a composição química de suas formulações. Desta forma, foi avaliada a eficiência de encapsulação dos peptídeos através de técnicas de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e espectroscopia de UV-Vis e fluorescência. Após testes de eficiência de encapsulação, os lipossomas contendo os análogos peptídicos da toxina CcdB encapsulados, foram submetidos a ensaio de inibição de crescimento em meio líquido para diferentes espécies bacterianas. Os resultados mostraram que os valores de eficiência para o análogo CdBSG-2 ficaram entre 62 e 75% e... / Abstract: The new technologies, like synthetic peptides, for the development new drugs is a promising in biotechnology. Peptides with antibiotic properties, from Intracellular toxins produced by systems of post-segregational killer (PSK) in bacteria such as CcdB are recent examples of this strategy. Promising results have been obtained with respect to inhibition of the activity of the bacterial enzyme DNA gyrase and topoisomerase IV by toxins antimicrobial peptide derivatives that can be seen through in vitro assays such as electrophoresis in agarose gel. However, drugs formed by peptide structures, based on bacterial toxins, have been shown serious problems in therapeutic application due to their poor solubility and low biological membrane permeabilization. The aim of this study is the development and enhancement of nanostructured systems (liposomes) that allows the encapsulation of analogues peptides based on CcdB toxin and its consequent bacterial translocation in the cytosol, allowing them to reach their cellular targets, which are bacterial enzymes DNA gyrase and topoisomerase IV. Liposomes of the SUV type ("Small unilamellar vesicles") of 100 nm diameter were prepared by extrusion and evaporation technique by varying the chemical composition of their formulations.Thus, we evaluated the encapsulation efficiency of the peptides through techniques of high performance liquid chromatography (HPLC) and UV-Vis spectroscopy and fluorescence. After efficiency of encapsulation tests the liposomes containing the peptides have been tested for growth inhibition in a liquid medium to different bacterial species. The results showed that the efficiency values for the analog CdBSG-2 were between 62 and 75% and the CcdBET-2 analogue values were between 52 and 71% Furthermore, the results of bacterial growth inhibition tests showed liposomal system that is effective, to inhibit 82% of gram positive Staphylococcus aureus... / Mestre

Orientador: Márcio Garcia Ribeiro / Coorientador: José Paes de Almeida Nogueira Pinto / Banca: Antonio Carlos Paes / Banca: Hélio Langoni / Banca: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza da Cunha / Banca: Nilson Roberti Benites / Resumo: O presente estudo avaliou a qualidade microbiológica, as características físicoquímicas e a presença de resíduos de antimicrobianos em leite de mulheres, vacas e cabras, bem como investigou a multirresistência bacteriana à antimicrobianos e a detecção de genes e produção de toxinas em linhagens de Staphylococcus spp. Foram colhidas 240 amostras de leite de mulheres encaminhadas ao Banco de Leite Humano (BLH) de Botucatu, SP, 200 amostras de leite de vacas com mastite e 200 de vacas sem mastite. Iguais quantidades de amostras de leite foram colhidas de cabras com e sem mastite. Dentre os tetos amostrados de vacas e cabras com mastite, 85,50% e 97,50% respectivamente acusaram mastite subclínica no CMT. A mastite clínica foi observada em 14,50% dos tetos de vacas e 2,50% dos tetos de cabras amostrados. A presença de micro-organismos em leite de vacas e cabras sem mastite foi verificada em cerca de 25,00% das amostras de leite testadas, alertando para a presença de animais portadores de patógenos no rebanho. A acidez dornic do leite de mulheres revelou que 95,42% encontraram-se dentro dos limites aceitáveis pela Rede Nacional de BLH. O aporte calórico do leite humano (LH) apresentou ampla variação nos teores de creme, gordura e valor energético. A acidez dornic do leite de vacas e cabras com e sem mastite apresentaram ampla variação indicando que outros fatores, além da contaminação microbiana do leite, podem interferir nos índices de acidez titulável. Staphylococcus spp. e Enterobacter spp. foram os isolados mais frequentes em amostras de LH. Streptococcus spp., Staphylococcus spp. e Corynebacterium bovis foram os micro-organismos mais comumente... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present study evaluated the microbiological quality, the characteristics physicist-chemistries and the presence of antimicrobials residues in milk of women, cows and goats, as well as investigated the bacterial multidrug resistance and the detection of genes and/or toxin production in Staphylococcus spp. strains. Was collected 240 milk samples from women referred to the Human Milk Bank (HMB) in Botucatu, 200 milk samples from cows with mastitis and 200 cows without mastitis. Equal amounts of milk samples were collected from goats with and without mastitis. Among the sampled cows and goats teats with mastitis, 85.50% and 97.50% respectively accused subclinical mastitis on CMT. Clinical mastitis was observed in 14.50% of cows teats and 2.50% of the sampled goats teats. The presence of microorganisms in milk from cows and goats without mastitis was found in about 25.00% of the milk samples tested, warning of the presence of pathogens from animals in the herd. Dornic acidity of woman's milk revealed that 95.42% were within acceptable limits by the National Network of HMB. Calorie intake of human milk (HM) showed wide variation in the amounts of cream, fat and energy value. Dornic acidity of cows and goats milk with and without mastitis showed wide variation indicating that other factors in addition to microbial contamination of milk can interfere with acidity indices. Staphylococcus spp. and Enterobacter spp. were the most frequently isolated in samples of human milk. Streptococcus spp., Staphylococcus spp. and Corynebacterium bovis were the microorganisms most commonly isolated in milk cows with and without mastitis. In milk samples from goats with and without... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-04-26T22:46:21Z No. of bitstreams: 1 GilmaraCelliMaiaDeAlmeida_TESE.pdf: 8599552 bytes, checksum: 6bc98b455dfe71915a9279a5198ff726 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-04-26T22:53:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 GilmaraCelliMaiaDeAlmeida_TESE.pdf: 8599552 bytes, checksum: 6bc98b455dfe71915a9279a5198ff726 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-26T22:53:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GilmaraCelliMaiaDeAlmeida_TESE.pdf: 8599552 bytes, checksum: 6bc98b455dfe71915a9279a5198ff726 (MD5) Previous issue date: 2014-10-17 / As infec??es por Staphylococcus t?m sido cada vez mais evidentes nas ?ltimas d?cadas, sendo este relevante em infec??es humanas, principalmente em ?mbito hospitalar. Os Staphylococcus, especialmente S. aureus e S. aureus resistente ? meticilina (MRSA), destacam-se como colonizadores de feridas infectadas, as quais s?o fontes potenciais de contamina??o cruzada em ambiente hospitalar. Assim, objetivou-se conhecer a preval?ncia de Staphylococcus spp. isolados de feridas em pacientes internados, verificar associa??o de fatores sociodemogr?ficos, relativos ? les?o e a interna??o com a presen?a de S. aureus e caracterizar os pacientes com presen?a de MRSA em ferida infectada e com coloniza??o na mucosa nasal. Tamb?m foi objetivo da pesquisa identificar, a partir de prontu?rios m?dicos, a preval?ncia de estafilococcias e estreptococcias, verificando associa??o de fatores cl?nicos e relativos ? interna??o com o tipo de infec??o. A pesquisa foi dividida em duas etapas. Primeiramente, foram investigados os prontu?rios m?dicos dos pacientes internados no Hospital Regional do Serid? com estafilococcias ou estreptococcias entre 2008 e 2010 (n= 315), obtendo-se a preval?ncia das referidas infec??es e a identifica??o de fatores como idade, sexo, sinais locais e sist?micos, presen?a de comorbidades, local da infec??o, realiza??o de exames, tempo de interna??o e uso de antibi?ticos. Em um segundo momento da pesquisa, foram coletadas amostras em pacientes que apresentavam feridas e estavam internados na cl?nica m?dica, cl?nica cir?rgica ou Unidade de Terapia Intensiva do referido hospital. A coleta de amostras de ferida e da mucosa nasal foi realizada com swab est?ril embebido em solu??o salina a 0,85%. No laborat?rio, o material foi semeado em ?gar manitol salgado e incubado em estufa bacteriol?gica (37?C-48 horas). As col?nias com fermenta??o do manitol foram submetidas ? colora??o de Gram, teste da catalase e coagulase. Posteriormente, foram realizados antibiogramas para identifica??o de MRSA e, em seguida, realiza??o de rea??o de polimerase em cadeia (PCR) para amplifica??o do gene mecA e confirma??o das cepas de MRSA. Foi realizado teste do Qui-quadrado para verificar associa??o de vari?veis independentes (idade, sexo, condi??es socioecon?micas, caracter?sticas da ferida, presen?a de doen?as sist?micas e fatores relativos ? interna??o) com a presen?a de Staphylococcus em feridas. Mann Whitney e teste t de Student foram utilizados para verificar se havia diferen?a significativa entre as vari?veis independentes e a coloniza??o nasal por Staphylococcus spp. e entre as vari?veis independentes e o tipo de infec??o (estafilococcia e estreptococcia). Com base nos prontu?rios m?dicos, a classifica??o do tipo de infec??o foi realizada em quase totalidade por crit?rios exclusivamente cl?nicos. Houve diferen?a significativa entre os grupos tratamento de estreptococcias e estafilococcias em rela??o a quantidade de antibi?ticos administrados (p=0,001) e n?mero de dias internados (p<0,001), sendo maior no grupo com tratamento de estafilococcias. As feridas (n=125) foram de pacientes com idade m?dia de 63.9 anos e 3.84 anos de estudo. A preval?ncia de Staphylococcus spp. em feridas foi 64.8% (n=81) e S. aureus 20% (n=25). Entre S. aureus, 32% (n=8) foram MRSA. A presen?a de S. aureus nasal (p<0,001), menos dias de antibi?tico pr?vio ? coleta (p=0,04) e hospitaliza??o na cl?nica m?dica foram fatores associados ? presen?a de S. aureus na ferida. MRSA foram isolados de indiv?duos com uso pr?vio de antibi?ticos (37,5%), pacientes com 2 ou mais comorbidades (75%) e metade dos indiv?duos com MRSA faleceram. Na an?lise de coloniza??o nasal de parte dos pacientes da pesquisa (n=71), verificou-se que 44,4% apresentavam MRSA na narina, e aqueles com MRSA estavam significativamente associados ao tratamento prolongado com antibi?ticos (p=0,002). Diante dos resultados, verifica-se que as feridas s?o fontes de infec??o por Staphylococcus, com expressiva frequ?ncia de S. aureus e MRSA. A mucosa nasal ? um importante s?tio para contamina??o cruzada, com destaque para linhagens resistentes, principalmente quando h? uso prolongado de antibi?ticos. Al?m disso, o diagn?stico de estafilococcias ocorre prioritariamente por crit?rios cl?nicos, o que pode contribuir para aumento da resist?ncia dos microrganismos quando realizados tratamentos emp?ricos inadequados. Assim, h? necessidade de cuidados voltados ao tratamento de feridas e cautela no uso de antibi?ticos em pacientes internados, para evitar dissemina??o de bact?rias resistentes em ambiente hospitalar.

As principais causas de morbidade e mortalidade em cirurgia biliar relacionam-se a complicações sépticas. Estas associam-se à presença de bife colonizada por bactérias. Pacientes portadores de patologias biliares apresentam colonização bacteriana da bile em uma prevalência que varia de 11 a 1 00°/o. A maior parte dos estudos identifica uma prevalência de colonização da bile em torno de 1/3 dos casos. As espécies bacterianas mais freqüentemente isoladas são as da flora entérica, destacando-se a Escherichia co/i, Klebsiella sp e Streptococcus faeca/is. As bactérias anaeróbicas são encontradas em zero a 40°/o dos pacientes, sendo as mais prevalentes dos gêneros Bacteroides e Clostridium. No presente estudo, foram coletadas biópsias hepáticas intra-operatórlas com agulha de Vinn Silvermann e material denominado de aspirado hepático, constituído do sangue aspirado pela agulha após a retirada do fragmento da biópsia. O estudo visa identificar a acurácia da cultura bacteriana destes materiais no diagnóstico da colonização bacteriana da bile. A cultura da bile do colédoco, coletada por cateterização transcística da via biliar, foi escolhida como padrão-ouro. Alem destas, foram realizadas culturas de bile da vesícula biliar e sangue periférico. Foram, também, coletados dados de idade, sexo, diagnóstico pré-operatório, fatores de risco para colonização biliar e uso de antibióticos profiláticos. A população amestrada foi de pacientes submetidos a cirurgia biliar no Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Foram excluídos pacientes em uso de antibióticos em regime terapêutico, uso de corticóides ou imunossupressores, presença de patologias parenquimatosas hepáticas e patologias infecciosas abdominais fora das vias biliares. As culturas aeróbicas foram feitas usando meio de agar-tripnase .. soja enriquecido com sangue humano desfibrinado e agar-MacConkey, incubados por 24 horas. As cultura anaeróbicas foram semeadas em caldo de tioglicolato enriquecido com vitamina K-hemina 1 o/o, agar-Brucella e agar-fenil-etanol enriquecidos com sangue de carneiro desfibrinado e vitamina K-hemina. o tempo de incubação foi de 48 horas. Entraram no estudo 57 pacientes, sete foram excluídos, permanecendo 50. A média de idade foi de 45,1 anos (:!:_15,3). Quarenta e oito pacientes tinham o diagnóstico pré-operatório de colecistite crônica, sendo 13 deles associada à coledocolitíase. Havia um caso de colecistite aguda e um de estenose pós-cirúrgica de via biliar. O fator de risco para colonização da bile de maior prevalência foi a coledocolitíase, com 13 pacientes. Vinte e nove pacientes não apresentavam nenhum fator de risco. Foram isoladas bactérias na bile do colédoco de nove pacientes. As espécies encontradas foram: Klebsiella pneumoniae, Escherichia co/i, Streptococcus faecalis, Enterobacter c/oacae, Klebsiella oxytoca, Streptococcus a-haemolitico. Na bile da vesícula biliar, foram isoladas bactérias em 7 pacientes: Klebsiella pneumoniae, Escherichia co/i, Streptococcus faeca/is, Enterobacter cloacae. Houve concordância entre os resultados da bile do colédoco e da vesícula biliar em 97,7% dos casos. A cultura da biópsia hepática foi positiva em dois casos. Em um, foi isolado Staphilococcus epidermidis, onde provavelmente houve contaminação externa. No outro, foi isolada Klebsiella pneumoniae que também havia sido encontrada na bile do colédoco do mesmo paciente. Neste paciente foi isolada Klebsiella no aspirado hepático. Foi o único caso de cultura positiva no aspirado hepático. Foi o único caso de cultura positiva no aspirado hepático. A cultura da biópsia hepática teve uma sensibilidade de 0,11, especificidade de 0,98, valor preditivo positivo de 0,50 e valor preditivo negativo de 0,83. A cultura do aspirado hepático apresentou uma sensibilidade de O, 11, especificidade de 1 ,O , valor preditivo positivo de 1 ,O e valor preditivo negativo de 0,84. Conclui-se que a cultura da biópsia e aspirado hepáticos com a técnica bacteriólogica empregada no estudo demonstrou uma acurácia diagnóstica baixa. A sua utilidade clínica na identificação de pacientes portadores de bactérias na bile é limitada. / The main causes of morbidity and mortality in biliary tract surgery are related to septic complications. Those relate to the presence of bile colonized by bacteria. Patients with biliary pathology show bacteria colonization of bile in a prevalence which varies from 11 to 100°/o. The majority of the studies identify a prevalence of colonization of bile about 1/3 of the cases. lhe bacterial species most frequently isolated are those of enteric flora, distinguishing the Escherichia co/i, Klebsiella sp and Streptococcus faecallis. The anaerobic bacteria are found in zero to 40o/o of the cases, being the most prevailing of the species Bactoides and Clostridium. In the present study there were collected hepatic intra-surgical biopsies with a needle of Vinn Silvermann and material named hepatical aspirated, made of aspirated blood through the needle after the removal of the pieces of the biopsy. lhe study aims to identify the accuracy of the bacterial culture from those substances in the diagnostic of the bacterial colonization of the bile. The culture of the bife from the common duct, collected by cystic duct probing, was chosen as the gold-standard. Besides those, there were made cultures o f bile o f the gallbladder and peripheral blood. lt was also collected data of age, sex, prcoperativo diagnosis, risk factors to biliary tract colonization and the use of prophylactic antibiotics. The sampled population was of patients undergoing on biliary tact surgery at the "Hospital de Clínicas de Porto Alegre". Patients in therapeutical use of antibiotics, using corticoesteroids or immunossupressive drugs, with hepato-cellular pathologies and abdominal infectious pathologies out · of the biliary tract were excluded. The aerobic cultures were made by the use of agar-tripnase-soy improved by desfibrinated human blood and agar-McConkey, incubated for 24 hours. The anaerobic cultures were sowed in a broth of tioglicolatus improved by vitamins K-hemine 1o/o, agar-Brucella and agar-fenil-ethanol improved with desfibrinated sheep blood and vitamin K-hemine. The time of incubation was of 48 hours. From 57 patients that begun the study, 7 were excluded, remaining 50. The age average was of 45,7 years old (± 15,3). Forty-eight patients had the preoperative diagnosis of chronic cholecystitis, 13 of them being related to choledocholithiasis. There was a case of acute cholecystitis and one of postoperative biliary tract stenosis. The risk factor to bile colonization of major prevalence was the choledocholithiasis (13 patients). Twenty-nine patients did not show any risk factor. They were isolated bacteria in the common duct bile of nine patients. The species found were Klebsiella penumoniae, Eschericha coli, Streptococcus faecalis, Enterobacter cloacae, Klebsiella oxytoca, Streptococcus a-haemolitico. In the gallbladder bile bacteria were isolated in 7 patients: Klebsie/la pneumoniae, Escherichia co/i, Streptococcus faecalis, Enterobacter cloacae. There was agreement between the results of the common duct and gallbladder bile in 97,7% o f the cases. The culture o f the hepatic biopsy was positiva in two cases. In one, it was isolated Staphi/ococcus epidermidis , were probably there was externai contamination. In the other one, it was isolated Klebsiella penumoniae, which had also been found in the common duct bile of the same patient. In that patient it was isolated Klebsiella in the hepatic aspirated. lt was the only case of positive culture in the hepatic aspirated. The hepatic biopsy culture had a sensibility of O, 11, a specificity of 0,98, a predictive positiva value of 0,50 and a predictive negative value of 0,83. The hepatic aspirated culture showed a sensibility of O, 11, a specificity of 1 ,O, a predictive positive value of 1 ,O and a predictive negative value of 0,84. We concluded that the culture of the biopsy and hepatic aspirated, with the bacteriological technique used in the study, showed a low diagnostic accuracy. lt has a low clinicai use in the identification of patients with biliary tract colonization.

Ornithobacterium rhinotracheale é uma bactéria associada com doença respiratória, decréscimo no crescimento, condenação de carcaças e mortalidade em galinhas e perus. Esta bactéria tem sido isolada em vários países e, recentemente, foi isolada no Brasil pelo nosso grupo que também estabeleceu um protocolo de reação em cadeia da polimerase (PCR) para a sua detecção e identificação e determinou a prevalência de anticorpos contra esta bactéria em plantéis comerciais de frangos e de matrizes da Região Sul do Brasil. O presente trabalho teve o objetivo de caracterizar isolados de O. rhinotracheale através de sorotipificação, resistência a antimicrobianos e single-enzyme amplified fragment length polymorphism (SAFLP). Vinte e sete isolados foram compatíveis com esta espécie através de isolamento em ágar sangue com gentamicina, coloração de Gram, teste de aglutinação em lâmina e reação em cadeia da polimerase. Dezenove isolados foram classificados como sorotipo A, seis não puderam ser sorotipificados com o painel de soros existentes e dois pertenceram ao sorotipo C. Vinte e cinco isolados foram sensíveis à norfloxacina, amoxicilina, doxiciclina, lincomicina e cefalotina, dois isolados foram resistentes à neomicina e 18 foram resistentes à sulfametoxazol/trimetoprima. Na análise de SAFLP, 22 isolados apresentaram padrão idêntico e os cinco isolados restantes foram classificados em cinco padrões distintos. Os resultados da sorotipificação indicaram que o sorotipo A de O. rhinotracheale é predominante em criações comerciais no Brasil. Os isolados brasileiros foram sensíveis à maioria dos antimicrobianos testados. O poder discriminatório do teste de suscetibilidade a antimicrobianos foi maior do que a sorotipificação e SAFLP, porém o método de SAFLP gerou um maior número de padrões, sugerindo que possa ser utilizado como ferramenta em estudos epidemiológicos.